JPS647048B2 - - Google Patents
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- JPS647048B2 JPS647048B2 JP54034559A JP3455979A JPS647048B2 JP S647048 B2 JPS647048 B2 JP S647048B2 JP 54034559 A JP54034559 A JP 54034559A JP 3455979 A JP3455979 A JP 3455979A JP S647048 B2 JPS647048 B2 JP S647048B2
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- glucopyranoside
- glucopyranosyl
- ginsenoside
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- saponin
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
この発明は実質的にオタネニンジン中に存在す
るサポニン成分のみまたはその成分であるギンゼ
ノサイドRh1、ギンゼノサイドRg2、ギンゼノサ
イドRg1、ギンゼノサイドRe、ギンゼノサイド
Rb1の単一物もしくは混合物よりなる細胞賦活剤
に関する。 ウコギ科に属するオタネニンジン（バナツクス
ギンゼング、シー．エイ．メイヤー；
Panaxginseng、C.A.MEYER）は一名チヨウセ
ンニンジンと呼ばれ、古来より疲労回復、強精、
消炎、利尿、胃腸衰弱改善、抗糖尿用の薬剤とし
て用いられてきたことは広く知られていることで
ある。近時、これらの薬効がチヨウセンニンジン
中のサボニン成分によるのではないかとの研究が
進められている。しかしながらこのサポニンがヒ
ト細胞賦活剤の効果を有することは全く知られて
いない。 この発明はオタネニンジン中のサポニン成分が
細胞賦活作用を有し、特にギンゼノサイドRh1：
20S−プロトパナキサトリオール−６−Ｏ−β−
Ｄ−グルコピラノシド、 ギンゼノサイドRg2：20S−プロトパナキサト
リオール−６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド、 ギンゼノサイドRg1：20S−プロトパナキサト
リオール−6.20−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノ
シド、 ギンゼノサイドRe：20S−プロトパナキサトリ
オール−６−〔Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20−Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシド、 ギンゼノサイドRb1：20S−プロトパナキサジ
オール−３−〔−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20−〔Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ
−グルコピラノシド〕にその効果が著しいという
新しい知見に基づいてなされたものである。 我々は上記チヨウセンニンジンのサポニンがヒ
ト細胞に対し細胞賦活作用をもたらし寿命を延長
することを見出し、裏付けることができた。細胞
は生物生命の基本単位であることは広く知られる
ところであるが、ヒトにおける細胞は、皮フ、消
化管内壁の上皮、骨髄、リンパ系諸器官、精巣、
血液、肺臓、肝臓等の細胞を構成しかつ分裂を繰
返し体内で死んで行く細胞の補給を行う分裂細胞
群と筋肉、脳細胞等の細胞分裂能力はないが生理
的な機能を営む分裂終了細胞群に分類されてい
る。現在これらの基本単位である分裂細胞は、組
織より取出し特に適当な培地、例えば10％子牛血
清添加MEM培地の中で培養し分裂増殖させ殖え
継いでその生長衰退の性状、性質を検討すること
ができるようになつている。この継代培養の進行
は３期にわけられ、初代培養期の第１期の次に一
定の速度で増殖してゆく第期がつづき、いかよ
うに条件をととのえてやつても増殖度が次第に衰
え継代できずに死滅する第期に至る。第期の
期間がもつとも長くこの間は細胞自身に蛋白合成
機能が高まり、DNAがふえ、一定速度で分裂が
活発に行われる。第期となると細胞自体にリポ
ゾームの崩解が認められ、蛋白合成機能が低下し
継代不能となり死滅して細胞の寿命が消失する。
この細胞の寿命というべき継代不能となる継代回
数は同一培地を使用した場合細胞によつてほぼ定
まつている。 例えばヒト胎児の肺より分離した正常２倍体線
維芽細胞（W1−１）の場合は10％牛血清添加
EME培地による培養で第期（増殖期）におけ
る細胞分裂の時間は35±２時間の速度で分裂を繰
返し増殖生存して行くが、第期に入り衰弱死滅
して51代で継代不能となる。 また、ヒトのウイルナー症候群皮フ細胞を用い
た場合は22代の継代培養で継代不能となり死滅す
る。このとき第期の初めに培地に対し200μ
ｇ／ml濃度の朝鮮ニンジン総サポニン、
ginsenoside Rb1.Rg2.Rg1.Re.Rb1を添加すると細
胞賦活作用をもたらし、第期の細胞活動を長か
らしめ継代回数を延長せしめる。 即ち、ヒト・ウイルナー症候群皮フ細胞の継代
培養に対して、１年性ニンジン総サポニンで4.5
％、４年性ニンジン総サポニンで22.7％、６年性
ニンジン総サポニン31.8％、ギンゼノサイドRh1
で59％、ギンゼノサイドRg2で50％、ギンゼノサ
イドRg1で44.5％、ギンゼノサイドReで36.4％、
ギンゼノサイドRb1で13.6％の継代回数の延長を
もたらす。 また、ヒト胎児肺由来正常二培体線維芽細胞
（W1−１）に対してもほぼ同様継代培養回数の延
長効果を認めた。添加濃度の範囲は10μｇ〜300μ
ｇ／mlが適当であるが100μｇ〜200μｇ／mlの濃
度がもつとも望ましい。 以上の如くチヨウセンニンジンサポニン並びに
ギンゼノサイドRh1，Rg2，Rg1，Re，Rb1が細
胞賦活作用を有し、細胞の寿命延長に効果をもた
らすことは明らかであるが、これを人体に投与す
る場合は１日20mg〜500mg好ましくは50mg〜200mg
を２〜３回に分けて投与することにより効力を発
揮できる。 投与は、経口、非経口の何れであつてもよい。
経口投与の際は、散剤、丸剤、錠剤等とされる。
これらの剤型は、乳糖、澱粉、デキストリン等の
賦形剤に適宜他の添加剤を添加し、通常の製剤化
技術に従つて作られる。また非経口投与の際は、
例えば坐剤が注射剤とされる。注射剤とすれば、
例えばリンゲル液にこの発明の有効成分をそのま
ま又は予め適当な倍量に希釈した水性溶液を添加
して注射剤とするのが好ましい。坐剤は、通常の
坐剤の製造技術に従つて作られる。 オタネニンジンの生薬からサポニン成分を得る
方法としては、例えば次のような方法で得ること
ができる。すなわち、原料となるニンジンを脱脂
せずに、あるいは通常の脂溶性有機溶媒を用いて
脱脂後、水または低級脂肪族アルコール類あるい
は含水低級脂肪族アルコールを用いてその有効成
分を抽出し、抽出液を蒸発濃縮して抽出エキスと
する。これをｎ−ブタノールに溶解し、該溶解液
に水を加えて振盪した後静置して不溶性物質を除
去し、ｎ−ブタノール層を蒸発乾固する。残留物
を低級脂肪族アルコールに溶解後、エーテル中に
撹拌注入して得られた析出物を取すればよい
（特公昭48−5016号参照）。 このようにして得られた抽出物は実質的にサポ
ニン成分のみを含むものであつて、そのままこの
発明の有効成分として使用できる。 この発明によるサポニン成分は、原料とするオ
タネニンジンの栽培年数などによつて構成される
成分の種類・量に若干の差があるが、後述するご
とき式（）、（）および（）の化合物を含有
するものである。サポニン成分の全体の性状とし
ては、いずれも黄白色〜かつ色の粉末で苦味を有
し、水、メタノール、希メタノールに易溶、エタ
ノールに可溶、クロロホルム、エーテル、四塩化
炭素に不溶である。また酸加水分解によつて必ず
水可溶部からブドウ糖が得られ、水不溶部からバ
ナキサザオール（C30H52O3、mp205℃）およ
び／または、バナキサトリオール（C30H52O4、
mp238〜239℃）が得られる。 また組織培養によりサポニンを得るには例えば
ノツプ（Knop）培養液（硫酸カルシウム1000
mg／、硝酸カリウム250mg／、硫酸マグネシ
ウム250mg／、第１燐酸カリウム250mg／）
500ml、ヘラー（d′Heller）のミネラル液１ml／
、ブドウ糖５％、ビタミンB10-6ｇ、ビオチン
10-6ｇ、カイネチン10-6ｇ、寒天１％よりなる培
地にオタネニンジンの根の組織片を入れ、26℃に
保つて培養増殖せしめ、ニンジンカルスを得る。
次いでこのカルスを同一の培地を用いて大量増殖
させ、このものを前記した抽出法と同様にして抽
出精製することによつてサポニン成分を得ること
ができる。 また、この発明におけるサポニン成分中には次
の式（）または（）で表わされるギンゼノサ
イド（ginsenoside）類の少なくとも一種類が含
まれ、さらに場合により式（）で表わされるβ
−Ｄ−グルコピラノシルオレアネート−(3)−β−
Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グル
クロノピラノシドが含まれたものである。 式（）： 式中、R1はβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→
２）−β−Ｄ−グルコピラノシル基を示し、R2は
β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ−
グルコピラノシル基、α−Ｌ−アラビノピラノシ
ル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基、β
−Ｄ−キシロピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシル基、α−Ｌ−アラビノフラノシル
（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基またはβ
−Ｄ−グルコピラノシル基を示す。 式（）： 式中、R3はα−Ｌ−アラノピラノシル（１→
２）−β−Ｄ−グルコピラノシル基、β−Ｄ−グ
ルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラ
ノシル基、β−Ｄ−グルコピラノシル基またはα
−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシル基を示し、R4は水素原子または
β−Ｄ−グルコピラノシル基を示す。 式（）： 式中、R5はβ−Ｄ−グルコピラノシル基を示
し、R6はβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）・
−β−Ｄ−グルクロノピラノシル基を示す。 式（）および式（）で表わされるサポニン
はトリテルペンのダンマラン系配糖体に属するサ
ポニンである。これら式（）および式（）の
サポニンは、現在のところオタネニンジンの如き
薬用ニンジンにのみに特異的に含まれることが判
明しているものである。 式（）で表わされる化合物の個々の具体名と
しては、20S−プロトパナキサジオール−３−
〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−
Ｄ−グルコピラノシド〕−20−〔Ｏ−β−Ｄ−グル
コピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
シド〕（ギンゼノサイドRb1）、20S−プロトパナ
キサジオール−３−〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノ
シル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20
−〔Ｏ−α−Ｌ−アラビノピラノシル（１→６）−
β−Ｄ−グルコピラノシド〕（ギンゼノサイド
Rb2）、20S−プロトパナキサジオール−３−〔Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ
−グルコピラノシド〕−20−〔Ｏ−α−Ｌ−アラビ
ノフラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
シド〕（ギンゼノサイドRc）、20S−プロトバナキ
サジオール−３−〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20−
〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−
Ｄ−グルコピラノシド〕（ギンゼノサイドRb2）
および20S−プロトパナキサジオール−３−〔Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ
−グルコピラノシド〕−20−〔Ｏ−β−Ｄ−グルコ
ピラノシド〕（ギンゼノサイドRd）が挙げられ
る。 式（）で表わされる化合物の具体名としては
20S−プロトパナキサトリオール−６−〔Ｏ−β
−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシド〕−20−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラ
ノシド（ギンゼノサイドRe）、20S−プロトパナ
キサトリオール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノ
シル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（ギ
ンゼノサイドRf）、20S−プロトパナキサトリオ
ール−6.20−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド
（ギンゼノサイドRg1）、20S−プロトバナキサト
リオール−６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（ギンゼノ
サイドRg2）、20S−プロトパナキサトリオール−
６−〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−
β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20−Ｏ−β−Ｄ−
グルコピラノシド（ギンゼノサイド20−グルコ−
Rf）および20S−プロトパナキサトリオール−６
−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ギンゼノサイ
ドRh1）が挙げられる。 なお、オタネニンジン中には前述した式（），
（）および（）の構造式を有するサポニンの
他に、式（）の骨格を有すると考えられるギン
ゼノサイドRaと称せられている構造未定のサボ
ニンおよび式（）の骨格を有すると考えられる
ギンゼノサイドRh2と称せられている構造末定の
サポニンも含まれており、これらの物質もこの発
明のサポニン成分に含まれる（Chem.Pharm.
Bull.，22(2)，421〜428（1974）および薬学雑誌94
(2)，252〜260（1974）参照）。 また、ギンゼノサイドUh1，Rg2，Rg1，Re，
Rb1は前述の如くして得られたサポニン成分をク
ロロホルム／メタノール／水系あるいはｎ−ブタ
ノール／酢酸水系の展開溶剤を用いたシリカゲル
カラムクロマトグラフイー、高速液体クロマトグ
ラフイーなどにより各構成サポニンに分離、精製
することによつて得ることができる。 夫々性状は次の通りである。 １ 分子式、融点および比旋光度 【表】 ２ いずれも白色に結晶で苦味を有し水、メタノ
ール、希メタノールに易溶、エタノールに可
溶、クロロホルム、四塩化炭素に難溶である。 ３ いずれも水と共に振るとき持続性の小泡を生
じ、リーベルマン反応、ザウコウスキー反応陽
性である。 ４ 酸加水分解反応によつて、水不溶部よりRb1
よりはバナキサジオール（C30H52O3.mp205
℃），Rh1，Rg2，Rg1，Reよりはバナキサトリ
オール（C30H52O4.mp238℃）が得られる。又
水可溶部より、Rb1よりはグルコーゼが、Rh1
よりはグルコーゼ、Rg2よりはグリコーゼとラ
ムノーゼが、Rg1よりはグリコーゼが、Reより
はグリコーゼとラムノーゼが得られる。 ５ 薄層クロマトグラフイーの展開位置は夫々
「図面の説明」の所に記載の通りである。 次の実施例によつて、この発明のギンゼノサイ
ド類のヒト細胞に対する細胞賦活作用を示す。 実施例 １ ヒトのウイルナー症候群の皮フ組織をトリブ
シン処理（0.05％トリブシン水溶液を用う）に
よつて細胞浮遊液とし、これをMEM培養液※
（10％子牛血清添加）にうえつぎ36℃で培養す
る（播種比１：４）。２〜３日で細胞はガラス
面を一面におおうようになる。これを再びトリ
ブシン処理して細胞浮遊液とし、１本の培養瓶
の内容を２本に分けてMEM培養液（10％子牛
血液添加）にうえつぎ継代培養を行う。 同操作によつて週２回、規則的に継代培養を
繰返して行く。22代の継代培養によつて細胞の
増殖が全く認められず継代培養不能となる。 これに対してオタネニンジンの１年性根の総
サポニン、４年性根の総サポニン、６年性根の
総サポニン、ギンゼノサイドRh1，Rg2，Rg1，
Rge，Rb1を夫々継代培養７代目より培養液中
に培養液に対し20μｇ／ml濃度となるよう添加
し、その後の継代培養においても培養液に同操
作をほどこし、継代培養を続行すると添加しな
い細胞の継代培養が22代で不能となるのに比
し、下記の如く細胞の寿命が著しく延長され継
代培養が延長される。 【表】 ２ ヒト胎児の肝由来の正常二倍体線維芽細胞
（W1−１）の細胞浮遊液を用いて１と同一条
件、同一操作で継代培養を行うと、51代の継代
培養で細胞の増殖は全く認められなくなり、継
代培養不能となつた。 これに対し継代培養15代目より培地に対し
夫々200μｇ／ml濃度の朝鮮ニンジンン総サポ
ニン、ギンゼノサイドRh1，Rg2，Rg1.Re，
Rb1を添加したものは51代の継代培養寿命が下
記の如く延長される。 【表】 【表】 ※ MEM培養液（Minimm Essential
Medium for Suspension） Ｌ−塩酸アルギニン 126.4mg／ Ｌ−シスチン 24.0 Ｌ−グルタミン 292.3 Ｌ−塩酸ヒスチジン 41.9 Ｌ−イソロイシン 52.5 Ｌ−ロイシン 52.5 Ｌ−塩酸リジン 73.1 Ｌ−メチオニン 14.9 Ｌ−フエニルアラニン 33.0 Ｌ−スレオニン 47.6 Ｌ−トリプト−フアン 10.2 Ｌ−チロジン 36.2 Ｌ−ヴアリン 46.9 Ｌ−塩化コリン 1.0 Ｄ−Caペントテナアート 1.0 葉酸 1.0
るサポニン成分のみまたはその成分であるギンゼ
ノサイドRh1、ギンゼノサイドRg2、ギンゼノサ
イドRg1、ギンゼノサイドRe、ギンゼノサイド
Rb1の単一物もしくは混合物よりなる細胞賦活剤
に関する。 ウコギ科に属するオタネニンジン（バナツクス
ギンゼング、シー．エイ．メイヤー；
Panaxginseng、C.A.MEYER）は一名チヨウセ
ンニンジンと呼ばれ、古来より疲労回復、強精、
消炎、利尿、胃腸衰弱改善、抗糖尿用の薬剤とし
て用いられてきたことは広く知られていることで
ある。近時、これらの薬効がチヨウセンニンジン
中のサボニン成分によるのではないかとの研究が
進められている。しかしながらこのサポニンがヒ
ト細胞賦活剤の効果を有することは全く知られて
いない。 この発明はオタネニンジン中のサポニン成分が
細胞賦活作用を有し、特にギンゼノサイドRh1：
20S−プロトパナキサトリオール−６−Ｏ−β−
Ｄ−グルコピラノシド、 ギンゼノサイドRg2：20S−プロトパナキサト
リオール−６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド、 ギンゼノサイドRg1：20S−プロトパナキサト
リオール−6.20−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノ
シド、 ギンゼノサイドRe：20S−プロトパナキサトリ
オール−６−〔Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20−Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシド、 ギンゼノサイドRb1：20S−プロトパナキサジ
オール−３−〔−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20−〔Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ
−グルコピラノシド〕にその効果が著しいという
新しい知見に基づいてなされたものである。 我々は上記チヨウセンニンジンのサポニンがヒ
ト細胞に対し細胞賦活作用をもたらし寿命を延長
することを見出し、裏付けることができた。細胞
は生物生命の基本単位であることは広く知られる
ところであるが、ヒトにおける細胞は、皮フ、消
化管内壁の上皮、骨髄、リンパ系諸器官、精巣、
血液、肺臓、肝臓等の細胞を構成しかつ分裂を繰
返し体内で死んで行く細胞の補給を行う分裂細胞
群と筋肉、脳細胞等の細胞分裂能力はないが生理
的な機能を営む分裂終了細胞群に分類されてい
る。現在これらの基本単位である分裂細胞は、組
織より取出し特に適当な培地、例えば10％子牛血
清添加MEM培地の中で培養し分裂増殖させ殖え
継いでその生長衰退の性状、性質を検討すること
ができるようになつている。この継代培養の進行
は３期にわけられ、初代培養期の第１期の次に一
定の速度で増殖してゆく第期がつづき、いかよ
うに条件をととのえてやつても増殖度が次第に衰
え継代できずに死滅する第期に至る。第期の
期間がもつとも長くこの間は細胞自身に蛋白合成
機能が高まり、DNAがふえ、一定速度で分裂が
活発に行われる。第期となると細胞自体にリポ
ゾームの崩解が認められ、蛋白合成機能が低下し
継代不能となり死滅して細胞の寿命が消失する。
この細胞の寿命というべき継代不能となる継代回
数は同一培地を使用した場合細胞によつてほぼ定
まつている。 例えばヒト胎児の肺より分離した正常２倍体線
維芽細胞（W1−１）の場合は10％牛血清添加
EME培地による培養で第期（増殖期）におけ
る細胞分裂の時間は35±２時間の速度で分裂を繰
返し増殖生存して行くが、第期に入り衰弱死滅
して51代で継代不能となる。 また、ヒトのウイルナー症候群皮フ細胞を用い
た場合は22代の継代培養で継代不能となり死滅す
る。このとき第期の初めに培地に対し200μ
ｇ／ml濃度の朝鮮ニンジン総サポニン、
ginsenoside Rb1.Rg2.Rg1.Re.Rb1を添加すると細
胞賦活作用をもたらし、第期の細胞活動を長か
らしめ継代回数を延長せしめる。 即ち、ヒト・ウイルナー症候群皮フ細胞の継代
培養に対して、１年性ニンジン総サポニンで4.5
％、４年性ニンジン総サポニンで22.7％、６年性
ニンジン総サポニン31.8％、ギンゼノサイドRh1
で59％、ギンゼノサイドRg2で50％、ギンゼノサ
イドRg1で44.5％、ギンゼノサイドReで36.4％、
ギンゼノサイドRb1で13.6％の継代回数の延長を
もたらす。 また、ヒト胎児肺由来正常二培体線維芽細胞
（W1−１）に対してもほぼ同様継代培養回数の延
長効果を認めた。添加濃度の範囲は10μｇ〜300μ
ｇ／mlが適当であるが100μｇ〜200μｇ／mlの濃
度がもつとも望ましい。 以上の如くチヨウセンニンジンサポニン並びに
ギンゼノサイドRh1，Rg2，Rg1，Re，Rb1が細
胞賦活作用を有し、細胞の寿命延長に効果をもた
らすことは明らかであるが、これを人体に投与す
る場合は１日20mg〜500mg好ましくは50mg〜200mg
を２〜３回に分けて投与することにより効力を発
揮できる。 投与は、経口、非経口の何れであつてもよい。
経口投与の際は、散剤、丸剤、錠剤等とされる。
これらの剤型は、乳糖、澱粉、デキストリン等の
賦形剤に適宜他の添加剤を添加し、通常の製剤化
技術に従つて作られる。また非経口投与の際は、
例えば坐剤が注射剤とされる。注射剤とすれば、
例えばリンゲル液にこの発明の有効成分をそのま
ま又は予め適当な倍量に希釈した水性溶液を添加
して注射剤とするのが好ましい。坐剤は、通常の
坐剤の製造技術に従つて作られる。 オタネニンジンの生薬からサポニン成分を得る
方法としては、例えば次のような方法で得ること
ができる。すなわち、原料となるニンジンを脱脂
せずに、あるいは通常の脂溶性有機溶媒を用いて
脱脂後、水または低級脂肪族アルコール類あるい
は含水低級脂肪族アルコールを用いてその有効成
分を抽出し、抽出液を蒸発濃縮して抽出エキスと
する。これをｎ−ブタノールに溶解し、該溶解液
に水を加えて振盪した後静置して不溶性物質を除
去し、ｎ−ブタノール層を蒸発乾固する。残留物
を低級脂肪族アルコールに溶解後、エーテル中に
撹拌注入して得られた析出物を取すればよい
（特公昭48−5016号参照）。 このようにして得られた抽出物は実質的にサポ
ニン成分のみを含むものであつて、そのままこの
発明の有効成分として使用できる。 この発明によるサポニン成分は、原料とするオ
タネニンジンの栽培年数などによつて構成される
成分の種類・量に若干の差があるが、後述するご
とき式（）、（）および（）の化合物を含有
するものである。サポニン成分の全体の性状とし
ては、いずれも黄白色〜かつ色の粉末で苦味を有
し、水、メタノール、希メタノールに易溶、エタ
ノールに可溶、クロロホルム、エーテル、四塩化
炭素に不溶である。また酸加水分解によつて必ず
水可溶部からブドウ糖が得られ、水不溶部からバ
ナキサザオール（C30H52O3、mp205℃）およ
び／または、バナキサトリオール（C30H52O4、
mp238〜239℃）が得られる。 また組織培養によりサポニンを得るには例えば
ノツプ（Knop）培養液（硫酸カルシウム1000
mg／、硝酸カリウム250mg／、硫酸マグネシ
ウム250mg／、第１燐酸カリウム250mg／）
500ml、ヘラー（d′Heller）のミネラル液１ml／
、ブドウ糖５％、ビタミンB10-6ｇ、ビオチン
10-6ｇ、カイネチン10-6ｇ、寒天１％よりなる培
地にオタネニンジンの根の組織片を入れ、26℃に
保つて培養増殖せしめ、ニンジンカルスを得る。
次いでこのカルスを同一の培地を用いて大量増殖
させ、このものを前記した抽出法と同様にして抽
出精製することによつてサポニン成分を得ること
ができる。 また、この発明におけるサポニン成分中には次
の式（）または（）で表わされるギンゼノサ
イド（ginsenoside）類の少なくとも一種類が含
まれ、さらに場合により式（）で表わされるβ
−Ｄ−グルコピラノシルオレアネート−(3)−β−
Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グル
クロノピラノシドが含まれたものである。 式（）： 式中、R1はβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→
２）−β−Ｄ−グルコピラノシル基を示し、R2は
β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ−
グルコピラノシル基、α−Ｌ−アラビノピラノシ
ル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基、β
−Ｄ−キシロピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシル基、α−Ｌ−アラビノフラノシル
（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノシル基またはβ
−Ｄ−グルコピラノシル基を示す。 式（）： 式中、R3はα−Ｌ−アラノピラノシル（１→
２）−β−Ｄ−グルコピラノシル基、β−Ｄ−グ
ルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラ
ノシル基、β−Ｄ−グルコピラノシル基またはα
−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシル基を示し、R4は水素原子または
β−Ｄ−グルコピラノシル基を示す。 式（）： 式中、R5はβ−Ｄ−グルコピラノシル基を示
し、R6はβ−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）・
−β−Ｄ−グルクロノピラノシル基を示す。 式（）および式（）で表わされるサポニン
はトリテルペンのダンマラン系配糖体に属するサ
ポニンである。これら式（）および式（）の
サポニンは、現在のところオタネニンジンの如き
薬用ニンジンにのみに特異的に含まれることが判
明しているものである。 式（）で表わされる化合物の個々の具体名と
しては、20S−プロトパナキサジオール−３−
〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−
Ｄ−グルコピラノシド〕−20−〔Ｏ−β−Ｄ−グル
コピラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
シド〕（ギンゼノサイドRb1）、20S−プロトパナ
キサジオール−３−〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノ
シル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20
−〔Ｏ−α−Ｌ−アラビノピラノシル（１→６）−
β−Ｄ−グルコピラノシド〕（ギンゼノサイド
Rb2）、20S−プロトパナキサジオール−３−〔Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ
−グルコピラノシド〕−20−〔Ｏ−α−Ｌ−アラビ
ノフラノシル（１→６）−β−Ｄ−グルコピラノ
シド〕（ギンゼノサイドRc）、20S−プロトバナキ
サジオール−３−〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20−
〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−
Ｄ−グルコピラノシド〕（ギンゼノサイドRb2）
および20S−プロトパナキサジオール−３−〔Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−β−Ｄ
−グルコピラノシド〕−20−〔Ｏ−β−Ｄ−グルコ
ピラノシド〕（ギンゼノサイドRd）が挙げられ
る。 式（）で表わされる化合物の具体名としては
20S−プロトパナキサトリオール−６−〔Ｏ−β
−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グ
ルコピラノシド〕−20−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラ
ノシド（ギンゼノサイドRe）、20S−プロトパナ
キサトリオール−６−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノ
シル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（ギ
ンゼノサイドRf）、20S−プロトパナキサトリオ
ール−6.20−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド
（ギンゼノサイドRg1）、20S−プロトバナキサト
リオール−６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（ギンゼノ
サイドRg2）、20S−プロトパナキサトリオール−
６−〔Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→２）−
β−Ｄ−グルコピラノシド〕−20−Ｏ−β−Ｄ−
グルコピラノシド（ギンゼノサイド20−グルコ−
Rf）および20S−プロトパナキサトリオール−６
−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシド（ギンゼノサイ
ドRh1）が挙げられる。 なお、オタネニンジン中には前述した式（），
（）および（）の構造式を有するサポニンの
他に、式（）の骨格を有すると考えられるギン
ゼノサイドRaと称せられている構造未定のサボ
ニンおよび式（）の骨格を有すると考えられる
ギンゼノサイドRh2と称せられている構造末定の
サポニンも含まれており、これらの物質もこの発
明のサポニン成分に含まれる（Chem.Pharm.
Bull.，22(2)，421〜428（1974）および薬学雑誌94
(2)，252〜260（1974）参照）。 また、ギンゼノサイドUh1，Rg2，Rg1，Re，
Rb1は前述の如くして得られたサポニン成分をク
ロロホルム／メタノール／水系あるいはｎ−ブタ
ノール／酢酸水系の展開溶剤を用いたシリカゲル
カラムクロマトグラフイー、高速液体クロマトグ
ラフイーなどにより各構成サポニンに分離、精製
することによつて得ることができる。 夫々性状は次の通りである。 １ 分子式、融点および比旋光度 【表】 ２ いずれも白色に結晶で苦味を有し水、メタノ
ール、希メタノールに易溶、エタノールに可
溶、クロロホルム、四塩化炭素に難溶である。 ３ いずれも水と共に振るとき持続性の小泡を生
じ、リーベルマン反応、ザウコウスキー反応陽
性である。 ４ 酸加水分解反応によつて、水不溶部よりRb1
よりはバナキサジオール（C30H52O3.mp205
℃），Rh1，Rg2，Rg1，Reよりはバナキサトリ
オール（C30H52O4.mp238℃）が得られる。又
水可溶部より、Rb1よりはグルコーゼが、Rh1
よりはグルコーゼ、Rg2よりはグリコーゼとラ
ムノーゼが、Rg1よりはグリコーゼが、Reより
はグリコーゼとラムノーゼが得られる。 ５ 薄層クロマトグラフイーの展開位置は夫々
「図面の説明」の所に記載の通りである。 次の実施例によつて、この発明のギンゼノサイ
ド類のヒト細胞に対する細胞賦活作用を示す。 実施例 １ ヒトのウイルナー症候群の皮フ組織をトリブ
シン処理（0.05％トリブシン水溶液を用う）に
よつて細胞浮遊液とし、これをMEM培養液※
（10％子牛血清添加）にうえつぎ36℃で培養す
る（播種比１：４）。２〜３日で細胞はガラス
面を一面におおうようになる。これを再びトリ
ブシン処理して細胞浮遊液とし、１本の培養瓶
の内容を２本に分けてMEM培養液（10％子牛
血液添加）にうえつぎ継代培養を行う。 同操作によつて週２回、規則的に継代培養を
繰返して行く。22代の継代培養によつて細胞の
増殖が全く認められず継代培養不能となる。 これに対してオタネニンジンの１年性根の総
サポニン、４年性根の総サポニン、６年性根の
総サポニン、ギンゼノサイドRh1，Rg2，Rg1，
Rge，Rb1を夫々継代培養７代目より培養液中
に培養液に対し20μｇ／ml濃度となるよう添加
し、その後の継代培養においても培養液に同操
作をほどこし、継代培養を続行すると添加しな
い細胞の継代培養が22代で不能となるのに比
し、下記の如く細胞の寿命が著しく延長され継
代培養が延長される。 【表】 ２ ヒト胎児の肝由来の正常二倍体線維芽細胞
（W1−１）の細胞浮遊液を用いて１と同一条
件、同一操作で継代培養を行うと、51代の継代
培養で細胞の増殖は全く認められなくなり、継
代培養不能となつた。 これに対し継代培養15代目より培地に対し
夫々200μｇ／ml濃度の朝鮮ニンジンン総サポ
ニン、ギンゼノサイドRh1，Rg2，Rg1.Re，
Rb1を添加したものは51代の継代培養寿命が下
記の如く延長される。 【表】 【表】 ※ MEM培養液（Minimm Essential
Medium for Suspension） Ｌ−塩酸アルギニン 126.4mg／ Ｌ−シスチン 24.0 Ｌ−グルタミン 292.3 Ｌ−塩酸ヒスチジン 41.9 Ｌ−イソロイシン 52.5 Ｌ−ロイシン 52.5 Ｌ−塩酸リジン 73.1 Ｌ−メチオニン 14.9 Ｌ−フエニルアラニン 33.0 Ｌ−スレオニン 47.6 Ｌ−トリプト−フアン 10.2 Ｌ−チロジン 36.2 Ｌ−ヴアリン 46.9 Ｌ−塩化コリン 1.0 Ｄ−Caペントテナアート 1.0 葉酸 1.0
第１図は各サポニンを下記条件で薄層クロマト
グラフイーに付したときのクロマトグラムであ
る。 （展開条件） 担体：キーゼルゲルF254（メルク社製） 溶剤：クロロホルム・メタノール・水（65：
35：10下層） 展開距離：15cm 発色：１％第二硫酸セリウム−10％硫酸噴霧後
105℃５分加熱各サポニン紅紫色呈色。
グラフイーに付したときのクロマトグラムであ
る。 （展開条件） 担体：キーゼルゲルF254（メルク社製） 溶剤：クロロホルム・メタノール・水（65：
35：10下層） 展開距離：15cm 発色：１％第二硫酸セリウム−10％硫酸噴霧後
105℃５分加熱各サポニン紅紫色呈色。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ オタネニンジン（パナツクス ギンゼング、
シー．エイ．メイヤー）のサポニン成分を有効成
分として含有する皮膚細胞賦活剤。 ２ サポニン成分が、ギンゼノサイドRh1：20S
−プロトパナキサトリオール−６−Ｏ−β−Ｄ−
グルコピラノシド、 ギンゼノサイドRg2：20S−プロトパナキサト
リオール−６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド、 ギンゼノサイドRg1：20S−プロトパナキサト
リオール−6.20−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノ
シド、 ギンゼノサイドRe：20S−プロトパナキサトリ
オール−６−［Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド］−20−Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシドおよび ギンゼノサイドRb1：20S−プロトパナキサジ
オール−３−［Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド］−20−［Ｏ
−β−Ｄ−グルコピラノシル（１→６）−β−Ｄ
−グルコピラノシド］ の単一物または混合物である特許請求の範囲第１
項記載の皮膚細胞賦活剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3455979A JPS55129228A (en) | 1979-03-24 | 1979-03-24 | Cell-activating agent |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3455979A JPS55129228A (en) | 1979-03-24 | 1979-03-24 | Cell-activating agent |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55129228A JPS55129228A (en) | 1980-10-06 |
| JPS647048B2 true JPS647048B2 (ja) | 1989-02-07 |
Family
ID=12417660
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3455979A Granted JPS55129228A (en) | 1979-03-24 | 1979-03-24 | Cell-activating agent |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS55129228A (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2717389B1 (fr) * | 1994-03-18 | 1996-06-07 | Lvmh Rech | Utilisation du ginsénoside Ro ou d'un extrait végétal en contenant pour stimuler la synthèse du collagène. |
| JPH1036279A (ja) * | 1996-07-18 | 1998-02-10 | Ichimaru Pharcos Co Ltd | 植物抽出物含有線維芽細胞増殖促進剤 |
| FR2767057B1 (fr) * | 1997-08-08 | 1999-10-29 | Lvmh Rech | Utilisation du ginsenoside rb1 comme agent destine a stimuler la synthese de l'elastine |
| WO2001092289A1 (en) * | 2000-05-31 | 2001-12-06 | Japan Science And Technology Corporation | SKIN TISSUE REGENERATION PROMOTERS COMPRISING GINSENOSIDE Rb1 |
| AU2003233733A1 (en) * | 2002-06-11 | 2003-12-22 | Panagin Pharmaceuticals Inc. | Compositions for cancer therapy saponins or sapogenins |
-
1979
- 1979-03-24 JP JP3455979A patent/JPS55129228A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS55129228A (en) | 1980-10-06 |
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