JPS6363384A - 粉末カタラ−ゼの製造方法 - Google Patents
粉末カタラ−ゼの製造方法Info
- Publication number
- JPS6363384A JPS6363384A JP20659686A JP20659686A JPS6363384A JP S6363384 A JPS6363384 A JP S6363384A JP 20659686 A JP20659686 A JP 20659686A JP 20659686 A JP20659686 A JP 20659686A JP S6363384 A JPS6363384 A JP S6363384A
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- catalase
- freeze
- drying
- aqueous solution
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- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔型巣上の利用分野〕
本発明は、粉末カタラーゼの製法に関し、更に詳しくは
カタラーゼ含有溶液を凍結乾燥させて安定な粉末カタラ
ーゼ製剤造する方法に関する。
カタラーゼ含有溶液を凍結乾燥させて安定な粉末カタラ
ーゼ製剤造する方法に関する。
カタラーゼは過酸化水素を水と酸素とに分解する酵素で
、一部の嫌気性菌？除き殆んど全ての生物体に広く存在
し、生体機能の維持にかかせない重要な酵素の一つであ
る。
、一部の嫌気性菌？除き殆んど全ての生物体に広く存在
し、生体機能の維持にかかせない重要な酵素の一つであ
る。
カタラーゼは浴液状や粉末状の酵素製剤とし−ｃ１臨床
分析用、食品ノＪＯ工用或いはその他の過酸化水素全分
解する必要のある産業分野において利用されている。
分析用、食品ノＪＯ工用或いはその他の過酸化水素全分
解する必要のある産業分野において利用されている。
通常、カタラーゼは牛、豚、馬などの動物の臓器例えば
肝臓や赤血球などから抽出されるが、抽出され友カタラ
ーゼは非常に不安定で容易に失活してしまう。そこで、
従来はカタラーゼの抽出液に安定剤としてアルコールや
塩類等を添加してカタラーゼ含有溶液として提供されて
い穴、シかしながら、用途上粉末状のカタラーゼ製剤が
必要な場合もある。
肝臓や赤血球などから抽出されるが、抽出され友カタラ
ーゼは非常に不安定で容易に失活してしまう。そこで、
従来はカタラーゼの抽出液に安定剤としてアルコールや
塩類等を添加してカタラーゼ含有溶液として提供されて
い穴、シかしながら、用途上粉末状のカタラーゼ製剤が
必要な場合もある。
多くの酵素に２いて粉末製剤として連結乾燥製剤が製造
されているが、カタラーゼは凍結乾燥中および凍結乾燥
後の保管中に失活が著しく、その几めカタラーゼの製剤
化について凍結乾燥操作は不適とされていた。この失活
を防止するために、糖類、グリセリン、無機塩類など種
々の化合物を安定剤として重加がなされてき九が十分な
成果を挙けるには主っていなかった。
されているが、カタラーゼは凍結乾燥中および凍結乾燥
後の保管中に失活が著しく、その几めカタラーゼの製剤
化について凍結乾燥操作は不適とされていた。この失活
を防止するために、糖類、グリセリン、無機塩類など種
々の化合物を安定剤として重加がなされてき九が十分な
成果を挙けるには主っていなかった。
そこで特開昭５８−１０１６９０号においては、凍結乾
燥ではなく、カタラーゼ活注金保有している乾燥微生物
細胞をカタラーゼ含有水溶液に浸漬させてカタラーゼを
捕集させ九後これをア七トン乾燥させて粉末化させる方
法がとられている。
燥ではなく、カタラーゼ活注金保有している乾燥微生物
細胞をカタラーゼ含有水溶液に浸漬させてカタラーゼを
捕集させ九後これをア七トン乾燥させて粉末化させる方
法がとられている。
前記アセトン乾燥粉末も広く利用されるが、使用されて
いる乾燥微生物細胞が増殖力？残しており、この方法に
よって得られ九カタラーゼ粉末？使用し烹場合には適当
な処置として細胞増殖？抑えなければならなかつ穴。
いる乾燥微生物細胞が増殖力？残しており、この方法に
よって得られ九カタラーゼ粉末？使用し烹場合には適当
な処置として細胞増殖？抑えなければならなかつ穴。
これに対し【、安定で保存性のよい凍結乾燥粉末カタラ
ーゼが得られ次ならば、上記の欠点がなくなるばかりで
なく、他の凍結乾燥可能な酵素やその他の物質との配合
物？凍結乾燥することができるので利用価値が一層高ま
るものである。そこでカタラーゼの凍結乾燥粉末の製造
が要望されてい友。
ーゼが得られ次ならば、上記の欠点がなくなるばかりで
なく、他の凍結乾燥可能な酵素やその他の物質との配合
物？凍結乾燥することができるので利用価値が一層高ま
るものである。そこでカタラーゼの凍結乾燥粉末の製造
が要望されてい友。
しかしながら、浴液状態におけるカタラーゼの安定化と
、凍結乾燥時ま７’ｉＣは凍結乾燥品としてのカタラー
ゼの安定１ヒとは根本的に異なるところがあり九、即ち
、凍結乾燥時および製品では、真空中での水の昇華に伴
なう高次構造の変化、突気との接触による活性部位の酸
化など溶液中ではおこり得ない原因がある。この九め、
カタラーゼを含む凍結乾燥粉末の製造は困難で６つ次。
、凍結乾燥時ま７’ｉＣは凍結乾燥品としてのカタラー
ゼの安定１ヒとは根本的に異なるところがあり九、即ち
、凍結乾燥時および製品では、真空中での水の昇華に伴
なう高次構造の変化、突気との接触による活性部位の酸
化など溶液中ではおこり得ない原因がある。この九め、
カタラーゼを含む凍結乾燥粉末の製造は困難で６つ次。
本発明者等は、凍結乾燥時および凍結乾燥製品の保管中
のカタラーゼの失活全同時に防ぐ方法を得るため、凍結
乾燥処理前にカタラーゼの安定化のための保護物質？加
え、混合し念後凍結乾燥処理を行なうこと全考え、保護
物質について広く様々な物について検討した結果、＃母
菌体の分解物′に存在させるとカタラーゼが凍結乾燥に
対して極めて安定化されることを見出して本発明？完成
し九。
のカタラーゼの失活全同時に防ぐ方法を得るため、凍結
乾燥処理前にカタラーゼの安定化のための保護物質？加
え、混合し念後凍結乾燥処理を行なうこと全考え、保護
物質について広く様々な物について検討した結果、＃母
菌体の分解物′に存在させるとカタラーゼが凍結乾燥に
対して極めて安定化されることを見出して本発明？完成
し九。
即ち、本発明は、カタラーゼ含有水浴液に酵母菌体の分
解物？添加混合した後凍結乾燥することを特徴とする粉
末カタラーゼの人造法である。
解物？添加混合した後凍結乾燥することを特徴とする粉
末カタラーゼの人造法である。
本発明の対象とするカタラーゼの起源は、動物体、植物
体、微生物体のいずれのものでもよく、また使用される
酵母はとくに限定はなく、通常は入手し易いパン酵母、
ビール酵母、サケ酵母などが使用される。酵母菌体は湿
菌体、乾燥菌体のいずれでもよく、その分解方法として
は自己消化ま九は外からの消化酵素添加による分解、或
いは超音波、ホモジナイザーなどによる物理的な分解な
ど通常の微生物の分解方法を特に限定なく使用すること
ができる。
体、微生物体のいずれのものでもよく、また使用される
酵母はとくに限定はなく、通常は入手し易いパン酵母、
ビール酵母、サケ酵母などが使用される。酵母菌体は湿
菌体、乾燥菌体のいずれでもよく、その分解方法として
は自己消化ま九は外からの消化酵素添加による分解、或
いは超音波、ホモジナイザーなどによる物理的な分解な
ど通常の微生物の分解方法を特に限定なく使用すること
ができる。
本発明に使用されるカタラーゼ含有水溶液は、動植物体
または微生物体二つカタラーゼ？抽出した粗細出液であ
ってＳ１工いし、ｌ九更に精製された分画でおってもよ
い。
または微生物体二つカタラーゼ？抽出した粗細出液であ
ってＳ１工いし、ｌ九更に精製された分画でおってもよ
い。
本発明は、例えばカタラーゼ含有水浴液に酊母菌体？添
加し、攪拌等の方法で均一に分散し次後常法により凍結
乾燥処理に付すとい５極めて容易な操作で実施すること
ができる。
加し、攪拌等の方法で均一に分散し次後常法により凍結
乾燥処理に付すとい５極めて容易な操作で実施すること
ができる。
次に参考例および尖施例ゲめげて本発明？具体的に説明
するが、本発明はこれによって限定されるものではない
。
するが、本発明はこれによって限定されるものではない
。
参考例１ カタラーゼの抽出方法
豚の肝１１１０に９’ａ−サイレントカッターで細切し
、水１０Ｊｋ加え念後ホモジナイデーにかけ定、得られ
次懸濁液にアセトン９Ｊを加え、遠心分離して上清２８
！を採取した。次にこれに更にアセトン１２！を加え、
遠心分離して沈澱を捕集した。この沈澱？水７．５ｋに
分散させ、フィルタープレスに二りテ過し、Ｆｉ７Ａｈ
得た。このＦ液に更に水を加えて全量を１０！とじた後
メンブレンフィルター？通過させて除菌し、これｔカタ
ラーゼ含有水溶液とした。
、水１０Ｊｋ加え念後ホモジナイデーにかけ定、得られ
次懸濁液にアセトン９Ｊを加え、遠心分離して上清２８
！を採取した。次にこれに更にアセトン１２！を加え、
遠心分離して沈澱を捕集した。この沈澱？水７．５ｋに
分散させ、フィルタープレスに二りテ過し、Ｆｉ７Ａｈ
得た。このＦ液に更に水を加えて全量を１０！とじた後
メンブレンフィルター？通過させて除菌し、これｔカタ
ラーゼ含有水溶液とした。
この浴液中のカタラーゼの力価は、１分間に１μモルの
過酸化水素全分解するひ素力を１単位とし九場合８５８
０００膚で６つｔ。
過酸化水素全分解するひ素力を１単位とし九場合８５８
０００膚で６つｔ。
参考例２ 生パン酵母お工びドライイーストの分解
１）生ノ９ン酵母（三共フーノ社裂）１時にトルエン２
００ゴを加えてよく疎ったらと、４８時間３７℃で自己
消化させる０次にこれに水０．５Ｊを加え７０℃で保存
して分解物としたが、これには生菌は生存せずまたカタ
ラーゼ活性もなかつ友。
００ゴを加えてよく疎ったらと、４８時間３７℃で自己
消化させる０次にこれに水０．５Ｊを加え７０℃で保存
して分解物としたが、これには生菌は生存せずまたカタ
ラーゼ活性もなかつ友。
２） ドライイースト（Ｓ、１．ルブラフル社製）２７
０２に水０．７３７’に加え水もどしし定径、トルエン
２００Ｒ６！ｉ加えてよく練り念後、上記１）と同様に
して自己消化、および後処理を行なり九。
０２に水０．７３７’に加え水もどしし定径、トルエン
２００Ｒ６！ｉ加えてよく練り念後、上記１）と同様に
して自己消化、および後処理を行なり九。
後処理後は生菌は全くなく、カタラーゼ活性もなかつｔ
。
。
実施例１
参考例１で得られたカタラーゼ含有水浴液１！に、下肥
Ａ１お工びＢの物質を夫々添加したものｔ試験区Ａ１お
よびＢとし、別に無添加のもの？対照区として凍結乾燥
処理中行なった。
Ａ１お工びＢの物質を夫々添加したものｔ試験区Ａ１お
よびＢとし、別に無添加のもの？対照区として凍結乾燥
処理中行なった。
Ａ：参考例２−１）で得られた分解物６００２Ｂ：参考
例２−２）で得られ九分解物６００を凍結乾燥処理は次
のようにして行なわれた。
例２−２）で得られ九分解物６００を凍結乾燥処理は次
のようにして行なわれた。
上記各区の混合物？大きめのポリエチレン製の袋に入れ
、これ２６０ｘ４０（ｍ）のトレーの上で袋ごとひろげ
て平坦にならし、−３５℃で予備凍結した。凍結終了後
袋の上部全切開して通気可能にし真空乾燥機に入れ、棚
温４０℃、真空度ＩＸＩＦ’ｌ’ルで真空乾燥し穴、最
終品温は４０℃である。
、これ２６０ｘ４０（ｍ）のトレーの上で袋ごとひろげ
て平坦にならし、−３５℃で予備凍結した。凍結終了後
袋の上部全切開して通気可能にし真空乾燥機に入れ、棚
温４０℃、真空度ＩＸＩＦ’ｌ’ルで真空乾燥し穴、最
終品温は４０℃である。
凍結乾燥直後の夫々のカタラーゼ活性を基準にして１０
０チとし、その後の３７℃における保存中の活性の経時
変化を測定し九、その結果ｒ表１に示した。
０チとし、その後の３７℃における保存中の活性の経時
変化を測定し九、その結果ｒ表１に示した。
表 １
上記の結果から明らかなように、酵母菌体の分解物？添
加して凍結乾燥することによって保存中のカタラーゼ活
性の低下は顕著に抑制され次。
加して凍結乾燥することによって保存中のカタラーゼ活
性の低下は顕著に抑制され次。
ｔ７＋２．凍結乾燥処理中のカタラーゼの活性低下をみ
る九め、凍結乾燥前と凍結乾燥直後の活性全測定し友、
その結果上表２に示し文、なお凍結乾燥前のカタラーゼ
活性は、カタラーゼ含有水溶液の力価で表わし、乾燥物
の力価は乾燥品に水？加え、乾燥前のカタラーゼ含有水
溶液と同量になるように調整し九。
る九め、凍結乾燥前と凍結乾燥直後の活性全測定し友、
その結果上表２に示し文、なお凍結乾燥前のカタラーゼ
活性は、カタラーゼ含有水溶液の力価で表わし、乾燥物
の力価は乾燥品に水？加え、乾燥前のカタラーゼ含有水
溶液と同量になるように調整し九。
表 ２
上記の結果から明らかなよつに、酵母菌体の分′弄物は
カタラーゼの凍結乾燥に対して顕著な保護効果を有し念
。
カタラーゼの凍結乾燥に対して顕著な保護効果を有し念
。
カタラーゼ含有水溶液ｒ凍結乾燥するに当り、本発明の
ように酵母菌体の分解物ケ添加してα結乾燥処理を行な
うと、豪結乾深時におけるカタラーゼの失活が抑制でき
るばかりでなく、長期の保存に対しても安定な凍結乾燥
粉末全稈ることができる。
ように酵母菌体の分解物ケ添加してα結乾燥処理を行な
うと、豪結乾深時におけるカタラーゼの失活が抑制でき
るばかりでなく、長期の保存に対しても安定な凍結乾燥
粉末全稈ることができる。
Claims (1)
- １、カタラーゼ含有水溶液に酵母菌体の分解物を添加混
合した後凍結乾燥することを特徴とする粉末カタラーゼ
の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20659686A JPS6363384A (ja) | 1986-09-02 | 1986-09-02 | 粉末カタラ−ゼの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20659686A JPS6363384A (ja) | 1986-09-02 | 1986-09-02 | 粉末カタラ−ゼの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6363384A true JPS6363384A (ja) | 1988-03-19 |
| JPH0243474B2 JPH0243474B2 (ja) | 1990-09-28 |
Family
ID=16526016
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20659686A Granted JPS6363384A (ja) | 1986-09-02 | 1986-09-02 | 粉末カタラ−ゼの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6363384A (ja) |
-
1986
- 1986-09-02 JP JP20659686A patent/JPS6363384A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0243474B2 (ja) | 1990-09-28 |
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