JPS6330766A - 分析物の検出法及び検出剤 - Google Patents
分析物の検出法及び検出剤Info
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- JPS6330766A JPS6330766A JP62177384A JP17738487A JPS6330766A JP S6330766 A JPS6330766 A JP S6330766A JP 62177384 A JP62177384 A JP 62177384A JP 17738487 A JP17738487 A JP 17738487A JP S6330766 A JPS6330766 A JP S6330766A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
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- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/78—Thyroid gland hormones, e.g. T3, T4, TBH, TBG or their receptors
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、試料中の分ｇ″ｒ物の検出法並びにこの方法
に通信な検出坤ｊＫ関する。
に通信な検出坤ｊＫ関する。
従来の技術
兇疫字的慣出法は、数年米謳尿診断学で重要な役目乙な
している。この検出法に、特異性が大きく、著しく販感
であることによってすぐれている。この検出法は、検出
すべき分析物とその結合成分との免疫学上の相互作用に
２！！づく。
している。この検出法に、特異性が大きく、著しく販感
であることによってすぐれている。この検出法は、検出
すべき分析物とその結合成分との免疫学上の相互作用に
２！！づく。
結合成分の１つを積置することによって、反応の度合及
びこれと共に測定すべき分析物の一度を測定することが
できる。免役学的測定法は選んだ標識、例えば放射源免
疫検定（放射性標識λ酵素免反検定（＃素標識）、螢光
免役検定（螢光襟ｇ）その他によって異なる。
びこれと共に測定すべき分析物の一度を測定することが
できる。免役学的測定法は選んだ標識、例えば放射源免
疫検定（放射性標識λ酵素免反検定（＃素標識）、螢光
免役検定（螢光襟ｇ）その他によって異なる。
これらの方法の欠点は、部分的ＶＣ極めて長い培−＃時
間が必要なことである。検出法は、作業がむづかしい。
間が必要なことである。検出法は、作業がむづかしい。
放射源免疫検定の場合には、放射性物質の取扱い？伴な
う４点が生じる。
う４点が生じる。
それ故、この試験を頃良する実験が欠けてい之。このよ
うにして、汐ＩＪえば多くの使用目刃１ζ対してすぐれ
ている測定法は、測定すべき分析物を、先づ過剰蓋の標
識成分と増重するようにして進行する。分析扁から結合
しない標識結合成分は、支竹捧に帖合し之分析物と用い
て固定する。非結合成分からの結合成分の膚用の分離故
に、最初の分＋ｆｒ吻含量の標識に基づいて試料を５１
ＩＪ定することができる。
うにして、汐ＩＪえば多くの使用目刃１ζ対してすぐれ
ている測定法は、測定すべき分析物を、先づ過剰蓋の標
識成分と増重するようにして進行する。分析扁から結合
しない標識結合成分は、支竹捧に帖合し之分析物と用い
て固定する。非結合成分からの結合成分の膚用の分離故
に、最初の分＋ｆｒ吻含量の標識に基づいて試料を５１
ＩＪ定することができる。
この＋１１１１足原理は、他のすべての元疫学的方法の
ように大きい埴感性を有するが、この外に従来の常用の
試験よ少も迅速に実施することのできる利点と有してい
る。しかしなから、この刑法の者しい欠点は、測定すべ
き分析物の標識結合成分は過剰量で便用しなければなら
ない、即ち比較的大量の免疫学的碑Ｒ結合成分か必弗な
ことである。希ダ〈されない血液、血清又は血漿中の高
−縮分折物の検出は、必要な高夾度の抗体及びこｎにと
もなつ７？：Ｓｔ用のｍめにもはや殆んど実施すること
はできない。
ように大きい埴感性を有するが、この外に従来の常用の
試験よ少も迅速に実施することのできる利点と有してい
る。しかしなから、この刑法の者しい欠点は、測定すべ
き分析物の標識結合成分は過剰量で便用しなければなら
ない、即ち比較的大量の免疫学的碑Ｒ結合成分か必弗な
ことである。希ダ〈されない血液、血清又は血漿中の高
−縮分折物の検出は、必要な高夾度の抗体及びこｎにと
もなつ７？：Ｓｔ用のｍめにもはや殆んど実施すること
はできない。
発明が解決しようとする問題点
それ故、本発明の目的μ、このように高嬢反の標識結合
成分が不必貿であり、匠って従来の公知方法よシも費用
が有利に実施することのできる方法と祷ることである。
成分が不必貿であり、匠って従来の公知方法よシも費用
が有利に実施することのできる方法と祷ることである。
問題点ｔ−牌大する之めの手段
この目的は、待針請求の範囲に記載の方法によって解決
される。
される。
本発明の昧題は、分析物を含有する試料を、標識結合成
分及び固定分析物又は固定分析物類似物と、か又ｒｉ標
線繊分析物は分析物類似物及び固定結合成分と培脣し、
結合成分は固定又は律−分析物又は分析物類似物に対し
て遊離分析物に対するよりも大きい親和性を有し、標識
結合成分又は標Ｊｅｔ分Ｏｒ物又は標識分析物類似物は
、検出すべき分析物の４度と比較して不足量で存在する
ことを％微とする分析物の検出法である。
分及び固定分析物又は固定分析物類似物と、か又ｒｉ標
線繊分析物は分析物類似物及び固定結合成分と培脣し、
結合成分は固定又は律−分析物又は分析物類似物に対し
て遊離分析物に対するよりも大きい親和性を有し、標識
結合成分又は標Ｊｅｔ分Ｏｒ物又は標識分析物類似物は
、検出すべき分析物の４度と比較して不足量で存在する
ことを％微とする分析物の検出法である。
分析物とは、一般に適邑な結合成分と特異な相互作用と
生じ倚る′物置である。この中では、例えばすべての袖
類の相互作用、例えば抗原−抗体相互作用、酵素−補酵
素相互作用又はその他の配位子−受容体相互作用でろる
。分＋ＪＴ物Ｖ；、好ｌしぐにハプテン、例えばテオフ
ィリン、チＯキシ−／ （Ｔ４） 、フエノバルビタル
その他、抗原、例えは俵酸又は蛋白員、例えば八ｍ１の
コリオゴナトトロピン（ｈＣす、人間の血清アルブミン
（Ｈ８Ａ） 、カルジノエンブリオナルＫＷ （ＣＥＡ
） 、α−フエト蛋白］ （ＡＦＰ）、グリコジル化へ
モグロビ７ （ＨｂＡｌ ） 、免疫グロブリンその他
又は抗体であってもよい。結合成分は、それぞれの分析
物によって測定する。分析物が、例えばハシテン又に抗
原の場合には、結合成分としては、このハプテン又は抗
原に指向した抗体が必要である。抗体を測定しなければ
々らない場合には、結合成分としては、所属する抗原又
は／’１７’テン又は抗−抗体が必要である。
生じ倚る′物置である。この中では、例えばすべての袖
類の相互作用、例えば抗原−抗体相互作用、酵素−補酵
素相互作用又はその他の配位子−受容体相互作用でろる
。分＋ＪＴ物Ｖ；、好ｌしぐにハプテン、例えばテオフ
ィリン、チＯキシ−／ （Ｔ４） 、フエノバルビタル
その他、抗原、例えは俵酸又は蛋白員、例えば八ｍ１の
コリオゴナトトロピン（ｈＣす、人間の血清アルブミン
（Ｈ８Ａ） 、カルジノエンブリオナルＫＷ （ＣＥＡ
） 、α−フエト蛋白］ （ＡＦＰ）、グリコジル化へ
モグロビ７ （ＨｂＡｌ ） 、免疫グロブリンその他
又は抗体であってもよい。結合成分は、それぞれの分析
物によって測定する。分析物が、例えばハシテン又に抗
原の場合には、結合成分としては、このハプテン又は抗
原に指向した抗体が必要である。抗体を測定しなければ
々らない場合には、結合成分としては、所属する抗原又
は／’１７’テン又は抗−抗体が必要である。
分析物類似物とは、本発明では分所物に対して鴇竜上の
類似、それ故類似の結合特性を有する化合物である。か
＼る分析物の対／分析物類似物の対は、例えばＴ３／Ｔ
４ 、テオフィリン／テオプロミン、人聞の血清アルブ
ミン／磯の血清アルブミンである。分析物類似物として
は、抗原形成１同所に指向している抗遺伝柱抗体を使用
する。〃）＼る抗体は、必然的に測定すべき分析物との
栴道的類似を有する。
類似、それ故類似の結合特性を有する化合物である。か
＼る分析物の対／分析物類似物の対は、例えばＴ３／Ｔ
４ 、テオフィリン／テオプロミン、人聞の血清アルブ
ミン／磯の血清アルブミンである。分析物類似物として
は、抗原形成１同所に指向している抗遺伝柱抗体を使用
する。〃）＼る抗体は、必然的に測定すべき分析物との
栴道的類似を有する。
本発明の抗体とは、モノクロナル並ひにポリクロナルの
抗藻である。抗体は、完全な抗体としてか又は抗体フラ
グメント、例／ｌばＦａｂフラグメントの形で使用して
もよい。不発明によれば、支狩体結合か又は標識分析物
又は支持体結合か又は標線分析物類似物を、遊離分析物
よりも待真釣に黛別するか又は固く結合する抗体？使用
する。
抗藻である。抗体は、完全な抗体としてか又は抗体フラ
グメント、例／ｌばＦａｂフラグメントの形で使用して
もよい。不発明によれば、支狩体結合か又は標識分析物
又は支持体結合か又は標線分析物類似物を、遊離分析物
よりも待真釣に黛別するか又は固く結合する抗体？使用
する。
か＼る抗体は、例えば分析物又は分析物類似物が支持体
マトリックス又は碑織剤に結合している架橋団を一緒に
識別する抗体である。か＼る抗体は公知方法によって得
ることがでさ、こ析 の場合には免疫する之めには、分籾物又は分析物類似物
、架橋回道ひに分析物又に分析物類似物が免役原で６え
も作用？有しないる甘には免役原蛋白實、例えばアルブ
ミン、エデスチンその他からなる吻３１作用する。
マトリックス又は碑織剤に結合している架橋団を一緒に
識別する抗体である。か＼る抗体は公知方法によって得
ることがでさ、こ析 の場合には免疫する之めには、分籾物又は分析物類似物
、架橋回道ひに分析物又に分析物類似物が免役原で６え
も作用？有しないる甘には免役原蛋白實、例えばアルブ
ミン、エデスチンその他からなる吻３１作用する。
分析物類似物と特異的に識別し、固有の分所物と低観相
で抗原抗体反応するのＶＣ，過さ゛ない抗体を使用する
こともできる。このようｌこして、クリえは本発明方法
によれば、叉待体マ）ｌツクスＴ６に結合し、Ｔ３に対
して尚親和性でるるか、Ｔ４に対してにわずかな親罪性
であるのに通さない抗体を便用する場合にはでを創足す
ることができる。類似方法で、蛋白質も測定することが
できる。このようにして、本発明方法で人間の血清アル
ブミン（Ｈ８Ａ）は、さるの血清アルブミンを同相に結
合し、抗体が人間の血清アルブミンに対してわずかな抗
原抗体反応性を有するさるの血清アルブミンに指向する
ことによって検出することができる。分析物は、分析物
類似物として一定の部分構造物又は部分連続物が支持体
マトリックスに結合し、この固定部分構造物又は部分連
続物を、恢出すべき分析物よジも特異的Ｖ？−慮別する
尻体ｆ！：便用する場合に測友することもできる。この
別法は、例えは好ましくはグリコンル化ヘモグロビンを
便用するためＶＣは、面相にグリコジル１じヘモグロビ
ンのグリコノル化個ＦｇＴ（ｉ−有する合成ペプチドが
結合し、わし坏をこのペプチドＶ（便用することによっ
て利用することができる。
で抗原抗体反応するのＶＣ，過さ゛ない抗体を使用する
こともできる。このようｌこして、クリえは本発明方法
によれば、叉待体マ）ｌツクスＴ６に結合し、Ｔ３に対
して尚親和性でるるか、Ｔ４に対してにわずかな親罪性
であるのに通さない抗体を便用する場合にはでを創足す
ることができる。類似方法で、蛋白質も測定することが
できる。このようにして、本発明方法で人間の血清アル
ブミン（Ｈ８Ａ）は、さるの血清アルブミンを同相に結
合し、抗体が人間の血清アルブミンに対してわずかな抗
原抗体反応性を有するさるの血清アルブミンに指向する
ことによって検出することができる。分析物は、分析物
類似物として一定の部分構造物又は部分連続物が支持体
マトリックスに結合し、この固定部分構造物又は部分連
続物を、恢出すべき分析物よジも特異的Ｖ？−慮別する
尻体ｆ！：便用する場合に測友することもできる。この
別法は、例えは好ましくはグリコンル化ヘモグロビンを
便用するためＶＣは、面相にグリコジル１じヘモグロビ
ンのグリコノル化個ＦｇＴ（ｉ−有する合成ペプチドが
結合し、わし坏をこのペプチドＶ（便用することによっ
て利用することができる。
か＼る抗体を用いて、本発明方法で酵素僚鷹結せ成分又
は標識分析物又は標識分所物類似物を、測定すべき分所
物く対して不足量で使用することかできる。検出すべき
分析物及び憚疏結合成分又は標識分析物又は分析物類似
物の一度がどれくらい異なっていてもよいかは、遊離分
＋３ｒ吻及び固定又は標識分析物又は分析物類似物に対
する結合成分の親和性の差異がどれくらい大きいかによ
って決定的に左右される。結合又は標識分析物又は分析
物類似物に比較して、遊離分析物に対する結合成分の親
和性が低ければそれたけ、測定すべき分析物の賽度に比
較して、標識結合成分又は模二識分析物又に分析物類似
物の一度は低くてもよい。企発明力法は、便用した結合
成分が同じ大きさの親、＋１］９．り優典？治する場合
には、憚ａ１！結合成分又にＣメ識分班吻又は分析物類
似物対検出すべき分所物の・１４度の割合１ ： １
ＬｌｏｏＯで、有利に実施“３々こと刀１できることが
判明し之。→子に有利には、ＬＤ度り割甘１：２〜ｉ：
３０００が判明し次。
は標識分析物又は標識分所物類似物を、測定すべき分所
物く対して不足量で使用することかできる。検出すべき
分析物及び憚疏結合成分又は標識分析物又は分析物類似
物の一度がどれくらい異なっていてもよいかは、遊離分
＋３ｒ吻及び固定又は標識分析物又は分析物類似物に対
する結合成分の親和性の差異がどれくらい大きいかによ
って決定的に左右される。結合又は標識分析物又は分析
物類似物に比較して、遊離分析物に対する結合成分の親
和性が低ければそれたけ、測定すべき分析物の賽度に比
較して、標識結合成分又は模二識分析物又に分析物類似
物の一度は低くてもよい。企発明力法は、便用した結合
成分が同じ大きさの親、＋１］９．り優典？治する場合
には、憚ａ１！結合成分又にＣメ識分班吻又は分析物類
似物対検出すべき分所物の・１４度の割合１ ： １
ＬｌｏｏＯで、有利に実施“３々こと刀１できることが
判明し之。→子に有利には、ＬＤ度り割甘１：２〜ｉ：
３０００が判明し次。
測定すべき分析ｖＢを含有する試料を、標識結合成分及
び支持体に結合しｍ分析物又は分析物類似物で、＠黛す
る場合には、生として久の反応が１互に競争する： ｆｉｌ Ａ＋Ｂ−Ｍ ≠ Ａ−Ｂ−Ｍ（２１Ａ−Ｂ
−Ｍ ＋ Ａｆｉｘき Ａ４１ｘ−Ｅ−Ｍ ＋ Ａこの
反応式ではＡは測定すべき分析物を、Ｂは分析物に指向
した結合成分を、Ｍは標識剤を、ＡｆｌＸは支持体に結
合しｍ分析物又は分析物類似Ｗと表わす。
び支持体に結合しｍ分析物又は分析物類似物で、＠黛す
る場合には、生として久の反応が１互に競争する： ｆｉｌ Ａ＋Ｂ−Ｍ ≠ Ａ−Ｂ−Ｍ（２１Ａ−Ｂ
−Ｍ ＋ Ａｆｉｘき Ａ４１ｘ−Ｅ−Ｍ ＋ Ａこの
反応式ではＡは測定すべき分析物を、Ｂは分析物に指向
した結合成分を、Ｍは標識剤を、ＡｆｌＸは支持体に結
合しｍ分析物又は分析物類似Ｗと表わす。
反応式（１）によれは、分析物及び悦識結合成分Ｂ−１
ｖｌから免没字的複合体が形成する。大過５１１ｉＩＩ
屑の分析物の之めに、この平衡は健織免疫学的複せ体の
側に十分に移動するので反応混合物中には殆んど専ら複
合法及び過剰徊の遊離分析物が存在する。結合分析物Ａ
ｆｈに対する結合１５ｙ：分の尚親和性のために、置侠
反応が方程式（２）Ｖこよって行われる。試料中の検出
すべき分析物の一度が大きσれげ、それだけ免疫学ｓ’
：＋複合体Ａ−Ｂ−Ｍからの検出すべき分析慄Ａの濾侠
は、支持体にｍ１合した分析物又は分析ｖ！Ｉ類似物に
よって強く憶抗する。それ改試料中の分析物の像度は、
反応混合物のｆｇ解部分の襟Ｒ量に直接に比例する、か
又はＡｒ１工によって支持体に結合している標識の輩に
逆に比例する。支舛体に結合し几憚誠か又は浴液中に存
在する標識と測定して、試料中の分析物の濃度？推論す
ることができる。
ｖｌから免没字的複合体が形成する。大過５１１ｉＩＩ
屑の分析物の之めに、この平衡は健織免疫学的複せ体の
側に十分に移動するので反応混合物中には殆んど専ら複
合法及び過剰徊の遊離分析物が存在する。結合分析物Ａ
ｆｈに対する結合１５ｙ：分の尚親和性のために、置侠
反応が方程式（２）Ｖこよって行われる。試料中の検出
すべき分析物の一度が大きσれげ、それだけ免疫学ｓ’
：＋複合体Ａ−Ｂ−Ｍからの検出すべき分析慄Ａの濾侠
は、支持体にｍ１合した分析物又は分析ｖ！Ｉ類似物に
よって強く憶抗する。それ改試料中の分析物の像度は、
反応混合物のｆｇ解部分の襟Ｒ量に直接に比例する、か
又はＡｒ１工によって支持体に結合している標識の輩に
逆に比例する。支舛体に結合し几憚誠か又は浴液中に存
在する標識と測定して、試料中の分析物の濃度？推論す
ることができる。
試料と、標識分析物又は標識分析物類似物及び固定結合
成分と培誉する場合には、類似反応式を定義し、類似の
判断を用いることができる。
成分と培誉する場合には、類似反応式を定義し、類似の
判断を用いることができる。
本発明による方法は、好ましくは検出すべき分析物を有
する検査試料？、先づ標識結合成分と予４養するように
して行なうことができる。
する検査試料？、先づ標識結合成分と予４養するように
して行なうことができる。
続いてこの堵養売合物は、分析物又は分析物類似物が結
合している固相と桜触させる。非結合成分からの結合成
分ｃｖ’、Ｉｖ用の分離が続く。最後の工程としては、
ａ雌部分又は／及び＃会部分の襟ｇを測足し、これから
試料の分析物含凧と推論する。
合している固相と桜触させる。非結合成分からの結合成
分ｃｖ’、Ｉｖ用の分離が続く。最後の工程としては、
ａ雌部分又は／及び＃会部分の襟ｇを測足し、これから
試料の分析物含凧と推論する。
方法は、検査すべき試料、健眞結合放分及び支持体に結
合しｍ分析物又は分析＠類似物を同時に培貸するように
して行なうこともできる。
合しｍ分析物又は分析＠類似物を同時に培貸するように
して行なうこともできる。
培誉工程後に、史に結合成分と非結合成分とを分離し、
結合成分又は／及び非結合成分中の標識を測定し、これ
から試料中の分析物の濃度を推論する。
結合成分又は／及び非結合成分中の標識を測定し、これ
から試料中の分析物の濃度を推論する。
か＼る一工程の試験法は、例えば常用の微量調定試験の
形で行なうことかでさる。この之めには、分析物を先づ
倣蓋崗定プレートに固定する。次いで標識結合成分と測
定すべき分析物を有するｇ、科とからなる混合物と堵賽
する。一定の増重時間後に浴液を除去し、洗浄し、続い
て倣ｉｔ闇定プレートＶＣ結合した砕識剤の量を測定す
る。
形で行なうことかでさる。この之めには、分析物を先づ
倣蓋崗定プレートに固定する。次いで標識結合成分と測
定すべき分析物を有するｇ、科とからなる混合物と堵賽
する。一定の増重時間後に浴液を除去し、洗浄し、続い
て倣ｉｔ闇定プレートＶＣ結合した砕識剤の量を測定す
る。
前記別法は、件跪ぐ倉成分の代シに積繊分析物又は似鐵
分析＃類似物を期用し、固定分ケ吻又ａ分所吻類似吻の
代ジに固定結合成分を使用する場合に容易に実施するこ
とができる。
分析＃類似物を期用し、固定分ケ吻又ａ分所吻類似吻の
代ジに固定結合成分を使用する場合に容易に実施するこ
とができる。
結合成分又は分σ「吻又は分析物類似物は、ｋ法で標識
することができる。この友めには当業者は、多くの公知
標識法、例えば放射性アイソトープ、＃索、蛍光注物實
又は測光で検出することのできる他の物質での標識を使
用する。本発明では、特に＃索でＱ標識が有利である。
することができる。この友めには当業者は、多くの公知
標識法、例えば放射性アイソトープ、＃索、蛍光注物實
又は測光で検出することのできる他の物質での標識を使
用する。本発明では、特に＃索でＱ標識が有利である。
標識酵素としては、例えばペルオキシダーゼ、アルカリ
性ホスファターゼ、グルコースオキシダーゼ又は特に好
ましくはβ−がラクトシダーゼを使用することができる
。
性ホスファターゼ、グルコースオキシダーゼ又は特に好
ましくはβ−がラクトシダーゼを使用することができる
。
分析物又は分析物類似物又は結合成分の支持体への結合
は、同じようにして尚業者に明らかな方法で行なう。こ
のためには、分析物、分析物類似物又は結合成分の反応
性基を利用する。
は、同じようにして尚業者に明らかな方法で行なう。こ
のためには、分析物、分析物類似物又は結合成分の反応
性基を利用する。
これらの物質が適当な反応性基を有しない禍せには、か
＼る基を公知力汐：で分子中に瑯入することができる。
＼る基を公知力汐：で分子中に瑯入することができる。
これらの反応性基を介して、通常二官能社架償団の中間
連結下ＶＣ反応江基と支持体材料との結合が行なわれる
。に′１台反分は、支持体に吸着して担狩させることも
できる。支持体材料とじ〔ケ、免疫学上有効な生化学的
化合切を固定する定めに通常使用δれるすべでＱ′？ｔ
ＪＪｔ、ｔｆｌＪえばニトロセルロース、峨、ポリスチ
ロール刀１らなるプラスチックその他が適当である。
連結下ＶＣ反応江基と支持体材料との結合が行なわれる
。に′１台反分は、支持体に吸着して担狩させることも
できる。支持体材料とじ〔ケ、免疫学上有効な生化学的
化合切を固定する定めに通常使用δれるすべでＱ′？ｔ
ＪＪｔ、ｔｆｌＪえばニトロセルロース、峨、ポリスチ
ロール刀１らなるプラスチックその他が適当である。
本発明のもう１つの課題は、本発明方法を実施するため
の検出剤である。この検出剤は固定分析物又は固定分析
物類似物及び標識結合成分、か又は標線分析物又は標識
分析＠類似物及び固足結合波分厳びに場合により通描な
緩衛剤及び更に付加的に通常使用される助剤を含有し、
結合成分は固定又Ｖｉ榛織分析物又は分析物類似物に対
して、遊離分析物に対するよｐも大きい親和性を有する
ことｅ［徴とする。
の検出剤である。この検出剤は固定分析物又は固定分析
物類似物及び標識結合成分、か又は標線分析物又は標識
分析＠類似物及び固足結合波分厳びに場合により通描な
緩衛剤及び更に付加的に通常使用される助剤を含有し、
結合成分は固定又Ｖｉ榛織分析物又は分析物類似物に対
して、遊離分析物に対するよｐも大きい親和性を有する
ことｅ［徴とする。
通常使用される他の付加的助７８ｒ１．＋は、例えば浸
透剤、安定剤、ガーレン助剤、フレーム形成体その他で
ある。
透剤、安定剤、ガーレン助剤、フレーム形成体その他で
ある。
襟鐵剤を検出する之めＶ（他の物置が必要な場合には、
この吻寅μ同じようにして試筆中に含まｎていてもよい
。僚識剤として、例えば酵素？利用する場合には、好ｚ
Ｌ（はこの畔累を検出するのに必要な基買及びその他の
助剤？検出剤に添加する。
この吻寅μ同じようにして試筆中に含まｎていてもよい
。僚識剤として、例えば酵素？利用する場合には、好ｚ
Ｌ（はこの畔累を検出するのに必要な基買及びその他の
助剤？検出剤に添加する。
検出剤は、別種の方法で調合してもよい。この検出剤は
）例えば標識結合成分又は標繊分所物又ｉ′２像鐵分析
物類似物、適当な緩衛剤、標識剤を創建する検出剤叢び
に場合にょ〕他の助剤を含有する異なる溶液と、分析物
又は分析ｖＪ類供物又は結合成分が場合にょシ架倫団を
介して結合している同相とからなっていてもよい。贋剤
としては、水か又は水と水浴性有機溶削、例えばメタノ
ール、エタノール、アセトン又はジメチルホルムアミド
との混合物が核嶋する。安定性の理由から、試＠に必習
な試薬を、実際の検査の場合ＶＣはじめて一緒にする２
イπ又は叙情の粘液に分配するのが有利でりる。
）例えば標識結合成分又は標繊分所物又ｉ′２像鐵分析
物類似物、適当な緩衛剤、標識剤を創建する検出剤叢び
に場合にょ〕他の助剤を含有する異なる溶液と、分析物
又は分析ｖＪ類供物又は結合成分が場合にょシ架倫団を
介して結合している同相とからなっていてもよい。贋剤
としては、水か又は水と水浴性有機溶削、例えばメタノ
ール、エタノール、アセトン又はジメチルホルムアミド
との混合物が核嶋する。安定性の理由から、試＠に必習
な試薬を、実際の検査の場合ＶＣはじめて一緒にする２
イπ又は叙情の粘液に分配するのが有利でりる。
本発明による検出剤の一足の実施形式に幻しては、検出
剤の成分が１部分又は完全に訣結乾朦形で存在する場合
に有利である。こ（１）′ｆｃめには常法で、先づ腋当
する内容ｖ／ＪＸＣ７）浴液を製造し、これを公九力伝
で峠結乾燥する。（壇鯖乾燥吻は便用Ｍ Ｋ常法で適当
な溶剤、例えば水で復ＭＣさせる。
剤の成分が１部分又は完全に訣結乾朦形で存在する場合
に有利である。こ（１）′ｆｃめには常法で、先づ腋当
する内容ｖ／ＪＸＣ７）浴液を製造し、これを公九力伝
で峠結乾燥する。（壇鯖乾燥吻は便用Ｍ Ｋ常法で適当
な溶剤、例えば水で復ＭＣさせる。
本発明による検出剤の１ｒ６１々の又はすべての成分を
、粉末混合物又は試薬タブレットで製造するのも有オリ
である。この友めには、検出剤の成分に常用のガーレン
添加剤を添加し、造粒する。
、粉末混合物又は試薬タブレットで製造するのも有オリ
である。この友めには、検出剤の成分に常用のガーレン
添加剤を添加し、造粒する。
刀・＼る添加剤としては、例えば適当な炭水化物、例え
は七ノー、オリゴ−又はポリサッカライド又は棚アルコ
ール、例えばマンニット、ンルビット又はキシリット又
は他の不活性化合物、例えばボリニチレングリコール又
はボ゛リビニルビロリドンが適当である。
は七ノー、オリゴ−又はポリサッカライド又は棚アルコ
ール、例えばマンニット、ンルビット又はキシリット又
は他の不活性化合物、例えばボリニチレングリコール又
はボ゛リビニルビロリドンが適当である。
実施例
例 １
テオフィリンの検出
囚 テオフィリン−９−カルボキシペンチルーエデスチ
ンＶＣ対するポリクロナル抗体の製造年を、公知）ｊ砥
でテオフィリン−９−カルボキシペンテルーエデスチン
で免役する。羊から椴出し之抗血清から、公知方法で恍
体尋液を単離する。抗体ｄ敵を、テオフィリン−９−ペ
ンチル−セファローズによって精製する。弓喘に、テオ
フィリンの段階グラジェントで行なう。高磯度のテオフ
ィリンを含有するフラクションを、透析後に史に便用す
る。
ンＶＣ対するポリクロナル抗体の製造年を、公知）ｊ砥
でテオフィリン−９−カルボキシペンテルーエデスチン
で免役する。羊から椴出し之抗血清から、公知方法で恍
体尋液を単離する。抗体ｄ敵を、テオフィリン−９−ペ
ンチル−セファローズによって精製する。弓喘に、テオ
フィリンの段階グラジェントで行なう。高磯度のテオフ
ィリンを含有するフラクションを、透析後に史に便用す
る。
旧）４＃られ次抗体での分析。
テオフィリン−９−カルボキシペンチルーヒドロキシサ
クシンイミドエステルを、うさき゛のｒｇａ （非％異
）に結合する。このようにして得られたポリハプテン（
ＰＨ）を、ｌ炭酸塩緩衝剤（２００ｍモル、ｐＪ−１９
，４）と混合する（ボ″リハプテン１０μｇ／炭酸塩緩
＃削１Ｍ）。倣−軸足プレートに、このポリハプテン浴
液を級堕する。
クシンイミドエステルを、うさき゛のｒｇａ （非％異
）に結合する。このようにして得られたポリハプテン（
ＰＨ）を、ｌ炭酸塩緩衝剤（２００ｍモル、ｐＪ−１９
，４）と混合する（ボ″リハプテン１０μｇ／炭酸塩緩
＃削１Ｍ）。倣−軸足プレートに、このポリハプテン浴
液を級堕する。
（Ａ）Ｋ記載の抗体を、楢養緩備剤（ＰＢＳ、牛の血清
アルブミン１％、トウエン（Ｔ〜νｗＥＮ〕２００．１
％）で希釈すると、１０−８ＭのσＦＪが青られる。こ
の浴液の１ど１５ＶＣ１等弁声の鹿１字上の多くの希釈
剤（ファクター１ ： ２ｎ）テオフィリン、テオフィ
リン−９−カルポキシベンナルーＮ −ｔ −ＢＯＣ−
リシン又はコフエインを加え、’ｘｍで１時間培誉する
。Ｎ −ｔ −ＢＯＣは、ｔｅｒｔ−略 プチルオキシ−刀ルボニル基の隔飴であり、通常便用さ
れる望索保譲基を表わす。
アルブミン１％、トウエン（Ｔ〜νｗＥＮ〕２００．１
％）で希釈すると、１０−８ＭのσＦＪが青られる。こ
の浴液の１ど１５ＶＣ１等弁声の鹿１字上の多くの希釈
剤（ファクター１ ： ２ｎ）テオフィリン、テオフィ
リン−９−カルポキシベンナルーＮ −ｔ −ＢＯＣ−
リシン又はコフエインを加え、’ｘｍで１時間培誉する
。Ｎ −ｔ −ＢＯＣは、ｔｅｒｔ−略 プチルオキシ−刀ルボニル基の隔飴であり、通常便用さ
れる望索保譲基を表わす。
この培大竹７＃甥を、ポリハプテンを被覆し九倣叛摘定
プレートに添加する。菟温で更に１時間培誉する。次い
で溶液′ｆ：尿去し、数回洗浄する。最後に、微址滴定
プレートに、ペルオキシダーゼ識別のうさぎ一抗一羊一
抗体（１００ｍＵ／ ｍｌ ）と添加する。室温で１時
間培養し、続いて洗浄する。微ｆ軸足の各々の孔に、Ａ
ＢＴＳ−培養基溶液［ＡＢＴＳ＝２ 、２’−アシノー
ｄ−（６−ｘ チル−ベンズチアゾリン−６−スルホ：
／ 酸）〕１００局を添加する。１時間後に、ミクロエ
リｆ’ （ＥＬｌ、：ｉＡ）読取機で吸光を測定する。
プレートに添加する。菟温で更に１時間培誉する。次い
で溶液′ｆ：尿去し、数回洗浄する。最後に、微址滴定
プレートに、ペルオキシダーゼ識別のうさぎ一抗一羊一
抗体（１００ｍＵ／ ｍｌ ）と添加する。室温で１時
間培養し、続いて洗浄する。微ｆ軸足の各々の孔に、Ａ
ＢＴＳ−培養基溶液［ＡＢＴＳ＝２ 、２’−アシノー
ｄ−（６−ｘ チル−ベンズチアゾリン−６−スルホ：
／ 酸）〕１００局を添加する。１時間後に、ミクロエ
リｆ’ （ＥＬｌ、：ｉＡ）読取機で吸光を測定する。
第１図には定型的創建曲線が図示されている。測定曲線
は、次のものと表わす： （１） テオフィリン （２＋ テオフィリン−９−カルざキシペンチル−Ｎ
−ｔ −ＢＯＣ−リシン （３１コフエイン これから、親和性の差異がコフェインで受容される２４
５％の抗原抗体反応でファクター約２００〜４００で存
在するのを読取ることができる。
は、次のものと表わす： （１） テオフィリン （２＋ テオフィリン−９−カルざキシペンチル−Ｎ
−ｔ −ＢＯＣ−リシン （３１コフエイン これから、親和性の差異がコフェインで受容される２４
５％の抗原抗体反応でファクター約２００〜４００で存
在するのを読取ることができる。
（Ｃ） テオフィリンの検出。
テオフィリンの検出を、（Ｂ）に記載の方法と全く同じ
ようにして行なう。
ようにして行なう。
テオフィリン含有血ｆｆ／２０μを及び前記抗体溶液２
０μｅと、田ンに記載の方法で培髪し、（Ｂ）Ｋよって
予め被覆し之微量崗定プレートで分析する。先づ正確に
明らかな肩、即ちテオフィリン２．５．５．１０．２０
及び４０呼／沼を含有する血清試料と用いて、次の測定
表が１−られる。
０μｅと、田ンに記載の方法で培髪し、（Ｂ）Ｋよって
予め被覆し之微量崗定プレートで分析する。先づ正確に
明らかな肩、即ちテオフィリン２．５．５．１０．２０
及び４０呼／沼を含有する血清試料と用いて、次の測定
表が１−られる。
２．５ ４９０
この表に基づいて、拭８ｃＰの禾知のテオフィリン含′
ｊｉを測定することができる。
ｊｉを測定することができる。
例 ２
チロキシン（Ｔ４）の検出。
（４） テト２ヨートーチｃｔ＝ン−Ｎ−ｔ−ＢＯＣ−
エデスチンに対するモノクロナル抗体の製造。
エデスチンに対するモノクロナル抗体の製造。
雌のパルド（Ｂａｌｄ）／ Ｃ−はっかねずみを、公知
方法でＴ４−トｔ −ＢＯＣ−エデスチンで免疫する。
方法でＴ４−トｔ −ＢＯＣ−エデスチンで免疫する。
この免疫はつかねずみのひぞう細胞に、ミニ０７−セリ
ニイ（Ｍｙｅｌｏｍａ−ＺｅＬｌｉ阜ｓｅ） Ａｇ ８
．６５３を、ケーラー及びミルスティンの公知方法によ
って結合する。得られ之クロンを選別する。
ニイ（Ｍｙｅｌｏｍａ−ＺｅＬｌｉ阜ｓｅ） Ａｇ ８
．６５３を、ケーラー及びミルスティンの公知方法によ
って結合する。得られ之クロンを選別する。
Ｔ４− Ｎ−１，−ＨｏＣ−免疫グロブリンに対して高
親和性を有するクロンを選択する。
親和性を有するクロンを選択する。
培別するためＫは、抗体を多くの一度のＴ４（ファクタ
ー１ ： ４ｆ１）とセ養しく室温で１Ｑ間）、次いで
ＰＨを被覆した倣ｈ゛を内定プレートＶＣ移す。更に２
時間培誉し之後ンζ、上面み浴欣を猷去し、プ７−トを
洗浄し、？１４１と同じようにして結合抗体をペルオキ
シダーゼ偉繊の抗−はつかね丁み一抗体及びＡＢＴＳで
見えるようにする。第２図は変性Ｔ４に対するρ為＼る
抗体（ＩＩ１１１＃２）の、Ｔ４に直接に指向する仇−
Ｔ４−仇俸（ａｆｌ繊１〕で得られ之曲機に比較される
歌合ｆｉｆｌ梅を示す。親和性の±異ファクター約２０
００が紹められる。
ー１ ： ４ｆ１）とセ養しく室温で１Ｑ間）、次いで
ＰＨを被覆した倣ｈ゛を内定プレートＶＣ移す。更に２
時間培誉し之後ンζ、上面み浴欣を猷去し、プ７−トを
洗浄し、？１４１と同じようにして結合抗体をペルオキ
シダーゼ偉繊の抗−はつかね丁み一抗体及びＡＢＴＳで
見えるようにする。第２図は変性Ｔ４に対するρ為＼る
抗体（ＩＩ１１１＃２）の、Ｔ４に直接に指向する仇−
Ｔ４−仇俸（ａｆｌ繊１〕で得られ之曲機に比較される
歌合ｆｉｆｌ梅を示す。親和性の±異ファクター約２０
００が紹められる。
（Ｅｌ モノクロナル抗体とβ−ガラクトシダーゼと
の結合。
の結合。
浄化モノクロナル抗体又はこれから侍られたＦａｂフラ
グメントを、マレイミドーヘキサノイルーヒドロキシサ
クシンイミド（ＭＨりと反応させる。ＭＨ８−変性抗体
又は抗体フラグメントを、β−ガラクトシダーゼと反這
させる。反応混合物を、ケ゛ル窺過（セファクリル８４
００）によって分離する。分子量７０００００〜２００
０００００Ｄの範囲内で存在する産せ切をザ用した。
グメントを、マレイミドーヘキサノイルーヒドロキシサ
クシンイミド（ＭＨりと反応させる。ＭＨ８−変性抗体
又は抗体フラグメントを、β−ガラクトシダーゼと反這
させる。反応混合物を、ケ゛ル窺過（セファクリル８４
００）によって分離する。分子量７０００００〜２００
０００００Ｄの範囲内で存在する産せ切をザ用した。
（Ｃ） テトラヨートーチロニノの検出。
倣景伺足プレートに、■と同じよりにしてテトラヨート
ーチご二ン−ｔ−ＢＯＣ−免役グロブリン（１ｐｇ／ｍ
１）ｔ：Ｍ曖する。テトラヨード−チロニン０．６．２
５．５０．１２５及び２４７μｇ／影を有する血清試料
（５０μｅ）〔この血清試料を製謔するためには、ＴＢ
Ｇを含ｌないＭ４阜皿屑（ベーリンガー社、マンハイム
８：）を開用する〕を孔に調之し、ＦＢＳＫｍかした５
ｃＳ＋−β−ガラクトシダーゼ−結合＊（２０ｍＵ／ｒ
ｕｔ ） １５０μｔを加える。￥温で１時間培誉伎に
上面与を除去し、微量調定プレートを洗浄し、培養基（
クロルフェノールレッド−ガラクトシド１ｍモル、ドイ
ツ特許公開第３３４５７４８号によって製造）２００μ
ｅを満たす。これから得られ次測定表を、次に記載する
： ＣＴ４ ｔ ａ ｇ／Ｊ３ ） ｍＥこの測定表
に基づいて、未知のＴ４含１ｔｔ有する血（Ｈ試料を測
定することができる。
ーチご二ン−ｔ−ＢＯＣ−免役グロブリン（１ｐｇ／ｍ
１）ｔ：Ｍ曖する。テトラヨード−チロニン０．６．２
５．５０．１２５及び２４７μｇ／影を有する血清試料
（５０μｅ）〔この血清試料を製謔するためには、ＴＢ
Ｇを含ｌないＭ４阜皿屑（ベーリンガー社、マンハイム
８：）を開用する〕を孔に調之し、ＦＢＳＫｍかした５
ｃＳ＋−β−ガラクトシダーゼ−結合＊（２０ｍＵ／ｒ
ｕｔ ） １５０μｔを加える。￥温で１時間培誉伎に
上面与を除去し、微量調定プレートを洗浄し、培養基（
クロルフェノールレッド−ガラクトシド１ｍモル、ドイ
ツ特許公開第３３４５７４８号によって製造）２００μ
ｅを満たす。これから得られ次測定表を、次に記載する
： ＣＴ４ ｔ ａ ｇ／Ｊ３ ） ｍＥこの測定表
に基づいて、未知のＴ４含１ｔｔ有する血（Ｈ試料を測
定することができる。
例 ６
テオフィリンを測定するために低親和性抗体を有する試
験条片。
験条片。
免疫原テオフィリン−８−カルボキシゾロビルーエデス
チンを用いて、公知方法でモノクロナル抗体を製造する
。
チンを用いて、公知方法でモノクロナル抗体を製造する
。
抗体を、競合試験によって選別する：
抗体と６液それぞれ１０Ａｌ及び多くの一度（ＰＢ１９
中テオフィリン５ｘ１０−′Ｖ〜６ｘ１０−８Ｖ〕のテ
オフィリンを、テオフィリン−８−カルボキシプロピル
−うさき°−ＩｇＧを被覆した微′ψ°ン閾定プレート
で２時間増養する。付層物ｔ ＊ ８１Ｍ定プレートか
ら除去し、プレートｅ死浄し、ポリハゲテン結合抗体金
例１（Ｂ）のようにして見えるようにする。
中テオフィリン５ｘ１０−′Ｖ〜６ｘ１０−８Ｖ〕のテ
オフィリンを、テオフィリン−８−カルボキシプロピル
−うさき°−ＩｇＧを被覆した微′ψ°ン閾定プレート
で２時間増養する。付層物ｔ ＊ ８１Ｍ定プレートか
ら除去し、プレートｅ死浄し、ポリハゲテン結合抗体金
例１（Ｂ）のようにして見えるようにする。
ポリハプテン被覆プレートへの結合が大シリテオフイリ
ノ（ン２ Ｘ １０−’ Ｍ ）で競合することができ
るのに過き゛ない抗坏會選択し次。
ノ（ン２ Ｘ １０−’ Ｍ ）で競合することができ
るのに過き゛ない抗坏會選択し次。
完全な抗体又ｒｌ：抗体フラグメントに例２の）のよう
にしてβ−ガラクトシダーゼを結合する。
にしてβ−ガラクトシダーゼを結合する。
固体支持体ノーの製造。
因 結合吻の支持体。
謙峨（液体吸収賃約１０μｅ／□□□２）に、牛の血清
アルブミン １％塩化マグネシウム
１ｍモルヘペス／水酸化ナト
リウム（ｐ）４７．２） ２５ｍモルを含有する
浴液を含浸する。続いて乾燥する。
アルブミン １％塩化マグネシウム
１ｍモルヘペス／水酸化ナト
リウム（ｐ）４７．２） ２５ｍモルを含有する
浴液を含浸する。続いて乾燥する。
（Ｂ） ポリハプテン−マトリックス。
ニトロセルロースメンプラン（孔径０．２μ）にハプテ
ンを被覆する。このためにはメンプランを、ポリハシテ
ン弓液（ＰＢＳにとかしたポリハプテン３＋＋＋！７／
＋ａ／）と１２〜１６時間層饗する。
ンを被覆する。このためにはメンプランを、ポリハシテ
ン弓液（ＰＢＳにとかしたポリハプテン３＋＋＋！７／
＋ａ／）と１２〜１６時間層饗する。
次いで牛の皿嘴アルブミン１殻／ａを２時間含浸し、Ｐ
）：ｌＳ ｖｃとかしたトリトン（Ｔｒｉｔｏｎ ）ｘ
−１０口 ０．０５％で６０分間流浄子る。
）：ｌＳ ｖｃとかしたトリトン（Ｔｒｉｔｏｎ ）ｘ
−１０口 ０．０５％で６０分間流浄子る。
ｔＣＪ 増寮基の支持体。
α紙（液体の吸収量的１０μｔ／□□□２）に、トウｘ
ン（Ｔｗｅｅｎ） ２０ ０，４％クロ
ルフェノールレッド−ガラクトシド ３ ｍＭヘペス
／水水化化ナトリウムｐ）１７．２） ２５ ｍ
Ｍを含有する浴液を含浸し、゛窩法で乾燥する。
ン（Ｔｗｅｅｎ） ２０ ０，４％クロ
ルフェノールレッド−ガラクトシド ３ ｍＭヘペス
／水水化化ナトリウムｐ）１７．２） ２５ ｍ
Ｍを含有する浴液を含浸し、゛窩法で乾燥する。
（Ｄ） 試験宋片。
この層で試験条片を形成する。血漿の分離には、ドイツ
％許公開第３０２９５７９号によるガラス繊維フリスが
役立つ。
％許公開第３０２９５７９号によるガラス繊維フリスが
役立つ。
（トン リ４り定。
試料（全血、血清又（ｄ類似物３０ｕＪ）をガラス繊維
フリス上に添加し、支持体に拡散させる。この場合結合
物は浴解し、試料中に存在する分析物と相互作用する。
フリス上に添加し、支持体に拡散させる。この場合結合
物は浴解し、試料中に存在する分析物と相互作用する。
浴液晶金物はポリハプテンメンプランに達し、この上で
クロマトグラフィーが行われる。次いでメンプランを冶
譬基支持俸で閉鎖する。ハプテ／マ）１ノクスからマト
リックスの発端で保−Ｍさｎない谷液九合物が培５に基
と接触する。ｍバー培養基の反応が行われる。色の発生
を、２０秒間後に反射測光によってポリハプテンマトリ
ックスの末端で測定する〔Δ％Ｒ＝２０秒闇佼の放射光
の反射変化（％）〕。明らかな濃度のテオフィリンを有
する試料に基づいて、第６図に示され次曲ｊ定曲蘇が侍
られる。この曲線は、ム安な全臨床範囲にわたる。この
測定曲巌によって、未知の試料中のテオフィリンの濃度
を御ｊ足することができる。
クロマトグラフィーが行われる。次いでメンプランを冶
譬基支持俸で閉鎖する。ハプテ／マ）１ノクスからマト
リックスの発端で保−Ｍさｎない谷液九合物が培５に基
と接触する。ｍバー培養基の反応が行われる。色の発生
を、２０秒間後に反射測光によってポリハプテンマトリ
ックスの末端で測定する〔Δ％Ｒ＝２０秒闇佼の放射光
の反射変化（％）〕。明らかな濃度のテオフィリンを有
する試料に基づいて、第６図に示され次曲ｊ定曲蘇が侍
られる。この曲線は、ム安な全臨床範囲にわたる。この
測定曲巌によって、未知の試料中のテオフィリンの濃度
を御ｊ足することができる。
例 ４
低親和性抗体によるフェニトインの測定。
囚 低親和性抗体の製造。
抗体を、例１（Ａ）のようにして、羊？ゾフェニルヒダ
ントイ／−バレａイル酸−牛の血清アルブミンで免疫し
て製造する。競合性に対する試験？、例３（Ａ）のよう
にして行なう。これによって、比較的大さい鋳度（６Ｘ
１ ｃｌ−ｅｌＭ ）のフエニトイ／が、ポリハプテ
ンから競合するために必着であることが判明し之（抗体
の永度：約５ｘｌＯ−”Ｍｓ ２８０ａｍでの吸収Ｖ
（よって測定）。
ントイ／−バレａイル酸−牛の血清アルブミンで免疫し
て製造する。競合性に対する試験？、例３（Ａ）のよう
にして行なう。これによって、比較的大さい鋳度（６Ｘ
１ ｃｌ−ｅｌＭ ）のフエニトイ／が、ポリハプテ
ンから競合するために必着であることが判明し之（抗体
の永度：約５ｘｌＯ−”Ｍｓ ２８０ａｍでの吸収Ｖ
（よって測定）。
それ故、抗血τ＊ｒｉ、他に分別しない。
（Ｅ） 試験載置の製造。
測定法は、ヨーロッパ丑計公開第００７３５１３号に記
載の方法で行なう。この中の第１ａ図及び第１ｂ図に記
載の装置を、遠心分離分析目動装宵ｌ′ｉ：使用する。
載の方法で行なう。この中の第１ａ図及び第１ｂ図に記
載の装置を、遠心分離分析目動装宵ｌ′ｉ：使用する。
この装置はスクリーンで相互に結合した苗と有し、この
至は部分的に異なるフリスを有し、培心分離力の影響下
にノ幀次に間貸することができる。フリスは異なる含浸
液を含浸している。
至は部分的に異なるフリスを有し、培心分離力の影響下
にノ幀次に間貸することができる。フリスは異なる含浸
液を含浸している。
次のフリス及びフリスの含浸液を使用する：フリスに
蓮祇 含改液 ： 浸透剤〔トウニン（Ｔｗｅｅｎ） ２０
） ５％フリス２二 濾紙 ＥＤＴＡ ５ｍ モル牛の血清
アルブミン １％ フリス３：ｄｔｉ紙 牛の血清アルブミン １％ アスパラクン取マグネシウム ４Ｉ］１モルヘペス媛寅
剤（ｕ７−２） ５０ｍモルフリス４：ａ■紙 フリス５： 濾紙 使用製氷の菫は、次の＝うｖＣ配置する：菟１： フリ
ス１１個 至２： から ￥６： フリス２１個 １ユ ４ ： フ リ ス ６ １ イ固１【≦
５ ： フ リ ス ４ １ イ化４至６：
フリス５２個 室７： 測定クベット （Ｃ）測定の実施 試料溶液として使用し九血清を、０．９％の塩化ナトリ
ウム溶液で１：１００に希釈する。このよ５ＶｃＬで得
られ之溶液６０μｔ？、便用製電のｖ：、科破覆至にピ
ペットで取り、次いで久の遍心分離プログラムを実施す
る： ２５０ｒｐｍ、２５秒間 ２０００ｒｐｍｑ２０秒間 （５Ｑ［］ｒｐｍ、３００秒間 試料及び抗−フェニトイン−抗体−結合物の培養Ｏｒｐ
ｍ ％ ３０口秒間 支持体に固定したスパセル化フェニトインで培養２ＱＯ
Ｏｒｐｍ、１５秒間 第２の培養の終了 Ｏｒｐｍ、１５秒間 ｉ ｏ ｏ ｒｐｍ、５秒間 液体のクベットへの供給 ７２０ｒｐｍ、ｓｏ秒間 ｂ ７８ ａｍで測定 前記の還り分離プログラムで、先づフリス１から浸透剤
を液体の導出と容易にする之めに分離する。続いて緩質
剤及び結合フリスと分離し、この上に存在する成分ｔｍ
解する。フェニトインが仇−フエニトインー抗−酵素−
結金物と結合している第１の斤量で３００秒間培養した
後に、ｆＬ衡を次の工程で試料に対して過剰員で存在す
るｉｉ！！１走したスバセル化フェニトインＴ ３００
秒間調節する。次いでｂ液を、培養基−フリス上に移す
。この場合培養基が分離する。全液体混合物がクベット
に入シ、そこで吸光の増大を５０秒間追求する。
蓮祇 含改液 ： 浸透剤〔トウニン（Ｔｗｅｅｎ） ２０
） ５％フリス２二 濾紙 ＥＤＴＡ ５ｍ モル牛の血清
アルブミン １％ フリス３：ｄｔｉ紙 牛の血清アルブミン １％ アスパラクン取マグネシウム ４Ｉ］１モルヘペス媛寅
剤（ｕ７−２） ５０ｍモルフリス４：ａ■紙 フリス５： 濾紙 使用製氷の菫は、次の＝うｖＣ配置する：菟１： フリ
ス１１個 至２： から ￥６： フリス２１個 １ユ ４ ： フ リ ス ６ １ イ固１【≦
５ ： フ リ ス ４ １ イ化４至６：
フリス５２個 室７： 測定クベット （Ｃ）測定の実施 試料溶液として使用し九血清を、０．９％の塩化ナトリ
ウム溶液で１：１００に希釈する。このよ５ＶｃＬで得
られ之溶液６０μｔ？、便用製電のｖ：、科破覆至にピ
ペットで取り、次いで久の遍心分離プログラムを実施す
る： ２５０ｒｐｍ、２５秒間 ２０００ｒｐｍｑ２０秒間 （５Ｑ［］ｒｐｍ、３００秒間 試料及び抗−フェニトイン−抗体−結合物の培養Ｏｒｐ
ｍ ％ ３０口秒間 支持体に固定したスパセル化フェニトインで培養２ＱＯ
Ｏｒｐｍ、１５秒間 第２の培養の終了 Ｏｒｐｍ、１５秒間 ｉ ｏ ｏ ｒｐｍ、５秒間 液体のクベットへの供給 ７２０ｒｐｍ、ｓｏ秒間 ｂ ７８ ａｍで測定 前記の還り分離プログラムで、先づフリス１から浸透剤
を液体の導出と容易にする之めに分離する。続いて緩質
剤及び結合フリスと分離し、この上に存在する成分ｔｍ
解する。フェニトインが仇−フエニトインー抗−酵素−
結金物と結合している第１の斤量で３００秒間培養した
後に、ｆＬ衡を次の工程で試料に対して過剰員で存在す
るｉｉ！！１走したスバセル化フェニトインＴ ３００
秒間調節する。次いでｂ液を、培養基−フリス上に移す
。この場合培養基が分離する。全液体混合物がクベット
に入シ、そこで吸光の増大を５０秒間追求する。
明らかな奮のフエニトイ／ｆｒ：含有する試料によ夕、
ｎｔｆ ｄｒＥ方法によって飼足囲〜を作製する。
ｎｔｆ ｄｒＥ方法によって飼足囲〜を作製する。
この測定１１ζ基づいて、未知のフェニトイン言動と有
する試料ｒ相応する方法でｍ１１定することかできる。
する試料ｒ相応する方法でｍ１１定することかできる。
第１図はチフィリン、チフィリン−？−カルボキシペン
チルーＮ −ｔ −ＢＯＣ−！Ｊシン及ヒコフエインの
奴元測定曲株を示し、第２図は抗体の競當１ｌＩｌｌｌ
−を示し、第３図はテオフィリンの濃度の測定曲解を示
す。 第２図 ；廊１ノ！［、ｕモ」し／シ） 第３図 ５ ｔｏ ＋５ ２０ ２５ ３０ｊ＆
度 （ｍｑ／Ｌ）
チルーＮ −ｔ −ＢＯＣ−！Ｊシン及ヒコフエインの
奴元測定曲株を示し、第２図は抗体の競當１ｌＩｌｌｌ
−を示し、第３図はテオフィリンの濃度の測定曲解を示
す。 第２図 ；廊１ノ！［、ｕモ」し／シ） 第３図 ５ ｔｏ ＋５ ２０ ２５ ３０ｊ＆
度 （ｍｑ／Ｌ）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、分析物を検出する方法において、分析物を含有する
試料を、標識結合成分及び固定分析物又は固定分析物類
似物と、か又は標識分析物又は分析物類似物及び一定結
合成分と培養し、結合成分は固定又は標識分析物又は分
析物類似物に対して、遊端分析物に対するよりも大きい
親和性を有し、標識結合成分又は標識分析物又は標識分
析物類似物は、検出すべき分析物の濃度と比較して不足
量で存在することを特徴とする、分析物の検出法。 ２、分析物は、架橋団を介して不溶性支持体又は標識剤
に結合し、結合成分は組合物の分析物−架橋団に対して
遊離分析物に対するよりも大きい親和性を有する、特許
請求の範囲第１項記載の方法。 ３、分析物類似物として、分析物と構造上の類似を有す
る化合物を使用し、結合成分は分析物類似物に対して測
定すべき分析物に対するよりも大きい親和性を有する、
特許請求の範囲第１項記載の方法。 ４、分析物類似物は測定すべき分析物の特性を有する部
分構造物又は部分連続物であり、結合成分はこの部分構
造物又は部分連続物に対して、測定すべき分析物に対す
るよりも大きい親和性を有する、特許請求の範囲第１項
記載の方法。 ５、標識結合成分又は標識分析物又は分析物類似物対検
出すべき分析物の濃度の割合は１：１００００までであ
る、特許請求の範囲第１項から第４項までのいずれか１
項記載の方法。 ６、分析物の検出剤において、固定分析物又は固定分析
物類似物及び標識結合成分、か又は標識分析物又は標識
分析物類似物及び固定結合成分並びに場合により適当な
緩衝剤及び更に付加的に通常使用される助剤を含有し、
結合成分は固定又は標識分析物又は分析物類似物に対し
て、遊離分析物に対するよりも大きい親和性を有する、
分析物の検出剤。 ７、溶液１種又は数種、支持体層１層又は数層、フィル
ム層１層又は数層又は／及び粉末混合物１種又は数種、
試薬タブレット又は凍結乾燥物からなる、特許請求の範
囲第６項記載の検出剤。 ８、少くとも３成分からなり、第１の成分は標識結合成
分又は標識分析物又は標識分析物類似物を含有し、第２
の成分は固定分析物又は固定分析物類似物叉は固定結合
成分を含有し、第３の成分は標識剤の検出に必要な物質
を含有し、各々の成分には場合により必要な他の助剤が
存在する、特許請求の範囲第６項又は第７項記載の検出
剤。
Applications Claiming Priority (2)
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|---|---|---|---|
| DE19863624464 DE3624464A1 (de) | 1986-07-19 | 1986-07-19 | Verfahren zum nachweis eines analyten sowie hierfuer geeignetes mittel |
| DE3624464.3 | 1986-07-19 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6330766A true JPS6330766A (ja) | 1988-02-09 |
| JPH0664060B2 JPH0664060B2 (ja) | 1994-08-22 |
Family
ID=6305556
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62177384A Expired - Lifetime JPH0664060B2 (ja) | 1986-07-19 | 1987-07-17 | 分析物の検出法及び検出剤 |
Country Status (9)
| Country | Link |
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| EP (1) | EP0254929B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0664060B2 (ja) |
| KR (1) | KR960016717B1 (ja) |
| AT (1) | ATE74211T1 (ja) |
| AU (1) | AU601993B2 (ja) |
| DE (2) | DE3624464A1 (ja) |
| ES (1) | ES2037032T3 (ja) |
| ZA (1) | ZA875084B (ja) |
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-
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- 1987-07-10 AT AT87109953T patent/ATE74211T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-07-10 EP EP87109953A patent/EP0254929B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-10 ES ES198787109953T patent/ES2037032T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-13 ZA ZA875084A patent/ZA875084B/xx unknown
- 1987-07-16 US US07/073,989 patent/US5037764A/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-07-17 JP JP62177384A patent/JPH0664060B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-17 AU AU75780/87A patent/AU601993B2/en not_active Ceased
- 1987-07-18 KR KR1019870007845A patent/KR960016717B1/ko not_active Expired - Fee Related
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