JPS63279169A - 糖脂質抗原に対するモノクローナル抗体、該抗体の産生法、およびその使用法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （λ東上の利用分野〕 本発明はヒト据脂質抗原に対するモノクローナル抗体、
該モノクローナル抗体を産生ずるハイプリント細胞系、
および、該モノクローナル抗体の使用法に関するもので
ある。

（従来の技術） 腺癌（Ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）　＆！腺組織由
来ノ癌あるいは腫瘍細胞が認識ｅｉ（能な線構造を形成
する癌である。ヒト腺癌が血液型抗原および化学的に関
連した構造に相当するフコ脂質を特徴的に発現している
ことを示唆する証拠が増加してきている（箱麻、Ａｎｎ
ｕａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　ｏｆ　ｒ、ｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ　。

２：１０３−１２６．１９８４））血液型Ｙジフコシル
化ハブテンは構造的に詳しく決定され、卵果嚢糖タンパ
ク質として初めて記述された（ロイド（Ｌｌｏｙｄ）他
、ＰｒＯＣｅｅｄｉｎｇＳ　Ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ　ＡｃａｃｔｅｍｙＯ１″５ｃｉｅｎｃｅｓ、　
ＵＳＡ　、　６１　：１４７０　１４７’１．１９６８
）＊後に、粧脂負の形態で、このノ・ブテンがイヌ腸（
スミス（Ｓｍｉ　ｔｈ）他、ＢｉＯＣｈｉｍｉＣａ　Ｂ
ｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ、３３８：１７１−１７９
．１９７５）、およびヒト胎児腸（カールソｙ　（Ｋａ
ｒｌｓｓｏｎ）他、Ｊｏｕｒｎａｌｏｔ’　Ｂｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　２５６：３５１２
−３５２４．１９８１）　　にも存在していることが見
いだされた。より最近では、血液型Ａ型の人よりもＯを
の人の赤血球により豊富に見られる、Ｙ決定基本造の二
量体および二量体を有する一連のより複雑な扼脂髄が解
析された（カンナギ（Ｋａｎｎａｇ　ｉ　）他％Ｊｏｕ
ｒｎａｌ　Ｏｆ″Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｅｍ１ｓｔ
ｒｙ。

２６０：６４１０−６４１５．１９８５，１゜該決定、
基はヒト肝臓腺癌中および、多糖として乳分泌期の女性
の尿中にも存在することが見いだされた。

抗Ｙ％異的活性を有する多数のモノクローナル抗体が、
ヒ）Ｗ癌、結腸癌、肺癌、卵巣癌、および、ヒト卵果奇
形癌細胞を有するマウスを免疫することにより産生され
てきた。Ｙ決定基を有する抗原の蓄積は、イムノペルオ
キシダーゼ法によって、数種のヒト腺癌について報告さ
れている。最近報告されたＹ決定基と癌初期抗原との関
連は、上皮腺癌におけるＹのｂ訪中マーカーとしての妥
当性なり主調するものであるにコルス（Ｎｉｃｈｏｌｓ
）他、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｔ’　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ、　１３５　：１９１１−１９１３．１Ｑ８５）５ Ｙ決定基の存在は腺癌と関連する扼脂質で見いだされて
いるが、Ｙ決定基上のエピトープとのみ反応するモノク
ローナル抗体は臨床的に有用であるとは思われないっこ
れは、与えられた腫瘍組轍内で多くの悪性細胞がＹ決定
基を含む抗原を発現しているとしても、小数ではあるが
重要な意味を持つ悪性細胞群はＹ決定基を発現せず、従
ってＹ決定基モノクローナル抗体の投与に主眼を置く免
疫治療に対してはおそらく抵抗性を示すと考えられるた
めであるっｌ」瘍組懺の再発を１ｌｆｆｆ能にするも゛
のはこれらの残存する細胞である５以上のことから、多
様な抗原の多数の決定基上に存在するエピトープとの反
応可能なモノクローナル抗体は、腺癌細紐の多数の異な
る集団に結合できることによりはるかに優れた臨床白ち
効果な冶するため、必要とされている。

（発明が無法しようとする課題〕 本発明の主な目的はＹ−６およびＢ−７−２の双方の訳
定基に結合する検出用標識を施したモノクローナル抗体
を用いて、該検出用ｍ＝モノクローナル抗体が該決定基
に結合するか否かを決定することにより、決定基Ｙ−６
およびＢ−７−２の検出法を与えることである。

本発明の別の目的は、決定基Ｙ−５およびＢ−７−２上
に存在するエピトープと反応する検出用標識モノクロー
ナル抗体を用いる。悪性度のｉｎＶ　ｉ　ｔｒｏおよび
ｉｎ　ＶｉＶＯでの診断法を与えることであろう 本発明の別の目的は、決定基′ｆ−６およびＢ−７−２
と反応する非標臓モノクローナル抗体あるいは治療用標
識モノクローナル抗体な舶いる、動物の悪性疾患の治療
法を与えることである。

以上のように、本発明は決定基Ｙ−６およびＢ−７−２
を含むと予想される試料を診断上有効量のモノクローナ
ル抗体ＢＲ５５−２の特異性を持つ検出用標識モノクロ
ーナル抗体あるいはその断片と接触させ、該抗体が該試
料に結合するが否かを決定することによるジフコシル血
液型抗原ｙ−６およびＢ−７−２の検出法に関するもの
でおる。

本発明はさらに、治療上有効量のモノクローナル抗体Ｂ
Ｒ５５−２の特異性を持つモノクローナル抗体あるいは
その断片を動物体に投与することからなる、動物の悪性
疾患を抑制する方法に関するものである。

本発明の方法で用いたモノクローナル抗体の主な利点は
、以前の技術によるモノクローナル抗体とは異なり、該
モノクローナル抗体は多数の決定基上に存在するエピト
ープに結合できることである。そうすることにより、該
モノクローナル抗体を利用する本発明の診断法および治
療法は、一種以上の該決定基を発現している悪性細胞へ
の結合が可能となる。さらに、該決定基は正常組織より
も悪性細胞ではるかに高頻度で発現しているため、結合
の可能性は正常細胞に対するよりも悪性細胞に対する方
がきわめて尚いっこの事実の結果により、臨床上効果的
であるが宿主細胞組織に対して最小の損傷あるいは全く
損傷を与えないような一度で本発明のモノクローナル抗
体を使用することが可能である。

（課題を解決するための手段及び作用〕本発明は、腺癌
およびその他の腫瘍細胞を指示する抗原に対する特異性
を持つモノクローナル抗体に関するものである。該モノ
クローナル抗体は該１１１ｆ瘍に関連する抗原の１ｎｖ
ｉｔｒｏおよび１ｎＶｉＶ。

の双方での免疫学的検出、および該抗原を含有する腫瘍
の免疫治療に非常に有用である。

モノクローナル抗体を分泌するハイプリドーマの産生に
使用される一般的方法は、本分野の通常の技術に熟達し
た者には既知のものである。本発明で用いた技術の実例
４！Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｔ’　ｔｈｅＮａｔｉ
ｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ”　Ｓｃ　１ｅｎｃｅ
ｓ、　ＬＩＳＡ　、　７５　：３４０５、（１９７８）
およびコブロウスキー　（ＫＯｐｒＯ−ｗｓｋｉ）、”
腫瘍抗体産生法”と題される米国ｈＭ第４．１７２，１
２４号に記述されている。

概述すると、ＢＡＬＢ／Ｃマウスを培養した乳癌細胞（
ＭＣＦ　　７）で免疫し、後に同じ細胞系で追加した。

ハイプリドーマは抗体産生に関して選択し、陽性のクロ
ーンは細胞系ＭＣＦ　　７および他の癌細単離した（ス
テブレウスキー（Ｓ　ｔｅｐｌｅｗｓｋｉ　）他。

ｐｒｏｃｅｅｃｉｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏ
ｎａｌ　Ａｃａａｅｍｙ　ｏｆ５ｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳ
Ａ、８２：８６５３．１９８５）ｚ本発明のモノクロー
ナル抗体の特異性を持つモノクローナル抗体を分泌する
他のハイプリドーマの単離は本分野の通常の技術に熟達
した者が抗イデイオタイプスクリーニング法（ボトクニ
ャク（Ｐｏｔｏｃｎｊ　ａｋ）　　他、　　５ｃｉｅｎ
ｃｅ、　　２１５：１６３７゜１９８２）によって実施
することができるっ抗イディオタイプ抗ｆ４＝ｔｓ、問
題のハイブリドーマに産生されたモノクローナル抗体上
に存在する単独の決定基を認識する抗体であるっ該決定
基は抗体の超可変領域に位置する。与えられたエピトー
プに結合するのはこの領域であり、したがっ℃、抗体の
特異性を規定するものである。抗イデイオタイプ抗体は
問題のモノクローナル抗体で動物を免疫することにより
調製できる。免疫した動物は該イディオタイプ決定基に
対する抗体を産生ずることにより免疫した抗体のイディ
オタイプ決定基を認識し、反応す・るであろう。第二の
動物の免疫に用いた単一のハイブリドーマに産生される
モノクローナル抗体に特異的である第二の動物の抗イデ
イオタイプ抗体を用いることにより、免疫感作に…いた
ハイブリドーマの抗体と正確に同じイディオタイプを有
する他のクローンを同定することが可能になった。

二つのハイブリドーマのモノクローナル抗体の間のイデ
ィオタイプ同一性は、二つのモノクローナル抗体が同じ
エピトープ決定基を＝＝する点で同一であることを示す
、したがって、あるモノクローナル抗体上のエピトープ
決定基に対する抗体を用いることにより、同じエピトー
プ特異性モノクローナル抗体を発現する他のハイブリド
ーマを同定することが可能である。

本発明は抛脂質および糖タンパク質分子に結合している
炭水化物決定基と反応するモノクローナル抗体、および
該モノクローナル抗体を産生ずるハイブリドーマに関す
るものである。あるモノクローナル抗体が必要な特異性
を持つか否かは、スＵ　ｙ　（Ｔｈｕｒｉｎ）他（Ｊｏ
ｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ、２６２：３７２．１９８７）のような抗原結合
イムノアッセイを行なうことにより容易に決定できる。

あるいは、発明者らは本発明のモノクローナル抗体の特
異性を持つモノクローナル抗体が反応するエピトープ部
分を解析したので（スリン（Ｔｈｕｒ　ｉ　ｎ　）他、
前出〕、同等のエピトープ特異性のモノクローナル抗体
を分泌するハイブリドーマをさらに産生ずることは通常
の技術の問題となる。

血液型決定基Ｙ−６およびＢ−７−２の炭水化物部分は
、本発明のモノクローナル抗体が結合するエピトープを
含んでおり、オゾン分解などの技術（サヘサン（５ａｂ
ｅｓａｎ）他、Ｃａｎａｄｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ
　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　６２　：１０３４　、１９８
４）、あるいはエンドグリセロセラミダーゼなどでの特
異的酵素加水分解（ヒ）　（Ｈｉ　ｔｏ）他、Ｊｏｕｒ
ｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏ−ｇｉＣａｌ　Ｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ、　２６２：１４２．７８．１９８６）によって
糖脂負の主要部分から精製される。したがって、細胞系
ＡＴＣＣＨＢ　　９３２４あるい（工ＡＴＣＣＨＢ　　
９３４７　　に産生されるモノクローナル抗体の特異性
を有するモノクローナル抗体を分泌するさらなるハイブ
リドーマ１ｃ’！、例えば、該エピトープをＫＬＨなと
の無害なあるいは免役原的担体分子と結合させ℃エピト
ープを免疫原的形態にすることにより産生可能である（
ハドソン（Ｈａｄｓｏｎ）　＆ヘイ（Ｈａｙ〕、Ｐｒａ
ｃ、ｔｉｃａｌ　ＩｍｍｕｎＯＩＯｇｙ、ｐ、　５−８
゜ブラックウェル・サイエンティフィック・パブリケー
ショ／ズ、１９８０）。この方法では、動物はまず一次
感作のためにＹ−６糖脂質全体あるいはＹ−６糖脂質が
豊富にある細胞画分で免疫し、次に、望ましいＢ細胞の
増殖を刺激するための追加刺激として上記の精製抗原の
エピトープ複合体で免疫されるつあるいは、本発明のモ
ノクローナル抗体と反応するエピトープは血液型決定基
Ｙ−６オヨヒＢ−７−２の双方の上に存在しているので
、まず一方の決定基、Ｙ−６などで免疫し、次にＢ−７
−２などの別の決定基で追加免疫をすることもできるつ
いずれの場合も、本発明のモノクローナル抗体のエピト
ープ特異性は明確に決定されてイルノテ（スリｙ　（Ｔ
ｈｕｒｉｎ）　、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＢｉｏｌｏｇ
ｉｃａｌ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　２６２　：　３７２
　、１９８７）、ハイプリドーマ融合で存在する反応性
Ｂ細胞のレバートリーを非常に制限することができ１．
それによって望みの特異性を持つハイブリドーマの単離
の際に不要な実験を避けることが可能である。＠合後、
該ハイプリドーマは該エピトープと遊離担体を用いて、
該エピトープに特異的なモノクローナル抗体を産生ずる
クローンを選択するためにスクリーニングを行なう。

異種供与体動物由来のモノクローナル抗体の別の受容体
動物種へのｉｎ　ＶｉＶＯでの使用は、通常は容易に行
なわれるが、起こり得る問題は供与体抗体上に存在する
抗原決定基に対する宿主の逆免疫反応が起きることであ
る。ある場合には、この逆反応は、？ｄ主内での供与体
抗体のｉｎ　ＶｉＶＯ便用ができないほど重大なものと
なり得る。さらに、宿主逆反応は供与体抗体の悪性度抑
制効果を甲害する場合があろう宿主内で起こる逆免疫反
応の可能性を防ぐことのできる一つの方法は、キメラ抗
体を用いることである（サン（ｓｕｎ）他、Ｈｙｂｒ　
ｉ　−ｄｏｍａ、５（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ　１）：Ｓ
１７，１９８６：　　オイ（Ｏｌ）他、ＢｉＯＴｅｃｈ
ｎｉｑｕｅｓ、　４（３Ｃ２１４゜１９８６）、キメラ
抗体は抗体のＨ鎖およびＬ鎖の様々な領域が一種以上の
ＤＮＡＫより℃コードされている抗体であろう一般に、
キメラ抗体は望みの抗原特異性の抗体を産生ずる供与体
由来のＨ鎖町変領域（ＶＨ）およびＬ鎖町変領域（Ｖｒ
ｊ、および。

宿主受容体の種由来のＨ鎖不変領域（ＣＨ）およびＬ鎖
不変領域（Ｃ：Ｌ）から成るっ宿主免疫系の抗体領域、
特にＣＨ領領域抗原決定基への接触を減じることにより
、受容体の種で起こる逆免疫反応の可能性を低減される
と考えられ℃いる。したがっ℃、例えば、ＡＴＣＣＨＢ
　　９３２４あるいはＡＴＣＧＨＢ　　９３４７から単
離されたＤＮＡによってコードされるマウスＶＨおよび
ＶＬ　領域およびヒト細胞から単離されたＤＮＡにコー
ドされるＣＨおよびＣＬ領領域らなるヒトへのｉｎ　Ｖ
ｉＶＯ臨床便用のためのキメラ抗体を作成することが可
能であるうある条件下では、一つのインタイブのモノク
ローナル抗体は他のものよりも、その診断上あるいは治
療上有効性の点で望ましい場合がある５例えば、イソタ
イプ　ガンマ−２ａおよびガンマ−３ａのマウスモノク
ローナル抗体は腫瘍の増殖阻害におい℃ガンマー１ａイ
ソタイプろよりも有効であることか知られている。この
異なる有効性は、ガンマ−２ａおよびガンマ−３ａイソ
タイプが腫瘍細胞の細胞溶解性破壊により活発に関与す
る能力があるためだと考えられている。モノクローナル
抗体の特別なインタイブは、直接、第一の融合からの選
択による調製、あるいは、二次的に、異なるイソタイプ
のモノクローナル抗体を分泌する親のハイブリドーマか
らクラス−スイッチ変異体を単離する血縁選択法（ｓｉ
ｂ　５ｅｌｅｃｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｉ−ｑｕｅ）を用
いた調製のいずれでも得ることができる（ステブレウス
キー（Ｓｔｅｐｌｅｗｓｋ　ｉ　）他。

Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎ
ａｌ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ、ＵＳＡ
、　８２　：８６５３　、１９８５　：　スビラ（Ｓｐ
ｉｒａ）他、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓ、　７４：３０７．１９８４
）　、　　以上のように、本発明のモノクローナル抗体
はＡＴＣＣＨＢ　　９３２４に産生されるモノクローナ
ル抗体ＢＲ５５−２あるいはＡＴＣＣ；　ＨＢ　　９３
４７に産生されるモノクローナル抗体ＢＦｔ５５−２−
８２ａ　の特異性を有するクラス−スイッチ変異型を含
む。

本発明のモノクローナル抗体が断片の形態、例えばＦａ
ｂおよびＦ（、ａｂ’）２．で使用される場合、特に、
該断片が治療用に標識されている場合には、この場合の
腫瘍阻害はもはや補体媒介性細胞溶解性の腫瘍細胞破壊
に依存しないため、いかなるアイソタイプも使用可能で
あるっ 本発明のモノクローナル抗Ｋｋ’；！　ｉｎ　Ｖｉ　ｔ
ｒｏあるいはｉｎ　ＶｉＶｎ　の免疫診断あるいは免疫
治療を行なうのに望ましいいかなる動物にも使用可能で
ある。ここで用いる１動物”とは、ヒトおよびヒト以外
の動物を含めたものを意味するつ 本発明で用いる“抗体”という語は、完全な分子および
、例えばＦａｂおよびＦ　（ａｂ’）　　などのエピト
ープ決定基に結合可能なその断片を含むことを意味する
っ 本発明のモノクローナル抗体は、液相で、あるいは固体
担体と結合させて用いるイムノアッセイでの使用が特に
適している。さらに、該イムノアッセイのモノクローナ
ル抗体＋ｚＴｈ々な方法で検出用に標識することが可能
である５本発明のモノクローナル抗体を使用できるイム
ノアッセイの形式の例は、直接あるいは間接様式のいず
れかの、競合あるいは非競合イムノアッセイである。該
イムノアッセイの例は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ
）およびサンドウィッチ（免疫測定）アッセイである。

本発明のモノクローナル抗体を用いた抗原の検出は、生
理学的試料での免役組域学的アッセイを含む、順相、逆
相、および同時形式のいずれがで行なわれるイムノアッ
セイによって行なわれ得る。

本発明のモノクローナル抗体は多数の異なる担体に結合
可能であり、腺癌関連抗原の存在の検出に用いることが
できる。広く知られた担体の例は、ガラスポリスチレン
、ポリプロピレン、ポリエチレン、テキストラン、ナイ
ロン、アミラーゼ、天然セルロース、修飾セルロース、
ポリアクリルアミド、アガロース、および磁鉄鋼である
。担体の性質は本発明の目的のためには可溶性、不溶性
ともに可能である５本分野の通常の技術に熟達した者は
、モノクローナル抗体に結合する他の適当な担体な知る
であろうし、あるいは、通常の実験によって、そのよう
なものを確認できるであろうっ本分野の通常の技術に熟
達した者には多数の異なる標識及び標識法が知られてい
る。本発明で使用できる標識の型の例は、酵素、放射性
同位体。

螢光化合物、化学発光化合物、および生物発光化合物を
含む５本分野の通常の技術に熟達した者は、モノクロー
ナル抗体に結合する他の適当な標識を知るであろうし、
あるいは、通常の実験を用いてその確認を行なうことが
できるであろう、さらに。

本発明のモノクローナル抗体への該標識の結合は、本分
野の通常の技術に熟達した者には既知の標準的技術を用
いて行なうことができる。

本発明の目的のためには、本発明のモノクローナル抗体
によっ℃検出される腺癌関連抗原は生物学的液体及び組
織に存在することが可能である。

検出可能量の腺癌関連抗原を含有するいかなる試料も使
用可能である５通常は、試料は尿、唾液、脳を髄液、血
液、血清などの液体、あるいは、組織、便などの固体あ
るいは半一体が使用されるっより高い感度を得られる別
の技術は、低分子量のハプテンを抗体に結合させること
によろう該ハプテンは、続いて第二の反応によって特異
的に検出され得る５例えば、アビジ／と反応するビオチ
ン、あるいは、特異的抗ハプテン抗体と反応するジニト
ロフェニル、ビリドキサル、およびフルオレセインなど
のハブテ／を用いるのが一般的である。

本発明で用いるように、“エピトープ”という語は、本
発明のモノクローナル抗体と特異的に反応できるあらゆ
る決定基を含むことを意味するウエビトープ決定基は通
常アミノ酸あるいは糖側鎖などの化学的に活性のある表
面分子群からなり。

また通常、特異的な三次元構造特性および特異的電荷特
性を有する。

本発明のモノクローナル抗体を抗原の１ｎＶｉＶ。

検出に用いる場合、検出用標識モノクローナル抗体は診
断上有効な投与量で与える。１診断上有効”という語は
、検出用標識モノクローナル抗体の量が、該モノクロー
ナル抗体が特異的に反応するジフコシル抗原を持つ部位
の検出を可能にするのに十分な量で投与することを意味
する。投与される検出用標識モノクローナル抗体の濃度
は、腫瘍部位への結合がバックグラウンドのシグナルと
比較して検出可能である程度に十分であるべきであるう
さらに、検出用標識モノクローナル抗体は最良の腫瘍対
バックグラウンドのシグナル比を侍るために、循環系か
ら迅速に除去されることが望ましい。

通例、診断のための検出用標識モノクローナル抗体の投
与量は年令、性、個体の疾患の程度などの因子に依存し
て変動する。モノクローナル抗体の投与量は０１０１ｍ
９／ｌｒｌから２０１ｎ？　／　ｍ’、望ましくは、０
．１〜／　ｍ’からｌＯ〜／イで変動し得ろう診療用１
ｎｖｉｖＯ像化のためには、使Ｉ：＋＠可能な検出装置
の型が与えられた放射性同位体の選択に於ける主要因子
である５選択する放射性同位体は与えられた型の装置で
検出可能な崩壊形式でなければならない、　　ｉｎ　ｖ
ｉｖｏ診断のだめの放射性同位体選択に於けるさらに別
の因子は、放射性同位体の半減期が、標的による最大取
り込み時まで検出可能な程度に長いが、宿主に対する有
害な照射が最小になる程度に短いことである、理想的に
は。

ｉｎ　ｖｉｖｏ像化に用いる放射性同位体は粒子放出は
欠くが、通常のガンマカメラで容易に検出できる１４０
−２５０ＫｅＶ程度の多数の光子を産出する。

ｉｎ　ＶｉＶＯ診断のために、放射性同位体は中間官応
基を用いて直接あるいは間接に免役グロブリンに結合す
ることができる。金属イオンとし又存在する放射性同位
体の免疫グロブリンへの結合にしばしは用いられる中間
官応基は、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）お
よびエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などの二価性
キレート試薬である。

本発明のモノクローナル抗体はまたｉｎ　ＶｉＶＯ診断
の目的で、磁気共鳴像化（ＭＨＩ）あるいは電子スピン
共鳴（ＥＳＥ（）において、常磁性同位体で標識する事
もできる。一般に、診断像を視角化するあらゆる慣習的
な方法も使用し得るう通常、カメラ像にはガンマおよび
陽子放出放射性同位体を使用し、ＮＭＲＫは常磁性同位
体を使用する。

本発明のモノクローナル抗体はある個体に於ける悪性疾
患の経路の追跡に用いることができる。

したがって、悪性部位の大きさあるいは数の増加あるい
は減少、あるいは多様な体液に流れる抗原の濃度変化を
測定することにより、悪性度の改善を目的とした特定の
治療法が効果的であるか否かを決定することができる。

本発明のモノクローナル抗体はまた１本発明のモノクロ
ーナル抗体と反応するエピトープを持っ腺癌関連ジフコ
シル血液型抗原を発現する１１！ｌ！瘍を有する動物の
免疫治療に単独で、あるいはエフェクター細胞との併用
で用いることができろうこの方法で用いる場合、モノク
ローナル抗体の投与量は、１０ｍ９７ｍ’から２０００
■／ｍ２まで変動可能である。′治療上有効”という語
は、用いるモノクローナル抗体量が悪性度による疾患の
原因を改善するのに十分な量であることを意味する。

免疫治療に使用する場合、本発明のモノクローナル抗体
は標識しない状態で、あるいは、治療用試薬で標識した
状態で使用することができる。該試薬は、本発明のモノ
クローナル抗体に直接あるいは間接に結合することがで
きる５間接的結合の一例は、スペーサ一部分の便用によ
るものである。

一方、該スペーサ一部分は、不溶性あるいは可溶性のい
ずれでも可能であり（ディーナ−（Ｄ　ｉ　ｅｎｅｒ）
他、３ＱｉｅｎＣｃ３，２３１：１４８．１９８６）、
標的部位のモノクローナル抗体分子からの薬剤放出な可
能にすることで選択できる。免疫治療のための、本発明
のモノクローナル抗体に結合できる治療用試薬の例は、
薬剤、放射性−３位体、免疫調節物質、レクチ／、およ
び毒素である。

本発明のモノクローナル抗体と結合可能な薬剤は、非蛋
白様薬剤および蛋白様薬剤を含む、“非蛋白様薬剤”と
いう語は、例えばマイトマイシンＣ，ダウノルビシン、
およびビンブラスチンなどの、古典的に薬剤と呼ばれた
化合物を含む。

本発明のモノクローナル抗体を標識する蛋白様薬剤は、
免疫調節物質および他の生体反応修飾物質を含む、°生
体反応修飾物質”という語は、本発明のモノクローナル
抗体が特異的に反応するジフコシル血液型抗原を含む腫
瘍細胞の破壊を促進するような免疫反応の修飾に関与す
る物質を包含することを意味する。免役反応修飾物質の
例は、リンホカインの様な化合物を含むウリンホカイン
の例としては、腫瘍壊死因子、インターロイキン１．２
、及び３、リンホトキシン、マクロファージ活性化因子
、転移阻害因子、コロニー刺激因子、およびインターフ
ェロンがある５本発明のモノクローナル抗体が標識され
得るインターフェロン（エアルファーインターフェロン
、ベーターインターフェロン、およびガンマ−インター
フェロンおよびそのサブタイプを含むっ 免疫治療のために本発明の放射性同位体が結合したモノ
クローナル抗体を使用する際に、腫瘍の分布および体積
、およびイソタイプの安定性および放射物などの因子に
依存して、あるイソタイプが他のイソタイプよりも望ま
しい場合がある。必要ならば、腫瘍の分布および体積は
上述の　１ｎｖＩｖＯ診断法によっ℃見積ることができ
る。存在する悪性度の壓によって、ある放射性物質が他
のものよりも望ましい場合があろう一般に、アルファお
よびベータ粒子放射性放射性同位体が免疫治療では望ま
しい５例えは、ある動物が固体腫瘍組織を有する場合は
、９０ｙなどの、組織を数ミリメートル透過可能な高エ
ネルギーベータ線放射物質が望ましいつ一方、白血病な
どのように、悪性部が単独の標的細胞から成る場合には
、２１２Ｂｉなどの短飛程高エネルギーアルファ線放射
物質が望ましいう治療目的でほんのモノクローナル抗体
を結合させる放射性同位体の例は１２５１　、１３１１
　、９０ｙ。

Ｃｕ、　　　Ｂｉ、　　　Ａｔ、　　　Ｐｂ、　　Ｓｃ
、　　　Ｐｄ。

および１８８　Ｒｅな含む。

レクチンは、通常植物性物質から単離される、特異的な
糖鎖部分に結合するタンパク質である。

多くのレクチンは、また、細胞を凝集させ、リンパ球を
刺激することができる。しかし、リシンは免疫治療的に
甲いられてきた毒素性レクチンであろうこれは、毒素性
に寄与するりシンのアルファーペプチド鎖が抗体分子に
結合することによって部位特異的な毒素効果の放出な可
能にすることにより行なわれる。

毎累は、十分量与えるとしはしは致死となる、他物、動
物、および微生物に産生される有毒物質である。ジフテ
リア毒素は本方法で使用可能な、コリネバクテリウム・
ジフテリア（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅ−ｒｉｕｍ　ｄｉ
ｐｈｔｈ８ｒｉａｅ）ニ産生さレル物質テあルッ該毎索
は、適当な条件下では分離されるアルファおよびベータ
サブユニットから成ろう毒ｉＡ成分は抗体に結合でき１
本発明のモノクローナル抗体が特異的に反応するジフコ
シル抗原を発現する腫瘍への部位特異的な放出に使用さ
れる５本発明のモノクローナル抗体に結合可能な他の治
療用試薬は、本分野の通常の技術に熟達した者に知られ
ており、各隅に確認することができる。

本発明の標識あるいは非標識モノクローナル抗体はまた
。上述のような治療用試薬との併用で使用可能である。

特に望ましいのは、本発明のモノクローナル抗体と免疫
調節物質および他の生体反応イレ帥物質を含む治療上の
併用である。

したがって、例えは１本発明のモノクローナル抗体はア
ルファーインターフェロンとの併用で使用できろ。該治
療法は、モノクローナル抗体と反応する抗原の癌細胞に
よる発現を増大させることにより、癌を標的とするモノ
クローナル抗体を刺激する（グライナー　ｃＧｒｅｉｎ
ｅｒ）他、５ｃｉｅｎｃｅ　。

２３５：８９５．１９８７）つ　あるいは、本発明のモ
ノクローナル抗体は、ｆｌｊえは、ガンマ−インターフ
ェロンとの併用することができ、そりにより、エフェク
ター細胞によるＦｃレセプターの発現を活性化し、増大
させ、結果としてモノクローナル抗体のエフェクター細
胞に対する結合が促進され、標的腫瘍細胞が破壊される
。本分野の通常の技術に熟達した名は、多数の生体反応
（１＃飾物質から本発明のモノクローナル抗体の有効性
を促進するような望みのエフェクター機能を生じるもの
を選択することができるであろうっ 上述のように１本発明のモノクローナル抗体を多様な治
療用試薬と併用する場合には、モノクローナル抗体と治
療用試薬の投与は通常、実１的に同時に行なわれる。“
実質的に同時”という語は、モノクローナル抗体と治療
用試薬が時間的にかなり近接して投与されることを意味
する。゛通常、モノクローナル抗体の前に治療用試薬を
投与することが望ましい５例えば、治療用試薬はモノク
ローナル抗体の１日から６日前に投与され得る。治療用
試薬の投与は、例えは腫瘍の性質、患者の状態、および
試薬の半減期などの因子に依存して、毎日あるいシま他
のあらゆる間隔で行なうことができる。

本発明のモノクローナル抗体を用いて、ここで述べた特
徴の全てを組み合わせた治療法を考案することが可能で
ある５例えは、ある状態では治療用試薬（群〕を、エフ
ェクター細胞および同じあるいは異なる治療用試薬（群
）と組み合わせた本発明のモノクローナル抗体に先だっ
て投与することが望ましい。例えは、腺癌患者に、まず
ガンマ−インターフェロンおよびインターロイキン−２
を３日から５日間毎日投与し、５白目にエフェクター細
胞およびガンマ−インターフェロン、インターロイキン
−２と組み合わせた本発明のモノクローナル抗体を投与
して治療することが望ましい場合があろう 膜内に本発明のモノクローナル抗体を持つリポソームも
、ジフコシル血液型抗原Ｙ−６およびＢ−７−２を発現
する腫瘍領域で特異的にリポソームを射出するために使
用することができる。該リポソームは、モノクローナル
抗体に加え、腫瘍部位で放出される上述のような免疫治
療試薬などを含むように作成することが可能である（ウ
ォルフ（Ｖ’１０１ｆｆ”）他、ＢｉＯＣｈｅｍｉＣａ
　ａｔ　ＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ、８０２：２５
９．１９８４）　２本発明のモノクローナル抗体投与の
投与量範囲は、ジフコシル抗原を発現し又いる腫瘍の症
状が改善されるような望ましい効果が得られる程度に十
分多いものである。投与量は、不要な交差反応、過敏反
応などの逆側作用を引き起こすほど多いべきではないう
一般に、投与量は年令、状態、性。

および患者の挟患の程度によって様々であり、本分野の
通常の技術に熟達した者によって決定され得る。投与量
は、あらゆる逆済応、免疫寛容あるいは同様の状態の場
合に応じて個々の医師によって適用され得ろ、投与量は
一回の投与あたり０．１１％’　／　ｍ’から２０００
Ｌｎ９７ｍ’、望ましく　６’！　０．１　ｍ９７ｍ’
から５００〜／　ｍ’の範囲で、毎日−回置上の投与で
一日から数日間である。一般に、本発明のモノクローナ
ル抗体が治療用試薬と結合して投与されるはあいには、
ｉｎ　ＶｉＶＯ免疫診断の像化に用いたような低投与量
で用いられる。

本発明のモノクローナル抗体は注射あろい（１長時間の
漸次的な潅流によって非経口的に投与される５本発明の
モノクローナル抗体は静脈内、腹膜内、筋肉内、皮下、
腔内、あるいは経皮的に、単独であるい（エエフエクタ
ー細胞との組合せで投与することが可能であろう 非経口投与のための準備は、滅菌水溶液あるいは滅菌非
水溶液、懸濁液、および乳濁液を含むっ非水溶媒の例は
、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オ
リーブ油などの植物注油、およびオレイン酸エテルなど
の注射可能な有機エステルである。水性溶媒は、生理食
塩水および緩衝液を含む、水、アルコール／水溶液、乳
濁液、あるいは懸濁液を含む、非経口基剤は、塩化ナト
リウム溶液、す／ガーΦデキストロース、デキストロー
スおよび塩化ナトリウム、乳酸リンガ−液、あるいは不
揮発性油な含む、静脈内基剤は、リンガ−・デキストロ
ースなどを基本にした、液体および栄養補給液、電解質
補給液を含む、保存剤および抗菌剤、酸化防止剤、キレ
ート試薬、および不活性ガスなどの他の添加物も存在し
うる。

本発明はまた、本発明のモノクローナル抗体を含む薬剤
あるいは製薬的組成、本発明のモノクローナル抗体と反
応するジフコシル血液型抗原を発現している腫瘍の治療
に用いられる薬剤に関するものである。

モノクローナル抗体は本発明で使用されるうＢＲ５５−
２はＡＴＣＣ寄託番号ＨＢ　　９３２４を有する細胞系
から得られた抗体から得られるか、あるいは、該抗体と
同一の性質を持つ５ＢＲ５５−２−３２ａ−は、ＡＴＣ
Ｃ寄託智号ＨＢ　　９３４７　　を自する細胞系から得
られた抗体から得られるか、あるいは、該抗体と同一の
性質を有する。これらの細胞系は、１９８７年３月２７
日に先立ち、米国メリーランド州ロックビルのアメリカ
ン−タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）に
３０年間寄託された。

（実施例〕 以上の記述は、本発明を、一般的に述べたものである、
より完全な理解は、ここに本発明の範囲を制限する意図
ではなく例示の目的のみで示す以下の特異的な実例を参
照することによって得られるであろう。

実施例　Ｉ Ａ、免疫およびハイプリドーマの産生 ＢＡＬＢ／Ｃマウス２Ｘ１０７細胞の胸腺癌ＭＣＦ−７
で腹膜内に免役し、４週間後に１×１０６細胞で静脈内
に追加免疫した。４日後、該動物を殺し、牌臓細胞をマ
ウス黒色１ｉＰ３Ｘ　　６３　Ａｇ８の６５３誘導体と
融合した、増殖、°クローニング、および産生されたハ
イプリドーマの維持はコブロウスキー　（Ｋｏｐｒｏｗ
ｓｋｉ）他、（Ｓｏｍａｔｉｃ　Ｃｅ１ｌ　ｃｅｎｅｔ
ｉｃｓ。

５：９５７．１９７９）に示されたように行なったっ多
様なハイブリドーマに産生されたモノクローナル抗体は
抗体産生に関してスクリーニングを行い、陽性のクロー
ンはさらに細胞系ＭＣＦ−７に対する反応性およびヒト
黒色腫細胞系ＷＭ１６４他に対する非反応性についてス
クリーニングを行った５選択された培養液は、次に、制
限−８釈法（Ｌｉｎｌｉ　ｔｉｎｇｄｉｌｕｔｉｏｎ　
ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）　　を用イテクローニングした。

ハイブリドーマクラス−スイッチ変異体１マステフツウ
スキ−（Ｓｔｅｐｌｅｗｓｋｉ）他（Ｐｒｏｃｅｅｄ　
ｉ　ｎｇ９ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄ
ｅｍｙ　ｏｆ’　５ｃｉｅｎｃｅ　。

ＵＳＡ、８２：８６５３．１９８５）　　による方法を
用いて産生じた。ＢＲ５５−２およびＢＲ５５−２−３
２ａのエピトープ特異性の解析は報告され℃いる（スリ
ン（Ｔｈｕｒｉｎ、）他、Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉ
ｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉ−３ｔｒｙ、２６２：３
７２．１９８７）ｚ　　モノクローナル抗体は、−１＝
　７−　、（（ｓｅａｒｓ）他（ＴＨＥ　ＬＡＮＧＥＴ
。

７６２、Ａｐｒｉｌ　３．１９８２）　Ｋよる臨床試験
のために軸装した。

Ｂ、糖脂質 多様な血液型抗原の精製および解析は実質的にスリン他
（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ。

２６０：１４５５６．１９８５）による方法によって行
なったり 実施例　２ ！ 再発、転移あるいは切除不能な腫瘍を示す末期胃腸癌の
患者が、７５オ以下で、カルノスキー指数が６０以上で
あり、余命が３力月以上であり、初期の腫瘍の型が生検
により胃腸管腺癌であると明確に同定された場合に１本
研究に含めたつ患者の腫瘍、あるいは可能な場合は転移
生検標本をモ／　りｏ　−す／ｌ／抗体ＢＲ５５−２−
８２ａ、Ｇ。

１９−９．０Ａ　　７３−３およびＣ０１７−ＩＡを由
いて抗原発現の試験を行なったっこれらの個々の免疫組
織化学的結果を基礎に、モノクローナル抗体の混合物を
患者に投与した。

患者の治療中に、正常に派゛生ずる末梢血液単核細胞が
白血球転移によって、　ＩＢＭ　２９９７血液細胞分離
機を用いた通常の方法で得られ、総数１×１０９から１
×１０１０の単核細胞が得られた。白血球転移によって
得られた該細胞は、総体積が１６０から２００ｍ１のプ
ラスチック・バッグに集めた。

患者腫瘍に反応するモノクローナル抗体（各々１５０−
２００ｍ９）を次に直接白血球のバッグに注入し１５分
ごとに緩やかに振とうしながら一時間室温でインキュベ
ートした。その間に、該モノクローナル抗体はＦｃレセ
プターによっ℃エフェクター細胞に結合することができ
、それによってエフェクター細胞が腫瘍を標的とするた
めのベクターとして働くことができろう白血球バッグの
上清中の遊離モノクローナル抗体の標本抽出により、平
均し℃注入した抗体量の４０％が正常派生細胞に結合す
ることが示された。このインキュベートＮｊｆ’＋ｉｌ
後、正常派生細胞の混合液および白血球バッグ内の遊離
モノクローナル抗体は、末梢静脈あるい（ま肝臓動脈に
２時間から３時間をかけて再注入した。注入後、可能な
遅滞した副作用を処理するため、管を血管中に保持した
。患者の血圧、心拍。

悪寒、皮膚の発疹、−気管支けいれんあるいは他の疑わ
しい臨床的徴候につ、いて、注入時およびその後２４時
間後に再度注意深（検査した。臨床試験第一段階の結果
を表１に示したつ 表１ 癌治療　　　　　　　　　　治療に反応して起源　　　
　転移　　　　　　患者　　　安定な月数５結腸　　　
　肝臓　　　　　　９ ２５　　　　　６、＋ ３９　　　　　７、＋ 肺　　　　　　　　１２　　　　　０ ２６　　　　８、＋ 肝臓、胸膜　　　３４　　　　０ 肝臓、肺　　　　４０　　　　７、十 皮膚　　　　　　３６　　　　０ 局所リンパ　　　４３　　　　６ 結節 胸　　　　　骨、皮膚　　　　２　　　　　腫瘍退行胸
膜、皮膚　　　２７　　　５、十 直腸　　　　肝臓　　　　　　１０　　　　２３３　　
　　８、＋ 胃　　　　　　局部　　　　　　　　１８　　　　３再
発 肺　　　　　　　　３８　　　　　７．＋すい臓　　　
切除不能　　　　２０　　　９肝臓　　　　　　２２　
　　８ 肝臓、リンパ結節　３２　　　　６ リンパ結節　　　３５　　　１ ａ　他のモノクローナル抗体およびエフェクター細胞と
の混合物中のガンマ−２Ａ誘導体ｂ　“十″　は患者が
データ編集の時点で依然として安定であることを示す。

Ｂ５５−２−３２ａで治療した患者は、結腸（１ｏ）、
胸（２〕、直腸（５）、胃管（２つ、およびすい臓（５
）の−次腫瘍組織を持っ℃いた。上述のように、全℃の
患者はある程度の転移を有していた。

このデータをさらに表２にまとめた。

表　　２ 腫瘍起源　患者数　なし　−次的安定　持続的安定結腸
　　　　１０　　　４　　　　　２　　　　　４胸　　
　　　　　２　　　　　　　　　　　　　　　　４ａ直
腸　　　　　　５　　−　　　　４　　　　１胃　　　
　　　　　２　　　−　　　　　１　　　　　１すい臓
　　　　５　　−　　　　５　　　　−計　　　　　　
２４　　　　４　　　　１２　　　　　８　　　・ａ　
−人の患者は腫瘍の退行を示したつここに示される徐に
１本実験でＢＲ５５−２−８２ａを注入された２４患者
のうち、４人が明らかにモノクローナル抗体治療に反応
しなかった。治療が良い方に働いた２０人の患者のうち
、１２人１工時間的には平均５．３ケ月間安定だった。

治療の効果があった残りの８人の患者はデータをまとめ
た時点で依然として安定であった。持続的多安定性を示
したこの患者群の中で、治療に対する平均の反応既刊は
６．９力月であり、腫瘍の退行をしめした患者を一人含
むっ 本発明を詳細に述べてきたが１本分野の通常の技術に熟
達した者には１本発明の本質あるいは範囲から逸脱する
ことなく、様々な変化および修飾がなされ得ることは明
らかであろう。

（外４名〕

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ジフコシル血液型抗原Ｙ−６およびＢ−７−２決定
   基を含むと予想される試料を、モノクローナル抗体ＢＲ
   ５５−２およびその変異型の特異性を持つ検出用標識モ
   ノクローナル抗体あるいはその断片の診断上有効量と接
   触させ、該抗体が該試料に結合するか否かを決定するこ
   とからなる、ジフコシル血液型抗原Ｙ−６およびＢ−７
   −２の検出法。 ２、該抗体がＡＴＣＣ　ＨＢ９３２４およびＡＴＣＣＨ
   Ｂ９３４７からなる群から選択された細胞系によって産
   生される、特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３、該検出が生体内で行なわれる、特許請求の範囲第１
   項記載の方法。 ４、該検出用標識が放射性同位体および常磁性標識から
   なる群から選択される、特許請求の範囲第３項記載の方
   法。 ５、該検出が試験管内で行なわれる、特許請求の範囲第
   １項記載の方法。 ６、該検出用標識が放射性同位体、螢光化合物、化学発
   光化合物、生物発光化合物、および酵素からなる群から
   選択される、特許請求の範囲第５項記載の方法。 ７、モノクローナル抗体ＢＲ５５−２およびそのに異型
   の特異性を有するモノクローナル抗体あるいはその断片
   の治療上有効量を悪性疾患を持つ動物体に投与すること
   による、動物の悪性疾患を抑制する方法。 ８、該モノクローナル抗体がＡＴＣＣ　ＨＢ９３２４お
   よびＡＴＣＣ　ＨＢ９３４７からなる群から選択される
   細胞系によって産生される、特許請求の範囲第７項記載
   の方法。 ９、該悪性疾患が腺癌である、特許請求の範囲第７項記
   載の方法。 １０、該投与が非経口的である、特許請求の範囲第７項
   記載の方法。 １１、該非経口的投与が皮下、筋肉内、腹膜内、腔内、
   あるいは静脈内注射による、特許請求の範囲第１０項記
   載の方法。 １２、該投与が約０．０１ｍｇ／ｍ＾２から約２０００
   ｍｇ／ｍ＾２の投与量である、特許請求の範囲第７項記
   載の方法。 １３、該抗体がエフェクター細胞とともに投与される、
   特許請求の範囲第７項記載の方法。 １４、該抗体が治療用に標識されている、特許請求の範
   囲第７項記載の方法。 １５、該治療用標識が放射性同位体、薬剤、免疫調節剤
   、生物反応修飾剤、レクチンおよび毒素からなる群から
   選択される、特許請求の範囲第１４項記載の方法。 １６、該抗体が治療用薬剤と実質的に同時に投与される
   、特許請求の範囲第７項、第１３項、および第１４項記
   載のいずれかの方法。 １７、該治療用薬剤が放射性同位体、薬剤、免疫調節剤
   、生物反応修飾剤、レクチンおよび毒素からなる群より
   選択される、特許請求の範囲第１６項記載の方法。 １８、該治療用薬剤の該投与が該抗体の投与の約１日か
   ら約６日前に行なわれる、特許請求の範囲第１６項記載
   の方法。 １９、ＡＴＣＣ　ＨＢ９３２４あるいはＡＴＣＣＨＢ９
   ３４７によって産生されるモノクローナル抗体の特異性
   を持つモノクローナル抗体の悪性疾患を抑制する量およ
   び製薬上不活性な担体からなる医薬組成物。 ２０、該悪性疾患が腺癌である、特許請求の範囲第１９
   項記載の医薬組成物。