JPS635080B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は発酵法によるピルビン酸の製造法に関
し、詳しくは特定の酵母を使用することによりピ
ルビン酸を効率よく大量に製造する方法に関す
る。

〔従来技術及び発明が解決すべき問題点〕

発酵法によるピルビン酸の製造法としては、細
菌や糸状菌を使用する方法のほかサツカロミセ
ス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）
等の一部の酵母を用いる方法も知られている。

しかしながら、従来の方法ではピルビン酸を工
業的に量産することには問題があつた。

〔問題点を解決するための手段〕

そこで本発明者らは、上記問題点を解決すべく
研究を重ねた結果、トルロプシス（Torulopsis）
属に属する酵母がピルビン酸を生産すること、特
に培地中のチアミン濃度を制限すると、著量のピ
ルビン酸を生産することを見出し、かかる知見に
基いて本発明を完成した。

すなわち本発明は、トルロプシス属に属し、ピ
ルビン酸生産能を有する塩性酵母を培養し、培養
物からピルビン酸を採取することを特徴とするピ
ルビン酸の製造法である。

本発明に使用する微生物としてトルロプシス・
エツチエルシー（T.etchellsii）Ｓ−９株、同Ｆ
−８株を挙げることができる。これら微生物は今
井誠一ら（日本醸造協会雑誌、第70巻、第６号、
第413〜415頁、1975年）より譲り受けたものであ
り、これら菌株の菌学的性質は以下の通りであ
る。

グルコース−酵母エキス−ペプトン水での生育： 25℃、３日間培養して球形または卵形、（２〜
４）×（2.5〜５）μ、表面にリングを形成 グルコース−酵母エキス−ペプトン寒天培地での
生育： 25℃、１月間培養して灰色がかつたクリーム色
のコロニーを形成 擬菌糸は形成せず。

発酵性 グルコース＋ ラクトース− ガラクトース− メリビオース− シユークロース− ラフイノース− マルトース＋ メレチトース− セロビオース− イヌリン− トレハロース− 炭素化合物の資化性 グルコース＋ Ｄ−キシロース− ガラクトース− Ｌ−アラビノース− Ｌ−ソルボース＋ Ｄ−アラビノース− シユークロース− Ｄ−リボース− マルトース＋ Ｌ−ラムノース− セロビオース− グリセロール＋ トレハロース− エリスリトール− ラクトース− リビトール− メレビオース− ガラクチトール− ラフイーノース− クエン酸− メレチトース− イノシトール− イヌリン− 可溶性澱粉− 硝酸カリウムの資化性：資化する ビタミン欠乏培地での生育：劣る 食塩耐性：21％（ｗ／ｖ）まで生育 生育最高温度：35℃ 上記したＳ−９株およびＦ−８株の菌学的性質
を「ジ・イースト（The Yeasts）」、第２版の記
載と比較したところ、これら菌株はトルロプシ
ス・エツチエルシーに該当することが判り、それ
ぞれトルロプシス・エツチエルシーＳ−９株、同
Ｆ−８株と命名した。これら菌株は工業技術院微
生物工業技術研究所に寄託されており、その受託
番号は前者がFERM Ｐ−8304、後者がFERM
Ｐ−8331である。

トルロプシス・エツチエルシーは好塩性である
ことから、同じくトルロプシス属に属する耐塩性
酵母として知られるトルロプシス・ベルサテイリ
ス（T.versatilis）についても同様の結果が予測
されたので、実験したところピルビン酸の生産能
を有することが明らかとなつた。とりわけ、下記
の菌学的性質を有するＤ−５株とＴ−38株（今井
誠一ら、日本醸造協会雑誌、第70巻、第６号、第
413〜415頁、1975年）のピルビン酸生産能がすぐ
れていた。

グルコース−酵母エキス−ペプトンでの生育： 25℃、３日間培養して球形または短かい卵形、
（2.5〜3.5）×（３〜4.5）μ、表面にリングを形成 グルコース−酵母エキス−ペプトン寒天培地での
生育： 25℃、１月間斜面培養して生成するコロニーは
わずかに褐色がかつたミルク色 擬菌糸は形成せず。

発酵性 グルコース＋ メリビオース− ガラクトース＋ ラフイノース− マルトース＋ メレチトース− トレハロース＋ イヌリン− ラクトース＋ 炭素化合物の資化性 グルコース＋ Ｌ−ラムノース− ガラクトース＋ エタノール− Ｌ−ソルボース− グリセロール＋ マルトース＋ エリスリトール− トレハロース＋ リビトール− ラクトース＋ ガラクチトール− イヌリン− Ｄ−グルシトール− 可溶性澱粉− クエン酸− Ｄ−キシロース− イノシトール− Ｄ−アラビノース− 硝酸カリウムの資化性：資化する。

ビタミン欠乏培地での生育：劣る チアミン存在下で生育が良くなる。

食塩耐性：13％（ｗ／ｖ）で生育 生育最高温度：35℃ 上記したＤ−５株とＴ−38株の菌学的性質を
「ジ・イースト（The Yeasts）」、第２版の記載
と比較したところ、これら菌株はトルロプシス・
ベルサテイリスに該当することが判り、それぞれ
トルロプシス・ベルサテイリスＤ−５株、同Ｔ−
38株と命名した。これら菌株は工業技術院微生物
工業技術研究所に寄託されており、その受託番号
は前者がFERM Ｐ−8329、後者がFERM Ｐ−
8330である。

上記トルロプシス属の好塩性（または耐塩性）
酵母の培養に用いる培地としは、これら微生物が
生育して十分量のピルビン酸を生産しうるもので
あればよく、炭素源としてはグルコース、マルト
ースなどが好ましく、窒素源としては肉エキス、
ポリペプトン、カザミノ酸、アミノ酸等の有機窒
素化合物や硫酸アンモニウム、硝酸カリウム等の
無機窒素化合物が用いられる。その他無機物とし
てリン酸塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、バ
リウム塩等を適宜加える。また、培地成分として
少量のNaClを加えておくことが好ましい。なお、
培地中のチアミン量を制御することによりピルビ
ン酸の蓄積量を増大させることができる。本発明
においては培地中のチアミン量については０〜
400μｇ／でピルビン酸の生成が認められたが、
一般に静置培養のときはチアミンを含まないか少
量であつてよいが、通気撹拌培養のときは或程度
の量のチアミンの存在が必要である。通常はチア
ミン量を０〜40μｇ／程度とすることが望まし
い。

培養はピルビン酸の蓄積量が最大となるまで行
なえばよく、通常は20〜35℃、好ましくは25〜30
℃にて２〜８日間、好ましくは３〜６日間好気的
条件下に行なう。

生成したピルビン酸の確認および回収は常法に
より行なえばよく、たとえば酵素法、すなわち乳
酸脱水素酵素を用いたニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオチド還元型（NADH）とピルビン酸の
反応による340nｍの吸光度変化により定量する
ことができる。

〔実施例〕

次に、本発明を実施例により詳しく説明する。

実施例 １ グルコース30ｇ、塩化アンモニウム2.7ｇ、硝
酸カリウム4.0％、チアミン塩酸塩400μｇ、リン
酸−カリウム0.85ｇ、リン酸二カリウム0.15ｇ、
硫酸マグネシウム0.5ｇ、塩化ナトリウム80.0ｇ、
塩化カルシウム0.1ｇに蒸留水を加えて１とし
た培地８mlを直径16mm、深さ160mmの試験管に入
れ、121℃、15分滅菌して冷却後、トルロプシ
ス・エツチエルシ−Ｓ−９（FERM Ｐ−8304）、
同Ｆ−８（FERM Ｐ−8331）、トルロプシス・ベ
ルサテイリスＤ−５（FERM Ｐ−8329）および
同Ｔ−38（FERM Ｐ−8330）をそれぞれ１白金
耳接種し30℃で３日間静置して種培養した。種培
養に用いたものと同組成の培地100mlを200ml三角
フラスコに入れ、同条件で滅菌、冷却したのち、
種培養液を0.3ml接種して30℃で14日静置培養し
た。ピルビン酸の蓄積量はＳ−９株が1.08ｇ／
、Ｆ−８株が0.88ｇ／、Ｄ−５株が0.75ｇ／
、Ｔ−38株が0.92ｇ／であつた。

実施例 ２ 実施例１と同条件でトルロプシス・エツチエル
シーＳ−９（FERM Ｐ−8304）を種培養し、種
培養に用いたものと同組成の培地500mlを１容
のガラス製ジヤーフアーメンターに入れ、同条件
で滅菌、冷却したのち、種培養液を0.75ml接種し
て通気量0.5VVM、撹拌器の回転数700rpmとし
て30℃で88時間培養した。ピルビン酸の蓄積量は
1.62ｇ／であつた。

実施例 ３ 実施例１と同条件でトルロプシス・エツチエル
シーＳ−９（FERM Ｐ−8304）を種培養し、こ
れを実施例１に用いた主培養の倍地中のチアミン
含量を400μｇ／ではなく40μｇ／に変えた倍
地500mlを１容ガラス製ジヤーフアーメンター
に入れ121℃、15分滅菌し、冷却したものに植菌
し、通気量1.0VVM、500rpmで30℃で培養した。
146時間培養した時のピルビン酸の蓄積量5.1ｇ／
であつた。

〔発明の効果〕

本発明によれば、トルロプシス属に属する好塩
性酵母を用いてピルビン酸を高収率で製造するこ
とができる。得られたピルビン酸は食品の風味成
分として有用であり、食品製造分野での利用が期
待される。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ トルロプシス属に属し、ピルビン酸生産能を
   有する好塩性酵母を培養し、培養物からピルビン
   酸を採取することを特徴とするピルビン酸の製造
   法。 ２ 好塩性酵母がトルロプシス・エツチエルシー
   Ｓ−９（FERM Ｐ−8304）またはトルロプシ
   ス・エツチエルシーＦ−８（FERM Ｐ−8331）
   である特許請求の範囲第１項記載の方法。