JPS6363383A - 粉末カタラ−ゼの製造法 - Google Patents
粉末カタラ−ゼの製造法Info
- Publication number
- JPS6363383A JPS6363383A JP20659586A JP20659586A JPS6363383A JP S6363383 A JPS6363383 A JP S6363383A JP 20659586 A JP20659586 A JP 20659586A JP 20659586 A JP20659586 A JP 20659586A JP S6363383 A JPS6363383 A JP S6363383A
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- JP
- Japan
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- catalase
- freeze
- drying
- yeast
- added
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- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、粉末カタラーゼの製法に関し、更に詳しくは
カタラーゼ含有溶ａｔ−凍結乾燥させて安定な粉末力タ
ラーゼヲ製造する方法に関する。
カタラーゼ含有溶ａｔ−凍結乾燥させて安定な粉末力タ
ラーゼヲ製造する方法に関する。
カタラーゼは過酸化水素を水と機素とに分解する酵素で
、一部の嫌気性菌を除き殆んど全ての生物体に広く存在
し、生体機能の維持にかかせない１喪な酵素の一つであ
る。
、一部の嫌気性菌を除き殆んど全ての生物体に広く存在
し、生体機能の維持にかかせない１喪な酵素の一つであ
る。
カタラーゼは溶液状や粉末状の酵素製剤として、臨床分
析用、食品加工用或いはその他の過酸化水素を分解する
必要のある産業分野において利用されている。
析用、食品加工用或いはその他の過酸化水素を分解する
必要のある産業分野において利用されている。
通常、カタラーゼは牛、豚、馬などの動物の臓器例えば
肝臓や赤血球などから抽出されるが、抽出されたカタラ
ーゼは非常に不安定で容易に失活してしまう。そこで、
従来はカタラーゼの抽出液に安定剤としてアルコールや
塩類等を添加してカタラーゼ含有溶液として提供されて
い九、シかしながら、用途上粉末状のカタラーゼ製剤が
必要な場合もある。
肝臓や赤血球などから抽出されるが、抽出されたカタラ
ーゼは非常に不安定で容易に失活してしまう。そこで、
従来はカタラーゼの抽出液に安定剤としてアルコールや
塩類等を添加してカタラーゼ含有溶液として提供されて
い九、シかしながら、用途上粉末状のカタラーゼ製剤が
必要な場合もある。
多くの酵素において粉末製剤として凍結乾燥製剤が製造
されているが、カタラーゼは凍結乾燥中および凍結乾燥
後の保管中に失活が著しく、その交めカタラーゼの製剤
化についてＨＭ乾燥操作は不適とされてい穴、この失活
を防止するために、糖類、グリセリン、無機塩類など種
々の化合物を安定剤として添加がなされて＠たが十分な
成果を挙げるには至っていなかった。
されているが、カタラーゼは凍結乾燥中および凍結乾燥
後の保管中に失活が著しく、その交めカタラーゼの製剤
化についてＨＭ乾燥操作は不適とされてい穴、この失活
を防止するために、糖類、グリセリン、無機塩類など種
々の化合物を安定剤として添加がなされて＠たが十分な
成果を挙げるには至っていなかった。
そこで特開昭５８−１０１６９０号においては、凍結乾
燥ではなく、カタラーゼ活性？保有している乾燥微生物
細胞をカタラーゼ含有水溶液に浸漬させてカタラーゼを
捕集させｔ後これをア七トン乾燥させて粉末化させる方
法がとられている。
燥ではなく、カタラーゼ活性？保有している乾燥微生物
細胞をカタラーゼ含有水溶液に浸漬させてカタラーゼを
捕集させｔ後これをア七トン乾燥させて粉末化させる方
法がとられている。
前記アセトン乾燥粉床も広く利用されるが、使用されて
いる乾燥微生物細胞が増殖力を残しており、この方法に
よって得られたカタラーゼ粉末？使用した場合には適当
な処置ケして細胞増殖？抑えなければならなかった。
いる乾燥微生物細胞が増殖力を残しており、この方法に
よって得られたカタラーゼ粉末？使用した場合には適当
な処置ケして細胞増殖？抑えなければならなかった。
これに対して、安定で保存性のよい凍結乾燥粉末カタラ
ーゼが得られ比ならば、上記の欠点がなくなるばかりで
なく、他の凍結乾燥可能な酵素やその他の物質との配合
物？凍結乾燥することができるので利用価値が一層高ま
るものである。そこでカタラーゼの凍結乾燥粉末の構造
が要望されてい九。
ーゼが得られ比ならば、上記の欠点がなくなるばかりで
なく、他の凍結乾燥可能な酵素やその他の物質との配合
物？凍結乾燥することができるので利用価値が一層高ま
るものである。そこでカタラーゼの凍結乾燥粉末の構造
が要望されてい九。
しかしながら、溶液状態におけるカタラーゼの安定化と
、凍結乾燥時まｔは凍結乾燥品としてのカタラーゼの安
定化とは根本的に異なるところがあった。即ち、凍結乾
燥時および裏品では、真空中での水の昇華に伴なう高次
構造の変化、空気との接触による活性部位の酸化など溶
液中ではおこり得ない原因がある。この交め、カタラー
ゼｒ含む直結乾燥粉末の製造は困難であった。
、凍結乾燥時まｔは凍結乾燥品としてのカタラーゼの安
定化とは根本的に異なるところがあった。即ち、凍結乾
燥時および裏品では、真空中での水の昇華に伴なう高次
構造の変化、空気との接触による活性部位の酸化など溶
液中ではおこり得ない原因がある。この交め、カタラー
ゼｒ含む直結乾燥粉末の製造は困難であった。
〔問題点？解決する１こめの手段〕
不発明者等は、凍結乾燥時および凍結乾燥製品の保管中
のカタラーゼの失活を同時に防ぐ方法を得る穴め、凍結
乾燥処理前にカタラーゼの安定化の念めの保鏝物質ケ加
え、混合した後凍結乾燥処理？行なうこと勿考え、保護
物質について広く様々な物について検討した結果、酵母
菌体を存在させるとカタラーゼが凍結乾燥に対して極め
て安定化されること？見出して本発明？完成した。
のカタラーゼの失活を同時に防ぐ方法を得る穴め、凍結
乾燥処理前にカタラーゼの安定化の念めの保鏝物質ケ加
え、混合した後凍結乾燥処理？行なうこと勿考え、保護
物質について広く様々な物について検討した結果、酵母
菌体を存在させるとカタラーゼが凍結乾燥に対して極め
て安定化されること？見出して本発明？完成した。
即ち、本発明は、カタラーゼ含有水浴τ仮に酵母の生菌
体ま几は死菌体全添加混合した後凍結乾燥することに＃
ＰｇＬとする粉末カタラーゼの製造性でめる。
体ま几は死菌体全添加混合した後凍結乾燥することに＃
ＰｇＬとする粉末カタラーゼの製造性でめる。
本発明の対象とするカタラーゼの起源は、動物体、植物
体、微生物体のいずれのものでもよく、また使用される
酵母はとくに限定はなく、通常は入手し易い・９ン酵母
、ビール酵母、サケ酵母などが使用される。使用菌体は
生菌体でも死菌体でもよいが、生菌体では湿菌体であっ
ても乾燥菌体であっても凍結乾燥後も増殖全する可能性
が残るので、死菌体の方が好ましい。
体、微生物体のいずれのものでもよく、また使用される
酵母はとくに限定はなく、通常は入手し易い・９ン酵母
、ビール酵母、サケ酵母などが使用される。使用菌体は
生菌体でも死菌体でもよいが、生菌体では湿菌体であっ
ても乾燥菌体であっても凍結乾燥後も増殖全する可能性
が残るので、死菌体の方が好ましい。
本発明に使用されるカタラーゼ含有水浴′ＷＬは、動植
物体または微生物体よりカタラーゼを抽出しｔ粗抽出液
であってもよいし、また更に精製された分画であっても
よい。
物体または微生物体よりカタラーゼを抽出しｔ粗抽出液
であってもよいし、また更に精製された分画であっても
よい。
本発明は、例えばカタラーゼ含有水溶液に醪母菌体七添
加し、攪拌等の方法で均一に分散し次後常法により凍結
乾燥処理に付すといり極めて容易な操作で実施すること
ができる。
加し、攪拌等の方法で均一に分散し次後常法により凍結
乾燥処理に付すといり極めて容易な操作で実施すること
ができる。
次に参考例および実施例をあげて本発明を具体的に説明
するが、本発明はこれによって限定てれるものではない
。
するが、本発明はこれによって限定てれるものではない
。
参考例１ カタラーゼの抽出方法
豚の肝臓１ｏｙ２サイレントカツターで細切し、水１０
Ｊｔ−加えた後ホモノナイブ−にかけた。得られた懸濁
液にアセトン１６７加え、遠心分離して上清２８！を採
取した０次にこれに更にアセトン１２ｊ’（加え、遠心
分離して沈澱？捕集した。この沈澱を水７．５Ｊに分散
させ、フィルタープレスに工り濾過し、Ｆ液７！を得九
。このＦ液に更に水を加えて全量ｒ１０！とじた後メン
ブレンフィルター七通過させて除目し、これをカタラー
ゼ含有水溶液とじ九。
Ｊｔ−加えた後ホモノナイブ−にかけた。得られた懸濁
液にアセトン１６７加え、遠心分離して上清２８！を採
取した０次にこれに更にアセトン１２ｊ’（加え、遠心
分離して沈澱？捕集した。この沈澱を水７．５Ｊに分散
させ、フィルタープレスに工り濾過し、Ｆ液７！を得九
。このＦ液に更に水を加えて全量ｒ１０！とじた後メン
ブレンフィルター七通過させて除目し、これをカタラー
ゼ含有水溶液とじ九。
この溶液中のカタラーゼの力価は、１分間に１μモルの
過酸化水素を分解する酵素力ｔ１単位としｔ場合８５８
００Ｕ／ゴでめった。
過酸化水素を分解する酵素力ｔ１単位としｔ場合８５８
００Ｕ／ゴでめった。
参考例２ 生パン酵母および水添加ドライイースト（サ
ツカロミセス・セレビシェ）のオートクレーブ処理 １）生パン酵母（三共フーノ社ｆｉ）１に９に水０．５
！を加えてよく混合し几後１２１℃で４０分間オートク
レーブ５２３１理を行つ九、処理後の酵母は全て死滅し
、カタラーゼ活性もなかった。
ツカロミセス・セレビシェ）のオートクレーブ処理 １）生パン酵母（三共フーノ社ｆｉ）１に９に水０．５
！を加えてよく混合し几後１２１℃で４０分間オートク
レーブ５２３１理を行つ九、処理後の酵母は全て死滅し
、カタラーゼ活性もなかった。
２） ドライイースト（Ｓ、１．ルブラフル社製）２７
０ｆに水０．７３７に加えてよく混合して生イーストと
同様の水分含量にし穴後更に水０．５７ ’ｉ加え、上
記１）と同様にオートクレーブ処理した。
０ｆに水０．７３７に加えてよく混合して生イーストと
同様の水分含量にし穴後更に水０．５７ ’ｉ加え、上
記１）と同様にオートクレーブ処理した。
処理後のイーストは全て死滅し、カタラーゼ活性もなか
つ皮。
つ皮。
実施例１
参考例１で得られ九カタラーゼ含有水浴ａ１！に、下記
Ａ、ＢおよびＣの物質を夫々添加しｔものと試験区ＡＳ
Ｂお工びＣとし、別に無添加のもの全対照区として凍結
乾燥処理全行なった。
Ａ、ＢおよびＣの物質を夫々添加しｔものと試験区ＡＳ
Ｂお工びＣとし、別に無添加のもの全対照区として凍結
乾燥処理全行なった。
Ａ：生パン酵母４００２
Ｂ：参考例２−１）で得られ九死滅酵母６００ｆ（生・
臂ン酵母約４’００ ｔに相当）Ｃ：参考例２−２）で
得られた死滅ドライイースト６００ｆ（同上） 凍結乾燥処理は次のようにして行なわれ文。
臂ン酵母約４’００ ｔに相当）Ｃ：参考例２−２）で
得られた死滅ドライイースト６００ｆ（同上） 凍結乾燥処理は次のようにして行なわれ文。
上記各区の混合物七人きめのポリエチレン製の袋に入れ
、これｆ ６０−ｘ ４０ （ｃｒｒＬ）のトレーの上
で袋ごとひろげて平坦にならし、−３５℃で予備凍結し
九。凍結終了後袋の上部全切開して通気可能にし真空乾
燥機に入れ、棚温４０℃、真空度ｌＸｌ０−’）ルで真
空乾燥し念。最終品温は４０℃である。
、これｆ ６０−ｘ ４０ （ｃｒｒＬ）のトレーの上
で袋ごとひろげて平坦にならし、−３５℃で予備凍結し
九。凍結終了後袋の上部全切開して通気可能にし真空乾
燥機に入れ、棚温４０℃、真空度ｌＸｌ０−’）ルで真
空乾燥し念。最終品温は４０℃である。
凍結乾燥直後の夫々のカタラーゼ活性全基準にして１０
０％とし、その後の３７℃における保存中の活性の経時
変化を測定した、その結果を表１に示した。
０％とし、その後の３７℃における保存中の活性の経時
変化を測定した、その結果を表１に示した。
表 １
上記の結果から明らかなように、酵母菌体を添加して凍
結乾燥することによって保存中のカタラーゼ活性の低下
は顕著に抑制され九。
結乾燥することによって保存中のカタラーゼ活性の低下
は顕著に抑制され九。
ま九凍結乾燥処理中のカタラーゼの活性低下をみるため
、凍結乾燥前と凍結乾燥直後の活性ケ測定した。その結
果を表２に示し文、なお凍結乾燥前のカタラーゼ活性は
、カタラーゼ含有水浴液の力価で表わし、乾燥物の力価
は乾燥品に水で加え、乾燥前のカタラーゼ含有水２液と
同量になるように調整した。
、凍結乾燥前と凍結乾燥直後の活性ケ測定した。その結
果を表２に示し文、なお凍結乾燥前のカタラーゼ活性は
、カタラーゼ含有水浴液の力価で表わし、乾燥物の力価
は乾燥品に水で加え、乾燥前のカタラーゼ含有水２液と
同量になるように調整した。
表 ２
上記の結果から明らかなように、酵母菌体はカタラーゼ
の凍結乾燥に対して顕著な保護効果勿有し次。
の凍結乾燥に対して顕著な保護効果勿有し次。
カタラーゼ含有水浴液１に結乾燥するに当り、本発明の
よりに酵母菌体を添加して凍結乾燥処理を行なうと、凍
結乾燥時におけるカタラーゼの失活が抑制できるばかり
でなく、長期の保存に対しても安定な凍結乾燥粉末を得
ることができる・
よりに酵母菌体を添加して凍結乾燥処理を行なうと、凍
結乾燥時におけるカタラーゼの失活が抑制できるばかり
でなく、長期の保存に対しても安定な凍結乾燥粉末を得
ることができる・
Claims (1)
- １、カタラーゼ含有水溶液に酵母の生菌体または死菌体
を添加混合した後凍結乾燥することを特徴とする粉末カ
タラーゼの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20659586A JPS6363383A (ja) | 1986-09-02 | 1986-09-02 | 粉末カタラ−ゼの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20659586A JPS6363383A (ja) | 1986-09-02 | 1986-09-02 | 粉末カタラ−ゼの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6363383A true JPS6363383A (ja) | 1988-03-19 |
| JPH0243473B2 JPH0243473B2 (ja) | 1990-09-28 |
Family
ID=16526001
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20659586A Granted JPS6363383A (ja) | 1986-09-02 | 1986-09-02 | 粉末カタラ−ゼの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6363383A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0475160U (ja) * | 1990-11-14 | 1992-06-30 |
-
1986
- 1986-09-02 JP JP20659586A patent/JPS6363383A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0243473B2 (ja) | 1990-09-28 |
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