KR20170069997A - 미리스토일화된 렙틴-관련된 펩티드 및 이들의 용도 - Google Patents
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Abstract
미리스트산 및 렙틴-관련된 펩티드의 접합체인, 비만 관련된 장애의 치료를 위한 제약학적 화합물. 바람직하게는, 렙틴-관련된 펩티드는 Leu-4에서 D-치환된 OB3이다. 결과의 접합체는 전달 루트에 따라 이의 반감기를 1 시간 이하로부터 길게는 28 시간까지 연장하고, 흡수를 증가시키고, 혈장 청소율을 감소시키고, 그리고 최소 효과량이 수배 감소될 수 있게 함으로써, 렙틴-관련된 펩티드의 약동학적 프로필을 유의미하게 향상시켰다.
Description
관련된 출원에 대한 교차 참조
본 출원은 2014년 8월 11일자 제출된 U.S. 가출원 번호 62/035,916에 우선권을 주장한다.
발명의 배경
1. 발명의 분야
본 발명은 렙틴-관련된 펩티드 및 더욱 구체적으로, 미리스토일화된 렙틴-관련된 펩티드에 관계한다.
2. 관련된 분야의 설명
마른 체중에 비하여 과잉의 체지방으로서 규정된 비만은 다수의 중요한 임상적 및 심리학적 병적 상태, 예를 들면, 고혈압, 상승된 혈액 지질 및 유형 II 또는 인슐린 비의존성 당뇨병 (NIDDM), 그리고 감소된 기대 수명과 연관된다. 미국에는 NIDDM을 앓는 대략 6-10 백만 명의 개체가 있는데, 이들은 65 세 이상의 전체 인구 중에서 18%를 차지한다. 이에 더하여, NIDDM을 앓는 남성의 대략 45% 및 여성의 70%는 비만하고, 그리고 이들의 당뇨병은 체중 감소에 의해 실제적으로 향상되거나 또는 심지어 소멸된다.
렙틴-관련된 펩티드 및 유사체는 인간 비만 및 이의 관련된 기능장애를 치료하는데 큰 잠재력을 보였다. 렙틴-관련된 합성 펩티드 효현제 및 길항제의 설계, 개발, 그리고 전임상 적용에서 계속되는 노력은 대다수의 비만한 인간의 치료적 요구를 충족시키지 못하는 임상 중인 렙틴의 명확한 실패가 이러한 질환 및 이의 연관된 물질대사 기능장애의 범유행 비율을 감소시키는 것을 목적으로 하는 신규한 펩티드 치료제를 개발하려는 노력에서 촉매제로서 기능하였다는 것을 지시한다. 이점에 관하여, 작은-분자 펩티드 치료제는 재조합 렙틴의 한계를 극복하는 잠재력을 갖는데, 그 이유는 중추신경계 (CNS) 내로 이들의 흡수가 혈액 뇌 장벽 (BBB)을 교차하여 가포화 수송에 의존하지 않기 때문이다. CNS 내로 결함성 수송은 인간 비만의 대다수의 사례에서 렙틴 내성의 원인으로서 확인되었다.
가령, 렙틴-유사 활성을 갖는 합성 펩티드, 예를 들면, 생쥐 [D-Leu-4]-OB3 및 이의 유사체는 렙틴-결함성 ob/ob 및 렙틴-내성 db/db 생쥐 모형에서 체중 증가, 사료 및 물 섭취, 혈당, 인슐린 감수성, 그리고 골 교체의 민감하고 특정한 마커인 혈청 오스테오칼신에 유의미하게 영향을 준다. 하지만, 인간에서 약물 후보로서 [D-Leu-4]-OB3 및 이의 유사체의 약물동력학은 치료적 용도를 위해 필요한 만큼 최적은 아니다. 특히, [D-Leu-4]-OB3 및 이의 유사체는 짧은 혈청 반감기 및 높은 혈장 청소율을 갖기 때문에, [D-Leu-4]-OB3 및 이의 유사체의 감소된 생체이용률이 유발되고, 따라서 더욱 높은 용량이 필요하다.
따라서, 인간 비만 및 이의 관련된 기능장애의 치료를 위한 효과적인 치료제를 제공하는, 향상된 약물동력학을 갖는 변형된 렙틴-관련된 펩티드 및 유사체의 개발이 요구된다.
발명의 간단한 요약
본 발명은 비-미리스트산 접합된 렙틴-관련된 펩티드에 비하여 향상된 약리학적 효과를 제공하는, 미리스트산 및 렙틴-관련된 펩티드의 폴리펩티드 접합체를 포함한다. 바람직하게는, 미리스트산은 렙틴-관련된 펩티드의 N 말단에 접합된다. 본 발명의 폴리펩티드 접합체는 투여 이후에, 체중 증가, 식품 섭취, 물소비량, 및/또는 혈당 수준을 감소시킴으로써 신체 질량을 조정할 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드 접합체는 또한, 골 형성을 증가시킬 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 렙틴-관련된 펩티드는 서열 SCSLPQT (서열 번호:1)를 갖는 렙틴-유사 활성의 합성 펩티드 아미드, [D-Leu-4]-OB3을 포함하고, 그리고 미리스트산에 접합되어 화합물 MA-[D-Leu-4]-OB3을 형성한다.
본원에서 설명된 제약학적 조성물은 비-미리스토일화된 렙틴-관련된 펩티드의 용량보다 최소한 4배, 그리고 심지어 10-배 낮은 용량에서 투여될 수 있다. 미리스트산 접합된 렙틴-관련된 펩티드는 치료 효과량을 개체에 투여함으로써, 치료가 필요한 개체에서 신체 질량의 항상성에 관련된 질환을 치료하는데 이용될 수 있다. 가령, 치료되는 질환은 비만, 과혈당증, 고인슐린혈증, 과식증, 갑상선 기능장애, 불임 또는 당뇨병일 수 있다. 미리스트산 접합된 렙틴-관련된 펩티드는 또한, 골 형성을 증가시키는데 이용될 수 있다. 가령, 미리스트산 접합된 렙틴-관련된 펩티드는 영양실조, 기아, 신경성 식욕부진, 골다공증, 암, 당뇨병, 결핵, 만성 설사, AIDS, 그리고 위장간막 동맥 증후군으로 구성된 군에서 선택되는 장애로 고통받는 개체를 치료하는데 이용될 수 있다. 미리스트산 접합된 렙틴-관련된 펩티드는 피하, 복막내, 근육내, 경구 또는 비내 투여를 통해 투여될 수 있다.
도면의 간단한 설명
본 발명은 첨부 도면과 함께 다음의 상세한 설명을 읽음으로써 더욱 충분히 이해되고 인지될 것인데, 여기서:
도면 1은 본 발명에 따른 미리스트산 접합된 렙틴-관련된 펩티드의 계통도이다.
도면 2는 치료 전 (시간 0), 그리고 수컷 Swiss Webster 생쥐 (시점마다 n = 3 생쥐)에 0.1 mg 펩티드의 피하 전달 후 1, 2, 4, 6, 18 및 24 시간에 MA-[D-Leu-4]OB3의 혈청 농도를 보여주는 그래프이다. 각 값은 평균 ± SEM을 나타낸다. 오차 막대는 포인트 내에 내포되고 0.01 및 0.12 ng/ml 사이의 범위에서 변하였다;
도면 3은 치료 전 (시간 0), 그리고 수컷 Swiss Webster 생쥐 (시점마다 n = 3 생쥐)에 0.1 mg 펩티드의 복막내 전달 후 1, 2, 4, 6, 18 및 24 시간에 MA-[D-Leu-4]OB3의 혈청 농도를 보여주는 그래프이다. 각 값은 평균 ± SEM을 나타낸다. 오차 막대는 포인트 내에 내포되고 0.01 및 0.12 ng/ml 사이의 범위에서 변하였다;
도면 4는 치료 전 (시간 0), 그리고 수컷 Swiss Webster 생쥐 (시점마다 n = 3 생쥐)에 0.1 mg 펩티드의 근육내 전달 후 1, 2, 4, 6, 18 및 24 시간에 MA-[D-Leu-4]OB3의 혈청 농도를 보여주는 그래프이다. 각 값은 평균 ± SEM을 나타낸다. 오차 막대는 포인트 내에 내포되고 0.01 및 0.12 ng/ml 사이의 범위에서 변하였다;
도면 5는 치료 전 (시간 0), 그리고 수컷 Swiss Webster 생쥐 (시점마다 n = 3 생쥐)에 0.1 mg 펩티드의 경구 전달 (위관영양) 후 1, 2, 4, 6, 18 및 24 시간에 MA-[D-Leu-4]OB3의 혈청 농도를 보여주는 그래프이다. 각 값은 평균 ± SEM을 나타낸다. 오차 막대는 포인트 내에 내포되고 0.01 및 0.12 ng/ml 사이의 범위에서 변하였다;
도면 6은 치료 전 (시간 0), 그리고 수컷 Swiss Webster 생쥐 (시점마다 n = 3 생쥐)에 0.1 mg 펩티드의 비내 점적 후 1, 2, 4, 6, 18 및 24 시간에 MA-[D-Leu-4]OB3의 혈청 농도를 보여주는 그래프이다. 각 값은 평균 ± SEM을 나타낸다. 오차 막대는 포인트 내에 내포되고 0.01 및 0.12 ng/ml 사이의 범위에서 변하였다;
도면 7은 0.3% 도데실 말토시드에서 경구 전달 이후에 db/db 생쥐에서 공복 혈당에 대한 미리스트산-접합된 [D-Leu-4]-OB3의 효과를 보여주는 그래프이다;
도면 8은 PBS에서 경구 전달 이후에 db/db 생쥐에서 공복 혈당에 대한 미리스트산-접합된 [D-Leu-4]-OB3의 효과를 보여주는 그래프이다;
도면 9는 STZ-유도된 고혈당 수컷 Swiss Webster 생쥐에서 MA-[D-Leu-4]-OB3 또는 메트포르민의 부재 또는 존재에서, 체중 증가에 대한 디테미르 인슐린의 효과를 보여주는 그래프이다. 각 포인트는 초기의 퍼센트로서 표시된 평균 ± SEM 체중을 나타낸다 (군마다 n = 6 생쥐); 그리고
도면 10은 STZ-유도된 고혈당 수컷 Swiss Webster 생쥐에서 MA-[D-Leu-4]-OB3 또는 메트포르민의 부재 또는 존재에서, 공복 혈당 수준에 대한 디테미르 인슐린의 효과를 보여주는 그래프이다. 각 막대 및 수직선은 평균 ± SEM 공복 혈당을 나타낸다 (군마다 n = 6 생쥐).
본 발명은 첨부 도면과 함께 다음의 상세한 설명을 읽음으로써 더욱 충분히 이해되고 인지될 것인데, 여기서:
도면 1은 본 발명에 따른 미리스트산 접합된 렙틴-관련된 펩티드의 계통도이다.
도면 2는 치료 전 (시간 0), 그리고 수컷 Swiss Webster 생쥐 (시점마다 n = 3 생쥐)에 0.1 mg 펩티드의 피하 전달 후 1, 2, 4, 6, 18 및 24 시간에 MA-[D-Leu-4]OB3의 혈청 농도를 보여주는 그래프이다. 각 값은 평균 ± SEM을 나타낸다. 오차 막대는 포인트 내에 내포되고 0.01 및 0.12 ng/ml 사이의 범위에서 변하였다;
도면 3은 치료 전 (시간 0), 그리고 수컷 Swiss Webster 생쥐 (시점마다 n = 3 생쥐)에 0.1 mg 펩티드의 복막내 전달 후 1, 2, 4, 6, 18 및 24 시간에 MA-[D-Leu-4]OB3의 혈청 농도를 보여주는 그래프이다. 각 값은 평균 ± SEM을 나타낸다. 오차 막대는 포인트 내에 내포되고 0.01 및 0.12 ng/ml 사이의 범위에서 변하였다;
도면 4는 치료 전 (시간 0), 그리고 수컷 Swiss Webster 생쥐 (시점마다 n = 3 생쥐)에 0.1 mg 펩티드의 근육내 전달 후 1, 2, 4, 6, 18 및 24 시간에 MA-[D-Leu-4]OB3의 혈청 농도를 보여주는 그래프이다. 각 값은 평균 ± SEM을 나타낸다. 오차 막대는 포인트 내에 내포되고 0.01 및 0.12 ng/ml 사이의 범위에서 변하였다;
도면 5는 치료 전 (시간 0), 그리고 수컷 Swiss Webster 생쥐 (시점마다 n = 3 생쥐)에 0.1 mg 펩티드의 경구 전달 (위관영양) 후 1, 2, 4, 6, 18 및 24 시간에 MA-[D-Leu-4]OB3의 혈청 농도를 보여주는 그래프이다. 각 값은 평균 ± SEM을 나타낸다. 오차 막대는 포인트 내에 내포되고 0.01 및 0.12 ng/ml 사이의 범위에서 변하였다;
도면 6은 치료 전 (시간 0), 그리고 수컷 Swiss Webster 생쥐 (시점마다 n = 3 생쥐)에 0.1 mg 펩티드의 비내 점적 후 1, 2, 4, 6, 18 및 24 시간에 MA-[D-Leu-4]OB3의 혈청 농도를 보여주는 그래프이다. 각 값은 평균 ± SEM을 나타낸다. 오차 막대는 포인트 내에 내포되고 0.01 및 0.12 ng/ml 사이의 범위에서 변하였다;
도면 7은 0.3% 도데실 말토시드에서 경구 전달 이후에 db/db 생쥐에서 공복 혈당에 대한 미리스트산-접합된 [D-Leu-4]-OB3의 효과를 보여주는 그래프이다;
도면 8은 PBS에서 경구 전달 이후에 db/db 생쥐에서 공복 혈당에 대한 미리스트산-접합된 [D-Leu-4]-OB3의 효과를 보여주는 그래프이다;
도면 9는 STZ-유도된 고혈당 수컷 Swiss Webster 생쥐에서 MA-[D-Leu-4]-OB3 또는 메트포르민의 부재 또는 존재에서, 체중 증가에 대한 디테미르 인슐린의 효과를 보여주는 그래프이다. 각 포인트는 초기의 퍼센트로서 표시된 평균 ± SEM 체중을 나타낸다 (군마다 n = 6 생쥐); 그리고
도면 10은 STZ-유도된 고혈당 수컷 Swiss Webster 생쥐에서 MA-[D-Leu-4]-OB3 또는 메트포르민의 부재 또는 존재에서, 공복 혈당 수준에 대한 디테미르 인슐린의 효과를 보여주는 그래프이다. 각 막대 및 수직선은 평균 ± SEM 공복 혈당을 나타낸다 (군마다 n = 6 생쥐).
발명의 상세한 설명
이들 도면 (유사한 참조 번호는 전역에서 유사한 부분을 지칭한다)을 참조하면, 렙틴-관련된 단백질 단독에 비하여 유의미하게 향상된 약동학적 프로필을 유발하는, 미리스트산 및 렙틴-관련된 펩티드의 접합체가 도면 1에서 목격된다. 바람직하게는, 렙틴-관련된 펩티드는 렙틴의 잔기 116-122에 상응하는 OB3으로서 알려져 있는 합성 펩티드이고, 여기서 생쥐 OB3은 서열 SCSLPQT (서열 번호:1)를 갖고, 그리고 인간 OB3은 서열 SCHLPWA(서열 번호: 16)를 갖는다.
렙틴-관련된 펩티드는 또한, SCSLPQT (서열 번호:1) 및 SCHLPWA(서열 번호: 16)에 상응하는 영역에 가장 가깝거나 또는 겹치는 다른 영역 렙틴을 포함할 수 있다. 가령, AVPIQKVQDDTKTLI (서열 번호: 2); TKTLIKTIVTRINDI (서열 번호: 3); RINDISHTQSVSAKQ (서열 번호: 4); VSAKQRVTGLDFIPG (서열 번호: 5); DFIPGLHPILSLSKM (서열 번호: 6); SLSKMDQTLAVYQQV (서열 번호: 7); VYQQVLTSLPSQNVL (서열 번호: 8); SQNVLQIANDLENLR (서열 번호: 9); DLLHLLAFSKSCSLP (서열 번호: 10); SCSLPQTSGLQKPES (서열 번호: 11); QKPESLDGVLEASLY (서열 번호: 12); EASLYSTEVVALSRL (서열 번호: 13); ALSRLQGSLQDILQQ (서열 번호: 14); 또는 DILQQLDVSPEC (서열 번호: 15)는 아래의 프로토콜을 이용하여 평가될 수 있었다.
바람직하게는, 렙틴-관련된 펩티드는 최소한 하나의 D-치환된 아미노산을 포함한다. 가령, D-동종형 아미노산은 서열 번호: 1에 대하여 [D-Ser-1]; [D-Cys-2]; [D-Ser-3]; [D-Leu-4]; [D-Pro-5]; [D-Gln-6]; 및 [D-Thr-7]로 구성된 군에서 선택될 수 있고, 그리고 서열 번호: 16에 대하여 [D-Ser-1]; [D-Cys-2]; [D-His-3]; [D-Leu-4]; [D-Pro-5]; [D-Trp-6]; 및 [D-Ala-7]로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
도면 1에서 목격되는 바와 같이, 미리스트산은 렙틴-관련된 펩티드의 잔기의 유리 아미노 기에 공유 부착된다. 대안으로, 미리스트산은 상기 펩티드의 잔기의 임의의 유리 아미노 기에 접합될 수 있다. 가령, 인간 OB3 펩티드 (서열 번호: 16)의 위치 3에서 히스티딘 (H) 잔기는 알파-아미노 기 이외에 추가 유리 아미노 기를 제공한다. 다음의 지질이 또한, 미리스트산 대신에 이용될 수 있고 아래의 프로토콜에 따라 시험될 수 있다: 시클로헥실발레로일, 아실-글루타밀, 라우로일, 2-숙시닐아미도 미리스트산, 2-숙시닐아미도에틸옥시 팔미트산, 미리스토일-α-글루타밀, 미리스토일-α-글루타밀-글리실, 콜로일, 7-데옥시콜로일, 리토콜로일, 리토콜로일-글루타밀, 4-벤조일-페닐알라닌, L-티록실, 수베로일-D-티록신, 3,3',5,5'-테트라요오도티로아세틸, 시클로헥실발레로일.
청구된 발명의 합성은 아실화의 공지된 과정에 기초되고, 여기서 지방산은 단백질에 공유 부착된다. ε-아미노 기를 선별적으로 아실화 (가령, 미리스토일화)하기 위해, 다양한 보호 기가 연계 동안 α-아미노 기를 차단하는데 이용될 수 있다. 적합한 보호 기의 선별은 당업자에게 공지되어 있고 p-메톡시벤족시-카르보닐 (pmZ)을 포함한다. 바람직하게는, ε-아미노 기는 아미노-보호 기의 이용 없이 일-단계 합성에서 아실화 (가령, 미리스토일화)될 수 있다. 아실화 (가령, 미리스토일화)는 활성화된 지방산 에스테르를 염기성 조건 하에 극성 용매에서 단백질의 ε-아미노 기와 반응시킴으로써 수행된다. 반응의 염기도는 렙틴 유사체의 모든 유리 아미노 기를 탈양자화하는데 충분해야 한다. 약염기성 조건 하에, 모든 유리 아미노 기가 탈양자화되지는 않고, 그리고 N 말단 또는 α-아미노 기의 우선적 아실화 (가령, 미리스토일화)가 발생한다. 아실화 (가령, 미리스토일화) 후, 산물은 표준 방법, 예를 들면, 역상 소수성 크로마토그래피에 의해 정제된다. 그 후에, 산물은 표준 방법, 예를 들면, 동결건조에 의해 또는 결정화에 의해 회수된다.
가령, 펩티드의 표본은 Rink 아미드 수지 상에서 Fmoc/tertbutyl 전략을 이용하여 Rainin Symphony 합성장치에서 합성되었다. 이들 아미노산은 HCTU/DIPEA 용액과 연계되고, 그리고 Fmoc가 20% 피페리딘/DMF의 용액으로 제거되었다. 자동화된 합성이 완결된 후에, 미리스트산 무수물이 펩티드의 N 말단에 수동으로 부가되었다. 펩티드는 TFA 개열 칵테일을 이용하여 수지로부터 개열되었다. Maldi-Tof 질량 분광분석법이 표적 덩어리가 존재하는 지를 점검하는데 이용되었다. 펩티드는 역상 HPLC 및 C-18 Waters Sunfire 칼럼을 이용하여 정제되었다.
미리스토일화된 펩티드의 약물동력학은 당분야에서 임의의 공지된 방법에 따라 결정될 수 있다. 가령, 미리스토일화된 렙틴-관련된 펩티드의 약물동력학은 총 흡수, 혈청 반감기, 그리고 혈장 청소율을 분석함으로써 결정될 수 있다. 총 흡수, 혈청 반감기, 그리고 혈장 청소율을 결정하는 검정은 당분야에서 널리 공지되고, 그리고 아래의 실시예에서 이용되었다. [D-Leu-4]-OB3에 미리스트산의 접합은 전달 루트에 따라 반감기를 1 시간 이하로부터 길게는 28 시간까지 연장하고, 흡수를 증가시키고, 혈장 청소율을 감소시키고, 그리고 최소 효과량이 4-배 또는 그 이상 감소될 수 있게 함으로써 약동학적 프로필을 유의미하게 향상시켰다. 본 발명의 미리스토일화된 펩티드는 따라서, 비-미리스토일화된 렙틴 펩티드에 비하여 유의미한 이점을 제공한다, 예를 들면, 이들은 더욱 낮은 용량에서 및 더욱 적은 투여 빈도로 투여될 수 있다. 비록 본 발명이 서열 번호: 1을 이용하여 시험되긴 했지만, 본 발명의 접근법은 다른 렙틴-관련된 단백질에 적용되고, 그리고 이후, 아래에 설명된 바와 같이 효력에 대해 시험될 수 있다.
실시예 1
[D-Leu-4]-OB3, 생물학적으로 활성 렙틴-관련된 합성 펩티드 아미드에 미리스트산의 접합은 이의 약동학적 프로필을 유의미하게 향상시킨다.
재료와 방법
동물의 하우징
12 및 15 g 사이의 무게가 나가는 3 내지 4 주령 수컷 Swiss Webster 생쥐는 Charles River Laboratories (Troy, NY, USA)로부터 획득되었다. 이들 동물은 스테인리스강 와이어 뚜껑 및 공기 필터가 구비된 폴리카보네이트 케이지 내에 케이지마다 3마리씩 수용되고, 그리고 Albany Medical College Animal Resources Facility 내에 통풍된 선반 (Thoren Caging Systems, Hazelton, PA, USA)에서 지지되었다. 이들 생쥐는 07:00 시부터 19:00 시까지 밝음 하에 일정한 온도 (24 ℃)에서 유지되고, 그리고 흡수 연구를 위해 이용 때까지 사료 및 물이 무제한으로 허용되었다.
펩티드 투여
MA-[D-Leu-4]OB3은 NeoBioLab (Cambridge, MA, USA)에 의해 C 말단 아미드로서 상업적으로 제조되었다. SC, IP 및 IM 전달을 위해, 상기 펩티드는 2가지 유전적으로 비만한 생쥐 모형에서 에너지 소비, 글루코오스 수준, 그리고 인슐린 감수성을 조절하는데 최적인 것으로 이전에 밝혀진 [D-Leu-4]-OB3의 농도보다 10-배 낮은 농도인 0.1 mg/200 μl의 농도에서 무균 인산염 완충된 식염수 (PBS, pH 7.2)에서 용해되었다. 경구 및 비내 전달을 위해, MA-[D-Leu-4]-OB3은 각각, 0.1 mg/100 μL 및 0.1 mg/10 μL의 농도에서 무균 탈이온수에서 재구성된 0.3% Intravail® (Aegis Therapeutics, San Diego, CA, USA)에서 용해되었다. 제로 (0) 시점에서, 생쥐 MA-[D-Leu-4]-OB3의 단일 200 μl SC, IM, 또는 IP 주사가 시점마다 각 3마리 생쥐에 제공되었다. 비내 전달은 생쥐를 이소플루란 (1-4%)으로 가볍게 마취시키고, 그리고 Gilson® P-20 피펫터를 이용하여, 10 μl의 MA-[D-Leu-4]OB3을 비공 내로 전달함으로써 달성되었다. 펩티드 투여 이후에, 생쥐는 지정된 기간 동안 별개의 케이지로 이전되었다.
혈액 및 혈청 제조물의 수집
펩티드 전달 후 1, 2, 4, 6, 18 및 24 시간에, 이들 생쥐는 이소플루란 (5%)으로 마취되고 심장 천자에 의해 방혈되었다. 혈액은 무균 비-헤파린화된 플라스틱 원심분리기 튜브에 수집되고 실온에서 1 시간 동안 그 상태로 있도록 허용되었다. 응고된 혈액은 튜브의 벽으로부터 무균 목재 애플리케이터 스틱으로 림드되었다. 개별 혈청 표본은 에펜도르프 5702R, A-4-38 회전자 (Eppendorf North America, Westbury, NY, USA)에서 2600 xg로 30 분 동안 원심분리에 의해 제조되고, 시점별로 모아지고, 그리고 MA-[D-Leu-4]OB3 함량에 대해 검정될 때까지 동결 보관되었다. 이들 동물 절차는 Albany Medical College Animal Care and Use Committee에 의해 승인되었고, 그리고 유관한 지침 및 규정에 따라서 수행되었다.
혈청 MA[D-Leu-4]-OB3의 계측
혼합 혈청 표본 내에 MA-[D-Leu-4]-OB3 농도는 다음의 변형으로, 본 발명자들에 의해 경쟁적 ELISA로 계측되고, 진전되고, 검증되었다: MA-[D-Leu-4]-OB3이 표준 곡선을 구축하는데 이용되었다. MA-[D-Leu-4]-OB3 및 ELISA에서 이용된 [D-Leu-4]-OB3에 대한 다중클론 항체의 교차반응성은 100%이었다. 각 혈청 표본은 2중으로 검정되었다. 검정내 및 검정간 변이 계수는 각각, 0.03% 및 0.2%이었다.
약동학적 분석: 총 흡수 (AUC)
SC, IP, IM, 경구, 또는 비내 전달 이후에 시간과 대비하여 MA-[D-Leu-4]OB3의 혈청 농도는 그래픽 프로그램 SigmaPlot 8.0 (SPSS Science, Chicago, IL, USA)을 이용하여 플롯팅되었다. 각 곡선 아래 면적 (AUC)은 이러한 프로그램의 함수로 계산되고, 그리고 ng/ml/분으로서 표시되었다.
약동학적 분석: 혈청 반감기 (t
1/2
)
MA-[D-Leu-4]OB3의 혈청 농도가 IP, SC, IM, 경구 및 비내 투여 이후에 달성된 최고 농도의 정확하게 절반까지 감소되는데 필요한 기간은 다음의 공식을 이용하여 계산되었다:
t1/2 = 0.693/kelim
여기서 kelim은 시간과 대비하여 흡수 프로필의 베타 시기에서 각 농도 포인트의 자연 로그 (log)를 플롯팅함으로써 결정된 제거 상수를 나타낸다. 이들 플롯 각각의 선형 회귀 분석은 직선을 유발하였는데, 이의 기울기는 각 전달 방법에 대한 kelim을 나타낸다.
약동학적 분석: 혈장 청소 (CL)
IP, SC, IM, 경구 및 비내 전달 이후에 혈장으로부터 MA-[D-Leu-4]-OB3의 청소는 다음의 공식을 이용하여 AUC로부터 계산되었다:
CL = 용량/AUC:
약동학적 분석: 겉보기 분포 용적 (V
d
)
약물의 반감기가 혈장으로부터 이의 청소에 역으로 관련되고 이의 분포 용적에 직접적으로 비례하기 때문에, ip, sc, im 및 비내 전달 이후에 MA-[D-Leu-4]-OB3의 겉보기 분포 용적은 다음의 공식을 이용하여 이의 반감기 및 청소율로부터 계산되었다:
t1/2 = 0.693 x Vd/CL
결과
[D-Leu-4]-OB3의 반감기는 정상적으로 1 시간 이하이고, 그리고 생리학적으로 유효 용량은 밀리그램 범위 내에 있다. 인간 비만 및/또는 당뇨병의 치료에 [D-Leu-4]-OB3의 적용에 비추어, 일차적으로 혈청 반감기를 연장하고 및/또는 최적 유효 용량을 감소시키기 위해, [D-Leu-4]-OB3의 약동학적 프로필을 향상시키는 것은 매우 중요하였다. 본원에서 제공된 결과는 [D-Leu-4]-OB3에 미리스트산의 접합이 (a) 전달 루트에 따라 이의 반감기를 1 시간 이하로부터 길게는 28 시간까지 연장하고, (b) 이의 흡수를 증가시키고, (c) 이것이 혈장으로부터 청소되는 비율을 감소시키고, 그리고 (d) 최소 효과량이 4-배 감소될 수 있게 함으로써 이의 약동학적 프로필을 유의미하게 향상시킨다는 것을 보여주었다.
흡수 프로필
SC, IP, IM, 경구 및 비내 전달 이후에 MA-[D-Leu-4]OB3의 흡수 프로필은 각각, 도면 2-6에서 도시된다. 0.1 mg 펩티드의 SC, IP 및 IM 투여 이후에 MA-[D-Leu-4]-OB3의 최대 흡수 (Cmax)는 2 시간 시점 (tmax)에 일어났고, 그리고 시간의 흐름에서 급속히 감소하였다. 18 시간 후, 혈청 내에 MA-[D-Leu-4]-OB3의 농도는 거의 기저 수준까지 감소되었다 (도면 2-4). 경구 및 비내 투여 이후에 흡수 프로필 (도면 5 및 6)은 SC, IP, 또는 IM 전달에 대해 관찰된 것들과 뚜렷하게 상이하였다. MA-[D-Leu-4]-OB3의 경구 및 비내 전달 이후에 Cmax는 각각, 4 시간 및 6 시간 시점에 달성되었다. 하지만, 경구 및 비내 전달 후 24 시간에, Cmax는 각각 31% 및 80% 감소되었다.
총 흡수
MA-[D-Leu-4]-OB3의 총 흡수는 각 전달 방법에 대한 흡수 곡선 아래 면적 (AUC)을 계측함으로써 결정되었다. 이러한 값은 전신 순환 내로 총 흡수 또는 펩티드 흡수의 정도, 또는 이의 투여 이후에 총 흡수를 나타낸다. SC, IP, IM, 경구 및 비내 전달 이후에 AUC 값은 각각, 1,829,225 ng/ml/분, 1,212,330 ng/ml/분, 842,374 ng/ml/분, 278,460 ng/ml, 그리고 158,426 ng/ml이었다. 이들 값으로부터, 비내, 경구, IM, IP 및 SC 전달 이후에 상대적 생체이용률은 각각, 1.0, 1.8, 5.3, 7.7 및 11.7인 것으로 계산되었다.
제거 상수 (k
elim
) 및 혈청 반감기 (t
1/2
)
SC, IP, IM, 경구 및 비내 전달 이후에 MA-[D-Leu-4]-OB3에 대한 제거 상수는 재료와 방법에서 설명된 바와 같이 계산되었고, 그리고 각각, -0.350, -0.155, -0.117, -0.024, 그리고 -0.085인 것으로 결정되었다. SC, IP, IM, 경구 및 비내 투여 이후에 MA-[D-Leu-4]-OB3의 혈청 반감기는 각각, 2.0, 4.1, 5.5, 28.9, 그리고 8.2 시간이었다.
혈장 청소율 (CL) 및 겉보기 분포 용적 (V
d
)
SC, IP, IM, 경구 및 비내 투여 이후에 혈장으로부터 MA-[D-Leu-4]-OB3의 청소율은 각각, 0.05, 0.08, 0.12, 0.36, 그리고 0.63 ml/분이었다. SC, IP, IM, 경구 및 비내 전달 이후에 MA-[D-Leu-4]-OB3의 겉보기 분포 용적은 각각, 8.6, 30.9, 61.3, 900.8, 그리고 447.0 ml이었다. 이들 약동학적 파라미터, 그리고 [D-Leu-4]-OB3에 대해 앞서 설명된 것들은 아래의 표 1에서 요약된다.
[표 1]
SC, IP, IM, 경구 및 비내 전달 이후에 [D-Leu-4]-OB3 (1 mg)1 및 MA-[D-Leu-4]-OB3 (0.1 mg)의 약동학적 프로필
전달
파라미터
[D-Leu-4]-OB3
MA-[D-Leu-4]-OB3
2SC
Cmax (ng/ml)
35,063
389,490
Tmax
5 분
2 시간
AUC (ng/ml/분)
1,182,498
1,829,225
kelim
-0.020
-0.350
t1/2
34 분
2.0 시간
혈장 CL (ml/분)
0.85
0.05
Vd (ml)
42.9
8.6
2IP
Cmax (ng/ml)
22,519
169,620
Tmax
5 분
2 시간
AUC (ng/ml/분)
1,072,270
1,212,330
kelim
-0.014
-0.155
t1/2
49 분
4.5 시간
혈장 CL (ml/mm)
0.93
0.08
Vd (ml)
65.5
30.9
2IM
Cmax (ng/ml)
46,566
89,750
Tmax
5 분
2 시간
AUC (ng/ml/분)
1,481,060
842,374
kelim
-0.023
-0.117
t1/2
36 분
5.9 시간
혈장 CL (ml/분)
0.68
0.12
Vd (ml)
29.4
60.3
3경구
Cmax (ng/ml)
8,574
14,373
Tmax
50 분
4 시간
AUC (ng/ml/분)
552,710
278,460
kelim
-0.034
-0.024
t1/2
20 분
28.9 시간
혈장 CL (ml/분)
1.81
0.36
Vd (ml)
47.9
900.8
3비내
Cmax (ng/ml)
91,732, 36,069
10,047
Tmax
10 분, 60 분
6 시간
AUC (ng/ml/분)
4,336,963
158,426
kelim
-0.090, -0.020
-0.85
t1/2
41 분
8.2 시간
혈장 CL (ml/분)
1.37
0.63
Vd (ml)
15.4
447.0
1 이전 연구로부터 취해진 데이터
2 PBS에서 전달됨
3 0.3% DDM에서 전달됨
[D-Leu-4]-OB3으로 이전 연구에서, 비록 에너지 균형 및 글루코오스 항상성에 대한 이의 렙틴-유사 효과가 반복적으로 증명되긴 했지만, 전달 루트에 상관없이, 지속된 반응을 위해 높은 농도 (밀리몰 범위) 및 복수 일일량이 필요하였다. 이런 이유로, 본 발명에서는 인간 적용을 위해 [D-Leu-4]-OB3의 약물동력학을 향상시키는 것이 필수적이었다. 구체적으로, [D-Leu-4]-OB3의 생체이용률을 증가시키고, 이의 반감기를 연장하고, 그리고 이것이 전신 순환으로부터 청소되는 비율을 감소시키는 것이 추구되었다. 이런 향상은 전달되는 [D-Leu-4]-OB3의 용량 크기 및 투약 빈도를 감소시키면서, 이의 효력을 지속하거나 또는 향상시키는 것을 가능하게 만든다.
본 발명에 따른 [D-Leu-4]-OB3에 미리스트산의 접합은 [D-Leu-4]-OB3의 약동학적 프로필을 향상시키기 위한 유효한 접근법을 제공한다. IP, SC, 또는 IM 주사에 의해 전달될 때, 또는 위관영양에 의해 경구 전달될 때, MA-[D-Leu-4]-OB3의 최대 흡수 (Cmax)는 심지어 10-배 낮은 용량에서도, [D-Leu-4]-OB3의 것보다 극히 높았다. 비내 점적 이후에 관찰된 [D-Leu-4]-OB3의 이상성 흡수는 하지만, MA-[D-Leu-4]-OB3의 비내 전달 이후에 관찰되지 않았는데, 이러한 현상은 투여된 더욱 낮은 용량에 관련될 수 있다. 비내 점적 이후에 MA-[D-Leu-4]-OB3의 흡수 프로필에서 이러한 변화는 [D-Leu-4]-OB3의 흡수 프로필에서 관찰된 2개의 피크와 비교할 때, 펩티드의 최고 농도가 훨씬 늦게 달성되는 흡수의 단일 위치를 암시한다 (각각, 10 분 및 60 분과 대비하여 6 시간에 Tmax).
상기 데이터에 의해 지시된 바와 같이, MA-[D-Leu-4]-OB3의 흡수는 [D-Leu-4]-OB3의 경우에 5 내지 60 분과 비교하여, 투여 루트에 따라 2 내지 6 시간의 기간에 걸쳐 천천히 발생한다. 이들 조사 결과는 미리스트산 접합이 [D-Leu-4]-OB3과 비교하여, 더욱 느린 비율에서 더욱 높은 농도의 MA-[D-Leu-4]-OB3의 흡수를 용이하게 한다는 것을 지시한다. 비록 흡수의 이러한 패턴이 이용된 모든 전달 방법에서 MA[D-Leu-4]-OB3의 총 흡수 (AUC)를 상승시키는 것으로 보이지는 않지만, 상기 펩티드가 전신 순환 동안 상승된 수준으로 존재하는 시간을 연장하였다.
특히 주목할 만하고, 그리고 MA-[D-Leu-4]-OB3의 생물학적 활성을 연장하는데 직접적으로 관련되는 것은 [D-Leu-4]-OB3과 비교하여, 본 연구에서 활용된 각 전달 방법 이후에 관찰된 혈장으로부터 이의 더욱 긴 반감기 및 더욱 느린 청소율이다. 이러한 패턴은 혈청 내에서 급속히 상승되고 급속히 청소되는 [D-Leu-4]-OB3과 비교할 때, 더욱 긴 기간에 걸쳐 MA-[D-Leu-4]-OB3의 생물학적 활성을 지속시킬 수 있다. [D-Leu-4]-OB3에서 이전에 이용된 것보다 더욱 낮은 용량의 MA-[D-Leu-4]-OB3이 전달된 db/db 생쥐에서 경구 효력 연구로부터 결과는 이것이 사실이라는 것을 지시하였다.
본 발명에 따른 [D-Leu-4]-OB3의 미리스트산 접합은 따라서, 이의 약동학적 프로필을 유의미하게 향상시킨다. 상기 데이터는 또한, MA-[D-Leu-4]-OB3이 인간에서 비만 및/또는 당뇨병의 관리를 위한 경구, 비침습성, 그리고 안전한 치료적 접근법으로서 이용될 수 있다는 것을 지시한다.
실시예 2
6 내지 7 주령 수컷 BKS.Cg-Dock7m +/+ Leprdb/J 당뇨병성 db/db 생쥐에서 공복 혈당에 대한, PBS 또는 0.3% 도데실 말토시드 (DDM, Intravail®)에서 미리스트산-접합된 [D-Leu-4]-OB3의 경구 전달의 효과를 비교하는 연구.
수컷 db/db 생쥐는 14 연속일 동안 저녁에 하루 1회 위관영양에 의해, PBS 또는 DDM에서 증가하는 농도의 MA-[D-Leu-4]-OB3이 경구 제공되었다. 공복 (8 시간) 혈당 수준은 Accu-Chek Nano 글루코오스 미터 (Roche, Indianapolis, IN)를 이용하여 격일로 계측되었다. 14 일간의 치료 후, PBS에서 MA-[D-Leu-4]-OB3 (250 또는 500 mcg/일)을 제공받는 생쥐에서 혈당 수준은 PBS 단독을 제공받는 대조 생쥐에서 혈당 수준으로부터 변화가 없었다. 하지만, 0.3% DDM에서 100 또는 250 mcg/일을 제공받는 db/db 생쥐에서 혈당 수준은 250 mcg/일로 치료된 생쥐에서 14-일 치료 기간의 종결 시점에, 비-당뇨병성 BKS 생쥐에서 목격되는 수준까지 현저하게 감소되었다.
이들 결과는 [D-Leu-4]-OB3을 이용한 우리의 이전 연구에서 이용된 농도보다 4-배 낮은 농도에서 MA-[D-Leu-4]-OB3이 DDM에서 경구 전달될 때 혈당 수준을 감소시키는데 효과적이라는 것을 지시한다. 이들 결과는 DDM에서 [D-Leu-4]-OB3의 것과 비교하여 DDM에서 MA-[D-Leu-4]-OB3의 증강된 흡수, 더욱 느린 청소, 그리고 더욱 긴 반감기를 지시하는 약동학적 데이터와 일치하였다.
실시예 3
인슐린-결함성 당뇨병의 생쥐 모형에서 체중 증가 및 혈당 제어에 대한 미리스트산-접합된 [D-Leu-4]-OB3 (MA-[D-Leu-4]-OB3)의 효력을 증명하는 연구.
목적
스트렙토조토신 (STZ)-유도된 수컷 Swiss Webster 생쥐가 당뇨병의 인슐린-결함성 생쥐 모형에서 체중 증가 및 인슐린 감수성에 대한 MA-[D-Leu-4]-OB3의 효과를 조사하는 이들 연구에서 이용되었다. 이러한 모형을 이용하여, MA-[D-Leu-4]-OB3의 인슐린 민감화 효과가 다른 충분히 특징화된 인슐린-민감화 약물, 메트포르민의 것들과 비교되었다.
재료와 방법
7-주령 수컷 Swiss Webster 생쥐는 150 mg/kg STZ의 단일 복막내 (ip) 용량으로 고혈당이 되도록 만들어졌다. 공복 혈당 수준은 정상적인 (비-당뇨병성) 글루코오스 수준을 확립하고, 그리고 그 후에 매일, 과혈당증을 사정하기 위해 STZ 처리에 앞서 계측되었다. 공복 혈당 수준은 일과적으로, STZ 처리 후 4-5 일에 정상보다 3- 내지 4-배 높았다.
디테미르 인슐린 (Levemir®, Novo Nordisk, Malov, Denmark) 전달 펜이 0.025U/100 μL 인산염 완충된 식염수 (PBS)를 분여하는데 이용되었고, 그리고 14 일 동안 오전 8:00 및 9:00 사이에 및 오후 4:00 및 5:00 사이에 하루 2회 피하 (sc) 주사에 의해 전달되었다. MA-[D-Leu-4]-OB3 (NeoBiolab, Cambridge, MA) 및 메트포르민 (Sigma Aldrich, St. Louis, MO)은 무균 탈이온수에서 재구성된 0.3% 도데실 말토시드 (DDM, Intravail®, Aegis Therapeutics, San Diego, CA)에서 용해되었고, 그리고 14 일 동안 각각, 5 mg/kg/100 μL 또는 100 mg/kg/100 uL의 농도에서 8:00 시 및 9:00 시 사이에 및 16:00 시 및 17:00 시 사이에 경구 위관영양에 의해 하루 2회 전달되었다.
제로 일자에 및 그 후에 매일, 사료 및 물 섭취가 계측되었고, 그리고 생쥐는 아침 8:00 시 및 9:00 시 사이에 계량되었다. 혈당이 계측되는 일자에 공복 (8 시간) 글루코오스 수준을 확실하게 하기 위해, 사료는 8:00 시 및 9:00 시 사이에 케이지로부터 제거되고 계측 직후에 대체되었다.
결과
STZ-유도된 고혈당 수컷 SW 생쥐에서 체중 증가에 대한, 단독으로 또는 MA-[D-Leu-4]-OB3 또는 메트포르민과 합동으로 인슐린의 효과는 도면 9 및 아래의 표 2에서 도시된다:
[표 2]
STZ-유도된 고혈당 수컷 Swiss Webster 생쥐에서 체중 증가, 사료 및 물 섭취, 그리고 혈당 수준에 대한, 단독으로 또는 MA-[D-Leu-4]-OB3 또는 메트포르민과 합동으로 디테미르 인슐린의 효과
DDM 단독이 제공된 생쥐는 14-일 시험 기간의 종결점에서 체중이 11.9% 증가한 반면, 0.05U 인슐린을 매일 제공받는 생쥐는 체중이 16.1% 증가하였다. MA-[D-Leu-4]-OB3 단독을 제공받는 생쥐는 체중이 단지 8.1% 증가하였다. MA-[D-Leu-4]-OB3이 인슐린과 합동으로 제공될 때, 인슐린에 의해 유도된 체중 증가가 처리되지 않은 생쥐에서 관찰된 수준까지 감소되었다 (11.9%). 메트포르민이 인슐린과 합동으로 제공될 때, 체중은 단지 10.0% 증가하였다.
STZ-유도된 고혈당 생쥐에서 공복 혈당에 대한 MA-[D-Leu-4]-OB3 또는 메트포르민의 부재 또는 존재에서 인슐린의 효과는 도면 10 및 표 2에서 도시된다. 정상적인 SW 생쥐에서 공복 혈당 수준은 14 일 연구 동안 안정된 상태 (150-170 mg/dl)에 있는 반면, DDM 단독을 제공받는 STZ-처리된 생쥐에서 공복 혈당 수준은 500 및 600 mg/dL 사이의 범위에서 변하였다. 0.05U 디테미르 인슐린은 혈당 수준을 64.0% 감소시키지만, 정상 범위까지는 감소시키지 못하였다. MA-[D-Leu-4]-OB3 단독은 공복 혈당 수준에 대한 효과가 거의 없었다. MA-[D-Leu-4]-OB3 또는 메트포르민과 합동으로 제공될 때, 0.05 U 디테미르 인슐린의 항고혈당 효과가 증폭되었다. 2 일 이내에, 인슐린과 합동으로 MA-[D-Leu-4]-OB3이 제공된 생쥐에서 공복 혈당 수준은 거의 정상화되었고, 그리고 연구 내내 그러한 상태로 있었다. 어떤 저혈당 이벤트도 확인되지 않았다. 메트포르민이 인슐린과 합동으로 제공될 때 유사한 결과가 관찰되었다. 하지만, 6 일간 치료 후, 메트포르민을 제공받는 생쥐는 점점 더 저혈당이 되었다.
결론
본 연구의 결과는 피하 투여된 인슐린과 합동으로 경구 제공될 때 MA-[D-Leu-4]-OB3이 인슐린 약물요법과 연관된 체중 증가를 예방한다는 것을 지시한다. 이들 결과는 당뇨병의 이러한 인슐린-결함성 생쥐 모형에서 MA-[D-Leu-4]-OB3이 외인성 인슐린에 의해 유도된 체중 증가를 예방하고, 그리고 인슐린에 대한 조직 감수성을 증강하는데 있어서 메트포르민만큼 우수하거나 또는 이를 능가한다는 것을 더욱 암시한다.
MA-[D-Leu-4]-OB3의 인슐린 민감화 효과는 인슐린 결함의 이러한 생쥐 모형에서, 고인슐린혈증 ob/ob 및 db/db 생쥐에서 [D-Leu-4]-OB3으로, 그리고 db/db 생쥐에서 MA-[D-Leu-4]-OB3으로 이전에 목격되었던 것과 대조적으로, MA-[D-Leu-4]-OB3 단독이 공복 혈당 수준을 유의미하게 감소시킬 수 없었다는 관찰 결과에 의해 더욱 뒷받침된다. 연구의 시작 시점에서보다 14-일 시험 기간의 종결점에서 단지 1.2% 낮은 이들 수준은 내인성 인슐린 생산이 STZ 처리에 의해 심하게 손상되었다는 것을 확증한다.
본 데이터는 MA-[D-Leu-4]-OB3이 혈당 수준에 대한 이의 영향력을 발휘하기 위해, 인슐린의 존재에 대한 절대적인 의존을 반영한다. 이러한 결론은 MA-[D-Leu-4]-OB3 (0.25 mg/kg/일에서)이 외인성 인슐린과 합동으로 제공될 때, 연구의 첫 2 일 이내에 혈당 수준을 정상화할 수 있었다는 관찰 결과에 의해 더욱 뒷받침된다.
이러한 생쥐 모형에서 글루코오스 항상성에 대한 MA-[D-Leu-4]-OB3의 효력에 관하여, 비록 MA-[D-Leu-4]-OB3 및 메트포르민 둘 모두 외인성 인슐린과 합동으로 제공될 때 혈당을 정상적인 수준 이내로 감소시킬 수 있지만, MA-[D-Leu-4]-OB3의 용량이 메트포르민의 용량보다 20-배 낮았다는 사실 (각각, 10 mg/kg/일 대 200 mg/kg/일)은 특히 주목할 만하다. 상기 데이터는 MA-[D-Leu-4]-OB3이 인슐린-결함의 이러한 생쥐 모형에서 인슐린 감수성을 향상시키는데 있어서 질량 기초에서 메트포르민보다 20 배 효과적이고, 그리고 몰 기초에서 6.1 배 효과적이라는 것을 지시한다.
다른 구체예에서, 본 발명은 렙틴-관련된 펩티드에 접합된 시클로헥실발레로일, 아실-글루타밀, 라우로일, 2-숙시닐아미도 미리스트산, 2-숙시닐아미도에틸옥시 팔미트산, 미리스토일-α-글루타밀, 미리스토일-α-글루타밀-글리실, 콜로일, 7-데옥시콜로일, 리토콜로일, 리토콜로일-글루타밀, 4-벤조일-페닐알라닌, L-티록실, 수베로일-D-티록신, 3,3',5,5'-테트라요오도티로아세틸, 시클로헥실발레로일 중에서 한 가지를 포함하는 제약학적 화합물일 수 있다. 렙틴 관련된 펩티드는 AVPIQKVQDDTKTLI (서열 번호: 2); TKTLIKTIVTRINDI (서열 번호: 3); RINDISHTQSVSAKQ (서열 번호: 4); VSAKQRVTGLDFIPG (서열 번호: 5); DFIPGLHPILSLSKM (서열 번호: 6); SLSKMDQTLAVYQQV (서열 번호: 7); VYQQVLTSLPSQNVL (서열 번호: 8); SQNVLQIANDLENLR (서열 번호: 9); DLLHLLAFSKSCSLP (서열 번호: 10); SCSLPQTSGLQKPES (서열 번호: 11); QKPESLDGVLEASLY (서열 번호: 12); EASLYSTEVVALSRL (서열 번호: 13); ALSRLQGSLQDILQQ (서열 번호: 14); 또는 DILQQLDVSPEC (서열 번호: 15) 중에서 한 가지일 수 있다.
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1 5
Claims (16)
- 렙틴-관련된 펩티드에 접합된 미리스트산을 포함하는 제약학적 화합물.
- 청구항 1에 있어서, 미리스트산은 렙틴-관련된 펩티드의 N 말단에 부착된 것을 특징으로 하는 제약학적 화합물.
- 청구항 2에 있어서, 렙틴-관련된 펩티드는 OB3인 것을 특징으로 하는 제약학적 화합물.
- 청구항 3에 있어서, 렙틴-관련된 펩티드는 서열 번호: 16인 것을 특징으로 하는 제약학적 화합물.
- 청구항 4에 있어서, 렙틴-관련된 펩티드는 최소한 하나의 D-동종형 아미노산을 내포하는 것을 특징으로 하는 제약학적 화합물.
- 청구항 5에 있어서, 렙틴-관련된 펩티드는 Leu-4에서 D-치환된 것을 특징으로 하는 제약학적 화합물.
- 청구항 3에 있어서, 렙틴-관련된 펩티드는 서열 번호: 1인 것을 특징으로 하는 제약학적 화합물.
- 신체 질량의 항상성에 관련된 질환에 대해 개체를 치료하는 방법에 있어서, 렙틴-관련된 펩티드에 접합된 미리스트산의 분자의 제약학적 효과량을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 8에 있어서, 미리스트산은 렙틴-관련된 펩티드의 N 말단에 부착된 것을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 9에 있어서, 렙틴-관련된 펩티드는 OB-3인 것을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 10에 있어서, 렙틴-관련된 펩티드는 서열 번호: 1인 것을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 11에 있어서, 렙틴-관련된 펩티드는 최소한 하나의 D-동종형 아미노산을 내포하는 것을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 12에 있어서, 렙틴-관련된 펩티드는 Leu-4에서 D-치환된 것을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 10에 있어서, 렙틴-관련된 펩티드는 서열 번호: 16인 것을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 8에 있어서, 질환은 비만, 과혈당증, 고인슐린혈증, 과식증, 갑상선 기능장애, 불임 또는 당뇨병인 것을 특징으로 하는 방법.
- 청구항 15에 있어서, 질환은 영양실조, 기아, 신경성 식욕부진, 골다공증, 암, 당뇨병, 결핵, 만성 설사, AIDS, 그리고 위장간막 동맥 증후군인 것을 특징으로 하는 방법.
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