JPS63274871A - ケトン体検出用試験片 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、体液中、殊に尿中のアセト酢酸、アセトン、
β−ヒドロキシ醋酸等のケトン体を検出する為の改良さ
れた試験片に関するものである。

［従来技術］ 体液中にケトン体の検出されることの多い疾患に異常が
起こり、脂肪代謝が冗進し、遊離脂肪酸のｊＱ（が増加
する。そして遊離脂肪酸が活発に酸化されるようになり
、肝臓では多ｅの脂質の中間代謝産物としてのア七ト酢
醜、アセトン、β−ヒドロキシ醋酸等のケトン体がつく
られる。

これらは拡散により、血液中に放出され、更に尿中に大
量に排潰されるようになる。

従って、体液、殊に尿中のケトン体の検出は多数の疾）
Ｂの診断、あるいは病状の経過判定に際し重要な手段と
されている。

従来よりケトン体を検出する為に、試薬成分を吸収性担
体に乾燥状態で担持させた、いわゆる試験片を用いる方
法が、迅速かつ簡便な方法として繁用されている。

現在商品化されているケトン体検出用試験片はレガール
（Ｌｅｇａｌ）法に基づくものである（米国特許第２，
１８６，９０２参照）。

すなわち、ニトロプルシッド塩をアルカリ条件下でケト
ン体と反応させる方法である。

しかしながら１周知のようにニトロプルシッド塩はアル
カリ媒体中で速やかに分解する為、試薬成分の安定性と
使用時の反応性（感度）とは、互いに相反するものとな
っていた。

反応性を損なうことなく試験片を安定化する試みが、幾
つか報告されている。

例えば、酸性ＰＨを有する有機フィルム形成性重合体を
ニトロプルシッド塩とともに吸収性担体に含浸せしめる
方法（特公昭４１−１２４３９号参照）、あるいはエチ
レンジアミン四酢酸二ナトリウムとアミノ酸とを吸収性
担体に含浸後乾燥させ、これにニトロプルシッド塩の低
級アルコール−ジメチルホルムアミド混合溶液を含浸さ
せる方法（特公昭５３−２１３１９号参照）等である。

上記の方法により得られる試験片は、被検液に接触させ
た際に、始めてアルカリ条件が得られるように調製され
たものであるが、■大気中の重量の水分によっても感度
が低下する、■製造時に２段階の含浸工程を要する為、
均一に含浸された試験片を得るには著しい困難を伴う、
あるいは■有Ｉｔｉなジメチルホルムアミドを使用する
為製造時の作業環境に関し特別な配慮を要する、等の問
題点を有していた。

又、吸収性担体にニトロプルシッド塩及び重金属塩を一
段階で含浸させる方法も開示されている（特公昭５１−
４３７９６号参照）、該方法は工程は簡略化されてはい
るものの、重金属塩とニトロプルシッド塩とでは水に難
溶性の塩を形成する為、均一な含浸溶液を得ることが困
難であることから、ジメチルスルホキシド等の不揮発性
溶媒を添加することにより均一性の改善を計っている。

しかし。

不揮発性溶媒の添加は試験片自体の感度を著しく低下さ
せてしまう。

マグネシウム塩、又はカルシウム塩の存在下、アルカリ
媒体中でニトロプルシッド塩とケトン体とを反応させる
ことにより、均一な含浸溶液による。一段階の含浸工程
で試験片を製造する方法も開示された（特開昭５４−１
０９８９９号参照）。

しかし、該方法により得られる試験片は、使用に耐え得
る程度の感度を得る為に比較的多量のニトロプルシッド
塩を用いることが必要であった。

この為、ニトロプルシッド塩自体の有する色が反応前の
試験片の色となり、微場のケトン体との反応による弱い
呈色の観察を妨害し、判定を著しく不正確なものとする
。

更に、該方法は均一な含浸液を得ることでは。

従来の他の技術に比べれば改善されているが、アルカリ
媒体中のニトロプルシッド塩の安定性の改には、未だ満
足のいくものではなかった。

反応前のケトン体検出用試験片の色調を白色に保つ為に
、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド等の非
プロトン性溶媒を外観保持剤として利用することも知ら
れている。しかしながら、従来技術における。このよう
な外観保持剤の使用は、試験片の耐湿安定性の保持力は
なく、著しい感度の低下を招くものであった。

この他、糖の添加（米国特許第２，５７７．９７８号参
照）、塩化ナトリウムとアルギン酸の添加（特公昭３７
−８４４５号参照）、ニトロプルシッド塩を溶解させる
ことなく吸収性担体に担持させる方法（特公昭４８−１
４２７３号参照）、有機酸とシリコンの添加（特公昭５
４−７９３３号参照）、リチウム塩の添加（特公昭６２
−３９０３号参照）、イツトリウム塩の添加（特開昭５
６−１４１５６０号参照）、ニコチンアミド誘導体の添
加（特開昭５６−１４１１０５８号参照）、三リン酸塩
の添加（特開昭５８−１２９２６０号参照）等、ニトロ
プルシッド塩の安定化に関しては、種々の報告がなされ
ているがいずれも特異性や反応性（感度や反応速度）に
劣るものであったり、あるいは特殊な製法を要する等の
短所を有し、十分な効果は期待しがたいものであった。

［発明の目的］ 本発明は煩雑な工程をふむことなく製造することができ
、しかも感度並びに保存安定性の良好なケトン体検出用
試験片の提供を目的としている。

［発明の構成］ 本発明は、ニトロプルシッド塩とポリオキシエチレン基
含有誘導体とを必須成分とすることを特徴とするケトン
体検出用試験片である。

本発明におけるニトロプルシッド塩は、従来ケトン体検
出用組成物に使用されていたものを用いることができる
。好ましいニトロプルシッド塩としては、アルカリ金属
塩、中でもナトリウム塩及びカリウム塩等が挙げられる
。

本発明のポリオキシエチレン基含有誘導体としては、ポ
リエチレンオキシド、ポリオキシエチレンアルキルフェ
ニルエーテル、クラウンエーテル等が挙げられる。

ポリエチレンオキシドとしては乎均分子賃２００〜ｓｏ
、ｏｏｏ、特に好ましくは４００〜４，０００の「マク
ロゴール」あるいは「カーポワックスＪ　（カー／ヘイ
ド＆カーボンケミカルズ社製、）等として重版されてい
るものが、又ポリオキシエチレンアルキルフェニルエー
テルとしてはトリトンＸ１００、トリトンＸ　４０５（
ローム＆ハース社製、商品名）が、更にクラウンエーテ
ル類としてはポリエチレンオキシドと同程度の重合度の
もの、例えば１２−クラウン−４，１５−クラウン−５
，１８−クラウン−６ｋｇを利用することができる。こ
の他クリプタント試薬（クリプトフィックス社製、商品
名）として知られている二環性の環状ポリエーテル類を
利用してもよい。これらポリオキシエチレン基含有誘導
体は、各々単独でも組み合わせてでも使用することがで
きる。

更に本発明におけるポリオキシエチレン基、（含有誘導
体は、ニトロプルシッド塩１モル当たり　８モル以上、
好ましくはｌＯ〜１４モル程度添加することにより、よ
り確実な安定化効果が期待できる。

本発明によるケトン体検出用試験片は、緩衝剤等の物質
と組み合わせて使用することにより、精度、感度の点で
優れたものとするεとができる。

適当な緩衝剤としては、ホウ酸塩、エチレンジアミン四
酢酸四ナトリウム、シクロヘキサンジアミン四酢酸四ナ
トリウム、ニトリロニ酢酸三ナトリウム、ジアミノプロ
パン四酢酸四ナトリウム、及びヒドロキシエチルエチレ
ンジアミン三酢酸三ナトリウム等のアルカリ側のＰＨを
有する緩衝液があげられるが、好ましくはシクロヘキサ
ンジアミン四酢酸四ナトリウムを０．３〜１．０　Ｈ／
Ｉｌ濃度（ｐＨ９，１±　０．１）で使用する。

更に本発明によるケトン体検出用試験片には、ケトン体
とニトロプルシッド塩との発色反応を助けるための反応
助剤を添加することもできる。

反応助剤としては、グリシンやアラニンに代表される低
級アミノ酸等のアミノ基共与体が用いられる。

本発明のケトン体検出用試験片は、吸収性担体に乾燥状
態で担持させた被検体と接触させるだけでケトン体の検
出をＩ’Ｔ　を駈とする有用な試験用具である。

吸収性担体としては、濾紙、グラスウール、あるいは不
織布等の繊維性物質やゼラチン等のフィルム形成性物質
等が使用できる。

本発明のケトン体検出用試験片の製造にあたっては、例
えば緩衝剤、反応助剤等を主成分とする第一溶液を、濾
紙等の吸収性担体に含浸後乾燥させ、次いでニトロプル
シッド塩及びポリオキシエチレン基含有誘導体とを必須
成分とする本発明の組成物を低級アルコール等の溶媒で
溶解した第二溶液を含浸させた後、乾燥させる方法等が
用いられる。

上記の方法等により得られた担体は、適切な大きさに裁
断し、ポリスチレン等のプラスチックシートの様な支持
体に貼り付は試験片とする。

吸収性担体としてフィルム形成性物質を用いる場合には
、フィルム形成性物質と本発明のケト〕／体検出用試験
片の必須成分とを混合し、得られた混合物を直接、ポリ
スチレン等のプラスチックシートの様な支持体に塗布後
乾燥し、適切な大きさに裁断し、試験片とすることもで
きる。

［発明の作用］ 本発明のポリオキシエチレン基含有誘導体がニトロプル
シッド塩の安定性を向トさせる作用機序は明らかではな
いが、本発明者等はポリオキシエチ」／ン基を含有する
広範囲の誘導体が意外にもケトン体との反応性を阻害す
ることなく、公知の安定化剤よりも優れた耐熱性、耐湿
性を有し、かつ本発明のケトン体検出用試験片の外観色
を白色に保つ作用をも有することを見出し、本発明を完
成した。

以下、実施例に基づき、本発明の詳細な説明するが、こ
れにより本発明の範囲が限定されるものではない。

実施例１゜ ポリオキシエチレン基含有誘導体として、ポリエチレン
グリコールを用いた本発明のケトン体検出用試験片の調
製 以下に示す第一溶液にｒ紙を浸漬し、取り出し８０℃で
１時間乾燥させた６次いで、この濾紙を以下に示す第二
溶液に再度浸漬し、取り出し６０℃で１時間乾燥させた
。得られた白色の濾紙をＱ、６　ｃｍＸ　Ｏ，６ｅｌｌ
に裁断し、接着テープを用いてポリスチレンシートの支
持体に貼り付け、　０．５ｅｍ　Ｘ８、Ｏｃｍ＋のケト
ン体検出用試験片を得た。

尚、ポリエチレングリコールはシグマ社製の商′品名［
ポリエチレングリコール４００Ｊを、　ｔＰ紙はワット
マン社製の商品名「ワットマン３　ＭＭＪを使用した。

第一溶液 シクロヘキサンジアミン４酢Ｍ　　　１８．２ｇグリシ
ン　　　　　　　　　　　　　１８．２３ＩＯＮ水酸化
ナトリウム　　　　　　　２０．０　＋＊１精製水　　
　　　　　　　　　全量１００．０　ｍｌ第二溶液 ニトロプルシッドナトリウム　　　　１．０　ｇポリエ
チレングリコール４００　　　１０．Ｏｍｌメタノール
　　　　　　　　　　　　２０．０履１ジメチルスルホ
キシド エタノール　　　　　　　　　全量１００．０　ｍｌこ
のようにして得られた試験片の外観色調は、白色を呈し
、この試験片を５〜　ｌＯ■ｇ／ｄｉ濃度のアセト酢酸
を含有する被検尿に瞬時浸し、色調をｉ察した時、３０
秒以内に白色の外観色調が鮮明な紫色を呈することが確
認された．本実施例で作成した本発明のケトン体検出用
試験片は、以下試験片１．とする。

実施例２。

ポリオキシエチレン基含有誘導体として、ポリエチレン
グリコール及びポリオキシエチレンアルキルフェニルエ
ーテルを用いた本発明のケトン体検出用試験片の調製 実施例１．に示した第二溶液の処方を以下のように変更
する他は，実施例１．と同様の方法で調製した。

尚，ポリエチレングリコールはシグマ社製の商品名「ポ
リエチレングリコール１５４０Ｊを、ポリオキシエチレ
ンアルキルフェニルエーテル光化学■製のポリオキシエ
チレン（１５）オクチルフェニルエーテル（商品名「ニ
ラコールＯＦ−　１　５」）を、〃１紙はワットマン社
製の商品名「ワットマン３ＭＭＪを使用した。

第二溶液 ニトロプルシッドナトリウム　　　　１．０ｇマクロゴ
ール１５４０　　　　　　　　　　４．０■Ｉポリオキ
シエツレン（１５）オクチル−フェニルエーテル　　　
　　　４．０　ｍｌメタノール　　　　　　　　　　　
　２０．０腸１エタノール　　　　　　　　　　全量１
００．０　ｍｌこのようにして得られた試験片の外観色
調は、白色を呈し、この試験片を５〜　１０　＋ｓｇ／
ｄｌ　ｅ度のアセト酢酸を含有する被検尿に瞬時浸し、
色調をｉＳｌ＝＋した時、３０秒以内に白色の外観色調
が鮮明な紫色を呈することが確認された．本実施例で作
成した本発明のケトン体検出用試験片は，以下試験片２
．とする。

実施例３。

ポリオキシエチレン基含有誘導体として、クラウンエー
テルを用いた本発明のケトン体検出用試験片の調製 実施例１．に示した第二溶液の処方を以下のように変更
する他は、実施例１．と同様の方法で調製した。

尚、クラウンエーテルとしては１５−クラウン−５（和
光紬薬■製）を、ｆ紙はワットマン社製の商品名「ワッ
トマン３ＭＭＪを使用した。

、第二溶液 ニトロプルシッドナトリウム　　　　１．０　ｇ１５−
クラウン−５５，０。

エタノール　　　　　　　　　全量１００．０　ｍｌこ
のようにして得られた試験片の外観色調は、白色を呈し
、この試験片を５〜１０■８／旧濃度のアセト酢酸を含
有する被検尿に瞬時浸し、色調を観察した時、３０秒以
内に白色の外観色調が鮮明な紫色を呈することが確認さ
れた０本実施例で作成した本発明のケトン体検出用試験
片は、以下試験片３．とする。

比較例 比較例としてポリオキシエチレンノ、（含有１誘導体を
含まない、従来の一般的な処方によるケトン体検出用試
験片の調製 実施例１．に示した第二溶液の処方を以ドのように変更
する他は、実施例１．と同様の方法で調製した。

第二溶液 ″−，ニトロプルシフトナトリウム　　　　１．０ｇジ
メチルスルホキシド　　　　　　　２５．０　ｍｌエタ
ノール　　　　　　　　　　全ｊｑｌＯＯ，Ｏｍｌ木例
で作成したケトン体検出用試験片は、以下比較用試験片
Ａとする。

比較例としてオキシエチレン基含有ポリニーツル類は含
まないが、他の安定化の１段を講じた、従来の処方（特
公昭４１−１２４３９号参照）によるケトン体検出用試
験片の調製 実施例１．に示した第二溶液の処方を以ドのように変更
する他は、実施例１．と同様の方法で調製した。

第二溶液 ニトロプルシッドナトリウム　　　　１．０ｇポリビニ
ルピロリドン／酢酸ビニ ル供重合体（５０％エタノール溶液）６．０■１ジメチ
ルスルホキシド　　　　　　　２５．０　ｍｌ無水エタ
ノール　　　　　　　　　　２０．０　ｍｌ精製水　　
　　　　　　　　　全量１００．０腸ｌ、本例で作成し
たケトン体検出用試験片は、以下比較用試験片Ｂとする
。

比較用試験片Ａ及び比較用試験片Ｂは５〜１０ｍｇ／ｄ
ｌ　′ｃ度のアセト酢酸を含有する被検尿に瞬時浸し１
色調を観察した時、３０秒以内に紫色を呈することが確
認された。

安定性比較試験 実施例１〜３で得られた本発明による試験片と比較用試
験片Ａ及び比較用試験片Ｂを、２５℃で湿度６０％ＲＨ
の環境下に放こし、経時的な試験片自体の外観色の変化
、並びに反応性を比較した。

結果は第１表に示すとおりである。

尚、反応性の判定は０．１０．３０．８０■ｇ／ｄｌの
各Ｃ度のアセト酢酸を含有する被検尿に、各試験片を侵
し１反応後の色調を肉眼にて観察した。

又、外観色の変化も肉眼にて観察した。

以下余白 第１表−■ 第１表−１１ 表中、−は色調変化が認められない、＋は弱い色調変化
（淡紫色）が認められる、什は色調変化（紫色）が認め
られる、■は強い色調変化（鮮やかな紫色）が認められ
る。各々の状態を示す。

表中の矢印、↓は各段階の判定よりも若干弱くなったも
の、↓↓はさらに弱くなったもの、↑は若［高くなった
ものを表わす。

［発明の効果］ 本発明によれば、極めて安定性の高いケトン体検出用試
験片の提供が可億となる。

特に未発ＩＩのケトン体検出用試験片の安定性は第１表
から明らかなように、公知の安定剤を用いた試験片（比
較用試験片Ｂ）の安定性を」−回るものであった。

更に、実施例、並びに比較例の中で述べたように、未発
ＩＪＪの試験片は１反応＋ｉｉｊに白色を呈している為
、ケトン体との反応によって生じる発色を明瞭に判別す
ることが＋−４）能である。従って、ごく微Ｈ，）のケ
トン体によって生じる微弱な発色を肉眼でも容紡に確認
することができる。

このように本発明のケトン体検出用組成物は安定性と共
に、試験に適用したときの発色の読み取り易さをも改善
するものである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）ニトロプルシッド塩とポリオキシエチレン基含有誘
   導体とを必須成分とすることを特徴とするケトン体検出
   用試験片 ２）ポリオキシエチレン基含有誘導体がポリエチレンオ
   キシド、ポリエチレンアルキルエーテル、ポリエチレン
   脂肪酸エーテル、ポリエチレンアルキルフェニルエーテ
   ル、ポリオキシエチレンリン酸エステル、ポリオキシエ
   チレンアルキルアミン及びクラウンエーテル類から成る
   群から選択されることを特徴とする特許請求の範囲第１
   項記載のケトン体検出用試験片 ３）ニトロプルシッド塩がナトリウム塩であることを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載のケトン体検出用試
   験片 ４）ニトロプルシッド塩とポリオキシエチレン基含有誘
   導体とを必須成分として吸収性担体に担持したことを特
   徴とする特許請求の範囲第１項記載のケトン体検出用試
   験片 ５）吸収性担体がろ紙、グラスウール、ゼラチン及び不
   織物から成る群から選択されることを特徴とする特許請
   求の範囲第４項記載のケトン体検出用試験片