JPS6337624B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は高圧滅菌可能な新規なRPMI1640培地
に関する。

RPMI1640培地はジヨウジ・イー・モーア
（George E.Moore）によつて開発された浮遊培
養用培地であり、マウス、ヒトの白血病細胞の初
代培養及び株継代維持に画期的な成果をあげたも
のであるが、この培地は白血病以外の細胞も浮遊
培養することができるので、最近は基礎及び臨床
の分野で広く使用されている。

このRPMI1640培地は当初は液体培地であつた
が、その後改良がなされ、現在は長期間保存可能
な粉末培地として提供されている。

しかしながら、当該粉末培地は、その使用に先
立つて滅菌処理されなければならない。培地の滅
菌法として、現在最も効果的かつ操作の簡単な方
法は高圧滅菌法である。しかし、従来の
RPMI1640培地は、これを高圧滅菌処理に付す
と、生体組織に対する支持力が著しく低下するの
で、細菌過器による滅菌を余儀無くされてい
た。しかしながら、細菌過器による滅菌法は、
滅菌効果が不充分であると共に多くの手数と時間
を要する欠点があり、従来から、高圧滅菌可能な
RPMI1640培地の開発が所望されていた。

そこで、本発明者は斯る問題点を解決せんと鋭
意研究を行つた結果、当該培地の処方中の熱に対
して不安定なものを除去乃至は他のもので代替
し、かつ有機酸緩衝剤を含有せしめることによ
り、高圧滅菌処理を行つても生体組織に対する支
持力の低下のみられないRPMI1640培地が得られ
ることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、RPMI1640培地の処方中
からＬ―グルタミン及びシスチンを除去し、代り
にシステイン並びに有機酸とその塩との組合せか
らなる有機酸緩衝剤を含有せしめた高圧滅菌型
RPMI1640培地を提供するものである。

本発明で使用される有機酸緩衝剤としては、PH
が４〜4.5になるもの、例えば酢酸と酢酸ナトリ
ウム、コハク酸とコハク酸ナトリウム等が好まし
い。

本発明の高圧滅菌型RPMI1640培地の代表的処
方（以下、本発明培地粉末と称する）は次のとお
りである。

Ｌ―アルギン塩酸塩 240.0（mg） Ｌ―アスパラギン（一水塩） 56.8 〃 Ｌ―アスパラギン酸 20.0 〃 Ｌ―システイン塩酸塩（一水塩） 72.9 〃 Ｌ―グルタミン 20.0 〃 グルタチオン 1.0 〃 グリシン 10.0 〃 Ｌ―ヒスチジン塩酸塩（一水塩） 20.3 〃 Ｌ―ヒドロキシプロリン 20.0 〃 Ｌ―イソロイシン 50.0 〃 Ｌ―ロイシン 50.0 〃 Ｌ―リジン塩酸塩 40.0 〃 Ｌ―メチオニン 15.0 〃 Ｌ―フエニルアラニン 15.0 〃 Ｌ―プロリン 20.0 〃 Ｌ―セリン 30.0 〃 Ｌ―スレオニン 20.0 〃 Ｌ―トリプトフアン 20.0 〃 Ｌ―チロシン 20.0 〃 Ｌ―バリン 20.0 〃 Ｄ―ビオチン 0.2 〃 Ｄ―パントテン酸カルシウム 0.25 〃 塩化コリン 3.0 〃 葉 酸 1.0 〃 ｉ―イノシトール 35.0 〃 ニコチン酸アミド 1.0 〃 パラアミノ安息香酸 1.0 〃 塩酸ピリドキシン 1.0 〃 リボフラピン 0.2 〃 塩酸チアミン 1.0 〃 シアノコバラミン 0.005 〃 コハク酸ナトリウム 164.0 〃 コハク酸 46.0 〃 塩化ナトリウム 6000.0 〃 塩化カリウム 400.0 〃 リン酸二水素ナトリウム 677.0 〃 硫酸マグネシウム 48.8 〃 硝酸カルシウム 69.5 〃 Ｄ―グルコース 2000.0 〃 フエノールレツド 5.0 〃 全 量 10199955 本発明高圧滅菌型RPMI1640培地は上記成分を
常法に従つて混和することにより製造される。尚
RPMI1640培地には一般に細胞の発育を増強する
ために数％の血清を添加して使用されるが、血清
を添加した場合、シスチンの代りにシステインを
含有させた本発明培地の高圧滅菌に対する有利性
は特に顕著である。

次に実施例を挙げて説明する。

実施例 １ RPMI1640培地粉末（市販品）10.4ｇを１
の蒸留水に溶解し、炭酸水素ナトリウム1.2ｇ
を加えて完全に溶解させた。これをボアサイズ
0.2μのフイルターで過滅菌して、RPMI1640
培地（以下下、従来培地と称する）を得た。

本発明培地粉末10.2ｇを１の蒸留水を溶解
し、121℃で15分間高圧滅菌し、これに冷後、
溶解、過滅菌したＬ―グルタミン0.3ｇ及び
炭酸水素ナトリウム1.9ｇを加えて培地（本発
明培地と称する）を得た。

本発明培地粉末の処方中のＬ―システイン塩
酸塩・一水塩（72.9mg）の代りにＬ―シスチン
２塩酸塩（65.0mg）を加えたものを、と同様
に操作して培地（比較培地と称する）を得た。

上で得た３つの培地に濃度が２％、５％になる
ように血清を加え、次の条件下でマウス白血病由
来の細胞株L5178Yの培養を行い、その増殖を調
べた。

φ6cmプラスチツクシヤーレ 植込細胞数 ５×10⁴セル／ml 37℃、５％炭酸ガス その結果は第１図（血清５％添加）及び第２図
（血清２％添加）のとおりである。

実施例 ２ 実施例１の〜と同様にして調整した各培地
に濃度が５％になるように血清を加え、これに実
施例１と同様にしてヒトのガン細胞由来の細胞株
katoを培養し、その増殖を調べた。その結果
は第３図のとおりである。

以上の実験から明らかな如く、本発明の培地は
高圧滅菌しても過滅菌した従来のRPMI1640培
地とほぼ同等の生体組織の発育支持力を有する。
特にＬ―シスチンのＬ―システインへの変更には
顕著な効果が認められる。

【図面の簡単な説明】

第１図は高圧滅菌した本発明培地に血清５％を
添加したものにおけるL5178Y株の増殖状態を、
第２図は同培地に血清２％を添加したものにおけ
るL5178Y株の増殖状態を、第３図は同培地に血
清５％を添加したものにおけるkatoの増殖状
態を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ RPMI1640培地の処方中からＬ―グルタミン
   及びシスチンを除去し、代りにシステイン並びに
   有機酸とその塩との組合せからなる有機酸緩衝剤
   を含有せしめたことを特徴とする高圧滅菌型
   RPMI1640培地。 ２ 有機酸緩衝剤がコハク酸とコハク酸ナトリウ
   ムとの組合せである特許請求の範囲第１項記載の
   高圧滅菌型RPMI1640培地。