KR19990077401A

KR19990077401A - 폴리에톡실화레틴아미드유도체및그의제조방법

Info

Publication number: KR19990077401A
Application number: KR1019990003758A
Authority: KR
Inventors: 정봉열; 김영근; 이인상; 박봉준; 조완구; 송영숙; 박문억; 김영득; 이성준
Original assignee: 성재갑; 주식회사 엘지화학
Priority date: 1998-03-30
Filing date: 1999-02-04
Publication date: 1999-10-25
Anticipated expiration: 2019-02-04
Also published as: DE69907656D1; JP2002509914A; US6316644B1; DE69907656T2; ATE239701T1; EP1068181B1; EP1068181A1; WO1999050240A1; KR100297061B1; JP3510591B2

Abstract

본 발명은 피부노화 억제제로서 유용한 하기 화학식 1의 폴리에톡실화 레틴아미드 유도체, 이를 제조하는 방법 및 이를 유효성분으로 함유함을 특징으로 하는 화장료 조성물에 관한 것이다:

상기식에서,

R 은 수소 또는 C_1-6-저급알킬을 나타내고,

n 은 2 내지 100 범위의 수이다.

Description

폴리에톡실화 레틴아미드 유도체 및 그의 제조방법 {Polyethoxylated retinamide derivatives and process for preparing the same}

본 발명은 피부노화 억제제로서 유용한 하기 화학식 1의 폴리에톡실화 레틴아미드 유도체 및 그의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 화학식 1의 13-트랜스-폴리에톡실화 레틴아미드 유도체는 비자극성일 뿐아니라, 피부흡수력과 콜라겐 합성 효능이 증진된 특성을 나타냄으로써 노화방지용 의약 및 화장품에 기능성 원료로서 유용하게 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한, 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 함유함을 특징으로 하는 화장료 조성물에 관한 것이다

화학식 1

상기식에서,

R 은 수소 또는 C_1-6-저급알킬을 나타내고,

n 은 2 내지 100 범위의 수이다.

장기간의 햇빛 노출은 주름살, 피부의 거칠음, 반점 등 특징적인 피부의 광노화뿐아니라 케라토시스(Keratosis)와 같은 피부암 등 수많은 피부 불균형을 야기시킨다.

이러한 피부의 광노화는 트레티노인(all-트랜스-레티노산)을 함유하는 크림을 피부에 바를 경우 개선될 수 있다고 보고되어 있으나(참조: "Topical Tretinoin Improves Photoaged Skin", JAMA, 259, Vol 4, pp95, 527~532, Jan, 22/29, 1988, the authors Webb et. al.), 이 물질은 지용성이므로 흡수력이 낮고 생체내에서 불안정하며 피부에 자극적이고 잠복기간 동안에 피부건조, 상처, 허물 벗겨짐 등의 부작용을 초래할 수 있다. 이러한 부작용으로 인하여 트레티노인을 의약 및 화장품의 주원료로 사용하는데 많은 어려움이 있으므로, 광노화의 억제라는 트레티노인의 활성을 그대로 유지하면서도 비자극적인 새로운 기능성 원료의 개발이 절실히 요구되고 있다.

트레티노인에 비해 좀더 개선된 피부노화 억제제로서, 13-트랜스 레티노산의 에스테르 또는 아미드 유도체가 피부질환 및 여드름에 치료효과를 나타내는 것으로 보고되었다. 즉, 2-(all-트랜스-레티노일옥시)-4-메톡시아세토페논 화합물은 비교적 저자극성이면서도 사용시 피부암이나 광노화의 억제에 효과를 나타내는 것으로 보고되었으며(참조: 미합중국 특허 제4,677,120호], 레티노산과 테트라에틸렌글리콜과의 에스테르화에 의해서 얻어진 화합물은 피부에 대한 침투효과가 증가된 것으로 보고되었다(참조: 미합중국 특허 제4,900,478호). 또한, N-(4-하이드록시페닐)레틴아미드(4-HPR) 및 레티노일 β-글루크로나이드(RAG) 역시 레티노산의 활성을 보유하면서도 상대적으로 독성이 감소된 것으로 보고된 바 있다(참조: FASEB J., 10, 1014-1024, 1996).

그러나, 상기 언급된 레티노산의 에스테르 및 아미드는 지용성이므로 근본적으로 피부 흡수력이 미약하여 콜라겐 합성의 증진기능 및 엘라스틴 분해 방지효과를 크게 기대하기 어렵거나, 생체 내에서의 빠른 효소분해로 인한 안정성 문제가 지적되고 있다. 따라서, 기존의 레티노이드계 노화방지용 원료약품들의 사용상 단점인 자극성이 다소 극복되었다 하더라도, 외피로부터의 흡수력이 증가되어 생체내에서의 세포 재생 기능이 극대화되고 안정성이 향상된 새로운 피부노화 억제제에 대한 욕구는 여전히 남아있다고 하겠다.

이에 본 발명자들은 종래의 문제점을 해결하고자 집중적인 연구를 수행하였으며, 그 과정에서 폴리에틸렌글리콜 유도체에 계면활성력이 뛰어나고 친수성에 의한 피부흡수력 증진효과가 있을 뿐아니라 물에 용해되어 배설됨으로써 잔류 독성을 극소화할 수 있는 바람직한 성질이 있음에 착안하고, 이를 레티노산 유도체와 아미드 축합반응시킨 새로운 화학식 1의 폴리에톡실화 레틴아미드 유도체를 개발하게 되었다. 이렇게 하여 개발된 화학식 1의 화합물은 기존의 레티노산 유도체에 비해 화학적 안정성과 피부흡수력이 뛰어나 궁극적으로 피부 재생에 있어서 탁월한 효과를 나타내었다.

도 1은 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물과 비교물질인 레티노산 및 레티놀 팔미테이트의 콜라겐 합성 증가율을 비교한 것이다.

도 2는 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물과 비교물질인 레티노산 및 레티놀 팔미테이트의 세포독성효과를 비교한 것이다.

본 발명은 피부노화 억제제로서 유용하게 사용될 수 있는 하기 화학식 1의 폴리에톡실화 레틴아미드 유도체에 관한 것이다:

화학식 1

상기식에서,

R 은 수소 또는 C_1-6-저급알킬을 나타내고,

n 은 2 내지 100 범위의 수이다.

상기 화학식 1의 화합물중에서도 더욱 바람직한 화합물은 R이 수소 또는 메틸이고, n이 4 내지 40 범위의 수인 화합물이다.

또한, 본 발명은 신규한 화학식 1의 화합물을 제조하는 방법을 제공한다. 화학식 1의 화합물은 1) 하기 화학식 2a의 화합물을 용매중에서 유기아민 촉매 존재하에 하기 화학식 3a의 모노-메톡시 폴리에틸렌글리콜 아민과 반응시키거나, 2) 하기 화학식 2b의 화합물을 용매중에서 축합제 및 촉매의 존재하에 화학식 3a의 화합물과 반응시키거나, 3) 하기 화학식 2c의 화합물을 용매중에서 염기 존재하에 하기 화학식 3b의 모노-메톡시 폴리에틸렌글리콜 할라이드 또는 설포네이트와 반응시킴을 특징으로 하여 제조할 수 있다.

상기식에서

R 및 n은 앞에서 정의한 바와 같고,

X¹은 할로겐을 나타내며,

X²는 할로겐, p-톨루엔설포닐 또는 메탄설포닐을 나타낸다.

상기 제조방법에 대해 보다 구체적으로 설명하면 다음과 같다.

방법 1)에서 촉매로 작용하는 유기아민으로는 피리딘 또는 트리에틸아민이 바람직하게 사용되며, 용매로는 무수 유기용매, 예를들어 디클로로메탄, 벤젠, 톨루엔, 테트라하이드로푸란 및 디에틸에테르중에서 선택된 1종 이상이 바람직하게 사용된다. 이때, 유기아민은 화학식 3a의 화합물을 기준으로 하여 1.0 내지 2.0 몰배량 사용하는 것이 바람직하다.

방법 2)에서 축합제로는 N,N-카보닐디이미다졸(CDI) 또는 N,N-디사이클로헥실카보디이미드(DCC)를 사용하고, 축합반응을 촉진시키는 촉매로는 N,N-디메틸아미노피리딘(DMAP) 또는 1-하이드록시벤조트리아졸(HOBT)을 바람직하게 사용한다. 또한, 용매로는 방법 1)에서 설명한 것과 동일한 종류를 언급할 수 있다. 반응은 통상 질소대기하에 빛과 수분이 차단된 상태에서 진행되며 냉각 내지 가온된 상태에서 이루어진다.

방법 3)에서 염기로는 수소화나트륨, 수산화나트륨, 수소화칼륨, 탄산나트륨 또는 탄산칼륨과 같은 금속염기 또는 피리딘, 트리에틸아민과 같은 유기염기 중에서 선택된 1 종 이상을 사용할 수 있고 용매로는 방법 1)에서 설명한 것과 동일한 종류를 언급할 수 있다.

그러나, 본 발명에 따른 방법에서 사용될 수 있는 염기, 축합제, 촉매 및 용매가 상기 열거된 것만으로 한정되는 것은 아니고, 반응에 악영향을 끼치지 않는 범위내에서 당업계에 통상적으로 공지된 모든 것이 사용될 수 있다.

본 발명의 방법에서 출발물질로 사용되는 화학식 2a의 할라이드 화합물은 화학식 2b의 카복실산 화합물을 삼염화인, 티오닐클로라이드 등과 같은 할로겐화제와 반응시킴으로써 제조할 수 있으며, 화학식 3a 또는 3b의 폴리에틸렌글리콜 유도체는 공지의 방법[참조: ① S. Zalipsky, C. Gilon and A. Zilkha., Eur. Polym. J., Vol. 19, No. 12, pp 1177-1183, 1983., ② J. Milton. Harris, N. H. Hundley, T. G. Shannon and E. C. Struck., J. Org. Chem. 1982, 47, 4789-4791.]에 따라 용이하게 제조하여 사용할 수 있다(실시예 1의 나 참조).

또한, 상기 설명한 방법으로 제조된 화학식 1의 화합물은 통상의 분리, 정제 방법, 예를들어 재결정이나 칼럼 크로마토그래피법을 사용하여 정제할 수 있다.

화학식 1의 화합물은 피부암이나 여드름과 같은 피부 질환에 의한 주름살, 주근깨 등의 치료에 사용될 수 있다. 특히, 화학식 1의 화합물은 투약에 따른 피부 자극성이 없으며, 피부 흡수력이 뛰어나서 콜라겐 생합성의 극대화 및 엘라스틴 분해 방지를 통한 피부 재생 효과를 지니고 있음을 특징으로 하고 있다.

화학식 1 화합물의 생리활성을 확인하기 위한 실험은 다음과 같이 수행되었다. 먼저, 경피 흡수 실험은 8주령 암컷 쥐의 등쪽 피부를 절취함으로써 수행되었으며 35mM의 시료를 적용한 후 경피흡수 측정기기(Franz cell) 및 HPLC를 사용하여 분석하였다. 세포 독성 실험은 V79-4 세포를 이용한 MTT 실험을 통해서 수행되었고, 피부 자극성 실험은 기니아 피그(Guinea Pig)를 이용한 패치실험을 통하여 물과 프로필렌글리콜의 o/w 제형 및 렉솔 GT-865를 사용하여 0.1 내지 1% 범위의 농도에서 수행되었다. 피부기관 배양실험은 무모 암컷쥐를 대상으로 MTT법을 이용하여 수행하였으며, 알러지 테스트는 에탄올을 운반매개물로 사용하여 쥐(Balb/c)를 대상으로 수행하였다. 한편, 세포재생 효과는 인간섬유아세포에 대한 콜라겐합성증진 효과를 측정하여 알아보았다.

이러한 실험결과, 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 기존에 상업적으로 사용되어온 노화 억제용 의약 및 화장품 원료인 레티노산 또는 레티놀 팔미테이트 등과 비교하여 경피 흡수력에 있어서 2~10배의 증가정도를 나타내었으며, 세포 독성 실험에서는 10^-4w%/㎖ 이하에서 무독성인 특성을 갖는 것으로 확인되었다. 따라서, 화학식 1의 화합물은 그의 무독성, 비자극성의 물성에 더하여 극대화된 피부 흡수력 및 이에 따른 우수한 콜라겐 합성 증진기능을 가지므로 의약 및 화장품(크림, 로션, 겔 등의 형태)에 노화방지용 첨가제로서 편리하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기위한 것일 뿐, 어떤 의미로든 본 발명의 범위가 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다.

실시예 1: 화학식 1의 폴리에톡실화 레틴아미드(R: 메틸, n=9.8)의 제조

가) 디사이클로헥실카보디이미드(DCC) 3.41g (0.0165몰)을 1-아미노-폴리에틸렌글리콜-모노메틸에테르(화학식 3a) (평균 분자량 550) 6.98g (0.0126몰), 레티노산 4.54g (0.0151몰) 및 1-하이드록시벤조트리아졸 1.7g (0.0126몰)의 무수 디클로로메탄 용액 50 ㎖에 가한후 질소하에서 빛과 수분을 차단한 가운데 상온에서 8시간 교반해주었다. 반응 용액을 여과한 후 용매를 감압증류하여 제거하고 컬럼 크로마토그래피로 분리하여 (SiO₂, 메쉬 크기 270~400, 디클로로메탄/메탄올 = 15:1, v/v) 표제화합물 (왁스 형태의 연 노랑색 액체, Tm = -15℃, Rf = 0.22) 9.42g (수율 = 75%)을 수득하였다.

나) 상기 가)에서 사용된 출발 물질인 1-아미노-폴리에틸렌글리콜-모노메틸에테르(화학식 3a)는 폴리에틸렌글리콜-모노메틸에테르로부터 3단계 반응을 거쳐 하기와 같이 제조되었다.

ⅰ) 폴리에틸렌글리콜 모노메틸에테르 55g (0.1몰)을 톨루엔 300㎖에 용해시킨 후 증류하여 건조시킨 다음, 무수 피리딘 7.9g (0.1몰)을 가하였다. 반응액을 가열환류시키면서 티오닐 클로라이드 7.3㎖를 30분간 적가하였다. 적가 완료 후 4시간 동안 반응액을 가열 환류시킨 후 상온으로 냉각시켰다. 반응액을 여과하여 피리딘 염산염을 제거한 후 톨루엔을 감압하에 제거하였다. 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고 무수 탄산칼륨으로 건조시킨 후 여과하였다. 여액을 활성 알루미나 (100g)로 처리하여, 여과시킨후 감압증류하여 클로로-폴리에틸렌글리콜 모노메틸 에테르[MPEG₅₅₀-Cl] 56g (수율 = 99%, Tm = -10℃, 무색 액체)을 수득하였다.

ⅱ) 단계 ⅰ)에서 수득된 MPEG₅₅₀-Cl 56g (0.099몰)을 디메틸포름아미드[DMF] 300㎖에 용해시킨 용액에 아지도 나트륨(NaN₃) 51.2g (0.79몰)을 가하고 3시간 동안 120℃에서 가열하였다. 반응액을 냉각, 여과한 후 감압 증류하여 DMF를 제거하였다. 잔류물을 디클로로메탄에 용해시키고, 물로 세척하고, 분리된 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과 및 감압증류하여 아지도-폴리에틸렌글리콜 모노메틸에테르 [MPEG₅₅₀-N₃] 55g (수율 98%, Tm = -11℃, 무색 액체)을 수득하였다.

ⅲ) 단계 ⅱ)에서 수득한 MPEG₅₅₀-N₃55g과 트리페닐포스핀(Ph₃P) 28.4g (0.107몰)을 테트라하이드로푸란 300㎖에 용해시킨 후 물 3㎖를 가하고 상온에서 8시간동안 교반하였다. 반응액을 감압 증류하여 용매를 제거하고, 잔류물을 디클로로메탄에 용해시킨 후 물로 세척하였다. 분리된 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 감압증류하였다. 수득된 혼합물을 실리카겔[SiO₂] (300g)에 통과시켜 부생성물인 트리페닐포스핀옥사이드를 제거한 다음, 감압증류하여 1-아미노-폴리에틸렌글리콜 모노메틸에테르[MPEG₅₅₀-NH₂] 45g (수율 85%, 연 노란색 액체, Tm = -12℃)을 수득하였다[참고문헌 : Bioconjugate Chem., Vol. 7. No. 2, 1996].

실시예 2: 화학식 1의 폴리에톡실화 레틴아미드(R: 메틸, n=9.8)의 제조

레티노산 4.0g (0.013몰)을 무수 톨루엔 20㎖에 용해시킨 후, 여기에 삼염화인 (PCl₃) 1.83g (0.013몰)을 적가하고 상온에서 빛과 수분을 차단한 채 질소하에 15시간 동안 교반하였다.

상기 수득된 레티노산 클로라이드 용액을 실시예 1의 나)에서 얻어진 1-아미노-폴리에틸렌글리콜 모노메틸에테르 7.15g (0.013몰) 및 트리에틸아민 1.57g(0.016몰)과 함께 얼음 냉각하에서 20분간 무수 메틸렌 클로라이드 40㎖에 적가해 준 후, 계속해서 5시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응액을 포화 염화나트륨 50㎖에 가하고 유기층을 분리하여 물로 세척한 다음 황산나트륨으로 건조, 여과 및 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 분리(실리카, 메쉬 크기 200~400, 메틸렌클로라이드/메탄올 = 15:1, v/v)하여 연 노란색의 표제화합물 9.1g (수율 86%)을 수득하였다.

실시예 3: 화학식 1의 폴리에톡실화 레틴아미드(R: 메틸, n=9.8)의 제조

가) 레틴아미드 3g(0.01몰)의 무수 톨루엔 20㎖ 용액을 수소화나트륨0.58g (0.012몰)의 무수 톨루엔 10㎖ 용액에 얼음 냉각하에서 적가한 후 상온에서 4시간 교반하였다. 상기 혼합액에 모노메톡시 폴리에틸렌글리콜 p-톨루엔 설포네이트 7.11g (0.01몰)의 무수 톨루엔 20㎖ 용액을 10분간 적가한 후 상온에서 10시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압증류하여 농축시킨 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 분리하여 (실리카, 메쉬 크기 200~400, 메틸렌클로라이드/메탄올 = 15:1, v/v) 연노란색의 표제화합물 6.9g (수율 82%)을 수득하였다.

나) 상기 가)에서 출발물질로 사용된 레틴아미드(화학식 2c)는 레티노산으로부터 하기와 같이 제조되었다.

실시예 2에 기재된 방법에 따라 제조된 레티노산 클로라이드 10g (0.031몰)을 암모니아수(35%) 300㎖와 테트라하이드로푸란 100㎖의 혼합액에 가한 후 상온에서 20시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 증류하여 농축한 후 메틸렌클로라이드를 가하여 추출하였다. 분리된 유기층을 물로 세척하고, 무수 마그네슘설페이트로 처리하여 건조시키고, 여과한 후 감압증류하여 레틴아미드 9.43g (수율 99%)을 수득하였다.

실시예 4: 화학식 1의 폴리에톡실화 레틴아미드(R: 수소, n=9.8)의 제조방법

디사이클로헥실카보디이미드(DCC) 3g (0.0146몰)을 1-아미노-폴리에틸렌글리콜 (분자량 400) 4.48g (0.0112몰), 레티노산 3.98g (0.0133몰) 및 1-하이드록시벤조트리아졸 1.51g (0.0112몰)의 무수 디클로로메탄 40㎖ 용액에 가한 후 실시예 1의 가)에서와 동일한 방법으로 실시하여 표제화합물을 제조하였다(수율 62%, Tm= -14℃, Rf=0.15).

실시예 5: 경피흡수 실험

기존의 노화방지용 의약 및 화장품 원료로써 사용되고 있는 레티놀, 레티놀 팔미테이트 및 레티노산을 비교약물로 하여, 본 발명에 따른 화학식 1 화합물의 경피흡수 실험을 운반매개로 오일(카프릴릭 카프릭 트리글리세라이드)과 에탄올의 1:1 혼합용매를 사용하여 수행하였다(참고: Lehman PA, Slattery JT, Franz TJ. Percutaneous absorption of retinoids : Influence of vehicle, light exposure, and dose, J. Invest Dermatol., 91; 56-61, 1988). 즉, 8주령의 암컷 쥐(무모 마우스)의 등쪽 부위를 절취하고 1.7cm²의 피부에 35mM의 시료용액 250㎕씩을 적용하였다. 경피흡수 측정기기(Franz cell)를 이용하여 24시간 후 수용기(receptor)용액[비이온 계면활성제로서 2% VolPO20 Polyethylene oleyl ether(HLB=16)를 포함하는 50mM PBS 완충용액(pH=7.4)] 7㎖와 피부에 각각 흡수된 물질을 추출하여 고압액체 크로마토그래피(HPLC)로 정량분석하고 그 결과를 표 1에 나타내었다.

표 1에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 기존에 피부노화 억제제로서 사용되어온 레티놀의 3배, 레티놀 팔미테이트의 6배, 레티노산의 2.4배로서 상대적으로 높은 경피흡수증가율을 나타내었다.

실시예 6: 콜라겐 합성효과시험

화학식 1 화합물(R=CH₃, n=9.8)의 피부노화 억제제로서의 유용성을 확인하기 위하여, 그의 콜라겐 합성효과를 대조물질로서 레티노산과 레티놀 팔미테이트를 이용하여 비교 실험하였다. 24개의 웰을 가진 플레이트에 동일수의 사람 섬유아세포 (human fibroblast)를 24시간동안 배양한 후 10^-4내지 10^-7w%/㎖로 시료를 적용하였다. 2시간 후 트리튬이 도입된 프롤린(L-2,3-³H 프롤린)을 적용하여 24시간동안 배양하고, 배양배지를 이용하여 섬유아세포가 새롭게 합성분비한 콜라겐의 양을 트리튬이 도입된 프롤린의 cpm(counting per minute)에 의거하여 측정함으로써 csp(콜라겐 민감 단백질: collagenous sensitive protein)의 양을 계산하였다. 또한, 계산된 csp 양을 이용하여 콜라겐 합성효과를 비교한 결과를 도 1에 나타내었다(참고: ① David F. W. and Wilson Harvey, Analytical Biochemistry, 1979 ; 96, 220-224. ② Atsushi Hatamochi, Masashi Ono, Hiroaki Ueki, and Masayoshi Namba., J. Invest Dermatol., 1991, 96, 473-477). 단, 도 1에서 대조군은 피부노화 억제물질이 첨가되지 않고, 콜라겐 합성에 활성을 갖는 혈청이 첨가된 것을 나타낸다.

도 1에서 보는 바와 같이, 레티놀 팔미테이트는 거의 콜라겐 합성증진효과를 나타내지 않았으며, 레티노산은 10^-6w%/㎖에서 최고 21.7%의 증가효과를 나타내었다. 반면에, 폴리에톡실화된 화학식 1의 화합물은 놀랍게도, 10^-7w%/㎖에서 최고 (33.8%)의 증진효과를 보였다.

실시예 7: 알러지 테스트(LLNA)

화학식 1의 화합물(R=CH₃, n=9.8)에 대한 안전성 실험방법으로는 운반 매개물로 에탄올을 사용하는 방법을 택하였다(참고: Kimber Ⅰ(1990): Identification of contact allergens using the murine local lymph node assay, J. Appl. Toxicol. 10(3); 173~180). 비교물질로서 레티놀 팔미테이트 및 레티노산과 화학식 1의 화합물을 각각 0.3%, 1% 농도의 아세톤/올리브오일(4/1, v/v) 용액으로 제조하였다. 쥐(Balb/c)의 양쪽 귀에 50㎕씩 3일간 발라준 후 쥐로부터 이개임파절(Auricular lymph node)을 분리하였다. 임파절을 분쇄하여 단일세포 상태로 만든 후 방사성 동위원소(³H-티미딘)를 첨가하여 24시간동안 배양한 다음, 세포의 증폭도[cpm]를 측정한 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

표 2에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 0.3%및 1% 용액에서 모두 에탄올에 비해 3배 이하의 낮은 유발성을 나타낸 반면, 레티놀 팔미테이트와 레티노산은 동일 조건에서 6배 이상의 높은 알러지 유발성을 보였다.

실시예 8: 피부 자극성 시험

화학식 1의 화합물(R=CH₃, n=9.8)의 피부 자극성을 확인하기 위하여 기니아피그(Guinea Pig)를 이용한 첩포시험(Patch test)를 수행하였다(참고: ①Draize, J. H.(1959): Dermal toxicity. Assoc. Food and Drug officials, US. Appraisal of the safety of chemicals in Food, Drugs and Cosmetics., pp46-59, Texas State Dept. of Health, Austin, Texas. ②Federal Register(1973): Method of testing primary irritant substances 38(187): pp1500-1541]. o/w제형 또는 렉솔 GT-865를 운반매개로 한 0.3% 농도의 6종류 시료용액을 제조하였다. 먼저, 시료 도포부위(등)의 털을 제거하고 피부 자극을 최소화하기 위해 24시간 동안 환경에 적응시켰다. 설정된 시료 도포부위(1.5cm×1.5cm)에 시료와 가아제를 적용한 다음 시료의 증발 및 손실을 방지하기 위해 고형 재질의 박지로 밀봉하고 탄력 붕대로 48시간동안 고정시켰다. 폐쇄첩포를 제거한 후 2시간, 24시간(첩포후 50시간, 72시간)째에 자극의 정도를 판정하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

표 3의 결과로부터 알 수 있듯이, 레티놀 팔미테이트, 레티노산과 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물의 자극정도에는 유의한 차이가 없음을 알 수 있다.

실시예 9: 피부기관 배양시험

본 발명에 따른 화학식 1의 화합물(R=CH₃, n=9.8)의 1차 안전성을 검증하기 위하여 9주령 무모 암컷쥐를 대상으로 실험하였다. 렉솔 GT-865를 운반매체로 하는 7 종류의 시료용액을 제조한 후 MTT[3-(4,5-디메틸티아졸-2,5-디페닐테트라졸리움 브로마이드)] 시험법을 수행한 결과는 하기 표 4에 나타내었다(참고: J. J. M. Van De SandT, A. A. J. J. L. Rutten & H. B. W. M. Koeter., Cutaneous toxicity testing in organ culture: Neutral Red uptake & Reduction of tetrazolium salt(MTT) Toxic. In Vitro Vol. 7, No. 1, 81~86, 1993).

표 4에서 보는 바와 같이, 0.3%의 레티노산은 강한자극을 나타낸 반면, 동일농도의 레티놀 팔미테이트와 화학식 1의 화합물은 유사하게 약한 자극을 나타내었다.

실시예 10: 세포독성 시험

의약 및 화장품에 사용되는 원료로서의 1차 안전성을 검증하고자 화학식 1의 화합물(R=CH₃, n=9.8)에 대하여 V79-4 세포(차이니스 햄스터, 폐조직 섬유아세포의 연속(continuous) 세포주)를 배양하여 MTT 시험법(참고: Mossman T.(1983). Rapid colorimetric assay for cellular growth & survival: application to proliferation & cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods 65, 55~63]을 수행함으로써 세포독성을 조사하고, 그 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2의 결과로부터 알 수 있듯이, 본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 10^-3w%/㎖ 이상에서는 점차 독성을 나타내었으나 10^-4w%/㎖ 이하에서는 미약한 독성만을 나타내었다. 이러한 결과는 독성을 나타내지 않는 한계농도인 10^-4w%/㎖ 이하에서 세포증진 효과를 보이기 시작하여 10^-7w%/㎖에서 최고의 콜라겐 합성 증진효과를 보이며, 상대적으로 세포독성을 발현하는 10^-3w%/㎖ 이상에서는 세포증진 효과를 나타내지 못하는 도 1의 실험결과와 잘 일치됨을 알 수 있다.

Claims

하기 화학식 1의 폴리에톡실화 레틴아미드 유도체:

화학식 1

상기식에서,

R 은 수소 또는 C_1-6-저급알킬을 나타내고,

n 은 2 내지 100 범위의 수이다.
제 1 항에 있어서, R이 수소 또는 메틸이고, n이 4 내지 40 범위의 수인 화합물.
1) 하기 화학식 2a의 화합물을 용매중에서 유기아민 촉매 존재하에 하기 화학식 3a의 모노-메톡시 폴리에틸렌글리콜 아민과 반응시키거나, 2) 하기 화학식 2b의 화합물을 용매중에서 축합제 및 촉매의 존재하에 화학식 3a의 화합물과 반응시키거나, 3) 하기 화학식 2c의 화합물을 용매중에서 염기 존재하에 하기 화학식 3b의 모노-메톡시 폴리에틸렌글리콜 할라이드 또는 설포네이트와 반응시킴을 특징으로 하여 제 1 항에 정의된 화학식 1의 화합물을 제조하는 방법:

화학식 2a

화학식 3a

화학식 2b

화학식 2c

화학식 3b

상기식에서

R 및 n은 제 1 항에서 정의한 바와 같고,

X¹은 할로겐을 나타내며,

X²는 할로겐, p-톨루엔설포닐 또는 메탄설포닐을 나타낸다.
제 3 항에 있어서, 방법 1)에서 유기아민 촉매가 피리딘 또는 트리에틸아민이며, 촉매를 화학식 3a의 화합물에 대해 1.0 내지 2.0몰배량 사용하는 방법.
제 3 항에 있어서, 방법 2)에서 축합제가 N,N-디사이클로헥실카보디이미드 (DCC) 또는 N,N-카보닐디이미다졸(CDI)인 방법.
제 3 항에 있어서, 방법 2)에서 촉매가 N,N-디메틸아미노피리딘 (DMAP) 또는 1-하이드록시벤조트리아졸(HOBT)인 방법.
제 3 항에 있어서, 방법 3)에서 염기가 수소화나트륨, 수산화나트륨, 탄산나트륨, 수소화칼륨, 탄산칼륨, 피리딘 및 트리에틸아민 중에서 선택된 1종 이상인 방법.
제 3 항에 있어서, 용매가 디클로로메탄, 벤젠, 톨루엔, 테트라하이드로푸란 및 디에틸에테르 중에서 선택된 1종 이상인 방법.
제 1 항에 정의된 화학식 1의 화합물을 유효성분으로 함유함을 특징으로 하는 화장료 조성물.