JPS633785A - 細胞の製造 - Google Patents
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- JPS633785A JPS633785A JP62153209A JP15320987A JPS633785A JP S633785 A JPS633785 A JP S633785A JP 62153209 A JP62153209 A JP 62153209A JP 15320987 A JP15320987 A JP 15320987A JP S633785 A JPS633785 A JP S633785A
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- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/38—Pseudomonas
- C12R2001/40—Pseudomonas putida
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
３、〔発明の詳細な説明〕
本発明は環状ジヒドロキシ化合物製造用の生化学的方法
において有用である細菌細胞の製造に関するものである
。
において有用である細菌細胞の製造に関するものである
。
いくつかのシス１，２−ジヒドロキシシクロへキサジエ
ンは新規ポリマーの製造において有用である。我々の欧
州特許明細書Ａ７６６０６において。
ンは新規ポリマーの製造において有用である。我々の欧
州特許明細書Ａ７６６０６において。
我々にシュードモナス・プチダ種の突然変異体。
特にＰ、プチダ菌株の突然変異体（ＮＣＩＢ１１７６７
お工びＮＣＩＢ１１６８０ ＞ｙ：！：使って芳香族化
合物からその種のジヒドロキシシクロへキサジエン？製
造する方法ｌ開示している。この方法に含まれる反応を
触媒する酵素は芳香族ジオキシゲナーゼであり、こ八は
ある種の芳香族イと金物と酸素との間の反応、例えば、
ベンゼンと酸素の間の反応を触媒する。
お工びＮＣＩＢ１１６８０ ＞ｙ：！：使って芳香族化
合物からその種のジヒドロキシシクロへキサジエン？製
造する方法ｌ開示している。この方法に含まれる反応を
触媒する酵素は芳香族ジオキシゲナーゼであり、こ八は
ある種の芳香族イと金物と酸素との間の反応、例えば、
ベンゼンと酸素の間の反応を触媒する。
Ｐ、プチダＮＣＩＢ１１７６７およびＮＣＩＢ１１６８
０のような菌株が芳香族と一緒に養われるとき、ジヒド
ロキシシクロへキサジエン１と合物は、そ几らが中間的
代諭の生成物ヘカテコールを経て急速にさらに酸１とさ
几るので、蓄積することがない。しかし、我々の欧州特
許明細書７６６０６においては、これらの微生物の突然
変異体であってジヒドロキシシクロへキサジエンｔぼ北
することができず、従ってその結果、その種の突然変異
体を芳香族基質へ露゛出するときにジシクロへキサジエ
ンが蓄積される突然変異体、がいかにして生成されるか
が記述されている。これらの突然変異体のいくつかハ、
芳香族ｔジヒドロキシシクロへキサジエンへ転＋１：、
するのに必要とｇｎる芳香族ジオキシゲナーゼの活性ｌ
誘発させるべき場合には、ベンゼンまたはトルエンの存
在下において増殖させねばならない。突然変異体のうち
のあるものは、ジヒドロキシシクロへキサジエンの生成
ｔひきおこ丁酪素について構成性（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔ
ｉｖｅ） である（「構成性菌株（ｃｏｎｓｔｉｔｕ
ｔｉｖｅ ５ｔｒａｉｎ月）。これらの構成性菌株はジ
ヒドロキシシクロへキサジエンを生ｇさせるためのベン
ゼンまたはトルエンニよる前板っての酵素誘導を必要と
しない。
０のような菌株が芳香族と一緒に養われるとき、ジヒド
ロキシシクロへキサジエン１と合物は、そ几らが中間的
代諭の生成物ヘカテコールを経て急速にさらに酸１とさ
几るので、蓄積することがない。しかし、我々の欧州特
許明細書７６６０６においては、これらの微生物の突然
変異体であってジヒドロキシシクロへキサジエンｔぼ北
することができず、従ってその結果、その種の突然変異
体を芳香族基質へ露゛出するときにジシクロへキサジエ
ンが蓄積される突然変異体、がいかにして生成されるか
が記述されている。これらの突然変異体のいくつかハ、
芳香族ｔジヒドロキシシクロへキサジエンへ転＋１：、
するのに必要とｇｎる芳香族ジオキシゲナーゼの活性ｌ
誘発させるべき場合には、ベンゼンまたはトルエンの存
在下において増殖させねばならない。突然変異体のうち
のあるものは、ジヒドロキシシクロへキサジエンの生成
ｔひきおこ丁酪素について構成性（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔ
ｉｖｅ） である（「構成性菌株（ｃｏｎｓｔｉｔｕ
ｔｉｖｅ ５ｔｒａｉｎ月）。これらの構成性菌株はジ
ヒドロキシシクロへキサジエンを生ｇさせるためのベン
ゼンまたはトルエンニよる前板っての酵素誘導を必要と
しない。
しかし、突然変異体の両タイプともにジヒドロキシシク
ロへキサジエンを生成きせるのに用いるときに欠点ンも
っている。微生物増殖中にベンゼンまたはトルエンある
いは類似酵素基質を用いることに、これらの１ｔＳ合物
の揮発性、可燃性、および貧弱な水溶性のｔめに、常に
実施可能であるわけではない。その上、ジヒドロキシシ
クロへキサジエン生成物に誘導期間中に生じ、１０ｒｎ
Ｍ７こえろ濃度で存在するかもしれず、従って潜在的に
。
ロへキサジエンを生成きせるのに用いるときに欠点ンも
っている。微生物増殖中にベンゼンまたはトルエンある
いは類似酵素基質を用いることに、これらの１ｔＳ合物
の揮発性、可燃性、および貧弱な水溶性のｔめに、常に
実施可能であるわけではない。その上、ジヒドロキシシ
クロへキサジエン生成物に誘導期間中に生じ、１０ｒｎ
Ｍ７こえろ濃度で存在するかもしれず、従って潜在的に
。
同一培養によってその後生成されるがもし几ない異なる
ジヒドロキシシクロへキサジエンを汚染する。これらの
誘導物質の存在下における増殖にまた。ジヒドロキシシ
クロへキサジエンを際化し従ってそれの上で増殖する能
カン再ひ獲得し九復珊変異体菌株にとって好適である。
ジヒドロキシシクロへキサジエンを汚染する。これらの
誘導物質の存在下における増殖にまた。ジヒドロキシシ
クロへキサジエンを際化し従ってそれの上で増殖する能
カン再ひ獲得し九復珊変異体菌株にとって好適である。
こｎｒｚ連続培養において特におこりや丁い。構成性突
然変異体に連続培養における成長にとって理想的ではな
く。
然変異体に連続培養における成長にとって理想的ではな
く。
なぜならば、その糧の培養においては構成的表現型が失
なわれる傾向があるからである。
なわれる傾向があるからである。
本発明により、我々は芳香族化合物または置換芳香族化
合物ｔ１，２−ジヒドロキシ−シクロヘキサ−３，５−
ジエン環ン含む相当環状ジヒドロキシ化合物へ転１とす
ることができる酵素ｌもクシュードモナス・プチダの細
胞の装造方法ｌ提供するが、その方法は、芳香族１６合
物または置換芳香族化合物を相当する環状ジヒドロキシ
化合物へ転化し得る酵素゛の誘導ンひきおこしかつ自ら
は上記酵素のための基質ではない誘導物質（ベンゼンま
たはトルエン以外の）を含む培養培地の中で、シュード
モナス・プチダ（以後で定義するとおりの）の突然変異
体菌株の細胞ン増殖させることから成る。
合物ｔ１，２−ジヒドロキシ−シクロヘキサ−３，５−
ジエン環ン含む相当環状ジヒドロキシ化合物へ転１とす
ることができる酵素ｌもクシュードモナス・プチダの細
胞の装造方法ｌ提供するが、その方法は、芳香族１６合
物または置換芳香族化合物を相当する環状ジヒドロキシ
化合物へ転化し得る酵素゛の誘導ンひきおこしかつ自ら
は上記酵素のための基質ではない誘導物質（ベンゼンま
たはトルエン以外の）を含む培養培地の中で、シュード
モナス・プチダ（以後で定義するとおりの）の突然変異
体菌株の細胞ン増殖させることから成る。
本発明の方法において生成される細胞は、我々の欧州特
許７６６０６Ｂの方法により、あるいに文献（例えば、
ギブソｙＤ、Ｔ、らの、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。
許７６６０６Ｂの方法により、あるいに文献（例えば、
ギブソｙＤ、Ｔ、らの、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。
ヱ、１９７０．１６２６−１６３０ ）に記載の別の方
法により、芳香族から環状ジヒドロキシ化合物を製造す
るための微生物触媒として使用してよい。
法により、芳香族から環状ジヒドロキシ化合物を製造す
るための微生物触媒として使用してよい。
本発明の方法によって生皮すれる微生物細胞は広い範囲
の芳香族および置換芳香族化合物を相当する環状ジヒド
ロキシ化合物へ転１とするのに使用してよい。好ましく
は、芳香族または置換芳香族化合物は単環式であり、し
かし、複式環、例えばナフタレンおよびビフェニルから
成っていてもよい。置換芳香族化合物は１個まｔは１個
以上の置換基をもつ。可能性のある置換基はアルキル基
、例えばメチルまたはエチル、ビニル基、例えば窒素、
硫黄またはハロゲン原子を含む有機基、および、ハライ
ド基を含む。本発明の方法によって虫取される細胞によ
って転化され得る特定の芳香族および置換芳香族化合物
はベンゼン（シス−１，２−ジヒドロキシシクロヘキサ
−３，５−ジエンへ転Ｉｔｓ）、クロロベンゼン、トル
エン、フルオロベンゼン、ベンジルアルコールおよびナ
フタレンン含む。
の芳香族および置換芳香族化合物を相当する環状ジヒド
ロキシ化合物へ転１とするのに使用してよい。好ましく
は、芳香族または置換芳香族化合物は単環式であり、し
かし、複式環、例えばナフタレンおよびビフェニルから
成っていてもよい。置換芳香族化合物は１個まｔは１個
以上の置換基をもつ。可能性のある置換基はアルキル基
、例えばメチルまたはエチル、ビニル基、例えば窒素、
硫黄またはハロゲン原子を含む有機基、および、ハライ
ド基を含む。本発明の方法によって虫取される細胞によ
って転化され得る特定の芳香族および置換芳香族化合物
はベンゼン（シス−１，２−ジヒドロキシシクロヘキサ
−３，５−ジエンへ転Ｉｔｓ）、クロロベンゼン、トル
エン、フルオロベンゼン、ベンジルアルコールおよびナ
フタレンン含む。
本発明の方法によって生皮される細胞に一般式ンもつ化
合物ｔつくる転化において使用して工〈。
合物ｔつくる転化において使用して工〈。
式中、Ｒｉ−Ｃトリハライド、−〇アルキルあるいに一
〇フェニル基であり、これに我々の分割特許願申におい
て特許請求されており、特定的には、Ｒが−ＣＦ、であ
る＋Ｃ合物である。
〇フェニル基であり、これに我々の分割特許願申におい
て特許請求されており、特定的には、Ｒが−ＣＦ、であ
る＋Ｃ合物である。
本発明の方法において用いられろ突然変異体菌株にシュ
ードモナス・プチダの菌株であり：（ａ） その中で
、芳香族または置換芳香族化合物Ｚ相当するジヒドロキ
シ化合物へ転ＩＩＳできる酵素が誘導されることができ
。
ードモナス・プチダの菌株であり：（ａ） その中で
、芳香族または置換芳香族化合物Ｚ相当するジヒドロキ
シ化合物へ転ＩＩＳできる酵素が誘導されることができ
。
（ｂ） そｎｈベンゼンまたはトルエン上で増殖でき
ず。
ず。
（Ｃ） そｎはベンゼンま７’ｊｉ）ルエン上で増殖
できるＰ、プチダの菌株から誘導される。
できるＰ、プチダの菌株から誘導される。
好ましクハ、この突然変異菌株は、英国スコツトランド
、了バーディーンの、ＮａｔｉｏｎａｌＣｏｌｌｅｃｔ
ｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｂａｃｔｅ
ｒｅｒｉａ。
、了バーディーンの、ＮａｔｉｏｎａｌＣｏｌｌｅｃｔ
ｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｂａｃｔｅ
ｒｅｒｉａ。
Ｔｏｒｒｅｙ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ ５ｔａｔｉｏｎ に
おいて保存されｔＰ、プチダ菌株ＮＣＩＢ１１６８０ま
たはＮＣＩＢ１１７６７から誘導される。
おいて保存されｔＰ、プチダ菌株ＮＣＩＢ１１６８０ま
たはＮＣＩＢ１１７６７から誘導される。
本発明の方法において誘導物質化合物として適当である
化合物は、シクロヘキサン、シクロヘキサノール、シス
１，２−ジヒドロキシ−シクロヘキサ−３，５−ジエン
、フラン、チオフェン、ベンゾフラン、シクロ−へキサ
ジエン、クマリンおよび１．３．５−トリメチルベンゼ
ンン含む。しかし最も有効な誘導物質１と合物、従って
好ましく用いられろものは、ピリジンおよびいくつかの
関連化合物、轡に、ピリジンおよび置換ピリジンであり
、特別に適当である化合物はピリジンおよびメチル置換
ピリジン、例えばα−ピコリンおよびβ−ピコリンであ
る。好ましい誘導物質化合物は水と混和し、限定された
揮発性と可燃性をもっている。
化合物は、シクロヘキサン、シクロヘキサノール、シス
１，２−ジヒドロキシ−シクロヘキサ−３，５−ジエン
、フラン、チオフェン、ベンゾフラン、シクロ−へキサ
ジエン、クマリンおよび１．３．５−トリメチルベンゼ
ンン含む。しかし最も有効な誘導物質１と合物、従って
好ましく用いられろものは、ピリジンおよびいくつかの
関連化合物、轡に、ピリジンおよび置換ピリジンであり
、特別に適当である化合物はピリジンおよびメチル置換
ピリジン、例えばα−ピコリンおよびβ−ピコリンであ
る。好ましい誘導物質化合物は水と混和し、限定された
揮発性と可燃性をもっている。
好ましくは誘導物質化合物は培養培地中Ｖｃｏ、ｏｉｍ
Ｍから２飾（の範囲の濃度で含ま几る。
Ｍから２飾（の範囲の濃度で含ま几る。
本発明の方法における突然変異体としてきわめて適当で
ある菌株に、シュードモナス・プチダＮＣＩＢ１１６８
０−！たμ好喧しくはシュードモナス・プチダＮＣＩＢ
１１７６７ Ｙ突然変異発生条件下で処理して、欧州特
許４７６６０６８に記載のとおりに単独の増殖用炭素源
としてトルエンまたげベンゼン？もはや利用できない突
然変異株を得ることによってつくってもよい。
ある菌株に、シュードモナス・プチダＮＣＩＢ１１６８
０−！たμ好喧しくはシュードモナス・プチダＮＣＩＢ
１１７６７ Ｙ突然変異発生条件下で処理して、欧州特
許４７６６０６８に記載のとおりに単独の増殖用炭素源
としてトルエンまたげベンゼン？もはや利用できない突
然変異株を得ることによってつくってもよい。
本発明の方法において、突然変異菌株の細胞に連続式９
回分式あるいに供給式・バッチ（ｆｅｄ−ｂａｔｃｈ）
式の技法として、便利な増殖培地（銹導物質＋ＦＳ合物
を含むよう変性されている）の中で増殖させてよい。Ｃ
の方法に連続式培養において細胞ケ増殖させるのに最も
価値がある。
回分式あるいに供給式・バッチ（ｆｅｄ−ｂａｔｃｈ）
式の技法として、便利な増殖培地（銹導物質＋ＦＳ合物
を含むよう変性されている）の中で増殖させてよい。Ｃ
の方法に連続式培養において細胞ケ増殖させるのに最も
価値がある。
使用する増殖培地にいずれかの適当な炭素源と鉱物塩水
溶液とから成っていてよい。炭素源に例えば、 酢ｍ
、グルコースまたはエタノールであってよい。炭素源ａ
度に広い範囲にわたって変えることができるが、−膜内
には１％（１！量／重合）と２０％（重ｔ／重量）の間
にある。嶽素ま７ｃに酸素含有ガスに増殖期間中存在せ
ねばならない。
溶液とから成っていてよい。炭素源に例えば、 酢ｍ
、グルコースまたはエタノールであってよい。炭素源ａ
度に広い範囲にわたって変えることができるが、−膜内
には１％（１！量／重合）と２０％（重ｔ／重量）の間
にある。嶽素ま７ｃに酸素含有ガスに増殖期間中存在せ
ねばならない。
増殖期間中の培地温度にかなり変ってもよいが、通常は
２５℃から６５℃の範囲にある。培地のｐＨに増殖中、
５．５から８．０の範囲、好ましく Ｈ６，５から７５
の範囲に保たれる。培養の大きさにかなりの程度に１例
えば１．５１と５００１の間で変ることができる。
２５℃から６５℃の範囲にある。培地のｐＨに増殖中、
５．５から８．０の範囲、好ましく Ｈ６，５から７５
の範囲に保たれる。培養の大きさにかなりの程度に１例
えば１．５１と５００１の間で変ることができる。
増殖期間に続いて、細胞は欧州特許／１６７６６０６Ｂ
に記載のとおりに転１ヒを実施するのに使用することが
できる。
に記載のとおりに転１ヒを実施するのに使用することが
できる。
本発明の方法において生成される微生物細胞を使りて生
成させることができる他の環状ジヒドロキシＩｔｓ合物
のうちのあるものは、薬、除草剤、および殺虫剤の製造
用中間体として、あるいは例えばある種の天然産物が合
成されろキラルシンソン（ｃｈｉｒａｌ ５ｙｎｔｈｏ
ｎ） として有用であるフェノール類およびカテコー
ル類Ｙｇ造するのに用いることができる。
成させることができる他の環状ジヒドロキシＩｔｓ合物
のうちのあるものは、薬、除草剤、および殺虫剤の製造
用中間体として、あるいは例えばある種の天然産物が合
成されろキラルシンソン（ｃｈｉｒａｌ ５ｙｎｔｈｏ
ｎ） として有用であるフェノール類およびカテコー
ル類Ｙｇ造するのに用いることができる。
突然変異体の調装および実施例の中で使用する増殖培地
１、ハクショップ拳エルストンの培地
Ｉｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇＬ１９６０゜２３巻、 ４５７−４６９頁に
記載のとおりのもの、２、ルリア液状培地 Ｊ、Ｈ，ミラーによる＠Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｅｓ”（１９７２年
、コールド・スプリング・ハーバ−研究所（二ニーヨー
ク）発行〕の中で記載のとおり。
ｉｏｌｏｇＬ１９６０゜２３巻、 ４５７−４６９頁に
記載のとおりのもの、２、ルリア液状培地 Ｊ、Ｈ，ミラーによる＠Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｅｓ”（１９７２年
、コールド・スプリング・ハーバ−研究所（二ニーヨー
ク）発行〕の中で記載のとおり。
ア液状培地中で初期指数的成長相まで増殖させた。
細胞ン遠心分離によって収獲し、１ｍ、９ＯＮ−メチル
−Ｎ／−二トローＮ−二トロソーグアニジン（ＮＴＧ）
Ｙ含むｐ Ｈ５，５の２５ミリモル濃度のクエン酸−ク
エン酸ナトリワム緩衝液の２５ｆｆｉｒ中で、乾燥細胞
重量０．２ｆｌ／ｌの濃度で懸濁させた。４５分後６０
℃において、細胞を遠心分離によって収穫シ、バクショ
ップ・エルストン培地で以て２回洗滌し、次に、この培
地中で一晩、０．３％（重量／容積）のピルビン酸ナト
リウムχ含むときに３０℃において増殖させ友。連続稀
釈を施こしたのち、細胞Ｙ０．３ミリモル濃度のピルビ
ン酸ナトリクムン含むバクショップ・エルストン培地寒
天上に置き、管壜中で０．５Ｒｔのベンゼンを各々含有
する１１のペイント缶（ｐａｉｎｔ ｔｉｎ）の中で保
温した。６口径６０℃において１４４個の将来性のある
突然変異体、丁なわち、０．５ｉｎより小さい直径のコ
ロニーを抜出し、０．２％（重量／容積）ピルビン酸ナ
トリウムのバクショップ・エルストン培地寒天上で再増
殖させｔｏ こ几らの突然変異体の９０個’ａ’、２６０ｎｒｎにお
いて吸収をもつ１ｔＳ合物をベンゼンからつくるために
液状培養において選別した。２６０ナノメートルにおい
て６７の最大吸収をもつ上澄液を与えた一つの突然変異
体を以後に便宜上突然変異体菌株Ｂとよぶ。
−Ｎ／−二トローＮ−二トロソーグアニジン（ＮＴＧ）
Ｙ含むｐ Ｈ５，５の２５ミリモル濃度のクエン酸−ク
エン酸ナトリワム緩衝液の２５ｆｆｉｒ中で、乾燥細胞
重量０．２ｆｌ／ｌの濃度で懸濁させた。４５分後６０
℃において、細胞を遠心分離によって収穫シ、バクショ
ップ・エルストン培地で以て２回洗滌し、次に、この培
地中で一晩、０．３％（重量／容積）のピルビン酸ナト
リウムχ含むときに３０℃において増殖させ友。連続稀
釈を施こしたのち、細胞Ｙ０．３ミリモル濃度のピルビ
ン酸ナトリクムン含むバクショップ・エルストン培地寒
天上に置き、管壜中で０．５Ｒｔのベンゼンを各々含有
する１１のペイント缶（ｐａｉｎｔ ｔｉｎ）の中で保
温した。６口径６０℃において１４４個の将来性のある
突然変異体、丁なわち、０．５ｉｎより小さい直径のコ
ロニーを抜出し、０．２％（重量／容積）ピルビン酸ナ
トリウムのバクショップ・エルストン培地寒天上で再増
殖させｔｏ こ几らの突然変異体の９０個’ａ’、２６０ｎｒｎにお
いて吸収をもつ１ｔＳ合物をベンゼンからつくるために
液状培養において選別した。２６０ナノメートルにおい
て６７の最大吸収をもつ上澄液を与えた一つの突然変異
体を以後に便宜上突然変異体菌株Ｂとよぶ。
本発明に以下の実施例によって例証さｎる：実施例１
本実施例は、ベンゼンおよびトルエンをベンゼンシス−
グリコール（シス１，２−ジヒドロキクシ９口へ１−−
３．５− ジエン）およヒドルエンシス−りＩＪコール
（シスｉ＊２−ジヒドロキシー３−メチルシクロヘキサ
−３，５−ジエン）へそｎぞ几転化する論議中の酵素に
対する基質でないイし合物のある範囲のものｔ使って、
本発明の方法による突然変異体Ｂ中での芳香族酸化の誘
発を例証するものである。
グリコール（シス１，２−ジヒドロキクシ９口へ１−−
３．５− ジエン）およヒドルエンシス−りＩＪコール
（シスｉ＊２−ジヒドロキシー３−メチルシクロヘキサ
−３，５−ジエン）へそｎぞ几転化する論議中の酵素に
対する基質でないイし合物のある範囲のものｔ使って、
本発明の方法による突然変異体Ｂ中での芳香族酸化の誘
発を例証するものである。
突然変異体ＢＹ、０．３％（重量／容積）のピルビン酸
ナトリウムと最終濃度１ｍＭの可能性のある誘導物質化
合物のある範囲のうちの一つとを含む５０１１！／のバ
クショップ・エルストン培地の５０ｄの中で、６０℃に
おいて一晩増殖させ几。増殖後、各培養株を遠心分離に
よって収獲し、０．４％ＣＭ量／容積）のエタノールを
含むｐＨ７，８の燐酸塩緩衝液のｌ０ＪＩＪ？の中で乾
燥重量０．５ｇ／ｌの濃度へ懸濁させた。各フラスコの
中央のくぼみ（ｗｅｌｌ）の中に０．５縦のトルエンを
入れ、フラスコ’Ｉ’ｍとうしながら３０℃で保温し九
〇 １８時間後、各フラスコ中のトルエンシス−クリコ
ール生ｇ−Ｊｉ’Ｙ測定した（表１）。潜在的誘導物質
に、ピルビン際単独上ｔｔは誘導物質としてのトルエン
と一緒で、誇導質を存在させずに増殖させた細胞におい
て見らｎる量エリも著しく多食のトルエンシス−グリコ
ールを明らかに生成させた。特に、シクロヘキセン、シ
クロヘキサジエン、ピリジン、フラン。
ナトリウムと最終濃度１ｍＭの可能性のある誘導物質化
合物のある範囲のうちの一つとを含む５０１１！／のバ
クショップ・エルストン培地の５０ｄの中で、６０℃に
おいて一晩増殖させ几。増殖後、各培養株を遠心分離に
よって収獲し、０．４％ＣＭ量／容積）のエタノールを
含むｐＨ７，８の燐酸塩緩衝液のｌ０ＪＩＪ？の中で乾
燥重量０．５ｇ／ｌの濃度へ懸濁させた。各フラスコの
中央のくぼみ（ｗｅｌｌ）の中に０．５縦のトルエンを
入れ、フラスコ’Ｉ’ｍとうしながら３０℃で保温し九
〇 １８時間後、各フラスコ中のトルエンシス−クリコ
ール生ｇ−Ｊｉ’Ｙ測定した（表１）。潜在的誘導物質
に、ピルビン際単独上ｔｔは誘導物質としてのトルエン
と一緒で、誇導質を存在させずに増殖させた細胞におい
て見らｎる量エリも著しく多食のトルエンシス−グリコ
ールを明らかに生成させた。特に、シクロヘキセン、シ
クロヘキサジエン、ピリジン、フラン。
１．３．５−トリメチルベンゼンに丁べて、ピルビン戯
単独まｔはｌ ａｔのトルエン共存の場合エリも著シく
多いトルエン・シス−グリコール’Ｙ与、ｔた。
単独まｔはｌ ａｔのトルエン共存の場合エリも著シく
多いトルエン・シス−グリコール’Ｙ与、ｔた。
ピリジンｌ用いろときの最適効果ｉ（１，０ｍＭの濃度
において見られｔｏ 表 １ 実施例 本実施例は連続培養における誘導物質としてビリジンケ
使用することの例証である。突然変異体Ｂ”Ｙ２Ｏ２ば
の連続培養装置で、ｐＨ７，０，温度３０℃、攪拌速度
５００ｆ−において、バラショップ・エルストン培地と
０．３％（重量／重量）のピルビン酸ナトリウムおよび
０．５ｍＭのピリジンとの中で増殖させた。０．１ｈ−
’の稀釈率を使つｔ０時間間隔を置いて、試料？連続培
養装置から取出し、実施例１：同［、）ルエンからのト
ルエン・シス−グリコールの生成について検定した。少
なくとも３６０ 時間ノ間、 Ｍ 胞ｎ トルエンシス
−グリコールを生成する能力を保持し、トルエンン誘導
物質として用いろ場合におこるような野生型の表現型へ
のその集団の復滞に存在しなかった。結果を表２に示す
。
において見られｔｏ 表 １ 実施例 本実施例は連続培養における誘導物質としてビリジンケ
使用することの例証である。突然変異体Ｂ”Ｙ２Ｏ２ば
の連続培養装置で、ｐＨ７，０，温度３０℃、攪拌速度
５００ｆ−において、バラショップ・エルストン培地と
０．３％（重量／重量）のピルビン酸ナトリウムおよび
０．５ｍＭのピリジンとの中で増殖させた。０．１ｈ−
’の稀釈率を使つｔ０時間間隔を置いて、試料？連続培
養装置から取出し、実施例１：同［、）ルエンからのト
ルエン・シス−グリコールの生成について検定した。少
なくとも３６０ 時間ノ間、 Ｍ 胞ｎ トルエンシス
−グリコールを生成する能力を保持し、トルエンン誘導
物質として用いろ場合におこるような野生型の表現型へ
のその集団の復滞に存在しなかった。結果を表２に示す
。
表 ２
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、芳香族化合物または置換芳香族化合物を１，２−ジ
ヒドロキシ−シクロヘキサ−３，５−ジエン環を含む相
当環式ジヒドロキシ化合物へ転化することができる酵素
をもつ￥シュードモナス・プチダ￥の細胞を製造する方
法であつて、 ￥シュードモナス・プチダ￥の突然変異体菌株（後で定
義するとおりの）の細胞を、芳香族化合物または置換芳
香族化合物を相当する環式ジヒドロキシ化合物へ転化す
ることができる酵素の誘導をおこさせかつ自らはその酵
素のための基質ではない誘導物質化合物（ベンゼンまた
はトルエン以外の）を含む培養培地の中で、増殖させる
ことから成る、方法。 ２、突然変異体菌株が￥シュードモナス・プチダ￥菌株
ＮＣＩＢ１１６８０またはＮＣＩＢ１１７６７の突然変
異体である、特許請求の範囲第１項に記載の方法。 ３、誘導物質化合物が水と混和性である、特許請求の範
囲第１項または第２項に記載の方法。 ４、誘導物質化合物がピリジンまたは置換ピリジンであ
る、特許請求の範囲第１項から第６項のいずれかに記載
の方法。 ５、誘導物質化合物がピリジン、α−ピコリン、あるい
はβ−ピコリンである、特許請求の範囲第４項に記載の
方法。 ６、誘導物質化合物がシクロヘキサン、シクロヘキサノ
ール、ベンゼン−シス−グリコール、フラン、チオフエ
ン、ベンゾフラン、シクロヘキサジエン、クマリン、あ
るいは１，３，５−トリメチルベンゼンである、特許請
求の範囲第１項から第３項のいずれかに記載の方法。 ７、誘導物質化合物が培養培地中で０．０１ｍＭから２
ｍＭの範囲の濃度で含まれる、前記特許請求の範囲各項
のいずれかに記載の方法。 ８、培養培地が１％から２０％（重量／重量）の範囲の
濃度の炭素源を含む、前記特許請求の範囲各項のいずれ
かに記載の方法。 ９、２５℃から３５℃の範囲の温度と５．５から８のｐ
Ｈにおいて実施する、前記特許請求の範囲各項のいずれ
かに記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB868614925A GB8614925D0 (en) | 1986-06-19 | 1986-06-19 | Cyclic dihydroxy compounds |
| GB8614925 | 1986-06-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS633785A true JPS633785A (ja) | 1988-01-08 |
Family
ID=10599706
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62153210A Expired - Lifetime JPH089560B2 (ja) | 1986-06-19 | 1987-06-19 | 環状ジヒドロキシ化合物 |
| JP62153209A Pending JPS633785A (ja) | 1986-06-19 | 1987-06-19 | 細胞の製造 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62153210A Expired - Lifetime JPH089560B2 (ja) | 1986-06-19 | 1987-06-19 | 環状ジヒドロキシ化合物 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US4740638A (ja) |
| EP (2) | EP0250122B1 (ja) |
| JP (2) | JPH089560B2 (ja) |
| AT (2) | ATE79366T1 (ja) |
| DE (2) | DE3778431D1 (ja) |
| GB (1) | GB8614925D0 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01174270U (ja) * | 1988-05-31 | 1989-12-11 | ||
| US7191562B2 (en) | 2001-01-12 | 2007-03-20 | Amesbury Group, Inc. | Locking balance shoe and system for a pivotable window |
| US10563441B2 (en) | 2015-11-20 | 2020-02-18 | Amesbury Group, Inc. | Constant force window balance engagement system |
| US10563440B2 (en) | 2017-04-07 | 2020-02-18 | Amesbury Group, Inc. | Inverted constant force window balance |
| US11193318B2 (en) | 2017-09-21 | 2021-12-07 | Amesbury Group, Inc. | Window balance shoes for a pivotable window |
| US11352821B2 (en) | 2019-01-09 | 2022-06-07 | Amesbury Group, Inc. | Inverted constant force window balance having slidable coil housing |
| US11560743B2 (en) | 2019-04-02 | 2023-01-24 | Amesbury Group, Inc. | Window balance systems |
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|---|---|---|---|---|
| EP0253438B1 (en) * | 1986-07-08 | 1992-12-23 | Shell Internationale Researchmaatschappij B.V. | New strains of pseudomonas putida and their use |
| ATE85040T1 (de) * | 1986-07-08 | 1993-02-15 | Shell Int Research | Organofluorverbindungen und ihr biochemisches herstellungsverfahren. |
| GB2222176A (en) * | 1988-07-29 | 1990-02-28 | Shell Int Research | P. putida cells for microbial production of catechols |
| GB8823977D0 (en) * | 1988-10-13 | 1988-11-23 | Ici Plc | Cyclic dihydroxy compounds |
| EP0477359B1 (en) * | 1990-04-16 | 1995-07-05 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Synthesis of cyclitols from substituted arene diols |
| US5824540A (en) * | 1995-06-20 | 1998-10-20 | Merck & Co., Inc. | Pseudomonas putida strain with dioxygenase activity |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA468280A (en) * | 1950-09-19 | Camille Dreyfus | Manufacture of cyclic aliphatic dihydroxy compounds | |
| GB773402A (en) * | 1953-06-01 | 1957-04-24 | Nat Res Dev | Manufacture of condensation products of fluoro-ketones |
| US3326770A (en) * | 1963-12-03 | 1967-06-20 | Mobil Oil Corp | Growing microorganisms on volatile hydrocarbons |
| GB1043507A (en) * | 1964-02-25 | 1966-09-21 | Marchon Products Ltd | Cyclo-aliphatic diols and process for their preparation |
| SU520343A1 (ru) * | 1974-04-29 | 1976-07-05 | Институт Органической Химии Ан Украинской Сср | Способ получени стереоизомеров трифтор-п-ментанола-3-7,7,7-трифтор -неоментола и 7,7,7-трифтор- -неозометола |
| DE3268971D1 (en) * | 1981-10-06 | 1986-03-20 | Ici Plc | Biochemical process |
| US4863861A (en) * | 1986-07-08 | 1989-09-05 | Shell Oil Company | Biochemical process to produce catechol or 1,2-dihydroxycyclohexa-3,5-diene compound(s) |
| ATE85040T1 (de) * | 1986-07-08 | 1993-02-15 | Shell Int Research | Organofluorverbindungen und ihr biochemisches herstellungsverfahren. |
| GB8630051D0 (en) * | 1986-12-16 | 1987-01-28 | Shell Int Research | Preparation of catechols |
-
1986
- 1986-06-19 GB GB868614925A patent/GB8614925D0/en active Pending
-
1987
- 1987-06-02 DE DE8787304878T patent/DE3778431D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-02 AT AT87304879T patent/ATE79366T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-06-02 DE DE8787304879T patent/DE3781055T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-06-02 EP EP87304878A patent/EP0250122B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-02 EP EP87304879A patent/EP0253485B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-02 AT AT87304878T patent/ATE75257T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-06-09 US US07/059,813 patent/US4740638A/en not_active Ceased
- 1987-06-09 US US07/060,071 patent/US4877740A/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-06-19 JP JP62153210A patent/JPH089560B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-19 JP JP62153209A patent/JPS633785A/ja active Pending
-
1988
- 1988-12-30 US US07/292,348 patent/USRE33307E/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JPH01174270U (ja) * | 1988-05-31 | 1989-12-11 | ||
| US7191562B2 (en) | 2001-01-12 | 2007-03-20 | Amesbury Group, Inc. | Locking balance shoe and system for a pivotable window |
| US8424248B2 (en) | 2001-01-12 | 2013-04-23 | Amesbury Group, Inc. | Method of installing a locking balance shoe and system for a pivotable window |
| US10344514B2 (en) | 2001-01-12 | 2019-07-09 | Amesbury Group, Inc. | Snap lock balance shoe and system for a pivotable window |
| US10533359B2 (en) | 2001-01-12 | 2020-01-14 | Amesbury Group, Inc. | Method of assembling a window balance system |
| US10563441B2 (en) | 2015-11-20 | 2020-02-18 | Amesbury Group, Inc. | Constant force window balance engagement system |
| US10563440B2 (en) | 2017-04-07 | 2020-02-18 | Amesbury Group, Inc. | Inverted constant force window balance |
| US11136801B2 (en) | 2017-04-07 | 2021-10-05 | Amesbury Group, Inc. | Inverted constant force window balance |
| US11193318B2 (en) | 2017-09-21 | 2021-12-07 | Amesbury Group, Inc. | Window balance shoes for a pivotable window |
| US12091895B2 (en) | 2017-09-21 | 2024-09-17 | Amesbury Group, Inc. | Window balance shoes for a pivotable window |
| US12410648B2 (en) | 2017-09-21 | 2025-09-09 | Amesbury Group, Inc. | Window balance shoes for a pivotable window |
| US11352821B2 (en) | 2019-01-09 | 2022-06-07 | Amesbury Group, Inc. | Inverted constant force window balance having slidable coil housing |
| US11560743B2 (en) | 2019-04-02 | 2023-01-24 | Amesbury Group, Inc. | Window balance systems |
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
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| EP0253485A2 (en) | 1988-01-20 |
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| GB8614925D0 (en) | 1986-07-23 |
| US4740638A (en) | 1988-04-26 |
| DE3781055T2 (de) | 1993-03-25 |
| USRE33307E (en) | 1990-08-21 |
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| DE3778431D1 (de) | 1992-05-27 |
| ATE75257T1 (de) | 1992-05-15 |
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| EP0253485A3 (en) | 1989-05-24 |
| JPH089560B2 (ja) | 1996-01-31 |
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| US4877740A (en) | 1989-10-31 |
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| DE3781055D1 (de) | 1992-09-17 |
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