JPS63252544A - 固定化酵素用無機担体およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、固定化酵素用無機担体、すなわち酵素を固定
化するために用いられる無機担体およびその製造方法に
関する。

［従来技術とその問題点］ 従来酵素を用いた反応は、食品工業、繊維工業、医薬品
工業および化学工業などの広い分野で使用されてきた。

し、かし、一般にこれらの酵素を用いる反応は、酵素が
水溶液状態で反応に関与させるために、反応終了後は酵
素を分離して再使用に供することが困難であり、酵素は
比較的高価であるにもかかわらず、これらをいわば使い
捨てにして、すなわち再利用せずに反応させていた。

そこで、酸素を各種の手法により水に不溶性となし、す
なわち酵素を固定化し、反応後の酵素の分離、回収を可
能とする試みが行われており、いくつかは現実の工業プ
ロセスに応用されてきている。

酵素の固定化法には、担体結合法、包括法、架橋法など
の３通りに大別されるが、担体結合法は簡便な手法であ
ることもあり、常用されている。

上記の担体結合法により酵素を担体に固定化する方法は
、例えば“「固定化生産触媒Ｊ１千畑一部／編、１９８
６年講談社発行”に詳しく記載されている。

また、担体結合法による固定化用担体としても、例えば
代表的なものとしてセルロース誘導体、アガロースゲル
、アクリルアミドゲル、アルキルアミノガラスなどが挙
げられている。これらの中でも１ｙＪ３者は有機系の柔
かい担体であるため、比較的小さいスケールの反応に用
いる固定化酵素用担体としては良好な性質であるが、担
体自体の機械的強度が小さいところから反応系のスケー
ルアップを行うには困難な点が多い。後者のアルキルア
ミノガラスは多孔質ガラスの表面および内部表面にアミ
ノ基を結合し、附与したものであって、これは担体の物
理的強度も太き（、固定化の方法も比較的容易である。

しかしながら、アルキルアミノガラスには、酵素を担体
の有する孔の内部表面に固定化するために見掛は上の活
性の低下が避けられない。また反応に用いる基質の径に
よっては該多孔質ガラスの孔に入り得ないために活性す
ら全く示さない場合もある。また担体あたりの固定化酵
素量が多い方が、酵素反応にあたっては有利であるが、
アルキルアミノガラスの場合には担体の単位ＩＭあたり
に固定化できる酵素量はあまり多くない。

固定化酵素用無機担体としてのアルキルアミノガラスの
製造方法は、特公昭５６−１５２３１号公報に見られる
如く、シランのトルエン溶液に多孔性ガラスを浸漬し、
−晩還流後乾燥することにより製造されている。

前述の如くアルキルアミノガラスはその多孔性を利用し
ているが、付着酵素量が少ないという欠点がある。

そこで、粒径の小さい無機微粒子を担体とすることも考
えられるが、前記公報の如き製造方法においては、無機
微粒子をトルエンなどの有機溶剤に安定かつ均一に分散
させることが困難であり、また１２時間もの長時間の還
流が必要な上に、あまり多量のアミノ基を担体に附与す
ることが困難であるという欠点があった。

［問題点を解決するための手段］ 本発明の目的は、前述の事情に鑑み、多量のアミン基が
附与でき、しかも簡便な固定化酵素用担体の製造方法を
提供することにある。

すなわち、本発明は、 ａ）式（ＲＯ）　ｎ　Ｓｉ　Ｒ’（１−ｎ）（Ｉ　）［
式（Ｉ）においてｎ個のＲＯは同一もしくは異なる低級
アルコキシ基であり、（４−ｎ）個のＲ′は−Ｎ＋−１
２基を含む有機基であり、ｎは２または３の整数である
］ で表されるジもしくはトリアルコキシシランを水性媒質
中で加水分解して、前記式（Ｉ）に対応する式 ％式％（） ［ここで、Ｒ′、ｎの定義は前記式（Ｉ）と同じＪ で表されるジもしくはトリヒドロキシシランを生成させ
る工程、 ｂ）上記ヒドロキシシランを含む水性媒質中に、−次粒
径がｏ、ｏｏｉ〜０．１μｍの範囲にある無機酸化物微
粒子を加えて、上記ヒドロキシシランを該微粒子にグラ
フト化させることによりグラフト化微粒子を生成させる
工程、 Ｃ）生成混合物を均質化することにより、上記グラフト
化微粒子の均一な水性媒質分散液を得る工程、および ｄＮｌられた均一な分散液を乾燥させる工程、により製
造されることを特徴とする固定化酵素用無機担体および
その製造方法に関する。

以下に本発明を更に説明する。

本発明において、上記式（Ｉ）で表わされるジもしくは
トリアルコキシシランにおけるアルコキシ基には、メト
キシ、エトキシ、プロポキシなどの低級アルコキシ基が
例示される。また、Ｒ′基はアミノ基（−ＮＨ２）を含
む有機残基であり、例えばアミノアルキル基、アミノシ
クロアルキル基がある。該有機残基はアミノ基を複数布
することもできる。

具体的な前記シランには、Ｎ−（２−アミノエチル）−
３−アミノプロピルトリメトキシシラン、Ｎ−（２−ア
ミノエチル）−３−アミノプロピルトリエトキシシラン
、γ−アミノプロピルトリメトキシシランおよびγ−ア
ミノプロピルトリエトキシシランなどが例示される。

上記工程ａ）は、水単独、あるいは水に適宜にエーテル
、ケトンなどの水溶性有機溶剤を加えてなる水性媒質中
で行う。

式（Ｉ）のシランの添加量は、水に対して　１〜２０重
量％、好ましくは１〜１０重量％である。シランの量が
１重量％未満である場合には後述のｄ）の工程における
乾燥エネルギーが大きくなりすぎ、また２０重量％を越
える場合には、後述の工程Ｃ）において溶液の粘度が高
くなりすぎて均一な分散液を作ることが困難となるので
いずれも好ましくない。

十分なる撹拌下にシランを媒質に添加し、０〜５０℃好
ましくは０〜２５℃の温度で、１分〜１５時間、好まし
くは１分〜３０分間反応させることによりシランを加水
分解させる。加水分解されたシランは、前記式（Ｉ）の
シランに対応した式（ＩＩ）で表わされるジもしくはト
リヒドロキシシランとなる。

なお、この反応の際、液のｐＨを３〜６、好ましくは３
〜４に調節しておくと、加水分解反応が容易に進行する
。

次に工程ｂ）において、上記のようにして得られた得ら
れたヒドロキシシラン溶液に、−次粒径が０．００１〜
０．１μｍの範囲にある無機酸化物微粒子を加える。

微粒子は無ＩＲ酸化物の微粒子ならばいずれのものも使
用でき、なかでもシリカまたはアルミナが安価でもあり
好ましい。

微粒子の粒径は、−次粒径で０．００１〜０．１μｍの
範囲にあるものを使用する。０．００１μｍ未満のもの
は高価で入手が困難である上に、凝集性が強いため担体
としての性能は期待できない。また０、１μｌを越える
ものは比表面積が小さくなるため、担体重量あたりの酵
素固定化量が小さくなるので好ましくない。

上記工程ｂ）における微粒子の添加口は、加水分解前の
式（Ｉ）のフルコキシシランに対して重層化で１．０〜
１０倍である。１．０倍未満では、担体に結合可能な量
以上のシランが存在することになり不経済である。１０
倍を越えると、担体表面に結合するアミノ基のモル数が
少なくなりすぎて好ましくない。

上記工程ｂ）において、ヒドロキシシランは、無機酸化
物粒子にグラフト化し、グラフト化微粒子が生成する。

工程ｃ）は好ましくは高撹拌速度において高剪断条件下
で０〜５０℃の温度範囲で５分〜２時間行う。この条件
により容易に均質な混合液を得ることが容易になる。

■程ｄ）は、乾燥時に凝集が起こりにくい条件で行う必
要があり、その点より、噴霧乾燥が好ましい。

■程ｄ）は工程Ｃ）から得た水分散液を加圧下で噴ｎ乾
燥包囲体内の熱空気または熱ガスの流れに注入して水の
蒸発を行い、生成した無機担体をサイクロンに送って高
温湿潤空気から分離することにより行うことが好ましい
。本方法により、乾燥時に担体が凝集することを防ぐこ
とができる。

上記のようにして製造された無機担体は、例えばフルキ
ルアミノガラスの場合と同様の方法で酵素を固定化する
ことが可能である。

酵素を担体に固定化する方法は、前述の「固定化生体触
媒」の第１４〜５２頁に述べられている方法、すなわち
、従来公知のアミノ基含有担体に酵素を固定するいかな
る方法も採用できる。

例えば下記のような方法によることができる。

１、グルタルアルデヒド法 ８２　Ｎ−酵素一一一 ２、ヘキサメチレンジイソシアネート法担体）−ＮＨ２
＋ＯＣＮ　（ＣＨ２＞５１　ＮＣＯ＋１−１２　Ｎ−酵
素一一一 担体）−ＮＨＣＯＮＨ（ＣＩ−１２）［Ｉ　Ｎ１−ＩＣ
０ＮＨ−酵素 ３、ペプチド合成法　　　　　　縮合試薬＊担体）−Ｎ
Ｈ２＋ＨＯＯＣ−酵素−−−’ｉ”ｉ’ｉ’ 担体）−ＮＣ−酵素 ＊：カルポジイミド、ウッドワード試薬等〔発明の効果
１ 従来の如く有機溶剤中でシランを担体に結合させる方法
では、まず微粒子の場合溶剤中に分散させることが困難
であるので、反応それ自体が進行しがたい。また、例え
ば溶剤量を大にして、たとえ反応を進行せることができ
たとしても、還流時間、すなわち反応時間が長くきびし
い上に、あまり冬場のアミノ基を担体に附着させること
ができない。

本発明によれば、容易な手法で極めて多量のアミノ基を
担体に結合できるために、この結果として本発明の担体
を用いれば活性の高い固定化酵素が得られる。

また本発明の担体により固定化された酵素は、酵素反応
侵、反応生成物を含む水相から遠心分離あるいは膜分離
により容易に分離、回収が可能であり、そのためリアク
ターへの応用も考えられる。

ざらに、無機酸化物担体であるので機械的強度に優れ、
反応のスケールアップも十分可能である。

［実施例］ 以下、実施例等により本発明を詳述する。

ＬＬｆＬ上 Ｎ−（２−アミノエチル）−３−アミノプロピルトリメ
トキシシラン１５０を１．２１の水に溶かし、塩酸でｐ
Ｈ３，５に調整し、２０℃、５分間ゆるく撹拌を行う。

上記反応液にエアロジル３８０（熱分解シリカ、−次粒
径ｏ、ｏｏｙμｍ１比表面積３８０尻／ｑ１日本エアロ
ジル■）を１００ｇ加え、２０℃、１５分間高速撹拌を
行う。得られた反応液は特にシリカの凝集もみられなか
った。該反応液を噴霧乾燥器に送り、サイクロンにて乾
燥粉末を回収し、無機担体を得た。得られた担体のデー
タを第１表に示す。

ｆｉ 実施例１のＮ−（２−７ミノエチル）−３−アミノプロ
ピルトリメトキシシランの代わりにγ−アミノプロピル
トリエトキシシランを用いて実施例１と同様の方法で無
機担体の調製を行った。得られた担体のデータを第１表
に示す。

１１１工 γ−アミノプロピルトリエトキシシラン１０ｇを０．６
１の水に溶かし、塩酸でｐＨ３，５に調整し、２０℃、
５分間ゆるく撹拌を行う。上記反応液に工アロジル３８
０を１００ｇ加え、２０℃、１５分間高速撹拌を行う。

該反応液を噴霧乾燥機に送り、サイクロンにて乾燥粉末
を回収し、無機担体を得た。得られた担体のデータを第
１表に示す。

’１ｊＬＬ３一 実施例３のエアロジル３８０の代りにアルミニウムオキ
サイド　Ｃ（熱分解アルミナ、−次粒径０．０２μｍ、
比表面積１００ゴ／９、日本エアロジル＠）を用いて実
施例３と同様の方法で無機担体の調製を行った。得られ
た担体のデータを第１表に示す。

裏１１Ｓ１ 従来のごとく（特開昭５５〜３２３５７号公報に開示）
、有機溶剤中で反応を行った。すなわち、５ｇのγ−ア
ミノプロピルトリエトキシシランを２００　ｘｉのトル
エンに溶解し、その中にエアロジル３８０を２０ｇ分散
させようとしたが、エアロジル３８０の強い親水性のた
めに凝集が起こり、分散させることができなかった。

凝集性を低下させるために、トルエン量を１Ｊにして、
上記と同様にして操作を行い分散液を得た。上記分散液
を１２時間還流を行い、遠心分離によりトルエンを除去
した侵に真空乾燥を行ない、無機担体を得た。得られた
担体のデータを第１表に示す。

友ユ」ゴヒニ［ 実施例１〜４で製造した無機担体１ｇを水洗後、２０１
！の蒸溜水に分散させ、５１！の２５％グルタルアルデ
ヒド水溶液を加えＷｌで２時間反応させた。

該反応物を５回水洗し、過剰のグルタルアルデヒドを洗
い落とす。得られた活性化担体を３０１！の１％粗パパ
イン（酵素：和光純薬■製）を含んだｐｉ−１７，０の
緩衝液に分散し、室温で２時間反応を行った。得られた
反応液を遠心分離し上澄を除去した後、４回水洗し、固
定化パパインを得た。

得られた固定化パパインを、カゼインを基質として酵素
活性を測定し、固定化酵素重量（％）あたりの試料活性
度（ＪＩＳＦ）で表し、その結果を第２表に示す。

裏車ｍ 比較例１で製造した無機担体を用いて実施例５と同様の
方法で固定化パパインを得た。測定した酵素活性の結果
を第２表に示す。

監１１工 担体として、多孔質ガラスである粒子径３０〜４５メツ
シユ、内径口４００±１０％入のアルキルアミンガラス
を用い実施例５と同様の方法でパパインを固定化し固定
化パパインを得た。測定した酵素活性の結果を第２表に
示す。

第　　１　　表 第　　２　　表 特許出願人　　日本石油化学株式会社 代理人　弁理士　伊　東　辰　雄 代理人　弁理士　伊　東　哲　也 手続補正書（自発）　　　　５ 昭和６２年７月７８ １、事件の表示 昭和６２年　特　許　願　第８３７１５号２、発明の名
称 固定化酵素用無機担体およびその製造方法３、補正をす
る者 事件との関係　　特許出願人 住　所　東京都千代田区内幸町−丁目３番１号住　所　
東京都港区虎ノ門二丁目８番１号、補正の対象 明細書中、「特許請求の範囲の欄」および「発明の詳細
な説明の欄」 補正の内容 １、特許請求の範囲を別紙の通り訂正する。

２、明細書第７頁第１９行の“酵素が”を「酵素を」に
訂正する。

３、同書第８頁第１８〜１９行、第９頁第４〜５行、第
９行、第１５〜１６行、第１８〜１９行、第１０頁第３
行の“アルキルアミノガラス“を「アルキルアミンガラ
ス」にそれぞれ訂正する。

４、同書第１１頁第６行の “（ＨＯ）　ｎ　Ｓ　Ｉ　Ｒ”　ｎ−＋　”を’　（Ｈ
Ｏ）　ｎ　Ｓ　Ｉ　Ｒ’　＋４−＋ｕ　Ｊに訂正する。

５、同書第１２頁第７行および第９行の“有機残基”を
「有機基」にそれぞれ訂正する。

６、同書第１４頁第１９行の“無ｍ酸化物粒子”を「無
機酸化物微粒子」に訂正する。

７、同書第１８頁第１行の“１５９を”を「２５９を」
に訂正する。

別紙 特許請求の範囲 ｒｌ、ａ）式（ＲＯ）　ｎ　Ｓ　ｆ　Ｒ’　＋４−１　
（Ｉ　）［式（Ｉ）においてｎ個のＲＯは同一もしくは
異なる低級アルコキシ基であり、（４−ｎ）個のＲ′は
−Ｎ　Ｈ２基を含む有機基であり、ｎは２または３の整
数である］ で表されるジもしくはトリアルコキシシランを水性媒質
中で加水分解して、前記式＜Ｉ）に対応する式（ＨＯ）
ｎ　ｓｉ　Ｒ′ｕ−＋　　　　　　　（ｎ）［ここで、
Ｒ′、ｎの定義は前記式（Ｉ）と同じ］で表されるジも
しくはトリヒドロキシシランを生成させる工程、 ｂ）上記ヒドロキシシランを含む水性媒質中に、−次位
径が０．００１〜０．１μＪの範囲にある無機酸化物微
粒子を加えて、上記ヒドロキシシランを該微粒子にグラ
フト化させることによりグラフト化微粒子を生成させる
工程、 Ｃ）生成混合物を均質化することにより、上記グラフト
化微粒子の均一な水性媒質分散液を得る工程、および ｄ）得られた均一な分散液を乾燥させる工程、により製
造されることを特徴とする固定化酵素用ｆＩ？、機担体
。

２、前記無機酸化上微粒子が、シリカまたはアルミナで
ある特許請求の範囲第１項記載の無機担体。

３、前記工程ｄ）における乾燥方法が、噴震乾燥である
特許請求の範囲第１項記載の無機担体。

４、前記式（Ｉ）のシランが、Ｎ−（２−アミノエチル
）−３−アミノプロピルトリ区トキシシランまたはγ−
アミノプロピルトリエトキシシランである特許請求の範
囲第１項記載の無機担体。

５、前記工程ａ）を水性媒質中で行ない、化合物（Ｉ）
の水に対する添加量が１〜２０重量％の範囲にある特許
請求の範囲第１項記載の無機担体。

６、前記工程ａ）を攪拌下に０〜５０℃の温度で１分〜
１５時間行う特許請求の範囲第５項記載の無機担体。

７、前記工程ａ）の加水分解中のｌ）Ｈが３〜６である
特許請求の範囲第５項記載の無機担体。

８、前記工程ａ）を水性媒質中で行い、化合物（Ｉ）の
水に対する添加量が１〜１０重量％であり、ｐＨを３〜
４に保持し、撹拌下に０〜２５℃の温度で１分〜３０分
間行う特許請求の範囲第１項記載の無機担体。

９、前記無機酸化物微粒子と化合物（Ｉ）との重量比が
１＝１〜１０：１である特許請求の範囲第１項記載の無
機担体。

１０、前記工程Ｃ）を０〜５０’Ｃの温度で５分〜２時
間行う特許請求の範囲第９項記載の無機担体。

１１、前記工程Ｃ）を高撹拌速度において高剪断条件下
で行う特許請求の範囲第９項記載の無機担体。

１２、前記工程ｄ）の実施が、工程Ｃ）から得た水分散
液を加圧下で噴霧乾燥包囲体内の熱空気または熱ガスの
流れに注入して、水の蒸発を行い、生成した無機担体を
サイクロンに送って高温湿潤空気から分離することによ
る特許請求の範囲第３項記載の無機担体。

１３、　ａ）式（ＲＯ）　ｎ　Ｓ！　Ｒ’　＋４−ｍｌ
　　（Ｉ　）［式（Ｉ）においてｎ個のＲＯは同一もし
くは異なる低級アルコキシ基であり、＜４−ｎ）個のＲ
′は−ＮＨ２基を含む有機基であり、ｎは２または３の
整数である］ で表されるジもしくはトリアルコキシシランを水性媒質
中で加水分解して、前記式（Ｉ）に対応する式（ＨＯ）
ｎＳ上Ｒ′、、−、＋　　　　　　　　　　（Ｔｌ　）
［ここで、Ｒ’　、ｎの定義は前記式（Ｉ）と同じ〕で
表されるジもしくはトリしドロキシシランを生成させる
工程、 ｂ）上記ヒドロキシシランを含む水性媒質中に、−成粒
径が０．００１〜０．１μｍの範囲にある無機酸化物微
粒子を加えて、上記ヒドロキシシランを該微粒子にグラ
フト化させることによりグラフト化微粒子を生成させる
工程、 Ｃ）生成混合物を均質化することにより、上記グラフト
化微粒子の均一な水性媒質分散液を得る工程、および ｄ）得られた均一な分散液を乾燥させる工程、からなる
ことを特徴とする固定化酵素用無機担体の製造方法。

１４、前記無機酸化物微粒子が、シリカまたはアルミナ
である特許請求の範囲第１３項記載の固定化酵素用無機
担体の製造方法。

１５、前記工程ｄ）における乾燥方法が、噴震乾燥であ
る特許請求の範囲第１３項記載の無機担体の製造方法。

１６、前記式（Ｉ）のシランが、Ｎ−（２−アミノエチ
ル）−３−アミノプロピルトリ区トキシシランまたはγ
−アミノプロピルトリエトキシシランである特許請求の
範囲第１３項記載の無機担体の製造方法。

１７、前記工程ａ）を水性媒質中で行ない、化合物（Ｉ
＞の水に対する添加量が１〜２０重量％の範囲にある特
許請求の範囲第１３項記載の無機担体の製造方法。

１８、前記工程ａ）を攪拌下に０〜５０℃の温度で１分
〜１５時間行う特許請求の範囲第１７項記載の無機担体
の製造方法。

１９、前記工程ａ）の加水分解中のＩ）Ｈが３〜６であ
る特許請求の範囲第１７項記載の無機担体の製造方法。

２０、前記工程ａ〉を水性媒質中で行い、化合物（Ｉ）
の水に対する添加量が１〜１０重量％であり、ｐＨを３
〜４に保持し、撹拌下に０〜２５℃の温度で１分〜３０
分間行う特許請求の範囲第１３項記載の無機担体の製造
方法。

２１、前記無機酸化物微粒子と化合物（Ｉ＞との重量比
が１＝１〜１０：１である特許請求の範囲第１３項記載
の無機担体の製造方法。

２２、前記工程Ｃ）を０〜５０℃の温度で５分〜２時間
行う特許請求の範囲第２１項記載の無機担体の製造方法
。

２３、前記工程Ｃ）を高撹拌速度において高剪断条件下
で行う特許請求の範囲第２１項記載の無機担体の製造方
法。

２４、前記工程ｄ）の実施が、工程ｃ）から得な水分散
液を加圧下で噴霧乾燥包囲体内の熱空気または熱ガスの
流れに注入して、水の蒸発を行い、生成した無機担体を
サイクロンに送って高温湿潤空気から分離することによ
る特許請求の範囲第１５項記載の無機担体の製造方法、
」

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ａ）式（ＲＯ）＿ｎＳｉＲ′＿（＿４＿−＿ｎ＿）
   （ I ）［式（ I ）においてｎ個のＲＯは同一もしくは
   異なる低級アルコキシ基であり、（４−ｎ）個のＲ′は
   −ＮＨ＿２基を含む有機基であり、ｎは２または３の整
   数である］ で表されるジもしくはトリアルコキシシランを水性媒質
   中で加水分解して、前記式（ I ）に対応する式 （ＨＯ）＿ｎＳｉＲ′（II） ［ここで、Ｒ′、ｎの定義は前記式（ I ）と同じ］ で表されるジもしくはトリヒドロキシシランを生成させ
   る工程、 ｂ）上記ヒドロキシシランを含む水性媒質中に、一次粒
   径が０．００１〜０．１μｍの範囲にある無機酸化物微
   粒子を加えて、上記ヒドロキシシランを該微粒子にグラ
   フト化させることによりグラフト化微粒子を生成させる
   工程、 ｃ）生成混合物を均質化することにより、上記グラフト
   化微粒子の均一な水性媒質分散液を得る工程、および ｄ）得られた均一な分散液を乾燥させる工程、により製
   造されることを特徴とする固定化酵素用無機担体。 ２、前記無機微粒子が、シリカまたはアルミナである特
   許請求の範囲第１項記載の無機担体。 ３、前記工程ｄ）における乾燥方法が、噴霧乾燥である
   特許請求の範囲第１項記載の無機担体。 ４、前記式（ I ）のシランが、Ｎ−（２−アミノエチ
   ル）−３−アミノプロピルトリエトキシシランまたはγ
   −アミノプロピルトリエトキシシランである特許請求の
   範囲第１項記載の無機担体。 ５、前記工程ａ）を水性媒質中で行ない、化合物（ I
   ）の水に対する添加量が１〜２０重量％の範囲にある特
   許請求の範囲第１項記載の無機担体。 ６、前記工程ａ）を撹拌下に０〜５０℃の温度で１分〜
   １５時間行う特許請求の範囲第５項記載の無機担体。 ７、前記工程ａ）の加水分解中のｐＨが３〜６である特
   許請求の範囲第５項記載の無機担体。 ８、前記工程ａ）を水性媒質中で行い、化合物（ I ）
   の水に対する添加量が１〜１０重量％であり、ｐＨを３
   〜４に保持し、撹拌下に０〜２５℃の温度で１分〜３０
   分間行う特許請求の範囲第１項記載の無機担体。 ９、前記無機微粒子と化合物（ I ）との重量比が１：
   １〜１０：１である特許請求の範囲第１項記載の無機担
   体。 １０、前記工程ｃ）を０〜５０℃の温度で５分〜２時間
   行う特許請求の範囲第９項記載の無機担体。 １１、前記工程ｃ）を高撹拌速度において高剪断条件下
   で行う特許請求の範囲第９項記載の無機担体。 １２、前記工程ｄ）の実施が、工程ｃ）から得た水分散
   液を加圧下で噴霧乾燥包囲体内の熱空気または熱ガスの
   流れに注入して、水の蒸発を行い、生成した無機担体を
   サイクロンに送って高温湿潤空気から分離することによ
   る特許請求の範囲第３項記載の無機担体。 １３、ａ）式（ＲＯ）＿ｎＳｉＲ′＿（＿４＿−＿ｎ＿
   ）（ I ）［式（ I ）においてｎ個のＲＯは同一もしく
   は異なる低級アルコキシ基であり、（４−ｎ）個のＲ′
   は−ＮＨ＿２基を含む有機基であり、ｎは２または３の
   整数である］ で表されるジもしくはトリアルコキシシランを水性媒質
   中で加水分解して、前記式（ I ）に対応する式 （ＨＯ）＿ｎＳＩＲ′＿（＿４＿−＿ｎ＿）（II）［こ
   こで、Ｒ′、ｎの定義は前記式（ I ）と同じ］ で表されるジもしくはトリヒドロキシシランを生成させ
   る工程、 ｂ）上記ヒドロキシシランを含む水性媒質中に、一次粒
   径が０．００１〜０．１μｍの範囲にある無機酸化物微
   粒子を加えて、上記ヒドロキシシランを該微粒子にグラ
   フト化させることによりグラフト化微粒子を生成させる
   工程、 ｃ）生成混合物を均質化することにより、上記グラフト
   化微粒子の均一な水性媒質分散液を得る工程、および ｄ）得られた均一な分散液を乾燥させる工程、からなる
   ことを特徴とする固定化酵素用無機担体の製造方法。 １４、前記無機微粒子が、シリカまたはアルミナである
   特許請求の範囲第１３項記載の固定化酵素用無機担体の
   製造方法。 １５、前記工程ｄ）における乾燥方法が、噴霧乾燥であ
   る特許請求の範囲第１３項記載の無機担体の製造方法。 １６、前記式（ I ）のシランが、Ｎ−（２−アミノエ
   チル）−３−アミノプロピルトリエトキシシランまたは
   γ−アミノプロピルトリエトキシシランである特許請求
   の範囲第１３項記載の無機担体の製造方法。 １７、前記工程ａ）を水性媒質中で行ない、化合物（
   I ）の水に対する添加量が１〜２０重量％の範囲にある
   特許請求の範囲第１３項記載の無機担体の製造方法。 １８、前記工程ａ）を撹拌下に０〜５０℃の温度で１分
   〜１５時間行う特許請求の範囲第１７項記載の無機担体
   の製造方法。 １９、前記工程ａ）の加水分解中のｐＨが３〜６である
   特許請求の範囲第１７項記載の無機担体の製造方法。 ２０、前記工程ａ）を水性媒質中で行い、化合物（ I
   ）の水に対する添加量が１〜１０重量％であり、ｐＨを
   ３〜４に保持し、撹拌下に０〜２５℃の温度で１分〜３
   ０分間行う特許請求の範囲第１３項記載の無機担体の製
   造方法。 ２１、前記無機微粒子と化合物（ I ）との重量比が１
   ：１〜１０：１である特許請求の範囲第１３項記載の無
   機担体の製造方法。 ２２、前記工程ｃ）を０〜５０℃の温度で５分〜２時間
   行う特許請求の範囲第２１項記載の無機担体の製造方法
   。 ２３、前記工程ｃ）を高撹拌速度において高剪断条件下
   で行う特許請求の範囲第２１項記載の無機担体の製造方
   法。 ２４、前記工程ｄ）の実施が、工程ｃ）から得た水分散
   液を加圧下で噴霧乾燥包囲体内の熱空気または熱ガスの
   流れに注入して、水の蒸発を行い、生成した無機担体を
   サイクロンに送って高温湿潤空気から分離することによ
   る特許請求の範囲第１５項記載の無機担体の製造方法。