KR20110021994A - 고막 또는 외이도 재생제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 염기성 섬유아세포 증식인자(bfgf)를 담지한 젤라틴 스펀지를 함유하고, 피복재료와 조합해서 이루어지는 고막 또는 외이도 재생제를 제공한다. 상기 피복재료는 젤라틴 스펀지의 환부로의 고정뿐만 아니라, 건조나 감염을 방지하여 외부와는 분리된 재생조직에 있어서 바람직한 배양환경을 제공하는 목적으로 사용된다. 조직의 재생을 촉진하기 위해서 바람직하게는, 고막 또는 외이도 결손의 변연부는 미리 신선화되어 있다.

Description

고막 또는 외이도 재생제{AGENT FOR REGENERATING TYMPANIC MEMBRANE OR EXTERNAL AUDITORY CANAL}

본 발명은 염기성 섬유아세포 증식인자(bFGF)를 담지(擔持)한 젤라틴 스펀지와 피복재료를 조합한, 고막 또는 외이도(外耳道) 재생제(再生劑)에 관한 것이다.

고막 천공은, 고막에 열상이나 천공 등의 결손을 일으키는 증상이며, 그 원인은 여러 가지이지만, 육안적으로 고실내가 건조하고 활동성의 염증이 없는 증상예에서는, 가능한 한 조기에 폐쇄하는 것이 바람직하다고 생각된다. 고막 폐쇄의 최대의 이점은, 청력의 상승이다. 내이가 장해되어 있지 않고, 중이에 특별한 병변이 없으면, 통상 고막 폐쇄 후는 모든 경우에 청력 개선이 얻어지고, QOL의 상승에 크게 기여한다.

고막 천공이 있는 경우, 단지 고막으로 충분한 소리를 파악할 수 없을 뿐만 아니라, 직접 고실내에 침입한 소리가, 와우의 정원창(正圓窓)을 통해서 들어가고, 정규의 루트로 들어온 소리와 와우내에서 서로 부딪치는 취소 효과에 의해서, 한층 더 들림(말의 청취)을 방해하게 된다. 또한, 외이도 측에 중이가 직접 노출되게 되고, 결과적으로 감염에 대한 저항이 감약되어, 중이염을 야기하기 쉬워진다. 또한 장기적 감염 상황은 내이 기능 저하에 의한, 감음 난청이나 평형 기능 장해를 일으킨다. 이들의 것으로부터, 가능한 한 고막은 폐쇄하고 있는 것이 바람직하다.

고막 폐쇄는, 그 천공의 크기에 의해서 여러 가지 치료법이 행해지고 있는데, 기본적으로는 현행의 치료법의 대부분이 수술에 의하는 것이다. 일반적으로는 고막형성술이나 고실형성술이 시행되고 있다. 전자에서는, 이후부(耳後部)의 피부절개와 자가조직의 채취ㆍ이식, 후자는 이들의 조작에 덧붙여서 외이도 박리가 필수이다. 고막 천공이 커지면, 고막의 대용으로서 자가조직(측두근막) 이식도 수술수법으로서 난이도가 올라간다. 즉, 수술을 시행하더라도 확실하게 청력이 개선한다고는 할 수 없다. 수술 후의 고막 재천공이나 귀 주위의 위화감, 이명 등 많은 후유증의 가능성이 있다. 또한 수술 후 고막이 잠재화, 비후(肥厚)하는 등, 본래의 고막과는 차이가 많은 것이 되고, 청력도 저하한다. 또, 이들의 수술에서는, 통상 1일∼수주간 정도의 입원 가료를 동반하며, 환자의 정신적ㆍ육체적ㆍ경제적 부담도 커지는 등의 난점이 있다.

마찬가지로, 뼈 노출을 동반하는 외이도 연부 조직 결손에 관해서도, 종래는 수술요법밖에 치료법이 없고, 이후부 외절개(外切開)와 자가조직 채취라고 하는 처치가 필수적이었다.

근래, 증식인자를 담지시킨 생체 적합성의 골격(scaffold)소재를 이용한 재생 의학적인 고막재생법이 제창되어 있다(예를 들면, 특허문헌 1 참조). 특히, 증식인자로서 염기성 섬유아세포 증식인자(bFGF)를 이용하고, 골격소재로서 콜라겐 막이나 키틴 막 등의 시트형상의 박막을 이용한 치료 예가 몇 가지 보고되어 있다(비특허문헌 1∼3). 또한, bFGF를 포함하는 콜라겐의 원통형상 부재를 이용한 외이도 재건용 형성품이 기재되어 있다(특허문헌 2).

외과수술에 의하지 않는 다른 고막재생법으로서 양막(羊膜)으로 고막 천공부를 피복하고, 피브린 풀(fibrin glue)로 접착시키는 방법이 보고되어 있다(비특허문헌 2).

그러나, 종래의 재생의학적인 치료법의 유효성은 비교적 작은 고막 천공이나 외이도 결손에 한정되고, 어느 정도 이상의 큰 고막 결손이나 이소골에 관련되는 결손이 있는 경우는, 수복(repair) 불가능하기 때문에 적용시키지 않았다.

한편, 젤라틴 스펀지는 수술시의 지혈제로서 이용되고 있는데, 이질환(耳疾患)의 치료에 있어서의 약제의 서방성 담체로서도 사용되고 있다(특허문헌 3).

특허문헌1: 국제공개 제2006/007417호 팸플릿 특허문헌2: 일본국 특허공개2007-125252호 공보 특허문헌3: 미국특허출원공개 제2007/0160648호 명세서

비특허문헌1: 하쿠바 등, 일본 이비인후과학회회보, 110권, 4호, p.261, 2007년 비특허문헌2: 하쿠바 등, 두경부외과, 16권, 1호, p.9-13, 2006년 비특허문헌3: 후타이 등, 일본 이비인후과학회회보, 110권, 4호, p.299, 2007년

종래, 외과 수술에 의지하지 않을 수 없었던 큰 고막 천공이나 외이도 연부 조직 결손도 수복 가능한, 재생 의학적인 수법에 의한 고막 및 외이도 재생법의 개발이 절실히 요구되고 있다. 따라서, 본 발명의 목적은 결손부의 크기나 위치에 관계없이 결손을 수복할 수 있는 신규인 고막ㆍ외이도 재생제를 제공하는 것이다.

본 발명자는 상기의 목적을 달성하기 위해 예의 검토를 거듭한 결과, 종래의 수법은 어느 것이나, 고막 천공 또는 외이도 연부 조직 결손부에 붙인 시트형상의 골격 소재의 저면을 따라서 주위 조직을 늘리고, 결손부를 수복하려고 한다는 것에 착안했다. 원래 막 형상인 조직을 재생시키는 것을 목적으로 하는 것이기 때문에, 시트형상의 소재를 골격으로서 이용한다고 하는 발상은, 일견 합리적인 것처럼 생각된다. 그러나, 고막 천공 또는 외이도 연부 조직 결손이 평면적인 부위뿐이면, 이것이라도 수복 가능하겠지만, 고막의 형상은 복잡하고, 게다가 이소골이 부착하기 때문에, 고막 결손이 커지면 커질수록 평면적인 시트형상의 소재로 전체를 덮는 것은 곤란하게 된다. 완전하게 결손부를 덮을 수 없으면, 고막의 수복은 불가능하게 되던지, 주위 조직과의 유착이 발생하여 후유증을 남긴다. 외이도 연부 조직에 관해서도 마찬가지이다.

이상의 이유로부터, 본 발명자는 시트형상의 소재를 이용한다고 하는 종래의 발상을 전환하고, 결손 부위 전체를 입체적으로 덮는 것이 가능한 소재를 이용하는 것을 중시하여, 젤라틴 스펀지를 골격재로서 채용했다. 즉, bFGF용액을 함침시킨 젤라틴 스펀지를 고막 또는 외이도의 결손부를 덮도록 유치했다. 젤라틴 스펀지는 콜라겐을 분해한 것으로, 콜라겐과 비교하여 극간이 많고 자유도가 높은 소재이기 때문에, 세포가 성장하는 골격으로서 기능하는 한편, 세포의 신장하는 방향을 방해하지 않는다고 하는 특징이 있다. 따라서, 종래와 같이 재생조직이 시트형상 소재의 저면을 따라서 신장하는 것은 아니고, 젤라틴 스펀지 내부에 재생조직이 침입하여 신장하는 것을 목적으로 하고 있다.

더욱이 그때, 피브린 풀 또는 알긴산 혹은 그의 염을 스펀지 표면에 적용하여, 해당 스펀지를 결손부에 피복 고정했다. 조직재생용 기재를 생체 접착재를 이용하여 주변조직에 고정하는 수법은 알려져 있는데, 본 발명자는 단순한 접착제로서가 아니라, 재생부위를 외부와 차단하고, 생체 내 배양의 양호한 환경을 창출한다고 하는 목적에서, 스펀지 표면을 피복재료로 피복했다. 또한 똑같은 관점으로부터, 고막 천공이나 외이도 연부 조직 결손의 변연부가 오래된 경우에는, 메스 혹은 단백질 변성 약제 등에 의해 변연부의 신선화를 실행했다.

그 결과, 종래법에서는 적용하지 않았던, 2/3 이상을 결손하는 고막 천공이나 창상부(創部) 지름이 2㎝를 넘는 외이도 연부 조직 결손이라도, 모든 증상예에서 결손의 폐쇄 및 청력의 개선이 인정되는 한편, 후유증은 관찰되지 않았다.

이상으로부터, 본 발명자는 bFGF를 담지한 젤라틴 스펀지와 피복재료를 조합하여 이용함으로써, 종래는 외과수술에 의지하지 않을 수 없었던 중증의 고막 천공 및 외이도 연부 조직 결손 환자에 대해서도, 저가로, 간편하고 안전하게, 고막 및 외이도의 재생이 가능한 것을 확인하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다.

즉, 본 발명은 이하에 기술하는 바와 같다.

[1] 염기성 섬유아세포 증식인자를 담지한 젤라틴 스펀지를 함유하고, 피복재료와 조합해서 이루어지는, 고막 또는 외이도 재생제.

[2] 피복재료가 피브린 풀 또는 수용성 고분자 다당류 혹은 그들의 유도체인, [1]에 기재된 재생제.

[3] 수용성 고분자 다당류가 키틴, 키토산 또는 알긴산 혹은 그의 염인, [2]에 기재된 재생제.

[4] 고막 천공 또는 외이도 연부 조직 결손의 변연부가 신선화되어 있는 것을 특징으로 하는 [1] 내지 [3] 중 어느 하나에 기재된 재생제.

[5] 치료상 유효량의 염기성 섬유아세포 증식인자를 담지한 젤라틴 스펀지를 고막 천공 또는 외이도 연부 조직 결손 환자의 고막 천공 또는 외이도 연부 조직 결손부에 유치하고, 피복재료로 피복하는 것을 포함하는 고막 또는 외이도의 재생방법.

[6] 피복재료가 피브린 풀 또는 수용성 고분자 다당류 혹은 그들의 유도체인, [5]에 기재된 재생방법.

[7] 수용성 고분자 다당류가 키틴, 키토산 또는 알긴산 혹은 그 염인, [6]에 기재된 재생방법.

[8] 고막 천공 또는 외이도 연부 조직 결손의 변연부를 미리 신선화시켜 두는 것을 특징으로 하는 [5] 내지 [7] 중 어느 하나에 기재된 재생방법.

[9] 고막 또는 외이도 재생제를 제조하기 위한 , 피복재료 및 젤라틴 스펀지에 담지시킨 염기성 섬유아세포 증식인자의 사용.

[10] 피복재료가 피브린 풀 또는 수용성 고분자 다당류 혹은 그들의 유도체인, [9]에 기재된 사용.

[11] 수용성 고분자 다당류가 키틴, 키토산 또는 알긴산 혹은 그의 염인, [10]에 기재된 사용.

[12] 고막 천공 또는 외이도 연부 조직 결손의 변연부가 신선화되어 있는 것을 특징으로 하는 [9] 내지 [11] 중 어느 하나에 기재된 사용.

젤라틴 스펀지를 골격소재로서 이용함으로써, 고막이나 외이도의 결손부위 전체를 입체적으로 덮는 것이 가능하게 되고, 완전하게 결손부를 덮을 수 있다. 또한, 고막 조직은 젤라틴 스펀지의 내부로 진입하여 재생한다. 따라서, 본 발명에 따르면, 대규모 혹은 복잡한 결손이라도, 고막이나 외이도의 수복이 가능하게 된다.

또한, 젤라틴 스펀지 표면을 피복재료로 커버함으로써, 건조나 감염을 방지하고, 외부와 분리된 양호한 배양환경을 만들어 낼 수 있다.

또한, 젤라틴 스펀지는 생체 내에서는 1개월 이내에 가수분해되어 소실하고, 고막 및 외이도 연부 조직 재생에 유리하게 작용한다.

도 1은 본 발명의 고막 재생제를 이용한 고막 재생 치료의 일례를 나타내는 도면이다. A. 고막의 약 2/3에 미치는 대천공을 인정한다. B. 고막 천공 가장자리를 고막 절개도로 상처를 내고, 전주성(全周性)에 신선창을 형성. C. bFGF 담지 젤라틴 스펀지를 천공부에 유치하고, 피브린 풀로 고정. D. 처치 3주일 후. 상피에 의해 고막 천공 완전 폐쇄. E. 처치 6주일 후. 상피가 약간 얇아지고, 더욱 고막에 가까운 것이 된다. F. 처치 12주일 후. 더욱더 정상의 고막에 가까운 것이 된다.
도 2는 본 발명의 외이도 재생제를 이용한 외이도 재생 치료의 일례를 나타내는 도면이다. A. 진주종(cholesteatoma)을 제거한 창상부는 연부조직의 결손과 뼈 노출이 인정된다. B. 젤라틴 스펀지덩어리에 bFGF를 함침시키고, 창상부를 충분히 덮도록 bFGF 젤라틴 스펀지덩어리를 유치. C. 알긴산 또는 그의 염(혹은 피브린 풀)으로 고정. D. 처치 2주일 후. 표면에 남은 알긴산 또는 그의 염 등을 제거하면, 창상부가 완전하게 폐쇄되고, 정상조직에 가까운 상태로 재생이 이루어지고 있는 것을 확인할 수 있었다.

본 발명의 고막ㆍ외이도 재생제로 이용되는 증식인자 bFGF는, 세포로의 직접증식효과와 혈관증식효과를 가진다. 고막은 3층 구조를 가지고 있으며, 본래의 전음(傳音)기능을 최대한으로 발휘하기 위해서는, 이러한 3층 구조의 유지가 중요하다. 그러나, 고막이 찢어져 자연 치유할 경우, 3층 구조가 유지되지 않은 채 상피층만이 재생된 얇은 고막을 자주 경험한다.

그 재생에는 골격으로서의 섬유아세포의 증식과 3층 구조를 지지하는 충분한 혈류의 유지가 불가결하다. 이 관점으로부터 bFGF는 이상적인 요소를 구비하고 있다. 즉, 그 이름이 나타내는 바와 같이, 섬유아세포를 증식하는 직접작용을 가지며, 또한, 혈관을 유도하여 주위조직에 영양을 공급하는 작용을 겸비하고 있기 때문이다.

본 발명에 있어서의 bFGF로서는 그의 동족체를 사용해도 좋다. 본 발명에 있어서의 bFGF 및/또는 그의 동족체는, 천연 혹은 유전자 재조합 기술에 의해 미생물 또는 배양세포에 생산시킨 것으로부터 단리정제함으로써, 혹은 그들을 화학적 으로 변형 또는 생물학적으로 변형함으로써 얻어진다. 본 발명에서 이용하는 bFGF로서는, 특히 인간bFGF 또는 그의 동족체가 바람직하다.

bFGF의 동족체란, 하기[I]또는[Ⅱ]의 폴리펩티드를 의미한다.

[I] 포유동물에서 생산되는 bFGF와 실질적으로 동일한 아미노산배열로 이루어지는 폴리펩티드. 여기에서 「실질적으로 동일한 아미노산배열」이란, 아미노산배열 중의 1∼6개의 아미노산이 별종의 아미노산에 의해 치환된 것으로 bFGF의 생물활성을 가지는 것을 의미한다. [Ⅱ] 포유동물에서 생산되는 bFGF의 N말단 및/또는 C말단, 혹은 상기 [I]의 폴리펩티드의 N말단 및/또는 C말단에, 추가의 아미노산 세그먼트(segment)가 추가된 폴리펩티드. 추가의 아미노산 세그먼트란, 1∼12개의 아미노산으로 이루어지고, bFGF의 생물활성 또는 상기 [I]의 폴리펩티드의 생물활성을 손상하지 않는 것을 의미한다.

인간bFGF는 아미노산 146개의 폴리펩티드인데, 본 발명의 제제에 있어서는, 인간bFGF의 동족체(상기 [I]의 동족체)로서, 예를 들면 일본국 특허공표 1990-504468호 공보에 기재한 아미노산 146개의 폴리펩티드를 이용해도 좋다. 이러한 폴리펩티드는 인간bFGF의 아미노산 배열을 구성하는 69위치의 시스테인(Cys) 및 87위치의 시스테인 (Cys)이 각각 세린(Ser)에 의해 치환된 것이다.

또한, 상기 [Ⅱ]의 동족체로서, 예를 들면 일본국 특허공표 1988-500843호 공보에 기재한 아미노산 155개의 폴리펩티드를 이용해도 좋다. 이러한 폴리펩티드는 인간bFGF의 N말단에 아미노산 9개의 세그먼트가 부가된 것이다.

또한, N말단에 Met-가 부가된 아미노산 147개의 폴리펩티드나, 일본국 특허공표 1988-501953호 공보에 기재한 N말단에 아미노산 11개로 이루어지는 세그먼트가 부가된 아미노산 157개의 폴리펩티드를 이용해도 좋다.

특히 바람직한 bFGF로서는, 트라페르민(유전자 재조합)을 들 수 있다.

본 발명의 제제에 있어서는 1종류의 bFGF를 단독으로 사용해도 좋으며, 복수종을 병용해도 좋다. 또한, 상술한 바와 같이, bFGF의 동족체는 복수종이 있는데, 이들의 동족체는 각각을 단독으로 사용해도 좋으며, 병용해도 좋다.

또한, 생체 내에 있어서의 bFGF의 존재량은 극미량이기 때문에 본 발명의 제제를 상업적으로 안정되게 공급한 다음부터는, 유전자 재조합 기술에 의해 대장균 등의 미생물 또는 배양세포에 생산시킨 bFGF 또는 그의 동족체를 사용하는 것이 특히 바람직하다. bFGF 또는 그의 동족체(이 경우는 일반적으로 상기 [I]의 폴리펩티드)를 생산시키기 위한 유전자를 미생물 또는 배양세포에 편입시킨 경우, 이 미생물 또는 배양세포로부터 생산되는 것은, 일반적으로 bFGF의 N말단 및/또는 C말단, 또는 상기 [I]의 폴리펩티드의 N말단 및/또는 C말단에, 추가의 아미노산 세그먼트가 부가된 것, 즉 상술한 [Ⅱ]의 폴리펩티드이다.

본 발명에 있어서의 젤라틴 스펀지의 원료가 되는 젤라틴의 종류에는 특별히 제한은 없으며, 통상 입수할 수 있는 것으로 좋다. 예를 들면, 소, 돼지, 닭, 연어 등의 뼈, 인대, 힘줄(腱), 피부를 산 또는 알칼리로 처리하여 얻은 거친 콜라겐을 물로 가열 추출한 것 등을 들 수 있다. 젤라틴은 1종류뿐만 아니라, 원료나, 용해성, 분자량, 등전점 등의 물성이 다른 것을 적절히 혼합하여 이용해도 좋다.

본 발명에서 이용되는 젤라틴 스펀지는, 형상이 복잡한 고막의 천공 가장자리 또는 외이도 결손의 변연부를 완전하게 피복 할 수 있는 정도의 유연성을 잃지 않는 범위에서, 고막 또는 외이도의 결손을 폐쇄하는데 충분한 기간, 재생조직의 골격으로서의 역할을 완수할 수 있도록 내수성을 높일 수 있도록 가교되어 있어도 좋다. 가교방법은 특별히 한정되지 않는데, 예를 들면, 가교제를 이용하는 방법, 진공열탈수법, 건열법, γ선조사법, 자외선조사법, 전자선조사법, X선조사법 등을 들 수 있다.

본 발명의 젤라틴 스펀지는, 다수의 미세 작은 구멍을 가지며 콜라겐과 비교해서 자유도가 높은 것이다. 다수의 미세 작은 구멍을 가짐으로써, 골격소재로서 이용할 경우에, 주변의 세포가 용이하게 스펀지 내부에 진입할 수 있어, 양호한 고막 및 외이도의 재생이 가능하게 된다. 이것은, 종래의 시트형상의 골격소재를 이용한 재생제와 근본적으로 다른 점이다. 즉, 시트형상의 콜라겐 막과 같은 골격에 대해서는, 조직은 그 골격의 내부를 진입하여 재생하는 일은 없으며, 위쪽이거나, 아래쪽의 어느 한쪽을 따라서 재생한다. 이것으로는, 어느 정도 이상의 크기의 고막결손에 대해서는 완전하게 결손부를 덮을 수 없으며, 고막의 수복이 불가능이 되거나, 주위조직과의 유착이 발생하여 후유증을 남긴다.

본 발명의 젤라틴 스펀지의 미세 작은 구멍의 평균 구멍 지름은, 스펀지 내부로 세포가 용이하게 진입하여 양호한 세포 접착성이 얻어지는 것을 고려하면 약 10㎛ 이상인 것이 바람직하고, 저세포 밀도에 의한 고막 또는 외이도의 재생율 저하를 방지하기 위해서는 약 500㎛ 이하인 것이 바람직하다. 더욱 바람직한 범위로서는 약 100㎛∼약 400㎛이다.

본 발명의 젤라틴 스펀지는 그의 기능에 악영향을 미치지 않는 범위에서, 다른 생체 내 흡수성 고분자 재료를 포함하고 있어도 좋다. 그와 같은 생체 내 흡수성 고분자 재료로서는, 예를 들면, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 폴리-ε-카프로락톤, 락트산-글리콜산 공중합체, 글리콜산-ε-카프로락톤 공중합체, 락트산-ε-카프로락톤 공중합체, 폴리구연산, 폴리사과산, 폴리-α-시아노아크릴레이트, 폴리-β-히드록시산, 폴리트리메틸렌옥살레이트, 폴리테트라메틸렌옥살레이트, 폴리오르토에스테르, 폴리오르토카보네이트, 폴리에틸렌카보네이트, 폴리-γ-벤질-L-글루타메이트, 폴리-γ-메틸-L-글루타메이트, 폴리-L-알라닌 등의 합성 고분자; 전분, 알긴산, 히알루론산, 키틴, 펙틴산 및 그의 유도체 등의 다당류나, 젤라틴, 콜라겐, 알부민, 피브린 등의 단백질 등의 천연고분자 등을 들 수 있다.

본 발명의 젤라틴 스펀지는, 예를 들면, 젤라틴 수용액을, 호모지나이저를 이용하여 약 3000∼약 10000rpm의 회전수로 약 10초∼약 5분간 교반해서 발포시킨 후, 해당 젤라틴 수용액을 적당한 크기의 형틀에 유연(流涎)하고, 약 -40∼약 -80℃로 약 30∼약 120분간 동결한 후, 이 동결물을, 예를 들면 약 0.1 Torr의 조건으로 동결건조함으로써, 제조할 수 있다. 젤라틴 수용액의 농도가 너무 높으면, 얻어지는 젤라틴 스펀지의 유연성이 낮아지므로, 예를 들면 약 3 w/w％ 이하로 조정하는 것이 바람직하다. 또한 가교가 필요한 경우에는, 적절히 가교를 수행할 수 있다.

본 발명의 젤라틴 스펀지로서, 지혈제로서 시판되고 있는 것(예를 들면, 스폰젤(등록상표)(아스테라스제약), 젤폼(등록상표)(파마시아ㆍ업존) 등)을 이용할 수 있다.

본 발명의 젤라틴 스펀지의 형상이나 사이즈는, 환자의 고막이나 외이도의 결손부를 덮는데 충분한 크기이면 특별히 제한되지 않는다.

상기와 같이 하여 조제한 젤라틴 스펀지에 bFGF를 담지시키는 방법은 특별히 한정되지 않는데, 예를 들면, bFGF 수용액을 젤라틴 스펀지에 적하하거나, 젤라틴 스펀지를 bFGF수용액 중에 가하여 팽윤시킬 수 있다.

젤라틴 스펀지에 담지시키는 bFGF의 양은, 고막 또는 외이도를 재생시키는데 충분한 양이면 특별히 제한은 없는데, 예를 들면, 투여 부위당 약 0.1∼ 약 1000㎍, 바람직하게는 약 1∼약 100㎍이다.

상기와 같이 하여 얻어진 bFGF 담지 젤라틴 스펀지 제제는, 동결 건조할 수도 있다. 필요에 따라, 동결건조는, 예를 들면, 액체 질소 중에서 30분 이상 또는―80℃로 1시간 이상 동결시킨 후에, 동결 건조기로 1∼3일간 건조시킴으로써 수행한다.

본 발명의 고막ㆍ외이도 재생제는, 중이ㆍ외이에 활동성의 감염ㆍ염증이 없는 고막 천공 또는 외이도 연부 조직 결손 환자이면, 어느 증상 예에 대해서도 적응 가능하다. 예를 들면, 고막 천공 증상 예로서 만성중이염, 고막폐쇄술 내지 고실형성술 시행후의 재천공, 외상성 고막 천공 진구, 삼출성 중이염에 의한 고막절개 내지 고막튜브 유치 후의 천공유잔 등을 들 수 있다. 또한, 외이도 연부 조직 결손 증상 예로서 예를 들면, 외이도 진주 종절제, 고실형성술 또는 외이도 종양 절제 후에, 외이도 연부 조직의 결손과 외이도 뼈의 노출이 있는 것을 들 수 있다.

본 발명의 고막ㆍ외이도 재생제는, 특히 종래의 재생 의학적 수법을 이용한 치료법이 적용되지 않았던, 큰 천공ㆍ결손을 가지는 고막 천공 또는 외이도 연부 조직 결손 환자에 대해서 바람직하게 이용될 수 있다. 구체적으로는, 고막 천공에 있어서는, 고막의 1/3 이상을 결손하는 환자, 특히 2/3 이상을 결손하는 환자에 대해서도, 고막의 수복이 가능하다. 또한, 외이도 연부 조직 결손에 있어서는 최대지름이 1㎝ 이상, 특히 2㎝ 이상의 결손을 가지는 환자에 대해서도, 외이도의 수복이 가능하다.

bFGF 담지 젤라틴 스펀지는, 고막 또는 외이도의 결손부에 따라서, 그보다 도 큰 사이즈로 조정되고, 결손부 전체를 덮도록 유치된다. 여기에서 결손부의 변연이 오래된 경우에는, 조직의 재생을 촉진하기 위해 변연부를 신선화시키는 것이 바람직하다. 신선화의 방법으로서는, 예를 들면, 메스 등을 이용하여 상처를 내거나, 초산 알루미늄 또는 고농도의 국소 마취약 등 단백 변성 효과가 있는 약제로 처리함으로써, 변연부의 상피를 제거하는 방법을 들 수 있다.

이 약제에 의한 방법은 외이도의 형상이 좁고, 고막 천공 변연의 신선화가 곤란한 경우에는 특히 유효하며, 우선 초산 알루미늄을 포함하는 젤라틴 스펀지를 결손부에 유치하고, 약 30분 후에 제거한다. 이 후, 4％ 염산리도카인으로 마취를 시행한 다음 변성한 변연부(백색으로 변색)의 조직을 가능한 한 제거하는 것으로, 신선화를 실행할 수 있다.

본 발명은 결손부에 유치한 bFGF 담지 젤라틴 스펀지의 표면을, 피복재료로 피복하는 것을 더욱 특징으로 한다. 본 발명에서 이용되는 피복재료로서는 bFGF 담지 젤라틴 스펀지를 고막 또는 외이도의 결손부에 고정하여 두기에 충분한 접착성을 가지며, 또한 외부환경과 분리시키는 것으로 해당 스펀지의 표면 및 내부에 재생조직의 세포에 있어서 매우 적합한 배양환경을 제공할 수 있는, 생체 적합성의 재료인 한 어떠한 것이라도 사용할 수 있는데, 예를 들면, 피브린 풀(혈액 중의 피브리노겐 및 트롬빈 추출물; 볼힐(Bolheal)(등록상표)(아스텔라스제약(Astellas Pharma)), 티실(TISSEEL)(등록상표)(박스터(Baxter)), 베리플라스트(Beriplast) (등록상표)(CSL 베링(CSL Behring))로서 시판되고 있다), 알긴산 또는 그의 염(예를 들면, 알긴산 칼슘, 알긴산 나트륨), 키틴, 키토산 등의 수용성 고분자 다당류를 들 수 있다.

알긴산 염(알긴산 칼슘)을 조제하고, 막 형상으로 성형하는 방법으로서는, 예를 들면, 2％ 알긴산 나트륨 수용액 3.3㎖를 10㎖ 용량의 배양 접시(Petri dish)의 저면 전체가 이 수용액에 접촉하도록 균일하게 유연한다. 그 후 3％ 염화칼슘 수용액 5㎖를 같은 배양 접시 위에 균일하게 넓히고, 알긴산 나트륨 수용액과 염화칼슘 수용액이 충분히 접촉하도록 한 후, 몇 분 기다린다. 잔존하고 있는 액을 제거 후, 증류수로 세정하고, 자연 건조시킴으로써 알긴산 칼슘막을 조제한다. 건조 후, 막을 벗기고, 적당한 크기로 형성하며, EO가스멸균을 시행함으로써 피복재료로서 조제할 수 있다.

해당 피복재료가 액체인 경우는, 결손부에 유치한 bFGF 담지 젤라틴 스펀지의 표면에 수 방울을 적하(滴下)하거나 자체 공지의 분무기를 이용하여 스프레이하는 것 등에 의해 투여할 수 있다. 또한, 해당 피복재료가 시트형상 물질인 경우, 결손부에 유치한 bFGF 담지 젤라틴 스펀지의 표면을 피복하도록 배치할 수 있다.

이하, 실시예를 나타내어 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하는데, 이들은 본 발명을 어떤 식으로든 한정하는 것은 아니다.

실시예

실시예 1 고막재생

1) 환자의 선택

환자는, 고막 천공을 가지며 중이ㆍ외이에 활동성의 감염ㆍ염증이 없는 것을 확인한 만성 중이염 증상 예(n=9), 고막폐쇄술 내지 고실형성술 시행 후의 재천공 증상 예(n=7), 외상성 고막 천공 진구 증상 예(n=5), 삼출성 중이염에 의한 고막절개 내지 고막튜브유치 후의 천공유잔 례(n=10) 등 여러 가지의 증상 예를 포함한다. 고막 천공의 크기는 불문한다.

고막 천공의 크기에 의해 환자를 3군으로 분류했다. 즉, 고막 천공이 1/3 이하, 1/3∼2/3, 2/3 이상에 이르는 것을 각각 Grade I, Ⅱ, Ⅲ으로 했다.

2) 처치방법과 경과관찰

고막 천공이 있으며, 또한 활동성의 감염ㆍ염증이 없는 것을 확인하고, 4％ 염산리드카인에 침지한 면화를 고막 천공부에 닿게 하도록 외이도 내에 삽입한다. 약 15분 후, 현미경 아래에 고막 천공 가장자리에 고막 절개도 등으로 상처를 내고, 천공 가장자리의 상피를 전주성으로 제거했다(도 1B). 계속해서, 고막 천공보다 큰 젤라틴 스펀지(스폰젤(등록상표): 아스텔라스) 덩어리에 bFGF(피브라스트 (Fiblast)(등록상표): 카켄제약)를 함침시키고, 고막 천공 부위를 충분히 덮도록 bFGF 담지 젤라틴 스펀지 덩어리를 유치했다(도 1C). 이 후, 이것을 피브린 풀(베리플라스트(등록상표):CSL 베링) 수 방울로 고정했다.

처치 후, 환자에게 강한 코 훌쩍거림이나 코 풀음 등 귀에 압력이 가해지는 것을 하지 않도록, 또, 세발, 입욕시에 귀에 물이 들어가지 않도록 지도했다.

3주 후의 진찰에서는, 표면에 남은 피복재료 및 젤라틴 스펀지가 고착하고 있으므로, 이것을 로젠(Rosen)의 탐침 등으로 주의 깊게 제거하면, 그 하면에 재생한 고막이 나타났다(도 1D). 1회의 처치로 천공이 폐쇄하지 않는 증상 예에 대해서는 동일 처치를 반복 실행했다.

재생 고막은, 이 시점에서는 비후(肥厚)하고 있으며 혈관이 많은 조직이지만, 시간의 경과와 함께 얇아지고(도 1E), 약 2개월에 정상 고막과 판별할 수 없게 되었다(도 1F).

3) 결과

본 방법에 의해서 26명 31귀의 고막 재생 치료가 이루어졌다. 그 결과를 표 1에 나타낸다. 결과는 폐쇄에 필요로 한 처치회수, 폐쇄율, 청력개선의 정도, 마취시간을 제외한 처치시간, 후유증의 유무를, 천공의 크기(Grade I∼Ⅲ)마다 정리했다. 또, bFGF를 사용하지 않고, 생리식염수만을 침지한 젤라틴 스펀지를 고막 천공부에 유치한 5증상 예의 결과를 표 2에 나타냈다.

bFGF를 사용하지 않고, 생리식염수만을 침지한 젤라틴 스펀지라도 약간의 고막 폐쇄 경향을 나타냈다. 이것은 골격의 유치만으로도 고막의 재생이 촉진되는 것을 나타내고 있으며, 극한 경도의 고막 천공에 대해서는 폐쇄가 가능하다고 생각되는데, 고막 천공이 큰 경우는, 처치회수를 늘려도 폐쇄할 수 없었다.

한편, bFGF를 첨가한 경우, 고막 천공의 크기에 관계없이 모든 증상 예에서, 고막 천공이 폐쇄되어 있다. 이것은 골격만으로는 세포의 재생에 한계가 있는 것을 나타내고 있으며, 어느 정도 이상의 크기의 고막 천공 증상 예에 대해서는, bFGF 등 성장인자의 첨가가 필수적이라고 생각된다. 또, 청력개선의 정도도, 고막 천공의 크기에 관계없이, 정상레벨까지 회복하고 있으며, 기능적으로도 회복한 고막의 재생이 보였다.

실시예 2 외이도 연부 조직 재생

1) 환자의 선택

환자는 외이도 진주종 절제 후(n=7), 고실형성술 후(n=2), 외이도 종양 절제 후(n=1)로, 어느 것이나 외이도 연부 조직의 결손과 외이도 뼈의 노출을 나타낸 증상 예이다. 결손의 크기는 불문한다.

2) 처치방법과 경과관찰

창상부에 활동성의 감염ㆍ염증이 없는 것을 확인하고, 국소 마취를 시행했다. 현미경 아래에, 외이도 진주종 및 외이도 종양의 증상 예에서는, 외이도 내로부터 진주종 및 종양을 절제한 후, 또, 고실형성술 후의 외이도 뼈 노출 증상 예에서는, 메스 등으로 신선한 창상부를 형성한 후에, 창상부보다 큰 젤라틴 스펀지 덩어리에 bFGF를 함침시켜, 결손부를 충분히 덮도록 bFGF 담지 젤라틴 스펀지덩어리를 유치했다(도 2B). 이 후, 이것을 피브린 풀 수 방울 또는 알긴산 칼슘막으로 피복했다(도 2C).

환자에게는 귀 팜의 금지나 입욕, 세발, 세안시에 외이도 내에 물이 들어가지 않도록 지도했다.

2, 3주일 후의 진찰에서는 표면에 남은 피복재료 및 젤라틴 스펀지가 고착하고 있으므로, 이것을 로젠의 탐침 등으로 주의 깊게 제거하면, 그 하면에 완전하게 재생한 외이도 상피 및 연부 조직이 나타났다(도 2D). 1회의 처치로 재생이 불충분한 경우에는 동일한 처치를 반복 실행했다.

3) 결과

본 방법에 의해서 10증상 예의 외이도 재생 치료가 이루어졌다. 그 결과를 표 3에 나타낸다. 결과는 폐쇄에 필요한 처치회수, 폐쇄율, 마취시간을 제외한 처치시간, 후유증의 유무를 결손의 크기(Grade I∼Ⅲ)마다 정리했다.

본 발명에 따르면, 본격적 수술 처치를 동반하지 않고, 외래에서의 10분 정도의 처치만으로 고막 천공 및 외이도 연부 조직 결손을 치료할 수 있으므로, 입원이나 빈번한 통원이 불필요하게 된다. 또한, 결손의 크기나 원인에 관계없이 고막ㆍ외이도 재생이 가능하므로, 종래의 재생 의학적 수법에 의한 치료를 적용하지 않았던 환자도 대상으로 할 수 있다. 또한 수기(手技)가 간단하고, 반복 처치해도 후유증이 없으며, 완전히 정상적인 고막ㆍ외이도의 재생이 가능하다. 또, 처치 직후부터 청력이 회복되고, 일상생활에도 전혀 지장이 없다. 따라서, 환자의 정신적ㆍ육체적ㆍ시간적ㆍ경제적 부담이 경감되고, 의료경제적으로도 매우 우수하다.

본 출원은, 일본에서 출원된 특허출원 2008-167744(출원일: 2008년 6월 26일)를 기초로 하고 있으며, 그 내용은 모두 본 명세서에 포함되는 것으로 한다.

Claims (12)

1. 염기성 섬유아세포 증식인자를 담지한 젤라틴 스펀지를 함유하고, 피복재료와 조합해서 이루어지는, 고막 또는 외이도 재생제.
2. 제 1 항에 있어서,
   피복재료가 피브린 풀 또는 수용성 고분자 다당류 혹은 그들의 유도체인, 재생제.
3. 제 2 항에 있어서,
   수용성 고분자 다당류가 키틴, 키토산 또는 알긴산 혹은 그의 염인, 재생제.
4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
   고막 천공 또는 외이도 연부 조직 결손의 변연부가 신선화되어 있는 것을 특징으로 하는 재생제.
5. 치료상 유효량의 염기성 섬유아세포 증식인자를 담지한 젤라틴 스펀지를, 고막 천공 또는 외이도 연부 조직 결손 환자의 고막 천공 또는 외이도 연부 조직 결손부에 유치하고, 피복재료로 피복하는 것을 포함하는 고막 또는 외이도의 재생방법.
6. 제 5 항에 있어서,
   피복재료가 피브린 풀 또는 수용성 고분자 다당류 혹은 그들의 유도체인, 재생방법.
7. 제 6 항에 있어서,
   수용성 고분자 다당류가 키틴, 키토산 또는 알긴산 혹은 그의 염인, 재생방법.
8. 제 5 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
   고막 천공 또는 외이도 연부 조직 결손의 변연부를 미리 신선화시켜 두는 것을 특징으로 하는 재생방법.
9. 고막 또는 외이도 재생제를 제조하기 위한 피복재료 및 젤라틴 스펀지에 담지시킨 염기성 섬유아세포 증식인자의 사용.
10. 제 9 항에 있어서,
    피복재료가 피브린 풀 또는 수용성 고분자 다당류 혹은 그들의 유도체인, 사용.
11. 제 10 항에 있어서,
    수용성 고분자 다당류가 키틴, 키토산 또는 알긴산 혹은 그의 염인, 사용.
12. 제 9 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    고막 천공 또는 외이도 연부 조직 결손의 변연부가 신선화되어 있는 것을 특징으로 하는 사용.

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