JPS63254983A - エイズの病原であるウイルスのｐ２５蛋白質をコードするウイルスベクター及び組換ＤＮＡ、感染された細胞培養物、得られる蛋白質、ワクチン及び得られる抗体 - Google Patents
エイズの病原であるウイルスのｐ２５蛋白質をコードするウイルスベクター及び組換ＤＮＡ、感染された細胞培養物、得られる蛋白質、ワクチン及び得られる抗体Info
- Publication number
- JPS63254983A JPS63254983A JP62305503A JP30550387A JPS63254983A JP S63254983 A JPS63254983 A JP S63254983A JP 62305503 A JP62305503 A JP 62305503A JP 30550387 A JP30550387 A JP 30550387A JP S63254983 A JPS63254983 A JP S63254983A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- virus
- viral vector
- gene
- vector according
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—RNA viruses
- C07K16/112—Retroviridae (F), e.g. leukemia viruses
- C07K16/114—Lentivirus (G), e.g. human immunodeficiency virus [HIV], feline immunodeficiency virus [FIV] or simian immunodeficiency virus [SIV]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/22—Viral peptide or viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はエイズ（ＡＩＤＳ）予防用のワクチンに関する
。
。
後天性免疫不全症候群（エイズ、ＡＩＤＳ）は、現在北
米、欧州及び中央アフリカで重要性のあるウィルス症状
である。最近の予測によると、約１００万人の米国人が
エイズウィルスに曝されたかも知れない、とされている
。感染した人は、重い免疫抑制状態を示し、本病気は一
般に致命的である。
米、欧州及び中央アフリカで重要性のあるウィルス症状
である。最近の予測によると、約１００万人の米国人が
エイズウィルスに曝されたかも知れない、とされている
。感染した人は、重い免疫抑制状態を示し、本病気は一
般に致命的である。
この病気の伝達は、性的接触により行われることが最も
多く、また静脈注射により麻薬を使用している人が高度
危険グループを形成し、更に多くの人が汚染された血液
または血液製剤の投与後に本ウィルスに感染している。
多く、また静脈注射により麻薬を使用している人が高度
危険グループを形成し、更に多くの人が汚染された血液
または血液製剤の投与後に本ウィルスに感染している。
この病気の病原は、レトロウィルスである。多くの動物
での症状はレトロウィルスに帰因するものとされて来た
が、この最近、ヒトのレトロウィルスについても記載す
ることが可能となってきた。
での症状はレトロウィルスに帰因するものとされて来た
が、この最近、ヒトのレトロウィルスについても記載す
ることが可能となってきた。
タイプエ及び■のヒトＴ細胞レトロウィルス（ＨＴＬＶ
：ヒトＴ白血病ウィルス、ｈｕｍａｎ Ｔｌｅｕｋｅｍ
ｉａ ｖｉｒｕｓ）は、成人のある種のＴ細胞白血病の
病原であることが確かめられているが、ＨＴＬＶ−ＩＩ
Ｉウィルス又はエイズ関連ウィルス（ＡＲ■）としても
知られており、最近ＨＩＶ−１（ヒト免疫不全ウィルス
、Ｈｕｍａｎ ＩｍｍｕｒｏｄｅｆｉｃｌｅｎｃｙＶｉ
ｒｕｓ ）と名付けられたリンパ節疾患関連レトロウィ
ルス（ＬＡＶ）が、一般に、エイズの病原であると認識
されている。
：ヒトＴ白血病ウィルス、ｈｕｍａｎ Ｔｌｅｕｋｅｍ
ｉａ ｖｉｒｕｓ）は、成人のある種のＴ細胞白血病の
病原であることが確かめられているが、ＨＴＬＶ−ＩＩ
Ｉウィルス又はエイズ関連ウィルス（ＡＲ■）としても
知られており、最近ＨＩＶ−１（ヒト免疫不全ウィルス
、Ｈｕｍａｎ ＩｍｍｕｒｏｄｅｆｉｃｌｅｎｃｙＶｉ
ｒｕｓ ）と名付けられたリンパ節疾患関連レトロウィ
ルス（ＬＡＶ）が、一般に、エイズの病原であると認識
されている。
ＨＩＶのいくつかの単離物のゲノムは、非常に完全に特
定され〔ウエインーホブソン（Ｗａｉ ｎ−Ｈｏｂｓｏ
ｎ）ら、１９８５；ラトナー（Ｒａｔｎｅｒ）ら、１９
８５；ミュージング（Ｍｕｅｓｉｎｇ ）ら、１９８５
；サンチェーペスカドール（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｐｅｓ
ｅａｄｏｒ）ら、１９８５〕、ヴイスナウイルス、レン
チウィルス亜科（Ｌｅｎｔｉｖｉｒｉｎａｅ）のプロト
タイプに対する遺伝的構成の類似性から、この種のレト
ロウィルス間に成る関係があることが示唆されている。
定され〔ウエインーホブソン（Ｗａｉ ｎ−Ｈｏｂｓｏ
ｎ）ら、１９８５；ラトナー（Ｒａｔｎｅｒ）ら、１９
８５；ミュージング（Ｍｕｅｓｉｎｇ ）ら、１９８５
；サンチェーペスカドール（Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｐｅｓ
ｅａｄｏｒ）ら、１９８５〕、ヴイスナウイルス、レン
チウィルス亜科（Ｌｅｎｔｉｖｉｒｉｎａｅ）のプロト
タイプに対する遺伝的構成の類似性から、この種のレト
ロウィルス間に成る関係があることが示唆されている。
レンチウィルス亜科は、長い潜伏期間を有する徐々に進
行する持続性の疾病の病原である。更に、ヴイスナウイ
ルスのように、ＨＩＶは脳の神経組織への同性（ｔｒｏ
ｐｉｓｍ ）をいくぶんか示す。
行する持続性の疾病の病原である。更に、ヴイスナウイ
ルスのように、ＨＩＶは脳の神経組織への同性（ｔｒｏ
ｐｉｓｍ ）をいくぶんか示す。
全てのレトロウィルスにおいて共通に見出される３つの
遺伝子即ちｇａｇＳｐｏｌ及びｅｎｖに加えて、ＨＩＶ
ウィルスゲノムは、更に少なくとも４種の遺伝子：Ｑ又
はｓ ｏ ｒＳＴＡＴ、ＡＲＴ及びＦ又は３’ｏｒｆを
有している〔ローゼン（Ｒｏｓｅｎ ） ら、１９８６
．フィック−？ −（Ｆｌｓｈｅｒ）ら、１９８６）。
遺伝子即ちｇａｇＳｐｏｌ及びｅｎｖに加えて、ＨＩＶ
ウィルスゲノムは、更に少なくとも４種の遺伝子：Ｑ又
はｓ ｏ ｒＳＴＡＴ、ＡＲＴ及びＦ又は３’ｏｒｆを
有している〔ローゼン（Ｒｏｓｅｎ ） ら、１９８６
．フィック−？ −（Ｆｌｓｈｅｒ）ら、１９８６）。
上記ｇａｇ遺伝子は、ヴイリオンの構造蛋白質をコード
するものである。その転写により得られるメツセンジャ
ーは、翻訳されると５５０００ダルトンの蛋白質（ｐ
５５）となり、この前駆体が次いで上記ｐｏｌ遺伝子に
よりコードされた特定のプロテアーゼの作用により成熟
したものとなる。
するものである。その転写により得られるメツセンジャ
ーは、翻訳されると５５０００ダルトンの蛋白質（ｐ
５５）となり、この前駆体が次いで上記ｐｏｌ遺伝子に
よりコードされた特定のプロテアーゼの作用により成熟
したものとなる。
最初のエンドプロテオリティック切断（ｅｎｄｏｐｒｏ
ｔｅｏｌｙｔｉｃ ｃｌｅａｖａｇｅ）により、４００
００ダルトンの蛋白質（ｐ４０）及び１５０００ダルト
ンの蛋白質（ｐ １５）が生成し、第二の切断により１
８０００ダルトンの蛋白質（ｐ１８）及び２５０００ダ
ルトンの蛋白質（ｐ ２５）が生成し、そのリーディン
グ°フレームの順序はＨ２Ｎ−ｐ１８−ｐ２５−ｐ １
５−Ｃ０ＯＨである。ｐ５５のＮＨ２末端は、ｐ１８の
それと一致しており、ミリスチン酸によりアシル化され
、これにより、ｐ１８がウィルス粒子中のゲノムのリボ
核酸と膜との結合（ｌｉｎｋ）として機能している、と
の理論を確実なものとしている。上記ｐ２５は、ヴイリ
オンのカプシドの主たる構成要素である。ｐ１５の強い
塩基性は、ウィルスのリボ核酸との密接な結合を示唆し
ている〔ウエインーホブソン（Ｖａｉｎ−Ｈｏｂｓｏｎ
）ら、１９８５）。
ｔｅｏｌｙｔｉｃ ｃｌｅａｖａｇｅ）により、４００
００ダルトンの蛋白質（ｐ４０）及び１５０００ダルト
ンの蛋白質（ｐ １５）が生成し、第二の切断により１
８０００ダルトンの蛋白質（ｐ１８）及び２５０００ダ
ルトンの蛋白質（ｐ ２５）が生成し、そのリーディン
グ°フレームの順序はＨ２Ｎ−ｐ１８−ｐ２５−ｐ １
５−Ｃ０ＯＨである。ｐ５５のＮＨ２末端は、ｐ１８の
それと一致しており、ミリスチン酸によりアシル化され
、これにより、ｐ１８がウィルス粒子中のゲノムのリボ
核酸と膜との結合（ｌｉｎｋ）として機能している、と
の理論を確実なものとしている。上記ｐ２５は、ヴイリ
オンのカプシドの主たる構成要素である。ｐ１５の強い
塩基性は、ウィルスのリボ核酸との密接な結合を示唆し
ている〔ウエインーホブソン（Ｖａｉｎ−Ｈｏｂｓｏｎ
）ら、１９８５）。
本発明は、一般的に言うと、少なくとも（ａ）ベクター
ウィルスのゲノムの一部分、（ｂ）エイズの原因となる
ＨＩＶウィルスの完全なｇａｇ遺伝子又はそのサブフラ
グメントの一つ、特にｐ２５蛋白質をコードする遺伝子
又はｐ１８蛋白質をコードする遺伝子、及び（ｃ）培養
中の真核細胞中でこの蛋白質の発現を可能とするエレメ
ント ゛ を含有するウィルスベクターを提供するものである。
ウィルスのゲノムの一部分、（ｂ）エイズの原因となる
ＨＩＶウィルスの完全なｇａｇ遺伝子又はそのサブフラ
グメントの一つ、特にｐ２５蛋白質をコードする遺伝子
又はｐ１８蛋白質をコードする遺伝子、及び（ｃ）培養
中の真核細胞中でこの蛋白質の発現を可能とするエレメ
ント ゛ を含有するウィルスベクターを提供するものである。
本発明の一実施態様によると、上記ウィルスのゲノムの
一部分としては、ボックスウイルスゲノムの一部分を挙
げることができ、該ボックスウイルスとしてはワクシニ
アウィルスを例示できる。
一部分としては、ボックスウイルスゲノムの一部分を挙
げることができ、該ボックスウイルスとしてはワクシニ
アウィルスを例示できる。
ＤＮＡコーディング配列は、ボックスウイルス遺伝子の
プロモーターの制御下に置くことができる。
プロモーターの制御下に置くことができる。
該プロモーターとしてはワクシニア遺伝子のプロモータ
ーを挙げることができる。
ーを挙げることができる。
ＤＮＡコーディング配列は、ワクシニアの７．５Ｋ蛋白
質に対する遺伝子のプロモーターの制御下に置くことが
できる。
質に対する遺伝子のプロモーターの制御下に置くことが
できる。
コーディング配列は、ワクシニアのＴＫ遺伝子中にクロ
ーン化することができる。
ーン化することができる。
従って、本発明は、本発明のウィルスベクターにより感
染された真核細胞の培養物にも関するものであり、また
本発明のウィルスベクターで感染された真核細胞を培養
し、生産された蛋白質を回収することを特徴とするエイ
ズの病原ウィルスの蛋白質の製造法にも関するものであ
る。
染された真核細胞の培養物にも関するものであり、また
本発明のウィルスベクターで感染された真核細胞を培養
し、生産された蛋白質を回収することを特徴とするエイ
ズの病原ウィルスの蛋白質の製造法にも関するものであ
る。
また、本発明は、上記製造法を実施することにより得ら
れる、エイズ原因ウィルスの蛋白質に関する。該蛋白質
としては、上記１）２５蛋白質であってもよいし、ｐ１
８蛋白質であってもよい。
れる、エイズ原因ウィルスの蛋白質に関する。該蛋白質
としては、上記１）２５蛋白質であってもよいし、ｐ１
８蛋白質であってもよい。
］）１５蛋白質を除けば、エイズ患者の血清中のｇａｇ
遺伝子によりコードされる蛋白質に向けられた抗体を検
出することは容易である。この免疫応答により、ＨＩＶ
ウィルスに感染された複数の患者においてこれら種々の
蛋白質が強い免疫原性を有していることが示される。ま
た、血清陽性（ＳｅｒＯｐＯ８ｉｔｉＶｅ）の人の場合
、その人の抗体のほとんどはｐ２５Ｋ向けられたもので
あり、抗−ｐ２５抗体の力価（ｔｉｔｅｒ ）の低下を
観察するためには病気の急性期を待たねばならない。こ
の観察結果は、免疫反応と病気の進行とが並行すること
を示すものであって、ｐ２５が、この病気の致死的結果
に対して保護を得るべく免疫応答を惹起させるべきター
ゲットであることを示している。
遺伝子によりコードされる蛋白質に向けられた抗体を検
出することは容易である。この免疫応答により、ＨＩＶ
ウィルスに感染された複数の患者においてこれら種々の
蛋白質が強い免疫原性を有していることが示される。ま
た、血清陽性（ＳｅｒＯｐＯ８ｉｔｉＶｅ）の人の場合
、その人の抗体のほとんどはｐ２５Ｋ向けられたもので
あり、抗−ｐ２５抗体の力価（ｔｉｔｅｒ ）の低下を
観察するためには病気の急性期を待たねばならない。こ
の観察結果は、免疫反応と病気の進行とが並行すること
を示すものであって、ｐ２５が、この病気の致死的結果
に対して保護を得るべく免疫応答を惹起させるべきター
ゲットであることを示している。
いくつかの文献によると、免疫の細胞型機構（ｃｅｌｌ
ｕｌａｒ ｔｙｐｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ）を誘発さ
せるには、ヴイリオンの構造蛋白質が重要であると強調
されている。これらの研究のうちでも、インフルエンザ
ウィルスの場合について言及しておくべきである。即ち
、この場合、一つのウィルスサブタイプの核蛋白質（ヴ
イリオンのカプシドの主要構成成分）に向けられたＣＴ
Ｌ （ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ−１ｙｍｐｈｏ−ｃｙｔ
ｅ、細胞傷害性１９２８球）反応は、他のサブタイプに
対しても保護を与えることができるが、表面糖蛋白質（
ヘマグルチニン及びノイミニダーゼ）により誘発される
抗体に対するサブタイプ間での免疫交差反応はない。こ
れら糖蛋白質の一次構造は、可変領域を有しており、該
可変領域においてペプチド配列は各サブタイプに特異的
なものとなっている。この分岐（ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ
）により、免疫交差反応の欠如が生じるのである。この
種の分岐は、ＨＩＶの異なる単離物間においても認めら
れ、それはＥＮＶ糖蛋白質の配列に対して最大である（
３５％まで）が、ｇａｇ遺伝子の配列に２１ては最小（
３〜５％）である〔スターシック（Ｓｔａｒｃｉｃｋ）
ら、１９８６：］、従って、ｇａｇ遺伝子によりコード
されるｐ２５蛋白質をＨＩＶによる感染に対して免疫応
答を刺激するのに用いるのが、本発明において採用され
る戦術である。
ｕｌａｒ ｔｙｐｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ）を誘発さ
せるには、ヴイリオンの構造蛋白質が重要であると強調
されている。これらの研究のうちでも、インフルエンザ
ウィルスの場合について言及しておくべきである。即ち
、この場合、一つのウィルスサブタイプの核蛋白質（ヴ
イリオンのカプシドの主要構成成分）に向けられたＣＴ
Ｌ （ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ−１ｙｍｐｈｏ−ｃｙｔ
ｅ、細胞傷害性１９２８球）反応は、他のサブタイプに
対しても保護を与えることができるが、表面糖蛋白質（
ヘマグルチニン及びノイミニダーゼ）により誘発される
抗体に対するサブタイプ間での免疫交差反応はない。こ
れら糖蛋白質の一次構造は、可変領域を有しており、該
可変領域においてペプチド配列は各サブタイプに特異的
なものとなっている。この分岐（ｄｉｖｅｒｇｅｎｃｅ
）により、免疫交差反応の欠如が生じるのである。この
種の分岐は、ＨＩＶの異なる単離物間においても認めら
れ、それはＥＮＶ糖蛋白質の配列に対して最大である（
３５％まで）が、ｇａｇ遺伝子の配列に２１ては最小（
３〜５％）である〔スターシック（Ｓｔａｒｃｉｃｋ）
ら、１９８６：］、従って、ｇａｇ遺伝子によりコード
されるｐ２５蛋白質をＨＩＶによる感染に対して免疫応
答を刺激するのに用いるのが、本発明において採用され
る戦術である。
本発明の好ましい一側面においては、本発明は、事実上
、ベクターとしてワクシニアウィルスを用いるｐ２５蛋
白質の発現に関する。最近の技術進歩により、ワクシニ
アウィルスゲノムの操作が可能となって来ており、また
、それをクローン化されれた遺伝子の発現用ベクターと
して用いることも可能となって来ている。生きている組
換えウィルスは、外来抗原（ｆｏｒｅｉｇｎ ａｎｔｉ
ｇｅｎｓ）の発現を可能として来ており、更に、各種ウ
ィルス性疾病（ヘルペス、インフルエンザ、Ｂ型肝炎等
）または原虫性疾病（マラリア）に対する免疫を得るこ
とも可能として来ている〔エム、マケット（Ｍ。
、ベクターとしてワクシニアウィルスを用いるｐ２５蛋
白質の発現に関する。最近の技術進歩により、ワクシニ
アウィルスゲノムの操作が可能となって来ており、また
、それをクローン化されれた遺伝子の発現用ベクターと
して用いることも可能となって来ている。生きている組
換えウィルスは、外来抗原（ｆｏｒｅｉｇｎ ａｎｔｉ
ｇｅｎｓ）の発現を可能として来ており、更に、各種ウ
ィルス性疾病（ヘルペス、インフルエンザ、Ｂ型肝炎等
）または原虫性疾病（マラリア）に対する免疫を得るこ
とも可能として来ている〔エム、マケット（Ｍ。
Ｍａｃｋｅｔｔ ）ら、１９８６．ビー、モス（Ｂ、Ｍ
ｏ５ｓ）、１９８５）。
ｏ５ｓ）、１９８５）。
ワクシニアウィルス（ＶＶ）による外来蛋白質（ｆｏｒ
ｅｉｇｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ）をコードする配列の発現
は、下記二つの段階を必要とする。
ｅｉｇｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ）をコードする配列の発現
は、下記二つの段階を必要とする。
１）コーディング配列が、ＶＶのプロモーターと一直線
に並んで（ａｌｉｇｎｅｄ ）いなければならず、且つ
、適当なバクテリアのプラスミド中にクローン化された
ＶＶゲノムの非必須セグメント中に挿入されなければな
らない。
に並んで（ａｌｉｇｎｅｄ ）いなければならず、且つ
、適当なバクテリアのプラスミド中にクローン化された
ＶＶゲノムの非必須セグメント中に挿入されなければな
らない。
２）コーディング配列の両側に位置するＶＶのＤＮＡ配
列が、プラスミドとウィルスゲノムとの間で相同性（ｈ
ｏｍｏ ｌ ｏｇｏｕｓ）組換えを可能としなければな
らず、二重相互組換え（ｄｏｕｂｌｅ ｒｅｃｉｐｒｏ
ｃａｌ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ）の場合はＮ
ＤＮＡ挿入片がプラスミドからウィルスゲノムへと移動
し、そ、こで伸長（ｐｒｏｐａｇａｔｅ ）され発現さ
れる〔パニカリ （Ｐａｎｉｃａｌ １）及びパオレッ
ティ（Ｐａｏｌｅｔｔｉ） 、１９８２ ；７ケツト（
Ｍａｃｋｅｔｔ ）ら、１９８２、スミス（Ｓｍｉｔｈ
）ら、１９８Ｂ、パニカリ （Ｐａｎｉｃａｌｉ）
ら、１９８３）。
列が、プラスミドとウィルスゲノムとの間で相同性（ｈ
ｏｍｏ ｌ ｏｇｏｕｓ）組換えを可能としなければな
らず、二重相互組換え（ｄｏｕｂｌｅ ｒｅｃｉｐｒｏ
ｃａｌ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ）の場合はＮ
ＤＮＡ挿入片がプラスミドからウィルスゲノムへと移動
し、そ、こで伸長（ｐｒｏｐａｇａｔｅ ）され発現さ
れる〔パニカリ （Ｐａｎｉｃａｌ １）及びパオレッ
ティ（Ｐａｏｌｅｔｔｉ） 、１９８２ ；７ケツト（
Ｍａｃｋｅｔｔ ）ら、１９８２、スミス（Ｓｍｉｔｈ
）ら、１９８Ｂ、パニカリ （Ｐａｎｉｃａｌｉ）
ら、１９８３）。
当然のことながら、この種のベクターの使用は、ベクタ
ーウィルスゲノムの部分的切除をしばしば含む。
ーウィルスゲノムの部分的切除をしばしば含む。
本発明は、より詳しくは、少なくとも、（ａ）ベクター
ウィルスのゲノムの一部分、（ｂ）エイズの原因となる
ＨＩＶウィルスのｐ２５蛋白質をコードする遺伝子、及
び （ｃ）この蛋白質の細胞中での発現を可能とするエレメ
ント を含有するウィルスベクターに関するものである。
ウィルスのゲノムの一部分、（ｂ）エイズの原因となる
ＨＩＶウィルスのｐ２５蛋白質をコードする遺伝子、及
び （ｃ）この蛋白質の細胞中での発現を可能とするエレメ
ント を含有するウィルスベクターに関するものである。
本発明は、また、上記ウィルスベクターに対応する組換
えＤＮＡに関するものでもある。
えＤＮＡに関するものでもある。
エイズの原因となるウィルスとは、特にＨＩＶウィルス
及びその可能な点突然変異体又はこれらウィルスの部分
欠失体、並びに関連ウィルスをも含む。
及びその可能な点突然変異体又はこれらウィルスの部分
欠失体、並びに関連ウィルスをも含む。
エイズの原因となるウィルスとは異なるベクターウィル
スのゲノムに対応する部分において、ウィルスベクター
は、任意の起源のウィルスのゲノムから形成することが
できる。しかし、ボックスウイルスのゲノムの一部分、
特に、ワクシニアのゲノムの一部分を用いるのが好まし
い。
スのゲノムに対応する部分において、ウィルスベクター
は、任意の起源のウィルスのゲノムから形成することが
できる。しかし、ボックスウイルスのゲノムの一部分、
特に、ワクシニアのゲノムの一部分を用いるのが好まし
い。
ワクシニアウィルス中での異種蛋白質（ｈｏｔｅｒ。
１ｏｇｏｕｓ ｐｒｏｔｅｉｎ）の発現に必要とされる
条件は上記した通りである。
条件は上記した通りである。
一般に、当該遺伝子、例えばｐ２５遺伝子は、発現され
るためには、ワクシニアの遺伝子のプロモーターの制御
下になければならない。このプロモーターは、一般に、
７．５Ｋ蛋白質プロモーターである。更に、該コーディ
ング配列は、マーカー遺伝子として機能することもでき
るワクシニアの可決遺伝子中にクローン化されなければ
ならない。はとんどの場合、これはＴＫ遺伝子である。
るためには、ワクシニアの遺伝子のプロモーターの制御
下になければならない。このプロモーターは、一般に、
７．５Ｋ蛋白質プロモーターである。更に、該コーディ
ング配列は、マーカー遺伝子として機能することもでき
るワクシニアの可決遺伝子中にクローン化されなければ
ならない。はとんどの場合、これはＴＫ遺伝子である。
まず、本発明は、細胞培養物中のＨＩＶウィルスのｐ２
５遺伝子によりコードされる蛋白質を得るためにウィル
スベクターを使用することに関する。該細胞としては、
まず、本発明のウィルスベクターで感染された哺乳類の
細胞であるが、又は、対応する組換ＤＮＡを含有し得る
哺乳類の細胞である。これら細胞の内でも、特に、ヒト
二倍体細胞、ベロ細胞（Ｖｅｒｏ ｃｅｌｌｓ）及び−
次培養物を挙げることができる。当然のことながら、他
の種類の細胞を用いることもできる。
５遺伝子によりコードされる蛋白質を得るためにウィル
スベクターを使用することに関する。該細胞としては、
まず、本発明のウィルスベクターで感染された哺乳類の
細胞であるが、又は、対応する組換ＤＮＡを含有し得る
哺乳類の細胞である。これら細胞の内でも、特に、ヒト
二倍体細胞、ベロ細胞（Ｖｅｒｏ ｃｅｌｌｓ）及び−
次培養物を挙げることができる。当然のことながら、他
の種類の細胞を用いることもできる。
こうして得られた蛋白質は、精製後、ワクチンの製造に
使用することができる。
使用することができる。
ワクチン接種を行なうために本発明のウィルスベクター
を直接用いることも可能であり、この場合、ｐ２５蛋白
質はイン・サイチュ（ｉｎ ５ｉｔｕ ）で且つイン・
ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ ）で生産される。
を直接用いることも可能であり、この場合、ｐ２５蛋白
質はイン・サイチュ（ｉｎ ５ｉｔｕ ）で且つイン・
ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ ）で生産される。
最後に、本発明は、また、ｐ２５蛋白質に対抗して生じ
た抗体に関するものでもあり、該抗体は、上記ウィルス
ベクターで生体を感染させ、所定時間経過後に誘発され
た抗体を回収することにより得られる。
た抗体に関するものでもあり、該抗体は、上記ウィルス
ベクターで生体を感染させ、所定時間経過後に誘発され
た抗体を回収することにより得られる。
上記ｐ２５蛋白質及び上記細胞培養物を得るために用い
られる手法及びワクチン接種の手法は、現在公知のワク
チンについて慣用的に行われている手法と同一であり、
当業者にとっては容易に行なえるものであり、ここでは
詳細には記載しない。
られる手法及びワクチン接種の手法は、現在公知のワク
チンについて慣用的に行われている手法と同一であり、
当業者にとっては容易に行なえるものであり、ここでは
詳細には記載しない。
以下実施例を掲げて、本発明の特徴と利点を詳しく説明
する。
する。
実施例１
〈プラスミドＭ１３７Ｇ１１２３の構築〉ｐ５５マルチ
−プロティン プレカーサーからｐ２５プロティンを得
る；したがって、その対応する核酸配列は、リーディン
グフレームの両端の翻訳開始及び終止信号を欠いている
。定方向突然変異誘発のための２種の処理、即ち、ＡＴ
Ｇを上流側に導入するための処理とコーディング配列か
ら下流側に終止コドンを位置させるための処理とが行わ
れる。
−プロティン プレカーサーからｐ２５プロティンを得
る；したがって、その対応する核酸配列は、リーディン
グフレームの両端の翻訳開始及び終止信号を欠いている
。定方向突然変異誘発のための２種の処理、即ち、ＡＴ
Ｇを上流側に導入するための処理とコーディング配列か
ら下流側に終止コドンを位置させるための処理とが行わ
れる。
・ｐ２５のＣ００Ｈ−末端部分に対応する配列のクロー
ニング及び突然変異誘発 プラスミドｐＪ１９−１３：Ｃウエインーホブソン（Ｗ
ａ ｉ ｎ−Ｈｏｂ ｓ ｏｎ）・ら、１９８５年〕の
Ｈｉｎｄ■（ウエインーホブソン（Ｗａｉｎ−Ｈｏｂｓ
ｏｎ）ら、１９８５年の座標（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ）
１２５８） −Ｅ ｃ ｏＲＶ （座標２５２３）制
限フラグメントをベクターＭ１３ＴＧ１３１ ［キーニ
ーら（Ｋｉ ｅｎｙ ｅ ｔ ａ １） 、１９８
３）の対応する部位にクローン化して、プラスミドＭ１
３ＴＧ１１２０を形成させた。
ニング及び突然変異誘発 プラスミドｐＪ１９−１３：Ｃウエインーホブソン（Ｗ
ａ ｉ ｎ−Ｈｏｂ ｓ ｏｎ）・ら、１９８５年〕の
Ｈｉｎｄ■（ウエインーホブソン（Ｗａｉｎ−Ｈｏｂｓ
ｏｎ）ら、１９８５年の座標（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ）
１２５８） −Ｅ ｃ ｏＲＶ （座標２５２３）制
限フラグメントをベクターＭ１３ＴＧ１３１ ［キーニ
ーら（Ｋｉ ｅｎｙ ｅ ｔ ａ １） 、１９８
３）の対応する部位にクローン化して、プラスミドＭ１
３ＴＧ１１２０を形成させた。
ｐ２５のリーディングフレームの一端での翻訳の終了は
、座標１４２５を有するヌクレオチドにおいて、位相の
合った終止コドンを導入することにより、行われる。プ
ラスミドＭ１３ＴＧ１１２０上でこの突然変異誘発を発
生させるために、合成オリゴヌクレオチドＴＧ６６８゜ ５’ −ＧＧＣＴＣＡＴＧＡＡＴＴＣＣＴＡＣＡＡＡＡ
ＣＴＣ−３’ を使用した。アイソトープ３２ｐでラベ
ルされたオリゴヌクレオチドＴＧ６６８を使用して行わ
れた定方向突然変異誘発後に得られたクローンのスクリ
ーニングは、プラスミドＭ１３ＴＧ１１２１の単離を可
能とした（第１図参照）。プラスミドＭｌ ３７Ｇ１１
２２を作り出すために、このプラスミドの小さなＥｃｏ
ＲＩ制限フラグメントが、取り除かれた。
、座標１４２５を有するヌクレオチドにおいて、位相の
合った終止コドンを導入することにより、行われる。プ
ラスミドＭ１３ＴＧ１１２０上でこの突然変異誘発を発
生させるために、合成オリゴヌクレオチドＴＧ６６８゜ ５’ −ＧＧＣＴＣＡＴＧＡＡＴＴＣＣＴＡＣＡＡＡＡ
ＣＴＣ−３’ を使用した。アイソトープ３２ｐでラベ
ルされたオリゴヌクレオチドＴＧ６６８を使用して行わ
れた定方向突然変異誘発後に得られたクローンのスクリ
ーニングは、プラスミドＭ１３ＴＧ１１２１の単離を可
能とした（第１図参照）。プラスミドＭｌ ３７Ｇ１１
２２を作り出すために、このプラスミドの小さなＥｃｏ
ＲＩ制限フラグメントが、取り除かれた。
・ｐ２５のＮＦ２−末端部分に対応する配列のクローニ
ング及び突然変異誘発 プラスミドｐＪ１９−１７のＨｉｎｄＩ［Ｉ制限フラグ
メント〔ウェインーホブソン（Ｗａｉｎ−Ｈｏｂｓｏｎ
）ら、１９８５、の座標６３１−１２５８〕をプラスミ
ドＭ１３ＴＧ１１２２のＨｉｎｄｍ部位にクローン化さ
せて、プラスミドＭ１３７Ｇ１１２３を得た。ｐ２５の
リーディングフレームのＮＦ２−末端における翻訳の開
始は、座標７３２を有するヌクレオチドの上流側に開始
コドンを加えることにより、行われた。この突然変異誘
発に使用された合成オリゴヌクレオチドＴＧ６２６．５
＝ −ＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＧＴＧＣＴ
ＧＡＣＣ−３′は、コザックの法則（エム、コザック（
Ｍ、Ｋ。
ング及び突然変異誘発 プラスミドｐＪ１９−１７のＨｉｎｄＩ［Ｉ制限フラグ
メント〔ウェインーホブソン（Ｗａｉｎ−Ｈｏｂｓｏｎ
）ら、１９８５、の座標６３１−１２５８〕をプラスミ
ドＭ１３ＴＧ１１２２のＨｉｎｄｍ部位にクローン化さ
せて、プラスミドＭ１３７Ｇ１１２３を得た。ｐ２５の
リーディングフレームのＮＦ２−末端における翻訳の開
始は、座標７３２を有するヌクレオチドの上流側に開始
コドンを加えることにより、行われた。この突然変異誘
発に使用された合成オリゴヌクレオチドＴＧ６２６．５
＝ −ＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＣＣＣＡＴＧＧＴＧＣＴ
ＧＡＣＣ−３′は、コザックの法則（エム、コザック（
Ｍ、Ｋ。
ｚａｋ） 、１９８６）に則ッテ、開始ＡＴＧの近傍の
配列にも変異を起こさせるように、デザインされた。ア
イソトープ３２ｐでラベルされたオリゴヌクレオチドＴ
Ｇ６２６を使用して行われた定方向突然変異誘発後に得
られたクローンのスクリーニングは、プラスミドＭ１３
ＴＧ１１２４の単離を可能とした。該プラスミドＭ１３
７Ｇ１１２４は、そのＮＦ２−末端において２個のアミ
ノ酸（メチオニンとこれに続くグリシン）を付加される
ことにより延長されているｐ２５蛋白質をコードする為
のリーディングフレームを含んでいる。
配列にも変異を起こさせるように、デザインされた。ア
イソトープ３２ｐでラベルされたオリゴヌクレオチドＴ
Ｇ６２６を使用して行われた定方向突然変異誘発後に得
られたクローンのスクリーニングは、プラスミドＭ１３
ＴＧ１１２４の単離を可能とした。該プラスミドＭ１３
７Ｇ１１２４は、そのＮＦ２−末端において２個のアミ
ノ酸（メチオニンとこれに続くグリシン）を付加される
ことにより延長されているｐ２５蛋白質をコードする為
のリーディングフレームを含んでいる。
蛋白質配列の残部は、ＨＩＶウィルスのｐ２５のそれと
全く同一である。
全く同一である。
実施例２
くプラスミドＭ１３ＴＧ１１２５の構築〉このプラスミ
ドは、蛋白質のＮＦ２−末端において第２のグリシンコ
ドンをアラニンコドンにより代替した点においてのみ、
プラスミドＭｌ ３ＴＧ１１２０と異なっている。Ｃ０
０Ｈ−末端部分のクローニング及び突然変異誘発の過程
、並びにＮＦ２−末端部分のクローニングの過程は、実
施例１で述べたものと同様である。
ドは、蛋白質のＮＦ２−末端において第２のグリシンコ
ドンをアラニンコドンにより代替した点においてのみ、
プラスミドＭｌ ３ＴＧ１１２０と異なっている。Ｃ０
０Ｈ−末端部分のクローニング及び突然変異誘発の過程
、並びにＮＦ２−末端部分のクローニングの過程は、実
施例１で述べたものと同様である。
・ＮＦ２−末端部分の突然変異誘発
合成オリゴヌクレオチドＴＧ６９４．
５−−ＧＣＡＣＴＡＴＡＧＧＴＧＣＣＡＴＧＧＴＧＣＴ
ＧＡＣＣＴＧＧＡＴＣＣＴＧＴＧＴ−ＣＣ−：３ ′が
、ＨＩＶウィルスのｐ２５の第１のプロリンコドンから
上流側にメチオニンコドンとこれに続くアラニンコドン
とを導入するために、使用された。さらに、プラスミド
Ｍ１３ＴＧ１１２３の突然変異誘発中に、ＡＴＧから１
７ヌクレオチド上流側にＢａｍＨＩ制限酵素部位が置か
れた。放射性アイソトープ３２ｐでラベルされたオリゴ
ヌクレオチドＴＧ６９４を使用して行われたクローンの
スクリーニングは、プラスミドＭ １３ＴＧ１１２５の
単離を可能とした（第２図参照）。
ＧＡＣＣＴＧＧＡＴＣＣＴＧＴＧＴ−ＣＣ−：３ ′が
、ＨＩＶウィルスのｐ２５の第１のプロリンコドンから
上流側にメチオニンコドンとこれに続くアラニンコドン
とを導入するために、使用された。さらに、プラスミド
Ｍ１３ＴＧ１１２３の突然変異誘発中に、ＡＴＧから１
７ヌクレオチド上流側にＢａｍＨＩ制限酵素部位が置か
れた。放射性アイソトープ３２ｐでラベルされたオリゴ
ヌクレオチドＴＧ６９４を使用して行われたクローンの
スクリーニングは、プラスミドＭ １３ＴＧ１１２５の
単離を可能とした（第２図参照）。
実施例３
〈プラスミドｐＴＧ２１０１の構築〉
ワクシニア ベクターによるｐ２５の発現を得るために
、この蛋白質をコードする配列が、ワクシニア ウィル
スの７．５Ｋ遺伝子プロモーターの支配下に置かれた。
、この蛋白質をコードする配列が、ワクシニア ウィル
スの７．５Ｋ遺伝子プロモーターの支配下に置かれた。
プラスミドＭ１３７Ｇ１１２４を制限酵素ＰｖｕＩＩ及
びＥｃｏＲＩにより切断し、ｐ２５をコードするＩ）Ｎ
Ａフラグメントを、酵素ＢａｍＨＩ。
びＥｃｏＲＩにより切断し、ｐ２５をコードするＩ）Ｎ
Ａフラグメントを、酵素ＢａｍＨＩ。
ＤＮＡポリメラーゼ及び酵素ＥｃｏＲＩにより順次処理
したプラスミドｐＴＧ１８６ＰＯＬＹ （フランス特許
８６１０５．０４３）内に導入した。
したプラスミドｐＴＧ１８６ＰＯＬＹ （フランス特許
８６１０５．０４３）内に導入した。
Ｔ４ＤＮＡリガーゼの作用及びバクテリアへのトランス
フェクション後に得られたクローンを制限マツピングに
より分析し、プラスミドｐＴＧ２１０１を選択した。
フェクション後に得られたクローンを制限マツピングに
より分析し、プラスミドｐＴＧ２１０１を選択した。
実施例４
〈プラスミドｐＴＧ２１０２の構築〉
プラスミドＭ１３７Ｇ１１２５のｐ２５配列が、同様に
ワクシニア ウィルスの７．５Ｋ遺伝子プロモーターの
支配下に置かれた。
ワクシニア ウィルスの７．５Ｋ遺伝子プロモーターの
支配下に置かれた。
プラスミドＭ１３ＴＧ１１２５及びｐＴＧ１８６ＰＯＬ
Ｙを制限酵素ＢａｍＨＩ及びＥｃｏＲＩにより切断した
。これらの反応の生成物を混合し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ
の作用に供し、バクテリアへトランスフェクトした。得
られたクローンを制限マツピングにより分析し、プラス
ミドｐＴＧ２１０２を選択した。
Ｙを制限酵素ＢａｍＨＩ及びＥｃｏＲＩにより切断した
。これらの反応の生成物を混合し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼ
の作用に供し、バクテリアへトランスフェクトした。得
られたクローンを制限マツピングにより分析し、プラス
ミドｐＴＧ２１０２を選択した。
実施例５
〈ワクシニア ウィルス ゲノムへのｐ２５遺伝子の導
入及び組換えウィルスの単離〉 スミスら（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ、１９８３）に
より記述されている手順は、イン・ビボで、感染細胞内
のワクシニア ウィルス ゲノムの相同配列（ｈｏｍｏ
ｌｏｇｏｕｓ ５ｅｑｕｅｎｃｅＳ）間で生ずる遺伝
的組換えに依存している。この現象は、プラスミド内に
クローン化されたＤＮＡフラグメントのウィルス ゲノ
ムへの移入を可能とする。ワクシニア ウィルスのチミ
ジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子の使用は、外来ＤＮＡがこ
の遺伝子の座に組み込まれることを可能とするだけでは
なく、ＴＫ−となった組換えウィルスの選択用の表現型
マーカーを入手することをも可能とする。
入及び組換えウィルスの単離〉 スミスら（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ、１９８３）に
より記述されている手順は、イン・ビボで、感染細胞内
のワクシニア ウィルス ゲノムの相同配列（ｈｏｍｏ
ｌｏｇｏｕｓ ５ｅｑｕｅｎｃｅＳ）間で生ずる遺伝
的組換えに依存している。この現象は、プラスミド内に
クローン化されたＤＮＡフラグメントのウィルス ゲノ
ムへの移入を可能とする。ワクシニア ウィルスのチミ
ジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子の使用は、外来ＤＮＡがこ
の遺伝子の座に組み込まれることを可能とするだけでは
なく、ＴＫ−となった組換えウィルスの選択用の表現型
マーカーを入手することをも可能とする。
ＴＫ−ウィルスは、５−ブロモデオキシウリジン（５Ｂ
ＵＤＲ）の存在下にＴＫ−細胞系統上に塗布（ｐｌａｔ
ｅ ）することにより、選択され得る〔マケットら（Ｍ
ａｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ）、１９８２）。ＴＫ−
ウィルスは、自身のＤＮＡをその上で正常に複製するこ
とが出来、目視出来るプラークを形成する。
ＵＤＲ）の存在下にＴＫ−細胞系統上に塗布（ｐｌａｔ
ｅ ）することにより、選択され得る〔マケットら（Ｍ
ａｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ）、１９８２）。ＴＫ−
ウィルスは、自身のＤＮＡをその上で正常に複製するこ
とが出来、目視出来るプラークを形成する。
ワクシニア ウィルスは、感染した細胞の核内でよりは
むしろ感染した細胞の細胞質内で繁殖する。この理由に
より、宿主のＤＮＡの複製及び転写の機構を利用するこ
とが出来ず、ピリオンがそのゲノムの発現のためのコン
ポーネントを有している必要がある。精製されたＶＶ
ＤＮＡは、非感染性である。
むしろ感染した細胞の細胞質内で繁殖する。この理由に
より、宿主のＤＮＡの複製及び転写の機構を利用するこ
とが出来ず、ピリオンがそのゲノムの発現のためのコン
ポーネントを有している必要がある。精製されたＶＶ
ＤＮＡは、非感染性である。
組換え体を発生させるためには、ワクシニアＤＮＡと相
同性の領域を持つクローン化異種ＤＮＡフラグメントで
トランスフェクションを行うと同時に、ｖｖピリオンに
よる細胞感染を行う必要がある。しかしながら、組換え
体の発生は、ＤＮＡによるトランスフェクションに応答
し得る細胞中の少量部分に限られている。
同性の領域を持つクローン化異種ＤＮＡフラグメントで
トランスフェクションを行うと同時に、ｖｖピリオンに
よる細胞感染を行う必要がある。しかしながら、組換え
体の発生は、ＤＮＡによるトランスフェクションに応答
し得る細胞中の少量部分に限られている。
＊・
３９．５℃とい゛う非許容温度で複製することが出来な
いワクシニアの温度感受性（ｔ ｓ）変異体の生感染性
ウィルスとしての使用は〔ドリリエン及びスペーナ−（
Ｄｒｉｌｌｉｅｎ ｅｔ ５ｐｅｈｎｅｒ ） １９８
３〕、非組換えウィルスにより形成されたバックグラウ
ンドを減少させる。細胞が、非許容条件下にｔｓ変異体
により感染され且つ野生型ウィルスのＤＮＡによりトラ
ンスフェクトされる場合には、ウィルスの増殖は、トラ
ンスフェクションの受容性があり且つ野生型ウィルスの
ＤＮＡとｔｓウィルスのゲノムとの間で組換えが生じて
いる細胞内でのみ起こる；その他の細胞内では、これ等
細胞が感染しているにもかかわらず、ウィルスは増殖し
ない。若し、ｐＴＧ２１０１またはｐＴＧ２１０２の様
なワクシニアＤＮＡフラグメントを含む組換えプラスミ
ドが、適当な濃度で、野生型ＤＮＡとのトランスフェク
ション混合物中に含まれるならば、受容性のある細胞中
で、ワクシニアＤＮＡとの同族組換え（ｈｏｍｏｌｏｇ
ｏｕｓ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）に該プラスミド
を関与させることも可能である。
いワクシニアの温度感受性（ｔ ｓ）変異体の生感染性
ウィルスとしての使用は〔ドリリエン及びスペーナ−（
Ｄｒｉｌｌｉｅｎ ｅｔ ５ｐｅｈｎｅｒ ） １９８
３〕、非組換えウィルスにより形成されたバックグラウ
ンドを減少させる。細胞が、非許容条件下にｔｓ変異体
により感染され且つ野生型ウィルスのＤＮＡによりトラ
ンスフェクトされる場合には、ウィルスの増殖は、トラ
ンスフェクションの受容性があり且つ野生型ウィルスの
ＤＮＡとｔｓウィルスのゲノムとの間で組換えが生じて
いる細胞内でのみ起こる；その他の細胞内では、これ等
細胞が感染しているにもかかわらず、ウィルスは増殖し
ない。若し、ｐＴＧ２１０１またはｐＴＧ２１０２の様
なワクシニアＤＮＡフラグメントを含む組換えプラスミ
ドが、適当な濃度で、野生型ＤＮＡとのトランスフェク
ション混合物中に含まれるならば、受容性のある細胞中
で、ワクシニアＤＮＡとの同族組換え（ｈｏｍｏｌｏｇ
ｏｕｓ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）に該プラスミド
を関与させることも可能である。
ニワトリ胚繊維芽細胞（ｃＥ Ｆ）初代培養細胞の単分
子層に３３℃でｖｖ−コペンハーゲンｔｓ７ （０，１
ｐｆｕ ／細胞）を感染させるとともに、ｖＶ−コペン
ハーゲン野生型ウィルスのＤＮＡ（５０ｎｇ／１０６個
細胞）と組換えプラスミド（５０ｎｇ／１０６個細胞）
とのリン酸カルシウム共析出物をトランスフェクトさせ
た。
子層に３３℃でｖｖ−コペンハーゲンｔｓ７ （０，１
ｐｆｕ ／細胞）を感染させるとともに、ｖＶ−コペン
ハーゲン野生型ウィルスのＤＮＡ（５０ｎｇ／１０６個
細胞）と組換えプラスミド（５０ｎｇ／１０６個細胞）
とのリン酸カルシウム共析出物をトランスフェクトさせ
た。
温度３３℃で２時間インキュベートした後、細胞を３９
．５℃（この温度では、ｔＳウィルスの−成長は不可能
である）で４８時間インキュベートした。５ＢＵＤＲ（
１５０μｇ／ｆｎＱ）の存在下に３７℃で１４３８−Ｔ
Ｋ−ヒト細胞の単分子層に感染させるために、ｔｓ”？
イルスの希釈物を使用した。組換えプラスミドを受は入
れたこれ等の細胞からＴＫ−ウィルスの種々のプラーク
を得たのに対し、プラスミドの存在しない対照培養物は
、プラークを示さなかった。次いで、ＴＫ″″ウィルス
を５ＢＵＤＲの存在下に二次選択によりサブクローンし
た。
．５℃（この温度では、ｔＳウィルスの−成長は不可能
である）で４８時間インキュベートした。５ＢＵＤＲ（
１５０μｇ／ｆｎＱ）の存在下に３７℃で１４３８−Ｔ
Ｋ−ヒト細胞の単分子層に感染させるために、ｔｓ”？
イルスの希釈物を使用した。組換えプラスミドを受は入
れたこれ等の細胞からＴＫ−ウィルスの種々のプラーク
を得たのに対し、プラスミドの存在しない対照培養物は
、プラークを示さなかった。次いで、ＴＫ″″ウィルス
を５ＢＵＤＲの存在下に二次選択によりサブクローンし
た。
ｐＴＧ２１０１またはｐＴＧ２１０２プラスミドとｖＶ
ゲノムとの間での二重相互的組換えは、挿入フラグメン
トを保持するＴＫ遺伝子とウィルスのＴＫ遺伝子との交
換を引き起こし、従って、組換え体は、ＴＫ−となった
。
ゲノムとの間での二重相互的組換えは、挿入フラグメン
トを保持するＴＫ遺伝子とウィルスのＴＫ遺伝子との交
換を引き起こし、従って、組換え体は、ＴＫ−となった
。
異なるＴＫ″″組換えウィルスから精製されたＤＮＡは
、Ｂｉｎｄ■により消化され、アガロースゲル電気泳勘
に供された。ＤＮＡフラグメントは、サザーン（ＳＯＵ
ＴＨＥＲＮ、 １９７５）により記述された手法に従っ
てニトロセルロース フィルターに移された。次いで、
フィルターは、予めアイソトープ３２ｐによりラベルさ
れたプラスミドｐＴＧ２１０１またはｐＴＧ２１０２と
共にインキュベートされた。フィルターは、洗浄され、
オートラジオグラフィーに供された。現像後、ｐ２５を
コードする遺伝子のワクシニア ゲノムへの移行を裏付
ける大きさのフラグメントの存在をフィルム上で観察し
た。
、Ｂｉｎｄ■により消化され、アガロースゲル電気泳勘
に供された。ＤＮＡフラグメントは、サザーン（ＳＯＵ
ＴＨＥＲＮ、 １９７５）により記述された手法に従っ
てニトロセルロース フィルターに移された。次いで、
フィルターは、予めアイソトープ３２ｐによりラベルさ
れたプラスミドｐＴＧ２１０１またはｐＴＧ２１０２と
共にインキュベートされた。フィルターは、洗浄され、
オートラジオグラフィーに供された。現像後、ｐ２５を
コードする遺伝子のワクシニア ゲノムへの移行を裏付
ける大きさのフラグメントの存在をフィルム上で観察し
た。
プラスミドｐＴＧ２１０１及びｐＴＧ２１０２の夫々に
ついて、組換えウィルスを選択して、夫々ＶＶ、ＴＧ、
２５ＭＧ及びＶＶ、ＴＧ、２５ＭＡと命名した。
ついて、組換えウィルスを選択して、夫々ＶＶ、ＴＧ、
２５ＭＧ及びＶＶ、ＴＧ、２５ＭＡと命名した。
実施例６
く組換えワクシニア ウィルスにより感染された細胞中
でのｐ２５蛋白質の合成〉 下記の手順を組換えウィルスＶＶ、ＴＧ、２５ＭＡ及び
ＶＶ、ＴＧ、２５ＭＧに対し、それぞれ適用した。
でのｐ２５蛋白質の合成〉 下記の手順を組換えウィルスＶＶ、ＴＧ、２５ＭＡ及び
ＶＶ、ＴＧ、２５ＭＧに対し、それぞれ適用した。
ＢＨＫ２１細胞の半集密的細胞単層を０．２ｐｆｕ／細
胞の濃度で感染させた。感染は、ウシ胎児血清５％を補
足されたＧ−ＭＥＭ培養培地中で組換えワクシニア ウ
ィルスを使用して行った。
胞の濃度で感染させた。感染は、ウシ胎児血清５％を補
足されたＧ−ＭＥＭ培養培地中で組換えワクシニア ウ
ィルスを使用して行った。
３７°Ｃで１８時間インキュベートした後、放射性アイ
ソトープ３５ｓでラベルしたメチオニンを含む新たな培
地により、培養培地を取り替えた。一般的なルールとし
て、培養培地１ｍｌに［３５Ｓ］メチオニン（５ｍＣ１
／３００μｍ）１０μｍを加えて、蛋白質の十分なラベ
リングを達成した。培地を３７℃で更にインキュベート
した後、遠心分離により、細胞から培地上澄みを分離し
た。２つのフラクションをエイズ患者の血清と共にそれ
ぞれインキュベートシ、次いでプロティンＡ−セファロ
ーズと共にインキュベートした。プロティンＡ−セファ
ローズ上に吸着された免疫グロブリン フラクションを
次いで遠心により分離し、この物質を５ＤＳ−ポリアク
リルアミド ゲル 電気泳動に供し、更にオートラジオ
グラフィーを行った。
ソトープ３５ｓでラベルしたメチオニンを含む新たな培
地により、培養培地を取り替えた。一般的なルールとし
て、培養培地１ｍｌに［３５Ｓ］メチオニン（５ｍＣ１
／３００μｍ）１０μｍを加えて、蛋白質の十分なラベ
リングを達成した。培地を３７℃で更にインキュベート
した後、遠心分離により、細胞から培地上澄みを分離し
た。２つのフラクションをエイズ患者の血清と共にそれ
ぞれインキュベートシ、次いでプロティンＡ−セファロ
ーズと共にインキュベートした。プロティンＡ−セファ
ローズ上に吸着された免疫グロブリン フラクションを
次いで遠心により分離し、この物質を５ＤＳ−ポリアク
リルアミド ゲル 電気泳動に供し、更にオートラジオ
グラフィーを行った。
第３図は、組換エウイルスＶＶ、ＴＧ、２５ＭＧ及びＶ
Ｖ、ＴＧ、２５ＭＡを使用して得られた結果を示す。細
胞ペレットを使用して得られた結果を示す第３Ａ図にお
いて、左側のレーン１，２゜３．４．５は、組換えウィ
ルスＶＶ、ＴＧ、 ２５ＭＡ （３５メチオニンでラ
ベリング後２．４．６．１０及び２４時間）に対応する
；右側のレーン１゜２．３，４．５は、組換えウィルス
ＶＶ、ＴＧ。
Ｖ、ＴＧ、２５ＭＡを使用して得られた結果を示す。細
胞ペレットを使用して得られた結果を示す第３Ａ図にお
いて、左側のレーン１，２゜３．４．５は、組換えウィ
ルスＶＶ、ＴＧ、 ２５ＭＡ （３５メチオニンでラ
ベリング後２．４．６．１０及び２４時間）に対応する
；右側のレーン１゜２．３，４．５は、組換えウィルス
ＶＶ、ＴＧ。
２５ＭＧ（ラベリング後２．４．６．１０及び２４時間
）に対応する；レーンＭは、分子量マーカー（ダルトン
）に対応する。第３Ｂ図は、対応する培養の上澄みに対
応する。
）に対応する；レーンＭは、分子量マーカー（ダルトン
）に対応する。第３Ｂ図は、対応する培養の上澄みに対
応する。
これらの結果は、約２５０００ダルトンの分子量を有す
る蛋白質が、エイズ患者の血清により、免疫析出させら
れたことを示している。この蛋白質は、組換えワクシニ
ア ウィルスに感染したＢＨＫ細胞中には存在するが、
野生型のワクシニアウィルスによる感染体には存在して
いない（図面には示さず）。従って、組換えワクシニア
ウィルスＶＶ、Ｔ０．２５ＭＧ及びＶＶ、ＴＧ、
２５ＭＡは、ｐ２５ＨＩＶの蛋白質に類似する構造を有
する蛋白質の合成を行っていることになる。
る蛋白質が、エイズ患者の血清により、免疫析出させら
れたことを示している。この蛋白質は、組換えワクシニ
ア ウィルスに感染したＢＨＫ細胞中には存在するが、
野生型のワクシニアウィルスによる感染体には存在して
いない（図面には示さず）。従って、組換えワクシニア
ウィルスＶＶ、Ｔ０．２５ＭＧ及びＶＶ、ＴＧ、
２５ＭＡは、ｐ２５ＨＩＶの蛋白質に類似する構造を有
する蛋白質の合成を行っていることになる。
何故ならば、該蛋白質は、患者の血清により完全に認識
されているからである。
されているからである。
実施例７
〈組換えワクシニア ウィルスＶＶ、ＴＧ、 ２５Ｆ
ｖＩＧ及びＶＶ、ＴＧ、２５ＭＡを接種されたマウスに
おける抗＝ｐ２５抗体の生産〉 生後７週間の雄性Ｃ５７／Ｂ １マウス４匹の尾の付根
を切開し、夫々４ｘｌＯ”ｐｆｕの組換えワクシニアウ
ィルスＶＶ、ＴＧ、２５ＭＧ及びＶＶ、ＴＧ、２５ＭＡ
を接種した。４週間後、マウスから血液試料を採取し、
上記と同様に２度目の接種を行なった。３週後、犠牲死
させ、心臓穿刺により血液を全て（ｉｎ ｔｏｔｏ ）
取出した。
ｖＩＧ及びＶＶ、ＴＧ、２５ＭＡを接種されたマウスに
おける抗＝ｐ２５抗体の生産〉 生後７週間の雄性Ｃ５７／Ｂ １マウス４匹の尾の付根
を切開し、夫々４ｘｌＯ”ｐｆｕの組換えワクシニアウ
ィルスＶＶ、ＴＧ、２５ＭＧ及びＶＶ、ＴＧ、２５ＭＡ
を接種した。４週間後、マウスから血液試料を採取し、
上記と同様に２度目の接種を行なった。３週後、犠牲死
させ、心臓穿刺により血液を全て（ｉｎ ｔｏｔｏ ）
取出した。
血清のＨＩＶ蛋白質の認識能をイムノ・プロッティング
方により評価した。この方法は、５ＤＳ−ポリアクリム
アミドゲル電気泳動後、ＨＩＶ蛋白質を前もって吸着さ
せたニトロセルロース膜と共にて、血清をインキュベー
トするものである。
方により評価した。この方法は、５ＤＳ−ポリアクリム
アミドゲル電気泳動後、ＨＩＶ蛋白質を前もって吸着さ
せたニトロセルロース膜と共にて、血清をインキュベー
トするものである。
ワクチン接種１月後に採取した最初の血清試料で得られ
た結果より、組換えワクシニアウィルスで接種されたマ
ウスの血清中に、ＨＩＶ（７）１）２５蛋白質を特異的
に認識する抗体が認められた。更に、他のいくつかの血
清試料も、ｐ４０レベルでのバンドの存在から証明され
るように、ｐ２５及びそのｐ４０前駆体の間に共通のエ
ピトープを認識することができる。これらの抗体は、野
生型ワクシニアウィルスを接種されたマウスの血清には
認められない（結果は図示せず）。
た結果より、組換えワクシニアウィルスで接種されたマ
ウスの血清中に、ＨＩＶ（７）１）２５蛋白質を特異的
に認識する抗体が認められた。更に、他のいくつかの血
清試料も、ｐ４０レベルでのバンドの存在から証明され
るように、ｐ２５及びそのｐ４０前駆体の間に共通のエ
ピトープを認識することができる。これらの抗体は、野
生型ワクシニアウィルスを接種されたマウスの血清には
認められない（結果は図示せず）。
第４図は、ブースター注射２５日後に採取した血清より
得られた結果を示す。レーン１，２，３゜４は、組換え
ウィルスｖｖ、ＴＧ、２５ＭＡを接種された４匹のマウ
スの血清に対応する。レーン５及び６は、組換えウィル
スｖＶ、Ｔ０．２５ＭＧを接種された２匹のマウスの血
清に対応する。
得られた結果を示す。レーン１，２，３゜４は、組換え
ウィルスｖｖ、ＴＧ、２５ＭＡを接種された４匹のマウ
スの血清に対応する。レーン５及び６は、組換えウィル
スｖＶ、Ｔ０．２５ＭＧを接種された２匹のマウスの血
清に対応する。
組換えワクシニアウィルスＶＶ、ＴＧ、２５ＭＧを接種
された２匹のマウスの血清は、第４図には示されていな
いが、同様の結果を与える。レーンＴはエイズ患者の血
清に対応する。第４図におけるｐ２５及びｐ４０前駆体
のバンド並びにｐ５５前駆体に特有の二重体（ｄｏｕｂ
ｌｅｔ ）に対応するバンドの存在は、組換えワクシニ
アウィルスｖＶ。
された２匹のマウスの血清は、第４図には示されていな
いが、同様の結果を与える。レーンＴはエイズ患者の血
清に対応する。第４図におけるｐ２５及びｐ４０前駆体
のバンド並びにｐ５５前駆体に特有の二重体（ｄｏｕｂ
ｌｅｔ ）に対応するバンドの存在は、組換えワクシニ
アウィルスｖＶ。
ＴＧ、２５ＭＡ及びＶＶ、ＴＧ、２５ＭＧで接種された
マウスの強い免疫反応を示している。
マウスの強い免疫反応を示している。
第４図より示される結果から明らかなように、ＨＩＶの
ｐ２５蛋白質を生産する組換え体ＶＶ。
ｐ２５蛋白質を生産する組換え体ＶＶ。
ＴＧ、２５ＭＡ及びＶＶ、ＴＧ、２５ＭＧ！、：よるマ
ウスの接種は、これらの動物において特異的免疫反応を
誘発する。更に、合成された抗体もｐ２５及びｐ４０前
駆体を認識し、それによって、ワクチン接種されたマウ
スにおける免疫反応の高い特異性が確かめ゛られる。
ウスの接種は、これらの動物において特異的免疫反応を
誘発する。更に、合成された抗体もｐ２５及びｐ４０前
駆体を認識し、それによって、ワクチン接種されたマウ
スにおける免疫反応の高い特異性が確かめ゛られる。
得られた組換え蛋白質は、該ウィルスに接触した患者の
血中に存在する潜在抗体を検出するための診断用キット
に用いることができる。これらの試験は、当業者に公知
の方法、例えば、ＥＬＩＳＡＳＲＩＰＡ及びウェスタン
ブロッティング（イムノ・プロッティング）等の方法に
従って、実施される。
血中に存在する潜在抗体を検出するための診断用キット
に用いることができる。これらの試験は、当業者に公知
の方法、例えば、ＥＬＩＳＡＳＲＩＰＡ及びウェスタン
ブロッティング（イムノ・プロッティング）等の方法に
従って、実施される。
また、該蛋白質は、試料中のウィルスを検出するのに用
いられるハイブリドーマ及びモノクロナール抗体を産生
させるためにも用いることができる。
いられるハイブリドーマ及びモノクロナール抗体を産生
させるためにも用いることができる。
下記のプラスミドは、１９８６年１１月２８日にパスツ
ール研究所（ｔｈｅ Ｉｒ＋５ｔｉｔｕｔ Ｐａ５ｔｅ
ｕｒ）のコレクシオン ナシオナル ド クルテユール
ド ミクロオルガニスム（ｃｏｌｌｅｃｔｌｏｎ Ｎａ
ｔｉｏｎａｌｅｄｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ ｄｅ Ｍｉｃ
ｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ （ＮａｔｉｏｎａｌＣｏ
ｌｌｅｃｔｌｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ
Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ） ）（２８リュ デュ ドク ト
ウールールウ、７７２４ パリ セデクス １５）に寄
託された。
ール研究所（ｔｈｅ Ｉｒ＋５ｔｉｔｕｔ Ｐａ５ｔｅ
ｕｒ）のコレクシオン ナシオナル ド クルテユール
ド ミクロオルガニスム（ｃｏｌｌｅｃｔｌｏｎ Ｎａ
ｔｉｏｎａｌｅｄｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ ｄｅ Ｍｉｃ
ｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ （ＮａｔｉｏｎａｌＣｏ
ｌｌｅｃｔｌｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ
Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ） ）（２８リュ デュ ドク ト
ウールールウ、７７２４ パリ セデクス １５）に寄
託された。
イー・コリ １１０６ ｐＴＧ２１０１ （Ｎｏ、１
イー・コリ １１０６ ｐＴＧ２１０２ （Ｎｏ、１
実施例８ く組換えワクシニアウィルスＶＶ、ＴＧ、２５ＭＡで接
種されたマウスの抗体による、ＨＩＶ−１のｐ２５蛋白
質の免疫沈降反応〉 蛋白質に［３５Ｓ］ システィンを組入れ、放射標識し
たＨＩＶ−１ウイルスの標本を抗原として用いた。これ
は、実施例７に記載のプロトコールに従って組換えワク
シニアウィルスで接種したＣ５７／ｂｌマウスの血清を
作用させることにより、沈降反応を起こした。
イー・コリ １１０６ ｐＴＧ２１０２ （Ｎｏ、１
実施例８ く組換えワクシニアウィルスＶＶ、ＴＧ、２５ＭＡで接
種されたマウスの抗体による、ＨＩＶ−１のｐ２５蛋白
質の免疫沈降反応〉 蛋白質に［３５Ｓ］ システィンを組入れ、放射標識し
たＨＩＶ−１ウイルスの標本を抗原として用いた。これ
は、実施例７に記載のプロトコールに従って組換えワク
シニアウィルスで接種したＣ５７／ｂｌマウスの血清を
作用させることにより、沈降反応を起こした。
５０μＱのウィルス°標本をＲＩＰＡ緩衝液中血清１０
μＱと共に、４℃で一晩培養し、次にプロティンＡ−セ
ファロースに接触させた。このマトリックス上に吸着し
た免疫グロブリン分画を、遠心分離によって、反応培地
より単離した。抗原抗体複合体を５ＤＳ−ポリアクリル
アミドゲル電気泳動にかけ、次いで蛍光間接撮影（ｆ
ｌｕｏｒｏｇｒａｐｈｙ）した。
μＱと共に、４℃で一晩培養し、次にプロティンＡ−セ
ファロースに接触させた。このマトリックス上に吸着し
た免疫グロブリン分画を、遠心分離によって、反応培地
より単離した。抗原抗体複合体を５ＤＳ−ポリアクリル
アミドゲル電気泳動にかけ、次いで蛍光間接撮影（ｆ
ｌｕｏｒｏｇｒａｐｈｙ）した。
第５図に結果を示す。レーンａ、 ｂ及びＣは各々マウ
ス血清及び２名の異なるヒトの血清により得られた免疫
沈降を示す。オートラジオグラフィから、ｐ２５蛋白質
が組換えワクシニアウィルスＶＶ、ＴＧ、２５ＭＡで接
種されたマウスの血清により免疫沈降を起こすＨＩＶ−
１の唯一の蛋白質であることが明らかである（その位置
を矢印で示す）。
ス血清及び２名の異なるヒトの血清により得られた免疫
沈降を示す。オートラジオグラフィから、ｐ２５蛋白質
が組換えワクシニアウィルスＶＶ、ＴＧ、２５ＭＡで接
種されたマウスの血清により免疫沈降を起こすＨＩＶ−
１の唯一の蛋白質であることが明らかである（その位置
を矢印で示す）。
従って、これらマウスの抗体は、ウェスタンブロッティ
ング法（実施例７参照）による分析で、ニトロセルロー
ス膜に吸着したｐ２５のみならず、ウィルス粒子中に見
出される天然の］）２５をも認識できる。
ング法（実施例７参照）による分析で、ニトロセルロー
ス膜に吸着したｐ２５のみならず、ウィルス粒子中に見
出される天然の］）２５をも認識できる。
この特性は、組換えウィルスＶＶ、ＴＧ、２５ＭＡの価
値を証明するものである。なぜなら、ＶＶ、ＴＧ、２５
ＭＡは、マウスにおいてＨＩＶ−１のｐ２５蛋白質のシ
ーケンシャルエピトープ（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｅｐ
Ｈｏｐｅ）及びコンフオメーショナルエピトーブ（ｃｏ
ｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ｅｐｉｔｏｐｅ）を認識で
きる抗体を誘発するからである。
値を証明するものである。なぜなら、ＶＶ、ＴＧ、２５
ＭＡは、マウスにおいてＨＩＶ−１のｐ２５蛋白質のシ
ーケンシャルエピトープ（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ ｅｐ
Ｈｏｐｅ）及びコンフオメーショナルエピトーブ（ｃｏ
ｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ｅｐｉｔｏｐｅ）を認識で
きる抗体を誘発するからである。
実施例９
〈完全なｇａｇ遺伝子の再構築とワクシニアウィルス中
への挿入〉 ファージＭ１３ＴＧ１１２０は、プラスミドｐＪ１９−
１３ （ヌクレオチド１２５８〜２５２３）のＨｉ ｎ
ｄｍ−Ｅ ｃ ｏＲＶフラグメントを含み、ｐ２５の
Ｃ−末端及びｐ１３の全体をコードする。
への挿入〉 ファージＭ１３ＴＧ１１２０は、プラスミドｐＪ１９−
１３ （ヌクレオチド１２５８〜２５２３）のＨｉ ｎ
ｄｍ−Ｅ ｃ ｏＲＶフラグメントを含み、ｐ２５の
Ｃ−末端及びｐ１３の全体をコードする。
このファージは、次の構造：
を有する。ｇａｇ遺伝子の残部は、２つのプラスミドｐ
Ｊ１９−１及びｐＪ１９−１７ （Ｈｉｎｄ■フラグメ
ント）中に含まれている。
Ｊ１９−１及びｐＪ１９−１７ （Ｈｉｎｄ■フラグメ
ント）中に含まれている。
第一段階は、Ｍ１３ＴＧ１１２０のＨｉｎｄＩＩＩ−Ｅ
ｃｏＲＶフラグメントから上流におけるｐ１８をコード
する部分の追加である。
ｃｏＲＶフラグメントから上流におけるｐ１８をコード
する部分の追加である。
プラスミドｐＪ１９−１は、プラスミドｐＵＣ１８にお
けるヌクレオチド７７と６３１との間にＨＩＶ−１ウィ
ルスのゲノムの配列を含んでＲＬＩ いる： 該ＤＮＡの転写の方向は、５ｓｔＩからＡｃｃ■への方
向へと進み、ｇａｇ開始ＡＴＧに対応するコドンは、位
置３３５Ｋ存在している〔ウエインーホブソン（Ｗａｉ
ｎ−Ｈｏｂｓｏｎ ） 、１９８５）。
けるヌクレオチド７７と６３１との間にＨＩＶ−１ウィ
ルスのゲノムの配列を含んでＲＬＩ いる： 該ＤＮＡの転写の方向は、５ｓｔＩからＡｃｃ■への方
向へと進み、ｇａｇ開始ＡＴＧに対応するコドンは、位
置３３５Ｋ存在している〔ウエインーホブソン（Ｗａｉ
ｎ−Ｈｏｂｓｏｎ ） 、１９８５）。
５ｓｔＩ−ＨｉｎｄＩＩ［フラグメントは、プラスミド
ｐＪ１９−１から切除され、バクテリオファージＭ１３
ＴＧ１１２０のＢａｍＨＩ部位とＨｉｎｄｍ部位との間
に、アダプター５’ −ＧＡＴＣＡＧＣＴ−３′により
、挿入されて、Ｍ１３ＴＧ１９１を生成する。Ｍ１３Ｔ
Ｇ１９１は、次の構造を有する。
ｐＪ１９−１から切除され、バクテリオファージＭ１３
ＴＧ１１２０のＢａｍＨＩ部位とＨｉｎｄｍ部位との間
に、アダプター５’ −ＧＡＴＣＡＧＣＴ−３′により
、挿入されて、Ｍ１３ＴＧ１９１を生成する。Ｍ１３Ｔ
Ｇ１９１は、次の構造を有する。
ＢａｍＨＩ’／Ｓａ七工φ
ＥｃｏＲＩ次の段階は、プラ
スミドｐＪ１９−１７のＨｉｎｄｍ中央フラグメント（
ヌクレオチド６３１−１２５８）を、Ｍ１３ＴＧ１９１
のＨｉｎｄＩＩＩ部位中に挿入することにある。これに
より、バクテリオファージＭ１３ＴＧ１９２： ５ａｉｌ ｐＬ８ ｐ２５
ｐ１３ ＥｃｏＲＥが生成子る。
ＥｃｏＲＩ次の段階は、プラ
スミドｐＪ１９−１７のＨｉｎｄｍ中央フラグメント（
ヌクレオチド６３１−１２５８）を、Ｍ１３ＴＧ１９１
のＨｉｎｄＩＩＩ部位中に挿入することにある。これに
より、バクテリオファージＭ１３ＴＧ１９２： ５ａｉｌ ｐＬ８ ｐ２５
ｐ１３ ＥｃｏＲＥが生成子る。
Ｍ１３ＴＧ１９２のＳａ Ｉ Ｉ−ＥｃｏＲＩ７ラグメ
ントを、次いで、プラスミドｐＴＧ１８６ＰＯＬＹの５
ａｌＩ部位とＥｃｏＲＩ部位との間に挿入し、プラスミ
ドｐＴＧ１１４４を得る。プラスミドｐＴＧ１１４４に
おいては、ｇａｇ遺伝子のコーディング配列が、ワクシ
ニアウィルスの７゜５Ｋプロモーターの制御下に置かれ
ている。このプラスミドは、ｇａｇ発現発現ブロック組
換えにより、ワクシニアウィルス中に組込まれることを
可能とする。゛ 実施例１０ 〈ｐ１８のリーディングフレームの末端への停止コドン
の導入〉 ｐ１８は、アミノ酸Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｔｙｒで終っ
ている。従って、停止コドンが、この配列のレベルで導
入されねばならない。この目的のために、限局性（ｌｏ
ｃａｌｉｚｅｄ ）突然変異を、Ｍｌ ３７Ｇ１９２に
ついて、オリゴヌクレオチド５’ −ＧＣＡＣＴＡＴＡ
ＧＡＣＴＡＧＴＴＴＴＧＧＣＴＧ −３’を用いて行い
、下記配列（Ｍ１３ＴＧ１１５４）Ｖａｔ Ｓｉｒ Ｇ
ｉｎ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｐｒ０ｆｅｅ Ｖ／１１ Ｇｉ
ｎＧＴＣＡＧＣＣｋＡ ＡＡＴ ＴＡＣＣＣＴ
ＡＴＡ ＧＴＧ ＣＡＧＣＡＧＣＣＭ ＡＡＣ’ｒ
’ＡＧ ＴＣＴ ＡＴＡ ＧＴＧ Ｃｐａ ｒ ＱＬｕ Ａｓｎ ５Ｌｏｏ Ｐｒ。
ントを、次いで、プラスミドｐＴＧ１８６ＰＯＬＹの５
ａｌＩ部位とＥｃｏＲＩ部位との間に挿入し、プラスミ
ドｐＴＧ１１４４を得る。プラスミドｐＴＧ１１４４に
おいては、ｇａｇ遺伝子のコーディング配列が、ワクシ
ニアウィルスの７゜５Ｋプロモーターの制御下に置かれ
ている。このプラスミドは、ｇａｇ発現発現ブロック組
換えにより、ワクシニアウィルス中に組込まれることを
可能とする。゛ 実施例１０ 〈ｐ１８のリーディングフレームの末端への停止コドン
の導入〉 ｐ１８は、アミノ酸Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｔｙｒで終っ
ている。従って、停止コドンが、この配列のレベルで導
入されねばならない。この目的のために、限局性（ｌｏ
ｃａｌｉｚｅｄ ）突然変異を、Ｍｌ ３７Ｇ１９２に
ついて、オリゴヌクレオチド５’ −ＧＣＡＣＴＡＴＡ
ＧＡＣＴＡＧＴＴＴＴＧＧＣＴＧ −３’を用いて行い
、下記配列（Ｍ１３ＴＧ１１５４）Ｖａｔ Ｓｉｒ Ｇ
ｉｎ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｐｒ０ｆｅｅ Ｖ／１１ Ｇｉ
ｎＧＴＣＡＧＣＣｋＡ ＡＡＴ ＴＡＣＣＣＴ
ＡＴＡ ＧＴＧ ＣＡＧＣＡＧＣＣＭ ＡＡＣ’ｒ
’ＡＧ ＴＣＴ ＡＴＡ ＧＴＧ Ｃｐａ ｒ ＱＬｕ Ａｓｎ ５Ｌｏｏ Ｐｒ。
を生成させる。
次いで、バクテリオファージＭ１３ＴＧ１１５４の５ａ
ｌＩ−８ｐｈＩフラグメントを、プラスミドｐＴＧ１８
６ＰＯＬＹ（７）Ｓ ａ ＬＩ部位と５ｐｈＩ部位との
間にクローン化し、プラスミドｐＴＧ１１９７を生成さ
せる。このプラスミドにおいて、ｐ１８のリーディング
フレームは、ワクシニアウィルスの７．５Ｋプロモータ
ーの制御下に置かれている。このプラスミドは、ｐ１８
のための発現ブロックが組ｉえによりワクシニアウィル
ス中に組込まれることを可能とする。
ｌＩ−８ｐｈＩフラグメントを、プラスミドｐＴＧ１８
６ＰＯＬＹ（７）Ｓ ａ ＬＩ部位と５ｐｈＩ部位との
間にクローン化し、プラスミドｐＴＧ１１９７を生成さ
せる。このプラスミドにおいて、ｐ１８のリーディング
フレームは、ワクシニアウィルスの７．５Ｋプロモータ
ーの制御下に置かれている。このプラスミドは、ｐ１８
のための発現ブロックが組ｉえによりワクシニアウィル
ス中に組込まれることを可能とする。
実施例１１
〈ｐ１８がそのＮ−末端部において麻疹ウィルスのＨＡ
遺伝子のＮ−末端疎水性ペプチドと融合したものの発現
を可能とするプラスミドの構築〉ｐ１８蛋白質をイン・
ビボ（ｉｎ ｖｌｖｏ ）でミリスチル化する。それは
、この脂肪酸を介して細胞質膜中に固定（ａｎｃｈｏｒ
）されることができる。この抗原のプレゼンテーション
を改善するために、この固定を疎水性ペプチド、例えば
、麻疹ウィルスのへマグルチニン（ＨＡ）遺伝子のそれ
により置換することができる。
遺伝子のＮ−末端疎水性ペプチドと融合したものの発現
を可能とするプラスミドの構築〉ｐ１８蛋白質をイン・
ビボ（ｉｎ ｖｌｖｏ ）でミリスチル化する。それは
、この脂肪酸を介して細胞質膜中に固定（ａｎｃｈｏｒ
）されることができる。この抗原のプレゼンテーション
を改善するために、この固定を疎水性ペプチド、例えば
、麻疹ウィルスのへマグルチニン（ＨＡ）遺伝子のそれ
により置換することができる。
プラスミドｐＴＧ２１５５ （フランス国特許８７／１
２．３９６）は、ワクシニアウィルスの７゜５Ｋプロモ
ーターから下流に、ＨＡ遺伝子の疎水性Ｎ−末端ペプチ
ドのコーディング配列を含んでいる。ＢａｍＨＩ部位が
、該疎水性領域のための配列の後に存在しており、これ
が外来ＤＮＡの組込みを可能とする。
２．３９６）は、ワクシニアウィルスの７゜５Ｋプロモ
ーターから下流に、ＨＡ遺伝子の疎水性Ｎ−末端ペプチ
ドのコーディング配列を含んでいる。ＢａｍＨＩ部位が
、該疎水性領域のための配列の後に存在しており、これ
が外来ＤＮＡの組込みを可能とする。
Ｂｇ１ｍ部位をｐ１８の開始ＡＴＧから上流に導入する
。これは、該遺伝子が、プラスミドｐＴＧ２１５５のＢ
ａｍＨＩ部位中に組込まれることを可能とするためであ
り、これは、オリゴヌクレオチド５’ −ＣＴＣＧＣＡ
ＣＣＣＡＴＡＧＡＴＣＴＣＣＴＴＣＴＡＧ −３’１、
突然変異ファージＭ１３７Ｇ１１５４：により行なうこ
とができる。得られるファージを、以下、Ｍ１３ＴＧ２
１６１という。
。これは、該遺伝子が、プラスミドｐＴＧ２１５５のＢ
ａｍＨＩ部位中に組込まれることを可能とするためであ
り、これは、オリゴヌクレオチド５’ −ＣＴＣＧＣＡ
ＣＣＣＡＴＡＧＡＴＣＴＣＣＴＴＣＴＡＧ −３’１、
突然変異ファージＭ１３７Ｇ１１５４：により行なうこ
とができる。得られるファージを、以下、Ｍ１３ＴＧ２
１６１という。
後者のＤＮＡを、次いで、ＢｇｌＩＩで切断し、プラス
ミドｐＴＧ２１５５のＢａｍＨＩ部位に挿入し、プラス
ミドｐＴＧ２１６０を得る。これは、ツクシュアウィル
スゲノム中への転移（ｔｒａｎｓｆｅｒ）を可能とする
。対応する組換えウィルスを、以下、ＶＶ、ＴＧ、２１
６１という。
ミドｐＴＧ２１５５のＢａｍＨＩ部位に挿入し、プラス
ミドｐＴＧ２１６０を得る。これは、ツクシュアウィル
スゲノム中への転移（ｔｒａｎｓｆｅｒ）を可能とする
。対応する組換えウィルスを、以下、ＶＶ、ＴＧ、２１
６１という。
実施例１２
くワクシニアウィルスにおけるｐ５５及びｐ１８ｇａｇ
蛋白質の発現〉 上記実施例に記載された挿入片を含む組換えワクシニア
ウィルス、ＶＶ、ＴＧ、１１４４及び１１９７は夫々、
ＨＩＶ−１ウィルスのｐ５５ＲＵ 蛋白質及びＩ）１８蛋白質をコードする。これらウィル
スは、実施例６に記載したように、細胞ローンズ（ｃｅ
ｌｌ ｌａｗｎｓ）を感染するのに用いられた。
蛋白質の発現〉 上記実施例に記載された挿入片を含む組換えワクシニア
ウィルス、ＶＶ、ＴＧ、１１４４及び１１９７は夫々、
ＨＩＶ−１ウィルスのｐ５５ＲＵ 蛋白質及びＩ）１８蛋白質をコードする。これらウィル
スは、実施例６に記載したように、細胞ローンズ（ｃｅ
ｌｌ ｌａｗｎｓ）を感染するのに用いられた。
免疫沈降に依り、２つの蛋白質の生産を示すことができ
、これら蛋白質は、５ＤＳ−ＰＡＧＥ（ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動）後に予測された移動度を以て泳動し
、それらのＮ−末端はミリスチル化される。ウィルスＶ
Ｖ、ＴＧ、２１６１は、予測されたように、ミリスチル
化されていない２３−ｋＤの蛋白質の合成を可能とする
。見かけ移動度３ Ｑ ｋ Ｄをもって泳動するｐ１８
の他の形態のものも、オートラジオグラフ上に観察され
る。このバンドは、ｐ１８のグリコジル化型に対応しな
い。
、これら蛋白質は、５ＤＳ−ＰＡＧＥ（ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動）後に予測された移動度を以て泳動し
、それらのＮ−末端はミリスチル化される。ウィルスＶ
Ｖ、ＴＧ、２１６１は、予測されたように、ミリスチル
化されていない２３−ｋＤの蛋白質の合成を可能とする
。見かけ移動度３ Ｑ ｋ Ｄをもって泳動するｐ１８
の他の形態のものも、オートラジオグラフ上に観察され
る。このバンドは、ｐ１８のグリコジル化型に対応しな
い。
固定されていないＣｕｎｆｉｘｅｄ ） Ｌ ＴＫ−７
ウスの細胞についての免疫蛍光実験により、ウィルスＶ
Ｖ、ＴＧ、１１９７及び２１６１により生産されたｐ１
８が感染細胞表面で視覚化される。
ウスの細胞についての免疫蛍光実験により、ウィルスＶ
Ｖ、ＴＧ、１１９７及び２１６１により生産されたｐ１
８が感染細胞表面で視覚化される。
上記の説明において参照した文献を、下記に列記する。
○ドリリエン、アール、 （Ｄｒｉｌｌｉｅｎ、 Ｒ
，）及びスペーナー、ディー、 （Ｓｐｅｈｎｅｒ
、 ’Ｄ、） 、ヴアイロロジー（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ）
１３１ 、３８５−３９３（１９８Ｂ）。
，）及びスペーナー、ディー、 （Ｓｐｅｈｎｅｒ
、 ’Ｄ、） 、ヴアイロロジー（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ）
１３１ 、３８５−３９３（１９８Ｂ）。
０フイツシヤー、ニー、ジー、 （Ｆｉｓｈｅｒ、
Ａ、Ｇ、）、７ エインヘル’ｊ 、 エム、ｔ：’−
，（Ｆｅｉｎｂｅｒｇ、 Ｍ。
Ａ、Ｇ、）、７ エインヘル’ｊ 、 エム、ｔ：’−
，（Ｆｅｉｎｂｅｒｇ、 Ｍ。
Ｂ、）、ジョセフス ニス、エフ、（Ｊｏｓｅｐｈｓ。
Ｓ、Ｆ、） 、ハーバ−エム、イー、 （Ｈａｒｐｅ
ｒ Ｍ。
ｒ Ｍ。
Ｅ、） 、７−セル、エル、エム、 （Ｍａｒｓｅｌ
ｌｅ、 Ｌ。
ｌｅ、 Ｌ。
Ｍ、）、レイニス、ジー、 （Ｒｅｙｅｓ、Ｇ、）
、ゴーダ。
、ゴーダ。
エム、ニー、 （Ｇｏｕｄａ 、 Ｍ、Ａ、） 、ア
ルドヴイニ。
ルドヴイニ。
ニー（Ａｌｄｏｖｉｎｉ、Ａ、 ） 、デバウク、シー
（Ｄｅｂｏｃｋ Ｃ，）ガロ、アール、シー、 （Ｇ
ａｌｌｏ 。
（Ｄｅｂｏｃｋ Ｃ，）ガロ、アール、シー、 （Ｇ
ａｌｌｏ 。
Ｒ，Ｃ，） 、ウォングースタール、エフ、 （Ｗｏ
ｎｇ−８ｔａａｌ 、 Ｆ、） 、ネーチャー （Ｎａ
ｔｕｒｅ） 、３２’０゜ｏキ−ニ＋、ｊ＋ム、ピー（
Ｋｉｅｎｅｙ、 Ｍ、Ｐ、） 、ラセ。
ｎｇ−８ｔａａｌ 、 Ｆ、） 、ネーチャー （Ｎａ
ｔｕｒｅ） 、３２’０゜ｏキ−ニ＋、ｊ＋ム、ピー（
Ｋｉｅｎｅｙ、 Ｍ、Ｐ、） 、ラセ。
アール（Ｌａｔｈｅ 、 Ｒ，） 、ルコック、ジエイ
、ピ＋、 （Ｌｅｃｏｃｑ、 Ｊ、Ｐ、） 、ジーン
（Ｇｅｎｅ） 、２６゜９１−９９．１９８３ ０コザック、エム、 （Ｋｏｚａｋ、Ｍ、） 、セル
（ｃｅｌｌ） 。
、ピ＋、 （Ｌｅｃｏｃｑ、 Ｊ、Ｐ、） 、ジーン
（Ｇｅｎｅ） 、２６゜９１−９９．１９８３ ０コザック、エム、 （Ｋｏｚａｋ、Ｍ、） 、セル
（ｃｅｌｌ） 。
４４．２８３−２９２ （１９８６）
Ｑラセ、アール−（Ｌａｔｈｅ、Ｒ，） 、ハース、ビ
ー。
ー。
（Ｉｌｉｒｔｈ、Ｐ、） 、デワイルド、エム、 （
Ｄｅｗｉｌｄｅ。
Ｄｅｗｉｌｄｅ。
＋４．） 、 ハーフオード、エフ、 （Ｈａｒｆｏ
ｒｄ、Ｎ、）、ルヨック、ジェイ、ピー、 （Ｌｅｃ
ｏｃｑ、 Ｊ、Ｐ、） 。
ｒｄ、Ｎ、）、ルヨック、ジェイ、ピー、 （Ｌｅｃ
ｏｃｑ、 Ｊ、Ｐ、） 。
ネーチャー （Ｎａｔｕｒｅ） 、２８４．４７３−４
７０マケット、エム、 （Ｍａｃｋｓｔｔ 、 Ｍ、
） 、スミス。
７０マケット、エム、 （Ｍａｃｋｓｔｔ 、 Ｍ、
） 、スミス。
ジ−６エル、 （Ｓｍｉｔｈ、Ｇ、Ｌ、） 、モス、
ビー（Ｍｏｓｓ、Ｂ、 ） 、プロシーディンゲス オ
ブ ザナショナル アカデミ−オブ サイエンスオブ
ザ ユナイティッド ステイツ オブアメリカ（Ｐｒｏ
ｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、 ） 、７
９．７４１５−７４１９ （１９８２）ｏマケット、エ
ム、 （Ｍａｃｋｅｔｔ 、 Ｍ、） 、スミス。
ビー（Ｍｏｓｓ、Ｂ、 ） 、プロシーディンゲス オ
ブ ザナショナル アカデミ−オブ サイエンスオブ
ザ ユナイティッド ステイツ オブアメリカ（Ｐｒｏ
ｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、 ） 、７
９．７４１５−７４１９ （１９８２）ｏマケット、エ
ム、 （Ｍａｃｋｅｔｔ 、 Ｍ、） 、スミス。
ジー、エル、 （Ｓｍｆｔｈ、 Ｇ、 Ｌ、） 、ジ
ャーナルオブ ジェネラル ヴイアロロジー（Ｊ、 Ｇ
ｅｎ。
ャーナルオブ ジェネラル ヴイアロロジー（Ｊ、 Ｇ
ｅｎ。
Ｖｌｒｏｌ、） 、６７、２０６７−２０８２ （１９
８０メシング（Ｍｅｓｓｉｎｇ）及びヴイエラス（Ｖｉ
ｅｒａｓ）、ジーン（Ｇｅｎｅ） 、１９． ２６９−
２７６ （１９８２）、 Ｏモス、ビー（Ｍｏｓｓ、Ｂ、 ） 、バンバリー レ
ポート （Ｂａｎｂｕｒｙ Ｒｅｐｏｒｔ）
、 Ａｐ ｒ−Ｍａ ｙ １ ９８５、
コールド スプリング ハーバ−ラボラトリイ（ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｌｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ ）、Ｃ８Ｈ，ＮＹ、ＵＳＡ Ｏミユージツク、エム、ニー、 （Ｍｕｅｓｉｎｇ、
Ｍ、Ａ、）、スミス、デ仁エイチ、 （Ｓｎ＋ｉｔｈ
、Ｄ、Ｈ，）、カブラディラ、シー、デ＜、 Ｌ （
ｃａｂｒａｄｉｌｌａ、Ｃ，Ｄ、）、ベントン、゛シー
、ヴ＜、 （Ｂｅｎｔｏｎ、 Ｃ，Ｖ、） 、ラスキ
ー、エル、 ：ｆ−＋、 （１，ａｓｋｙ、Ｌ、Ａ、
） 、カプロン、デ仁ジエイ、 （ｃａｐｒｏｎ、
Ｄ、Ｊ、） 、ネイチャー （Ｎａｔｕｒｅ） 、
３・１３．４５０−４５８ （１０パニカリ、ディ（Ｐ
ａｎｉｃａｌｉ、Ｄ、）及びパオレテイ。
８０メシング（Ｍｅｓｓｉｎｇ）及びヴイエラス（Ｖｉ
ｅｒａｓ）、ジーン（Ｇｅｎｅ） 、１９． ２６９−
２７６ （１９８２）、 Ｏモス、ビー（Ｍｏｓｓ、Ｂ、 ） 、バンバリー レ
ポート （Ｂａｎｂｕｒｙ Ｒｅｐｏｒｔ）
、 Ａｐ ｒ−Ｍａ ｙ １ ９８５、
コールド スプリング ハーバ−ラボラトリイ（ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｌｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ ）、Ｃ８Ｈ，ＮＹ、ＵＳＡ Ｏミユージツク、エム、ニー、 （Ｍｕｅｓｉｎｇ、
Ｍ、Ａ、）、スミス、デ仁エイチ、 （Ｓｎ＋ｉｔｈ
、Ｄ、Ｈ，）、カブラディラ、シー、デ＜、 Ｌ （
ｃａｂｒａｄｉｌｌａ、Ｃ，Ｄ、）、ベントン、゛シー
、ヴ＜、 （Ｂｅｎｔｏｎ、 Ｃ，Ｖ、） 、ラスキ
ー、エル、 ：ｆ−＋、 （１，ａｓｋｙ、Ｌ、Ａ、
） 、カプロン、デ仁ジエイ、 （ｃａｐｒｏｎ、
Ｄ、Ｊ、） 、ネイチャー （Ｎａｔｕｒｅ） 、
３・１３．４５０−４５８ （１０パニカリ、ディ（Ｐ
ａｎｉｃａｌｉ、Ｄ、）及びパオレテイ。
イー（Ｐａｏｌｅｔｔｉ、Ｅ、 ） 、Ｐｒｏｃ、Ｎａ
ｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ。
ｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ。
ＵＳＡ、７９．４９２７−４９３１ （１９８２）０パ
ニカリ、ディ（Ｐａｎｉｃａｌｉ、 Ｄ、） 、デイヴ
イス。
ニカリ、ディ（Ｐａｎｉｃａｌｉ、 Ｄ、） 、デイヴ
イス。
ニス、ダヴリュ＋、（Ｄａｖｉｓ、Ｓ、Ｗ、）、ヴアイ
ンバーグ、アール、エル、 （Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、Ｒ
，Ｌ、 ）、パオレティ、イー（ＰａｏＩｅｔｔｉ、Ｅ
、 ） ％ Ｐｒｏｃ。
ンバーグ、アール、エル、 （Ｗｅｉｎｂｅｒｇ、Ｒ
，Ｌ、 ）、パオレティ、イー（ＰａｏＩｅｔｔｉ、Ｅ
、 ） ％ Ｐｒｏｃ。
Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ、 ８０．５３６
４−５３ｏ−７トナー、エル、 （Ｒａｔｈｅｒ、Ｌ
、 ） 、ハセルティン・ ダヴリュ＋、 （Ｈａｓ
ｅｌｔｉｎｅ、Ｗ、） 、／々ターカ。
４−５３ｏ−７トナー、エル、 （Ｒａｔｈｅｒ、Ｌ
、 ） 、ハセルティン・ ダヴリュ＋、 （Ｈａｓ
ｅｌｔｉｎｅ、Ｗ、） 、／々ターカ。
アール、 （Ｐａｔａｒｃａ 、 Ｒ，） ％ リヴ
アク、ケー。
アク、ケー。
ジエイ、 （Ｌｉｖａｋ、に、Ｊ、） 、スターシッ
ク、ビー。
ク、ビー。
（Ｓｔａｒｃｉｃｈ、Ｂ、 ） 、ジョセフス、ニス・
エフ（Ｊｏｓｅｐｈｓ、Ｓ、Ｆ、） 、トラン、イー、
アール。
エフ（Ｊｏｓｅｐｈｓ、Ｓ、Ｆ、） 、トラン、イー、
アール。
（Ｄｏｒａｎ、Ｅ、Ｒ，） 、ラフアルスキ、ジエイ、
ニー（Ｒａｆａｌｓｋｌ、Ｊ、Ａ、 ） 、ホワイトホ
ーン、イー。
ニー（Ｒａｆａｌｓｋｌ、Ｊ、Ａ、 ） 、ホワイトホ
ーン、イー。
ニー、 （Ｗｈｉｔｅｈｏｒｎ、Ｅ、Ａ、） 、ボー
マイスター。
マイスター。
ケー、 （Ｂａｕｍｅｉｓｔｅｒ、に、 ） 、イワ
ノフ、エル。
ノフ、エル。
（Ｉｖａｎｏｆｆ’、Ｌ、） 、ピータ−ウェイ’）：
ｘ、−７゜ニス、アール、 （Ｐｅｔｔｅｒｖａｙ
Ｊｒ、、Ｓ、Ｒ，） 、ペアラン１．エム、エル、
（Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍ、Ｌ、） 、ｏ−テンバーガー、
ジエイ、ニー、 （Ｌａｕｔｅｎｂｅｒｇｅｒ。
ｘ、−７゜ニス、アール、 （Ｐｅｔｔｅｒｖａｙ
Ｊｒ、、Ｓ、Ｒ，） 、ペアラン１．エム、エル、
（Ｐｅａｒｓｏｎ、Ｍ、Ｌ、） 、ｏ−テンバーガー、
ジエイ、ニー、 （Ｌａｕｔｅｎｂｅｒｇｅｒ。
Ｊ、Ａ、） 、ババス、ティ、ニス、 （Ｐａｐａｓ
、Ｔ、Ｓ、）、ギライエブ、ジェイ、 （Ｇｈｒａｙ
ｅｂ、Ｊ、） 、チャン。
、Ｔ、Ｓ、）、ギライエブ、ジェイ、 （Ｇｈｒａｙ
ｅｂ、Ｊ、） 、チャン。
エフ。ティ、 （ｃｈａｎｇ、Ｎ、Ｔ、）、ガロ、ア
ール。
ール。
シー、 （Ｇａｌｌｏ、Ｒ，Ｃ，） 、ウオンースタ
ール、エフ、 （Ｗｏｎｇ−Ｓｔａａｌ、Ｐ、 ）
、Ｎａｔｕｒｅ、 ３１３． ２０ローゼン、ジー、エ
イ、 （Ｒｏｓｅｎ、Ｇ、Ａ、） ％ソドロスキ、ジ
エイ、ジー、 （Ｓｏｄｏｒｏｓｋｉ、Ｊ、Ｇ、）、
ゴー、ダグリュー。シー、 （Ｇｏｈ、Ｗ、Ｃ，）
、ディトン、ニー、アイ、 （Ｄａｙｔｏｎ、Ａ、１
．）、リツブク。
ール、エフ、 （Ｗｏｎｇ−Ｓｔａａｌ、Ｐ、 ）
、Ｎａｔｕｒｅ、 ３１３． ２０ローゼン、ジー、エ
イ、 （Ｒｏｓｅｎ、Ｇ、Ａ、） ％ソドロスキ、ジ
エイ、ジー、 （Ｓｏｄｏｒｏｓｋｉ、Ｊ、Ｇ、）、
ゴー、ダグリュー。シー、 （Ｇｏｈ、Ｗ、Ｃ，）
、ディトン、ニー、アイ、 （Ｄａｙｔｏｎ、Ａ、１
．）、リツブク。
ジエー、 （Ｌｉｐｐｋｅ、Ｊ、 ） 、ハセルテイ
ン、ダヴリュー、 （Ｈａｓｅｌｔｉｎｅ、Ｗ、）
、Ｎａｔｕｒｅ、 ３１９゜Ｑスミス、ジー、エル、
（Ｓｍｉｔｈ、Ｇ、Ｌ、） 、マケット、エム、
（Ｍａｋｋｅｔｔ、Ｍ、） 、モス、ヴ仁（Ｍｏｓｓ
、Ｖ、 ） 、Ｎａｔｕｒｅ、 ３０２．４９０−４
９Ｏスミス、ジー、エル、 （Ｓｗｉｔｈ、Ｇ、Ｌ、）
、マーフイビー′、アール、 （Ｍｕｒｐｈｙ、Ｂ、
Ｒ，） 、モス、ビー（Ｍｏｓｓ、Ｂ、 ） 、Ｐｒｏ
ｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、 ＵＳＡ８０．７１
５５−７１５９ （１９８Ｂ）０スターシツク、ビー、
アール（Ｓｔａｒｃｉｅｈ、Ｂ、Ｒ，）バーン、ビー、
エイチ、 （Ｈａｈｎ、Ｂ、Ｈ，） 、シャウ、ジー
、エム、 （Ｓｈａｖ、Ｇ、Ｍ、）、マクニーリ−。
ン、ダヴリュー、 （Ｈａｓｅｌｔｉｎｅ、Ｗ、）
、Ｎａｔｕｒｅ、 ３１９゜Ｑスミス、ジー、エル、
（Ｓｍｉｔｈ、Ｇ、Ｌ、） 、マケット、エム、
（Ｍａｋｋｅｔｔ、Ｍ、） 、モス、ヴ仁（Ｍｏｓｓ
、Ｖ、 ） 、Ｎａｔｕｒｅ、 ３０２．４９０−４
９Ｏスミス、ジー、エル、 （Ｓｗｉｔｈ、Ｇ、Ｌ、）
、マーフイビー′、アール、 （Ｍｕｒｐｈｙ、Ｂ、
Ｒ，） 、モス、ビー（Ｍｏｓｓ、Ｂ、 ） 、Ｐｒｏ
ｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、 ＵＳＡ８０．７１
５５−７１５９ （１９８Ｂ）０スターシツク、ビー、
アール（Ｓｔａｒｃｉｅｈ、Ｂ、Ｒ，）バーン、ビー、
エイチ、 （Ｈａｈｎ、Ｂ、Ｈ，） 、シャウ、ジー
、エム、 （Ｓｈａｖ、Ｇ、Ｍ、）、マクニーリ−。
ビー、ディ （ＭｃＮＥＥＬＹ、Ｐ、Ｄ、） 、モウド
ロー、ニス、（Ｍｏｄｒｏｖ、Ｓ、 ） 、ウオルフ、
エイチ。
ロー、ニス、（Ｍｏｄｒｏｖ、Ｓ、 ） 、ウオルフ、
エイチ。
（ｖｏｌｆ、Ｈ，）、パークス、イー、ニス、 （Ｐａ
ｒｋｓ。
ｒｋｓ。
Ｅ、Ｓ、） 、パークス、ダヴリュー、ビー（Ｐａｒｋ
ｓ。
ｓ。
Ｗ、Ｐ、） 、ジョセフス、ニス、エフ、 （Ｊｏｓ
ｅｐｈｓ。
ｅｐｈｓ。
Ｓ、Ｆ、） 、ガロ、アール、シー、 （Ｇａｌｌｏ
、Ｒ，Ｃ，）、ウォンースタール、エフ、 （Ｗｏｎ
ｇ−３ｔａａｌ、Ｐ、 ）、セル（ｃｅｌｌ） 、 ４
５．６３７−６４８ （１９８０ウエインーホブソン、
ニス、 （Ｖａｉｎ−Ｈｏｂｓｏｎ、Ｓ、）、ソニゴ、
ピー、 （Ｓｏｎｉｇｏ、 Ｐ、） 、ダノス、オー
、 ル（Ｄａｎｏｓ、Ｏ，） 、コール、ニス、
（ｃｏｌｅ、Ｓ、 ） 。
、Ｒ，Ｃ，）、ウォンースタール、エフ、 （Ｗｏｎ
ｇ−３ｔａａｌ、Ｐ、 ）、セル（ｃｅｌｌ） 、 ４
５．６３７−６４８ （１９８０ウエインーホブソン、
ニス、 （Ｖａｉｎ−Ｈｏｂｓｏｎ、Ｓ、）、ソニゴ、
ピー、 （Ｓｏｎｉｇｏ、 Ｐ、） 、ダノス、オー
、 ル（Ｄａｎｏｓ、Ｏ，） 、コール、ニス、
（ｃｏｌｅ、Ｓ、 ） 。
、 アリシン、エム、 （Ａｌｉｚｏｎ、Ｍ、）、
セル（ｃｅｌｌ） 。
セル（ｃｅｌｌ） 。
４０．９−１７ （１９８５）
、 第１図は、プラスミドＭ１３ＴＧ１１２４の構築法
を示す図面であり、第２図はプラスミドＭ１３ＴＧ１１
２５の構築法を示す図面であり、図中の略号は下記の意
味を示す。 ←１Ｌ→：ＨＩＶのｐ１５蛋白質のリーディングフレー
ム。 ←ｐ１８→：ＨＩＶのｐ１８蛋白質のリーディングフレ
ーム。 （→屡２５ら＞：ＨＩＶのｐ２５蛋白質のリーディング
フレーム。 ＝＝＝コニＨＩＶ由来のヌクレオチド配列。 ｆｆ：ＨＩＶのｐ２５蛋白質のリーディングフレーム。 Ω ：定方向突然変異の位置 △Ｒ１：ＥｃｏＲＩ制限フラグメントの欠失。 ロ：使用した制限部位の表示。 Ｒ３，Ｒ１，Ｒ５，Ｂｌ、Ｐ２：夫々、制限酵素Ｈｉｎ
ｄ■、ＥｃｏＲＩ、ＥｃｏＲＶ、ＢａｍＨＬ ＰｖｕＩ
Ｉを示す。 第３Ａ図及び第３Ｂ図は、組換ウィルスによるｐ２５蛋
白質の生産を示すオートラジオグラフを示すものである
。 第４図は、免疫プロット法によるｐ２５Ｋ対する抗体の
検出結果を示すものである。 第５図は、ｐ２５の免疫沈降反応の結果を示すものであ
る。 （以 上） 畠 ｂ ｃ 自 ９、 ？ 一一−−−― ←−９２５ 一 〜−
を示す図面であり、第２図はプラスミドＭ１３ＴＧ１１
２５の構築法を示す図面であり、図中の略号は下記の意
味を示す。 ←１Ｌ→：ＨＩＶのｐ１５蛋白質のリーディングフレー
ム。 ←ｐ１８→：ＨＩＶのｐ１８蛋白質のリーディングフレ
ーム。 （→屡２５ら＞：ＨＩＶのｐ２５蛋白質のリーディング
フレーム。 ＝＝＝コニＨＩＶ由来のヌクレオチド配列。 ｆｆ：ＨＩＶのｐ２５蛋白質のリーディングフレーム。 Ω ：定方向突然変異の位置 △Ｒ１：ＥｃｏＲＩ制限フラグメントの欠失。 ロ：使用した制限部位の表示。 Ｒ３，Ｒ１，Ｒ５，Ｂｌ、Ｐ２：夫々、制限酵素Ｈｉｎ
ｄ■、ＥｃｏＲＩ、ＥｃｏＲＶ、ＢａｍＨＬ ＰｖｕＩ
Ｉを示す。 第３Ａ図及び第３Ｂ図は、組換ウィルスによるｐ２５蛋
白質の生産を示すオートラジオグラフを示すものである
。 第４図は、免疫プロット法によるｐ２５Ｋ対する抗体の
検出結果を示すものである。 第５図は、ｐ２５の免疫沈降反応の結果を示すものであ
る。 （以 上） 畠 ｂ ｃ 自 ９、 ？ 一一−−−― ←−９２５ 一 〜−
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）少なくとも、 （ａ）ベクターウイルスのゲノムの一部分、（ｂ）エイ
ズの原因となるＨＩＶウイルスの完全なｇａｇ遺伝子又
はそのサブフラグメントの一つ、特に、ｐ２５蛋白質を
コードする遺伝子又はｐ１８蛋白質をコードする遺伝子
、及び （ｃ）培養において真核細胞中でこの蛋白質の発現を可
能とするエレメント を含有するウイルスベクター。 （２）ウイルスのゲノムの一部分が、ボックスウイルス
のゲノムの一部分である特許請求の範囲第１項記載のウ
イルスベクター。 （３）ボックスウイルスが、ワクシニアウイルスである
特許請求の範囲第２項記載のウイルスベクター。 （４）ＤＮＡコーデイング配列が、ボックスウイルス遺
伝子のプロモーターの制御下にある特許請求の範囲第１
項乃至第３項のいずれかに記載のウイルスベクター。 （５）プロモーターが、ワクシニア遺伝子のプロモータ
ーである特許請求の範囲第４項記載のウイルスベクター
。 （６）ＤＮＡコーデイング配列が、ワクシニアの７．５
Ｋ蛋白質に対する遺伝子のプロモーターの制御下にある
特許請求の範囲第５項記載のウイルスベクター。 （７）コーデイング配列が、ワクシニアのＴＫ遺伝子中
にクローン化されている特許請求の範囲第４項乃至第６
項のいずれかに記載のウイルスベクター。 （８）少なくとも、 （イ）ベクターウイルスのゲノムの一部分、（ロ）エイ
ズの原因となるＨＩＶウイルスのｐ２５蛋白質をコード
する遺伝子、及び （ハ）培養において真核細胞中でこの蛋白質の発現を可
能とするエレメント を含有する特許請求の範囲第１項乃至第７項のいずれか
に記載のウイルスベクター。 （９）ＶＶ、ＴＧ、２５ＭＧ及びＶＶ、ＴＧ、２５ＭＡ
から選ばれたものである特許請求の範囲第８項記載のウ
イルスベクター。 （１０）少なくとも、 （ｉ）ベクターウイルスのゲノムの一部分、（ｉｉ）エ
イズの原因となるＨＩＶウイルスのｐ１８をコードする
遺伝子、及び （ｉｉｉ）培養において真核細胞中でこの蛋白質の発現
を可能とするエレメント を含有する特許請求の範囲第１項乃至第７項のいずれか
に記載のウイルスベクター。 （１１）ＶＶ、ＴＧ、１１９７及びＶＶ、ＴＧ、２１６
１から選ばれたものである特許請求の範囲第１０項記載
のウイルスベクター。 （１２）特許請求の範囲第１項乃至第１１項のいずれか
に記載のベクターに対応する組換ＤＮＡ。 （１３）特許請求の範囲第１項乃至第１１項のいずれか
に記載のウイルスベクターで感染された真核細胞の培養
物。 ９ 特許請求の範囲第１３項記載の培養物を得、生産さ
れた蛋白質を回収することを特徴とするエイズの原因と
なるウイルスの蛋白質を製造する方法。 （１５）特許請求の範囲第１４項に記載の方法を実施す
ることにより得られるエイズの原因となるウイルスの蛋
白質。 （１６）ｐ２５蛋白質である特許請求の範囲第１５項記
載の蛋白質。 （１７）ｐ１８蛋白質である特許請求の範囲第１５項記
載の蛋白質。 （１８）ｐ１８蛋白質が、そのＮ末端部分において麻疹
ウイルスのＨＡ遺伝子のＮ末端疎水性ペプチドと融合し
ている特許請求の範囲第１５項記載の蛋白質。 （１９）特許請求の範囲第１５項記載の蛋白質を有効成
分とする免疫原剤。 （２０）特許請求の範囲第１項乃至第１１項のいずれか
に記載のウイルスベクター及び／又は特許請求の範囲第
１５項の蛋白質を含有するワクチン。 （２１）特許請求の範囲第１項乃至第１１項のいずれか
に記載のウイルスベクターで生体を感染させるか又は生
体に特許請求の範囲第１５項の蛋白質を接種し、所定期
間経過後に形成された抗体を回収して得られることを特
徴とするエイズの原因となるウイルスの蛋白質に対応す
る抗体。 （２２）標識化され又はされない特許請求の範囲第１５
項記載の蛋白質又は特許請求の範囲第１８項記載の抗体
を有効成分とする診断剤。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8616787 | 1986-12-01 | ||
| FR8616787A FR2607518B1 (fr) | 1986-12-01 | 1986-12-01 | Vecteur viral et adn recombinant codant pour la proteine p25 du virus agent causal du s.i.d.a., culture cellulaire infectee, proteine obtenue, vaccin et anticorps obtenus |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63254983A true JPS63254983A (ja) | 1988-10-21 |
Family
ID=9341436
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62305503A Pending JPS63254983A (ja) | 1986-12-01 | 1987-12-01 | エイズの病原であるウイルスのｐ２５蛋白質をコードするウイルスベクター及び組換ＤＮＡ、感染された細胞培養物、得られる蛋白質、ワクチン及び得られる抗体 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0276591B1 (ja) |
| JP (1) | JPS63254983A (ja) |
| KR (1) | KR880007728A (ja) |
| AT (1) | ATE103934T1 (ja) |
| AU (1) | AU604791B2 (ja) |
| DE (1) | DE3789545T2 (ja) |
| DK (1) | DK631387A (ja) |
| FR (1) | FR2607518B1 (ja) |
| PT (1) | PT86234B (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2617715B1 (fr) * | 1987-07-07 | 1990-08-31 | Transgene Sa | Vecteur viral et adn recombinant codant pour une ou des proteines de surface (ha et/ou f) d'un morbillivirus, culture cellulaire infectee, proteines obtenues, vaccin et anticorps obtenus |
| EP0361749B1 (en) * | 1988-09-27 | 1995-02-08 | Dana Farber Cancer Institute | A vector comprising a replication competent HIV-I provirus and a heterologous gene |
| FR2640877A1 (ja) * | 1988-12-06 | 1990-06-29 | Centre Nat Rech Scient | |
| US5232829A (en) * | 1989-09-29 | 1993-08-03 | Hoffmann-La Roche Inc. | Detection of chlamydia trachomatis by polymerase chain reaction using biotin labelled lina primers and capture probes |
| JP2002125687A (ja) * | 2000-10-30 | 2002-05-08 | Tosoh Corp | Ｈｉｖ−１検出のためのオリゴヌクレオチドおよび検出法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1986006099A1 (en) * | 1985-04-08 | 1986-10-23 | Genetic Systems Corporation | EXPRESSION AND DIAGNOSTIC USE OF gag ENCODED PEPTIDES WHICH ARE IMMUNOLOGICALLY REACTIVE WITH ANTIBODIES TO LAV |
-
1986
- 1986-12-01 FR FR8616787A patent/FR2607518B1/fr not_active Expired
-
1987
- 1987-11-27 PT PT86234A patent/PT86234B/pt not_active IP Right Cessation
- 1987-11-27 AU AU81881/87A patent/AU604791B2/en not_active Ceased
- 1987-11-30 KR KR870013532A patent/KR880007728A/ko not_active Withdrawn
- 1987-12-01 EP EP87402715A patent/EP0276591B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1987-12-01 JP JP62305503A patent/JPS63254983A/ja active Pending
- 1987-12-01 DE DE3789545T patent/DE3789545T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-12-01 AT AT87402715T patent/ATE103934T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-12-01 DK DK631387A patent/DK631387A/da not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2607518A1 (fr) | 1988-06-03 |
| PT86234A (pt) | 1987-12-01 |
| DE3789545D1 (de) | 1994-05-11 |
| FR2607518B1 (fr) | 1989-10-20 |
| ATE103934T1 (de) | 1994-04-15 |
| EP0276591A3 (en) | 1988-10-05 |
| DK631387A (da) | 1988-06-02 |
| DK631387D0 (da) | 1987-12-01 |
| KR880007728A (ko) | 1988-08-29 |
| DE3789545T2 (de) | 1994-08-25 |
| EP0276591A2 (fr) | 1988-08-03 |
| EP0276591B1 (fr) | 1994-04-06 |
| AU604791B2 (en) | 1991-01-03 |
| PT86234B (pt) | 1990-11-07 |
| AU8188187A (en) | 1988-06-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4918166A (en) | Particulate hybrid HIV antigens | |
| JP3073752B2 (ja) | Ｈｉｖエンベロープタンパク質およびそれを用いたｈｉｖ抗原に対する抗体の検出方法 | |
| US5866320A (en) | Nucleic acids encoding for non-infectious, replication-defective, self-assembling HIV-1 viral particles containing antigenic markers in the gag coding region | |
| Griffiths et al. | Hybrid human immunodeficiency virus Gag particles as an antigen carrier system: induction of cytotoxic T-cell and humoral responses by a Gag: V3 fusion | |
| EP0265785A2 (en) | Polypeptides derived from the envelope gene of human immunodeficiency virus in recombinant baculovirus infected insect cells | |
| EP0677111B1 (en) | Novel proteinaceous particles | |
| NZ230855A (en) | Principal neutralising domain of hiv variant, dna, vaccine, assay, antibodies and treatment | |
| WO1996006177A2 (en) | Retrovirus-like particles made non-infectious by a plurality of mutations | |
| US5795577A (en) | Viral vector coding for a glycoprotein of the virus responsible for A.I.D.S. | |
| EP0201716B1 (en) | Expression of immunologically reactive viral proteins | |
| JP2719917B2 (ja) | Ａｉｄｓの原因ウィルスの糖蛋白質、該糖蛋白質の製造方法及びワクチン | |
| EP0329671B1 (en) | Particulate hybrid hiv antigens | |
| CA2077753C (en) | Purified gp120 composition retaining natural conformation | |
| KR19990044093A (ko) | 다수-서브타입 ｆｉｖ 백신 | |
| KR960005181B1 (ko) | 재조합 htlv-ⅲ 단백질 및 이의 용도 | |
| EP0651806B1 (en) | Anti-feline immunodeficiency virus (fiv) vaccines | |
| Yasuko et al. | Expression of an immunogenic region of HIV by a filamentous bacteriophage vector | |
| Charbit et al. | Immunogenicity and antigenicity of conserved peptides from the envelope of HIV-1 expressed at the surface of recombinant bacteria | |
| AU604791B2 (en) | Viral vector and recombinant DNA coding, in particular, for the p25 protein of the virus that is a causal agent of aids, infected cell culture, protein obtained, vaccine and antibodies obtained | |
| JPH02211881A (ja) | ＨＩＶに対する中和抗体を誘発するかまたはかかる抗体によって認識され得る免疫原配列を含むＨＢｓＡｇ抗原の形態学的特徴を有する組換えハイブリッドＨＢｓＡｇ粒子、かかる粒子をコードするヌクレオチド配列及び核粒子を含むワクチン | |
| JPH01500962A (ja) | ウィルスベクター及びエイズ原因ウィルスのｆ蛋白質をコードするｄｎａ組換え体、該ベクターにより感染された細胞培養物、上記蛋白質の製造方法、得られた蛋白質、ワクチン及び得られた抗体 | |
| Bugge et al. | Analysis of a highly immunodominant epitope in the human immunodeficiency virus type 1 transmembrane glycoprotein, gp41, defined by a human monoclonal antibody | |
| JPH02448A (ja) | Ｈｉｖ−２ウィルスの蛋白質を発現させるためのベクターおよびその用途 | |
| Kienzle et al. | Immunological study of the Nef protein from HIV-1 by polyclonal and monoclonal antibodies | |
| WO1988008449A1 (en) | Hiv related human retrovirus strain with cloned nucleotide sequence and applications thereof |