KR20100123768A

KR20100123768A - 줄기 세포 생성을 위한 혈액, 바람직하게는 말초 혈액을 수집하는 키트

Info

Publication number: KR20100123768A
Application number: KR1020107023005A
Authority: KR
Inventors: 마르코 폴레티니; 알레산드라 감바쿠르타
Original assignee: 세일즈 엔지니어링 에이지
Priority date: 2008-03-18
Filing date: 2009-03-17
Publication date: 2010-11-24
Also published as: RS52863B; SI2276569T1; CN102015108A; JP5517362B2; US8500712B2; WO2009115522A1; CA2718527C; BRPI0909754A2; EA018290B1; HRP20130668T1; IL208145A0; AU2009226963B2; AU2009226963A1; MX2010010251A; PL2276569T3; EA201071069A1; EP2276569A1; CN102015108B; JP2011515084A; EP2276569B1

Abstract

항응고제 및 물질 MCSF (대식세포 집락 자극 인자)를 함유하는, 채취 혈액을 담을 수 있는, 적어도 하나의 제1용기(12)로 이루어진, 만능 줄기 세포의 생성을 위해 혈액 바람직하게는 말초 혈액을 수집하는 키트(10)

Description

줄기 세포 생성을 위한 혈액, 바람직하게는 말초 혈액을 수집하는 키트 {Kit for collecting blood, preferably peripheral blood, for the production of stem cells}

본 발명은 성인 줄기 세포 형성을 위한 혈액, 바람직하게는 말초 혈액을 수집하는 키트에 관한 것이다.

최근에는 지금까지 치료 불능으로 여겨졌던 질병들을 치료하는 여러 성공들로 인해 줄기 세포의 활용이 널리 인정받게 되었다.

그런데, 줄기 세포들을 얻는 공지의 방법들은 오래 걸리고 힘들며 비용도 높게 든다.

만능 줄기 세포(PSC)는 연구용뿐만 아니라 약품 제조 및 이식용으로도 이용가능한 소스이다 (웨이저스 에이. 제이.외 2002; 그리피뜨 엘.쥐.외 2002).

태아 및 성인 줄기 세포들이 있으며, 전자는 8일 배반포에서 유도해낸 것이고, 성인것은 주로 골수, 지방, 근육 조직, 말초 혈액, 탯줄로부터 얻을 수 있다.

줄기 세포의 정의는 계속 발전하고 있으며, 현재 이들을 분리하거나 식별하는 일반적인 표준적인 방법은 없다. 태아(ES) 및 성인, 혈액 세포 요소(HSC) 또는 제대혈 (MSC) (쿠와나 엠.외 2003) 이들 모두의 세포에 대해, 여러 유전 표시자들이 식별되어 왔고, 그 중 몇은 여러 셀 타입에서 흔한 것이다(콘도민즈 엠.외 2006, 강 더블유. 제이.외 2006; 자오 와이.외 2003; 라비노비치 엠.외 1976).

현재, 연구는 태아 조직, 태아 및 탯줄로부터 분리된 줄기 세포들을 이용하는 쪽으로 더 연구가 되고 있으나, 이는 법적 그리고 윤리적 문제를 야기하고 있다. 특히, 현재까지 이들 셀의 이용은 감염위험, 이식시의 거부 위험, 말등의 포유동물에서는 기형종 출현등의 여러 반대 징후를 보인다.

이러한 문제점들을 해결하기 위해서, 생체내 치료에서는 자기 조직의 줄기 세포, 바람직하게는 골수, 지방조직 또는 말초 혈액으로부터 분리된 세포들을 이용하는 것이 알려져있다.

성인 줄기 세포로부터 시작해서, 분화의 특정 유도 인자에 의해 요구되는 세포 라인내의 줄기 세포들의 시험관내(생체 밖)에서의 분화 단계와, 상기 얻어진 분화 셀 라인의 생체내에서의 후속 이식 단계가 있다.

이들 방법에서는 이들은 시험관내에서 유도된 분화 단계동안에 자체 인식 인자를 잃어버리는 만큼, 관련 기관내로 재도입된 분화된 셀들이 자체 셀로 인정받지 않기 때문에 "거부 현상"의 불리점이 있다.

사람에 있어서는 말초 혈액으로부터 줄기 세포를 취하는 것은 방혈(aphaeresis) 또는 백색 혈액 세포 획득법으로 불리는 과정을 통해 정화가 이루어진다.

이들 세포들은 혈액으로부터 추출되고 수집된 후, 화학요법 또는 방사요법 직후에 환자들에게 주입된다.

6-8시간 지속되는 방혈에서, 혈액은 팔의 정맥 또는 목이나 가슴의 정맥에서 취해지고, 줄기세포를 제거하는 기계를 통과하도록 된다.

이렇게 정화된 혈액은 환자에게로 되돌려지는 반면 수집된 세포들은 액체 질소에서 냉장 보관된다. (콘도마인즈 엠.외 2006) 이러한 기술은 고통스러운 것은 차치하고서라도 환자에게는 상당한 긴장감을 주는 것이기도 하다. 특히, 이러한 기술은 순환되는 줄기 세포의 실제적인 식별력 및/또는 정화를 제공하지 못한다.

정화를 위한 주된 공지 기술로는

- 성장 인자 또는 플레이트 유도체(TGF-B, VEGF)를 이용하는 기술과(그러나, 이들을 추출하는 경제적 비용은 과중하다(하우 엠.외 2006);

- 골수로부터 취해진 줄기 세포들을 격리시키는 기술 (이는 추출된 물질에 포함되어 있는 약 15%의 세포를 정화시키고 치료로 이용하게 한다);

- 지방 조직으로부터 줄기 세포를 격리시키는 기술과(이는 도너로부터의 상당한 양의 조직을 사전 수술로 제거하는 작업을 필요로 하지만 정맥내의 관리를 허용하지 않는다);

- 텐도트로핀(Tendotrophin)으로 알려진 IGF-I (인슐린과 같은 성장 인자 1)(피들러 제이.외 2006)와;

- UBM (방광 매트릭스)가 있다. 이 매트릭스는 시토킨을 포함하는 돼지의 유도체이나 핵셀을 포함하지는 않는다. 이는 상처의 치유를 유도하지만 손상 부위의 재생성을 유도하지 않는다. (장 와이에스 외. 2005)

또다른 방법은 "자오 와이.외"에 의해 "인체 말초 혈액 단핵세포 유도된 서브세트는 만능 줄기 세포로 작용한다"는 기사와 WO-A-2004-043990에서 설명되어 있다. 이는 단핵세포로부터 유도된 줄기 세포를 준비하는 방법이다. 이는 단핵세포를 격리시키는 단계와 미토겐 성분과 접촉시키는 단계와 이어 세포의 증식에 적절한 조건에서 말초 혈액으로부터의 단핵 세포의 배양을 행하는 단계로 이루어진다.

처음에 단핵 세포를 격리시키는 단계와 이후에 배양수단에서 팽창시키는 단계를 필요로 하는 이 방법은 매우 오래 걸리고 상당한 수의 줄기 세포를 얻기까지 약 15-20일이 걸리며, 짧은 시간후에 직접 환자에게 접종되기에 적절하게 발달된 만능 줄기 세포를 얻을 수 없다.

다시 단핵 세포로부터 줄기 세포를 준비하는 프레임 작업에 있어서, 문서 WO-A-2005/046570, WO-A-2007/131200, WO-A-03/083092가 또한 알려져 있다. 그런데, 이들은 세포 조각, 즉 단핵 세포만을 격리하기 위해서 혈액의 예비 정화를 실행해야 하고, 원하는 줄기 세포를 얻기 위해서는 후속 팽창을 실행해야 하기 때문에, 이들 문서에서 설명된 방법들은 적절한 양의 줄기 세포를 얻기 위해 긴 시간 즉 15-40일이 걸린다.

이런 관점에서 볼 때, 쉽게 접근 가능한 소스, 특히 혈액 바람직하게는 말초 혈액으로부터 성인 줄기 세포의 정화, 확장법 또는 분할을 온전하게 만들 분명한 필요가 있으며, 이는 또한 약물 처리에 적절한 줄기 세포를 얻게 해준다.

신속히 환자에게 처방할 수 있도록, 가장 짧은 가능한 시간에 혈액 바람직하게는 말초 혈액으로부터 줄기 세포를 형성시키는 것을 시작해야 하는 명백한 필요성이 또한 있다.

그러므로 본 발명의 목적은 만능 줄기 세포 생성을 빨리 시작할 수 있도록 줄기 세포 형성을 위한 혈액, 바람직하게는 말초 혈액을 수집하는 키트를 얻는 데에 있다.

출원인은 종래 기술의 단점을 극복하고, 상기 목적등을 얻도록 본 발명을 고안하고 테스트하여 실시화하였다.

본 발명은 독립항에 설명되어 있으며, 한편 종속항들은 본 발명의 다른 특성이나 주된 발명의 변형된 아이디어를 설명하고 있다.

혈액 특히 말초 혈액으로부터의 줄기 세포를 시험관내에서 성장시키고 정화시키는 방법이 본 저자에 의해 개발되었으며, 본 출원인의 이름으로 국제출원 PCT/EP2007/059531에 기술되어 있으며, 이는 참고용으로 전체가 여기에 첨부되어 있으며, 성인 만능 줄기 세포를 얻도록 하며, 2개의 서브스텝으로 이루어진 제1단계를 포함한다.

a) 혈액을 취한 후에, 대식세포 집락 자극 인자(MCSF)로 시험관내 처리함에 의해서 8-15 nM, 바람직하게는 10nM의 농도에서 말초 혈액의 줄기 세포를 성장시키는 제1 서브스텝

b) 바람직하게는 피콜 변화의 분류에 의해서 정화시키는 제2 서브스텝

상기 제1 성장 서브스텝은 시험관내 처리가 실행되는 조건에 따라서 가변적인 경과시간을 가질 수도 있으며, 본 저자는 줄기 표지 식별 CD90, CD90/34, CD34 및 CD1 17로, 24 내지 96시간 바람직하게는 48 내지 72 시간 경과가 시험관내 MCSF 처리의 성장 안정을 이끌어내는 것으로 실험적으로 증명하였다. 이러한 조건은 최적의 조건으로 여겨진다. 상기 제2 서브스텝의 정화는 기본적으로 적혈구를 파괴하기 위한 것이다.

스텝 b)에서 얻어진 반제품을 이용하는 제2 단계는 c) 35-55nM 바람직하게는 50nM 더욱 바람직하게는 45nM의 농도에서 MCSF 시험관내 처리를 거치는, 스텝 b)에서 정화된 말초 혈액의 줄기세포의 성장 단계이다.

이러한 MCSF 농도로, 세포들은 성인 만능 줄기 세포의 표현형을 유지한다.

이러한 제2 단계는 24 내지 96시간 바람직하게는 48 내지 72시간사이의 가변 경과시간을 가질 수 있다. 55 nM 보다 더 진한 농도(예를 들면 75nM 농도)에서 24시간 이후에 MCSF를 사용하면 세포들은 만능 줄기 세포의 표현형을 유지하지 않는 것으로 관찰되었다.

특히, 혈액을 취한 후에 MCSF로 행하는 분할 및 부유상태에서의 사전 성장의 a) 단계는 줄기 세포의 백분율을 증가시킨다. 상기 후속 단계 b)에서는 환자에게 일단 투여되면 거부 현상 또는 감염없이 생체내에서 직접 차별화되는 성인 만능 줄기 세포를 얻을 수 있다. 이러한 제품 효과는 줄기 표지 CD90, CD90/34 CD34 CDI 17에 의해서 생긴 것이며, 줄기 세포는 분할 또는 증식후에도 자기 인식 인자를 잃지 않는다는 사실에 기인하는 것이다. 그러한 줄기 세포들은 한번 환자에게 투여되면 거부 현상, 감염, 기형종의 발전등의 부작용을 주지 않으며, "생체내"에서 분화될 수가 있고, 만능 줄기 세포로 행동할 수 있다.

분할 또는 증식에 의해 성장한 세포들은 한번 국부적으로나 정맥내로 주입되면, 처치되는 생체 기관의 질병 및 필요에 따라서 대식 세포, 림프구, 상피, 내피, 신경 및 간 세포의 형태학적 및 화학적 특성 모두를 생체내에서(적절한 성장 인자 및/또는 화학 자극에 의한 종래의 방법(글라티 알.외 2003, 카츠 알.엘.외 2002, 오카자와 티.외 2005)에서와 같은 시험관내에서가 아님) 얻게 됨을 본 저자는 알 수 있다. 본 방법은 줄기 세포들을 수집하는데에 지금까지 이용된 다른 방법들보다 침입성이 덜하며, 방혈과는 달리 고통이 덜하며 경제적이다. 최종적으로 이들 세포들을 쉽게 얻고 그리고 오랫동안, 예를 들면 액체 질소에서 냉장하여 저장할 수 있는 가능성으로 인해, 본 발명의 방법으로 얻은 세포들은 자기 조직 이식 및 여러 질병(여러 종류의 외상, 신진대사질환, 심각하고 오래된 신경 및 염증 질환) 치료에 적절하다.

본 발명의 한 특징에 따르면, 상술한 방법에 따라 다중 줄기 세포 생성을 위한 혈액, 바람직하게는 말초 혈액을 수집하는 키트는 항응고제 및 물질 MCSF을 함유하는, 채집한 혈액을 담을 수 있는 시험관등의 제1용기를 포함한다. 통상, 제1용기는 유리로 만들어진다.

본 키트로는 혈액, 바람직하게는 말초 혈액을 채집할 수 있고, 상술한 방법에 의해서 줄기 세포의 성장 및 생성을 신속히 시작할 수가 있으므로 그 생성을 더 신속히 이루게 된다.

그러므로, 본 발명의 주된 이점은 신체 전체에 직접 작용함으로써, 종래 기술의 방법과 비교할 때, 매우 제한된 시간 단지 48시간내에도 충분한 양의 만능 줄기세포를 얻는 것이다. 따라서,본 발명에 따라서 혈액을 채집하는 키트는 혈액 바람직하게는 말초 혈액으로부터 직접 만능 줄기 세포를 얻기 위한 빠르고도 효과적인 해결책으로 제안된다.

통상, 본 발명에 따른 키트내의 MCSF의 농도는 약 2 내지 20nM까지 바람직하게는 약 8 내지 10 nM까지 변한다. 보통, 헤파린 또는 EDTA가 항응고제로 이용된다.

항응고제의 존재는 혈액의 응고의 시작을 막는데 필수적인 반면, MCSF는 줄기 세포의 증식 성장 과정의 원인 물질이다.

본 발명의 또다른 실시예에 따르면, 키트는 제1용기이외에도 시험관등의 하나이상의 용기를 포함할 수도 있다. 후자는 바람직하게 적외선 또는 감마선으로 처리된 폴리프로필렌등의 플라스틱 물질의 적어도 내벽을 가지도록 형성되며, 이는 줄기 세포가 벽에 부착되어 응집되어 버리는 것을 방지한다. 통상, 후자에 대해서정맥내의 사용을 위해 얻은 줄기 세포를 담는 것을 제2 용기이고, 다른 사이즈의 제3용기는 국부적인 사용을 위한 것이다.

상기 용기들내에서 생성된 줄기 세포들은 즉시 이용되거나 또는 액체 질소내에서 저장될 수 있으므로, 필요가 있을 때 후에 이용할 수도 있다. 또다른 실시예에 따르면, 상기 용기들은 스템셀이 준비되는 실험실내에서 그리고 선적시에 식별을 용이하게 할 수 있도록 항응고제와 MCSF를 함유하는 혈액 채집용 용기와 보존용 용기 둘다 공통되는 일련번호이거나 또는 순차 번호로 식별되거나 소정 기준에 따라 생성될 수 있다.

명료한 식별을 위해, 관련 광학 또는 전자 판독기와 함께 사용할 수 있도록 바코드 및/또는 RFID 태그, 눈금표시 또는 표시/기록을 이용하는 것도 가능하다.

상술한 방법의 제1성장 서브스텝은 바람직하게 혈액을 샘플한 직후에 시작되므로, 혈액은 그동안에 응고되지 않는다.

직후라는 단어에 의해서, 우리는 혈액의 응고를 막고 혈액 채취후 가능한 가장 짧은 시간내에 줄기 세포의 증식을 시작하기 위해서 혈액 채취와 응고사이에 가능한 가장 짧은 시간을 의미한다. 즉, "직후"는 줄기 세포의 성장은 환자로부터 혈액이 취해진 직후에 시작된다는 사실을 의미하며, 이는 본 발명에 있어서 혈액 응고전에 상기 증식 과정이 시작되는 것이 필수적임을 설명하고 있다.

실제로, 환자에게서 막 채취된 혈액은 항응고제와 MCSF가 있는 시험관에 넣어진다. 항응고제는 응고의 시작을 막는 한편, MCSF의 동시 존재는 증식과정의 빠른 시작을 허용하고 환자치료 시작 시간을 최소화하는 것을 보장한다.

이러한 정의는 혈액 샘플이 바람직하게는 말초 혈액 샘플이 환자로부터 취해지고, 줄기 세포 생성능력을 변화시키지 않는 보존 과정을 거치는 혈액의 응고를 막도록 항응고제를 첨가하는 경우를 또한 포함한다.

필요할 때에, 혈액을 저장소로부터 가져와서 상술한 바와 같이 즉 MCSF를 첨가하여 줄기 세포증식 과정을 거치게 하여, 필요한 양의 줄기 세포를 매우 빨리 얻을 수 있다.

그러므로, 혈액 바람직하게 말초 혈액을 샘플해서 보존하게 되는 과정은 본 발명의 범위내에 있으며, 상기 과정은 적절한 혈액 뱅크에서 줄기세포를 생성할 수 있고, 필요시 MCSF를 첨가하여 만능 줄기 세포 생성을 위해 사후에 사용할 수 있다.

통상적으로 혈액은 저장소로부터 꺼내져서 이미 2 내지 20 nM, 바람직하게는 8 내지10 nM의 농도의 MCSF를 담고 있는 시험관내에 넣어진다.

이는 예를 들면 상술한 바와 같이 액체 질소를 사용하고 종래의 혈액 보존 기술만을 이용하는 복잡하고도 비싼 줄기 세포 보존 과정을 피할 수 있게 된다.

시험관(11)의 MCSF의 농도는 약 8내지 10nM이다. 상기 키트는 적외선 또는 감마선으로 처리된 폴리플로필렌등의 플라스틱 물질로 되어 있는 또다른 2개의 시험관(18, 20)을 포함한다. 제2시험관(18)은 정맥내의 사용을 위해 얻은 세포들을 보존하기 위한 것이고, 제3시험관(20)은 국부사용을 위한 세포 보존용이다.

시험관(12,18,20)은 그 내용물의 소독을 확실히 해야 하는 점이 중요하다. 모든 시험관(12,18,20)에는 이를 막기 위한 각각의 스토퍼(22,24)가 구비되어 있다.스토퍼(22,24)는 압력타입, 나사타입등일 수 있다. 용기(12)의 스토퍼(22)는 예를 들면 압력타입일 수 있다. 각각의 시험관(18,20)의 스토퍼(24)는 예를 들면 나사타입일 수 있다.

제2시험관(18)의 사이즈는 높이 115mm, 직경 17mm, 두께 0.3mm, 용량 12mL인 한편, 제3시험관(20)의 사이즈는 높이 110mm, 직경 30mm, 두께 0.3mm, 용량 40mL이다.

본 발명에 따른 MCSF에 의한 증식의 결과로, 말초 혈액으로부터 분리된 세포들은 생체내에서 만능 줄기 세포(PSC)로 작용하며, 몇달간 치료불능이었던 손상 또는 질병를 해결하는 데 적절하며, 또는 기존방법 및/또는 약으로는 느리게만 치료가능했던 것을 해결하는 데 적절하다.

재질 및 방법

샘플링: 약 0.5-7ml의 말초 혈액의 각각의 샘플은 말과 개의 하부 다리로부터 취해져서, 즉시 적절한 양의 헤파린과 MCSL(10nM)을 포함하는 시험관에 넣어진다.

EDTA등의 다른 항응고제도 어느 경우에든 이용될 수 있다.

이점에서 제1서브스텝의 시험관내의 처리가 실행되며, 여기에서 우리는 MCSF 및 정화덕분에 줄기 세포의 분할 및 사전 성장을 얻는다.

혈액 샘플은 NH₄CL (200mM)m를 포함하는 PBS(인산염 완충제 염류)내에서 1:5로 희석되어 적혈구의 용해를 야기하며, 10,000g에서 원심분리되고, PBS로 두번 세척된 후, 200g에서 다시 원심분리된다. 이렇게 얻어진 핵세포들은 l7-12시간 바람직하게는 10-12시간동안 섭씨37도에서 인큐베이트되고, 피콜 변화상에서 분류되어 정화된 후에 격리되고, RPMI 미디움 1640으로 세번 세척된다(라이프 테크널로지, 그랜드 아일런드,NY).

한번 정화되면, 세포들은 50ngml의 MCSF 45nM에서 24-72시간동안 또한번 인큐베이트되어 표현형 CD90를 가진 세포들이 약 95%있는 세포들(FACan을 이용한 시토플루오리메트릭 분석에 의해 결정된 바와 같음 -베콘 디킨즈 유동 광도계) 을 얻게 되며, 이후에 증식되어 10,000g에서의 국부적인 또는 원심분리적인 처리에 필요한 수의 세포 그리고 정맥내의 치료를 위해 약 90x I03 cells/ml의 농도에서 PBS에서 떠있는 세포를 얻는다.

단백질 검출법:Immunostaining

세포 표현특성(Cytophenotyping)을 위해서, 세포들은 PBS에서 세척된 후, 섭씨 200도에서 20분간 PBS에서 포름알데히드 4%에서 슬라이드상에 고착된다.

내부-세포 단백직을 식별하기 위해, 섭씨 200도에서 5분간 0.5% 트리톤 X-100으로 세포들에 침투시키고, 세포들은 1% BSA를 함유하는 PBS에서 희석된 최초 항원과 함께 1시간동안 인큐베이트된다.

세번의 연속 세척후에, 슬라이드는 가장 적절한 형광색소: FITC 또는 테트라메틸로다민 B 아이소싸이오시아네이트 TRITC, 또는 Cy5로 접합된 제2항원과 함께 45분간 인큐베이트된다. 모든 제2항원은 당나귀를 숙주로 이용하여 잭슨 이뮤노 리서치에 의해 개발되었다.

면역세포화학은 섭씨 4도의 습도 포화대기에서 실행되었다. 세번의 세척후 슬라이드는 겔바톨-PBS를 이용해 장착되었다. 그 다음, 글리세르알데히드 3-인산염 탈 수소효소에 반대하여 내부 표준으로서 하나의 직접 면역 형광법을 이용하는 형광 현미경에 의해서 형광 이미지가 얻어졌다(코르텍스 바이오켐 샌 린드로, CA에 의해 제조된 다클론성 양 항원).

음성적인 제어로서, 그리고 형광의 배경 레벨을 검사하기 위해서, 관련 샘플과 똑같은 기준의, 특정 항원과 인큐베이트된 슬라이드가 이용되었다.

지금 설명한 방법은 모든 표지를 식별하는 데에 이용되었으며(CD90, CD90/34, CD34 및 CDI 17), 표지들은 다음 표에 기록한다.

표: 말초 혈액으로부터 분리된 소식세포와 MCSF(PBC)로 처리된 세포들의 특성

상대 형광도

표면 항원 PSC 대식세포

MAC-I 76 ± 18 84 ± 15

CD14 126 ± 29 157 ± 19

CD34 77 ± 16 15 ± 5

CD45 143 ± 26 165 ± 38

시토킨의 제조

IL-I 82 ± 27 83 ± 12

IL-6 43 ± 22 67 ± 14

IL-IO 7 ± 8 58 ± 7

TNF- 25 ± 16 67 ± 16

기능 반응지시약

식작용 (Phagocytosis) 187 ± 23 195 ± 26

자극 0,72 ± 0,07 0, 17 ± 0,02 림프구 Abs540

세포 독성 % 9 ± 4 72 ± 6

본 발명의 범위를 이탈하지 않는 한도내에서, 줄기 세포 형성을 위한 혈액, 바람직하게는 말초 혈액을 수집하는 키트에 대한 변형 및/또는 첨부가 또한 가능함은 물론이다. 몇 가지 예를 들어 본 발명을 설명하였지만, 당 분야의 전문가에 의해서 청구범위에서 설명한 특성을 가진, 즉 본발명의 보호범위내에 있는 "줄기 세포 형성을 위한 혈액, 바람직하게는 말초 혈액을 수집하는 키트"의 여러 등가물을 얻을 수 있음은 물론이다.

Claims

항응고제 및 물질 MCSF (대식세포 집락 자극 인자)를 함유하는, 채취 혈액을 담을 수 있는 적어도 하나의 제1용기(12)로 이루어진, 만능 줄기 세포의 생성을 위한, 혈액 바람직하게는 말초 혈액을 수집하는 키트(10).
제1항에 있어서, 제1용기(12)의 MCSF의 농도는 약 2nM 내지 약 20nM인 것을 특징으로 하는 키트.
제2항에 있어서, 제1용기(12)의 MCSF의 농도는 약 8nM 내지 약 10nM인 것을 특징으로 하는 키트.
제1항, 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 항응고제는 헤파린 또는 EDTA인 것을 특징으로 하는 키트.
상술한 항들중의 어느 한 항에 있어서, 제1용기(12)에 대해 폐쇄 부재(22)를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
상술한 항들중의 어느 한 항에 있어서, 줄기 세포의 부착을 방지하는 물질로 된 최소한의 내부벽을 가진 적어도 하나의 제2용기(18, 20)을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
제6항에 있어서, 상기 물질은 적외선 및 감마선으로 처리된 폴리프로필렌등의 플라스틱 물질인 것을 특징으로 하는 키트.
제6항 또는 제7항에 있어서, 각각의 용기(18,20)에 대해서 폐쇄 부재(24)를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.