JPS637758B2 - - Google Patents
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- JPS637758B2 JPS637758B2 JP56138365A JP13836581A JPS637758B2 JP S637758 B2 JPS637758 B2 JP S637758B2 JP 56138365 A JP56138365 A JP 56138365A JP 13836581 A JP13836581 A JP 13836581A JP S637758 B2 JPS637758 B2 JP S637758B2
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- Japan
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- spiramycin
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
- C07H17/08—Hetero rings containing eight or more ring members, e.g. erythromycins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
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- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
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- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、スピラマイシンの改良された製造
法並びに改良された製造法を可能にした微生物に
関する。抗生物質スピラマイシンはスピラマイシ
ン,およびの成分が知られており、この抗
生物質スピラマイシンはストレプトマイセス・ア
ンボフアシエンスNRRL2420を培養する事によ
り、製造する事が知られている。 (特公昭34−499)又、スピラマイシンは、
スピラマイシンの各成分中、最も高い生物活性を
示すことが知られている。(フランス薬局方) しかし、公知の方法によりスピラマイシンを製
造すると、スピラマイシン,およびの混合
物が培養物中に生成される。その中で、スピラマ
イシンの生成比率は通常60%程である。スピラ
マイシンのみを製造するためには、該混合物か
ら他の成分を分離し、精製しなければならない。
(特公昭36−4599、特公昭36−21546)しかしなが
ら、それらの成分は化学構造が極めて類似してい
るため、それらスピラマイシンおよびの分離
精製は工業的には非常に困難である。本発明者ら
は、スピラマイシンのみを有利に製造するため
の方法を鋭意研究した結果、スピラマイシン,
およびを併産する菌株からスピラマイシン
およびを生産する能力を欠失し、スピラマイシ
ンのみを高収率で生産する微生物を造成するこ
とに成功し、スピラマイシンのみを有利に製造
する方法を見い出した。 本発明を具体的に説明するならば、公知のスピ
ラマイシン,およびを併産するストレプト
マイセス・アンボフアシエンスNRRL―2420か
らスピラマイシンおよびを生産する能力を欠
失し、スピラマイシンのみを著量蓄積する変異
株の造成に成功したものである。従つて本発明は
又、新たな菌学的性質を有する微生物に関する。
尚本発明にかかる微生物はストレプトマイセス・
アンボフアシエンスCS―93(ブタペスト条約によ
る寄託NRRL12511)としてアグリカルチユラ
ル・リサーチ・カルチユア・コレクシヨン
(NRRL)に寄託されている。 次に本発明による変異株の取得方法を具体的に
以下に述べる。 変異株の分離 ストレプトマイセス・アンボフアシエンス
NRRL2420をPH9.0のトリスマレイト緩衝液中、
28℃で45分間1mg/mlのN―メチル―N′―ニト
ロソ―N―ニトログアニジンで処理した後、表1
培地組成の寒天培地に接種する。28℃で5〜10日
間培養してから生存するコロニーを鈞菌し、表2
からなるスピラマイシン生産用培地でスピラマイ
シンの生産能力を調べる。このような選択条件
下でスピラマイシン単独生産菌株としてCS―93
を選択した。 表 1 マルトーズ 10g/L リン酸第二カリウム 0.5g/L 塩化ナトリウム 0.1g/L 硫酸鉄 0.1g/L バクトトリプトン 5g/L セルレニン 50mg/L 寒天 20g/L PH 7.4(NaOH) 本発明により得られるスピラマイシンのみを
生産する微生物を培養する培地は、炭素源、窒素
源、無機塩類および必要ならば、更にその他の微
量栄養源を含有する通常の液体培地である。炭素
源としては、グルコースのような単糖類、澱粉の
ような多糖類、グリセロールのような糖アルコー
ル、大豆油のような油が使用できる。窒素源とし
ては、塩安、硫安のようなアンモニウム塩、コー
ンスチープリカー、パン酵母のような有機窒素源
が使用できる。培養方法は好気的条件がよく、培
地のPHは殺菌前に実質的に中性、好適には6〜8
の間にする。培養温度は24〜30℃がよい。このよ
うにして5〜7日培養すると著量のスピラマイシ
ンが培地中に蓄積する。この場合、スピラマイ
シンおよびは後述のバイオオートグラフイー
法では検出されない。 培養液よりスピラマイシンを採取するには、
例えば菌体を分離し、水不混和性溶剤による溶媒
抽出法にて、スピラマイシンを抽出し、この抽
出液を濃縮し、晶出すれば、簡単にスピラマイシ
ンの結晶を得ることができる。以下に本発明を
実施例によつて詳細に説明する。 実施例 1 表2のシード培地300mlを張込んだ2容フラ
スコにストレプトマイセス・アンボフアシエンス
CS―93株(NRRL12511)を接種し、28℃にて48
時間振とう培養した。こ培養液を表2に主発酵培
地30mlを張込んだ250ml容フラスコに1ml添加し
て28℃、7日間培養した。対照実験として
NRRL12511株に代えて、ストレプトマイセス・
アンボフアシエンスNRRL2420株を用いて同一
操作を行つた。
法並びに改良された製造法を可能にした微生物に
関する。抗生物質スピラマイシンはスピラマイシ
ン,およびの成分が知られており、この抗
生物質スピラマイシンはストレプトマイセス・ア
ンボフアシエンスNRRL2420を培養する事によ
り、製造する事が知られている。 (特公昭34−499)又、スピラマイシンは、
スピラマイシンの各成分中、最も高い生物活性を
示すことが知られている。(フランス薬局方) しかし、公知の方法によりスピラマイシンを製
造すると、スピラマイシン,およびの混合
物が培養物中に生成される。その中で、スピラマ
イシンの生成比率は通常60%程である。スピラ
マイシンのみを製造するためには、該混合物か
ら他の成分を分離し、精製しなければならない。
(特公昭36−4599、特公昭36−21546)しかしなが
ら、それらの成分は化学構造が極めて類似してい
るため、それらスピラマイシンおよびの分離
精製は工業的には非常に困難である。本発明者ら
は、スピラマイシンのみを有利に製造するため
の方法を鋭意研究した結果、スピラマイシン,
およびを併産する菌株からスピラマイシン
およびを生産する能力を欠失し、スピラマイシ
ンのみを高収率で生産する微生物を造成するこ
とに成功し、スピラマイシンのみを有利に製造
する方法を見い出した。 本発明を具体的に説明するならば、公知のスピ
ラマイシン,およびを併産するストレプト
マイセス・アンボフアシエンスNRRL―2420か
らスピラマイシンおよびを生産する能力を欠
失し、スピラマイシンのみを著量蓄積する変異
株の造成に成功したものである。従つて本発明は
又、新たな菌学的性質を有する微生物に関する。
尚本発明にかかる微生物はストレプトマイセス・
アンボフアシエンスCS―93(ブタペスト条約によ
る寄託NRRL12511)としてアグリカルチユラ
ル・リサーチ・カルチユア・コレクシヨン
(NRRL)に寄託されている。 次に本発明による変異株の取得方法を具体的に
以下に述べる。 変異株の分離 ストレプトマイセス・アンボフアシエンス
NRRL2420をPH9.0のトリスマレイト緩衝液中、
28℃で45分間1mg/mlのN―メチル―N′―ニト
ロソ―N―ニトログアニジンで処理した後、表1
培地組成の寒天培地に接種する。28℃で5〜10日
間培養してから生存するコロニーを鈞菌し、表2
からなるスピラマイシン生産用培地でスピラマイ
シンの生産能力を調べる。このような選択条件
下でスピラマイシン単独生産菌株としてCS―93
を選択した。 表 1 マルトーズ 10g/L リン酸第二カリウム 0.5g/L 塩化ナトリウム 0.1g/L 硫酸鉄 0.1g/L バクトトリプトン 5g/L セルレニン 50mg/L 寒天 20g/L PH 7.4(NaOH) 本発明により得られるスピラマイシンのみを
生産する微生物を培養する培地は、炭素源、窒素
源、無機塩類および必要ならば、更にその他の微
量栄養源を含有する通常の液体培地である。炭素
源としては、グルコースのような単糖類、澱粉の
ような多糖類、グリセロールのような糖アルコー
ル、大豆油のような油が使用できる。窒素源とし
ては、塩安、硫安のようなアンモニウム塩、コー
ンスチープリカー、パン酵母のような有機窒素源
が使用できる。培養方法は好気的条件がよく、培
地のPHは殺菌前に実質的に中性、好適には6〜8
の間にする。培養温度は24〜30℃がよい。このよ
うにして5〜7日培養すると著量のスピラマイシ
ンが培地中に蓄積する。この場合、スピラマイ
シンおよびは後述のバイオオートグラフイー
法では検出されない。 培養液よりスピラマイシンを採取するには、
例えば菌体を分離し、水不混和性溶剤による溶媒
抽出法にて、スピラマイシンを抽出し、この抽
出液を濃縮し、晶出すれば、簡単にスピラマイシ
ンの結晶を得ることができる。以下に本発明を
実施例によつて詳細に説明する。 実施例 1 表2のシード培地300mlを張込んだ2容フラ
スコにストレプトマイセス・アンボフアシエンス
CS―93株(NRRL12511)を接種し、28℃にて48
時間振とう培養した。こ培養液を表2に主発酵培
地30mlを張込んだ250ml容フラスコに1ml添加し
て28℃、7日間培養した。対照実験として
NRRL12511株に代えて、ストレプトマイセス・
アンボフアシエンスNRRL2420株を用いて同一
操作を行つた。
【表】
バチルス・ズブチリスATCC6633菌を被検菌と
する生物力価検定によるバイオオートグラフイー
定量法にて各成分の定量を実施したところ表3に
示す結果を得た。該定量法は公知の通り(特公昭
36―349)ペーパークロマトグラフイー法により
分離したスピラマイシン,およびを、被検
菌が埋めこまれた培養基に転溶し、対照として純
粋な状態で単離された既知量のスピラマイシン
,およびを同様に処理し、一定時間培養
後、そのクロマトグラムから生物力価を決定する
ものである。ペーパークロマトグラフイーを実施
する際には通常1mcgをスポツトする。本法での
検出限界は0.01mcgであり、阻止帯が認められな
い場合は相対含量は1%以下である。
する生物力価検定によるバイオオートグラフイー
定量法にて各成分の定量を実施したところ表3に
示す結果を得た。該定量法は公知の通り(特公昭
36―349)ペーパークロマトグラフイー法により
分離したスピラマイシン,およびを、被検
菌が埋めこまれた培養基に転溶し、対照として純
粋な状態で単離された既知量のスピラマイシン
,およびを同様に処理し、一定時間培養
後、そのクロマトグラムから生物力価を決定する
ものである。ペーパークロマトグラフイーを実施
する際には通常1mcgをスポツトする。本法での
検出限界は0.01mcgであり、阻止帯が認められな
い場合は相対含量は1%以下である。
【表】
CS―93株の培養液1より菌体を分離し、そ
の液を弱アルカリ性(PH9.5)にしメチルイソ
ブチルケトンを500ml用いて抽出した。この抽出
液にリン酸酸性(PH3.0)の水500mlを加えスピラ
マイシン成分を抽出転溶した。この水性抽出液を
弱アルカリ性(PH9.5)にし、クロロホルム100ml
を加え抽出した。このクロロホルム抽出液を濃縮
して晶出しスピラマイシンの結晶160mgを得た。
この結晶を前述のバイオオートグラフイーで調べ
たところ単一のスポツトを示し、スピラマイシン
にそのRfは一致した。したがつて、SPMお
よびは実質的に存在していないものと判断され
た。 対照のNRRL2420の培養液を同様に処理して、
スピラマイシンの結晶約200mgを得た。この結晶
をバイオオートグラフイーで調べたところ、3成
分に別れ、そのRfはスピラマイシン,およ
びに一致した。また、その組成比は培養液の組
成比と概ね一致した。 実施例 2 実施例1と同様のシード培養を実施した
NRRL2420株と、その変異株のCS―93株の培養
液3mlを表2の主発酵培地100mlを張込んだ2
容フラスコに添加して28℃、7日間培養した。表
4にその結果を示す。
の液を弱アルカリ性(PH9.5)にしメチルイソ
ブチルケトンを500ml用いて抽出した。この抽出
液にリン酸酸性(PH3.0)の水500mlを加えスピラ
マイシン成分を抽出転溶した。この水性抽出液を
弱アルカリ性(PH9.5)にし、クロロホルム100ml
を加え抽出した。このクロロホルム抽出液を濃縮
して晶出しスピラマイシンの結晶160mgを得た。
この結晶を前述のバイオオートグラフイーで調べ
たところ単一のスポツトを示し、スピラマイシン
にそのRfは一致した。したがつて、SPMお
よびは実質的に存在していないものと判断され
た。 対照のNRRL2420の培養液を同様に処理して、
スピラマイシンの結晶約200mgを得た。この結晶
をバイオオートグラフイーで調べたところ、3成
分に別れ、そのRfはスピラマイシン,およ
びに一致した。また、その組成比は培養液の組
成比と概ね一致した。 実施例 2 実施例1と同様のシード培養を実施した
NRRL2420株と、その変異株のCS―93株の培養
液3mlを表2の主発酵培地100mlを張込んだ2
容フラスコに添加して28℃、7日間培養した。表
4にその結果を示す。
【表】
この培養液1を実施例1と同様な方法で精製
し、スピラマイシンの結晶160mgを得た。この
結晶をバイオオートグラフイーで調べたところ単
一のスポツトを示し、スピラマイシン,のス
ポツトは存在しなかつた。 実施例 3 実施例1と同様のシード培養を実施した
NRRL―2420とその変異株CS―93株の培養液300
mlを表2の主発酵培地3張り込んだ5ガラス
ジヤーフアーメンターに添加して28℃、500rpm、
通気3/minで7日間培養した。表5にその結
果を示す。
し、スピラマイシンの結晶160mgを得た。この
結晶をバイオオートグラフイーで調べたところ単
一のスポツトを示し、スピラマイシン,のス
ポツトは存在しなかつた。 実施例 3 実施例1と同様のシード培養を実施した
NRRL―2420とその変異株CS―93株の培養液300
mlを表2の主発酵培地3張り込んだ5ガラス
ジヤーフアーメンターに添加して28℃、500rpm、
通気3/minで7日間培養した。表5にその結
果を示す。
【表】
CS―93株の培養液3を実施例1と同様な方
法で精製し、スピラマイシンの結晶500mgを得
た。この結晶をバイオオートグラフイーで調べた
ところ単一のスポツトを示し、スピラマイシン
およびは存在しなかつた。NRRL2420の培養
液3を同様に処理し、スピラマイシンの結晶
630mgを得た。この結晶のバイオオートグラフイ
ーは3スポツトを示し、スピラマイシン,お
よびの混合物である事が確認された。
法で精製し、スピラマイシンの結晶500mgを得
た。この結晶をバイオオートグラフイーで調べた
ところ単一のスポツトを示し、スピラマイシン
およびは存在しなかつた。NRRL2420の培養
液3を同様に処理し、スピラマイシンの結晶
630mgを得た。この結晶のバイオオートグラフイ
ーは3スポツトを示し、スピラマイシン,お
よびの混合物である事が確認された。
Claims (1)
- 1 ストレプトマイセス属に属し、スピラマイシ
ンおよびスピラマイシン生産能を欠失し、且
つスピラマイシンを生産する能力を有する微生
物を栄養培地に培養し、培養物中にスピラマイシ
ンを蓄積せしめ、蓄積したスピラマイシンを
該培養物から採取する事を特徴とするスピラマイ
シンの製造法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56138365A JPS5840089A (ja) | 1981-09-04 | 1981-09-04 | スピラマイシン1の製造法 |
| EP82304597A EP0074244A1 (en) | 1981-09-04 | 1982-09-01 | Process for producing spiramycin I |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56138365A JPS5840089A (ja) | 1981-09-04 | 1981-09-04 | スピラマイシン1の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5840089A JPS5840089A (ja) | 1983-03-08 |
| JPS637758B2 true JPS637758B2 (ja) | 1988-02-18 |
Family
ID=15220222
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56138365A Granted JPS5840089A (ja) | 1981-09-04 | 1981-09-04 | スピラマイシン1の製造法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0074244A1 (ja) |
| JP (1) | JPS5840089A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100284174B1 (ko) * | 1999-02-12 | 2001-03-02 | 조생현 | 스피라마이신의 정제방법 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1211310A (fr) * | 1955-11-30 | 1960-03-15 | Rhone Poulenc Sa | Nouveaux antibiotiques du groupe de la spiramycine et leurs procédés de préparation |
| US2978380A (en) * | 1956-01-12 | 1961-04-04 | Rhone Poulenc Sa | Process for obtaining separately spiramycin 1, spiramycin ii, and spiramycin iii |
-
1981
- 1981-09-04 JP JP56138365A patent/JPS5840089A/ja active Granted
-
1982
- 1982-09-01 EP EP82304597A patent/EP0074244A1/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5840089A (ja) | 1983-03-08 |
| EP0074244A1 (en) | 1983-03-16 |
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