JPS6337625B2 - - Google Patents
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は高圧滅菌可能な新規なダルベツコ変法
イーグル培地（以下、DME培地と称する）に関
する。 DME培地はアール・ダルベツコ（R.
Dulbecco）らによつて開発された培地であり、
公知のイーグルMEM中のアミノ酸濃度を約２倍
及びビタミン濃度を約４倍にすることにより培養
細胞の増殖に必要な栄養源を豊富にし、これに更
にグリシン、セリン、ピルビン酸及び鉄イオンを
添加した改良型のイーグルMEMであり、種々の
細胞の初代培養や単細胞培養を行う目的で広く使
用されている。特にDME培地は、細胞にウイル
スを感染させたのち血清を含まない培地に変えて
も細胞を長く維持できる培地として広く使用され
ている。 このDME培地は当初は液体培地であつたが、
その後製法の改良がなされ、現在は長期間保存可
能な粉末培地として提供されている。 しかしながら、当該粉末培地は、その使用に先
立つて溶解され滅菌処理されなければならない。
培地の滅菌法として、現在最も効果的かつ操作の
簡単な方法は高圧滅菌法である。しかし、従来の
DME培地は、これを高圧滅菌処理に付すと、細
胞増殖に対する支持力が著しく低下するので、細
菌過器による滅菌を余儀無くされていた。しか
しながら、細菌過器による滅菌法は、細菌効果
が不充分であると共に多くの手数と時間を要する
欠点があり、従来から、高圧滅菌可能なDME培
地の開発が所望されていた。 そこで、本発明者は斯る問題点を解決せんと鋭
意研究を行つた結果、当該培地の処方中の熱に対
して不安定なものを除去乃至は他のもので代替
し、かつ有機酸緩衝剤を含有せしめることによ
り、高圧滅菌処理を行つても細胞増殖に対する支
持力の低下のみられないDME培地が得られるこ
とを見出し、本発明を完成した。 すなわち、本発明はDME培地の処方中からＬ
―グルタミン及びＬ―シスチンを除去し、代りに
Ｌ―システイン並びに有機酸とその塩との組合せ
からなる有機酸緩衝剤を含有せしせた高圧滅菌型
DME培地を提供するものである。 本発明で使用される有機酸緩衝剤としては、PH
が4.25になるもの、例えば酢酸と酢酸ナトリウ
ム、コハク酸とコハク酸ナトリウム等が好まし
い。 本発明の高圧滅菌型DME培地の代表的処方
（以下、本発明培地粉末と称する）は次のとおり
である。 塩化ナトリウム 6400.0（mg） 塩化カリウム 400.0 塩化カルシウム 200.0 硫酸マグネシウム 97.7 リン酸二水素ナトリウム（無水） 108.0 硝酸第二鉄（九水塩） 0.1 ブドウ糖 1000.0 ピルビン酸ナトリウム 110.0 コハク酸 106.0 コハク酸ナトリウム（六水塩） 27.0 Ｌ―アルギニン塩酸塩 84.0 Ｌ―システイン塩酸塩（一水塩） 70.3 グリシン 30.0 Ｌ―ヒスチジン塩酸塩（一水塩） 42.0 Ｌ―イソロイシン 104.8 Ｌ―ロイシン 104.8 Ｌ―リジン塩酸塩 146.2 Ｌ―メチオニン 30.0 Ｌ―フエニルアラニン 66.0 Ｌ―セリン 42.0 Ｌ―スレオニン 95.2 Ｌ―トリプトフアン 16.0 Ｌ―チロシン二ナトリウム 89.5 Ｌ―バリン 93.6 重酒石酸コリン 7.2 葉酸 4.0 ニコチン酸アミド 4.0 パントテン酸カルシウム 4.0 ピリドキサール塩酸塩 4.0 リボフラビン 0.4 チアミン塩酸塩 4.0 ｉ―イノシトール 7.2 フエノールレツド 5.0 全量 9503.0 本発明高圧滅菌型DME培地は上記成分を常法
に従つて混和することにより製造される。尚
DME培地には一般に細胞の増殖を図るために10
％前後の血清を添加して使用するが、血清の添加
量が少ない場合、Ｌ―シスチンの代りにＬ―シス
テインを含有させた本発明培地の高圧滅菌に対す
る有利性は特に顕著である。 次に実施例を挙げて説明する。 実施例 １ DME培地粉末（市販品）10.0ｇを１の蒸
留水に溶解し、炭酸水素ナトリウム1.2ｇを加
えて完全に溶解させた。これをポアサイズ0.2μ
のフイルターで過滅菌して、DME培地（以
下、従来培地と称する）を得た。 本発明培地粉末9.5ｇを１の蒸留水に溶解
し、121℃で15分間高圧滅菌し、これに冷後、
溶解、過滅菌したＬ―グルタミン0.584ｇ及
び炭酸水素ナトリウム1.2ｇを加えて培地（本
発明培地と称する）を得た。 本発明培地粉末の処方中のＬ―システイン塩
酸塩・一水塩（70.3mg）の代りにＬ―シスチン
二塩酸塩（62.6mg）を加えたものを、と同様
に操作して培地（比較培地と称する）を得た。 上で得た３つの培地に新生子牛の血清を濃度が
２％になるように加え、次の条件下でヒト子宮ガ
ン細胞由来の細胞株Hela―S3の培養を行い、そ
の増殖を調べた。 φ6cmプラスチツクシヤーレ（培地量５ml）植
込細胞数５×104セル／Dish37℃、５％炭酸ガス。 その結果は第１図に示すとおりである。 実施例 ２ 実施例１の〜と同様にして調整した各培地
にヒト子宮ガン細胞由来の細胞株Hela―S3の培
養を行い、そのコロニー形成率を調べた。ただし
血清濃度は５％及び２％の場合について調べた。
各測定とも５枚のシヤーレにより調べた結果を次
表に示す。 【表】
イーグル培地（以下、DME培地と称する）に関
する。 DME培地はアール・ダルベツコ（R.
Dulbecco）らによつて開発された培地であり、
公知のイーグルMEM中のアミノ酸濃度を約２倍
及びビタミン濃度を約４倍にすることにより培養
細胞の増殖に必要な栄養源を豊富にし、これに更
にグリシン、セリン、ピルビン酸及び鉄イオンを
添加した改良型のイーグルMEMであり、種々の
細胞の初代培養や単細胞培養を行う目的で広く使
用されている。特にDME培地は、細胞にウイル
スを感染させたのち血清を含まない培地に変えて
も細胞を長く維持できる培地として広く使用され
ている。 このDME培地は当初は液体培地であつたが、
その後製法の改良がなされ、現在は長期間保存可
能な粉末培地として提供されている。 しかしながら、当該粉末培地は、その使用に先
立つて溶解され滅菌処理されなければならない。
培地の滅菌法として、現在最も効果的かつ操作の
簡単な方法は高圧滅菌法である。しかし、従来の
DME培地は、これを高圧滅菌処理に付すと、細
胞増殖に対する支持力が著しく低下するので、細
菌過器による滅菌を余儀無くされていた。しか
しながら、細菌過器による滅菌法は、細菌効果
が不充分であると共に多くの手数と時間を要する
欠点があり、従来から、高圧滅菌可能なDME培
地の開発が所望されていた。 そこで、本発明者は斯る問題点を解決せんと鋭
意研究を行つた結果、当該培地の処方中の熱に対
して不安定なものを除去乃至は他のもので代替
し、かつ有機酸緩衝剤を含有せしめることによ
り、高圧滅菌処理を行つても細胞増殖に対する支
持力の低下のみられないDME培地が得られるこ
とを見出し、本発明を完成した。 すなわち、本発明はDME培地の処方中からＬ
―グルタミン及びＬ―シスチンを除去し、代りに
Ｌ―システイン並びに有機酸とその塩との組合せ
からなる有機酸緩衝剤を含有せしせた高圧滅菌型
DME培地を提供するものである。 本発明で使用される有機酸緩衝剤としては、PH
が4.25になるもの、例えば酢酸と酢酸ナトリウ
ム、コハク酸とコハク酸ナトリウム等が好まし
い。 本発明の高圧滅菌型DME培地の代表的処方
（以下、本発明培地粉末と称する）は次のとおり
である。 塩化ナトリウム 6400.0（mg） 塩化カリウム 400.0 塩化カルシウム 200.0 硫酸マグネシウム 97.7 リン酸二水素ナトリウム（無水） 108.0 硝酸第二鉄（九水塩） 0.1 ブドウ糖 1000.0 ピルビン酸ナトリウム 110.0 コハク酸 106.0 コハク酸ナトリウム（六水塩） 27.0 Ｌ―アルギニン塩酸塩 84.0 Ｌ―システイン塩酸塩（一水塩） 70.3 グリシン 30.0 Ｌ―ヒスチジン塩酸塩（一水塩） 42.0 Ｌ―イソロイシン 104.8 Ｌ―ロイシン 104.8 Ｌ―リジン塩酸塩 146.2 Ｌ―メチオニン 30.0 Ｌ―フエニルアラニン 66.0 Ｌ―セリン 42.0 Ｌ―スレオニン 95.2 Ｌ―トリプトフアン 16.0 Ｌ―チロシン二ナトリウム 89.5 Ｌ―バリン 93.6 重酒石酸コリン 7.2 葉酸 4.0 ニコチン酸アミド 4.0 パントテン酸カルシウム 4.0 ピリドキサール塩酸塩 4.0 リボフラビン 0.4 チアミン塩酸塩 4.0 ｉ―イノシトール 7.2 フエノールレツド 5.0 全量 9503.0 本発明高圧滅菌型DME培地は上記成分を常法
に従つて混和することにより製造される。尚
DME培地には一般に細胞の増殖を図るために10
％前後の血清を添加して使用するが、血清の添加
量が少ない場合、Ｌ―シスチンの代りにＬ―シス
テインを含有させた本発明培地の高圧滅菌に対す
る有利性は特に顕著である。 次に実施例を挙げて説明する。 実施例 １ DME培地粉末（市販品）10.0ｇを１の蒸
留水に溶解し、炭酸水素ナトリウム1.2ｇを加
えて完全に溶解させた。これをポアサイズ0.2μ
のフイルターで過滅菌して、DME培地（以
下、従来培地と称する）を得た。 本発明培地粉末9.5ｇを１の蒸留水に溶解
し、121℃で15分間高圧滅菌し、これに冷後、
溶解、過滅菌したＬ―グルタミン0.584ｇ及
び炭酸水素ナトリウム1.2ｇを加えて培地（本
発明培地と称する）を得た。 本発明培地粉末の処方中のＬ―システイン塩
酸塩・一水塩（70.3mg）の代りにＬ―シスチン
二塩酸塩（62.6mg）を加えたものを、と同様
に操作して培地（比較培地と称する）を得た。 上で得た３つの培地に新生子牛の血清を濃度が
２％になるように加え、次の条件下でヒト子宮ガ
ン細胞由来の細胞株Hela―S3の培養を行い、そ
の増殖を調べた。 φ6cmプラスチツクシヤーレ（培地量５ml）植
込細胞数５×104セル／Dish37℃、５％炭酸ガス。 その結果は第１図に示すとおりである。 実施例 ２ 実施例１の〜と同様にして調整した各培地
にヒト子宮ガン細胞由来の細胞株Hela―S3の培
養を行い、そのコロニー形成率を調べた。ただし
血清濃度は５％及び２％の場合について調べた。
各測定とも５枚のシヤーレにより調べた結果を次
表に示す。 【表】
第１図は高圧滅菌した本発明培地に血清２％を
添加したものにおけるHeLa―S3株の増殖状態を
示す。
添加したものにおけるHeLa―S3株の増殖状態を
示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ダルベツコ変法イーグル培地の処方中からＬ
―グルタミン及びＬ―シスチンを除去し、代りに
Ｌ―システイン並びに有機酸とその塩との組合せ
からなる有機酸緩衝剤を含有せしめたことを特徴
とする高圧滅菌型ダルベツコ変法イーグル培地。 ２ 有機酸緩衝剤がコハク酸とコハク酸ナトリウ
ムとの組合せである特許請求の範囲第１項記載の
高圧滅菌型ダルベツコ変法イーグル培地。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56084789A JPS57202288A (en) | 1981-06-02 | 1981-06-02 | Dulbecco modified eagle medium of high-pressure sterilization type |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56084789A JPS57202288A (en) | 1981-06-02 | 1981-06-02 | Dulbecco modified eagle medium of high-pressure sterilization type |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS57202288A JPS57202288A (en) | 1982-12-11 |
| JPS6337625B2 true JPS6337625B2 (ja) | 1988-07-26 |
Family
ID=13840460
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56084789A Granted JPS57202288A (en) | 1981-06-02 | 1981-06-02 | Dulbecco modified eagle medium of high-pressure sterilization type |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS57202288A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01303225A (ja) * | 1988-05-28 | 1989-12-07 | Daifuku Co Ltd | 物品仕分け設備における容器供給装置 |
-
1981
- 1981-06-02 JP JP56084789A patent/JPS57202288A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01303225A (ja) * | 1988-05-28 | 1989-12-07 | Daifuku Co Ltd | 物品仕分け設備における容器供給装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS57202288A (en) | 1982-12-11 |
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