JPS6352634B2

JPS6352634B2 -

Info

Publication number: JPS6352634B2
Application number: JP6150880A
Authority: JP
Inventors: Tsunematsu Takemoto; Shigenobu Arihara; Tadashi Nakajima; Megumi Okudaira
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1980-05-08
Filing date: 1980-05-08
Publication date: 1988-10-19
Also published as: JPS56127400A

Description

【発明の詳細な説明】

この発明は、酸加水分解によるサポニン類の製
造法に関する。この発明の発明者らは、ウリ科の植物であるア
マチヤヅルの含有成分、ことにサポニンの単離と
化学構造の研究等を行い、この発明を見出すに至
つたものである。この発明に用いる原料物質は、新規物質であつ
て式（）で表わされる。式（）：｛式中R¹が〔β−Ｄ−グルコピラノシル（１→
２）−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）〕−β
−Ｄ−グルコピラノシル基であるときは、R²が
水素原子、β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）
−β−Ｄ−グルコピラノシル基、α−Ｌ−ラムノ
ピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル基もしくはβ−Ｄ−グルコピラノシル基であ
り、 R¹がβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β
−Ｄ−グルコピラノシル基であるときは、R²が
α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−
グルコピラノシル基であり、 R¹がα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β
−Ｄ−グルコピラノシル基であるときは、R²が
β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ−
グルコピラノシル基、α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基もしくは
β−Ｄ−グルコピラノシル基であり、 R¹がβ−Ｄ−グルコピラノシル基であるとき
はR²がβ−Ｄ−キシロピラノシル（１→６）−β
−Ｄ−グルコピラノシル基もしくはα−Ｌ−ラム
ノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
シル基であり、また R¹が水素原子であるときは、R²がβ−Ｄ−キ
シロピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラ
ノシル基もしくはα−Ｌ−ラムノピラノシル（１
→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基である。｝これらのサポニン類（）の具体名を列挙する
と次の通りである。 20S−ブロトパナキサジオール−３−０−｛〔β
−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−α−Ｌ−ラ
ムノピラノシル（１→６）〕−β−Ｄ−グルコピラ
ノシド｝−20−０−〔β−Ｄ−グルコピラノシル
（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−以下
「ギノサポニンＡ」と称する− 20S−プロトパナキサジオール−３−０−｛〔β
−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−α−Ｌ−ラ
ムノピラノシル（１→６）〕−β−Ｄ−グルコピラ
ノシド｝−20−０−〔α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−以下
「ギノサポニンＢ」と称する− 20S−プロトパナキサジオール−３−０−｛〔β
−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−α−Ｌ−ラ
ムノピラノシル（１→６）〕−β−Ｄ−グルコピラ
ノシド｝−20−０−β−Ｄ−グルコピラノシド−
以下「ギノサポニンＦ」と称する− 20S−プロトパナキサジオール−３−０−〔β
−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシド〕−20−０−〔α−Ｌ−ラムノピラ
ノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−
以下「ギノサポニンＥ」と称する− 20S−プロトパナキサジオール−３，20−ビス
−０−〔α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β
−Ｄ−グルコピラノシド〕−以下「ギノサポニン
Ｇ」と称する− 20S−プロトパナキサジオール−３−０−〔α
−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシド〕−20−０−β−Ｄ−グルコピラ
ノシド−以下「ギノサポニンＫ」と称する− 20S−プロトパナキサジオール−３−０−β−
Ｄ−グルコピラノシド−20−０−〔β−Ｄ−キシ
ロピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
シド〕−以下「ギノサポニンＩ」と称する− 20S−プロトパナキサジオール−３−０−β−
Ｄ−グルコピラノシド−20−０−〔α−Ｌ−ラム
ノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
シド〕−以下「ギノサポニンＪ」と称する− 20S−プロトパナキサジオール−20−０−〔β
−Ｄ−キシロピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシド〕−以下「ギノサポニンＭ」と称
する− 20S−プロトパナキサジオール−20−０−〔α
−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシド〕−以下「ギノサポニンＮ」と称
する− 20S−プロトパナキサジオール−３−０−〔α
−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシド〕−20−０−〔β−Ｄ−グルコピラ
ノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−
以下「ブロギノサポゲニンA₂」と称する− プロトパナキサジオール−３−０−｛〔β−Ｄ−
グルコピラノシル（１→２）−α−Ｌ−ラムノピ
ラノシル（１→６）〕−β−Ｄ−グルコピラノシ
ド〕−以下「ブロギノサポゲニンＡ−AH」と称
する− サポニン類（）のうち、ギノサポニンＡ、
Ｂ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、ＭおよびＮはいず
れもアマチヤヅルのサポニンの構成成分であり、
例えば次の方法によつてアマチヤヅルから抽出、
分離される。先ず初めに、アマチヤヅルを水または含水低級
アルコールで抽出する。含水低級アルコールとし
ては50v／ｖ％程度以下の含水メタノール、含水
エタノール等が例示される。この抽出は加温また
は加熱下に行うのが好ましい。なお、原料のアマ
チヤヅルは、抽出に先立つて予め細切し、あるい
は常法により脱脂したものを用いてもよい。また
抽出溶媒として含水低級アルコールを用いた場合
には抽出液を濃縮してアルコール分を除去したの
ち、適量の水を加えて次の非イオン性吸着樹脂で
の処理に付すのが好ましい。非イオン性吸着樹脂としては、スチレン−ジビ
ニルベンゼン共重合体からなるハイポーラスなも
のが好ましく、具体的にはアンバーライトXAD
−２（米国ロームアンドハース社製）などが繁用
される。この処理は、吸着樹脂を充填したカラム
に上記で得られた抽出液を通液して行うのが便利
である。この操作によりサポニンが樹脂に吸着さ
れる。次いで樹脂に吸着されたサポニンを低級アルコ
ールで溶出する。溶出溶媒として用いられる低級
アルコールとしてはメタノール（98％以上）、エ
タノール（95％以上）等が好ましい。なお、溶出
に先立つて予めカラムを水あるいは20v／ｖ％程
度の含水低級アルコールで洗浄するのが好まし
い。上記で得られた低級アルコール溶出液を次いで
アルミナで処理する。この処理も、アルミナを充
填したカラムを用いて行えば簡便である。この処
理により、サポニンはアルミナに吸着される。な
お、このアルミナでの処理に先立つて上記の低級
アルコール溶出液を予め適宜濃縮しておいてもよ
い。アルミナに吸着されたサポニンを次いで低級ア
ルコールまたは含水低級アルコールで、好ましく
は50v／ｖ％程度の含水低級アルコールで溶出す
る。この溶出を濃縮することにより、粗ギノサポ
ニン類が得られる。上記のようにして得られる粗ギノサポニン類
は、ギノサポニンＡ、Ｂ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｉ、Ｊ、
Ｋ、ＭおよびＮ等からなり、これらの各成分は例
えば次の方法により分離、精製される。すなわち、粗ギノサポニン類を水に溶解し、こ
の水溶液をスチレン系吸着樹脂、例えばサーバク
ロム（Servachrom）XAD−２〔サーバ（Serva）
社製〕で処理し、被吸着物質を、メタノール含量
を20％から順次増大したメタノール水溶液で溶出
する。その中の45〜99％メタノールによる溶出液
を濃縮後シリカゲルカラムで処理する。シリカゲルに吸着されたサポニンを次いでクロ
ロホルム・低級アルコール・水で好ましくはクロ
ロホルム・メタノール・水（65：35：10）下層で
溶出し、薄層クロマトグラフイー（TLC）を指
標とし、溶出液をフラクシヨン１〜６に分画す
る。フラクシヨン１〜３をそれぞれシリカゲルカラ
ムで処理し、次いでシリカゲルに吸着されたサポ
ニンをクロロホルム・低級アルコール・酢酸エチ
ル・水で、好ましくはクロロホルム・メタノー
ル・酢酸エチル・水（２：２：４：１）下層で分
画溶出する。また、フラクシヨン４および５もそれぞれシリ
カゲルカラムで処理し、次いで、シリカゲルに吸
着されたサポニンを低級アルコール・酢酸エチ
ル・水で好しくはｎ−ブタノール・酢酸エチル・
水（４：１：２）上層で分画溶出する。また、フラクシヨン６もシリカゲルカラムで処
理し、次いで、シリカゲルに吸着されたサポニン
をクロロホルム・低級アルコール・水で、好まし
くはクロロホルム・メタノール・水（65：35：
10）下層で分画溶出する。上記で得られた各分画溶出液を濃縮し、さらに
TLCの結果を指標にして前記のシリカゲルカラ
ムクロマトグラフイーを繰返し、これらのギノサ
ポニン類を各個別に分離し、精製すると、フラク
シヨン１からギノサポニンＭおよびＮが、フラク
シヨン２からギノサポニンＩ、ＪおよびＫが、フ
ラクシヨン３からギノサポニンＧが、フラクシヨ
ン４からギノサポニンＥおよびＦが、フラクシヨ
ン５からギノサポニンＢが、またフラクシヨン６
からギノサポニンＡがそれぞれ得られる。なお、ブロギノサポゲニンA₂は、ギノサポニ
ンＡを酵素加水分解することにより得られ、また
プロギノサポゲニンＡ−AHはギノサポニンＡを
50％酢酸で処理することにより製造できる。この発明による加水分解は、前記の式（）の
化合物に弱酸を反応さすことによつて行われる。
弱酸としては、水溶性の低級脂肪族カルボン酸、
例えば酢酸が好ましい。最も好ましいのは40〜60
％酢酸水溶液である。反応温度は、室温ないし若干高められた温度
（例えば70〜80℃）で行われる。酸の使用量は、
通常サポニン１モルに対し、100〜1000モル当量
好ましくは270〜630モル当量が用いられる。このような条件下で式（）の化合物を加水分
解に付すと、３位の置換分が不変のまま、20位の
置換分を選択的に脱離さすことができる。より具
体的には、20位の置換分であるグルコピラノシル
基、グルコピラノシル−グルコピラノシル基、キ
シロピラノシル−グルコピラノシル基またはラム
ノピラノシル−グルコピラノシル基を水素原子に
それぞれ加水分解することができる。なお、加水分解生成物が混合物の場合は、前述
のアマチヤヅルの抽出物を精製、分離する際に用
いられたと同様の技法で各成分に分離することが
できる。更に、この発明では式（）の化合物を場合に
より混合物として使用してもよい。かくして、例えばギノサポニンＡまたはＢを用
いれば、ブロギノサポゲニンＡ−AH（R²が水素
原子、R¹がβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）
−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ
−グルコピラノシル基）が得られる。かくして、式（）の化合物は、それ自体新規
で例えば脂質分解抑制及び脂質合成抑制作用を有
し、この発明は式（）の化合物を同じく式
（）に属する他の化合物への転換を可能にする
ものである。次にこの発明を参考例および実施例によつて説
明する。参考例１乾燥したアマチヤヅル全草２Kgを水30で熱時
２回抽出した。両抽出液を合し、非イオン性吸着
樹脂、アンバーライトXAD−２（平均粒径0.45〜
0.60mm、米国ロームアンドハース社製）４を充
填したカラムに通導した。吸着部を水10、次い
で20％メタノール６で洗浄したのち、99％メタ
ノール５で溶出し、溶出液を減圧下に濃縮乾固
し、黄褐色粉末37ｇを得た。これを99％メタノー
ル１に溶解し、アルミナ〔中性、70〜290メツ
シユ、ウオルム（Woelm）社製〕300ｇを充填し
たカラムに通導したのち、50％メタノール約20
で溶出した。溶出液を減圧下に濃縮乾固し、淡黄
色粉末として粗ギノサポニン画分25ｇを得た。粗ギノサポニン画分20ｇを水１に溶解し、ス
チレン系吸着樹脂サーバクロムXAD−２（100〜
200μ、サーバ社製）600mlを充填したカラムに通
導した。吸着部を20％メタノールより順次５％ず
つメタノール含量を増しながら溶出し、30〜40％
メタノール溶出部分（40）を合し、減圧下に濃
縮乾固して淡黄色粉末２ｇを得た。さらに45〜99％メタノール溶出部分（70）を
合し、減圧下に濃縮乾固して淡黄色粉末16ｇを得
た。 30〜40％メタノール溶出画分２ｇを最少量の99
％メタノールに溶解し、シリカゲル４ｇとよく混
和し、溶剤を減圧下に蒸発乾固したのちシリカゲ
ル（230〜400メツシユASTM、メルク社製）200
ｇを乾式で充填したカラムの上にのせ、次いでク
ロロホルム・メタノール・水（65：35：10）下層
を用いて展開溶出し、さらにこの操作を２回くり
返し、ギノサポニン0150mgを得た。 45〜99％メタノール溶出画分16ｇを最小量の99
％メタノールに溶解し、シリカゲル30ｇとよく混
和し、溶剤を減圧下に蒸留乾固したのちシリカゲ
ル300ｇを乾式で充填したカラムの上にのせ、次
いでクロロホルム・メタノール・水（65：35：
10）下層を用いて展開溶出した。溶出液を適時
TLC〔吸着剤：シリカゲル、溶媒系：クロロホル
ム：メタノール・水（65：35：10）下層、検出：
30％硫酸〕で検討を行ない、フラクシヨン１〜６
に分画し、それぞれ減圧下に濃縮乾固した。フラクシヨン１（約1.1ｇ）、２（約1.1ｇ）なら
びに３（約1.0ｇ）をそれぞれ最少量の99％メタノ
ールに溶解し、シリカゲル３ｇとよく混和し、溶
剤を減圧下に蒸留乾固したのち、シリカゲル100
ｇを乾式で充填したカラムの上にのせ、クロロホ
ルム・メタノール・酢酸エチル・水（２：２：
４：１）下層を用いて展開溶出し、さらにそれぞ
れこの操作を２回くり返し、フラクシヨン１から
ギノサポニンL350mg、ギノサポニンM60mgおよ
びギノサポニンN160mgを、フラクシヨン２から
ギノサポニンH150ｇ、ギノサポニンI60mg、ギノ
サポニンJ120mgおよびギノサポニンK110mgを、
フラクシヨン３からギノサポニンG450mgをそれ
ぞれ得た。フラクシヨン４（約3.4ｇ）および５（約2.5ｇ）
をそれぞれ最少量の99％メタノールに溶解し、シ
リカゲル６ｇとよく混和し、溶剤を減圧下に蒸発
乾固したのち、シリカゲル200ｇを乾式で充填し
たカラムの上にのせ、ｎ−ブタノール・酢酸エチ
ル・水（４：１：５）上層を用いて展開溶出し、
さらにそれぞれこの操作を２回くり返し、フラク
シヨン４からギノサポニンD350mg、ギノサポニ
ンE1500mgおよびギノサポニンF80mgを、フラク
シヨン５からギノサポニンB220mgおよびギノサ
ポニンC240mgをそれぞれ得た。さらにフラクシヨン６（約0.9ｇ）を前記の方法
に準拠して処理し、クロロホルム・メタノール・
水（65：35：10）下層を用いて展開溶出し、ギノ
サポニンA510mgを得た。各ギノサポニンの物性は後記の表１および表２
に示す通りである。なお、ギノサポニンＣ、Ｄ、ＨおよびＬはそれ
らの物性ならびにCMRにより直接比較し、薬用
人参サポニンであるギンセノシド−Rb₁、−Rb₃、
−Rdおよび−F₂にそれぞれ同定された。実施例１ギノサポニンA150mgを50％酢酸10mlに溶解し、
70℃で６時間撹拌した。反応液をサーバクロム
XAD−２（50ml）のカラムに通導し、吸着部を水
１次いで30％メタノール２で洗浄したのち、
99％メタノール300mlで溶出した。溶出液を減圧
下に濃縮乾固して約100mgのブロサポゲニン画分
を得た。これを最少量の99％メタノールに溶解
し、シリカゲル１ｇとよく混和し、溶剤を減圧下
に蒸発乾固したのち、シリカゲル50ｇを乾式で充
填したカラムの上にのせ、次いでクロロホルム・
メタノール・酢酸エチル・水（２：２；４：１）
下層を用いて展開溶出し、プロギノサポゲニンＡ
−AH35mgを得た。本品の物性は後記の表１およ
び表２に示す通りである。

【表】

【表】＊：化学シフトはシグナル重複により不明
瞭
実施例２ギノサポニンＢおよびＣの混合物300mgを50％
酢酸10mlに溶解し、70℃で６時間撹拌した。反応
液を実施例１と同様に処理してプロサポゲニン画
分200mgを得た。これを最少量の99％メタノール
に溶解し、シリカゲル１ｇとよく混和し、溶剤を
減圧下に蒸発乾固したのち、シリカゲル50ｇを乾
式で充填したカラムの上にのせ、次いでクロロホ
ルム・メタノール・水（65：35：10）下層を用い
て展開、溶出し、プロギノサポゲニンＡ−AH30
mgおよびプロギノサポゲニンＥ−AH70mgを得
た。プロギノサポゲニンＡ−AHはTLCおおよび
PMRにより実施例１で得られた標品と同定した。
なおプロギノサポゲニンＥ−AHは薬用人参サポ
ニンの50％酢酸加水分解物であるギンセノシド−
Rg₃と同定した。実施例３ギノサポニンE350mgを50％酢酸10mlに溶解し、
70℃で６時間撹拌した。反応液を実施例１と同様
に処理してプロサポゲニン画分約210mgを得た。
これを最少量の99％メタノールに溶解し、シリカ
ゲル１ｇとよく混和し、溶剤を減圧下に蒸発乾固
したのち、シリカゲル50ｇを乾式で充填したカラ
ムの上にのせ、次いでクロロホルム・メタノー
ル・酢酸エチル・水（２：２：４：１）下層を用
いて展開、溶出し、プロギノサポゲニンＥ−
AH140mgを得た。本品は実施例２で得られた標品とTLCおよび
PMRにより同定した。

Claims

【特許請求の範囲】１式（）：｛式中R¹が〔β−Ｄ−グルコピラノシル（１→
２）−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）〕−β
−Ｄ−グルコピラノシル基であるときは、R²が
β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ−
グルコピラノシル基、α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基もしくは
β−Ｄ−グルコピラノシル基、 R¹がβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β
−Ｄ−グルコピラノシル基であるときには、R²
がα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ
−グルコピラノシル基、 R¹がα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β
−Ｄ−グルコピラノシル基であるときには、R²
がβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ
−グルコピラノシル基、α−Ｌ−ラムノピラノシ
ル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基もし
くはβ−Ｄ−グルコピラノシル基、 R¹がβ−Ｄ−グルコピラノシル基であるとき
は、R²がβ−Ｄ−キシロピラノシル（１→６）−
β−Ｄ−グルコピラノシル基もしくはα−Ｌ−ラ
ムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラ
ノシル基、また R¹が水素原子であるときは、R²がβ−Ｄ−グ
ルコピラノシル基、β−Ｄ−キシロピラノシル
（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基もしくは
α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→６）−β−Ｄ−
グルコピラノシル基である。｝で表わされるサポニンを弱酸による加水分解に付
して、式（）の化合物の20位の置換分から糖を
脱離し、必要に応じて生成物を精製・分離するこ
とを特徴とする酸加水分解によるサポニン類の製
造法。