JPS6371176A - 固定化酵素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、特定の重合体、特定の有機化合物及び酵素よ
りなる新規な固定化酵素に関する。

（従来技術及び発明が解決しようとする問題点）酵素は
タンパク質よりなる生体内触媒であって、常温常圧とい
う温和な条件下に効率よく反応を進行させ、かつ作用の
特異性が非常に高いという特徴をもつ。従来、このよう
なｇ素の作用を工業的に利用するために酵素な担体に固
定した、所謂固定化酵素が種々提供されてきた。

かかる固定化酵素の用途のうち、バイオセンサーとして
の用途においては、該センサーの応答速度の高速化ある
いは小屋化を図るため、固定化酵素の薄膜化が要求され
るようになってきた。

一方、固定化酵素は担体結合法、架橋法及び包括法によ
って得られる３種に大別されるが、上記したｕ膜化の如
き微細な成形加工を必要とする用途において次のような
問題を有している。すなわち、担体結合法は予め担体を
成形するために微細な成形加工は可能であるが、酵素の
固定化が困難であったり、酵素の結合力が弱いという問
題を有する。また、架橋法及び包括法は、酵素の結合力
が強く、酵素活性の高いものも得られるが、架橋あるい
は包括を成形と同時に行うため微細な成形が困難である
という問題を有する。

（問題点を解決するための手段） 本発明者等は、上記問題を解決すべく研究を重ねた。そ
の結果、特定の重合体、特定の有機化合物及び酵素より
なる固定化酵素が、酵素を固定化した状態で優れた成形
加工性を有し、しかも、成形後においても優れた活性を
有することを見出し、本発明を完成させるに至った。

すなわち、本発明は ＋１）イオン性基を有する重合体（以下、イオン性重合
体と略記する） （２）（イ）２本または３本の直鎖疎水基、または剛直
性部分を連鎖中に含む１本の直鎖疎水基 を有し、かつ （ロ）イオン性基 を有する有機化合物（以下、直鎖有機化合物と略記する
） （３）酵素 よりなる固定化酵素である。

本発明において、イオン性基とは酸性基または塩基性基
の総称として定義される。ここで酸性または塩基性とは
、ブレンステッド酸またはブレンステッド塩基を意味し
、酸性基としては一般にスルホン基、カルボキシル基。

リン酸基、フェノール性水酸基、及びこれらが塩となっ
たもの、塩基性基としては一般に７ミノ基、置換７ミノ
基、第四アンモニウム基、及びこれらが塩となったもの
が好適に使用される。また、本発明でいう直鎖疎水基と
は、完全に直鎖状のものの他に、炭素数２個までの分枝
を有する分校状のものをも含んだ意味で使用される。か
かる直鎖疎水基としては、炭素数４〜３０の直鎖アルキ
ル基またはそのハｐゲン置換体が代表的である。

更に、本発明において、剛直性部分とは、次の■、■及
び■に示す基をいう。

■直結あるいは、炭素−炭素多重結合、炭素−窒素多重
結合、窒素−窒素多重結合、エステル結合、７ミド結合
等を介して連結された少なくとも２個の芳香環で構成さ
れる２価の基 このような基を具体的に示せば、例えば、ｏ　　　　　
　　　　　　　　　　　　　Ｏ等の２ｆ５の基が挙げら
れる。

０２個の芳香環の結合が複数であるか、複数原子間の単
結合であって、その回転がエネルギー的に束縛を受けて
いる２価の基 このような基を具体的に示せば、例えば、ＣＭ。

等の２価の基が挙げられる。

■芳香環が綜合環を形成しているもので、この縮合環が
多分子間で積層した場合に、その回転が互いに立体的に
束縛を受けている２価の基 このような基を具体的に例示すると、 等の６価の基が挙げられる。

本発明の固定化酵素の構成要件の１つはイオン性重合体
である。かかるイオン性重合体は、前記したイオン性基
を有する公知のものが特に制限なく使用されろ。そのう
ち、得られる固定化酵素の強度及び安定性を勘案すれば
、一般には分子量がｓ、ｏｏｏ以上のものを用いろこと
が望ましい。また、該重合体に含まれるイオン性基の量
はその種類、後記する直鎖有機化合物等によって異なり
一概に限定できないが、一般にはｏ、　１ｍａｑ　／　
７９以上、好ましくは、０　ｍｅｑ　／　９以上のもの
が望ましい。

本発明において一般に好適に使用されるイオン性重合体
を一般式で例示すれば次のとおりである。

■カルボキシル基を有する重合体 ま ただし、Ｒは水素原子、フルキル基またはカルボキシメ
チル基であり、Ｘは一〇Ｈ，−基。

Ｒ’　　　　　　　　　　　０ ルキル基または７リール基）であり、Ｍは水素原子、金
属原子または低級アンモニウムである。Ｃは０〜２の整
数であり、ａ、ｂはＯまたは１である。ここで、ａが０
０ときはｂ　＝　１　、　ｃ　＝　Ｑ　、　Ｒは水素原
子であり、ａが１のときはｂ＝ｏ　、ｃ−０〜２　、Ｒ
は水素原子、アルキル基またはカルボキシメチル基であ
る。

■スルホン酸基を有する重合体 ”−”Ｈｌ　　　　　　　　　　　　　（１：１人 ｄ Ｓｏ、Ｍ ただし、Ｒａは水素原子またはアルキル基でＯＣＩ（８ 一〇−または　（−ＣＨ，＋。　（ただし、ｅは正の整
数）であり、Ｍは水素原子、金属原子または低級アンモ
ニウムであり、ｄは０または１である。

■リン酸基を有する重合体 Ｒ″ Ｐ（ＯＭ）Ｂ ただし、Ｒ■　は水素原子またはフルキル基テアリ、Ｚ
ｉ！　　−Ｃ−０＋ＣＨａ＋ｇＯ（ただしＩは正の整数
）であり、Ｍは水素原子、金屑原子または低級アンモニ
ウムであり、ｆはＯまたは１である。

■アンモニウム塩基を有する重合体 Ｒ″ （ただし、Ｒ１）＋は水素原子またはフルキル基であり
、２は−０−または−ＮＨ−基でありＹは炭素数１〜１
２のメチレン鎖で特に炭素数１〜８が好適であり、゛ハ
ロゲン置換あるいは水酸基置換のメチレン鎖も好適であ
り％　ＲＩＲ、Ｒは同種または異種の炭素数１〜４のフ
ルキル基、またはそのハロゲン原子及び／または水酸基
による置換体であり、Ｘはハロゲン、水酸、硝酸、過塩
素酸、チオシアン酸。

酢醗の７ニオンである。） 上記一般式（１）　、　（Ｉ［）　、　（■）及び（ｆ
ｆ）中、Ｒ、Ｒ’、　Ｒ”、　Ｒ”、及びＲ開で示され
るフルキル基としては、その炭素数に限定されず、いか
なるものでも使用できるが、一般には炭素数が１〜４の
ものが好適である。また、上記一般式（１）及び〔Ｉ〕
中、Ｃ及びＩは正の整数であればよいが、就中、原料の
人手の容易さから１〜４の整数であることが好ましい。

本発明におｌするイオン性基を有する重合体としては、
前記した重合体の他に、イオン性基を有する天然高分子
も好適に使用される。

一般に本発明において好適に使用されるイオン性基を有
する天然高分子を例示すると、アルギン酸、アルギン酸
ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ヘパリン、
コンＦＥイチン硫酸及びこれらの誘導体等が挙げられる
。

また本発明において、直鎖有機化合物は２本または３本
の直鎖疎水基または剛直性部分を連鎖中に含む１本の直
鎖疎水基を有しかっイオン性基を有するものであれば公
知のものが特に限定されず用いうる。一般に好適に使用
される代表的なものを例示すれば以下の一般式に示すも
のがある。

（ただし、Ｒ、Ｒは同種または異種の炭素数６〜３０の
直鎖フルキル基またはそのハロゲン置換体であり、Ｒ、
Ｒは同種または異種の炭素数１〜４のアルキル基、また
はそのハロゲン原子及び／または水駿基による置換体で
あり、Ｘはハロゲン原子またはＯＨ原子団である。） （ただし、Ｒ、Ｒ、Ｘ　　は上記と同じでありであり、
ｊはＯまたは１であり、ｋは正の整数である。）であり
、ｈ、ｌは正の整数である。Ｒ、Ｒ、Ｒは上記のＲ及び
Ｒの説 明と同じである。） ＋１ （ただし、Ｒ、Ｒ、Ｒ、Ｒ、Ｒ、Ａ及びＸは上記と同じ
であり、ｔは１または２、ｍはＯまたは１である。） （ただし、Ｒ１、ＲＮ　、　Ｒ８、Ｒ４、Ｈｌｉ及びＸ
は上記と同じであり、ｎは正の整数である。）Ｒ’−Ｄ
−Ｅ−Ｎ”−Ｒ’　ＸｅＣＥ）Ｓ （ただし、Ｒ、Ｒ、Ｒ及びＸは上記と同じであり、Ｒ６
は炭素数４〜３０のフルキル基。

フルキルオキシ基、若しくはフルキルオキシカルボニル
基またはこれらのノーロゲン置換体（ただし、Ｆは−Ｎ
＝ＣＨ−、−Ｎ＝Ｎ−。

Ｑ　　　　　　　　　　０−Ｃ−。

Ｈ８ −ＮＨＣＨ，−、−ＣＨ＝ＣＨＣ−。

Ｅは　４ＣＨ，＋９　　または−〇−（ＣＨｆｉ＋、　
　である。（ただし、ｑ、ｒは正の整数である。））上
記一般式（Ｂ）　、　ＣＤ）及び（Ｅ）中、ｋ、ｎ。

ｑ及びｒは正の整数であればよいが、一般には原料の人
手の容易さから１〜１６であることが好ましい。また、
上記一般式ＣＢ）中、ｈ及びＩは、正の整数を何ら制限
なく取り得るが、一般には原料の人手の容易さから１〜
４であることが好ましい。

（ただし、Ｒ、Ｒは有機化合物（Ａ）〜（Ｄ）での説明
と同じで、Ｍは特に限定されず一般に有機、無機の陽イ
オンとなる原子または原子団であり、水素、アルカリ金
属、アルカリ土類金属原子、アンモニウム原子団が好適
であろう） ■　　　０ （ただし、Ｒ，Ｒ及びＭは上記と同じである。） また本発明でいう直鎖フルキル基とは、完全に直鎖状の
ものの他に、炭素数２個までの分校を有する分枝状のも
のをも含んだ意味で使用される。また上記一般式（Ａ）
　、　ＣＢ）　。

（Ｃ）　、　（Ｄ）　、　ＯＥ）　、　ＣＦ）及び（Ｇ
）中、Ｒ１，・Ｒ、Ｒ、Ｒ、Ｒ及びＲで示されるハロゲ
ン置換アルキル基のハロゲン原子としては、フッ素、塩
素、臭素、ヨウ素の各原子が挙げられる。

本発明において、酵素とは特に限定されず公知のものを
意味するが、一般には分子量１万から１００万のタンパ
ク質分子であって、触媒活性を示すものをいう。本発明
に使用されろ代表的な酵素を例示すれば、アルコールデ
ヒドロゲナーゼ、グリセルールデヒドロゲナーゼ、乳酸
デヒドロゲナーゼ、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、グルタ
ミン酸デヒドロゲナーゼ、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼ、
七ノ７ミンオギシダーゼ、チｐシナーゼ等のオキシドレ
ダクターゼ類；アスパラギン酸アミノトランスフェラー
ゼ、カテフールメチルトランスフーラーゼ、ホスホリテ
ーゼ、クレアザーンキナーゼ等のトランスフェラーゼ類
；リパーゼ。

キモトリプシン、アルカリ性ホスファターゼ。

トリプシン、アミノ７シラーゼ、パパイン。

ペプシン、リゾチーム、ウレアーゼ等のヒドロラーゼ類
；グルタミン酸デカルボキシラーゼ、フマラーゼ、カル
ボネートデヒドラターゼ等のリアーゼ類；グルコースリ
ン醒インメラーゼ、ＵＤＰ−グルコース４−エピメラー
ゼ等のインメラーゼ類；ホルミルテトラヒドロホレート
シンテターゼ等のりカーーゼ類等が挙げられる。

本発明のイオン性重合体、直鎖有機化合物及び酵素より
なる固定化酵素は、単なる混合物となって℃・るのでは
なく、一部イオン交換反応を起こしてイオン結合で結合
されていたり、直鎖有機化合物の疎水性による物理的な
吸着などにより一体化した物質として存在するので、一
般には単一物質として取扱うことができる。このように
イオン性重合体と直鎖有機化合物と酵素とが一体化した
物質として取扱うことができる限り、これらの網成比は
特に限定されず配合することができる。一般にはその製
造上あるいは取扱い上、水中での安定性を勘案すれば、
イオン性重合体のイオン性基に対して０．２〜５倍１Ｌ
好ましくは０．５〜３倍当量の直鎖有機化合物を配合す
ると好適である。さらに、酵素はその酵素機能を発現、
利用するに足る量であれば特に限定されず配合すること
ができろ。一般には製造上あるいは工業的人手の逮しさ
等を勘案すれば、全重量に対しＯ，ＯＯ１〜１０重量％
、好ましくはｏ、ｏｉ〜５ｇＬ量％の酵素を配合すると
好適である。

また、前記のイオン性重合体と直鎖有機化合物とは、イ
オン性基が互いに逆荷電を有するように（８合せて用い
るのが最適である。

本発明のイオン性重合体、直鎖有機化合物及び酵素こか
らなる固定化酵素の製造方法は特杷限定されず、最終的
にこれらの成分が混合される方法であればどのような方
法であってもよい。一般に好適な製造方法を例示すれば
以下に示す方法が挙げられる。すなわち、←イ）イオン
性重合体と直鎖有機化合物と酵素とを所定量それぞれ同
一または異なる溶媒に溶解、あるいはｇ渇せしめ、これ
らを混合して生じた沈ｇｌ物を集める方法。この場合の
混合の屓序は特に限定されないが、一般にイオン性重合
体及びｒＩＩ素に直鎖有機化合物を加える方法あるいは
直鎖有機化合物及び酵素にイオン性重合体を加える方法
が好適に使用される。

あるいは（ロ）予めイオン性重合体と直鎖有機化合物と
からなる組成物を製造し、これと酵素を混合あるいは接
触せしめる方法。この場合該組成物の製造方法としては
特開昭６０−２２８５６４号に示される方法、例えば、
イオン性重合体と直鎖有機化合物とを所定量それぞれ同
一または異なる溶媒に溶解、あるいは懸濁せしめ、これ
らを混合し生じた沈澱物を集める方法等が好適である。

ここで使用される溶媒は同一の溶媒の場合、水あるいは
水と相溶性のある有機溶媒との混合溶媒、例えハ水／メ
タノール混合溶媒、水／エタノール混合溶媒、水／７セ
トン混合溶媒等が一般に好適である。重合体と直鎖有機
化合物とで異なる溶媒を使用する場合、重合体の溶媒に
は一般に水が好適である。直鎖有機化合物の溶媒として
は、水、メタノール、エタノール。

２−プロパツール、７セトン、酢酸エチル。

エチ／レエーテル、ベンゼン、クロロホルム。

塩化メチレン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルム７
ミド、ジメチルアセトアミド、７セトニトリル等が好適
に用いられる。この時互いに混和しない溶媒の場合には
、一般に混合の際に激しく攪拌する等の方法でエマルジ
ョンにする操作が沈澱物を得るのに有効である。一般に
上記の操作により得られる組成物の耐溶媒性が向上する
。

本発明の固定化酵素は酵素を含んだ状態で成形を行うこ
とができる。例えば、■溶融成形性、■溶媒蒸発法等が
好適である。■の溶融成形法は、酵素の活性が失なわれ
ない温度で、公知の溶融成形方法、例えば射出成形。

押出成形、プレス成形等によって行うことができろ。こ
の場合、固定化酵素の軟化温度はイオン性重合体と直鎖
有機化合物との組成比を調節することにより、−２５〜
１００℃程度まで変化させることができる。従って、上
記成形温度、使用環境等を勘案して該組成比を決定すれ
ばよい。また、■の溶媒蒸発法は酵素を失活させること
なく固定化酵素を溶解し得る溶媒中に該固定化酵素を溶
解せしめ、これを例えば適当な平面を有する基板上に流
延させた後、該溶媒を除去する方法である。

かかる方法によれば厚さ２０μ以下の薄膜を得ることが
できる。上記溶媒を例示すれば、メタノール、エタノー
ル、　２−フｃ＝パノール。

酢酸エチル、アセトン、ベンゼン、クロロホルム、塩化
メチレン、テトラヒドロフラン。

エチルエーテル、アセトニトリル、ジメチルホルム７ミ
ド、ジメチル７セト７ミド等が挙げられる。一般に該固
定化酵素の有機溶媒に対する溶解性は、その成分である
イオン性重合体及び直鎖有機化合物及び酵素の種類及び
組み合せによって大きく異なるので、実施の際には予め
溶解性について試験することが望ましい。上記溶媒の除
去は一般に風乾、減圧乾燥等が好適に使用される。

（効果） 以上説明したように、本発明の固定化酵素は酵素を固定
化した状態で優れた成形性を有すると共に、成形後にお
いても充分な酵素活性を維持させることができる。従っ
て、バイオリアクタの触媒やクロマトグラフィー用担体
等の用途のみならず、微細加工の必要なバイオセンサー
、ミクロセンサー等の用途に好適に使用されるものであ
る。なお、酵素活性は酵素反応を測定することにより確
認され、公知の方法が特に限定されず使用される。一般
に好適な測定法としては、（イ）分光学的測定法すなわ
ち紫外−可視光などの吸光度変化を測定するもの、（ロ
）けい先決すなわちけい光強度変化を測定するもので、
けい光プルーブなとも使用可能であり、一般に高感度の
測定が可能となる、（ハ）電極法すなわち酸素電極やＰ
Ｈｔ極などを用いて識素濃度変化、ＰＨ変化を測定する
などが挙げられる。

（作用） 本発明の固定化酵素が良好な成形加工性を示し、かつ酵
素機能を発現する作用機構については必ずしも明白では
ないが、本発明のイオン性重合体及び直鎖有機化合物と
からなる組成物が液晶性を示す（特開昭６０−２２８５
６４号）ことが何らかの形で関与しているものと推察さ
れる。すなわち、該組成物の液晶性により酵素との結合
力が大きくなり、固定化酵素としての機能が発現され易
くなるばかりでなく、成形加工時に伴う酵素の失活が少
なくなるものと推察される。このことは本発明の直鎖有
機化合物が水中で脂質二分子膜と類似の二分子層構造を
形成することとも関連するものと推測される。すなわち
、該直鎖有機化合物の配向性が酵素の安定化に寄与して
いるものと推察される。

（実施例） 以下に本発明をさらに具体的に説明するために実施例を
挙げるが、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はない。

実施例　１ 化合物 １９を水５０１に超音波分散させ、石けん状の液を得、
これに７シラーゼ（ｆｒｏｍＡａ−ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ
　　ｇｅｎｕｓ　、東京化成工業）５０ｍｇを加え、４
０℃にて激しく攪拌しながら、ポリスチレンスルホン酸
ナトリウム（粘度平均分子量：１０６万）０．４Ｆ！を
水に溶解させた液を加えた。４０℃のまま３０分間攪拌
し生じた沈澱を濾堆し、水でよく洗浄後、５０％メタノ
ールで軽く洗浄し減圧乾燥した。淡かつ色の固形物、０
ｇを得た。

この固形物０．１Ｆをクロロホルム５１）１７に溶解し
、直径５ｃＩＲのテフロン製シャーレに流凰した後に溶
媒を蒸発せしめ、厚さ３５μｍの膜状物を得た。

上記膜状物、Ｏｄを切り取り、、９７ＷＭ７セチルーＬ
−フェニルアラニン溶液（−＜＋＝＋−ル緩衝液ＰＨ＝
７．９５　）　０．２ｍ、　２５ｍＭ塩化コバルト０．
１ゴ、ペロナール緩衝層（ＰＨ＝７．９５）、６Ｍを加
え、更に水で２１にｌｉｌ＃！した液中に浸し、３８℃
で４時間反応させた。次いでこの反応溶液０．５　Ｒ／
を取り出し、０．２Ｍホウ酸緩衝液（Ｐ）Ｉ＝９．０）
を加え、更にフルオレサミンの０．０２％７セトン溶液
０．５１）７を加えて激しく攪拌し、この溶液について
励起波長３８０ｆＭ、４５０〜５００龍範囲でげい光分
光光度計（日立２０４ＲＷ）を用いてけい光強度を測定
した結果、７セチルーＬ−フェニルアラニンの酵素反応
生成物であるＬ−フェニルアラニンが１）％（基質に対
して）生成していることが確認された。

実施例　２ 化合物 ＩＩを水５０ｓ＋ｊに超音波分散させ、石けん状の液を
得、これにα−キモトリプシン（ＳｒＧＭＡ）２０ｍｇ
を加え、４０℃にて激しく攪拌しながらポリ（塩化トリ
メチルアンモニオエチルメタクリレート）　０．４１）
を水２０１に溶解させた液を加えた。４０℃のまま３０
分間攪拌し、生じた沈澱をＭ取し、水でよく洗浄した後
５０％メタノールで軽く洗浄後、減圧乾燥した。白色の
固定物、Ｏｌを得た。

この固定物０．１Ｅをクロロホルム５萬−に溶解し、直
径５３のテフロン製シャーレに流延した後、溶媒を蒸発
せしめ、厚さ約４０μｍの膜状物を得た。

上記膜状物の、０ｄを切り取り、これを吸光度測定用セ
ルにｌｏＭＮ−７セチルーＬ−チロシンエチルエステル
（リンａｔａ衝１ＰＴ（＝７．０８）３鼠ｌと共に入れ
、Ｎ−７セチルーＬ−チロシンエチルエステルの加水分
解生成物であるＮ−７セチルーＬ−チロシンとの吸光度
の差（ａｔ２３７Ｕ＋）を紫外可視分光光度計（日立２
００ｆＥｉ）で測定し、＃素反応の進行な確認した。そ
の結果、２６℃で６０分紅遇後、６Ｘ１０　　の吸光度
の変化がみられた。

実施例　３ 化合物 １ｙを水５０１に超音波分散させ、石けん状の液を得、
これにトリプシン（ＳＩＧＭＡ）２０篤９を加え、４０
℃に【激しく攪拌しながらポリスチレンスルホン醗ナト
リウム（粘度平均分子量＝１０６万）０．４．９を水２
０１７に溶解させた液を加えた。４０℃のまま３０分間
攪拌して生じた沈澱を濾別し、水でよく洗浄した後５０
％メタノールで洗浄、減圧乾燥し、白色の固形物０．９
１を得た。

この固形物２ＣＪ１９をクロロホルム１−に溶解し、こ
のうち０．１５−を石英板（０，９Ｘ２．５ｃｒＡ）上
に流延した後に溶媒を蒸発させ、石英板上に膜状物を形
成せしめた。

上記石英板を吸光度測定用セルに５Ｘ１０−’ＭＮ−ベ
ンゾイルーＬ−フルギニンエチルエステル（リン酸緩衝
液ＰＨ＝８．０２）２ｄと共に入れ、Ｎ−ベンゾイル−
Ｌ−フルギニンエチルエステルの加水分解生成物Ｎ−ベ
ンゾイル−Ｌ−フルギニンとの吸光度の差（ａｔ２５３
１ｍ）を紫外可視分光光度計（日立２００ｍ）で測定し
、酵素反応の進行を確認した。

その結果、３８℃で３０分経過後５Ｘ１０−Ｂの吸光度
変化がみられた。

実施例　４ 実施例１〜３と同様の方法で、第１表に示す直鎖有機化
合物１　ｍｍｏｌｅとイオン性基として当量のイオン性
重合体１　ｍｍｏｌｅと酵素１０冨９とから固形物を得
た。

この固形物０．１９を第１表に示す溶媒５１に溶解し、
直径５　Ｃｍのテフロン製シャーレにＲ，延した後′に
一溶媒を蒸発せしめ、膜状物を得た。

上記膜状物、０−を切り取り、基質との酵素反応を第１
表に示す方法を用いて測定し、固定化酵素としての機能
を有することを確認した。その結果、第１表に示す全て
の固定化酵素が充分な酵素活性を有していることが確認
された。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）イオン性基を有する重合体
2. （２）（イ）２本または３本の直鎖疎水基、または剛直
   性部分を連鎖中に含む１本の直鎖疎水基を有し、かつ （ロ）イオン性基を有する有機化合物
3. （３）酵素 よりなる固定化酵素