JPS6360863B2 - - Google Patents
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- JPS6360863B2 JPS6360863B2 JP55139567A JP13956780A JPS6360863B2 JP S6360863 B2 JPS6360863 B2 JP S6360863B2 JP 55139567 A JP55139567 A JP 55139567A JP 13956780 A JP13956780 A JP 13956780A JP S6360863 B2 JPS6360863 B2 JP S6360863B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- flow path
- switching
- sampling
- diluted
- liquid
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- Expired
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/38—Diluting, dispersing or mixing samples
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- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、反応槽内における進行する酵素反応
を追跡するため、一定の時間間隔毎に反応溶液を
サンプリングし、液体クロマトグラフイーで反応
液成分を分析するために、サンプリングした反応
溶液を希釈し、該液体クロマトグラフ装置に希釈
サンプルを注入するための希釈サンプリング方法
に関するものである。
を追跡するため、一定の時間間隔毎に反応溶液を
サンプリングし、液体クロマトグラフイーで反応
液成分を分析するために、サンプリングした反応
溶液を希釈し、該液体クロマトグラフ装置に希釈
サンプルを注入するための希釈サンプリング方法
に関するものである。
酵素反応のごとき化学反応において、反応の進
行状況を詳細に調べるためには、反応溶液の複数
成分の濃度を一定時間毎に分析することが必要で
ある。このため従来行われた方法によれば、一定
時間毎にピペツトを用いて一定量ずつの反応溶液
を試験管に採取し、該試験管内に希釈溶液、失活
剤、除タンパク質などを加えよく混合した後、沈
澱物を除いた上清液を液体クロマトグラフイーで
分析する。該混合液の液体クロマトグラフイーで
分析する。該混合液の液体クロマトグラフ装置へ
の注入は、マイクロシリンジあるいは液体クロマ
トグラフ用オートサンプラーを用いて行う。しか
し、前記いずれの注入法を用いる場合にも、反応
溶液のサンプリングおよび前処理が手操作に依存
するため反応液を採取するタイミングや希釈率な
どにより不確定要素がはいりやすく、その上、ピ
ペツトによる採取の際に微生物などの異物も反応
槽に混入する可能性が大きい等の問題があり、ま
た自動化が困難である。
行状況を詳細に調べるためには、反応溶液の複数
成分の濃度を一定時間毎に分析することが必要で
ある。このため従来行われた方法によれば、一定
時間毎にピペツトを用いて一定量ずつの反応溶液
を試験管に採取し、該試験管内に希釈溶液、失活
剤、除タンパク質などを加えよく混合した後、沈
澱物を除いた上清液を液体クロマトグラフイーで
分析する。該混合液の液体クロマトグラフイーで
分析する。該混合液の液体クロマトグラフ装置へ
の注入は、マイクロシリンジあるいは液体クロマ
トグラフ用オートサンプラーを用いて行う。しか
し、前記いずれの注入法を用いる場合にも、反応
溶液のサンプリングおよび前処理が手操作に依存
するため反応液を採取するタイミングや希釈率な
どにより不確定要素がはいりやすく、その上、ピ
ペツトによる採取の際に微生物などの異物も反応
槽に混入する可能性が大きい等の問題があり、ま
た自動化が困難である。
本発明は、前記した難点を除くため、自動的に
反応槽から反応溶液をサンプリングし、液体クロ
マトグラフ装置に希釈サンプルを注入することを
可能にした希釈サンプリング方法を提供すること
にある。
反応槽から反応溶液をサンプリングし、液体クロ
マトグラフ装置に希釈サンプルを注入することを
可能にした希釈サンプリング方法を提供すること
にある。
本発明に係わる希釈サンプリング方法は、複数
のサンプリングバルブ、複数の流路切換バルブ、
撹拌容器、送液ポンプ、ラインフイルター、配管
等で構成される密閉流路を具備し、反応槽に接続
されたサンプリングバルブによりサンプリングさ
れた定量の反応液を密閉流路内で希釈溶液で均一
に希釈し、液体クロマトグラフ装置に接続された
サンプリングバルブにより定量の希釈試料を液体
クロマトグラフ装置に注入し、かかる後前記複数
の流路切換バルブの切換えと送液ポンプの反転を
組合せて洗浄後、密閉流路内の溶液を新鮮な希釈
溶液で置換することを特徴とする、希釈サンプリ
ング方法に係わるものである。
のサンプリングバルブ、複数の流路切換バルブ、
撹拌容器、送液ポンプ、ラインフイルター、配管
等で構成される密閉流路を具備し、反応槽に接続
されたサンプリングバルブによりサンプリングさ
れた定量の反応液を密閉流路内で希釈溶液で均一
に希釈し、液体クロマトグラフ装置に接続された
サンプリングバルブにより定量の希釈試料を液体
クロマトグラフ装置に注入し、かかる後前記複数
の流路切換バルブの切換えと送液ポンプの反転を
組合せて洗浄後、密閉流路内の溶液を新鮮な希釈
溶液で置換することを特徴とする、希釈サンプリ
ング方法に係わるものである。
以下、本発明の一実施例を示す図面により、更
に説明する。
に説明する。
第１図において、反応槽Ａ、送液ポンプP1、
サンプリングバルブS1は配管によつて接続され、
該配管内を反応溶液が絶えず循環する。サンプリ
ングバルブS1を切換えるとサンプルループL1内
に保持された反応溶液が密閉流路Ｔ内にサンプリ
ングされ、該反応溶液がサンプリングバルブS1、
流路切換バルブV2、撹拌容器Ｖ、送液ポンプR1，
R2、流路切換バルブV1、ラインフイルターＦ、
サンプリングバルブS3等を通過し、密閉流路Ｔ内
を１回から10回循環する間に、該反応溶液はあら
かじめ撹拌容器Ｖおよび密閉流路Ｔを満たしてい
た希釈溶液によつて均一に希釈される。ラインフ
イルターＦは密閉流路Ｔ内に存在する不溶性固定
物を除去する目的で、流路切換バルブV1とサン
プリングバルブS3の間に挿入される。均一に希釈
されたサンプル溶液はサンプリングバルブS3を切
換え、サンプルループL3内に該希釈サンプル溶
液を保持した後、再び該サンプリングバルブS3を
戻すことにより、液体クロマトグラフ装置H1の
流路に注入される。
サンプリングバルブS1は配管によつて接続され、
該配管内を反応溶液が絶えず循環する。サンプリ
ングバルブS1を切換えるとサンプルループL1内
に保持された反応溶液が密閉流路Ｔ内にサンプリ
ングされ、該反応溶液がサンプリングバルブS1、
流路切換バルブV2、撹拌容器Ｖ、送液ポンプR1，
R2、流路切換バルブV1、ラインフイルターＦ、
サンプリングバルブS3等を通過し、密閉流路Ｔ内
を１回から10回循環する間に、該反応溶液はあら
かじめ撹拌容器Ｖおよび密閉流路Ｔを満たしてい
た希釈溶液によつて均一に希釈される。ラインフ
イルターＦは密閉流路Ｔ内に存在する不溶性固定
物を除去する目的で、流路切換バルブV1とサン
プリングバルブS3の間に挿入される。均一に希釈
されたサンプル溶液はサンプリングバルブS3を切
換え、サンプルループL3内に該希釈サンプル溶
液を保持した後、再び該サンプリングバルブS3を
戻すことにより、液体クロマトグラフ装置H1の
流路に注入される。
液体クロマトグラフ装置H1に希釈サンプル溶
液を注入後、以下のように密閉流路Ｔ内の溶液を
新鮮な希釈溶液で置換する。すなわち、流路切換
バルブV2を切換え、かつ流路切換バルブV1をポ
ジシヨン２に設定し、撹拌容器Ｖの中の溶液を廃
液口W1から捨て、次に流路切換バルブV1をポジ
シヨン３に戻すと同時に該送液ポンプR1，R2を
反転し、洗浄溶液容器B2からの洗浄液で密閉流
路Ｔを洗浄しつつ撹拌容器Ｖを充満する。前記の
廃液操作と充満操作を交互に１回から５回位くり
返して行つた後、サンプリングバルブS1を基準位
置にもどし、再び撹拌容器Ｖの中の洗浄溶液を廃
液口W1から捨て、次に流路切換バルブV1をポジ
シヨン１に設定すると同時に送液ポンプR1，R2
を反転させ、希釈溶液容器B1からの失活剤や除
タンパク質剤等を含む希釈溶液で撹拌容器Ｖを充
満する。流路切換バルブV2を基準位置にもどし、
送液ポンプR1，R2を正転させると、次のサンプ
ル溶液を反転槽から受入れる準備が完了である。
本実施例において例えばコンピユーターであるい
はシークエンスコントローラー等の時計内蔵の制
御装置は、前記操作手順に従つて、決められた時
間に決められた操作に応じた電気信号を出力し、
該電気信号に適合する駆動部を持つ複数のバル
ブ、送液ポンプを操作する。
液を注入後、以下のように密閉流路Ｔ内の溶液を
新鮮な希釈溶液で置換する。すなわち、流路切換
バルブV2を切換え、かつ流路切換バルブV1をポ
ジシヨン２に設定し、撹拌容器Ｖの中の溶液を廃
液口W1から捨て、次に流路切換バルブV1をポジ
シヨン３に戻すと同時に該送液ポンプR1，R2を
反転し、洗浄溶液容器B2からの洗浄液で密閉流
路Ｔを洗浄しつつ撹拌容器Ｖを充満する。前記の
廃液操作と充満操作を交互に１回から５回位くり
返して行つた後、サンプリングバルブS1を基準位
置にもどし、再び撹拌容器Ｖの中の洗浄溶液を廃
液口W1から捨て、次に流路切換バルブV1をポジ
シヨン１に設定すると同時に送液ポンプR1，R2
を反転させ、希釈溶液容器B1からの失活剤や除
タンパク質剤等を含む希釈溶液で撹拌容器Ｖを充
満する。流路切換バルブV2を基準位置にもどし、
送液ポンプR1，R2を正転させると、次のサンプ
ル溶液を反転槽から受入れる準備が完了である。
本実施例において例えばコンピユーターであるい
はシークエンスコントローラー等の時計内蔵の制
御装置は、前記操作手順に従つて、決められた時
間に決められた操作に応じた電気信号を出力し、
該電気信号に適合する駆動部を持つ複数のバル
ブ、送液ポンプを操作する。
第２図は第１図の実施例に、更にサンプリング
バルブS2、送液ポンプP2、標準サンプル溶液B3、
サンプリングバルブS4、液体クロマトグラフ装置
H2を追加したもので、反応溶液成分の濃度変化
の速度が、液体クロマトグラフ装置H1の分析速
度を超えているような試料の場合、２台の液体ク
ロマトグラフ装置に交互に試料注入をし、並行し
て分析する場合の希釈サンプリング装置である。
また、同じ試料を２台の液体クロマトグラフ装置
H1とH2で別々の条件で分析し、分離能、検出の
ダイナミツクレンジ、分析可能な成分数等を向上
させることが可能である。このように多目的に液
体クロマトグラフ装置を更に持続することは可能
である。液体クロマトグラムの分析成分の溶出位
置、溶出強度は各液体クロマトグラフ装置H1，
H2により少々異なるため、それぞれの装置の特
性差を補正するため、同一の標準サンプルを複数
の液体クロマトグラフ装置であらかじめ分析し、
補正係数を求めておくことが好ましく、本実施例
では標準サンプル用のサンプリングバルブを有す
る。
バルブS2、送液ポンプP2、標準サンプル溶液B3、
サンプリングバルブS4、液体クロマトグラフ装置
H2を追加したもので、反応溶液成分の濃度変化
の速度が、液体クロマトグラフ装置H1の分析速
度を超えているような試料の場合、２台の液体ク
ロマトグラフ装置に交互に試料注入をし、並行し
て分析する場合の希釈サンプリング装置である。
また、同じ試料を２台の液体クロマトグラフ装置
H1とH2で別々の条件で分析し、分離能、検出の
ダイナミツクレンジ、分析可能な成分数等を向上
させることが可能である。このように多目的に液
体クロマトグラフ装置を更に持続することは可能
である。液体クロマトグラムの分析成分の溶出位
置、溶出強度は各液体クロマトグラフ装置H1，
H2により少々異なるため、それぞれの装置の特
性差を補正するため、同一の標準サンプルを複数
の液体クロマトグラフ装置であらかじめ分析し、
補正係数を求めておくことが好ましく、本実施例
では標準サンプル用のサンプリングバルブを有す
る。
希釈溶液は目的とする試料により適宜選ばれる
が、通常は、水、緩衝溶液、有機溶媒、失活剤溶
液、除タンパク質剤溶液等の中から、均一あるい
はスラリー状の反応溶液を均一に溶かすことがで
き、かつ液体クロマトグラフの溶離液と類似した
溶液でクロマトグラムに悪影響を与えないものを
選択して用いる。洗浄溶液は通常は水、緩衝溶
液、有機溶媒等で、反応溶液および希釈溶液と自
由に混合し、反応槽Ａの中で進行する酵素反応に
全く影響を与えない溶液が好ましい。標準サンプ
ル溶液は反応溶液と同じ基質と生成物を含み、酵
素を除いた溶液が好ましい。サンプリングバルブ
S1，S2のサンプリングループ容量は10μ以上１
ml以下、サンプリングバルブS3，S4のサンプリン
グループ容量は10μ以上100μ以下がよく、撹
拌容器Ｖの容積は0.5ml以上10ml以下がよい。希
釈比はサンプリングループ容量と撹拌容器の容積
とから求められるが、反応溶液の成分濃度と検出
器の感度によつて適宜選ばれる。送液ポンプＲ、
P1，P2は１分当りの送液量が10ml以上1000ml以
下のものでよい。液体クロマトグラフ装置H1，
H2は送液ポンプ、バルスダンパー、圧力計、分
離カラム、クロマトグラフ用検出器、レコーダー
等を具備した通常のもので、ゲル過モード、分
配吸着モード等によつて分析が行われる。液体ク
ロマトグラフイーの溶離液は、分析する試料によ
り適宜選ばれるが、例えば水、緩衝溶液、メタノ
ール、アセトン、アセトニトリルなどが好まし
い。
が、通常は、水、緩衝溶液、有機溶媒、失活剤溶
液、除タンパク質剤溶液等の中から、均一あるい
はスラリー状の反応溶液を均一に溶かすことがで
き、かつ液体クロマトグラフの溶離液と類似した
溶液でクロマトグラムに悪影響を与えないものを
選択して用いる。洗浄溶液は通常は水、緩衝溶
液、有機溶媒等で、反応溶液および希釈溶液と自
由に混合し、反応槽Ａの中で進行する酵素反応に
全く影響を与えない溶液が好ましい。標準サンプ
ル溶液は反応溶液と同じ基質と生成物を含み、酵
素を除いた溶液が好ましい。サンプリングバルブ
S1，S2のサンプリングループ容量は10μ以上１
ml以下、サンプリングバルブS3，S4のサンプリン
グループ容量は10μ以上100μ以下がよく、撹
拌容器Ｖの容積は0.5ml以上10ml以下がよい。希
釈比はサンプリングループ容量と撹拌容器の容積
とから求められるが、反応溶液の成分濃度と検出
器の感度によつて適宜選ばれる。送液ポンプＲ、
P1，P2は１分当りの送液量が10ml以上1000ml以
下のものでよい。液体クロマトグラフ装置H1，
H2は送液ポンプ、バルスダンパー、圧力計、分
離カラム、クロマトグラフ用検出器、レコーダー
等を具備した通常のもので、ゲル過モード、分
配吸着モード等によつて分析が行われる。液体ク
ロマトグラフイーの溶離液は、分析する試料によ
り適宜選ばれるが、例えば水、緩衝溶液、メタノ
ール、アセトン、アセトニトリルなどが好まし
い。
具体的な例として、プロテアーぜによりペプチ
ド分解合成反応の測定では、水―アセトニトリル
混合溶媒系における逆相クロマトグラフイーによ
つてペプチドを分析するため、希釈溶液と溶離液
は共に水―アセトニトリル混合溶媒、洗浄液は水
―アセトニトリル混合溶媒あるいは純水がよい。
ド分解合成反応の測定では、水―アセトニトリル
混合溶媒系における逆相クロマトグラフイーによ
つてペプチドを分析するため、希釈溶液と溶離液
は共に水―アセトニトリル混合溶媒、洗浄液は水
―アセトニトリル混合溶媒あるいは純水がよい。
本発明による希釈サンプリング方法を用いれ
ば、該希釈サンプリング装置は死体積を全く持た
ないため、反応槽から新鮮な反応溶液を微量だけ
損失なくサンプリングでき、さらに失活剤を含む
希釈溶液を用いた場合にはサンプル溶液を希釈す
ると同時に酵素活性を停止させることが可能にな
る等の利点を有する。また、反応溶液がスラリー
状の場合にも希釈溶液を正しく選択することによ
り、スラリーを均一に溶解することも可能であ
り、例えばペプチドの溶解に水―アセトニトリル
混合溶媒が用いられる。
ば、該希釈サンプリング装置は死体積を全く持た
ないため、反応槽から新鮮な反応溶液を微量だけ
損失なくサンプリングでき、さらに失活剤を含む
希釈溶液を用いた場合にはサンプル溶液を希釈す
ると同時に酵素活性を停止させることが可能にな
る等の利点を有する。また、反応溶液がスラリー
状の場合にも希釈溶液を正しく選択することによ
り、スラリーを均一に溶解することも可能であ
り、例えばペプチドの溶解に水―アセトニトリル
混合溶媒が用いられる。
第１図と第２図は本発明の各実施例を示す希釈
サンプリング方法の構成をそれぞれ示すブロツク
図である。 S1，S2，S3，S4…サンプリングバルブ、L1，
L2，L3，L4…サンプリングループ、V1，V2…流
路切換バルブ、P1，P2…送液ポンプ、R1，R2…
送液ポンプ、Ｆ…ラインフイルター、Ａ…反応
槽、Ｖ…撹拌容器、Ｍ…マグネチツクスタラー、
B1…希釈溶液容器、B2…洗浄溶液容器、B3…標
準サンプル、Ｔ…密閉流路、H1，H2…液体クロ
マトグラフ装置、W1，W2…廃液口。
サンプリング方法の構成をそれぞれ示すブロツク
図である。 S1，S2，S3，S4…サンプリングバルブ、L1，
L2，L3，L4…サンプリングループ、V1，V2…流
路切換バルブ、P1，P2…送液ポンプ、R1，R2…
送液ポンプ、Ｆ…ラインフイルター、Ａ…反応
槽、Ｖ…撹拌容器、Ｍ…マグネチツクスタラー、
B1…希釈溶液容器、B2…洗浄溶液容器、B3…標
準サンプル、Ｔ…密閉流路、H1，H2…液体クロ
マトグラフ装置、W1，W2…廃液口。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 酵素反応における反応溶液成分を希釈サンプ
リングする方法において、 反応槽からの反応液を一定量保持させるた
め、サンプリングバルブのサンプリングループ
に反応液を絶えず循環し、 該サンプリングバルブを切換えることによ
り、サンプリングループ内に保持された反応液
をラインフイルター、撹拌機、複数の流路切換
えバルブおよび送液ポンプ等からなる密閉流路
内で希釈溶液により均一に希釈し、 液体クロマトグラフ装置に供給し、 該複数の切換バルブを切換えて、洗浄溶液容
器からの流路を該密閉流路の一点に接続し、廃
液口を該密閉流路の一点に接続し、それによつ
て該密閉流路内を洗浄液で洗浄し、次に該複数
の切換バルブを切換えて、希釈溶液容器からの
流路を該密閉流路の一点に接続し、廃液口を該
密閉流路の一点に接続し、それによつて該密閉
流路内を希釈溶液で置換することを特徴とする
希釈サンプリング方法。 ２ 工程を行つた後、さらに工程ないしを
反復する特許請求の範囲第１項記載の希釈サンプ
リング方法。 ３ 制御装置の多点外部出力信号の切換えによつ
てそれぞれ操作される複数のバルブ切換駆動部と
該信号の切換えによつて操作される送液方向の反
転機能を有する送液ポンプを具備し、該制御装置
の外部出力信号により、順次制御が可能である特
許請求の範囲第１項又は第２項記載の希釈サンプ
リング方法。 ４ 反応槽に接続されたサンプリングバルブ、液
体クロマトグラフ装置に接続されたサンプリング
バルブ、複数の流路切換バルブ、撹拌容器、送液
ポンプ、ラインフイルター、配管等により構成さ
れる密閉流路を具備し、前記反応槽に接続された
サンプリングバルブの切換えで該反応槽と該サン
プリングバルブ間を送液ポンプにより絶えず循環
している反応溶液から該切換えの瞬間にサンプリ
ングループ内に保持されていた部分をサンプリン
グし、該サンプルを密閉流路内で希釈溶液で均一
に希釈した後、液体クロマトグラフ装置に接続さ
れたサンプリングバルブの切換えにより、一定量
の希釈サンプル溶液を液体クロマトグラフ装置に
供給し、さらに該複数の切換バルブを切換えて、
洗浄溶液容器からの流路を該密閉流路の一点に接
続し、廃液口を該密閉流路の一点に接続し、それ
によつて該密閉流路内を洗浄液で洗浄し、次に該
複数の切換バルブを切換えて、希釈溶液容器から
の流路を該密閉流路の一点に接続し、廃液口を該
密閉流路の一点に接続し、それによつて該密閉流
路内を希釈溶液で置換することを特徴とする希釈
サンプリング方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13956780A JPS5764143A (en) | 1980-10-06 | 1980-10-06 | Dilution sampling method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13956780A JPS5764143A (en) | 1980-10-06 | 1980-10-06 | Dilution sampling method |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5764143A JPS5764143A (en) | 1982-04-19 |
| JPS6360863B2 true JPS6360863B2 (ja) | 1988-11-25 |
Family
ID=15248267
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13956780A Granted JPS5764143A (en) | 1980-10-06 | 1980-10-06 | Dilution sampling method |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5764143A (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6192855U (ja) * | 1984-11-21 | 1986-06-16 | ||
| JPS61124850A (ja) * | 1984-11-21 | 1986-06-12 | Eruma Kogaku Kk | 超純水の不純物測定装置 |
| JPS61190863U (ja) * | 1985-05-21 | 1986-11-27 | ||
| CN108627657A (zh) * | 2018-01-18 | 2018-10-09 | 重庆中元汇吉生物技术有限公司 | 一种液体路径系统、免疫定量分析仪及其控制方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5139586B2 (ja) * | 1973-07-02 | 1976-10-28 |
-
1980
- 1980-10-06 JP JP13956780A patent/JPS5764143A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5764143A (en) | 1982-04-19 |
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