JPS6357569A - ヒドラジド化合物及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は新規なヒドラジド化合物に関イろ。

す’）　Ｋ　Ｒ−しくは、活性ジスルフィド基をそσ）
分子構造中に含有するヒドラジド化合物に関する。

〈従来の技術と問題点〉 従来、高分子又は低分子物１質に活性ジスルフィド基や
チオール基を導入するためには、Ｎ−サクシンイミジル
３−（２−ピリジルジチＣＪ、Ｃａｒｌｓａｏｎ＋　Ｈ
，Ｄｒｅｖｉｎ　ａｎｄ　Ｒ，Ａｘｅｎ＋　Ｂｉｏｃｂ
ｅｍ、Ｊ、　。

１７３．７２３（１９７８）、）、Ｓ−７セチルメルカ
り ａｎｄ　Ｒ，Ｅ、Ｈｅ１ｎｅｙ　　ｒ　Ａｒｃｈ　、Ｂ
ｌｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ　、　、　９　Ｌ（Ｈ，
Ｊ、５ｃｈｒａｎ＋ｍ　ａｎｄ　Ｔ、Ｄｉｌｌｆｆｅｒ
、　　Ｈｏｐｐｅ−８ｅｙｌｅｒ’ｓ　Ｚ。

ｐｈｙｓｔｏｌ、ｃｈｅｍ、、３５８．１３７（１９７
７）、）などの二官能基性架橋剤が使用され℃きたつこ
れらのジスルフィド基またはチオール基Ｑ、・導入剤は
、いずれも７ミノ基と反応性の官能基をその分子構造中
に含有し℃おり、従って活性ジスルフィド基またはチオ
ール基を導入しまうとする対象物質が、その目的に使用
できる７ミノ基を持つ℃いる場合、例えば、ある種の蛋
白質の様な場合には、これらは好適に使用できろ。

しかし、アミ７基を含有し℃いない物質、例えば、ある
種の糖質、多糖高分子ゲル等の場合や、アミノ基を含有
Ｌ　Ｃい℃も、それに池の物を結合することが適当でな
い糖蛋白等に、活性ジスルフィド基ＪＰキオール基を導
入することは、これらの導入剤では困難である。

〈問題点を解決するための手段〉 木発明者らは、従来の導入剤では有効に成しえない、糖
質に活性ジスルフィド基を導入するたｂの導入剤を鋭意
探索した結果、活性ジスルフィド基とヒドラジド基を同
一分子内ｌ′Ｃ含んだ本発明の２官能基性化合物が、こ
り目的のために極めて有用であることを見い出（〜、本
発明に至った。

即ち、不発明は、下記式ｌ〕 Ｘ−３Ｓ−Ａ−ＣＯＮＴｒＮＨｌ−・・−・・ｒＬ１１
式中、Ｘは２−ピリジル基または４−ビリ１で表わされ
るヒドラジド化合物およびその製造方法である。

本発明の化合物を表わす式０〕におい℃、Ｘ）工２−ピ
リジル基又は４−ピリジル基を表わす。

従つ℃、隣接するジスルフィド基は（・わゆろ活性ジス
ルフィド基であり、ジチオスフイトール。

２−メルカプトエタノール、水素化ホウ素力トリウム等
の還元剤で容易にチオール基に還元することができる。

反面、水素化シアノホウ素ナトリウムによる還元罠は比
較的安定である。Ａは炭素数１〜６の２価の炭化水素残
基であり、メチレン（−Ｃルー）、ジメチレン（−ＣＴ
（、ＣＩ（□−）。

トリメチレン（−ＣＨ，ＣＨ＊ＣＨ，−）　、　　テト
ラメチレン（棚ばＨ，Ｃ記１−　）、ペンタメチレン（
Ｃ）Ｔ、ＣＩ［、−ＣＨ，ＣＨ，ＣＨ＊　−）　、　ヘ
−１’　ｔ　／　チｖ　ｙ　（−ＣＨ，ＣＴＬ（ＪＩ、
Ｃ）Ｌ　−ＣＴ（ＣＨ，−’）　、及び公文した炭化水
ぶ残基を表わすが、そのうちでもジメチレンとトリメチ
レンが特に好ま［−い。

本発明Ｑ）ヒドラジド化合物のコツ造におい℃は、それ
ぞれ原料である下記式（２） ％式％ 〔式中、Ｘ、Ａの定義は代印に同じ。〕または、下記弐
■ Ｘ−３Ｓ　−Ａ　−Ｃｏ　−Ｙ　　・・・・・・・・・
（３）で表わされるカルボン酸またはその反応性誘導体
に、前者の場合は脱水１合剤とともに、後者の場合は脱
水縮合剤無１−に、ヒドラジンを反応せ１．めで製造す
る。

原料のカルボン酸またはその反応性誘導体は、公知の方
法ＣＪ、Ｃａｒｌｓｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ　、　、　Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ、Ｊ、　ｒ１７３．７２３（１９７８）：Ｊ
、Ｃａｒｌｓｓｏｎら、特開昭５３−１３０７８１　〕
およびそれらに類似の方法により工業的に容易に供給さ
れる。原料りカルボン酸にヒドラジンを反応させる場合
に共存させる脱水縮合剤とは、アミン類とカルオン酸４
ｊよりアミドを形成せ【−める反応の助剤を意味１１、
例えば、ペプチド合成反応に使用されろカップリング試
薬〔泉屋信夫も著、「ペプチド合成Ｑ）基礎と実験」九
善（１９８５”）ｐｐ　１１４−１２５参照〕が好まし
い。なかでも、Ｎ、　Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジ
イミド、カルボニルジイミダゾール１　ジフェニルホス
ホリル７ジド等は特番て好ましい。反応に際しては、好
ま１．（は、カルボン酸に対し℃ヒドラジン１．０〜１
０．０倍モル。

脱水縮合剤１．０〜３．０倍モルを溶媒中均一溶液と【
、″Ｃ反応させろ。用いる溶媒は、カルホン酸。

ヒドラジン、脱水縮合剤のすべてを溶解し、かつそれら
と反応（−ないものが好マ１−＜、例えば、ジクロロメ
タン、ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素類、テト
ラヒト−フラン、ジオキサン等のエーテル類、酢酸エチ
ル、酢酸ブチル等のエステル類、７セＦニトリル、ジメ
チルアセトアミド゛、ジメチルホルムアミド、ピリジン
などの極性溶媒２等を好ましく用いることができろう通
常、反応温度はＩ）℃〜５０℃９反り時間は１時間〜３
日である。反応終了後は、目的物であるヒドラジド化合
物はｒ取、抽出、結晶化。

クロマトグラフィー等の通常の精製手段によって単離精
製することができろ。

本発明のヒドラジド化合物を、式■で表わされるカルボ
ン酸の反応性誘導体にヒドラジンを作用させ℃製造する
場合、原料である式（３）で表わされるカルボン酸の反
応性３１体とは、具体的にはハロゲン化物と【−て酸塩
化物、酸臭化物。

陵沃化物、活性エステル類とし又、Ｎ−サクシ５１水物
として、エトキシカルボニルオキシ誘導ＣＨ１ チルエステルなどがある。反応におい又は、好ましくは
カルボン酸の反応性誘導体を、ＲＩ−：中均−溶液とし
てヒドラジンを作用させる。用いるヒドラジンの量は、
好まＬ　（は１〜５０倍モルである。溶媒は、原料の反
応性誘導体とヒドラジンをとも罠溶解し、かつこれらと
反応し−ないものが好ましく、例えば、ジクロロメタン
。

ジクロロエタン等のハロゲン化炭化水素炉、テトラヒド
ロフラン、ジメトキシエタン等のエーテル類、酢酸エチ
ル、酢酸ブチル等のエステル類、アセトニトリル、ジメ
チルホルムアミド。

ピリジン等の極性溶媒な好ま【、＜用いろことかできろ
。通常、反応温度は一２０Ｃ〜５０℃、反応時間は３０
分〜３日である。必要に応じてトリエチルアミン等の反
応助剤を添加１．てもよい。反応終了後は、目的物であ
るヒドラジド化合物はｒ取、抽出、結晶化、り＋−＋　
）　／ラフイー等の通常のｎ製手段によって単離精製す
ることができる。

本発明のヒドラジド化合物の使用例として、糖質へ活性
ジスルフィド基およびスルフィド基を導入する方法を下
記式によって説明する。先−１！質を、過ヨウ素酸また
はガラクトースオキシダーゼで酸化してアルデヒド基を
発生せしめ（アルデヒド化糖質）、これに、本発明のヒ
ドラジドとシアノ水素化ホウ素ナトリウムを作用させて
、活性ジスルフィド基を糖質に導入することができる。

さらにこれに２−メルカプトエタノールやジチオスレイ
トール等の還元剤を作用させれば、活性ジスルフィド基
をチオール基に望換することができる。

実施例Ｌ３−（２−ピリジルジチオ）プロパノヒドラジ
ドの合成 Ｎ−サクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プル
ビオネートの結晶１００１１ｇのジメトキシエタン（５
−）溶液に、水冷下にヒドラジンヒトラード３２ｑのジ
メトキシエタン（１−）溶液を加え、室温下で１３時間
反応させた。

溶媒を減圧留去し、得られた残渣をエーテル−３−へキ
サンｌ：ｌの混合溶媒より結晶化ｔ、て、目的物３−（
２−ピリジルジチオ）プロパノヒドラジドの結晶５８鵞
グを得た。収率は７９チであった。物理性状は以下の通
りであった。

ｍ、ｐ、：　９２　、５−９３　、５℃ＮＭＲ：　（Ｃ
ＤＣム中ＴＭＳよりのδ値）２．５２　（２Ｈ，ｂｒｔ
、６Ｈ２）、３．０３　（２Ｈ。

ｂｒｔ、６Ｈ２）、３．７７　（２Ｈ，ｂｒｓ　）。

６．９−８．６　（４）（、ｍ　＞　、　８．３１　（
ＩＨ。

ｂｒ＠） ＩＲ：　（ＫＢｒ　）　３２６０ｆｓ）、　　１６７０
（ｓ）、　　１６４５゜１５７５．１５３０，１４４５
．１４１０国−１質量スペクトル（ＥＩＭＳ　）：　１
１　ｔ　（Ｍ”）　。

２２９　（Ｂａｓ＠Ｐ＠ｓｋ　： 実施例２ 公知の方法（特開昭５３−１３０６７４号参照）に従つ
℃得た２−カルボキシエチル２−ピリジルジスルフィド
２００ηの酢酸エチル溶液１０ｓｄＫ、水冷下にヒドラ
ジ７６０冨ｇと、ジシクロへキシルカルボジイミド２８
７　Ｑを加えて４℃で１５時間反応させた。溶液に酢酸
エチル２〇−を加え、０．５Ｍの二ン酢水溶液３０−で
洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥１１、溶媒を減
圧留去した。残渣を実施例１と同様のシリカゲルクロマ
トグラフィーにより精製し、エーテル−ｎ−へキサンｌ
：１の混合溶媒より結晶化して、目的物である３−（２
−ピリジルジチオ）プロパノヒドラジドの結晶６１真９
を得た。収率は２９％であった。物理性状は実施例１で
得られたものとよ（一致した。

実施例１　モノクローナル抗体への活性ジスルフ）　　
　　イド基の導入 抗ヒトメラノートモノクローナル抗体 （ｆｇＧ２ｍ　）　９６．５を６．ＩＱ溶解した生理食
塩水１ｍに、メタ過ヨウ素酸ナトリウム水Ｗ！２１７．
８　ｍＭ　を５０　ｐｔ　加え、氷上に工１時間、Ｉｇ
Ｇ１分子鎖の酸化反応１行なった。反応液を生理食塩水
に℃十分透析することＫより、残存するメタ過ヨウ素酸
ナトリウムを除いた後、かかる反応産物に０．１　Ｍク
エン酸ｔｌＩｌｉ液（ｐＨ５，５）を０．５−添加し、
その後８０μｔ　のＤｂ正に溶解した３−（２−ピリジ
ルジチオ）プロパノヒドラジドを１．７６１１９加え、
氷上にＣ４時間反応せしめた。その後、最終濃度が４０
　ｍＭ　Ｋなるようにシアノ水素化ホウ素ナトリウムを
加え、１時間還元反応を行なった後、１０　ｙｎＭ　　
Ｕン隈緩衝液（ｐＨ７，２）　−０，１４Ｍ　Ｎａ（／
Ｊ　”Ｃ十分透析することＫより、２−ピリジルジチオ
基を含有するＩｇＧ　５．Ｉ　Ｍｇを得た。ＩｇＧ量は
２８０　ｎｍ　　の吸光度により決定Ｉ−た。得られた
２−ピリジルジチオ基を有するＩｇＧ上の活性ジスルフ
ィド残基の量は、一部のサンプルに過剰のジチオスレイ
トールを作用させ、遊離したチオピリドンの吸収極大値
（３４３ｎｍ）における吸光度を測定して定量した。一
方、該サンプル中のＩｇ（ｒ）量は２８０　ｎｍ　　に
おける吸光度を測定し℃求めた。

ＩｇＧ１分子に存在する活性ジスルフィド残基の数はこ
れらの測定値の比で表わされる。即ち、であった。

〈発明の効果〉 本発明のヒドラジド化合物の工業的応用は多岐に渡る。

選択的に作用する医薬品の製造への応用例を示すと、！
１ｇ′に選択的に結合する杭腫瘍抗体忙、その糖鎖部位
で活性ジスルフィド基を導入し、その上で、制ガン薬メ
ソトレキセー）　（ＭＴＸ　）の、例えば、下記式で表
わされるチオール基含有誘導体を Ｃｏ、）Ｉ 反応させれば、睡瀉に選択的（作用する抗肝Ｊｑ抗体−
ＭＴＸ複合体が得られろ。

又、例えば、ａ量物質σ）定量法に酵素免疫測定法があ
るが、そこで使用する酵素−抗体複合体の作製において
、本発明のヒドラジド化合ｍを使用すれば、酵素又は抗
体の糖鎖部位で、これらを架橋して複合体を作製するこ
とができる。

又、例えば、活性ジスルフィド基を導入（、たセファロ
ースゲルが、チオール基含有物質を捕捉するための担体
と１．て使用されているが、かかる活性ジスルフィド基
を導入Ｉまた［質ゲルを調製するために、本発明のヒド
ラジド化合物を使用することができる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記式〔１〕 Ｘ−ＳＳ−Ａ−ＣＯＮＨＮＨ＿２………〔１〕式中、Ｘ
   は２−ピリジル基または４−ピ リジル基を表わし、Ａは炭素数１〜６の２価の炭化水素
   残基を表わす。 で表わされるヒドラジド化合物。 ２、式〔１〕において、Ｘが２−ピリジル基を、Ａがジ
   メチレン基（−ＣＨ＿２ＣＨ＿２−）またはトリメチレ
   ン基（−ＣＨ＿２ＣＨ＿２ＣＨ＿２−）を表わす、特許
   請求の範囲第１項記載のヒドラジド化合物。 ３、下記式〔２〕 Ｘ−ＳＳ−Ａ−ＣＯ＿２Ｈ………〔２〕 式中、Ｘは２−ピリジル基または４−ピリジル基を表わ
   し、Ａは炭素数１〜６の２価の炭化水素残基を表わす。 で表わされるカルボン酸に、脱水縮合剤の存在下にヒド
   ラジンを作用させることを特徴とする、下記式〔１〕で
   表わされるヒドラジド化合物の製造方法。 Ｘ−ＳＳ−Ａ−ＣＯＮＨＮＨ＿２………〔１〕〔式中、
   Ｘは２−ピリジル基または４−ピリジル基を表わし、Ａ
   は炭素数１〜６の２価の炭化水素残基を表わす。〕 ４、下記式〔３〕 Ｘ−ＳＳ−Ａ−ＣＯ−Ｙ………〔３〕 式中、Ｘは２−ピリジル基または４−ピリジル基を表わ
   し、Ａは炭素数１〜６の２価の炭化水素残基を表わす。 Ｙは、隣接するカルボニル基とともにカルボン酸の反応
   性誘導体残基を形成する１価の有機基を表わす。 で表わされるカルボン酸の反応性誘導体に、ヒドラジン
   を作用させることを特徴とする、下記式〔１〕で表わさ
   れるヒドラジド化合物の製造方法。 Ｘ−ＳＳ−Ａ−ＣＯＮＨＮＨ＿２………〔１〕式中、Ｘ
   は２−ピリジル基または４−ピリジル基を表わし、Ａは
   炭素数１〜６の２価の炭化水素残基を表わす。 ５、下記式〔１〕 Ｘ−ＳＳ−Ａ−ＣＯＮＨＮＨ＿２………〔１〕式中、Ｘ
   は２−ピリジル基または４−ピリジル基を表わし、Ａは
   炭素数１〜６の２価の炭化水素残基を表わす。 で表わされるヒドラジド化合物と、アルデヒド化糖質を
   反応させることを特徴とする、糖質に活性ジスルフイド
   基を導入する方法。