JPS6357601A - 三次元架橋化高分子物質及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、新規な三次元架橋化高分子物質に係り、特に
β−アミラーゼ、γ−アミラーゼを選択的に吸着する吸
着剤として有用な三次元架橋化高分子物質及びその製造
方法に関する。

〔従来の技術〕

現在、異性化糖や麦芽糖は澱粉をα−アミラーゼ、γ−
アミラーゼあるいはβ−アミラーゼを用いて加水分解し
工業生産されている。

このようにβ−アミラーゼやＴ−アミラーゼは澱粉から
有用な低分子性の甘味料を工業生産するのに極めて有用
である。

一般に、酵素は酵素生産菌を液体培養して製造される。

研究用試薬としての酵素は、塩析やイオン交換クロマト
、電気泳動法等を組み合わせた、複雑なプロセスによっ
て、部分精製もしくは高度精製して用いられている。

これに対し、工業用酵素製剤としては、培養濾液をその
まま濃縮した濃縮液か、乾燥した粉末、あるいは分離精
製して得られる濃縮液もしくはその乾燥粉末として得ら
れる。しかし、培養濾液の濃縮液や粗乾燥品には、培養
液中に含まれる不快臭成分及び着色成分が多量に含まれ
るため、目的とする反応生成物を分離精製する際、最終
的に除去することが必要となってくる。また、培養濾液
中には蛋白分解酵素（プロテアーゼ）をも含むことが多
い。アミラーゼ以外に蛋白分解酵素類を含む培養濾液等
の粗酵素溶液では精製途中や目的反応の進行に際して、
蛋白分解酵素の作用によりアミラーゼが分解され失活す
ることが多い。このため、酵素反応を利用して有用物質
を生産する際には、これら不利益となる゛不純物を除去
することが必要となってくる。

このため、後続の反応生成物の分離精製工程に著しく負
担をかける。一方、一般的な精製方法として知られる塩
析法や液体クロマトでは部分的な濃縮が限界であり、分
離精度を高めるためにはこれらの操作条件、例えば沈澱
剤の種類、濃度、ｐＨ１充填剤の種類、吸脱着液の種類
等、を変え、これらを組み合わせた複雑なプロセスを経
ることが必要となる。

それだけでなく、操作には沈澱剤、溶出剤として多量の
塩を添加することになり、次工程へ移る際の脱塩操作も
必要である。さらに、数１０％の高い塩濃度のＢＯＤ廃
液は、その廃液処理も簡単ではない。

以上のことから、これら公知の精製方法は、専ら、研究
用試薬等におのずと限定されている。

なかでも、精製が困難とされているβ−アミラーゼとＴ
−アミラーゼを選択的に効率よく吸着できる吸着剤が開
発されれば、培養濾液から両酵素を一段階で純度高く濃
縮分離できる。

発明者らは、古くから、α−アミラーゼの精製方法とし
て研究されはじめていたアミロース〔グルコースの直鎖
状ポリマ（分子量１０〜４０５、グルコース重合数（５
Ｘ１０”〜２Ｘ１０’）を吸着剤とする吸着法に着目し
、これをβ−アミラーゼ及びＴ−アミラーゼに適用して
みた。

しかし、吸着容量がα−アミラーゼの１０３分の１以下
と極めて低く、実質的に吸着分離が不可能であることが
判明した。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明の目的は、グルコースのα−１，４ホモオリゴマ
を分子間架橋してなる新規な三次元架橋化高分子物質及
びその製造方法を提供するものであって、この高分子物
質は培養液などのβ−アミラーゼ及びγ−アミラーゼ以
外に多種多様の不純物を含む、β−アミラーゼ、γ−ア
ミラーゼもしくは両者を含む含有液から、該酵素を選択
的に効率よく吸着分離できる吸着剤として利用できるも
のである。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、β−アミラーゼ及びγ−アミラーゼ用の
吸着剤について鋭意検討した結果、グルコースがα−１
，４結合したオリゴ糖の分子がβ−アミラーゼもしくは
Ｔ−アミラーゼの分子と複合分子を形成することを見出
した。しかし、オリゴ糖とのこれら複合体は水溶性のた
め、酵素の回収は簡単ではない。そこで、更に、種々検
討した結果、該オリゴ糖を分子間で架橋化することによ
り得られる新規な架橋化高分子物質が該酵素類への吸着
能を損なうことなし水に不溶化することを見出し、本発
明を完成するに到った。

本発明の第１の特徴は、好ましくはグルコース分子が２
〜６分子、α−１，４結合により直線的に重合したオリ
ゴマを化学的に分子間架橋して三次元マトリックスを形
成させたα−アミラーゼ及びＴ−アミラーゼを選択的に
吸着できる高分子物質及びその製造方法である。

架橋剤としてエピクロルヒドリンを用いた場合の前記物
質の代表的な構造単位の例を次の式（１）゛　及び（Ｉ
Ｉ）に示す。

（本頁以下余白） ｃ式中、１は非還元末端、２は還元末端、３は架橋鎖を
示す、〕 本発明の三次元架橋化高分子物質を吸着剤として適用で
きる酵素は、β−アミラーゼ及びγ−アミラーゼである
。本酵素の分類の範囲内にあれば、その起源生物に特に
限定されるものではない。

例えば、アスペルギルス属、リゾープス属等の糸状菌や
サツカロミセス属等の酵母、バシルス属等の細菌を起源
とするβ−アミラーゼであっても適用できる。また、ア
スペルギルス属、リゾープス属等の糸状菌やサツカロミ
セス属等の酵母、バシルス属、クロスツリジュウム属等
の細菌を起源とするＴ−アミラーゼであっても適用でき
る。

本発明の架橋化高分子物質を製造するための原料として
のオリゴ糖は、グルコ−ろ分子がα−１゜４結合で直線
状に重合した重合数２〜６のオリゴ糖が用いられる。こ
れらのオリゴ糖は単成分であっても混合物であってもよ
い。しかし、β−アミラーゼとＴ−アミラーゼのどちら
か一方乃至両方を相対的に選択吸収したい場合には前述
した様に適宜、糖の種類を選択する。゛ 上述したオリゴ糖の架橋方法は、特に限定されないが、
その架橋の程度は、β−アミラーゼもしくはＴ−アミラ
ーゼを吸着する際に使用される温度である氷点以上で６
０℃以下において、１００ｇの水に対し得られる架橋化
高分子物質の溶解度が０．０１ｇ以下になる様に、分子
間架橋を行なえばよい。

したがって、架橋化処理により調製された本発明の架橋
化高分子物質は水和性のゲル又は固定である。

架橋反応及び条件は、オリゴ糖の種類、濃度、酵素吸着
時の使用条件により適宜選択される。反応として、例え
ば、エピクロルヒドリンによるグルコース残基のＯＨ基
間の架橋等があげられる。エピハロゲンとしてはエピク
ロルヒドリンが最も実用的である。エピハロゲンの場合
、その添加量は原料ポリグルカンの溶液の０．５〜３倍
が好適である。原料液中のポリグルカン濃度は少なくと
も１％以上が好ましい、アルカリは苛性ソーダ、苛性カ
リ等の強アルカリが用いられるが、その濃度は１　Ｎ以
上のエピハロゲンのハロゲンに対し、等量・以上のアル
カリを含むことが必要である。温度は３０℃以上で行わ
れる。時間は温度、アルカリ濃度により適宜選択される
が、６０℃の際、３０分間以上を要する。反応中のエピ
ハロゲン層と水層との接触と、ゲル生成に伴う液の粘性
上昇のため攪拌は有効である。

〔実施例〕

以下、本発明の実施例を用いて、さらに詳しく説明する
。

実施例１ マルトース１０ｇに水９０−を添加し、５０℃に加熱し
て溶解した。これに３Ｎの苛性ソーダ３３−を添加し、
これを攪拌機と還流冷却器を付した５００−の反応フラ
スコに入れた。次いで、１４０−のエビロクロルヒドリ
ンを加え、２Ｑｒｐｍで攪拌しつつ、７０℃で１５時間
加熱した。

反応終了後、内容物を室温に冷却し、下部の水層中のゲ
ル状物を濾別した。このゲル状物にエタノール５０ｍ１
を添加し、攪拌後濾過してゲル状物を回収した０回収ゲ
ルを再度エタノール５０−に再び懸濁し、濾過してゲル
状物を回収した０本捏作をさらに３回繰り返した０次に
、蒸留水５０−に懸濁し、濾別した０本捏作を３回繰り
返した後、再度エタノール５０ｍｅに分散した。これを
濾過し、ゲル状物を乾燥後、粉砕し、白色高分子粉末９
．４ｇを得た。

本粉末の６０℃における水への溶解度は水１００ｇに対
し０．００２ｇ以下であった。さらに本粉末を６０℃の
水に１日間浸漬した後の水和ゲルの本粉末に対する重量
比は１４．０であった。

一方、アスペルギルス・オリゼＩＦＯ−４１７６の培養
濾液２０ｄ（α−アミラーゼ０．５０単位、β−アミラ
ーゼ０．９８単位、γ−アミラーゼ１．３０単位／−を
含む）を６℃に冷却し、上記の高分子粉末０．２ｇを添
加し、５　ｒｐｍで２分間攪拌した。これを濾過し濾液
２０−を得た。濾液中のα−アミラーゼ活性、β−アミ
ラーゼ活性、γ−アミラーゼ活性を測定した。

濾液中のα−アミラーゼは０．５０単位／−１β−アミ
ラーゼは０．９７単位／−１Ｔ−アミラーゼは０．０１
単位／−であった。

上記高分子粉末に吸着した酵素量を、高分子粉末との接
触前の酵素濃度から接触後の酵素濃度を減じた値として
計算した。その結果、α−アミラーゼはθ単位／−１β
−アミラーゼは０．０１５単位／ｄ、γ−アミラーゼは
１．２９単位／−−培養濾液、だけ高分子粉末に吸着さ
れたことになる。したがって、培養濾液中に存在したα
−アミラーゼの０％、β−アミラーゼの１％、Ｔ−アミ
ラーゼの９９％が吸着された。

次に、上記の酵素を吸着した高分子粉末を２０ｍｆの容
器に入れ、苛性ソーダでｐＨ８に調節した液４−を添加
し、５　ｒｐｍで攪拌して２分間接触させた。これを３
００Ｏｒｐｍ、　５分間遠心分離して、高分子粉末と上
澄液とに分離した。さらに高分子粉末に水２−を加え懸
濁し、再度、３０００ｒｐ＋＊、　５分間遠心分離して
、洗滌液と高分子粉末とに固液分離した。

上記で得られた上澄液と洗滌液とを合わせ、酵素脱離液
６−を得た。

上記の酵素脱離液の酵素濃度を測定した結果、α−アミ
ラーゼθ単位／−２β−アミラーゼ０．６５単位／−１
γ−アミラーゼ４．２５単位／＠１であった。

従って、α−アミラーゼ０単位（回収率０％）、β−ア
ミラーゼの３．９単位（２％）、γ−アミラーゼ２５．
５単位（９８％）を回収できた。

また、本液中にはプロテアーゼ活性は検出されず、着色
、着臭も認められなかった。かつ、本液中の有機物量及
び無機物量は、原液中の含有量に対し、それぞれ１．５
％、１．４％に減少した。上記により、原液中のγ−ア
ミラーゼを選択的に約３倍に濃縮し、かつ精製できた。

実施例２ マルトース２０ｇに水８０ａｆを添加し、５０℃に加熱
して溶解した。これに４Ｎの苛性カリ３３ｍを添加し、
これを攪拌機と還流冷却器を付した５００１Ｂｌの反応
フラスコに入れた。

次いで、１４０−のエビロクロルヒドリンを加え、２０
ｒｐｍで攪拌しつつ、８０℃で６時間加熱した。

反応終了後、内容物を室温に冷却し、下部の水層中のゲ
ル状物を濾別した。このゲル状物にエタノール５０−を
添加し、攪拌後濾過してゲル状物を回収した。

回収ゲルを再度エタノール５０ｄに懸濁し、濾過してゲ
ル状物を回収した０本捏作をさらに３回繰り返した０次
に、蒸留水５０ｎＩに懸濁し、濾別した。

本操作を３回繰り返した後、再度エタノール５〇−に分
散した。これを濾過し、ゲル状物を乾燥後、粉砕し、白
色の高分子粉末１８．１ｇを得た。

本粉末の６０℃における水への溶解炭は水１００ｇに対
し０．００３ｇ以下であった。さらに本粉末を６０℃の
水に１日間浸漬した後の水和ゲルの本粉末に対する重量
比は１５．２であった。

一方、アスペルギルス・オリゼＩＦＯ−４１７６の培養
濾液２０ｍＺ　（α−アミラーゼ０．５０単位、β−ア
ミラーゼ０．９８単位、γ−アミラーゼ１．３０単位／
−を含む）を６℃に冷却し、上記の高分子粉末０．２ｇ
を添加し、５　ｒｐｍで２分間攪拌した。これを濾過し
、濾液中のα−アミラーゼ活性、β−アミラーゼ活性、
Ｔ−アミラーゼ活性を測定した。

濾液中の各酵素活性を測定した。濾液中のα−アミラー
ゼは０．５０単位／−１β−アミラーゼは０゜８８単位
／−１γ−アミラーゼは０．０１単位／ｍ１であった。

上記高分子粉末に吸着した酵素量を、高分子粉末との接
触前の酵素濃度から接触後の酵素濃度を減じた値として
計算した。その結果、α−アミラーゼはＯ単位／−１β
−アミラーゼは０．１０単位／−１Ｔ−アミラーゼは１
．２９単位／ｄ−培養濾液、だけ高分子粉末に吸着され
たことになる。

したがって、培養濾液中に存在したα−アミラーゼは全
く吸着されず、β−アミラーゼの１０％、γ−アミラー
ゼの９９％が吸着された。

次に、上記め酵素を吸着した高分子粉末を２０−の容器
に入れ、苛性カリでｐＨ８に調節した液４−を添加し、
５　ｒｐｓで攪拌して２分間接触させた。

これを３００Ｏｒｐｍ、　５分間遠心分離して、高分子
粉末と上澄液とに分離した。さらに高分子粉末に水２−
を加え懸濁し、再度、３０００ｒｐｍ＋、　５分間遠心
分離して、洗滌液と高分子粉末とに固液分離した。上記
で得られた上澄液と洗滌液とを合わせ、酵素脱離液６ｍ
ｌを得た。

上記の酵素脱離液の酵素濃度を測定した結果、α−アミ
ラーゼ０単位／−１β−アミラーゼ０．３５単位／−２
Ｔ−アミラーゼ４．１４単位／−であった。

従って、α−アミラーゼ０単位（回収率０％）、β−ア
ミラーゼ２．１単位（１０，７％）、Ｔ−アミラーゼ２
４．８単位（９５％）を回収できた。

また、本液中にはプロテアーゼ活性は検出されず、着色
、着臭も認められなかった。かつ、本液中の有機物量及
び無機物量は、原液中の含有量に対し、それぞれ１．４
％、１．２％に減少した。上記により、原液中のＴ−ア
ミラーゼを選択的に約３．２倍に濃縮し、かつ精製でき
た。

実施例３ マルトトリオース１０ｇに水８０−を添加し、５０℃に
加熱して溶解した。これに４Ｎの苛性ソーダ３３−を添
加し、これを攪拌機と還流冷却器を付した５００−の反
応フラスコに入れた。

次いで、１４０１１ｉのエビロクロルヒドリンを加え、
２０ｒｐｒａで攪拌しつつ、８０℃で６時間加熱した。

反応終了後、内容物を室温に冷却し、下部の水層中のゲ
ル状物を濾別した。このゲル状物にエタノール５０ｙｄ
を添加し、攪拌後濾過してゲル状物を回収した。

回収ゲルを再度エタノール５０−に懸濁し、濾過してゲ
ル状物を回収した０本捏作をさらに３回繰り返した０次
に、蒸留水５０−に懸濁し、濾別した。

本操作を３回繰り返した後、再度エタノール５０ｄに分
散した。これを濾過し、ゲル状物を乾燥後、粉砕し、白
色高分子粉末９．７ｇを得た。

本粉末の６０℃における水への溶解度は水１００ｇに対
し０．００２ｇ以下であった０、さらに本粉末を６０℃
の水に１日間浸漬した後の水和ゲルの本粉末に対する重
量比は１４．８であった。

一方、アスペルギルス・オリゼＩＭＰ−４０７６の培養
濾液２０−（α−アミラーゼ０．５０単位、β−アミラ
ーゼ０．９８単位、Ｔ−アミラーゼ１．３０単位／ｌＢ
１を含む）を６℃に冷却し、上記の高分子粉末０．２ｇ
を添加し、５　ｒｐｍで２分間攪拌した。これを濾過し
、濾液中のα−アミラーゼ活性、β−アミラーゼ活性、
Ｔ−アミラーゼ活性を測定した。

濾液中の各酵素活性を測定した。濾液中のα−アミラー
ゼは０．５０単位／−１β−アミラーゼは０゜６４単位
／−１Ｔ−アミラーゼは０．０３単位／ｄであった。

上記の高分子粉末に吸着した酵素量を、高分子粉末との
接触前の酵素濃度から接触後の酵素濃度を減じた値とし
て計算した。

その結果、α−アミラーゼは０単位／ｄ、β−アミラー
ゼは０．３４単位／−２Ｔ−アミラーゼは１．２７単位
／ｗｌ−培養濾液、たけ高分子粉末に吸着されたことに
なる。

したがって、培養濾液中に存在したα−アミラーゼは全
く吸着されず、β−アミラーゼの３５％、γ−アミラー
ゼの９８％が吸着された。

次に、上記の酵素を吸着した高分子粉末を２０−の容器
に入れ、苛性ソーダでｐＨ８に調節した液４ｍｆを添加
し、５　ｒｐｍで攪拌して２分間接触させた。これを３
００Ｏｒｐｍ、　５分間遠心分離して、高分子粉末と上
澄液とに分離した。さらに高分子粉末に水２−を加えて
懸濁し、再度、３０００ｒｐｍ、　５分間遠心分離して
、洗滌液と高分子粉末とに固液分離した。上記で得られ
た上澄液と洗滌液とを合わせ、酵素脱離液６−を得た。

上記の酵素脱離液の酵素濃度を測定した結果、α−アミ
ラーゼθ単位／−１β−アミラーゼ１．０５単位／Ｔｄ
、Ｔ−アミラーゼ４．１６単位／ｄであった。

従って、α−アミラーゼ０単位（回収率０％）、β−ア
ミラーゼ６．２７単位（３２％）、γ−アミラーゼ２５
．０単位（９６％）全回収できた。

また、本液中にはプロテアーゼ活性は検出されず、着色
、着臭も認められなかった。かつ、本液中の有機物量及
び無機物量は、原液中の含有量に対し、それぞれ１．７
％、１．２％に減少した。上記により、原液中のγ−ア
ミラーゼを選択的に約３．２倍に濃縮し、かつ精製でき
た。

実施例４ マルトテトラオース１ｇに水８−を添加し、５０℃に加
熱して溶解した。これに４Ｎの苛性ソーダ３３ｍを添加
し、これを攪拌機と還流冷却器を付した２００−の反応
フラスコに入れた。

次いで、１５−のエビロクロルヒドリンを加え、２０ｒ
ｐ−で攪拌しつつ、８０℃で６時間加熱した。

反応終了後、内容物を室温に冷却し、下部の水層中のゲ
ル状物を濾別した。このゲル状物にエタノール５０−を
添加し、攪拌後濾過してゲル状物を回収した。

回収ゲルを再度エタノール５０−に懸濁し、濾過してゲ
ル状物を回収した０本捏作をさらに３回繰り返した０次
に、蒸留水５０−にＭ、’ｌｉｌ、、、濾別した。

本操作を３回繰り返した後、再度エタノール５〇−に分
散した。これを濾過し、ゲル状物を乾燥後、粉砕し、白
色高分子粉末０．９０ｇを得た。

本粉末の６０℃における水への溶解度は水１００ｇに対
し０．００１ｇ以下であった。さらに、本粉末を６０℃
の水に１日間浸漬した後の水和ゲルの本粉末に対する重
量比は１３．４であった。

一方、アスペルギルス・オリゼＩＭＰ−４０７６の培養
濾液２０ｍ１（α−アミラーゼ０．５０単位、β−アミ
ラ−ゼ０．９８単位、Ｔ−アミラーゼ１．３０単位／−
を含む）を６℃に冷却し、上記の高分子粉末０．２ｇを
添加し、５　ｒｐｍで２分間攪拌した。

これを濾過し、濾液中のα−アミラーゼ活性、β−アミ
ラーゼ活性、Ｔ−アミラーゼ活性を測定した。

濾液中のα−アミラーゼは０．５０単位／−１β−アミ
ラーゼは０．２９単位／ｒＩｉ、γ−アミラーゼは０゜
０３単位／ｄであった。

上記の高分子粉末に吸着した酵素量を、高分子粉末との
接触前の酵素濃度から接触後の酵素濃度を減じた値とし
て計算した。

その結果、α−アミラーゼはＯ単位／ｄ、β−アミラー
ゼは０．６９単位／−１Ｔ−アミラーゼは１゜２７単位
／−−培養濾液だけ高分子粉末に吸着されたことになる
。

したがって、培養濾液中に存在したα−アミラーゼは全
く吸着されず、β−アミラーゼの７０％、Ｔ−アミラー
ゼの９８％が吸着した。

次に、上記の酵素を吸着した高分子粉末を２０ｗ１の容
器に入れ、苛性ソーダでｐＨ８，２に調節した液４ｒｄ
添加し、５　ｒｐｍで攪拌して２分間接触させた。これ
を３００Ｏｒｐｍ、　５分間遠心分離して、高分子粉末
と上澄液とに分離した。さらに高分子粉末に水２−を加
え懸濁し、再度、３ＱＯＯｒｐｍ、　５分間遠心分離し
て、洗滌液と高分子粉末とに固液分離した。

上記で得られた上澄液と洗滌液とを合わせ、酵素脱離液
６−を得た。

上記の酵素脱離液の酵素濃度を測定した結果、α−アミ
ラーゼ０単位／ａｉ、β−アミラーゼ１．３１単位／ｍ
ｌ、ｒ−アミラーゼ２．０６単位／ｒｎｌであった。

従って、α−アミラーゼ０単位（回収率０％）、β−ア
ミラーゼ７．８４単位（４０，０％）、Ｔ−アミラーゼ
１２．３５単位（９５％）を回収できた。

また、本液中にはプロテアーゼ活性は検出されず、着色
、着臭も認められなかった。かつ、本液中の有機物量及
び無機物量は、原液中の含有量に対し、それぞれ１．７
％、１．３％に減少した。上記により、原液中のγ−ア
ミラーゼを選択的に約９．５倍に濃縮し、かつ精製でき
た。

実施例５ マルトースヘキサオース１０ｇに水９０ｍ１を添加し、
５０℃に加熱して溶解した。これに４Ｎの苛性ソーダ３
３−を添加し、これを攪拌機と還流冷却器を付した２０
０ｄの反応フラスコに入れた。

次いで、１５０ｍ１のエビロクロルヒドリンを加え、２
０ｒｐ＋＊で攪拌しつつ、８０℃で６時間加熱した。

反応終了後、内容物を室温に冷却し、下部の水層中のゲ
ル状物を濾別した。このゲル状物にエタノール５０−を
添加し、攪拌後濾過してゲル状物を回収した。

回収ゲルを再度エタノール５０−に懸濁し、濾過してゲ
ル状物を回収した。本操作をさらに３回繰り返した。次
に、蒸留水５０ｍ（に懸濁し、濾別した。

本操作を３回繰り返した後、再度エタノール５〇−に分
散した。これを濾過し、ゲル状物を乾燥後、粉砕し、白
色高分子粉末９．７ｇを得た。

本粉末の６０℃における水への溶解度は水１００ｇに対
し０．００１ｇ以下であった。さらに、本粉末を６０℃
の水に１日間浸漬した後の水和ゲルの本粉末に対する重
量比は１３，５であった。

一方、アスペルギルス・オリゼＩＭＰ−４０７６の培養
ｔ？ｆｆ１２０ｍＺ　（α−アミラーゼ０．５０単位、
β−アミラーゼ０．９８単位、γ−アミラーゼ１．３０
単位／Ｔｎ１を含む）を６℃に冷却し、５　ｒｐｍで２
分間攪拌した。

これを濾過し、濾液中のα−アミラーゼ活性、β−アミ
ラーゼ活性、ｒ−７ミラーゼ活性を測定した。

上澄液中のα−アミラーゼは０．５０単位／ｄ、β−ア
ミラーゼは０．０２単位／ｍ１、Ｔ−アミラーゼは０．
０３単位／ｄであった。

上記の高分子粉末に吸着した酵素量を、高分子粉末との
接触前の酵素濃度から接触後の酵素濃度を減じた値とし
て計算した。その結果、α−アミラーゼは０単位／−１
β−アミラーゼは０．９６単位／ｍＺ、γ−アミラーゼ
は１．２７単位／ｄ−培養濾液だけ高分子粉末に吸着さ
れたことになる。

したがって、培養濾液中に存在したα−アミラーゼは吸
着されず、β−アミラーゼは９０％、Ｔ−アミラーゼの
９８％が吸着された。

次に、上記の酵素を吸着した高分子粉末を２０ｍｆの容
器に入れ、苛性ソーダでｐＨ８，２に調節した液４ｄを
添加し、５　ｒｐｓ＋で攪拌して２分間接触させた。こ
れを３００Ｏｒｐｍ　、５分間遠心分離して、高分子粉
末と上澄液とに分離した。さらに高分子粉末に水２−を
加えて懸濁し、再度、３０００ｒｐｍ、　５分間遠心分
離して、洗滌液と高分子粉末とに固液分離した。上記で
得られた上澄液と洗滌液とを合わせ、酵素脱離液６−を
得た。

上記の酵素脱離液の酵素濃度を測定した結果、α−アミ
ラーゼＯ単位／−１β−アミラーゼ２５．５単位／−１
γ−アミラーゼ４１．７車位／ｗｌであった。

従って、α−アミラーゼＯ単位（回収率θ％）、β−ア
ミラーゼ１５．３単位（７８，０％）、Ｔ−アミラーゼ
２５．０単位（９６，０％）を回収できた。

また、本液中にはプロテアーゼ活性は検出されず、着色
、着臭も認められなかった。かつ、本液中の有機物量及
び無機物量は、原液中の含有量に対し、それぞれ１．８
％、１．９％に減少した。上記により、原液中のＴ−ア
ミラーゼを選択的に約１９゜２倍に濃縮し、かつ精製し
た。

次に、本発明吸着剤の代わりにα−アミラーゼ吸着剤と
して公知のアミロース（馬鈴薯起源）を用いてα−アミ
ラーゼ、β−アミラーゼ及びｒ　−アミラーゼの吸着実
験を比較例として実施した。

比較例１ 実施例と同一ロンドのアスペルギルス・オリゼＩＦＯ−
４１７６の培養液４０ａ！　（α−アミラーゼ０．５０
単位、β−アミラーゼ０．９８単位、Ｔ−アミラーゼ１
．３０単位／−を含む）を６℃に冷却し、アミロース粉
末０．２ｇを添加し、５　ｒｐｍで２分間攪拌して接触
させた。これを濾過し、濾液中のα−アミラーゼ活性、
β−アミラーゼ活性及びγ−アミラーゼ活性を測定した
。

濾液中のα−アミラーゼは０．０２単位／−１β−アミ
ラーゼは０．９６単位／ｄ、γ−アミラーゼは１゜２９
単位／−であった。上記アミロース粉末に吸着した酵素
量を、アミロースとの接触前の酵素濃度から接触後の酵
素濃度を減じた値として計算した。

その結果、培養濾液中に存在したα−アミラーゼはその
９６％（０，４８単位／ｗｌ）、β−アミラーゼはその
２％（０，０２単位／−）が吸着され、Ｔ−アミラーゼ
は１％（０，０１単位／−）と事実上α−アミラーゼ以
外は吸着されなかった。

〔発明の効果〕

本発明は、グルコースのα−１，４ホモオリゴマを分子
間架橋してなる新規な三次元架橋高分子物質を提供する
ものである。そして、この三次元架橋化高分子物質は酵
素生産菌の培養濾液など多種多様の有機性、無機性の不
純物及び他の酵素を含む液中から、β−アミラーゼ、Ｔ
−アミラーゼを選択的に吸着分離することができる。特
に、プロテアーゼなどの酵素精製の際に不都合な酵素類
を除去することができる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、グルコースのα−１，４ホモオリゴマを分子間架橋
   してなることを特徴とする三次元架橋化高分子物質。 ２、グルコースのα−１，４ホモオリゴマの重合度が２
   〜６であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載
   の三次元架橋化高分子物質。 ３、グルコースのα−１，４ホモオリゴマの重合度が２
   であることを特徴とする特許請求の範囲第２項記載の三
   次元架橋化高分子物質。 ４、グルコースのα−１，４ホモオリゴマの重合度が３
   〜６であることを特徴とする特許請求の範囲第２項記載
   の三次元架橋化高分子物質。 ５、氷点以上６０℃以下の温度範囲において、１００ｇ
   の水に対する溶解度が０．００１ｇ以下であることを特
   徴とする特許請求の範囲第１〜第４項記載の三次元架橋
   化高分子物質。 ６、グルコースのα−１，４ホモオリゴマに架橋剤を加
   え反応させ分子間架橋させて三次元マトリックスを形成
   させることを特徴とする三次元架橋化高分子物質の製造
   方法。 ７、架橋剤がエピハロゲンであることを特徴とする特許
   請求の範囲第６項記載の三次元架橋化高分子物質の製造
   方法。 ８、エピハロゲンがエピクロルヒドリンであることを特
   徴とする特許請求の範囲第７項記載の三次元架橋化高分
   子物質の製造方法。 ９、架橋剤を加えた反応により、氷点以上６０℃以下の
   温度範囲ににおいて、１００ｇの水に対する溶解度が０
   ．００１ｇ以下になるように分子間架橋させることを特
   徴とする特許請求の範囲第６項記載の三次元架橋化高分
   子物質の製造方法。