KR20170077145A - 미분화된 알껍데기 막 입자, 및 상처 치유를 촉진시키기 위한 이것의 용도 - Google Patents

미분화된 알껍데기 막 입자, 및 상처 치유를 촉진시키기 위한 이것의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20170077145A
KR20170077145A KR1020177011901A KR20177011901A KR20170077145A KR 20170077145 A KR20170077145 A KR 20170077145A KR 1020177011901 A KR1020177011901 A KR 1020177011901A KR 20177011901 A KR20177011901 A KR 20177011901A KR 20170077145 A KR20170077145 A KR 20170077145A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
wound
esm
particles
particle
mmp
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
KR1020177011901A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102683921B1 (ko
Inventor
랄프 슈미트
헨리-피에르 수소
엔다 케니
Original Assignee
바이오보텍 에이에스
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB1419183.7A external-priority patent/GB201419183D0/en
Priority claimed from GBGB1506504.8A external-priority patent/GB201506504D0/en
Priority claimed from GBGB1511476.2A external-priority patent/GB201511476D0/en
Application filed by 바이오보텍 에이에스 filed Critical 바이오보텍 에이에스
Publication of KR20170077145A publication Critical patent/KR20170077145A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102683921B1 publication Critical patent/KR102683921B1/ko
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/56—Materials from animals other than mammals
    • A61K35/57—Birds; Materials from birds, e.g. eggs, feathers, egg white, egg yolk or endothelium corneum gigeriae galli
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
    • A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
    • A61L15/40—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. plant or animal extracts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
    • A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
    • A61L15/42—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L15/60—Liquid-swellable gel-forming materials, e.g. super-absorbents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0009—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form containing macromolecular materials
    • A61L26/0023—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0057—Ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L26/00—Chemical aspects of, or use of materials for, wound dressings or bandages in liquid, gel or powder form
    • A61L26/0061—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L26/008—Hydrogels or hydrocolloids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L31/00—Materials for other surgical articles, e.g. stents, stent-grafts, shunts, surgical drapes, guide wires, materials for adhesion prevention, occluding devices, surgical gloves, tissue fixation devices
    • A61L31/005—Ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L31/00—Materials for other surgical articles, e.g. stents, stent-grafts, shunts, surgical drapes, guide wires, materials for adhesion prevention, occluding devices, surgical gloves, tissue fixation devices
    • A61L31/08—Materials for coatings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
    • C08L5/04—Alginic acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/30—Compounds of undetermined constitution extracted from natural sources, e.g. Aloe Vera
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/404—Biocides, antimicrobial agents, antiseptic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/41—Anti-inflammatory agents, e.g. NSAIDs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/412—Tissue-regenerating or healing or proliferative agents
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은, (i) 세포외 매트릭스(ECM) 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 부적절한 수준의 매트릭스-메탈로프로테나아제(MMP) 활성, 및/또는 (ii) 과도한 염증 반응의 위험이 있거나 이들이 존재하는 만성 상처의 치유를 촉진시키는데 사용되는, 미분화된 ESM으로 필수적으로 구성되고 100 μm 미만의 평균 입자 직경을 갖는 입자를 제공한다. 본 발명은 추가로, 상기 치료에 사용되는 미분화된 ESM-함유 입자를 포함하는 약제학적 조성물, 상처 드레싱 및 이식가능한 의료 기기를 제공한다. 본 발명은 더욱 추가로, 미분화된 ESM-함유 입자, 및 이 입자를 포함하는 조성물, 드레싱 및 이식가능한 의료 기기를 제조하는 방법을 제공한다.

Description

미분화된 알껍데기 막 입자, 및 상처 치유를 촉진시키기 위한 이것의 용도 {MICRONIZED EGGSHELL MEMBRANE PARTICLES AND THE USE THEREOF TO PROMOTE THE HEALING OF WOUNDS}
본 발명은 일반적으로 상처 치유를 촉진시키기 위한 상처 치료 분야에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은, 상처 내에 또는 상처 위에 제공되는 경우에, 상처 치유, 예컨대 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 부적절한 수준의 MMP 활성, 및/또는 과도한 염증 반응의 위험이 있거나 이들이 존재하는 만성 상처, 예컨대 화상의 치유를 촉진시키는데 특히 유리하게 하는 특정 특성들을 나타내는 것으로 확인된 알껍데기 막 (ESM) 마이크로입자 및 나노입자를 제공한다. 본 발명은 추가로 상기 치료에 사용하기 위한 미분화된 ESM 입자를 포함하는 약제학적 조성물, 상처 드레싱 및 이식가능한 의료 기기를 제공한다. 본 발명은 더욱 추가로 미분화된 ESM 입자를 제조하는 방법, 및 상기 입자를 포함하는 조성물, 드레싱 및 이식가능한 의료 기기를 제공한다.
상처, 즉 온전하거나 노출된 조직, 일반적으로는 피부 내 파열구(breach)는 인간 및 다른 동물의 삶에서 불가피하게 발생한다. 상처는 외과적으로, 물리적 손상 (예를 들면, 기계적 손상; 열 손상, 예를 들면 과도한 열 또는 냉기로부터 비롯된 것들; 전기적 손상, 예를 들면, 전위 공급원과의 접촉에 의해 초래된 것들; 및 예를 들면, 적외선, 자외선, 또는 이온화되는 방사선으로의 장기간의 광범위한 노출에 의해 초래된 방사선 손상)에 의해 또는 자발적으로 형성되는 병변, 예컨대 피부 궤양 (예를 들면, 정맥성, 당뇨 또는 압력 궤양), 항문 열구, 구강 궤양 및 심상성 여드름에 의해 발생될 수 있다.
의학 분야에서, 상처는 전형적으로 급성 또는 만성으로서 정의된다. 급성 상처는 지연된 시간과정 없이 지혈 후 치유 과정의 3개의 인지된 단계 (즉, 염증 단계, 증식 단계 및 개조 단계)를 통해 순서대로 진행되는 상처이다. 만성 상처는 치유될 수 없거나 화상을 통한 것과 같은 과도한 피부 손실이 있는 상처로서 정의된다. 그와 같은 상처는, 이 상처가 치유 단계 중 하나에서 멈춰지게 되기 때문에 치유 과정의 생화학적 사건의 정연한 순서를 완결하지 않는다. 일반적으로, 만성 상처는 염증 단계에서 멈춘다. 만성 상처는 환자에 대한 이환율의 주 원인이다.
상처 치유 치료의 주요 목표는 상처 난 조직의 외부 층, 예를 들면, 피부 상처의 맥락에서는 표피에 근접하게 하거나 이를 개량하여, 기저 조직의 혈액 손실 또는 감염을 예방하는 것이다. 상처입은 대상체의 자연 치유 과정에 크게 의존하는 치료가 이루어지는 급성 상처에 대해서는 비교적 간단할 수 있다. 그러나, 만성 상처의 경우에는, 그러한 치유 과정이 제대로 기능하지 않으며, 그래서 만성 상처 치료에서의 중요한 목표는 신체 반응을 증대 및 증강시키는 것이며, 손상되거나 파괴된 조직을 재생하도록 신체를 돕는 것이다.
통상의 상처 치유 치료는 지혈 단계, 즉 과량의 삼출물의 흡수, 및 피부 병변을 치유하면서 감염을 예방하는 멸균 장벽을 유지하는 것에 집중하고 있다. 통상의 제품은 또한 국소 약리학적 제품, 예컨대 항생제 및 스테로이드 크림을 제자리에(in situ) 유지하는 것을 도울 수 있고, 이러한 제품이 옷 등과의 접촉으로부터 짓물러지는 것을 방지할 수 있다. 발전된 상처 치유 제품은 이러한 특성을 공유할 뿐만 아니라, 이들의 주요 역할은 축축한 치유 환경을 유지하는 것이다. 최적의 상처 치유를 위해서는, 상처 베드(wound bed)가 축축하긴 하지만, 주변 피부 및 상처 베드의 짓무름을 초래할 정도로 과도하게 축축하지 않은 것이 중요하다. 발전된 상처 관리 제품은 또한 상처 치유를 돕는 약리학적 제품, 예컨대 항생제 또는 성장 인자를 함유할 수 있다.
그러나, 만성 상처의 발생에 대한 주 이유는 지혈 후의 상처 회복 주기에서의 불균형이며, 이러한 선행 기술에서의 방법은 그러한 다른 치유 단계 구체적으로, 즉 염증, 증식 및 조직 개조 (예를 들면, 재-상피화) 단계에 집중하고 있지 않다.
이와 같이, 상처 내 과도한 염증 반응을 다룰 수 있는 상처 치유 치료가 유리할 것이다. 더욱이, 최근에는 염증 단계 동안의 치유 과정에서의 불균형이 상처 베드 내에서 프로테아제, 예를 들면, MMP (예를 들면, MMP-2, MMP-8 및 MMP-9), 콜라게나아제, 엘라스타아제 및 플라스민의 과생성 및/또는 과활성을 초래할 수 있음이 밝혀졌다. 이는 상처 베드 내에서 새롭게 합성된 세포외 매트릭스 (ECM)의 파괴 및 내인적으로 생성된 성장 및 분화 인자의 파괴를 초래한다. 이 불균형은 자극성 성장 인자, 예컨대 RegranexTM (재조합 인간 PDGF)의 부가에 의해 해결될 수 있지만, 심지어 이 경우에도 외인성 PDGF가 프로테아제에 의해 신속하게 비활성화될 수 있다. 이것을 해결할 수 있는 또 하나의 방법은, 프로테아제에 우선적으로 결합하여 프로테아제가 ECM 구성성분 및 단백질 성장 인자, 예컨대 PDGF의 단백질분해로부터 회피되는 단백질 또는 다른 물질의 부가를 통한 것이다. 그와 같은 제품에는 콜라겐 기반 물질, 예컨대 PromogranTM 및 복합 ECM 기반 물질, 예컨대 돼지 소장 서브뮤코사 (OasisTM)가 포함된다. 그러나, 이러한 제품들은 포유동물 공급원, 대개는 소 또는 돼지로부터 유래되며, 특정한 바이러스 또는 TSE를 전달시킬 위험이 있다. 따라서, 비-포유동물 공급원이 바람직할 것이다.
프로테아제, 예를 들면, MMP에 의한 ECM의 개조가 또한 예를 들면, 신생물 (종양)에서의 혈관형성 과정, 및 악성 신생물의 전이 과정 동안에 관찰된다. 이러한 과정에서, 프로테아제는 성장하는 혈관 또는 신생물의 세포를 둘러싸는 ECM을 적어도 부분적으로 파괴하는 것으로 생각되며, 이에 의해 그와 같은 세포가 자유롭게 이동하여 새로운 위치에 성장 중인 혈관 또는 2차 악성 신생물의 벽을 형성할 수 있게 된다. 혈관형성은 정상적인 생리적 과정이지만, 성장 중인 신생물에서 상기 과정은 또한 신생물에 대한 모세관 혈액 네트워크를 제공하여 추가 성장을 가능케 하는데 이용된다. 이러한 생리적 환경에서 프로테아제를 억제할 수 있는 제제는 (특히 외과적 절제 후에) 신생물과 싸우고 전이를 억제할 가능성을 가질 것이다.
최근에는, 무손상(intact) 암탉 알껍데기 막 (ESM)이 손상된 피부 위에 무손상 막으로서 위치하는 경우에 상처 치유를 촉진시키는데 사용될 수 있음이 밝혀졌다 (Yang, J-Y et al. 2003. Chang Gung Med J).
ESM은 조류 알의 난백과 알껍데기 사이에서 확인된 복합적인 2층의 단백질 풍부 섬유상 구조이다. 연구로부터 그와 같은 막이 대략 90 중량%의 단백질 (예컨대, 콜라겐, 엘라스틴, 피브로넥틴 펩타이드 성장 인자, 오보트랜스페린, 리실 옥시다아제 및 리소자임) 및 데스모신, 이소데스모신 및 글리코사미노글리칸 (예를 들면, 더마탄 설페이트, 콘드로이틴 설페이트 및 히알루론산)을 함유함이 밝혀졌다. ESM은 다양한 기계적인 수단에 의해 알껍데기 및 알의 내부 성분으로부터 용이하게 분리되어, ESM의 본질적으로 순수한 조제물(preparation)이 생산될 수 있다.
피부 상처 위에 무손상 시트로서 위치하는 경우에, ESM은 반-투과성 막으로 기능하며, 수증기 전달을 허용하여 상처 베드 내 수분을 관리한다. 이것의 특성은 합성 물질, 예컨대 BiobraneTM과 유사하다. 그러나, 상처 치유 환경에서 사용하기에 적절한 크기의 무손상 ESM은 상업적으로 실행가능한 양으로 제조하기에는 어렵다. 무손상 ESM에서는 소형(manual) 조제물이 사용가능한 크기로 유지되어야 하고, 심지어 그 후에도 개별 막의 모자이크로 적용될 필요가 있을 것이다. 가공 동안, 민감한(delicate) 물질은 잔류하는 결합된 칼슘 및 관련된 난백 성분으로부터의 분리, 및 무균성 가공 또는 최종적인(terminal) 멸균화를 필요로 한다. 결과적으로, 그와 같은 맥락에서 의료 제품의 제조에 충분한 공정 및 품질 제어는 기술적으로 또는 경제적으로 실행가능하지 않다.
100-500 μm의 ESM 분말은 또한 국소 투여 경로를 통한 특정 상처의 치료를 위해 제안되었다 (WO 2004/080428). 이 제안에 대한 근거는 명확하지 않으며, 성공적인 치료 증거도 제시되어 있지 않다.
100-500 μm의 ESM 분말은 또한 전신, 특히 경구 투여 경로를 통해 관절염과 관련된 통증 및 염증, 및 다른 염증성 병태의 치료를 위해 제안되었다 (US 8580315).
더욱 작은 ESM 입자는 급성 피부 상처에 대한 치료에서의 사용에 대해 그리고 새로운 상처에 대한 대체용 피부 이식물로서 설명되고 제안되었다 (US 3196075 및 US 3194732). 만성 상처의 염증 단계에 대한 임의 효과는 개시되어 있지 않고 만성 상처 맥락에서의 용도도 제안되어 있지 않다.
100 μm 미만의 평균 입자 직경을 갖는 미분화된 ESM 입자가, (i) 특히 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 부적절한 수준의 매트릭스-메탈로프로테아제 (MMP) 활성; 및/또는 (ii) 상처 치유를 촉진시키기 위한 과도한 염증 반응의 위험이 있거나 이들이 존재하는 만성 상처, 예컨대 화상의 치료에서 상기 입자를 특히 유리하게 만드는 특수한 레퍼토리의 특성을 가짐이 현재 놀랍게도 발견되었다.
이러한 특성에는 (i) 예를 들면, ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대해 상처 내 MMP의 활성을 감소시킴으로써 상처 내 ECM 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자의 분해를 감소시키는 능력; (ii) 항-염증 효과; (iii) 항균 효과; (iv) 예를 들면, 상처 조직 세포에 대한 스캐폴드(scaffold)로 작용하는 능력을 통하여 그러한 세포의 상처 내로의 이동, 및/또는 그러한 세포의 증식 및/또는 분화를 촉진시킴으로써 새로운 조직의 형성을 촉진시키는 능력; (v) 축축한 치유 환경의 유지를 방해하지 않는 능력 및 (vi) 담체 매트릭스 (예를 들면, 하이드로겔 및 하이드로콜로이드 겔을 포함하는 겔 매트릭스) 내에서의 가공에 대한 순응성(amenability)이 포함된다.
따라서, 제1 측면에서는, (i) ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 부적절한 수준의 MMP 활성, 및/또는
(ii) 과도한 염증 반응의 위험이 있거나 이들이 존재하는 만성 상처의 치유를 촉진시키는 방법으로서, 미분화된 알껍데기 막 (ESM)으로 필수적으로 구성되며 100 μm 미만의 평균 입자 직경을 갖는 하나 이상의 입자가 상처 치유를 촉진시키기에 충분한 양으로 상기 상처에 적용되는, 방법이 제공된다.
대안적으로, 본 발명의 이 측면은, (i) ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 부적절한 수준의 MMP 활성, 및/또는
(ii) 과도한 염증 반응의 위험이 있거나 이들이 존재하는 만성 상처의 치유를 촉진시키는데 사용하기 위한, 미분화된 ESM으로 필수적으로 구성되며 100 μm 미만의 평균 입자 직경을 갖는 입자를 제공한다.
더욱 대안적으로, 본 발명의 이 측면은, (i) ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 부적절한 수준의 MMP 활성, 및/또는
(ii) 과도한 염증 반응의 위험이 있거나 이들이 존재하는 만성 상처의 치유를 촉진시키는데 사용하기 위한 약제의 제조에서, 미분화된 ESM으로 필수적으로 구성되며 100 μm 미만의 평균 입자 직경을 갖는 입자의 용도를 제공한다.
특정 구현예에서, 상처는, ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대하여 부적절한, 즉 과도한 수준의 MMP-2, MMP-8 및/또는 MMP-9 활성의 위험이 있거나 이들이 존재하는 상처이다. 다른 구현예에서, 상처는, 부적절한, 즉 과도한 수준의 전체 MMP 활성의 위험이 있거나 이것이 존재하는 상처이다. 다른 구현예에서, 상처는, 부적절한, 즉 과도한 수준의 ECM 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자 분해의 위험이 있거나 이것이 존재하는 상처이다. 이러한 특성을 갖는 상처는, ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자 분해를 측정하기 위한, 또는 일반적으로 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자 또는 상처 기질에 대한 전체의 또는 특정한 MMP 활성을 모니터하기 위한 상기 방법을 사용하여 확인될 수 있다.
특정 구현예에서, 목표(target) 상처는, 염증이 일어나게 될 위험이 있거나 염증이 있는 상처, 예를 들면, 면역 세포 (예를 들면, 대식세포, 단핵구, 비만 세포 및/또는 중성구) 및/또는 부적절한, 즉 과도한 수준의 염증-촉진성(pro-inflammatory) 표지자 (예를 들면, 본원에 개시된 것들) 및/또는 부적절한, 즉 불충분한 수준의 항-염증성 표지자 (예를 들면, 본원에 개시된 것들)를 함유하는 상처이다.
이하에서, 간결함 및 명료함을 위하여, "상처" 또는 "목표 상처"에 대한 언급은, 문맥이 구체적으로 다른 것을 설명하지 않으면 상기 언급된 만성 상처에 대한 언급이다.
상처 치유를 촉진시키는 것은, 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자를 사용한 상처의 치료가 당해 상처의 치유 과정 (즉, 치유 과정의 3개의 인지된 단계를 통한 상처의 진행)을 가속화시킴을 의미한다. 치유 과정의 가속화는 치유 단계 중 하나, 둘 또는 모두 (즉, 염증 단계, 증식 단계 및/또는 개조 단계)를 통한 진행 속도에서의 증가로 나타날 수 있다. 상처가 치유 단계 중 하나에서 멈추면, 가속화는 상기 멈춤 후 직선의 순차적인 치유 과정의 재개시로 나타날 수 있다. 말하자면, 치료는 상처를 비-치유 상태에서, 상처가 치유 단계를 통해 진행되기 시작하는 상태로 이동시킨다. 상기 재개시 후의 그러한 진행은, 정상적인 급성 상처가 치유될 속도와 비교하여 정상적인 속도 또는 심지어는 더욱 느린 속도에서 일어날 수 있다. 상처 치유의 촉진은 또한 당해 상처의 치유 과정의 감속을 방지하게 하는 것으로 간주될 수 있다. 치유 과정의 감속은 치유 단계 중 하나, 둘 또는 모두를 통한 진행 속도에서의 감소로 나타날 수 있다. 상처가 멈춤 후에 직선의 순차적인 치유 과정의 재개시인 경우에, 감속은 치유 단계 중 하나에서 멈춰지는 것에 대한 복귀로 나타날 수 있다. 말하자면, 본 치료는 상처가 치유 상태에서 비-치유 상태로 이동하는 것을 방지한다. 상처 치유의 촉진은 현존하는 상처를 치료하게 하거나, 현존하는 상처의 성장, 및/또는 현재 치유되고 있는 상처가 잘 치유되지 않거나 만성 상처가 되는 것을 방지하게 하는 것으로 추가로 간주될 수 있다.
치유를 촉진시키기 위해 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자(이 용어는 본원에서 "ESM 입자" 및 "ESM의 입자"와 번갈아 사용되고 있음)를 사용한 목표 상처의 치료는, ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 상처 내 MMP의 활성을 감소 또는 제한시킬 수 있다. 따라서, 본 발명은, ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 상처 내 MMP의 활성이 감소되거나 제한되는, 상처의 치유를 촉진시키는 방법으로서, 본원에서 정의된 하나 이상의 ESM 입자가 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 상처 내 MMP의 활성을 감소 또는 제한시키기에 충분한 양으로 상기 상처에 적용되는 방법을 포함하는 것으로 간주될 수 있다.
MMP-2 (72 kDa 유형 IV 콜라게나아제 또는 젤라티나아제 A로도 칭해짐), MMP-8 (중성구 콜라게나아제 또는 PMNL 콜라게나아제로도 칭해짐) 및/또는 MMP-9 (92 kDa 유형 IV 콜라게나아제, 92 kDa 젤라티나아제 또는 젤라티나아제 B로도 칭해짐)는 상처, 특히 만성 상처에서 공통적으로 확인되며, 바람직한 구현예에서는 구체적으로 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 이러한 MPP의 활성이 감소된다.
특정 구현예에서, ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 상처 내 MMP의 활성은, 치료가 이루어지고 있는 상처의 치유 과정에 불리하지 않은 수준으로 감소되거나 제한된다. 이러한 감소는 상처 (또는 상처 분비액(fluid)) 내 ECM 단백질 (예를 들면, 콜라겐 및 엘라스틴) 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자 단편의 수준에서의 감소로 관찰될 수 있는데, 상기 감소는 차례로 이러한 단백질 분해의 지표이며, 면역조직화학/면역세포화학 기술 및/또는 생체분자 (예를 들면, 단백질) 염색제 및 염료를 포함하는 일반적인 기술에 의해, 또는 크로마토그래피 기술을 사용한 상처 분비액의 분석에 의해 검출될 수 있다. 제한은 그러한 수준의 유지로서 관찰될 수 있다.
각각의 상처는 상이한 (예를 들면, 감소된) 수준의, ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 MMP 활성을 필요로 할 것이며, 심지어는 시간 경과에 따라 이러한 측면에서의 동일한 상처의 요건은 상이할 수 있다. 필요한 경우에 이것은 과도한 부담없이 당업자에 의해 결정될 수 있지만, 본원에 개시된 미분화된 ESM-함유 입자의 중요한 이점은 효과적인 수준의 MMP 억제를 달성하기가 비교적 용이하며 그와 같은 번거로운 용량(dose) 최적화가 일반적으로 필요하지 않다는 것이다. 참으로, 대부분의 경우에, 본원에서 정의된 ESM 입자에 의해 초래된 MMP 활성에서의 임의 감소는 상처 치유를 촉진시키는데 효과적일 것이다.
수치로 표시하면, 본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM-함유 입자를 치료 중인 상처에 적용한 후에, 상처 내 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자 (또는 전체 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자 분해)에 대한 MMP 활성은 바람직하게는 적어도 5%, 예를 들면, 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%까지 감소될 것이다. 특정 구현예에서는, ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자 (또는 전체 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자 분해)에 대한 MMP 활성의 일부 수준을 유지하는 것이 필요할 수 있고, 그와 같은 구현예에서 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자 (또는 전체 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자 분해)에 대한 MMP 활성에서의 감소는 최대 90%, 예를 들면, 최대 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 또는 5% 이다. 이러한 값 중 임의 것의 조합으로부터 유도될 수 있는 임의의 및 모든 범위 종점이 구체적으로 고려된다.
이론에 구속시키고자 하는 것은 아니지만, ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자 (또는 전체 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자 분해)에 대한 MMP 활성에서의 감소 또는 제한은 다수의 메커니즘 때문일 수 있다. 이것에는 상처 MMP의 직접적인 억제, 상처 MMP의 흡수 및 비활성화, 대체되는/과량의 기질을 제공함에 의한 상처 MMP의 적정(titrating out), 상처 MMP 활성화에 관련된 효소 (예를 들면, 세린 프로테아제, 예컨대 플라스민, 중성구 엘라스타아제 및 비만 세포 키마아제) 억제, 상처 세포 및/또는 염증 세포, 예를 들면, 단핵구, 대식세포, 중성구 및 비만 세포에 의해 MMP의 발현 및/또는 분비를 억제하는 상처 내 MMP의 내인성 억제제 (예를 들면, TIMP; 메탈로프로테나아제의 조직 억제제)의 상향조절이 포함될 수 있지만, 이것들로 제한되지 않는다. 당업자는 일반적인 분석 기술 (이들 중 일부는 상업적으로 입수가능함)을 사용하여 과도한 부담없이 상처 내에서 그와 같은 효과를 측정할 수 있을 것이다. 상기 인용된 감소 백분율이 이러한 맥락에서 적용된다.
ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 MMP 활성에서의 감소 또는 제한은, 치료 중인 상처 내 전체 MMP 활성에서의 감소 또는 유지로서 나타날 수 있다. 전체 MMP 활성은 모든 상처 기질에 대한 모든 MMP 활성의 측정치이다. 전체 MMP 활성은 일반적인 분석 기술 (이들 중 일부는 상업적으로 입수가능함)을 사용하여 과도한 부담없이 측정될 수 있다. 수치로 표시하면, 본 발명에서 사용된 ESM 입자를 치료 중인 상처에 적용한 후에 상처 내 전체 MMP 활성은 바람직하게는 적어도 5%, 예를 들면, 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%까지 감소될 것이다.
특정 구현예에서는, 전체 MMP 활성, 및 특히 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 MMP 활성의 일부 수준을 유지하는 것이 필요할 수 있고, 그와 같은 구현예에서 전체 MMP 활성, 및 특히 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 MMP 활성에서의 감소는 최대 90%, 예를 들면, 최대 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 또는 5%이다. 이러한 값 중 임의 것으로부터 유도될 수 있는 범위 종점의 임의의 및 모든 조합이 구체적으로 고려된다.
다른 구현예에서는, 특수한 MMP, 예를 들면, MMP-2, MMP-8 및/또는 MMP-9의 전체 활성이 고려된다. 이러한 구현예에서, 전체 MMP 활성은 모든 상처 기질에 대한 당해 특정한 MMP의 활성이다.
한 구현예에서, 본 발명의 방법은, 대상체가 부적절한, 즉 과도한 수준의, ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 MMP 활성 (또는 전체 수준의 MMP 활성)의 위험이 있거나, 감소 또는 제한된 (예를 들면, 유지된), ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 MMP 활성 (또는 전체 수준의 MMP 활성)을 갖는 것으로부터 이로움을 얻을 상처를 갖는 것으로 진단될 것인 단계를 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 본 발명의 방법은, 대상체가 부적절한, 즉 과도한 수준의 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자 분해의 위험이 있는 상처를 갖는 것으로 진단될 단계를 포함할 수 있다.
추가 구현예에서, 본 발명의 방법은, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자를 상처에 적용한 후에, ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자의 분해가 모니터되고/되거나, ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 MMP 활성이 모니터되고/되거나 전체 MMP 활성이 모니터되는 단계를 포함할 수 있다. 다른 구현예에서는, MMP-2, 8 및/또는 9가 일반적으로 MMP 대신에 고려된다. 대안적으로 또는 부가적으로, 본 발명의 방법은, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자를 상처에 적용한 후에, 상처의 임상 지표 (예를 들면, 상처 크기 (깊이 및/또는 면적), 치유 시간, 상처 또는 주변 조직에서의 일반적인 불편감 또는 통증)가 모니터되는 단계를 포함할 수 있다. 이러한 모니터링 단계는, 본 발명에서 사용된 ESM 입자를 상처에 적용하기 직전 또는 심지어 대상체 치료에서 더 이른 또 하나의 시점에 동일한 측정치(metric)와 비교하는 것을 포함할 수 있다.
이러한 측면에서, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자의 "충분한 (또는 효과적인) 양"은, MMP 활성에 대한 효과 및 상기 ECM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자의 분해 효과를 초래하여, 상처의 치유를 촉진시키는 본원에서 정의된 그러한 ESM 입자의 양이다. 당업자는, 일반적인 용량 반응 프로토콜 및, 편리하게는 상기 논의되고 실시예 3에 예시된 MMP 활성, 및 ESM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자의 분해를 평가하는 일반적인 기술을 토대로 ESM 입자의 효과적인 (충분한) 양이 무엇일지를 용이하게 측정할 수 있을 것이다.
치유를 촉진시키기 위한 본원에서 정의된 ESM 입자를 사용한 목표 상처의 치료는, 상처 내 염증을 감소 또는 제한할 수 있거나, 또한 감소 또는 제한할 수 있다. 따라서, 본 발명은, 상처 내 염증이 감소 또는 제한되거나, 또한 감소 또는 제한되는 상처의 치유를 촉진시키는 방법으로서, 본원에서 정의된 ESM 입자가 상처 내 염증을 감소 또는 제한시키기에 충분한 양으로 상기 상처에 적용되는 방법을 포함하는 것으로 간주될 수 있다.
상처 내 염증은 홍반, 팽창, 국소 열감, 부종 및/또는 고름으로서 확인될 수 있다. 염증의 하나 이상의 이러한 징후의 해부학적 범위 및/또는 세기에서의 감소는 염증에서의 감소를 초래한다. 염증의 하나 이상의 이러한 징후의 해부학적 범위 및/또는 세기에서의 증가를 유지 또는 억제하는 것은 염증에서의 제한을 초래한다.
대안적으로 또는 부가적으로, 상처 내 염증-촉진성(pro-inflammatory) 및/또는 항-염증성 표지자, 예를 들면, 사이토킨 및 케모킨, 및/또는 면역 세포의 수준 또는 활성은, 예를 들면, 상처 조직 샘플에서 및/또는 상처 내부로부터의 샘플에서 측정될 수 있다. 더 구체적으로, TNFα, IL-1, IL-6, NF-κB, ROS, 히스타민, 대식세포, 단핵구, 비만 세포 및/또는 중성구의 수준 또는 활성이 측정될 수 있다. 이는 예를 들면, 상처 샘플의 면역검정 또는 유동 세포계측법, 또는 적합한 활성 검정에 의해 수행될 수 있다.
상처 샘플 내 하나 이상의 염증-촉진성 표지자 및/또는 면역 세포의 수준 또는 활성에서의 감소는 상처 내 염증을 감소시키는 것으로 간주될 수 있다. 유사하게, 상처 샘플 내 하나 이상의 항-염증성 표지자의 수준 또는 활성에서의 증가는 상처 내 염증을 감소시키는 것으로 간주될 수 있다. 하나 이상의 염증-촉진성 표지자 및/또는 면역 세포의 수준 또는 활성에서의 증가를 유지 또는 억제하는 것, 또는 상처 샘플 내 하나 이상의 항-염증성 표지자의 수준 또는 활성에서의 감소를 유지 또는 억제하는 것은 상처 내 염증을 제한시키는 것으로 간주될 수 있다.
이 측면에서, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자의 "충분한 (또는 효과적인) 양"은, 상기 상처 내 염증에 대한 효과, 특히 염증-촉진성 및/또는 항-염증성 표지자 수준 또는 활성 및/또는 면역 세포 수준 또는 활성에 대한 효과를 나타내어, 상처의 치유를 추가로 촉진시키는 ESM 입자의 그러한 양이다. 당업자는, 일반적인 용량 반응 프로토콜 및, 편리하게는 상기 논의되고 실시예 2에 예시된 상처 염증을 평가하는 일반적인 기술을 토대로 ESM 입자의 효과적인 (충분한) 양이 무엇일지를 용이하게 측정할 수 있을 것이다.
한 구현예에서, 본 발명의 방법은, 대상체가, 염증이 발생될 위험이 있거나 또한 있거나 상처 내 치료된 (즉, 감소되거나 제한된) 염증을 갖는 것으로부터 이로움을 얻을 상처를 갖는 것으로 진단될 단계를 포함함 수 있다.
추가 구현예에서, 본 발명의 방법은, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자를 상처에 적용한 후에, 상처 내 염증의 정도가 모니터되는 단계를 포함할 수 있다. 이러한 모니터링 단계는, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자를 상처에 적용하기 직전에 또는 심지어는 대상체의 치료에서 더 이른 또 하나의 시점에서 동일한 측정치와 비교하는 것을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자는 95 μm 미만, 예를 들면, 90 μm 미만, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 5, 또는 1 μm, 예를 들면, 900 nm 미만, 850, 800, 750, 700, 650, 600, 550, 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 50, 10, 5 또는 1 nm의 평균 입자 직경을 갖는다.
특정 구현예에서, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자는 또한 적어도 1 nm, 예를 들면, 적어도 5, 10, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900 또는 950 nm, 또는 적어도 1 μm, 예를 들면, 적어도 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 또는 95 μm의 평균 입자 직경을 갖는다. 이러한 값 중 임의 것의 조합으로부터 유도될 수 있는 임의의 및 모든 범위 종점이 구체적으로 고려된다.
상기 입자는 임의의 3차원 형태일 수 있다. 이것은 본질적으로 대칭 또는 비대칭일 수 있다. 이것은 본질적으로 구형, 각뿔대 모양 또는 원통형일 수 있다. 이것은 본질적으로 불규칙적 또는 규칙적일 수 있거나 이 둘 모두의 영역을 가질 수 있다. 이것은 각지거나 둥글거나 끝이 가늘어지거나 이러한 영역을 가질 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 입자는 나머지 것들보다 현격하게 더 큰 하나의 길이 치수를 가져서, 예를 들면, 막대 형상, 바늘 형상 또는 섬유상 (막대, 바늘 또는 섬유)으로 칭해질 수 있고, 현격하게 더 큰 길이의 치수에 대해 실질적으로 수직인 단면 형태에 따라 원통형 또는 각뿔대 모양 (예를 들면, 입방형)으로 불려질 수 있다.
특정 구현예에서, 본 발명에서 사용되는 입자는 적어도 1.5 (제1 길이 치수: 제2 길이 치수), 예를 들면, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 80, 90 또는 100의, 제1 길이 치수와 이것에 대해 수직으로 배열된 제2 길이 치수 사이의 종횡 비(aspect ratio)를 갖는다. 다른 구현예에서, 본 발명에서 사용되는 입자는 2 이하 (제1 길이 치수:제2 길이 치수), 예를 들면, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 80, 90 또는 100 이하의, 제1 길이 치수와 이것에 대해 실질적으로 수직으로 배열된 제2 길이 치수 사이의 종횡 비를 갖는다. 이러한 값 중 임의 것의 조합으로부터 유도될 수 있는 임의의 및 모든 범위 종점이 구체적으로 고려되며, 예를 들면, 본 발명에서 사용되는 입자는 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 중 임의 것:20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 또는 70 중 임의 것의 종횡 비를 가질 수 있다.
이러한 구현예에서, 제1 길이 치수는 입자 내 최장 길이 치수이며, 세로방향 치수로 칭해질 수 있다. 따라서 제2 길이 치수는 가로방향(lateral) 치수로 칭해질 수 있다. 제2 길이 치수는 예를 들면, 세로방향 치수의 길이를 따라 측정된, 입자의 최장 가로방향 치수이거나 가로방향 치수의 평균 값이다.
특정 구현예에서, 길이방향 치수는 0.1 μm 내지 500 μm, 예를 들면, 0.1 μm 내지 400 μm, 0.1 μm 내지 300 μm, 0.1 μm 내지 200 μm, 0.1 μm 내지 100 μm, 0.1 μm 내지 80 μm, 0.1 μm 내지 60 μm, 0.1 μm 내지 40 μm, 0.1 μm 내지 20 μm, 0.1 μm 내지 10 μm, 0.1 μm 내지 1 μm, 0.1 μm 내지 0.5 μm, 0.5 μm 내지 500 μm, 0.5 μm 내지 400 μm, 0.5 μm 내지 300 μm, 0.5 μm 내지 200 μm, 0.5 μm 내지 100 μm, 0.5 μm 내지 80 μm, 0.5 μm 내지 60 μm, 0.5 μm 내지 40 μm, 0.5 μm 내지 20 μm, 0.5 μm 내지 10 μm, 0.5 μm 내지 1 μm, 1 μm 내지 500 μm, 1 μm 내지 400 μm, 1 μm 내지 300 μm, 1 μm 내지 200 μm, 1 μm 내지 100 μm, 1 μm 내지 80 μm, 1 μm 내지 60 μm, 1 μm 내지 40 μm, 1 μm 내지 20 μm, 1 μm 내지 10 μm, 10 μm 내지 500 μm, 10 μm 내지 400 μm, 10 μm 내지 300 μm, 10 μm 내지 200 μm, 10 μm 내지 100 μm, 10 μm 내지 80 μm, 10 μm 내지 60 μm, 10 μm 내지 40 μm, 10 μm 내지 20 μm, 20 μm 내지 500 μm, 20 μm 내지 400 μm, 20 μm 내지 300 μm, 20 μm 내지 200 μm, 20 μm 내지 100 μm, 20 μm 내지 80 μm, 20 μm 내지 60 μm, 20 μm 내지 40 μm, 40 μm 내지 500 μm, 40 μm 내지 400 μm, 40 μm 내지 300 μm, 40 μm 내지 200 μm, 40 μm 내지 100 μm, 40 μm 내지 80 μm, 40 μm 내지 60 μm, 60 μm 내지 500 μm, 60 μm 내지 400 μm, 60 μm 내지 300 μm, 60 μm 내지 200 μm, 60 μm 내지 100 μm, 60 μm 내지 80 μm, 80 μm 내지 500 μm, 80 μm 내지 400 μm, 80 μm 내지 300 μm, 80 μm 내지 200 μm, 80 μm 내지 100 μm, 100 μm 내지 500 μm, 100 μm 내지 400 μm, 100 μm 내지 300 μm, 100 μm 내지 200 μm, 200 μm 내지 500 μm, 200 μm 내지 400 μm, 200 μm 내지 300 μm, 300 μm 내지 500 μm, 300 μm 내지 400 μm 또는 400 μm 내지 500 μm이다.
특정 구현예에서, 가로방향 치수, 또는 이것의 평균은 0.01 μm 내지 20 μm, 예를 들면, 0.01 μm 내지 16 μm, 0.01 μm 내지 12 μm, 0.01 μm 내지 8 μm, 0.01 μm 내지 4 μm, 0.01 μm 내지 2 μm, 0.01 μm 내지 1.6 μm, 0.01 μm 내지 1.2 μm, 0.01 μm 내지 0.8 μm, 0.01 μm 내지 0.4 μm, 0.01 μm 내지 0.2 μm, 0.01 μm 내지 0.1 μm, 0.01 μm 내지 0.05 μm¸ 0.05 μm 내지 20 μm, 0.05 μm 내지 16 μm, 0.05 μm 내지 12 μm, 0.05 μm 내지 8 μm, 0.05 μm 내지 4 μm, 0.05 μm 내지 2 μm, 0.05 μm 내지 1.6 μm, 0.05 μm 내지 1.2 μm, 0.05 μm 내지 0.8 μm, 0.05 μm 내지 0.4 μm, 0.05 μm 내지 0.2 μm, 0.05 μm 내지 0.1 μm, 0.1 μm 내지 20 μm, 0.1 μm 내지 16 μm, 0.1 μm 내지 12 μm, 0.1 μm 내지 8 μm, 0.1 μm 내지 4 μm, 0.1 μm 내지 2 μm, 0.1 μm 내지 1.6 μm, 0.1 μm 내지 1.2 μm, 0.1 μm 내지 0.8 μm, 0.1 μm 내지 0.4 μm, 0.1 μm 내지 0.2 μm, 0.2 μm 내지 20 μm, 0.2 μm 내지 16 μm, 0.2 μm 내지 12 μm, 0.2 μm 내지 8 μm, 0.2 μm 내지 4 μm, 0.2 μm 내지 2 μm, 0.2 μm 내지 1.6 μm, 0.2 μm 내지 1.2 μm, 0.2 μm 내지 0.8 μm, 0.2 μm 내지 0.4 μm, 0.4 μm 내지 20 μm, 0.4 μm 내지 16 μm, 0.4 μm 내지 12 μm, 0.4 μm 내지 8 μm, 0.4 μm 내지 4 μm, 0.4 μm 내지 2 μm, 0.4 μm 내지 1.6 μm, 0.4 μm 내지 1.2 μm, 0.4 μm 내지 0.8 μm, 0.8 μm 내지 20 μm, 0.8 μm 내지 16 μm, 0.8 μm 내지 12 μm, 0.8 μm 내지 8 μm, 0.8 μm 내지 4 μm, 0.8 μm 내지 2 μm, 0.8 μm 내지 1.6 μm, 0.8 μm 내지 1.2 μm, 1.2 μm 내지 20 μm, 1.2 μm 내지 16 μm, 1.2 μm 내지 12 μm, 1.2 μm 내지 8 μm, 1.2 μm 내지 4 μm, 1.2 μm 내지 2 μm, 1.2 μm 내지 1.6 μm, 1.6 μm 내지 20 μm, 1.6 μm 내지 16 μm, 1.6 μm 내지 12 μm, 1.6 μm 내지 8 μm, 1.6 μm 내지 4 μm, 1.6 μm 내지 2 μm, 2 μm 내지 20 μm, 2 μm 내지 16 μm, 2 μm 내지 12 μm, 2 μm 내지 8 μm, 2 μm 내지 4 μm, 4 μm 내지 20 μm, 4 μm 내지 16 μm, 4 μm 내지 12 μm 또는 4 μm 내지 8 μm이다.
특히 임의의 및 모든 종횡 비, 및 그 범위와 함께, 상기 개시된 세로방향 및 가로방향 치수, 및 그 범위의 임의의 및 모든 조합이 구체적으로 고려된다. 전술된 측면에서, 본 발명에서 사용되는 특정 입자는 막대, 바늘 또는 섬유 형상인 것으로 관찰될 수 있다.
입자 형태에 대한 본 발명의 일반론의 측면에서, 실질적으로, 예를 들면, 본질적으로 구형이 아닌 입자의 맥락에서, 따라서 입자 직경에 대한 언급은 대등한 구형 직경에 대한 언급이다. 이러한 구현예에서, 입자는, 사용된 입자 크기 측정 기술로 상기 직경의 동일한 물질 조성으로 된 구체와 동일한 크기 판독치를 나타낼 크기 치수에 의해서 정의된 형태를 갖는다. 특정 구현예에서, 사용된 크기 치수는 용적 또는 표면적, 바람직하게는 용적이다.
평균 직경, 또는 대등한 구형 직경은 임의의 편리한 수단, 예를 들면, 저항성 펄스/콜터(Coulter) 방법, 침전 (중력 또는 원심분리), 광학적 이미지화 (예를 들면, SEM, 정적 이미지 분석, 동적 이미지 분석), 레이저 회절 또는 광 산란에 의해 평가될 수 있지만, 본 발명의 목적상 조정가능한 저항성 펄스 센싱(Tunable Resistive Pulse Sensing) 형태의 콜터 방법 또는 광학적 수단이 입자 크기를 측정하는데 사용되어야 한다.
ESM은, 조류 알, 예를 들면, 닭 (투계/땅닭(landfowl) (닭목) 및 물새 (기러기목)) 및 가금류, 특히 닭, 오리, 거위, 칠면조, 뿔닭, 타조, 비둘기, 꿩, 자고새, 뇌조 또는 갈매기 알의 난백과 알껍데기 사이의, 알에서 확인된 섬유상 이중층이다. 사육용 닭 (Gallus gallus domesticus)의 알이 특히 바람직하다. 이중층 중 하나 또는 둘 모두의 층이 본 발명에 따라 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 입자는 미분화된 형태의 그와 같은 막으로 필수적으로 구성된다. "필수적으로 구성되는"은, 입자가 적어도 80% w/w 미분화된 ESM, 예를 들면, 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 99.9% w/w 미분화된 ESM를 함유함을 의미한다. 특정 구현예에서, 입자는 미분화된 ESM으로 구성된다. 이러한 구현예에서, 수분, 즉 물은 w/w의 계산에 포함되지 않는데, 즉 계산은 물이 아닌 성분을 기준으로 한다. 그러나, 입자는 약간의 수분을 여전히 함유할 수 있는데, 예를 들면, 입자 총 질량의 최대 20%, 15%, 10%, 5% 또는 1%가 물 분자에 의해 구성될 수 있다. 미분화된 ESM의 개별 입자는 임의 형상, 예를 들면 상기 형상을 지닐 수 있다. 미분화된 ESM의 형상은 본 발명에서 사용되는 입자의 형상과 동일하거나 상이할 수 있다. 복수의 미분화된 ESM 입자가 존재하는 경우에, 이들의 형상은 본질적으로 동일 (즉, 본 발명에서 사용되는 입자 내 미분화된 ESM의 형상은 본질적으로 균일)할 수 있거나 상이 (불균일)할 수 있다. 특정 구현예에서, 본 발명에서 사용되는 입자 내 미분화된 ESM의 입자는 섬유, 막대 또는 바늘 형상이다.
상기 정의에 의해 허용된 범위까지, 본 발명에서 사용되는 입자는 비-ESM 물질, 예를 들면, 본원에 개시된 부형제 또는 추가 치료제를 추가로 함유할 수 있다. 바람직하게는, 상기 입자는 본질적으로 (ESM과 비교하여 "오염" 물질로 간주될 수 있는) 다른 (비-ESM) 알 성분, 예를 들면, 난백, 난황, 및/또는 알 껍데기 (탄산칼슘)를 함유하지 않는다. "본질적으로 함유하지 않는"은, 입자가 최대 5% w/w, 예를 들면, 최대 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1%, 0.05% 또는 0.01% w/w의 비-ESM 알 성분을 함유함을 의미한다.
특정 구현예에서, ESM 성분의 입자는 단일의 미분화된 ESM 입자, 특히 섬유, 막대 또는 바늘 형상의 미분화된 ESM이다.
높은 종횡 비를 가지며, 예를 들면, 섬유, 막대 또는 바늘 형상이고 상기 크기 (크기에 따라 본원에서 마이크로-섬유, 마이크로-막대 및 마이크로-바늘, 또는 나노-섬유, 나노-막대 및 나노-바늘로 번갈아 칭해질 수 있음)의 미분화된 ESM 입자는, 적어도 본원에 기재된 의학적 치료의 맥락에서 다른 형태의 ESM (예를 들면, WO 2004/080428의 것들)에 비하여 특정의 물리적 이점을 가질 것으로 생각된다. 특히, 그와 같은 배열은 특히 상처 치유, 및 조직 공학(engineering) 드레싱/스캐폴드의 맥락에서 이상적인 수준의 표면적, 재편성(turnover) 속도, 습윤성, 수분 보유, 퍼짐성 및 특히, MMP 억제를 제공할 수 있는 것으로 생각된다.
특정 구현예에서, 본 발명에서 사용되는 입자는 실질적으로 예를 들면, 본질적으로 구형이 아니며, 즉 1.5 미만, 예를 들면, 1.4, 1.3, 1.2 또는 1.1의 상기 정의된 종횡 비를 갖는 입자가 아니다. 다른 구현예에서, 본 발명에서 사용되는 입자는 구체가 아니며, 즉 1의, 상기 정의된 종횡 비를 갖는 입자가 아니다.
추가 측면에서는, 미분화된 알껍데기 막 (ESM)으로 필수적으로 구성되는 입자로서, 상기 입자가 100 μm 미만의 평균 입자 직경을 갖는 입자가 제공된다.
본 발명에서 사용되는 입자의 ESM은 임의의 편리한 수단에 의해 다른 알 성분으로부터 분리될 수 있다. ESM이 분리될 수 있는 알은 멸균화되거나 멸균화되지 않을 수 있다. 알은 무손상일 수, 즉 부화 전일 수 있거나, 비어있을 수, 즉 부화 후, 또는 알 성분 (난백 및 난황) 추출 후의 알 잔여물일 수 있다. 적합한 수단은 예를 들면, WO 2004/080428 및 US 8580315에 기재되어 있고, 상기 특허의 내용은 본원에 참고로 편입된다. 바람직하게는, ESM은 WO 2015/058790 (PCT/EP2013/072049)에 개시된 상업적인 알 가공 플랜트에서 알껍데기 막을 인라인(in-line)으로 수확하는 방법에 의해 제조되며, 상기 특허의 내용은 본원에 참고로 편입된다. WO 2015/058790에는, 알 깨뜨림 유닛으로부터 흘러나오며 알껍데기 부분 뿐만 아니라 막 부분을 포함하는 알껍데기 잔여물 가공 방법으로서, 상기 알 깨뜨림 유닛으로부터 (예를 들면, 약 0.5 mm 내지 약 40 mm의 입자 크기, 및 약 3% 내지 약 40%의 습량 기준의 수분 함량을 갖는) 알껍데기 잔여물을, 약 85℃ 미만 (바람직하게는 약 60℃ 미만)의 온도를 가지며 약 60m/s를 초과하는 (바람직하게는 약 70 m/s 내지 약 340 m/s) 속도를 갖는 공정 기체에 의해 구동된 사이클론 내로 공급하는 것을 포함하는 가공 방법이 제공되어 있다. 상기 사이클론 내에서, 알껍데기 잔여물의 보텍스(vortex) 가공에 의해 입자 크기가 감소되고 상기 알껍데기 부분의 상기 막 부분이 박리되어, 상기 알껍데기 부분이 상기 막 부분으로부터 분리되게 된다. 상기 사이클론의 최상부 출구를 통하여, 주로 공정 기체, 증기 및 소적(droplet)으로 된 혼합물이 방출되고, 상기 사이클론의 최하부 출구를 통하여 주로 분류된 알껍데기 부분과 막 부분의 혼합물이 방출된다. 그 후, 상기 방출된 혼합물은 분리 장치에서 알껍데기 부분 일부 및 막 부분 일부로 분리된다. 그 후, 수득한 ESM 부분은 바람직하게는 개재되는 단계 없이 본원에 기재된 ESM 입자로 추가로 가공될 수 있다.
특정 구현예에서, ESM 제조 방법은, 총 공정 기체 공급 속도에 대하여 알껍데기 잔여물 공급 속도를 예를 들면, 약 0.5s 내지 약 20s 및 바람직하게는 약 1s 내지 약 5s의 간격으로 조정함으로써, 알껍데기 잔여물을 상기 사이클론 내로 공급하는 것과 상기 혼합물을 상기 사이클론으로부터 방출시키는 것 사이의 시간을 조절하는 추가 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 방법은, 알껍데기 잔여물을 상기 사이클론 내로 공급하기 전에 알껍데기 잔여물을 원심분리시키는 단계를 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 상기 공급 단계는 연속적이다. 다른 구현예에서, 분류 단계는 상기 막 부분 일부를 분류용 스크린 및 분류 장치로부터 공압식으로 배출하는 것을 포함한다. 상기 방법은 또한 막 부분 일부를 건조시키는 최종 단계를 포함할 수 있다.
약 1 mm2 내지 약 10 mm2의 크기 범위 내 플레이크 형태의 ESM 물질은 무손상 ESM과 같은 특징을 갖는 시트로 개량되거나 가공될 수 없다. 그러나, 본 발명은 그와 같은 물질을 상처 표면으로 제공하고 상처 치유를 촉진시키는 수단을 제공한다.
특정 구현예에서, 본 발명에서 사용되는 입자의 ESM (또는 적어도 그 단백질 성분)은 실질적으로 껍데기-막 분리 공정으로부터 얻어진 것일 것이다. 말하자면, 본 발명에서 사용되는 입자의 ESM은 상응하는 조류 공급원으로부터의 천연 ESM과 비교하여 실질적으로 화학적으로 개질되지 않을 것이다.
더 구체적으로, 본 발명에서 사용되는 입자의 ESM은 상응하는 조류 공급원으로부터의 천연 ESM과 비교하여 화학적으로 실질적으로 분해되지 않으며, (예를 들면, 화학적으로 또는 효소적으로) 소화되지 않고/않거나 변성되지 않을 것이다. "실질적으로 분해되지 않음"은, ESM 성분의 20% 미만, 예를 들면, 15% 미만, 10%, 5% 또는 1%가 상응하는 조류 공급원으로부터의 천연 ESM과 비교하여 분해의 증거를 보일 것임을 의미한다. 소화되지 않음 및 변성되지 않음도 그에 따라 해석되어야 한다. ESM의 분해/소화/변성 정도는, ESM의 상대적 용해도 및/또는 ESM 내 콜라겐 섬유의 상대적 크기 또는 구조를 측정함에 의해서 평가될 수 있다. 이는 면역조직화학/면역세포화학 기술 및/또는 생체분자 (예를 들면, 단백질) 염색제 및 염료를 포함하는 일반적인 기술을 통하여 성취될 수 있다.
특히, 본 발명에서 사용되는 입자의 ESM은, 가수분해 반응 또는 이황화물 결합 환원 반응, 예를 들면, 화학적 또는 효소적, 특히 알칼리성 가수분해 반응에 노출되지 않을 것이다. 말하자면, 본 발명에서 사용되는 입자의 ESM은 실질적으로 가수분해되지 않을 것인데, 이는 ESM 성분의 20% 미만, 예를 들면, 15% 미만, 10%, 5% 또는 1%가 상응하는 조류 공급원으로부터의 천연 ESM과 비교하여 가수분해의 증거를 보일 것임을 의미한다. ESM의 가수분해 정도는, ESM의 상대적 용해도 및/또는 ESM 내 콜라겐 섬유의 상대적 크기 및/또는 콜라겐 가교결합 정도를 측정함에 의해서 평가될 수 있다. 이는 면역조직화학/면역세포화학 기술 및/또는 단백질 염색제 및 염료를 포함하는 일반적인 기술을 통하여 성취될 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명에서 사용되는 입자의 ESM은 실질적으로, 예를 들면, 본질적으로 중성 pH, 예를 들면, pH 6.8-7.2에서 물에 불용성일 것이다. 본 발명의 목적상, 불용성 물질은 1 g의 용질을 용해시키는데 10 L 초과의 용매가 필요하다.
본 발명에서 사용되는 ESM 입자는, 임의의 편리한 입자 크기 감소, 즉 미분화, 연마, 분쇄, 또는 밀링(milling) 기술 수단, 예를 들면, 볼 밀링, 비드 미링, 제트 밀링, 보텍스 밀링에 이어, 크기 선택, 예를 들면 체 분리 및 스크리닝에 의하여 미분화될 수 있다. 선택된 입자 크기 감소 방법은 건식으로 또는 액체 매질을 사용하여 수행될 수 있다. 저온(Cryo)-분쇄가 또한 사용될 수 있다. 특정 구현예에서는 입자 크기 감소 공정 및 특정 구현예에서는 선행하는 ESM 제조 공정이, 원하는 크기의 ESM 섬유 (즉, 마이크로-섬유 및 나노-섬유)가 생산됨을 토대로 선택된다. 특히, 회전하는 블레이드 블렌더에서 건조한 ESM의 분쇄가 이러한 측면에서 효과적인 것으로 밝혀졌다 (도 5).
추가 측면에서, 본 발명은, 본원에서 정의된 미분된 ESM 함유 입자의 제조 방법으로서, 상기 방법이, 예를 들면, 본원에서 정의된 ESM을 제공하는 단계, 및 이 ESM에 미분화 공정 및 입자 크기 선택 공정을 실시하는 단계를 포함하는, 제조 방법을 제공한다. 바람직하게는, 비-ESM 알 성분을 본질적으로 함유하지 않는 ESM이 제공된다. 더 바람직하게는, 비-ESM 알 성분을 본질적으로 함유하지 않는 ESM을 제공하는 것은, 예를 들면, WO 2015/058790 (PCT/EP2013/072049)에 그리고 상기 기재된 바와 같이 비-ESM 알 성분으로부터 ESM을 분리하고, 이렇게 얻어진 ESM을 약 산 용액 (이 용어는 약하게 산성인 용액을 포함함), 예를 들면, 약 0.1% 염산 또는 아세트산 수용액으로 세척하여, ESM 내 임의의 잔류 탄산칼슘을 제거하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 미분화된 ESM을 상기 약산 용액으로 세척한다. 이 약산 세척, 특히 약 0.1% HCl 용액을 사용한 처리는 ESM을 탈미네랄화시켜서 ESM 내 무기 염의 양을 최소화시킬 뿐만 아니라, 감염제, 예를 들면, 미생물 (예를 들면, 본원에 기재된), 프리온 및 바이러스를 비활성화시킨다.
도 5에 도시된 바와 같이, 이 방법으로 제조된 ESM의 미분화에 의해 길이 10-100 μm 및 두께 1-5 μm의 ESM 섬유 (즉, 마이크로-섬유 및 나노-섬유)가 생산된다.
본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM 함유 입자의 부가적인 성분이 미분화 공정 전에, 상기 공정 동안에 또는 상기 공정 후에 포함될 수 있다. 상기 방법에 의해 얻어지거나 얻어질 수 있는 미분화된 ESM 함유 입자가 본 발명의 추가 측면이다.
본 발명에서 사용되는 입자는 전형적으로 복수의 상기 입자 부분으로서 제공될 것이며, 상기 복수의 입자는 100 μm 미만, 예를 들면, 95 μm 미만, 90, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10, 5, 또는 1 μm, 예를 들면, 900 nm 미만, 850, 800, 750, 700, 650, 600, 550, 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 50, 10, 5 또는 1 nm의 평균 입자 직경을 갖는다.
특정 구현예에서, 상기 복수의 입자는 또한 적어도 1 nm, 예를 들면, 적어도 5, 10, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900 또는 950 nm, 또는 적어도 1 μm, 예를 들면, 적어도 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 또는 95 μm의 평균 입자 직경을 갖는다. 이러한 값 중 임의 것의 조합으로부터 유도될 수 있는 임의의 및 모든 범위 종점이 구체적으로 고려된다.
특정 구현예에서, 상기 복수의 입자 내 입자 수의 25% 미만, 예를 들면, 20% 미만, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1%는 100 μm 이상의 평균 입자 직경을 갖는다.
특정 구현예에서, 낮은 분산도를 갖는 복수의 입자를 제공하는 것이 유리할 수 있다. 이러한 이유로, 입자는 바람직하게는 10% 미만, 더 바람직하게는 5% 미만, 더욱 더 바람직하게는 2% 미만의 (상기 정의된) 선택된 평균 입자 직경에 대한 변동 계수 (CV)를 갖는다. CV는 하기와 같이 백분율로 측정된다:
CV = 100 x 표준 편차/평균
상기 식에서, 평균은 평균 입자 직경이고, 표준 편차는 입자 직경에서의 표준 편차이다. CV는 바람직하게는 주 모드로, 즉 단봉 분포 곡선을 검출된 입자 크기 분포에 핏팅시켜서 계산된다. 따라서, 예를 들면, 총 입자 수의 (즉, 검출가능한 입자의) 약 90%에 기반할 수 있는 모드(mode) 크기 미만 또는 초과의 일부 입자는 계산에 계수되지 않을 수 있다. 그와 같은 CV의 측정은 Coulter LS 130 입자 크기 분석기 상에서 수행가능하다.
다른 구현예에서, 복수의 입자는 본질적으로 단분산성이다.
한편, 특정의 다른 구현예에서, 광범위한 입자 크기 또는 복수의 더욱 좁은 입자 크기 범위가, 본원에 기재된 다양한 생리적 효과 중 하나 이상을 성취하도록 선택될 수 있다. 이론에 구속시키고자 하는 것은 아니지만, 크기 범위의 상부 말단에서 평균 입자 직경을 갖는 본 발명에서 사용되는 ESM 입자는 더욱 큰 스캐폴딩 효과를 제공함으로써 상처 세포 이동을 촉진시킬 수 있는 반면, 크기 범위의 하부 말단에서 평균 입자 직경을 갖는 본 발명에서 사용되는 ESM 입자는 MMP 및 염증에 대한 더욱 큰 억제 효과를 가질 수 있다. 본 발명에서 사용되는 ESM 입자의 생리적 효과를 조정하도록 상이한 크기 범위를 선택하는 것이 유리할 수 있다.
추가의 구현예에서, 사용된 ESM 입자는 상기한 것보다 더 클 수 있으며, 예를 들면, 상기 입자는 최대 500 μm, 예를 들면, 최대 450, 400, 300, 350, 200, 150, 125 μm의 평균 입자 직경을 가질 수 있고, 이전에 인용된 값과 함께 이러한 값 중 임의 것의 조합으로부터 유도된 임의의 및 모든 범위 종점이 구체적으로 고려된다. ESM 입자의 물리적 특성 및 이 입자의 생산에 대한 이전 논의가 필요한 변경을 가하여 본 발명의 이 부분에 적용된다.
상기 논의된 바와 같이, 상처는 표피 장벽의 부족, 및 미생물 부착 및 집락형성을 위한 기질 및 표면의 이용가능성 때문에 감염, 특히 만성 감염의 이상적인 환경이다. 문제가 되는 것은, 상처의 감염이, 상처 및 주변 상처 조직 내 염증, 및 괴사를 증가시킴에 의해 종종 치유를 지연시키며, 이에 따라 그 상처는 확립된 (만성) 감염에 더욱 취약해진다는 것이다. 치유되고자 하는 많은 상처는 감염을 포함하며 이와 같이 상처 내 감염 (소위, 상처의 미생물오염도(bioburden))을 또한 다룰 수 있는 상처 치유 치료가 특히 유리할 것이다.
특정 구현예에서, 치유를 촉진시키기 위한 본원에서 정의된 ESM 입자를 사용한 상처의 치료는 또한 상처 중에 존재하는 미생물의 생존 능력 및/또는 성장을 억제하여, 상처 중에 존재하는 미생물 감염과 싸울 수 있다. 따라서, 본 발명은, 상처 중에 존재하는 미생물의 생존 능력 및/또는 성장이 또한 억제되거나, 상처 내 미생물 감염과 또한 싸우는 상처의 치유를 촉진시키는 방법으로서, 본원에서 정의된 하나 이상의 하나 이상의 ESM 입자가 미생물의 생존 능력 및/또는 성장을 억제시키거나 미생물 감염과 싸우기에 충분한 양으로 상기 상처에 적용되는 촉진 방법을 포함하는 것으로 간주될 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "미생물"은, 임의의 세포성 미생물 유기체, 즉 미시적인, 즉 육안으로 관찰되기에는 너무 작은 임의의 세포성 유기체를 포함한다. 특히, 본원에서 사용된 상기 용어에는 전형적으로, 미생물로 생각되는 유기체, 특히 세균, 진균, 고세균, 조류 및 원생동물이 포함된다. 미생물은 원핵 또는 진핵일 수 있고, 임의 부류, 속 또는 종의 미생물로부터의 것일 수 있다. 미생물은 혐기성 또는 호기성일 수 있다. 미생물은 병원성 또는 비-병원성일 수 있거나, 부패 또는 지표 미생물일 수 있다. 미생물은 약물 (즉, 항균성 약물, 예를 들면, 항생제 또는 항진균성 약물) 내성 또는 다중약물 내성일 수 있다. 특히 바람직한 구현예에서, 미생물은 상처를 집락형성시키고 상처 치유를 지연시킬 수 있다.
세균 또는 진균이 바람직한 부류의 미생물을 나타내며, 따라서 본 발명에서 사용되는 ESM 입자는 바람직하게는 항-세균성 또는 항-진균성 활성 (예를 들면, 살균 또는 정균, 또는 살진균 또는 살정균)을 갖는 것으로 간주될 수 있다.
바람직하게 세균은 하기 속으로부터 선택된다: 아크로모박터, 아시네토박터, 액티노바실러스, 아에로모나스, 아그로박테리움, 알칼리게네스, 알테로모나스, 박테로이테스, 바르토넬라, 보렐리아, 보르데텔라, 브루셀라, 버크홀데리아, 캄필로박터, 카디오박테리움, 클라미디아, 클라미도필라, 크로모박테리움, 키세오박테리움, 크리세오모나스, 시트로박터, 클로스트리디움, 코마모나스, 코리네박테리움, 콕시엘라, 크립토박테리움, 에드워드시엘라, 에이케넬라, 엔테로박터, 엔테로코커스, 에르위니아, 킨젤라, 클레브시엘라, 락토바실러스, 락토코커스, 레지오넬라, 렙토스피라, 렙토트리키아, 류코노스톡, 리스테리아, 리스토넬라, 모비룬커스, 모락셀라, 모르가넬라, 미코박테리움, 미코플라스마, 네이세리아, 노카르디아, 노카르디옵시스, 판토에아, 파라클라미디아, 파스테우렐라, 펩토코커스, 펩토스트렙토코커스, 프레보텔라, 프로피오니박테리움, 프로테우스, 프로비덴시아, 슈도모나스, 랄스토니아, 리케트시아, 살모넬라, 쉐웨넬라, 시겔라, 스핑고박테리움, 스핑고모나스, 스타필로코커스, 스테노트로포모나스, 스트렙토바실러스, 스트렙토코커스, 스트렙토마이세스, 트레포넴 및 예르시니아.
따라서, 세균은 그람 양성 또는 그람 음성 세균, 또는 참으로 그람-불확실한 세균일 수 있다. 그람-음성 세균이 중요하다. 그람-음성 세균 중에서 장내세균 및 그람-음성 세균 비발효성 세균이 특히 주목된다.
장내세균에는 알리쉐와넬라, 알테로코커스, 아쿠아모나스, 아라니콜라, 아조티비르가, 브레네리아, 부드비시아, 부티아욱셀라, 세데시아, 시트로박터, 크로노박터, 디케야, 에드워드시엘라, 엔테로박터, 에르위니아, 에셰리키아, 에윙겔라, 그리몬텔라, 하프니아, 클레브시엘라, 클루이베라, 레클레르시아, 레미노렐라, 모엘레렐라, 모르가넬라, 오베섬박테리움, 판토에아, 펙토박테리움, 플로모박터, 포토르하브두스, 플레시오모나스, 프라기아, 프로테우스, 프로비덴시아, 라흐넬라, 라오울텔라, 살모넬라, 샘소니아, 세라티아, 시겔라, 소달리스, 타투멜라, 트라불시엘라, 윙글레스워티아, 제노르하브두스, 예르시니아, 요케넬라 속로부터의 세균이 포함되지만 이것들로 제한되지 않는다. 바람직한 속의 장내세균에는 에셰리키아, 클레브시엘라, 살모넬라, 시겔라, 예르시니아 및 프로비덴시아가 포함된다.
비발효성 그람-음성 세균에는 슈도모나스, 아시네토박터, 스테노트로포모나스 및 버크홀데리아, 아크로모박터, 알갈리게네스, 보르데텔라, 브레분디모나스, 코마모나스, 엘리자베스킹기아 (이전에는 크리세오박테리움), 메틸로박테리움, 모락셀라, 오크로박트럼, 올리겔라, 싸이크로박터, 랄스토니아, 로세오모나스, 쉐와넬라, 스핑고박테리움, 예를 들면, 슈도모나스 아에루기노사, 아시네토박터 바우만니, 스테노트로포모나스 말토필리아, 및 버크홀데리아 복수 종(spp.) 속으로부터의 세균이 포함되지만 이것들로 제한되지 않는다.
바람직하게는 세균은 슈도모나스, 아시네토박터, 버크홀데리아, 에셰리키아, 클레브시엘라, 스트렙토코커스, 엔테로코커스, 프로비덴시아, 모락살라, 스타필로코커스, 예를 들면, 슈도모나스 아에루기노사, 아시네토박터 바우만니, 버크홀데리아 복수 종, E. coli, 클레브시엘라 뉴모니아, 버크홀데리아 세파시아, 버크홀데리아 멀티보란스, 버크홀데리아 말레이, 버크홀데리아 슈도말레이, 아시네토박터 료피, 프로비덴시아 스투아르티, 프로비덴시아 레트게리, 프로비덴시아 알칼리파시엔스, 클레브시엘라 옥시토카, 슈도모나스 앙구일리셉티카, 슈도모나스 오리지하비탄스, 슈도모나스 플레코글로시시다, 슈도모나스 루테올라, 모락살라 카타르할리스, 엔테로코커스 파에시움, 엔테로코커스 파에칼리스, 스트렙토코커스 오랄리스, 스타필로코커스 아우레우스 (예를 들면, MRSA) 속으로부터 선택될 수 있다.
따라서, 대표적인 예로, 미생물은 스타필로코커스, 슈도모나스, 레지오넬라, 미코박테리움, 프로테우스, 클레브시엘라, 푸소박테리움 속의 세균, 또는 다른 장관 또는 대장균군 세균일 수 있다.
미생물은 또한 예를 들면, 원생생물계로 분류될 수 있거나 되었을 수 있는 진균, 예를 들면 칸디다, 아스페르길루스, 뉴모키스티스, 페니실린 및 푸사리움 속으로부터의 진균을 포함하는 진균일 수 있거나 이 진균으로부터의 것일 수 있다. 대표적인 진균 종에는 칸디다 알비칸스, 칸디다 두블리니엔시스, 크립토코커스 네오포르만스, 히스토플라마 캡설라텀, 아스페르길루스 푸미가투스, 코시디오데스 이미티스, 파라코시디오데스 브라실리엔시스, 블라스토마이세스 데르미티디스, 네오모키스티스 카르니, 페니실린 마르네피, 알테르나리아 얼터네이트가 포함되지만 이것들로 제한되지 않는다.
미생물은 또한 원생동물, 예를 들면, 아모에배, 스포로조아, 실리아테스, 및 플라겔라테스 군의 성분일 수 있다. 대표적인 원생동물에는 톡소플라스마 종, 예를 들면, 톡소플라스마 곤디, 플라스모디움 종, 예컨대 플라스모디움 팔시파룸, 플라스모디움 비박스, 플라스모디움 말라리아, 트리파노소마 종, 예를 들면, 트리파노소마 브루세이, 트리파노소마 크루지, 레이시마니아 종, 예컨대 레이시마니아 메이저, 및 엔타모에바 종, 예컨대 엔타모에바 히스톨리티카가 포함된다.
바람직하게는 미생물은 하기 속으로부터 선택된다: 시트로박터, 엔테로박터, 에셰리키아, 하프니아, 세라티아, 예르시니아, 펩토스트렙토코커스, 박테리오데스, 슈도모나스, 레지오넬라, 스타필로코커스, 엔테로코커스, 스트렙토코커스, 클레브시엘라, 칸디다, 프로테우스, 버크홀데리아, 푸소박테리움 및 미코박테리움, 예를 들면, 에셰리키아 콜라이 (대장균), 엔테로코커스 파에칼리스 스타필로코커스 아우레우스, 스타필로코커스 에피더미디스, 레지오넬라 뉴모필라, 칸디다 알비칸스, 슈도모나스 아에루기노사, 버크홀데리아 세파시아 및 스트렙토코커스 피오게네스. 슈도모나스에 의해 초래된 감염, 예를 들면, 슈도모나스 아에루기노사 감염이 특히 주목된다.
미생물은 생물막(biofilm)으로 되어 있을 수 있거나, 다르게는 미생물은 성장 모드의 생물막으로 되어 있을 수 있다. "생물막"은, (예를 들면, 이들의 "비-생물막" 또는 유리-부유성 또는 플랑크톤성 대응물과 비교하여) 기층 또는 계면 또는 서로 (일부 운동성 세포가 또한 존재할 수 있음)에 부착되며 이 집락의 미생물이 성장 속도 및 유전자 전사에 대하여 변경된 표현형을 나타냄을 특징으로 한 세포외 폴리머 (더욱 구체적으로는 생성된 세포외 폴리머)의 매트릭스 중에 포매되는 목없는(sessile) 세포의 우세로 특징된 미생물 집단을 의미한다. "생물막으로 된"은, 미생물이 생물막의 폴리머 매트릭스 내부에 (완전히 또는 부분적으로), 그 위에 있거나, 그와 관련됨을 의미한다. 다르게 보면, "생물막으로 되어 있지 않은" 미생물은, 단리되어 있는, 예를 들면, 플라크톤성이거나, 복수 미생물의 응집체로 되어 있는 경우에는, 응집이 조직화되어 있지 않고/않거나 생물막의 매트릭스 특징이 없는 미생물이다. 각각의 경우에, 개별 미생물은 이들의 생물막에 거주하는 대응물에서 관찰되는 변경된 표현형을 나타내지 않는다.
용어 "미생물의 생존 능력"은 주어진 조건 하에서, 예를 들면 상처 내에서 생존하는 미생물의 능력을 의미한다. 생존은 살아 남아있는 것과 동일한 것으로 간주될 수 있다. 본 발명에서 사용되는 ESM 입자는 살균 효과를 통해 미생물의 생존 능력을 감소시킬 수 있다. 미생물의 생존 능력의 측정은, 미생물 세포사 (및 생존 능력)를 측정하기 위한 하기 상술된 기술을 사용하여 수행될 수 있다.
따라서, 미생물의 "생존 능력 억제"는 미생물의 생존 능력을 감소시키거나 미생물을 덜 생존하기 쉽게 하거나 "비-생존가능"하게 하는 임의 효과를 포함할 수 있다. 특히, 이 용어는 미생물 사멸 또는 파괴를 포함한다.
용어 "미생물 사멸"은, 미생물이 살아있는 것을 중단시키는, 즉 죽게 하는 작용을 칭한다. 미생물은, 이 미생물의 성장을 일반적으로 지지할 매질 중에 위치하고/하거나, 미생물이 세포 기능을 지지하도록 에너지를 방출하는 대사되는 영양소인 경우에, 이것이 복제 및/또는 성장되도록 유도될 수 있거나 적어도 형태학적인 변화를 나타낼 수 있다면, 살아있는 것으로 간주된다. 전형적으로, 미생물이 세포 막 완전성을 상실하면 죽은 것으로 간주될 수 있다.
미생물이 살아있는지 (생존 가능한지) 또는 죽은 지를 측정하기 위해 많은 일반적인 검정이 이용가능하다. 한 선택은, 미생물을, 그 미생물의 성장을 일반적으로 지지하고, 적절한 표준 수단에 의해, 예를 들면 미생물의 크기, 미생물의 형태, 시간 경과에 따른 집락 내 미생물 수, 배양 배지 내 영양소의 소비 등을 모니터함에 의해 미생물의 성장을 모니터할 조건에 놓는 것이다. 또 하나의 선택은, 세포 사의 형태학적 특성, 예를 들면, 괴사성 또는 세포자멸사성 소체(body), 막 기포(bleb), 핵 응축 및 DNA의 일정한 크기의 단편, 파괴된 세포 벽 또는 막으로의 절단 및 세포 내용물의 세포외성 환경으로의 누출에 대하여 미생물을 평가하는 것이다. 다른 방법에서는 죽은 미생물에서 막 세포 완전성의 특징적인 손실을 이용한다. 막 불투과성 염료 (예를 들면, 트리판 블루 및 프로피디움 아이오다이드)가 막 완전성을 평가하는데 일반적으로 사용된다. 더욱 추가의 선택은 미생물의 대사를 측정하는 것이다. 이는 다수의 방식으로 일반적으로 수행될 수 있다. 예를 들면, ATP 수준이 측정될 수 있다.
"미생물의 성장"은, 미생물의 크기에서 또는 미생물 구성성분의 양 및/또는 용적 (예를 들면, 핵산의 양, 단백질의 양, 핵의 수, 소기관의 수 또는 크기, 세포질의 용적)에서의 증가 및 미생물 수에서의 증가, 즉 미생물의 복제에서의 증가 둘 모두를 의미한다.
"미생물 성장 억제"는, 미생물의 측정가능한 성장 (예를 들면, 복제), 또는 이것의 속도가 감소됨을 의미한다. 바람직하게는, 미생물의 측정가능한 성장 (예를 들면, 복제), 또는 이것의 속도는 적어도 50%, 더 바람직하게는 적어도 60%, 70%, 80% 또는 90%, 예를 들면, 적어도 95%까지 감소된다. 바람직하게는, 측정가능한 성장 (예를 들면, 복제)은 중단된다. 미생물 크기 증가 또는 팽창 등의 측면에서의 성장은 복제와 무관하게 억제될 수 있고 그 반대일 수 있다. 본 발명에서 사용되는 ESM 입자는 정균 효과 및/또는 살균 효과를 통해 미생물의 생존 능력을 억제할 수 있다.
따라서, 본 발명은 또한, 상처 내 미생물 감염과 싸우며 특히 상기 감염을 치료하는데 사용하기 위한 본원에서 정의된 ESM 입자, 또는 상처 내 미생물 감염과 싸우며 특히 상기 감염을 치료하는데 사용하기 위한 약제의 제조에서 본원에서 기재된 ESM 입자의 용도를 제공하는 것으로 관찰될 수 있다. 대상체에서 미생물의 성장 및/또는 생존 능력을 억제함으로써 감염과 싸울 수 있음이 이러한 측면에서 관찰될 것이다. 감염은 생물막 감염일 수 있다.
"감염과 싸우는 것"은, 예를 들면, 감염 형성의 예방 또는 억제, 감염의 감소 또는 제거, 감염을 구성하는 집락 내 미생물 수에서의 감소, 감염 및/또는 그 내 미생물 성장 속도에서의 감소 또는 정지, 감염 내 미생물의 수에서 팽창 속도 감소 또는 중지를 포함하는 감염의 치료 또는 예방으로서 관찰될 수 있다. "생물막과 싸우는 것"은, 예방적인 그리고 반응적인 수단 또는 치료 둘 모두를 포함한다. 따라서, 생물막과 싸우는 것은, 생물막 형성의 방지 또는 억제, 생물막의 제거 또는 감소, 생물막 크기에서의 감소, 생물막 집락 내 미생물 수에서의 감소, 생물막 성장 속도에서의 감소 또는 정지, 생물막 집락 내 미생물 수에서의 팽창 속도의 감소 또는 정지, 생물막의 물리적 완전성에서의 감소, 항균제 또는 숙주 면역 결핍 메커니즘에 대한 생물막 집락 내 미생물 감도에서의 증가, 및 생물막의 항균제 또는 숙주 면역 결핍 메커니즘으로의 투과성에서의 증가를 포함한다.
이러한 구현예에서, 미생물은, 본 발명에서 사용되는 입자를 상처에 적용한 후에 상기 입자와 접촉될 것이다. 용어 "접촉하는"은, 상기 입자를 미생물에 직접 적용하는 것, 또는 상기 입자를, 미생물이 나중에 접촉하게 되는 상처에 적용하는 것을 포함한다.
더 구체적으로, 미생물은, 효과적인 양의 본 발명에서 사용되는 ESM 입자, 더 구체적으로는 미생물의 생존 능력을 직접적으로 억제시키기에 (예를 들면, 사멸시키기에) 또는 미생물의 성장을 직접적으로 억제시키기에 효과적인 본 발명에서 사용되는 ESM 입자의 양과 접촉될 것이다.
"직접적으로"는, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자가, 살균 또는 정균 (예를 들면, 이들의 세포독성 또는 세포증식억제) 효과를 제공하도록 생리적 시스템 또는 메커니즘 (예를 들면, 면역계)을 동원하지 않음을 의미한다. 오히려, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자는 미생물에 대하여 직접적으로 작용한다.
이러한 구현예에서, "충분한 (또는 효과적인) 양"의 본 발명에서 사용되는 ESM 입자는, 상기 살균 또는 정균 효과를 나타내거나 감염과 효과적으로 싸워서 상처의 치유를 촉진시키는 ESM 입자의 그러한 양을 의미한다. 당업자는, 일반적인 용량 반응 프로토콜 및 편리하게는 상기 논의된 바와 같이 미생물 사멸 또는 성장 억제 등을 평가하는 일반적인 기술을 토대로 ESM 입자의 효과적인 (충분한) 양이 무엇일 지를 용이하게 측정할 수 있을 것이다. 본 발명에서 사용되는 ESM 입자의 직접적인 효과는, 살균 또는 정균 효과의 평가를 방해할 수 있는 완전한 생리적 시스템 또는 메커니즘 (예를 들면, 예를 들면, 실시예 1에 개시된 간단한 세포 배양 시스템, 단리된 세포/바이러스 시스템)이 없는, 당업자에게 잘 알려진 일반적인 시험관 내 시스템을 사용함에 의해서 평가될 수 있다.
한 구현예에서, 본 발명의 방법은, 대상체가, 감염을 발생시킬 위험이 또한 있거나 상처 내 감염을 치료한 것으로부터 이로움을 얻을 상처를 갖는 것으로 진단될 단계를 포함할 수 있다.
추가 구현예에서, 본 발명의 방법은, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자를 상처에 적용한 후에, 상처 내 미생물의 성장 및/또는 생존 능력, 또는 감염 정도가 모니터되는 단계를 포함할 수 있다. 이러한 모니터링 단계는, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자를 상처에 적용하기 직전에, 또는 심지어는 대상체의 치료에서 더 이른 또 하나의 시점에서 동일한 측정치와 비교하는 것을 포함할 수 있다.
상기 논의된 바와 같이, 일반적인 상처 치유 과정은, 상처 조직 세포가 상처 내로 이동하고/하거나 증식되어 새로운 조직을 형성시키는 증식 단계를 포함하지만, 일부 예에서는 상기 치유 과정이 이전 단계에서 멈추게 된다.
따라서, 상처 조직 세포의 생존 능력 및/또는 성장을 촉진시킬 수 있는 상처 치유 치료가 특히 유리할 것이다.
따라서, 특정 구현예에서, 치유를 촉진시키기 위해 본원에서 정의된 ESM 입자를 사용하여 상처를 치료하면 또한 상처 조직 세포의 생존 능력 및/또는 성장을 촉진시킬 수 있다. 따라서, 본 발명은, 상처 조직 세포의 생존 능력 및/또는 성장이 또한 촉진되는 상처 치유를 촉진시키는 방법으로서, 본원에서 정의된 ESM 입자가 상처 조직 세포의 생존 능력 및/또는 성장을 촉진시키기에 충분한 양으로 상기 상처에 적용되는 방법을 포함하는 것으로 간주될 수 있다.
용어 "생존 능력 및/또는 성장"은, 이 예에서 성장이 또한 상처 조직 세포의 분화를 포함할 수 있다 하더라도, 미생물 맥락에서의 상기 논의와 일관되게 해석되어야 한다.
"상처 조직 세포의 성장을 촉진시키는 것"은, 상처 조직 세포의 측정가능한 성장 (예를 들면, 복제 및/또는 분화), 또는 이것의 속도가 증가, 또는 적어도 유지 또는 감소로부터 방지됨을 의미한다. 바람직하게는 상처 조직 세포의 측정가능한 성장 (예를 들면, 복제 및/또는 분화), 또는 이것의 속도는 적어도 5%, 더 바람직하게는 적어도 10%, 20%, 30% 또는 40%, 예를 들면, 적어도 50%까지 증가된다.
한 구현예에서, 본 발명의 방법은, 대상체가, 상처 조직 세포의 생존 능력 및/또는 성장이 촉진된 것으로부터 또한 이로움을 얻을 상처를 갖는 것으로 진단될 단계를 포함할 수 있다.
추가 구현예에서, 본 발명의 방법은, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자를 상처에 적용한 후에, 상처 조직 세포의 생존 능력 및/또는 성장, 및/또는 새로운 조직 형성이 모니터되는 단계를 포함할 수 있다. 이러한 모니터링 단계는, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자를 상처에 적용하기 직전 또는 심지어는 대상체 치료에서 더 이른 또 하나의 시점 직전에 동일한 측정치와 비교하는 것을 포함할 수 있다.
따라서, 상처 조직 세포의 상처 내로의 이동을 또한 촉진시킬 수 있는 상처 치유 치료가 또한 특히 유리할 것이다.
따라서, 특정 구현예에서, 치유를 촉진시키기 위해 본원에서 정의된 ESM 입자를 사용한 상처의 치료는 또한 상처 조직 세포의 상처 내로의 이동을 촉진시킬 수 있다. 따라서, 본 발명은, 상처 조직 세포의 상처 내로의 이동이 또한 촉진되는 상처 치유를 촉진시키는 방법으로서, 본원에서 정의된 ESM 입자를, 상처 조직 세포의 상처 내로의 이동을 촉진시키기에 충분한 양으로 상기 상처에 적용하는 방법을 포함하는 것으로 간주될 수 있다.
"이동을 촉진시키는 것"은, 상처 조직 세포의 상처 내로의 측정가능한 이동 또는 이것의 속도가 증가 또는 적어도 유지되거나 감소로부터 방지됨을 의미한다. 바람직하게는 상처 조직 세포의 측정가능한 이동, 또는 이것의 속도는 적어도 5%, 더 바람직하게는 적어도 10%, 20%, 30% 또는 40%, 예를 들면, 적어도 50%까지 증가된다.
한 구현예에서, 본 발명의 방법은, 대상체가, 상처 조직 세포의 상처 내로의 이동이 촉진된 것으로부터 또한 이로움을 얻을 상처를 갖는 것으로 진단될 단계를 포함할 수 있다.
추가 구현예에서, 본 발명의 방법은, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자를 상처에 적용한 후에, 상처 조직 세포의 상처 내로의 이동 범위, 및/또는 새로운 조직 형성이 모니터되는 단계를 포함할 수 있다. 이러한 모니터링 단계는, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자를 상처에 적용하기 직전에 또는 심지어는 대상체 치료에서의 더 이른 또 하나의 시점에서 동일한 측정치와 비교하는 것을 포함할 수 있다.
상처 세포의 이동 및/또는 증식의 촉진은, 상처 조직 세포에 대해 스캐폴드로 작용하는 본 발명에서 사용되는 ESM 입자에 기인할 수 있다. 이동 및/또는 증식의 촉진은 새로운 조직 형성을 촉진시킬 수 있다. 상처 조직 세포의 상처 내로의 이동, 상처 내 스캐폴드 및 새로운 조직 형성을 제공하는데 있어서 ESM 입자의 역할은, 상처 또는 그 샘플의 현미경 분석에 의해서 모니터되고 평가될 수 있다. 그와 같은 분석은, 상처 내 상처 조직 및/또는 새로운 조직의 세포 위에서 분자 표지자를 검출하기 위한 화학적 및/또는 면역화학적 염색을 포함할 수 있다.
이러한 구현예에서, 본원에서 정의된 "충분한 (또는 효과적인) 양"의 ESM 입자는, 상기 증식 촉진 또는 이동 촉진 효과를 나타내거나 새로운 조직 형성을 촉진시켜서 상처 치유를 추가로 촉진시키는 그러한 양의 ESM 입자이다. 당업자는, 일반적인 용량 반응 프로토콜, 및 편리하게는 상기 논의된 상처 세포 생존 능력, 성장 및 이동을 평가하는 일반적인 기술을 토대로, ESM 입자의 효과적인 (충분한) 양이 무엇일 지를 용이하게 측정할 수 있을 것이다.
이러한 구현예에서, 상처 세포는, 본 발명에서 사용되는 입자를 상처에 적용한 후에 상기 입자와 접촉될 것이다. 더 구체적으로, 상처 세포는, 상처 조직 세포의 생존 능력 및/또는 성장을 촉진시키고, 상처 조직 세포의 상처 내로의 이동을 촉진시키거나 새로운 조직 형성을 촉진시키기에 효과적인, 효과적인 양의 본 발명에서 사용되는 ESM 입자와 접촉될 것이다.
본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM 함유 입자는, 축축한 치유 환경의 유지를 방해하지 않는 조제물에서 제형화하기 쉽다는 부가적인 이점을 갖는다. 따라서, 본원에 개시된 본 발명의 방법에서, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자는 축축한 치유 환경의 유지를 방해하지 않도록, 예를 들면, 축축한 치유 환경의 유지를 방해하지 않도록 적응된 제형 또는 드레싱으로, 예를 들면, 본원에 기재된 것들로 상처에 적용된다.
특정 구현예에서, 본 발명의 방법은, 상기 부가적인 상처 효과, 즉, (i) ECM 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자의 분해 억제 (특히, ECM 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 MMP 활성 억제), 및 상기 부가적인 상처 효과 중 하나 이상 또는 전부, 특히 항균 효과 및/또는 항-염증 효과; 및/또는 (ii) 상처 내 염증에서의 감소, 및 상기 부가적인 상처 효과 중 하나 이상 또는 전부, 특히 항균 효과 및/또는 MMP 억제 효과 중 하나 이상 또는 전부와 함께, 상처 치유의 촉진을 성취한다.
상처는 대상체 내에서 또는 그 위에서 확인될 수 있다. 용어 "대상체에서"는, 대상체 내부 또는 대상체 위의 위치 또는 장소, 예를 들면, 외부 신체 표면을 포함하도록 본원에서 광범위하게 사용되며, 특히 이식가능한 의료 기기를 포함하는 상처를 포함할 수 있다.
따라서, 상처는 구강 (예를 들면, 잇몸, 잇몸 틈새, 치주낭), 생식관 (예를 들면, 자궁 경부, 자궁, 나팔관), 복막, 위장관, 귀, 눈, 전립샘, 요로, 혈관계, 호흡관, 심장, 신장, 간, 췌장, 신경계 또는 뇌 내 임의의 민감한 표면 내에 또는 상기 표면 위에서, 또는 피부 내에 또는 피부 위에서 확인될 수 있다. "상처 조직 세포"는 그에 맞게 해석되어야 한다. 바람직하게는 상처는 임의 깊이의 표피 및/또는 진피 및 기저 조직을 포함하는 피부 (skin or cutaneous) 상처, 즉 피부(dermal) 또는 피부과적 상처이다.
이식가능한 의료 기기에는, 상처를 초래하는 임의 종류의 경피 기기 및/또는 라인 (예를 들면, 중심 정맥 카테터, 특히 커프스, 예를 들면, 다크론 또는 콜라겐 커프스를 갖는 카테터, 인공 기기, 예를 들면, 심장 판막, 인공 관절, 치과 이식물 및 연질 조직 이식물 (예를 들면, 유방, 엉덩이, 및 입술 이식물), 스텐트, 심장박동기(pacemaker), 및 기관절개술 관이 포함되지만 이것들로 제한되지 않는다. "이식가능한" 의료 기기는, 이것의 임의 부분이 신체 내부에 포함되는, 즉 상기 기기가 완전히 또는 부분적으로 이식될 수 있는 기기를 포함할 수 있다.
상처는 외과적으로, 물리적 손상 (예를 들면, 기계적 손상; 열 손상, 예를 들면 과도한 열 또는 냉기로부터 비롯된 것들; 전기적 손상, 예를 들면, 전위 공급원과의 접촉에 의해 초래된 것들; 및 예를 들면, 적외선, 자외선, 또는 이온화되는 방사선으로의 장기간의 광범위한 노출에 의해 초래된 방사선 손상)에 의해 또는 자발적으로 형성되는 병변, 예컨대 피부 궤양 (예를 들면, 정맥성, 당뇨 또는 압력 궤양), 항문 열구, 구강 궤양 및 심상성 여드름에 의해 발생될 수 있다. 외과적으로 이식된 조직은 상처인 것으로 간주된다.
의학 분야에서, 상처는 전형적으로 급성 또는 만성으로서 정의된다. 급성 상처는 지연된 시간과정 없이 지혈 후 치유 과정의 3개의 인지된 단계 (즉, 염증 단계, 증식 단계 및 개조 단계)를 통하여 순서대로 진행되는 상처이다. 만성 상처는 치유될 수 없거나 화상을 통한 것과 같은 과도한 피부 손실이 있는 상처로서 정의된다. 그와 같은 상처는, 이 상처가 치유 단계 중 하나에서 멈춰지게 되기 때문에 치유 과정의 생화학적 사건의 정연한 순서를 완결하지 않는다. 일반적으로, 만성 상처는 염증 단계에서 멈춘다. 만성 상처는 환자에 대한 이환율의 주 원인이다.
본 발명의 특수한 측면에 따르면, 만성 상처는 예상된 양의 시간 내에, 예를 들면, 예상된 것보다 적어도 5, 10, 15, 20 또는 30일 더 길게 치유되지 않은 상처인 것으로 간주될 수 있다. 이것은 형성되고 적어도 30, 적어도 40일, 특히 적어도 50일, 더 구체적으로는 적어도 60일, 가장 구체적으로는 적어도 70일 후에도 치유되지 않은 상처로 간주될 수 있다.
만성이 된 화상 상처가 또한 특히 주목된다. 임의의 화상, 특히 중증 화상은 대상체의 상피 및/또는 내피 장벽의 완전성에 중대한 영향을 미치며, 그와 같은 외상의 치유는 종종 긴 과정이다. 이와 같이, 본 발명의 방법은 화상에 의해 초래된 만성 상처의 치유를 촉진시키는 방법인 것으로 간주될 수 있다.
전형적인 화상-초래 동인(agent)은 극심한 온도 (예를 들면, 극심한 온도에서의 화염 및 액체 및 기체), 전기, 부식성 화학물질, 마찰 및 방사선이다. 상기 동인의 세기/강도와 함께, 노출 정도 및 지속시간이 가변되는 중증도의 화상을 초래한다. 열상(Scalding) (즉, 고온 액체 및/또는 기체와 관련된 외상)은 화상인 것으로 간주된다.
특정 구현예에서, 목표 상처는 또한 미생물 감염, 예를 들면 본원에 개시된 것들의 위험이 또한 있거나 이 감염을 함유하는 상처이다. 감염은 급성일 수 있거나 대안적으로는 만성, 예를 들면, 적어도 5 또는 구체적으로는 10일, 특히 적어도 20일, 더 구체적으로는 적어도 30일, 가장 구체적으로는 적어도 40일 동안 지속된 감염일 수 있다.
특정 구현예에서, 목표 상처는 또한 부적절한, 즉 불충분한 수준의, 상처 조직 세포의 상처 내로의 이동 및/또는 상처 조직 세포의 증식 또는 분화 및/또는 새로운 조직 형성의 위험이 또한 있거나 이들이 존재하는 상처이다.
더욱 추가의 구현예에서, 목표 상처는 (i) (특히 ECM 및 성장 인자에 대한) MMP 과활성, 또는 과도한 ECM 및 성장 인자 분해, 및 상기 상처 특성 중 하나 이상, 특히 미생물 감염 및 염증; 및/또는 (ii) 과도한 염증 및 상기 상처 특성 중 하나 이상, 특히 미생물 감염 및 (특히 ECM 및 성장 인자에 대한) MMP 과활성 또는 과도한 ECM 및 성장 인자 분해를 갖는다.
본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자의 만성 상처 치유 효과 이외에도, 본원에서 정의된 ESM 입자를 사용한 치료는 (i) 외과적 제거 과정 후에 남아있는 신생물의 임의 잔여물 내에서 혈관형성을 억제함으로써 신생물과 싸우고 (ii) 신생물의 외과적 제거 또는 절제 위치에서 MMP 활성을 억제함으로써 외과적 제거 과정 후에 남아있는 신생물의 임의 잔여물의 전이를 방지할 수 있는 것으로 예상되기 때문에, 신생물의 외과적 제거 위치는 상기 치료로부터 또한 이로움을 얻을 것임이 예상된다.
따라서, 본 발명은, 신생물, 또는 그 일부가 외과적으로 제거된 위치에서 신생물의 전이를 방지하거나 신생물과 싸우는 방법으로서, 본원에서 정의된 하나 이상의 ESM 입자가, 임의의 남아있는 신생물의 전이를 방지하거나 임의의 남아있는 신생물과 싸우기에 충분한 양으로 상기 위치 또는 상기 위치의 바로 근처에 적용되는 방법을 추가로 제공한다.
이러한 구현예에서, 임의의 남아있는 신생물의 세포는, 외과적인 제거 위치 또는 그 바로 근처에 본원에서 정의된 ESM 입자를 적용한 후에 상기 입자와 접촉될 것이다. 용어 "접촉되는"은, 상기 입자를 임의의 남아있는 신생물의 세포에 직접 적용하거나, 상기 입자를 외과적 제거 위치 또는 그 바로 근처에, 그리고 임의의 남아있는 신생물의 세포가 나중에 접촉하게 되는 위치에 적용하는 것을 포함한다. "바로 근처"는, 제거되는 신생물의 크기와 관련하여 해석되어야 한다. 일부 예에서, 외과적 제거 또는 절제 위치의 바로 근처는, 외과적 제거 위치의 경계선으로부터 상기 위치의 가장 넓은 부분의 최대 50%, 예를 들면, 최대 40, 30, 20, 10, 5 또는 2%인 거리까지 연장되는 영역일 것이다.
"신생물이 외과적으로 제거된 위치에서 신생물과 싸우는 것"은, 그 신생물의 재형성, 신생물의 임의 잔여물의 감소 또는 제거, 상기 위치에서 임의의 남아있는 신생물 세포 수에서의 감소, 임의의 남아있는 신생물 및/또는 그 내부 또는 그 위치에서 임의의 신생물성 세포의 성장 속도에서의 감소 또는 정지, 남아있는 신생물 내 또는 그 위치에서 신생물 세포 수에서의 팽창 속도에서의 감소 또는 정지를 방지, 제한 또는 억제하기 위해 외과적으로 제거된 신생물의 임의 잔여물의 치료로 간주될 수 있다.
언급된 대로, 이론에 구속시키고자 하는 것은 아니지만, 이러한 싸우는 효과는, 차례로 본원에 기재된 ECM 단백질에 대한 MMP 활성에서의 감소 또는 제한으로부터 비롯되는 임의의 남아있는 신생물 내에서 혈관형성의 방지, 억제, 제한 또는 제거에 의해 적어도 부분적으로 성취된다. 그와 같은 효과의 상세한 논의를, 필요한 변경을 가하여 본 발명의 이 부분에 적용한다. 또 하나의 메커니즘은 ESM 입자 그 자체를 사용하여 혈관 성장을 방해하는 것을 포함할 수 있다.
"신생물이 외과적으로 제거된 위치에서 신생물의 전이를 방지하는 것"은, 임의의 그와 같은 잔여물 세포의 전이를 방지, 제한 또는 억제하기 위해 외과적으로 제거된 신생물의 임의 잔여물의 치료로서 간주될 수 있다. 상기 치료는 모든 전이 사건을 방지할 수 있거나, 그와 같은 사건을 현재의 속도 또는 확률로 제한하거나 전이의 속도 또는 확률을 낮출 (억제할) 수 있다.
언급된 대로, 이론에 구속시키고자 하는 것은 아니지만, 전이에 대한 이 효과는, 본원에 기재된 ECM 단백질에 대한 MMP 활성에서의 감소 또는 제한에 의해서 성취된다. 그와 같은 효과의 상세한 논의를, 필요한 변경을 가하여 본 발명의 이 부분에 적용한다.
따라서, 본 발명의 이 측면은, 대상체로부터 외과적으로 제거된 신생물의 재성장 또는 재발을 예방하는 방법 및/또는 대상체 암의 재발 또는 재현을 예방하는 방법 및/또는 대상체로부터 신생물의 외과적 제거 후에 완화 기회를 개선시키는 방법을 포함하는 것으로 간주될 수 있다.
신생물은, 대상체 신체의 임의 조직, 예를 들면, 본원에 기재된 그러한 조직, 및 신체 일부의 임의 조직 내 신생물일 수 있다. 특정 구현예에서, 신생물은 악성 신생물, 특히 높은 전이 가능성 또는 확률을 갖는 신생물이다. 따라서, 신생물은, 이러한 신생물이 세포 수집물 (덩어리)로 특징되는 한, 육종, 암종, 종자세포종, 림프종, 백혈병, 모세포종, 유두종 및 샘종일 수 있다. 그와 같은 수집물 또는 덩어리는, 상기 덩어리가 확산되고/되거나 틈을 포함할 수 있다 하더라도 "고체"로 기재될 수 있다. 특정 구현예에서, 종양은 악성 또는 전암성 종양, 예를 들면, 육종, 암종, 종자세포종, 모세포종, 림프종 또는 백혈병이다.
더 구체적인 구현예에서, 신생물은 결장직장 종양 (결장 종양, 직장 종양 또는 장 종양으로 공지됨), 전립샘 종양, 고환 종양, 피부 종양 (예를 들면, 흑색종 및 비-흑색종 (예를 들면, 기저-세포 종양, 편평-세포 종양)), 유방 종양, 신장 (콩팥) 종양 (예를 들면, 윌름스 종양), 난소 종양, 위 (위장) 종양, 장 종양 (예를 들면, 십이지장 종양, 회장 종양, 공장 종양, 소장 종양), 간 (간장) 종양, 췌장 종양, 폐(lung or pulmonary) 종양, 식도 종양, 구강 종양, 인후 종양, 뇌 종양 (예를 들면, 아교모세포종, 속질모세포종), 부신 종양 (예를 들면, 부신겉질 종양), 갑상샘 종양 (예를 들면, 역형성 갑상샘 암종), 자궁 종양 (예를 들면, 자궁 암육종), 혈액 종양 (또한 혈액 암으로 공지됨) (예를 들면, 조혈 및 림프구 종양 암, 예를 들면, 백혈병, 림프종 및 골수종)일 수 있다.
더 구체적인 구현예에서, 종양은 결장직장 암 (또한 결장 암, 직장 암 또는 장 암으로 공지됨), 전립샘 암, 고환 암, 피부 암 (예를 들면, 흑색종 및 비-흑색종 (예를 들면, 기저-세포 암, 편평-세포암)), 유방 암, 신장 (콩팥) 암 (예를 들면, 윌름스 종양), 난소 암, 위 (위장) 암, 장 암 (예를 들면, 십이지장 암, 회장 암, 공장 암, 소장 암), 간 (간장) 암, 췌장 암, 폐 암, 식도 암, 구강 암, 인후 암, 뇌 암 (예를 들면, 아교모세포종, 속질모세포종), 부신 암 (예를 들면, 부신겉질 암), 갑상샘 암 (예를 들면, 역형성 갑상샘 암종), 자궁 암 (예를 들면, 자궁 암육종), 혈액 암 (또한 혈액 암으로 공지됨) (예를 들면, 조혈 및 림프구 암, 예를 들면, 백혈병, 림프종 및 골수종) 또는 이러한 해부학적 위치에서의 비-악성 종양 (예를 들면, 결장직장 폴립, 모기질종, 혈관종, 골종, 연골종, 지방종, 섬유종, 림프관종, 평활근종, 횡문근종, 별아교세포종, 수막종, 신경절신경종, 유두종, 샘종)일 수 있다.
외과적 제거 방법은 제한되지 않으므로, 예를 들면, 기계적, 열적 또는 레이저 수단, 또는 지짐술에 의한 예를 들면, 적출 또는 절제에 의해서일 수 있다. 종양 절제는 종양, 또는 그 부분 또는 일부가 물리적 수단에 의해 파괴되고, 전형적으로, 절제 단계로부터 초래되는 종양의 잔여물이 제자리에 남게 되는 과정이다. 따라서, 외과적 "제거"는 그에 맞게 해석되어야 한다. 대표적인 종양 절제 방법에는 동결절제, 열수(hydrothermal) 절제, 이온화되는 방사선 절제 (외부 빔 방사선 치료 또는 근접치료), 방사선절제, 초음파 절제, 레이저 절제, 마이크로파 절제 및 전기절제가 포함되지만 이것들로 제한되지 않는다. 그와 같은 방법은 암 치료 분야에서 잘 실시되고 있다.
대상체는 임의의 인간 또는 비-인간 동물 대상체일 수 있지만, 더 구체적으로는 인간 또는 비-인간 척추동물, 예를 들면, 포유동물, 조류, 양서류, 어류 및 파충류로부터 선택된 비-인간 동물일 수 있다. 포유동물 대상체가 바람직하다. 비-인간 동물은 가축 또는 사육용 동물, 또는 상업적 가치의 동물, 예컨대 실험실 동물, 또는 동물원 또는 게임 파크 내 동물일 수 있다. 따라서, 대표적인 비-인간 동물에는 개, 고양이, 토끼, 쥐, 기니피그, 햄스터, 말, 돼지, 양, 염소, 소, 닭, 칠면조, 뿔닭, 오리, 거위, 앵무새, 사랑앵무, 비둘기, 연어, 송어, 틸리피아, 캣피쉬, 브림, 큰입선농어, 그루퍼, 멀릿, 방어, 민어, 로후, 고비, 대구, 해덕대구, 농어 및 잉어가 포함된다. 따라서, 본 발명의 수의학적 용도가 포함된다. 대상체는 환자로 간주될 수 있다. 바람직하게는 대상체는 인간이다.
본 발명에 따라 대상체에서 의학적 병태 (예를 들면, 상처) 또는 감염의 치료와 관련하여 사용된 경우의 치료"는, 임의의 치료 효과, 즉 상기 병태에 대한 또는 상기 감염과 관련한 임의의 유익한 효과를 포함하도록 본원에서 광범위하게 사용된다. 따라서, 병태/감염의 근절 또는 제거, 또는 병태/감염 대상체의 치유 뿐만 아니라, 대상체의 감염/병태에서의 개선이 포함된다. 따라서, 예를 들면, 감염/병태의 임의 증상 또는 징후에서의, 또는 감염/병태의 임의의 임상적으로 허용된 지표 (예를 들면, 상처 크기 (깊이 및/또는 면적)에서의 감소, 치유 시간의 가속화, 본원에 기재된 하나 이상의 상처 효과, 또는 상처 또는 주변 조직 내 일반적인 불편함 또는 통증에서의 감소))에서의 개선이 포함된다. 따라서, 치료는 예를 들면, 선재성 또는 진단된 감염/병태의 치유 및 완화 치료 둘 모두, 즉 반응성 치료를 포함한다.
본원에서 사용된 "예방"은, 임의의 예방적 또는 방지적 효과를 칭한다. 따라서, 예방은 병태 (예를 들면, 상처 크기, 또는 만성 또는 잘 치유되지 않는 상처의 발생에서의 증가) 또는 감염, 또는 병태/감염의 개시, 또는 예를 들면 병태/감염에 대한 하나 이상의 증상 또는 그 적응증, 또는 예방적 치료 전의 증상 또는 적응증을 지연, 제한, 감소 또는 예방하는 것을 포함한다. 따라서, 예방은 병태/감염, 또는 그 증상 또는 적응증의 발생 또는 발병의 절대적 예방, 및 병태/감염 또는 증상 또는 적응증의 개시 또는 발병에서의 임의 지연, 또는 병태/감염 또는 증상 또는 적응증의 발병 또는 진행에 대한 감소 또는 제한 둘 모두를 포함한다.
구체적으로, 본원에서 정의된 미분화된 ESM 함유 입자는 예를 들면, 상처 감염의 위험을 예방하거나 적어도 최소화시키거나, 상처 크기에서의 증가 또는 잘 치유되지 않거나 만성인 상처 발생 위험을 예방하거나 적어도 최소화시키기 위한 예방적 치료로서 간주될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM 함유 입자의 "약제학적으로 효과적인" 또는 "생리적으로 효과적인" 양은, 목표 상처의 치유를 측정가능하게 촉진시키는 입자의 양이다. 더 구체적으로, 이것은 상기 다양한 생리적 효과를 성취하기에 충분한 (효과적인) 상기 양일 수 있다.
약제학적으로/생리적으로 효과적인 양을 성취할 수 있는 본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM 함유 입자의 적합한 용량은, 대상체 사이에서 가변될 것이고, 대상체의 체중, 연령 및 성별, 병태/감염의 중증도, 투여 방법 및 또한 선택된 특수한 ESM 입자에 따라서 의사 또는 수의사에 의해 결정될 수 있다.
"상처에 적용된"은, 본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM 함유 입자가, 상기 ESM 입자가 주로 대상체의 혈액 또는 림프 순환을 통하여 상처에 도달되게 하기 위해 대상체에 전신적으로 투여되지 않음을, 즉 본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM 함유 입자가 대상체의 혈액 또는 림프 순환이 아닌 지점으로부터 상처와 접촉하게 됨을 의미한다. 이는 국부 또는 국소 적용으로 간주될 수 있다. 전형적으로, 본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM 함유 입자는 상처의 표면 및/또는 내부에 직접 적용된다.
본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM 함유 입자는 임의의 통상적인 국소 형태로 상처에 적용 (투여)될 수 있다. 가장 간단하게, 상기 입자는 추가 제형화없이 건조 분말로 적용될 수 있다. 건조 분말 제형은 상처 표면이 예를 들면, 0.5 mm 또는 그 미만의 층까지 덮여지도록 분말을 흩뿌림으로써 상처 표면에 적용될 수 있다. ESM은 고유한 수분 흡수 능력을 갖지 않아서, ESM은 특정 구현예에서는 부가적인 상처 드레싱, 예를 들면, 하기 논의된 유형의 것들을 분말 치료된 상처의 최상부에 위치시키는 것이 유익할 수 있다. 죽은조직제거술이 필요한 건조한 상처에 대해서는, 상기 상처 표면을 연질의 또는 액체/유체 겔 제형 (예를 들면, 하이드로겔 또는 연질의 하이드로콜로이드 겔)으로 치료한 다음, 건조한 ESM 입자를 상기 겔의 최상부에 적용하는 것이 유익할 수 있다.
그러나, 당업자는 또한 본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM 함유 입자를, 당해 분야에 공지되고 문헌에 광범위하게 기재된 통상의 방법 중 임의 것에 따라 국소 투여에 적합한 약제학적 제형으로 제형화시킬 수 있을 것이다.
본 발명에서 사용되는 ESM 입자는, 임의로 다른 활성제와 함께 하나 이상의 통상의 담체, 희석제 및/또는 부형제와 함께 혼입되어, 통상의 국소 조제물, 예컨대 분말, 비드 향낭, 현탁액, 에멀젼, 용액, 에어로졸 (고체로서 또는 액체 매질 내), 스프레이 (예를 들면, 코 스프레이), 연고, 고약, 크림, 페이스트, 막, 겔 (예를 들면, 하이드로겔 및 하이드로콜로이드), 폼 등을 생성시킬 수 있다. 단지 지침을 위해, 실시예 5는 하이드로콜로이드 ESM 입자 겔의 생산을 기재한다. 그와 같은 겔은, 이 겔이 적용되는 상처를 수화시키고, 수성의 죽은조직제거술을 허용하며 상기 논의된 ESM 이점을 가져오는 것으로 예상될 것이다. 그와 같은 조성물은 건조한 괴사성 상처에 사용하기에 적합하다. 실시예 6 내지 9는 추가의 특정 구현예를 제공한다.
따라서, 본 발명은 또한, 적어도 하나의 약제학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자를 포함하는, 예를 들면, 본 발명의 상기 언급된 방법 또는 의학적 치료 중 임의 것에서 사용하기 위한 약제학적 조성물을 제공한다.
적합한 담체, 부형제, 및 희석제의 예로는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 소르비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 검, 인산칼슘, 비활성 알기네이트, 트래거캔스, 젤라틴, 펙틴, 피브로넥틴, 엘라스틴, 칼슘 실리케이트, 미세결정성 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스 (예를 들면, 산화된 재생 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스 카복시메틸셀룰로오스, 하이드록시에틸셀룰로오스), 물 시럽(water syrup), 물, 물/에탄올, 물/글리콜, 물/폴리에틸렌, 고장성(hypertonic) 염수, 글리콜, 프로필렌 글리콜, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필 하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 미네랄 오일 또는 지방 물질, 예컨대 경질 지방, 또는 이들의 적합한 혼합물이다. 상기 조성물은 윤활제, 습윤제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 부가적으로 포함할 수 있다. 1가, 2가 또는 3가 금속 양이온 알기네이트, 특히 나트륨, 칼슘, 아연 및 은 알기네이트가 주목된다.
본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM-함유 입자는 또한 상처 드레싱, 예를 들면, 직조 및 비직조된 건조한 섬유상 (예를 들면, 직물) 드레싱, 막 기반의 드레싱, 겔 기반의 드레싱, 또는 이러한 드레싱 유형의 조합물인 드레싱 내로 혼입될 수 있다. 본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM-함유 입자는 상처로의 적용 전에 또는 그 동안에 적용될 수 있거나, 제조 동안 혼입될 수 있다. 드레싱은 전형적으로, 본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM-함유 입자가 사용시에 상처 또는 상처 분비액에 노출되도록 적응되거나 사용될 것이다.
본 발명에서 사용되는 섬유상 드레싱에는 면, 알기네이트, 셀룰로오스 (예를 들면, 산화된 재생 셀룰로오스, 카복시메틸셀룰로오스, 하이드록시에틸셀룰로오스), 섬유상 콜라겐, 및 ESM (본원에 참고로 편입된 US 7767297) 기반의 드레싱이 포함될 수 있다.
막 기반 드레싱은 전형적으로 물에 대해 반- 또는 불투과성이며 가요성이고, 임의의 적합한 플라스틱, 예를 들면, 폴리우레탄, 폴리비닐클로라이드로부터 형성될 수 있다.
하이드로겔 및 하이드로콜로이드 겔을 포함하는 겔 기반의 드레싱은 알기네이트, 셀룰로오스 (예를 들면, 산화된 재생 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 카복시메틸셀룰로오스, 하이드록시에틸셀룰로오스), 콜라겐, 펙틴, 엘라스틴, 피브로넥틴을 포함하지만 이것들로 제한되지 않는 과량의 폴리머성 물질로부터 형성될 수 있다. 바이오폴리머, 검 또는 수지 (예를 들면, 젤라틴)의 포함은, 드레싱이 상처 표면에 부드럽게(lightly) 부착되게 하는 것을 도울 수 있다. 알기네이트의 혼입은 겔 매트릭스의 수분 수용능력을 증가시킬 수 있다. 상처 치유를 위한 그와 같은 기본적인 알기네이트 겔이 US 특허 6201164에 기재되어 있다.
겔 기반의 드레싱은 깊은 공동을 갖거나 건강한 피부 아래에 터널형성될 수 있는 상처에 적합할 수 있다. 후자 유형의 상처에서, 겔은 주사기 내로 로딩된 다음, 상기 공동으로 전달되어 모든 상처 표면이 덮여지게 할 수 있다. 사용 시에, 겔 기반의 드레싱은 겔의 배치를 유지하고/하거나 겔 및 상처 내 수분을 유지하도록 2차 드레싱, 예를 들면, 섬유상 드레싱 및/또는 막 드레싱으로 겔 기반 드레싱을 덮고/덮거나 미생물에 대한 장벽으로 작용하기에 유익할 수 있다. 본 발명의 겔 기반의 드레싱은 겔 요소에 필수적인 그와 같은 2차 요소를 갖도록 설계될 수 있다.
적합할 것으로 예상되는 추가의 국소 시스템은, 고체, 반-고체, 무정형 또는 액체 결정성 겔 매트릭스가 제자리에서 형성되며 본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM-함유 입자를 포함할 수 있는 제자리 약물 전달 시스템, 예를 들면, 겔이다. 그와 같은 매트릭스는 편의상 매트릭스로부터 입자의 방출을 조절하도록 설계될 수 있으며, 예를 들면, 방출은 선택된 시기의 시간에 걸쳐 지연 및/또는 지속될 수 있다. 그와 같은 시스템은 생물학적 조직 또는 분비액과의 접촉시에만 겔을 형성할 수 있다. 전형적으로, 상기 겔은 생체결합성(bioadhesive)이다. 사전-겔(pre-gel) 조성물을 보유할 수 있거나 보유하도록 적응될 수 있는 임의 신체 위치로의 전달은 그와 같은 전달 기술에 의해서 표적화될 수 있다. 그와 같은 시스템은 WO 2005/023176에 기재되어 있다.
상처의 관리에 사용된 하이드로콜로이드 겔은 연질의 또는 유체/액체 겔이거나 견고하고 단단한 겔로서 공급될 수 있다. 견고한 하이드로콜로이드 겔의 예는 GranuflexRTM 및 DuodermRTM의 상표명으로 판매되고 있다. 하이드로콜로이드 겔은 적당한 분비액 흡수성을 가지며 상처 베드 및 주변 피부에 짓무름을 일으키지 않으면서 축축한 상처 베드를 유지한다. 축축해짐에 따라 하이드로콜로이드 겔은 팽창하고 점성을 유지하며 흡수된 분비액을 보유한다. 상처에 사용하기에 적합한 연질의 또는 유체/액체 하이드로겔은 당해 분야에, 예컨대 US 특허 5503847에 기재되었다.
추가의 특정 구현예에서, 본 발명은, 적절한 경우에 본 발명의 방법 및 의학적 치료에 사용하기 위한 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자를 포함하는 상처 드레싱, 바람직하게는 하이드로콜로이드 또는 하이드로겔 드레싱을 추가로 제공한다.
바람직한 구현예에서, 선택된 담체 시스템은 또한 ESM 성분의 기여와는 별도로 상처 치유 과정을 향상시킬 수 있다.
한 예에서, 본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM-함유 입자가 혼입되는 기능성 하이드로콜로이드 겔 상처 드레싱은 펙틴, 나트륨 카복시메틸 셀룰로오스 및 프로필렌 글리콜로부터 제조될 수 있으며, 예를 들면, 상기 드레싱에서, 펙틴은 0.05 중량% 및 1 중량%로 존재하며, CMC는 2 중량% 및 4.5 중량%로 존재하고, 프로필렌 글리콜은 15 내지 20 중량%로 존재하고, ESM 입자는 0.5 중량% 및 10 중량%로 존재하며, 물이 100 중량%에 대한 잔여량을 구성한다. 이 구현예에서, 상기 제형은 부가적으로 상처를 깨끗이 하고 죽은 조직을 제거하고 적절한 양의 삼출물을 흡수할 수 있다. 이러한 기능은, 프로테아제에 결합하여 프로테아제가 상처 베드 파괴로부터 회피되는 것으로 생각되며 세포성 부착 및 상처 베드를 통한 이동을 가능케 하는 스캐폴드로 작용하는 미분화된 ESM-함유 입자의 활성을 증대시킨다. 이 하이드로콜로이드 제형은 이상적으로는, 깊은 공동을 갖거나 건강한 피부 아래에 터널형성될 수 있는 상처에 적합하다. 후자 유형의 상처에서, 겔을 주사기 내로 로딩한 다음, 공동으로 전달하여 모든 상처 표면이 덮여지게 할 수 있다.
추가 구현예에서, 본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM-함유 입자는 실질적으로 순수한 물/하이드록시에틸셀룰로오스 하이드로겔로 제형화될 수 있다. 그와 같은 제형은, 진탕 또는 교반시키면서 HEC를 물에 용해시키고 ESM을 상기 수성 HEC 용액 중에 분산시킴으로써 제조될 수 있다. 그 후, 상기 ESM-HEC 하이드로겔을 편리한 용기 내로, 예를 들면 튜브 내로 채운 다음, 채워진 용기를 예를 들면, 25 kGy에서의 감마 방사선을 사용하여 멸균시킬 수 있다.
멸균성 장벽으로 작용할 수 있을 뿐 아니라 상처 표면 내 수분 관리에서 기능을 담당하는 반-투과성 배킹(backing) 시트가 혼입되어 있는 단단하거나 견고한 겔 하이드로콜로이드가 또한 제조될 수 있다. 그와 같은 단단한 물질에는, 드레싱이 상처 표면에 부드럽게 부착되도록 폴리머 또는 검 또는 수지 또는 젤라틴이 혼입될 수 있다. 그와 같은 제품은 약간 내지는 적당히 삼출되는 비-공동 상처를 치료하는데 적합할 것이다. 그와 같은 드레싱은, 이 드레싱이 적소에 유지되게 하거나 항균성 장벽을 제공하는 2차 드레싱을 필요로 하지 않을 것이다.
임의로, 하이드로콜로이드 겔은 베이스 매트릭스 겔의 수분 수용능력을 증가시키도록 알기네이트를 함유할 수 있다. 이는 적당한 내지는 많은 삼출물을 갖는 상처에서 바람직할 것이다. 그와 같은 기본적인 알기네이트 겔은 US 6201164에 기재되어 있다.
전술된 바로부터 명확해지듯이, 알기네이트 기반의 상처 드레싱, 예를 들면, 건조한, 실질적으로 건조하거나 축축한 섬유상 또는 겔은, 본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM-함유 입자에 대한 중요한 전달 시스템이다. 알기네이트 기반의 드레싱은 ESM 입자를 다수의 다양한 방식 및 형태로 상처로 전달할 수 있는 유연성 있고 개작가능한 기술을 나타낸다. 본 발명에서 사용되는 ESM 입자가 알기네이트와 조합되는 ESM-알기네이트 복합 드레싱이 특히 주목되며, 상처 드레싱, 또는 그 요소는 상기 복합 혼합물로부터 제조되거나 제자리에서 형성된다. 그러한 드레싱은 많은 삼출물을 갖는 상처의 관리에 특히 유용하다. 상기 복합 드레싱은 재생되는 조직과의 ESM 접촉을 촉진시키면서 과량의 삼출물을 흡수하기 때문에 상처 베드에서 유리한 수분 수준을 유지한다. 그와 같은 드레싱 또는 ESM-알기네이트 복합체를 함유하는 그 요소는 상처 분비액을 흡수할 수 있는 건조한, 실질적으로 건조한 또는 축축한 형태로 제공될 수 있다.
알기네이트가 충분한 양의 2가 또는 3가 금속 양이온 (예를 들면, Ca2 +, Be2+, Mg2 +, Sr2 +, Ba2 +, Fe2 +, Fe3 +, Al3 + 또는 Zn2 +)의 존재 하에서는 가교결합된 겔을 형성시키는 능력을 갖지만 충분한 양의 2- 또는 3가 금속 양이온의 부재 하에 또는 1가 금속 양이온 (예를 들면, Na+, Li+, K+, Rb+ 또는 Cs+)의 존재 하에서는 높은 물 보유 특성 및 비-가교결합된 겔을 형성시키는 능력에도 불구하고 알기네이트가 수용액 중에 본질적으로 가용성이기 때문에, ESM-알기네이트 복합 드레싱이 제조될 수 있다. 가장 간단하게는, ESM이 유체 알기네이트 용액과 혼합될 수 있고, 그 후, 상처 내에서 Ca2 +와 접촉되자 마자, 예를 들면, 이 상처 자체 내에서 차후 가교결합 또는 침전이 개시될 수 있다.
2- 또는 3가 금속 이온-알기네이트 겔은, 특히 물질의 수분 흡수성에 의해 결정되며 차례로 2- 또는 3가 금속 이온 치환 정도에 의해서 결정되는 가변되는 물질 특성을 갖는다. 따라서, 알기네이트 함유 혼합물 내에서 2- 또는 3가 금속 이온:1가 금속 이온 (예를 들면, Ca2 + 및 Na+)의 비를 가변시킴으로써, 광범위한 특성을 갖는 겔 스펙트럼을 제조할 수 있다. 사용 전에 그와 같은 겔로부터 수분을 제거함으로써, 사용 시에는 상당한 수분 흡수성을 갖는, 섬유를 포함하는 건조한 형태를 제조할 수 있다. 유리하게는, 흡수성 알기네이트 드레싱은 2- 또는 3가 금속 이온 알기네이트와 1가 금속 이온 알기네이트의 혼합물을 기반으로 할 수 있다. 상기 2- 또는 3가 금속 이온 알기네이트는 드레싱의 구조적 강도에 기여하며 1가 금속 이온 알기네이트는 흡수를 촉진시킨다. 과량의 2- 또는 3가 금속 이온 알기네이트가, 물질 내 2- 또는 3가 금속 이온의 농도를 계수할 수 없음으로 해서 상처 위치에서 확인된 생리적 용액에 의해 유연한 겔 형태로 복귀될 수 없는 드레싱을 초래할 것이므로, 균형이 맞춰져야 한다. 과량의 1가 금속 이온 알기네이트는 감소된 강도 및 더욱 불량한 취급 특성, 특히 섬유 품질을 초래할 것이다. 그럼에도 불구하고, 1가 금속 이온 알기네이트와 ESM 입자의 복합 혼합물은 유용함을 증명할 수 있는데, 그 이유는 Ca2 +로의 노출이 제자리에서 일어날 수 있고 따라서 제자리 가교결합된 겔 형성, 즉 제자리에서의 드레싱 형성이 일어날 수 있기 때문이다.
실시예 6 내지 9에 기재되었듯이, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자를 1가 금속 이온 알기네이트 (나트륨 알기네이트)의 용액에 부가하고, 상기 혼합물을 상처 자체로부터의 Ca2 + 또는 Ca2 + 용액 (CaCl2)을 사용하여 차후 겔화시키면 예를 들면, 과립, 겔 패드 및 섬유 형태의 ESM-알기네이트 복합 드레싱의 토대를 형성할 수 있다. 그와 같은 형태를 건조시켜서 수분 함량을 낮춰서, 사용 및 보관시에 흡수성을 향상시키고 운송 및 보관을 촉진시킬 수 있다. 많은 다른 구조적 형태가 당업자에게 자명할 것이며 과도한 부담없이 제조될 수 있고, 예를 들면, 분말은 ESM 입자 및 1가 금속 이온 알기네이트의 용액을 2- 또는 3가 금속 이온 용액 내로 분무시키거나 분무 건조를 통해서 형성될 수 있다. 알기네이트 섬유의 제조는 문헌 [Qin, Y., 2008, Polymer International, 57:171-180]에서 고찰되고 있고, 상기 문헌의 내용은 본원에 참고로 편입된다. 따라서, 예를 들면, 상기 킨의 문헌에 기재된 대로 본 발명에서 사용되는 ESM 입자는 칼슘, 나트륨, 칼슘-나트륨, 아연 및 은 알기네이트 및 알긴산 섬유에 포함될 수 있다.
따라서, 추가의 특정 구현예에서, 본 발명은, 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자와 알기네이트의 복합 혼합물을 포함하는 (예를 들면, 이로부터 형성된) 상처 드레싱, 또는 그 구조적 요소를 추가로 제공한다. 상기 드레싱은 적절한 경우에 본 발명의 방법 및 의학적 치료에서 사용하도록 제공될 수 있다.
알기네이트에 대한 언급에는, 문맥이 다른 것을 명시하지 않으면 알긴산이 포함된다. 드레싱의 알기네이트는 알긴산, 2가 금속 이온 알기네이트, 3가 금속 이온 알기네이트 및/또는 1가 금속 이온 알기네이트, 예를 들면, 상기 언급된 것들, 특히 각각 Ca2 + 및/또는 Na+ 알기네이트일 수 있다. 바람직하게는, 상처 드레싱의 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자와 알기네이트의 복합 혼합물은 겔, 예를 들면, 가교결합된 겔, 예컨대 그와 같은 겔로부터 형성된 섬유, 패드, 과립 및 분말이다. 알기네이트는 전형적으로 예를 들면, 적어도 35 kDa의 폴리머, 또는 복수의 상이한 크기의 폴리머일 것이지만, 더 작은 올리고머가 상기 폴리머 대신에 또는 상기 폴리머와 함께 사용될 수 있다.
상처 드레싱의 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자와 알기네이트의 복합 혼합물은 건조할 (건식 시험 방법 상에서의 손실에 의해 측정된 2 중량% 미만의 수분), 실질적으로 건조할 (5 중량% 미만의 수분) 또는 축축할 (5 중량% 초과의 수분) 수 있다.
상처 드레싱의 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자와 알기네이트의 복합 혼합물은 대안적으로 분말, 과립, 대규모(macroscale) 고체 지지체 (예를 들면, 패드 또는 스폰지) 또는 섬유의 형태일 수 있다. 상기 상처 드레싱은 상기 분말, 과립, 대규모 고체 지지체, 또는 섬유 중 하나 이상으로 필수적으로 구성될 수 있다. 다른 구현예에서, 상처 드레싱은 적어도 제2 구조 요소, 예를 들면, 막-, 섬유- 또는 겔 기반의 드레싱의 맥락에서 상기한 막, 섬유 및 겔로부터 형성된 구조 요소를 포함할 수 있다. 불투과성 배킹이 주목될 수 있다.
부가적인 겔 유변성 개질 물질, 예를 들면, 카복시메틸셀룰로오스, 하이드록시에틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스 또는 펙틴이, 예를 들면, 상기 복합체의 수분 보유 특성 및/또는 기계적 특성을 추가로 개질시키기 위해 복합 혼합물 내로 혼입될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM 함유 입자는 또한 이식가능한 의료 기기 내로 또는 그 위로 혼입될 수 있고, 따라서 상처로의 적용은 이러한 방식으로 또한 성취될 수 있다. 그러한 의료 기기는, 상처를 초래하는 임의 종류의 경피 기기 및/또는 라인 (예를 들면, 중심 정맥 카테터, 특히 커프스, 예를 들면, 다크론 또는 콜라겐 커프스를 갖는 카테터), 인공 기기, 예를 들면, 심장 판막, 인공 관절, 치과 이식물 및 인공 연질 조직 이식물 (예를 들면, 유방, 엉덩이, 및 입술 이식물), 스텐트, 심장박동기, 및 기관절개술 관을 포함하지만 이것들로 제한되지 않는 본원에 기재된 것들일 수 있다.
카테터, 예를 들면 혈액투석 카테터의 임상적 유용성은 이들이 감염되게 되는 경우로 제한된다 (Wayne et al 2005; J Am Soc Nephrol 16: 1453-1462). 출구 위치는 세균 성장을 감소시키도록 항생제로 처리될 수 있지만, 그와 같은 사용은 종종 항생제 내성의 발생과 관련된다. 많은 경우에, 일단 출구 위치가 만성적으로 감염되면, 카테터는 제거되어야 한다. 출구 위치 주변의 상처 회복 및 조직 성장을 촉진시킬 뿐 아니라 세균 성장을 억제시킴으로써, 본원에서 정의된 미분화된 ESM 함유 입자는 예를 들면, 카테터의 감염 없는 유용한 임상 수명을 연장시킬 것이다. 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자로 코팅된 카테터 외부 위에 성장 중인 조직은, 출구 위치를 통한 잠재적 감염 경로를 효과적으로 막을 것이다.
따라서, 추가 측면에서, 본 발명은, 민감한 표면 또는 그 일부, 예를 들면 경피 커프스가 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자로 사전처리된 이식가능한 의료 기기를 제공한다.
"사전처리된"은, 민감한 표면이, 대상체 중에 이식되기 전에, 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자가 상당한 시간의 지속기간 동안 상처 치유 또는 본원에 기재된 임의의 또는 상처 효과를 촉진시키기에 충분한 지속시간 동안 상기 표면 위에서 존속되게 하는 방식으로 상기 입자에 노출됨을 의미한다. 바람직하게는 상기 입자는 표면의 실질적으로 유용한 수명 동안 존속될 것이며, 예를 들면, 사전처리에 의해 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자의 실질적으로 영구적인 코팅이 얻어진다. 따라서 사전-처리된 표면/기기는, 여기에 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자가 적용되고 이 위에 상기 입자가 유지되는 표면/기기이다. 그와 같은 기기/표면은 코팅되고/되거나 함침된 기기/표면일 수 있다. 바람직하게는 코팅은 복수, 즉 적어도 2개 층의 ESM 입자를 포함할 것이다.
사전처리는 임의의 편리한 수단, 예를 들면 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자를 표면에 적용하는 것, 특히 표면을 코팅하는 것, 예를 들면, 분무 코팅, 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자가 혼입되어 있는 폴리머를 사용한 폴리머 코팅, 또는 견고한 하이드로겔 또는 하이드로콜로이드를 표면 상에 배치하는 것 중 임의의 형태에 의해서 성취될 수 있다. 코팅은 이식 직전에 또는 이식 동안 수행될 수 있다. 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자를 함유하는 그러한 "코팅" 조성물은 본 발명의 추가 측면이다. 대안적으로, 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자는, 기기 또는 이것의 민감한 부분이 제조되는 물질 내로 혼입되거나 함침될 수 있다. 이 방법은 폴리머, 예컨대 플라스틱 및 실리콘으로부터 제조된 기기, 또는 그 구성 부분에 적합하다. 따라서, 미분화된 ESM-함유 입자 코팅 또는 코팅 조성물을 포함하거나, 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자가 혼입되어 있거나 이것으로 함침된 비활성(inanimate) 표면을 포함하는 이식가능한 의료 기기가 고려된다.
본 발명은 또한, 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자를 포함하는 조성물, 상처 드레싱 또는 이식가능한 기기를 제조 또는 제작하기 위한, 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자의 용도를 제공한다.
본 발명에 따른 사용을 위해 제안된 미분화된 ESM-함유 입자는 단일 약제학적 제형 또는 조성물 또는 드레싱 또는 기기 (예를 들면, 본원에 기재된 것들)로, 예를 들면 함께 투여될 다른 치료제와 함께, 또는 별도로 (즉, 별개, 순차 또는 동시 투여를 위해) 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM-함유 입자는 예를 들면, 약제학적 키트 내에서 또는 조합된 ("조합") 제품으로 제2 (또는 추가의) 치료적 활성제와 함께 조합될 수 있다. 상기 추가 치료제는 임의의 편리한 수단, 및 그래서 반드시는 아니지만 국소 수단, 예를 들면, 비경구 또는 장관 (예를 들면, 경구, 정맥내 또는 흡입에 의한)에 의해 투여될 수 있다. 상기 제제는 별도로, 또는 동일한 조성물 또는 드레싱 또는 기기 중에서 함께, 예를 들면, 임의의 원하는 시간 간격에서 동시에 또는 순차적으로 또는 별도로 사용될 수 있다.
본 발명의 하나의 유리한 구현예에서, 본원에서 정의된 미분화된 ESM-함유 입자는 본 발명의 방법에서 제2 또는 추가의 임상적으로 유용한 항균제 (이하에서, "추가의 항균제")와 함께 사용될 수 있다. 상기 제제는 별도로, 또는 동일한 조성물 또는 드레싱 또는 기기 중에서 함께, 예를 들면, 임의의 원하는 시간 간격에서 동시에 또는 순차적으로 또는 별도로 사용될 수 있다.
따라서, 대표적인 예로, 상기 입자가 상처에 적용된 다음에 상기 추가의 항균제가 사용될 수 있지만, 일부 상황에서는 선행하거나 동시적인 사용이 유익할 수 있다.
대표적인 항생제에는 아미노글리코사이드 (예를 들면, 아미카신, 젠타마이신, 카나마이신, 네오마이신, 네틸마이신, 스트렙토마이신, 토브라마이신); 카르베세펨 (예를 들면, 로라카르베프); 제1 세대 세팔로스포린 (예를 들면, 세파드록실, 세파졸린, 세팔렉신); 제2 세대 세팔로스포린 (예를 들면, 세파클로르, 세파만돌, 세팔렉신, 세폭시틴, 세프프로질, 세푸록심); 제3 세대 세팔로스포린 (예를 들면, 세픽심, 세프디니르, 세프디토렌, 세포페라존, 세포탁심, 세프포독심, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심, 세프트리악손); 제4 세대 세팔로스포린 (예를 들면, 세페핌); 매크롤라이드 (예를 들면, 아지트로마이신, 클라리트로마이신, 디리트로마이신, 에리트로마이신, t-롤레안도마이신); 모노박탐 (예를 들면, 아즈트레오남); 페니실린 (예를 들면, 아목시실린, 암피실린, 카르베니실린, 클록사실린, 디클록사실린, 나프실린, 옥사실린, 페니실린 G, 페니실린 V, 피페라실린, 티카르실린); 폴리펩타이드 항생제 (예를 들면, 바시트라신, 콜리스틴, 폴리믹신 B); 퀴놀론 (예를 들면, 시프로플록사신, 에녹사신, 가티플록사신, 레보플록사신, 로메플록사신, 목시플록사신, 노르플록사신, 오플록사신, 트로바플록사신); 설폰아미드 (예를 들면, 마페나이드, 설파세타마이드, 설파메티졸, 설파살라진, 설피속사졸, 트리메토프림-설파메톡사졸); 테트라사이클린 (예를 들면, 데메클로사이클린, 독시사이클린, 미노사이클린, 옥시테트라사이클린, 테트라사이클린); 카르바페넴 (예를 들면, 이미페넴, 메로페넴, 에르타페넴, 도리페넴, 파니페넴/베타미프론, 비아페넴, PZ-601); 클로람페니콜; 클린다마이신, 에탐부톨; 포스포마이신; 이소니아지드; 리네졸라이드; 메트로니다졸; 니트로푸란토인; 피라진아미드; 퀴누프리스틴/달포프리스틴; 리팜핀; 스펙티노마이신; 및 반코마이신이 포함되지만 이것들로 포함되지 않는다.
대표적인 방부제에는 염소 표백제 (나트륨 하이포클로라이트), 4차 암모늄 화합물 (예를 들면, 벤즈알코늄 클로라이드, 세틸트리메틸암모늄 브로마이드, 세틸피리디늄 클로라이드), 과산화수소, 페놀 화합물 (예를 들면, TCP 트리클로산), 알콜 (예를 들면, 에탄올), VirkonTM, 아이오딘 화합물 (예를 들면, 포비돈-아이오딘), 은 화합물 (예를 들면, 원소 은 나노/마이크로입자)이 포함되지만 이것들로 제한되지 않는다.
항균성 계면활성제가 또 하나의 부류의 방부제이다. 이들은 미생물 세포 막 및 다른 구조적 성분을 파괴하는 화합물이며, 따라서 미생물의 성장 및/또는 생존 능력을 억제한다. 항균성 계면활성제, 및 항균 조성물 내에서 이들의 용도는 당해 분야에 잘 공지되어 있고, 추가 지침을 위해 문헌 ["Preservative-free and self-preserving cosmetics and drugs - Principles and practice", Ed. Kabara and Orth, Marcel Dekker, NY, NY, 1997]에서의 항균성 계면활성제의 논의가 필요하며, 상기 문헌 전체는 참고로 명백하게 편입된다. 항균성 계면활성제는 음이온성, 양이온성, 비-이온성 또는 양쪽성일 수 있다. 항균성의 음이온성 계면활성제에는 나트륨 도데실 설페이트 (나트륨 라우릴 설페이트), 나트륨 도데실 아미노프로피온산, 나트륨 리시놀리에이트, 담즙산, 알킬아릴 설포네이트, 그릴로산 DS7911, 이나트륨 운데실렌산 모노에탄올 아미도설포석시네이트가 포함되지만 이것들로 제한되지 않는다. 항균성의 양이온성 계면활성제의 예에는 4차 암모늄 화합물, 아민이미드 및 클로르헥시딘 화합물이 포함되지만 이것들로 제한되지 않는다. 항균성의 비-이온성 계면활성제의 예에는 지방산의 모노에스테르, 알킬디하이드록시벤조산의 폴리에틸렌글리코모노에스테르, 글루코사민 유도체 및 N-라우로일 디펩타이드의 디에탄올아미드가 포함되지만 이것들로 제한되지 않는다. 항균성의 양쪽성 계면활성제의 예에는 알킬 베타인, 알킬아미도프로필베타인, 알킬 아미노프로피오네이트, 알킬이미노디프로피오네이트 및 알킬이미다졸린이 포함되지만 이것들로 제한되지 않는다.
대표적인 항진균제에는 폴리엔 (예를 들면, 나타마이신, 리모시딘, 필리핀, 니스타틴, 암포테리신 B, 칸디신); 이미다졸 (예를 들면, 미코나졸, 케토코나졸, 클로트리마졸, 에코나졸, 비포나졸, 부토코나졸, 펜티코나졸, 이소코나졸, 옥시코나졸, 세르타코나졸, 설코나졸, 티오코나졸); 트리아졸 (예를 들면, 플루코나졸, 이트라코나졸, 이사부코나졸, 라부코나졸, 포사코나졸, 보리코나졸, 테르코나졸); 알릴아민 (예를 들면, 테르비나핀, 아모롤핀, 나프티핀, 부테나핀); 및 에키노칸딘 (예를 들면, 아니둘라펑진, 카스포펑진, 미카펑진)이 포함되지만 이것들로 제한되지 않는다.
대표적인 항바이러스제에는 아바카버, 아시클로버, 아데포버, 아만타딘, 암프레나버, 아르비돌, 아타자나버, 아트리플라, 보세프레버, 시도포버, 콤비버, 다루나버, 델라버딘, 디다노신, 도코사놀, 에독수딘, 에파비렌즈, 엠트리시타빈, 엔푸비르티드, 엔테카버, 팜시클로버, 포미버센, 포삼프레나버, 포스카넷, 포스포넷, 간시클로버, 이바시타빈, 이뮤노버, 이독서리딘, 이미퀴모드, 인디나버, 이노신, 인터페론 유형 III, 인터페론 유형 II 인터페론 유형 I, 라미부딘, 로피나버, 로비리드, 마라비록, 모록시딘, 넬피나버, 네비라핀, 넥사버, 오셀타미버, 펜시클로버, 페라미버, 플레코나릴, 포도필로톡신, 랄테그라버, 리바비린, 리만타딘, 리토나버, 사퀴나비, 스타부딘, 테노포버, 테노포버 디소프록실, 티프라나버, 트리플루리딘, 트리지버, 트로만타딘, 트루바다, 발라시클로버, 발간시클로버, 비크리비록, 비다라빈, 비라미딘, 잘시타빈, 자나미버, 및 지도부딘이 포함되지만 이것들로 제한되지 않는다.
추가의 항균성 제제는 편리하게는 본 발명에서 사용되는 미분화된 ESM-함유 입자 전에, 이와 동시에 또는 이후에 적용될 수 있다. 편리하게는, 상기 추가의 항균제는 ESM 입자와 실질적으로 동시에 또는 그 후에 적용된다. 예를 들면, 추가의 항균성 제제는 ESM 입자가 투여된 후 적어도 1시간에, 바람직하게는 적어도 3시간에, 더 바람직하게는 적어도 5시간에 및 가장 바람직하게는 적어도 6시간에 적용된다. 다른 구현예에서, 추가의 항균제는 편리하게는 ESM 입자에 앞서, 예를 들면, ESM 입자에 앞서 적어도 1시간에, 적어도 3시간에, 적어도 6시간에 적용되거나 투여될 수 있다. 이러한 구현예에서, ESM 입자는 추가 항균제를 추가로 적용하거나 추가로 적용하지 않고 적용되거나 투여될 수 있다. 추가 항균제의 항균 효과를 최적화하기 위해, 이 항균제는 사용된 제제에 대하여 적절한 시점에서 반복적으로 제공 (예를 들면, 투여 또는 전달) 될 수 있다. 당업자는 적합한 용량 또는 사용 계획을 고안할 수 있다. 장기간 치료에서, ESM 입자는 또한 반복적으로 사용될 수 있다. 이는 추가 항균제만큼 빈번할 수 있지만, 덜 빈번할 수 있다. 필요한 빈도수는 집락 조성, 사용된 항균제 및 이것의 투여 경로에 따를 것이며, 당업자는 결과를 최적화하도록 용량 또는 사용 패턴을 최적화할 수 있다.
성장 인자, 예를 들면, PDGF, FGF, EGF, TGF, hGF와 조합하여 또는 함께 본원에서 정의된 미분화된 ESM 함유 입자를 사용하는 것이 또한 유익할 수 있다. 적합한 치료 계획은 추가 항균제의 사용 맥락에서 설명된 바와 같을 수 있다.
항-염증제, 예를 들면, 항-염증성 스테로이드 또는 NSAID와 조합하여 또는 함께 본원에서 정의된 미분화된 ESM 함유 입자를 사용하는 것이 또한 유익할 수 있다. 대표적인 NSAID에는 살리실레이트 (예를 들면, 아스피린 (아세틸살리실산), 콜린 마그네슘 트리살리실레이트, 디플루니살, 살살레이트, 프로피온산 유도체 (예를 들면, 이부프로펜, 덱시부프로펜, 덱스케토프로펜, 페노프로펜, 플루르비프로펜, 케토프로펜, 록소프로펜 나프록센, 옥사프로진), 아세트산 유도체 (예를 들면, 아세클로페낙, 디클로페낙, 에토돌락, 인도메타신, 케토롤락, 나부메톤, 톨메틴, 설린닥), 엔올산 유도체 (예를 들면, 드록시캄, 이속시캄, 로르녹시캄, 멜록시캄, 피록시캄, 테녹시캄), 안트라닐산 유도체 (예를 들면, 플루페남산, 메클로페남산, 메페남산, 톨페남산) 및 선택적 COX-2 억제제 (콕시브; 예를 들면, 셀레콕시브, 에토리콕시브, 루미라콕시브, 파레콕시브, 로페콕시브, 발데콕시브)가 포함되지만 이것들로 제한되지 않는다. 프로피온산 유도체 (예를 들면, 이부프로펜, 덱시부프로펜, 덱스케토프로펜, 페노프로펜, 플루르비프로펜, 케토프로펜, 록소프로펜 나프록센, 옥사프로진)가 바람직하며, 이부프로펜이 가장 바람직하다. 적합한 치료 계획은 추가 항균제의 사용 맥락에서 설명된 바와 같을 수 있다.
본 발명을 하기 비-제한적인 실시예를 참고로 추가로 설명할 것이다:
도 1에는, 100 μm의 평균 입자 직경을 갖는 ESM 입자의 존재 (0.003 g 또는 0.01 g의 부가된 ESM 입자) 또는 부재 하에 대장균에 대한 세균 성장 곡선이 도시되어 있다. 하부 2개의 흔적은 부가된 ESM이다.
도 2에는, NF-kB-활성에 의해 측정된, LPS에 대한 NF-kB-조절된 루시퍼라아제 리포터 작제물을 함유하는 U937 인간 단핵구 세포의 염증 반응에 대한, 100 μm 미만의 평균 입자 직경을 갖는 ESM 입자의 효과가 도시되어 있다. 대조 = ESM 부가되지 않음. 비-LPS: 좌측 막대; LPS: 우측 막대.
도 3에는, 재조합 MMP-9의 활성에 대한, 100 μm 미만의 평균 입자 직경을 갖는 ESM 입자의 효과가 도시되어 있다. MMP9가 없는 경우: 좌측 막대; MMP9가 있는 경우: 우측 막대.
도 4에는, 도 3에 표시된 결과를 나타내는데 사용된 것과 동일한 검정에서 MMP-9 활성에 대한 MMP 억제제 GM6001의 효과가 도시되어 있다.
도 5에는, 회전하는 블레이드 블렌더에서 건조 ESM 플레이크를 분쇄시켜 형성된 ESM 섬유가 도시되어 있는데, 상기 건조 ESM 플레이크는 WO 2015/058790 (PCT/EP2013/072049)에 그리고 이상에 기재된 대로 비-ESM 알 성분으로부터 ESM을 분리하고, 이렇게 얻어진 ESM 플레이크를 0.1% 염산으로 세척하여, ESM 플레이크 내 임의의 잔여 탄산칼슘을 제거하고, ESM 플레이크를 건조시켜서 제조하였다.
도 6에는 치료 후 남아있는 상처 면적 백분율에 의해 측정된, db/db 당뇨병 마우스에서 전층 결손 상처(full-thickness excisional wound)의 봉합에 대한, 4개의 상이한 ESM 입자 제형의 효과가 도시되어 있다. 상기 4개의 ESM 제형은 실시예 10에 기재되어 있다. 이러한 치료로부터의 데이터는, '치료되지 않은' 군 (음성 대조) 및 양성 대조 (0.5% HPMC (하이드록시프로필 메틸 셀룰로오스) 중에서 혈소판-유래 성장 인자-BB (rh-PDGF-BB [10μg]) 및 변환 성장 인자-알파 (rh-TGF-α [1μg])를 사용한 치료)로부터의 데이터에 대하여 도식화되어 있다.
도 7에는 도 6의 음성 및 양성 대조로부터의 데이터가 도시되어 있다.
도 8에는 도 6의 음성 및 양성 대조 및 ESM-30으로부터의 데이터가 도시되어 있다.
도 9에는 도 6의 음성 및 양성 대조 및 ESM-10으로부터의 데이터가 도시되어 있다.
도 10에는 도 6의 음성 및 양성 대조 및 ESM-3으로부터의 데이터가 도시되어 있다.
도 11에는 도 6의 음성 및 양성 대조 및 ESM-1로부터의 데이터가 도시되어 있다.
도 12에는, NF-kB-활성에 의해 측정된, LPS에 대한 NF-kB-조절된 루시퍼라아제 리포터 작제물을 함유하는 U937 인간 단핵구 세포의 염증 반응에 대한, 상이한 평균 입자 직경을 갖는 동일한 질량의 ESM 입자의 효과가 도시되어 있다. 치료되지 않은 군: 1 mm보다 큰 ESM 단편; A & B: 크기 250 μm 미만인 분쇄된 ESM 입자; C: 크기 120 μm 미만인 분쇄된 ESM 입자; D: 크기 80 μm 미만인 분쇄된 ESM 입자.
실시예 1
ESM의 항균 활성
도입
ESM 입자 (평균 입자 직경 100 μm)의 항균 활성을, 자동화 Bioscreen C 시스템에서 ESM 입자와 함께/없이 배양된 세균 배양물의 성장 곡선을 측정함에 의해서 시험하였다.
물질 및 방법
대장균을 37℃에서 24시간 동안 BHI 우무배지 (뇌 심장즙 우무배지) 상에서 배양시키고, 우무배지 판으로부터 하나의 집락을 취하고 이것을 5 ml의 BHI 배지 내로 현탁시켜서 대장균에 대한 접종물을 제조하였다. 그 후, 10μl의 접종물을 350μl의 BHI 배지에 접종시키고 벌집모양 미량역가판 내로 평판배양시켰다. 대장균 접종물이 없는 멸균 BHI 배지를 대조로서 사용하였다.
OD600 (광학 밀도)을 매회 측정하기 전에 흔들면서, 자동화 Bioscreen C 시스템에서 ESM 입자가 없는 제1 배양을 37℃에서 24시간 동안 수행하였다. 24시간의 배양 후에, 오토클레이브 처리한 ESM 입자 (0.003 g 및 0.01 g)를 대장균(Escherichia coli) 샘플에 그리고 상기 멸균 배지에 부가하였다. ESM 입자를 갖는/갖지 않는 멸균 BHI 배지를 대조로서 사용하였다.
결과 및 결론
0.003 g 또는 0.01 g의 ESM 입자를 부가한 후의 성장 곡선은 40시간 동안 ESM 입자가 없는 샘플에 대해서와 동일하였고 그 후에는 급격하게 감소된 반면, ESM 입자가 없는 샘플은 증가를 보였다. 결과는, ESM 입자가 대장균의 생존 능력 및/또는 성장을 억제함을 보여주었다 (도 1).
실시예 2
ESM의 항-염증 효과
도입
전사 인자 NF-kB는 스트레스 및 염증 반응에서 중요한 역할을 한다. U937 3x NF-kB-LUC 세포계, 3x NF-kB-루시퍼라아제 리포터 작제물로 안정하게 형질감염된 인간 단핵구 세포주 (U937)를, NF-kB 발현에 의한 세포성 염증 반응에 대한 ESM 입자 (평균 입자 직경 100 μm)의 잠재적인 생물활성을 조사하는데 사용하였다.
물질 및 방법
비 부착성 U937 3xNF-kB-LUC 세포를 DMEM 배지 (Sigma) 내 96웰 역가 판에 파종하고, 37℃ 및 5% CO2에서 배양시켰다. LPS로 처리 (1.0 μg/ml)하기 30분 전에 5시간 동안 인큐베이션시켜 (루시퍼라아제 활성에 비례하는) 염증 효과를 유도함으로써 상이한 농도의 ESM 입자의 항-염증 효과를 시험하였다 (0 mg/ml, 0.5 및 1 mg/ml). 인큐베이션의 마지막에, Bright-Glo 루시퍼라아제 검정 (Promega)을 사용하여 루시퍼라아제 활성을 측정하였다. 이 검정에서, LPS 노출에 따른 루시퍼라아제 활성이 낮을수록 항-염증 효과는 커진다.
결과 및 결론
LPS 유도된 염증 반응은 ESM 입자에 의해 용량 의존적인 방식으로 감소되었는데, 이는 항-염증 효과를 나타낸다. 도 2에는 1 mg/ml 농도에서의 ESM 입자의 효과가 도시되어 있다.
실시예 3
MMP 조절 효과
도입
매트릭스 메탈로프로테나아제 (MMP)는 세포외 매트릭스 성분을 소화할 수 있는 분비되거나 막-관련된 단백질 부류이다. MMP-9 활성에 대한 ESM 입자 (평균 입자 직경 100 μm)의 효과를 SensoLyte® Generic MMP 검정 키트 "Fluoremetric" (AnaSpec)를 사용하여 시험하였다. 재조합 MMP를 사용한 MMP 유도제 또는 억제제의 스크리닝은 이 검정 키트에 의해서 가능하다.
물질 및 방법
상기 SensoLyteRTM Generic MMP 검정 키트 his 키트에서는 효소 활성을 연속적으로 측정하기 위해 5-FAM (형광단) 및 QXL520™ (켄쳐) 표지된 FRET 펩타이드 기질이 사용된다. 무손상 FRET 펩타이드에서, 5-FAM의 형광성은 SensoLyteRTM에 의해서 소멸된다. MMP에 의해 FRET 펩타이드를 절단하자 마자, 5-FAM의 형광성은 회복되며, 여기/방출 = 490 nm/520 nm에서 연속적으로 모니터될 수 있다.
상이한 양의 ESM 입자를 재조합 MMP-9 (AnaSpec)에 부가하였고, 제조 과정에 따라 효소 활성을 측정하였다. 또한, GM6001, MMP 활성의 일반적인 억제제를 시험관 내 시스템에서의 억제에 대한 양성 대조로서 사용하였다.
결과 및 결론
ESM 입자를 부가함에 의해 재조합 MMP-9의 활성은 감소되었는데, 이는 MMP 활성에 대한 ESM 입자의 네거티브한 효과를 보여준다 (도 3).
실시예 4
상처로 적용하기 위한 미분화된 ESM 입자의 조제물
정제 및 밀링 후에, ESM은, 의료 기기로서의 앞으로의 가공에 적합한 낮은 내독소 및 낮은 미생물오염도 물질이다. 정제된 ESM 물질을, 예를 들면 알루미늄 호일 또는 타이벡(Tyvec) 재료로 제작된 1 g 향낭에 채워서 건조 분말 제형을 제조한다. 그 후, 밀봉한 향낭을 감마 방사선 (바람직하게는 25 kGy)으로 멸균시킨다.
상기 건조 분말 제형은, 상처 표면이 0.5 mm 또는 그 미만의 층까지 덮여지도록 이 분말을 흩뿌려서 상처 표면에 적용할 수 있다. ESM은 고유한 수분 흡수 능력을 갖지 않아서, 부가적인 상처 드레싱, 예컨대 하이드로콜로이드, 알기네이트 또는 섬유 드레싱이 드레싱된 상처의 최상부 위에 놓여져야 한다. 유사하게, 죽은조직제거술이 필요한 건조한 상처에 대해서는, 상처 표면을 먼저 하이드로겔 제형으로 치료한 다음, 건조 분말 ESM을 하이드로겔의 최상부에 흩뿌렸다.
치료 동안 및 드레싱 교체 시에, ESM 제품은 식염 용액 또는 다른 생리적 용액을 사용하여 씻음으로써 상처를 용이하게 씻어낼 수 있다. 이는 드레싱 교체 동안에 또는 치유 상태의 감염에 대하여 상처를 살펴보는데 필요할 수 있다.
최선으로, ESM 치료된 상처를 2차 드레싱으로 덮어서 ESM이 적소에 유지되게 하고 조직 재성장을 위한 축축한 환경을 촉진시킨다. 많은 삼출물이 있는 상처에서는, 상처를 고성능 드레싱, 예컨대 하이드로화이버(hydrofiber) 드레싱, 예를 들면, Aquacel로 덮는 것이 바람직할 것이다.
실시예 5
하이드로콜로이드 ESM 입자 겔의 생산 및 적용
하이드로콜로이드 겔은 상처 관리에 사용되며 연질 또는 수성 겔, 또는 견고하고 단단한 겔로서 공급될 수 있다. 견고한 하이드로겔은 상표명 Granuflex 및 Duoderm으로 판매되고 있다. 상기 하이드로겔은 적절한 분비액 흡수성을 가지며 상처 베드 및 주변 피부에 짓무름을 일으키지 않으면서 축축한 상처 베드를 유지한다. 습윤화에 따라서, 하이드로겔은 팽창하며 점성을 유지하고 흡수된 분비액을 보유한다. 연질 또는 수성 하이드로겔은 당해 분야에, 예컨대 US 5503847에 기재되었다.
ESM이 혼입되어 있는 기능성 하이드로겔은 펙틴, 나트륨 카복시메틸 셀룰로오스 및 프로필렌 글리콜로부터 제조될 수 있다. 이 실시예에서는, 펙틴의 농도가 0.05% 내지 1%이고, CMC의 농도는 2% 내지 4.5%이며, 프로필렌 글리콜의 농도는 15 내지 20%이고, ESM의 농도는 0.5% 내지 10%이다. 물은 100 중량%에 대한 잔여물을 구성한다. 이 구현예에서, 상기 제형은 부가적으로 상처를 깨끗이 하고 죽은 조직을 제거하고 적절한 양의 삼출물을 흡수할 수 있다. 이러한 기능은, 프로테아제에 결합하고/하거나 프로테아제가 상처 베드 파괴로부터 회피되게 하고 세포성 부착 및 상처 베드를 통한 이동을 가능케 하는 스캐폴드로 작용하는 ESM의 활성을 증가시킨다.
펙틴을 먼저 분산시키고 대략 50℃로 적절하게 가열시켜서 물에 용해시킨다. 그 후, 프로필렌 글리콜을 혼합을 이용하여 부가한 다음, 세게 혼합시키면서 CMC를 서서히 부가한다. 20 내지 30℃로 냉각되면, ESM 입자를 혼합을 이용하여 부가한다. 일단 혼합되면, ESM 입자가 하이드로콜로이드 내에 현탁액으로서 균일하게 분산된다. 그 후, 상기 겔을 알루미늄 또는 유사 튜브, 또는 향낭 중에 분배하고 감마 방사선, 바람직하게는 25 kGy에 의해 멸균시킨다. 상기 겔을 냉각된 5℃에서 보관하거나, 실온에서 보관할 수 있다.
하이드로콜로이드 제형은 이상적으로, 깊은 공동을 갖거나 건강한 피부 아래에 터널형성될 수 있는 상처에 적합하다. 후자 유형의 상처에서는, 상기 겔을 주사기 내로 로딩시킨 다음, 상기 공동으로 전달하여 모든 상처 표면이 덮여지게 할 수 있다.
추가의 구현예에서, ESM 입자를 실질적으로 순수한 물/하이드록시에틸셀룰로오스 하이드로겔로 제형화할 수 있다. 그와 같은 제형을 진탕 또는 교반을 사용하여 물에 HEC를 용해시키고 상기 HEC 수용액 내에 ESM을 분배하여 제조할 수 있다. 그 후, ESM-HEC 하이드로겔을 편리한 용기 내로, 예를 들면, 튜브 또는 향낭 내로 채울 수 있고, 그 후 채워진 용기를 예를 들면, 25 kGy에서의 감마 방사선을 사용하여 멸균시킬 수 있다.
최선으로, 그 후 상처를 2차 드레싱, 예컨대 반-투과성 막으로 덮어서 축축한 환경을 유지하고 하이드로콜로이드를 적소에 유지시킨다.
멸균성 장벽으로 작용할 수 있을 뿐 아니라 상처 표면 내 수분 관리에서 기능을 담당하는 반-투과성 배킹 시트가 혼입되어 있는 단단하거나 견고한 겔 하이드로콜로이드가 또한 제조될 수 있다. 그와 같은 단단한 물질에는, 드레싱이 상처 표면에 부드럽게 부착되도록 폴리머 또는 검 또는 수지 또는 젤라틴이 혼입될 수 있다. 그와 같은 제품은 약간 내지는 적절히 삼출되는 비-공동 상처를 치료하는데 적합할 것이다. 그와 같은 드레싱은, 이 드레싱이 적소에 유지되게 하거나 항균 장벽을 제공하는 2차 드레싱을 필요로 하지 않을 것이다.
임의로, 하이드로콜로이드는 베이스 매트릭스 겔의 수분 수용능력을 증가시키도록 알기네이트를 함유할 수 있다. 이는 적당한 내지는 많은 삼출물을 갖는 상처에서 바람직할 것이다. 그와 같은 기본적인 알기네이트 겔이 US 6201164에 기재되어 있다.
실시예 6
ESM 나트륨 알기네이트 복합체 과립의 생산
이 실시예에서는, 본 발명에서 사용되는 ESM 입자 (섬유)를 나트륨 알기네이트와 조합시켜서 과립화된 분말을 형성시킨다. 상기 과립은 직경이 대략 100-200 μm인 비교적 큰 입자이다. 이 크기 범위는 제품을, 최종 포장 용기로부터 손으로 직접 흩뿌림으로써 살포에 의해 상처에 적용하기가 비교적 용이하게 한다. 상처와의 접촉 시에, 알기네이트 성분은 분비액, (Ca2 +를 함유하는) 상처 삼출물을 흡수하고, 겔로 팽창된다 (제자리 드레싱). 그 후, ESM 입자가 상처로부터 직접적으로 또는 겔로부터 간접적으로 수화되고 상처 표면과 접촉된다.
구체적으로, 40 중량%의 ESM 입자 및 60 중량%의 40% Na 알기네이트 용액을 조합시켜서 과립을 형성시킨다. 그 후, 상기 조합물을 균일한 농도가 얻어질 때까지 회전식 드럼 혼합기에서 혼합시킨다. 이 물질은 촉촉한 덩어리와 유사하다. 그 후, 이것을 유동층 건조기로 옮기고, 건조 시험 방법 또는 이와 대등한 방법 상에서의 손실에 의해 수분이 5% 중량/중량 미만일 때까지 공기 건조시킨다. 그 후, 이 물질은 굵은 빵부스러기와 유사하다. 그 후, 이것을 200 μm 체를 사용하여 콘 밀링(cone milling) 시켜서, 200 μm 미만의 ESM과 알기네이트가 결합된 과립을 생성시킨다. 이것을 추가로 스크리닝하여 더욱 작은 입자를 제거할 수 있다. 그 후, 과립화된 생성물을 포장하고, 바람직하게는 감마 방사선에 의해 또는 에틸렌 옥사이드 처리에 의해 멸균시킨다.
부가적인 물질, 예컨대 카복시메틸셀룰로오스 또는 하이드록시에틸셀룰로오스를 상기 과립 내로 혼입시켜서 복합체의 수분 보유 특성을 추가로 개질시킬 수 있다.
실시예 7
ESM 나트륨 알기네이트 복합체 패드의 생산
40 중량% ESM 입자 및 60 중량%의 40% Na 알기네이트 용액을 조합시키고, 균일한 농도가 얻어질 때까지 회전식 드럼에서 혼합시킨다. 이 물질은 축축한 덩어리와 유사하다. 그 후, 상기 축축한 덩어리를 금형 내로 채운 다음, 동결 건조시키거나 진공 건조시켜서 패드를 생산한다. 수분 농도가 건조 시의 손실에 의해 5% 중량/중량 미만이 될 때까지, 건조를 진행한다.
상처와의 접촉 시에, 상기 패드의 알기네이트 성분은 분비액, (Ca2 +를 함유하는) 상처 삼출물을 흡수하고, 겔로 팽창된다 (제자리 드레싱). 그 후, ESM 입자가 상처로부터 직접적으로 또는 겔로부터 간접적으로 수화되고 상처 표면과 접촉된다.
상기 패드를 또한 다른 물질과 조합시켜 하이브리드 드레싱, 예를 들면, 다량의 삼출물이 있는 상처로부터 누출을 방지하기 위한 불투수성 배킹을 갖는 드레싱을 제조할 수 있다.
부가적인 물질, 예컨대 카복시메틸셀룰로오스 또는 하이드록시에틸셀룰로오스를 상기 패드 내로 혼입시켜 복합체의 수분 보유 특성을 추가로 개질시킬 수 있다.
실시예 8
ESM 칼슘 알기네이트 복합체 패드의 생산
이 실시예에서는, ESM 입자를 용액 상태의 Na 알기네이트와 조합시킨다. 그 후, CaCl2를 부가함에 의해 가용성 알기네이트를 용액으로부터 침전시켜서, ESM이 분포되어 있는 Ca 알기네이트의 불용성 겔 매트릭스를 형성시킨다.
구체적으로, 본 발명에서 사용되는 건조 ESM 입자 (섬유)를 먼저 1% 중량/용적으로 물에 현탁시킨 다음, 충분한 Na 알기네이트 분말과 조합시켜서 2% 중량/용적의 알기네이트 용액을 얻는다. 상기 현탁액은 Na 알기네이트를 용해시키도록 대략 50℃로 가열할 필요가 있을 수 있다. 그 후, 현탁액을 경화를 위해 금형에 위치시킨다. 그 후, 10% CaCl2 용액을 2%의 최종 농도로 각각의 금형에 천천히 부가하고, 생성물을 0 내지 30℃에서 24시간 동안 충분히 경화시킨다. 24시간 후에, 경화 및 Ca 알기네이트 형성 동안 상기 겔로부터 방출된 과량의 물을 흡출에 의해 제거하고, 금형을 동결 건조기 또는 진공 건조기에 위치시킨다. 건조 시 손실에 의해 수분 농도가 5% 중량/중량 미만일 때까지 건조를 진행한다. 그 후, 생성물을 포장하고, 바람직하게는 감마 방사선에 의해 또는 에틸렌 옥사이드 처리에 의해 멸균시킨다.
상기 패드를 또한 다른 물질과 조합시켜 하이브리드 드레싱, 예를 들면, 다량의 삼출물이 있는 상처로부터 누출을 방지하기 위한 불투수성 배킹을 갖는 드레싱을 제조할 수 있다.
부가적인 물질, 예컨대 카복시메틸셀룰로오스 또는 하이드록시에틸셀룰로오스를 상기 패드 내로 혼입시켜 복합체의 수분 보유 특성을 추가로 개질시킬 수 있다.
실시예 9
ESM 칼슘 알기네이트 복합체 섬유의 생산
이 실시예에서는, ESM 입자를 방사 제조 공정 동안 Ca 알기네이트 섬유 내로 혼입시킨다. 나트륨 알기네이트와 ESM의 혼합물을 방적돌기를 통해 CaCl2 욕 내로 압출시킨다. CaCl2 처리에 의해 알기네이트 폴리머를, ESM 물질이 혼입되는 불용성 섬유 내로 침전시킨다. 과립 및 비드는 적합한 분무 수단에 의해 유사하게 형성될 수 있었다.
구체적으로, pH 대략 7.0의 탈이온수, Na 알기네이트 및 본 발명에서 사용되는 ESM 입자 (섬유)로부터 방사 용액을 제조한다. 최종 알기네이트 섬유의 두께 및 직경은 용액의 점도에 의해서 한정되는데, 상기 점도는 차례로 방사 용액의 농도에 의존한다. ESM 입자를 먼저 1% 내지 50% w/v로 물에 현탁시킨 다음, Na 알기네이트 분말을 대략 5-6% w/v의 농도로 부가한다. 상기 현탁액을 전단에 의해서 혼합시킨다. Na 알기네이트를 용해시키도록 현탁액을 대략 50℃로 가열시킬 필요가 있을 수 있다. 그 후, 상기 혼합물을 2% CaCl2를 함유하는 수욕 내로 방사시켜서, 알기네이트를 Ca 복합체 (겔)로 침전시킨다. 이 공정 동안, ESM 입자가 Ca 알기네이트 매트릭스 내로 분산되게 되어 복합 섬유상 구조가 형성된다.
그 후, 방사된 섬유를 드럼 롤러 상에서 수집하고 상기 킨의 문헌에 기재된 대로 추가로 가공하여 이들의 겔 및 흡수 특성을 개질시킬 수 있다. 세척 공정 동안 Ca2 +을 Na+으로 이온 교환시키면 증가된 수분 흡수성을 갖는 섬유가 얻어진다. 따라서, 일정 범위의 특성을 갖는 섬유가 얻어지며, 이 섬유는 광범위한 상처 유형에 적합하다. 다른 양이온 (예를 들면, 아연 및 은)과의 이온 교환을 수행하여 섬유를 추가로 기능화시킬 수 있다.
그 후, 방사된 섬유를 (상기) 킨의 문헌에 기재된 대로 표준 기술에 의해 메쉬(mesh)로 형성시킬 수 있다. 방사된 섬유를 또한 다른 물질과 조합시켜서, 하이브리드 드레싱, 예를 들면, 다량의 삼출물이 있는 상처로부터 누출을 방지하기 위한 불투수성 배킹을 갖는 드레싱을 제조할 수 있다. 그 후, 이러한 제품을 포장하고, 예를 들면 사용 전에 감마 방사선에 의해 멸균시킬 수 있다.
부가적인 물질, 예컨대 카복시메틸셀룰로오스 또는 하이드록시에틸셀룰로오스를 상기 섬유 내로 혼입시켜 복합체의 수분 보유 특성을 추가로 개질시킬 수 있다.
실시예 10
db/db 당뇨병 마우스에서 전층 결손 상처의 치유에 대한 ESM 입자의 영향 조사
도입
인지되고 광범위하게 사용된, 지연된 상처 치유의 동물 모델 - 당뇨병 (db/db) 마우스 모델 (즉, BKS.Cg-m Dock7m +/+ Leprdb/J 마우스)에서의 이 연구는, 상처 관리 및 조직 회복에서 ESM 입자의 미래 적용을 위하여 지연된 상처 치유의 인지된 생체 내 모델에서 조직 회복을 촉진시키는 상기 입자의 능력에 대하여 4개의 ESM 입자 제형을 평가하도록 수행되었다.
상기 4개 제형의 각각을 사용하여 치료된 상처의 치유 반응을, 서로 그리고 (i) "치료되지 않은 군" (음성 대조) 및 (ii) 양성 대조 치료군 (0.5% HPMC 중의 혈소판-유래 성장 인자-BB [rh-PDGF-BB] + 변환 성장 인자-알파 [rh-TGF-α])에 노출시킨 상처의 치유 반응과 비교하였다.
이 실시예는, 상기 당뇨병 마우스에서 전층 결손 피부 상처의 상처 봉합 (시간 경과에 따른 개방된 상처 면적에서의 감소)에 대한 이러한 4개 ESM 입자 조제물의 영향을 상술한다. 상처 봉합 데이터는, 각각의 평가 시점에서 각각의 상처로부터 취해진 평가된(scaled) 상처 이미지로부터 측정되었다. 주어진 시점에서 주어진 상처의 면적은, 손상 직후 (즉, 0일째) 그 상처 면적의 백분율로 표시되었다. 남아있는 상처 면적의 평균 백분율 (및 평균의 표준 편차)을 각각의 군에 대하여 계산하였고, 이는 도 6 내지 11에 그래프로 도시되어 있다
표 1 - 치료 계획
Figure pct00001
* 주의: 치료 군 2, 3, 4 & 5에 대해서는, ESM-30 및 ESM-10을 투여한 상처 표면에 단단한 생성물이 형성되었기 때문에 4일째 치료가 종결되었다. 연구를 표준화하기 위해서, 모든 군에서 4일째 치료를 종결하였다.
물질 및 방법
ESM 입자는 모두 정제된 물질의 동일한 배치(batch)로부터의 것이었고, 이것을 10 ml의 마개 있고 주름진 유리 바이알 내로 과량으로 등분하고, 감마 방사선 (대략 25 kGy)으로 멸균하였다. 30 및 10 mg 단위를 건조 분말로서 상처에 직접 적용하였다. 3 및 1 mg 등분을 주입을 위해 50 μl의 물에 수화시킨 다음, 현탁액으로서 상처 표면 위에 피펫팅하였다.
양성 대조는 0.5% HPMC 비히클 (하이드록시프로필 메틸 셀룰로오스, Sigma Aldrich, UK)에서 제조하였다. 0.5 g의 하이드록시-프로필-메틸 셀룰로오스 (HPMC)를 가온, 교반 및 냉각의 도움으로 100 ml 증류수에 용해시켰다. 수산화나트륨을 부가하여 pH가 최대 7.0이 되게 하였다.
결과
1) "시간에 따라 남아있는 상처 면적%" 데이터의 상처 봉합 프로파일은, 상이한 치료 군 사이에서 눈에 띄게 상이한 것으로 확인되었다 (도 6). 성장 인자 조합물이 투여된 상처 (양성 대조)는 가장 신속한 봉합 속도를 나타내는 것으로 확인되었다 - 이는 상처형성 후 16일째까지의 전(full) 상처 봉합에 가까움을, 그리고 연구 기간 후 8일째부터의 치료되지 않은 상처와 비교하여 유의미하게 더 높은 수준의 상처 봉합을 실증한다 (p=0.000, 만-휘트니 U 검정) (도 7).
2) ESM-30이 투여된 상처는 상처 면적에서 초기 증가를 실증하는 것으로 확인되었다 (4일 째에 관찰됨). 이것은 치료되지 않은 상처에 비하여 통계학적으로 유의미한 것으로 확인되었다 (p≤0.02, 만-휘트니 U 검정). (오히려 상처 팽창보다는) 상처 봉합이 이 치료 군에서 8일 후로부터 관찰되었다. 그러나, 평균 상처 면적은 8일째에 치료되지 않은 상처보다 약간 더 크게 남아 있었다. 치료되지 않은 상처에 비하여 유의미하게 증가된 상처 봉합이 12일 후로부터 관찰되었다 (p≤0.005, 만-휘트니 U 검정) (도 8).
3) 다른 모든 치료 군 내 상처: EMS-10, EMS-3 및 EMS-1은 8일 이후로부터 치료되지 않은 상처와 비교하여 유의미하게 증가된 상처 봉합을 실증하는 것으로 확인되었다 (p≤0.000, 만-휘트니 U 검정) (도 9 내지 11).
4) EMS 치료 군의 비교 시에:
i. EMS-30이 투여된 상처는, 4일 및 8일째에 EMS-10이 투여된 상처보다 유의미하게 더 큰 것으로 확인되었다 (p=0.001).
ii. EMS-30이 투여된 상처는, 4 내지 12일째에 EMS-3 또는 EMS-1이 투여된 상처보다 유의미하게 더 큰 것으로 확인되었다 (p=0.038).
iii. 8일 및 12일째에, 최고 농도의 ESM (ESM-30)이 사용된 경우에 최저 수준의 봉합이 관찰되었고, 최저 농도의 ESM (ESM-1)이 사용된 경우에 최고 양의 상처 봉합이 관찰되었다.
iv. 8일째에, ESM-1을 사용한 경우에 관찰된 상처 봉합에서의 증가는 ESM-10 및 ESM-3과 비교하여 근접하게 유의미한 것으로 관찰되었다 (각각 p=0.075 및 p=0.063, 만-휘트니 U 검정).
v. ESM-30을 사용한 경우에는 16일째와 비교하여 20일째에, 남아있는 평균 상처 면적에서의 작은 증가가 관찰되었다.
5) 양성 대조와 i) 16일 및 20일째의 ESM-10 및 ii) 20일째의 ESM-1 사이에서는 유의미한 차이가 관찰되지 않았다.
실시예 11
상이한 크기의 ESM 입자의 항-염증 효과
물질 및 방법
비 부착성 U937 3xNF-kB-LUC 세포를 DMEM 배지 (Sigma) 내 96웰 역가 판에 파종하고 37℃ 및 5% CO2에서 배양시켰다. 상이한 크기 (250 μm 미만, 120 μm 미만 및 80 μm 미만)의 ESM 입자의 항-염증 효과를 시험하였다. 정해진 질량(set mass)의 입자를 LPS로 치료 (1.0 μg/ml)하기 30분 전에 상기 세포에 5시간 동안 적용하여 (루시퍼라아제 활성에 비례하는) 염증 효과를 유도하였다. 인큐베이션 마지막에, Bright-Glo 루시퍼라아제 검정 (Promega)을 사용하여 루시퍼라아제 활성을 측정하였다. 이 검정에서, LPS 노출에 따른 루시퍼라아제 활성이 낮을수록, 시험 물질의 항염증 효과가 더욱 크다.
결과 및 결론
도 12에 도시되어 있듯이, ESM 입자 크기와 항-염증 활성 사이에는 간접적인 관련성이 있다. 80 μm 미만의 입자는 이 크기 초과의 입자보다 더욱 효능 있다. 도 12에서 치료되지 않은 군으로 이름 붙여진 1 mm 초과의 ESM의 큰 입자 또는 단편은 최저 활성을 갖는다.

Claims (26)

  1. (i) 세포외 매트릭스(ECM) 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 부적절한 수준의 매트릭스-메탈로프로테나아제(MMP) 활성, 및/또는
    (ii) 과도한 염증 반응의 위험이 있거나 이들이 존재하는 만성 상처의 치유를 촉진시키는데 사용되는, 미분화된 ESM으로 필수적으로 구성되고 100 μm 미만의 평균 입자 직경을 갖는, 입자.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 입자가 최대 80, 60, 40, 20, 15, 10, 5, 또는 1 μm의 평균 입자 직경을 갖는, 입자.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 입자가 적어도 1, 5, 10, 15, 20, 40, 60, 또는 80 μm의 평균 입자 직경을 갖는, 입자.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ESM이 닭, 오리, 거위, 칠면조, 뿔닭, 타조, 비둘기, 꿩, 자고, 뇌조 또는 갈매기 ESM, 바람직하게는 사육용 닭(Gallus gallus domesticus) ESM인, 입자.
  5. 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ESM이 상응하는 조류 공급원으로부터의 천연 ESM과 비교하여 화학적으로 실질적으로 분해되지 않으며, 소화되지 않고/않거나 변성되지 않은, 입자.
  6. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ESM이 실질적으로 가수분해되지 않은, 입자.
  7. 청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ESM이 중성 pH의 물에 실질적으로 가용되지 않는, 입자.
  8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, ESM 단백질 및/또는 펩타이드 성장 또는 분화 인자에 대한 상처 내 MMP의 활성이, 상기 입자를 상처에 적용한 후에 감소되거나 제한되는, 입자.
  9. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MMP가 MMP-2, MMP-8 및 MMP-9 중 하나 이상으로부터 선택되는, 입자.
  10. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상처 내 염증이 상기 입자를 상처에 적용한 후에 감소되거나 제한되는, 입자.
  11. 청구항 1 내지 10 중 어느 한 항에 있어서, 상처 중에 존재하는 미생물의 생존 능력 및/또는 성장이 상기 입자를 상처에 적용한 후에 또한 억제되는, 입자.
  12. 청구항 11에 있어서, 상기 미생물이 시트로박터, 엔테로박터, 에셰리키아, 하프니아, 세라티아, 예르시니아, 펩토스트렙토코커스, 박테리오데스, 슈도모나스, 레지오넬라, 스타필로코커스, 엔테로코커스, 스트렙토코커스, 클레브시엘라, 칸디다, 프로테우스, 버크홀데리아, 푸소박테리움 또는 미코박테리움 속으로부터 선택되며, 바람직하게는 미생물이 에셰리키아 콜라이 (대장균), 엔테로코커스 파에칼리스 스타필로코커스 아우레우스, 스타필로코커스 에피더미디스, 레지오넬라 뉴모필라, 칸디다 알비칸스, 슈도모나스 아에루기노사, 버크홀데리아 세파시아 또는 스트렙토코커스 피오게네스인, 입자.
  13. 청구항 1 내지 12 중 어느 한 항에 있어서, 상처 조직 세포의 생존 능력 및/또는 성장이 상기 입자를 상처에 적용한 후에 또한 촉진되는, 입자.
  14. 청구항 1 내지 13 중 어느 한 항에 있어서, 상처 조직 세포의 상처 내로의 이동이 상기 입자를 상처에 적용한 후에 또한 촉진되는, 입자.
  15. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서, 상처가 피부 상처 및/또는 이식가능한 의료 기기를 포함하는 상처인, 입자.
  16. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, 입자가 상처 드레싱 형태로 상처에 적용되는, 입자.
  17. 청구항 16에 있어서, 상처 드레싱이 하이드로콜로이드 또는 하이드로겔 드레싱인, 입자.
  18. 청구항 16 또는 17에 있어서, 상처 드레싱이 알기네이트를 포함하는, 입자.
  19. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, 입자가, 민감한 표면, 또는 그 일부가 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에서 정의된 하나 이상의 입자로 사전처리된 이식가능한 의료 기기 형태로 상처에 적용되는, 입자.
  20. 민감한 표면, 또는 그 일부가 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에서 정의된 하나 이상의 입자로 사전처리된, 이식가능한 의료 기기.
  21. 신생물 또는 그 일부가 외과적으로 제거된 위치에서 신생물과 싸우거나 신생물의 전이를 방지하는 방법에서 사용되는, 미분화된 ESM으로 필수적으로 구성되고 100 μm 미만의 평균 입자 직경을 갖는, 입자.
  22. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에서 정의된 입자의 제조 방법으로서,
    상기 ESM을 제공하는 단계, 및
    ESM에 미분화 공정 및 입자 크기 선택 공정을 실시하는 단계를 포함하는, 제조 방법.
  23. 청구항 22에 있어서, 상기 미분화 공정이 볼 밀링(milling), 비드 밀링, 제트 밀링 및 보텍스(vortex) 밀링으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 제조 방법.
  24. 청구항 22 또는 23에 있어서, 상기 입자 크기 선택 공정이 체 분리 또는 스크리닝인, 제조 방법.
  25. 청구항 22 내지 24 중 어느 한 항에 있어서, ESM 또는 상기 미분화된 ESM이 약산 용액과 접촉되는, 제조 방법.
  26. 청구항 25에 있어서, 상기 약산 용액이 약 0.1% 염산 또는 아세트산의 수용액인, 제조 방법.
KR1020177011901A 2014-10-28 2015-10-28 미분화된 알껍데기 막 입자, 및 상처 치유를 촉진시키기 위한 이것의 용도 Active KR102683921B1 (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1419183.7A GB201419183D0 (en) 2014-10-28 2014-10-28 Micronized eggshell membrane particles and the use thereof in the promotion of wound healing
GB1419183.7 2014-10-28
GB1506504.8 2015-04-16
GBGB1506504.8A GB201506504D0 (en) 2015-04-16 2015-04-16 Micronized eggshell membrane particles and the use thereof in the promotion of wound healing
GB1511476.2 2015-06-30
GBGB1511476.2A GB201511476D0 (en) 2015-06-30 2015-06-30 Micronised eggshell membrane particles and the use thereof in the promotion of wound healing
PCT/EP2015/075041 WO2016066718A1 (en) 2014-10-28 2015-10-28 Micronized eggshell membrane particles and the use thereof to promote the healing of wounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20170077145A true KR20170077145A (ko) 2017-07-05
KR102683921B1 KR102683921B1 (ko) 2024-07-11

Family

ID=54360467

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020177011901A Active KR102683921B1 (ko) 2014-10-28 2015-10-28 미분화된 알껍데기 막 입자, 및 상처 치유를 촉진시키기 위한 이것의 용도

Country Status (12)

Country Link
US (2) US11992508B2 (ko)
EP (1) EP3212204B1 (ko)
JP (1) JP6772160B2 (ko)
KR (1) KR102683921B1 (ko)
CN (1) CN107106733A (ko)
AU (1) AU2015340635B2 (ko)
CA (1) CA2963595C (ko)
DK (1) DK3212204T3 (ko)
ES (1) ES2739227T3 (ko)
PL (1) PL3212204T3 (ko)
PT (1) PT3212204T (ko)
WO (1) WO2016066718A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021251747A1 (ko) * 2020-06-10 2021-12-16 서울대학교산학협력단 생체적합성이 향상된 난각막을 포함하는 피부 재생 또는 상처 치료용 지지체 및 이의 제조방법

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2015340635B2 (en) 2014-10-28 2021-03-11 Biovotec As Micronized eggshell membrane particles and the use thereof to promote the healing of wounds
EP3313464B1 (en) * 2015-06-24 2020-08-26 Biovotec AS Tissue engineering scaffolds comprising particulate egg shell membrane
GB201519923D0 (en) 2015-11-11 2015-12-23 Biovotec Dac And Biovotec As Dry biocompatible disintegrateable films for delivering particulate egg shell membrane to a wound
JP2018052855A (ja) * 2016-09-29 2018-04-05 株式会社 アルマード 卵殻膜含有粉末を含む腸内フローラ改善剤
JP7086517B2 (ja) * 2016-09-29 2022-06-20 株式会社 アルマード 卵殻膜含有粉末を有効成分として含む腸内フローラ改善用組成物
WO2018062354A1 (ja) * 2016-09-29 2018-04-05 株式会社 アルマード 卵殻膜含有粉末を含む腸内フローラ改善剤および腸内フローラ改善用組成物
CA3013007C (en) * 2017-04-10 2019-07-02 Ecopoxy Inc. System and apparatus for processing waste egg shells into products
CN109010896B (zh) * 2018-07-26 2021-04-13 华中农业大学 一种耐水增强型伤口愈合薄膜及其制备方法
WO2020128114A1 (es) * 2018-12-18 2020-06-25 Torolis Explotaciones S.L. Procedimiento para la obtención de membrana de huevo soluble
US12472285B2 (en) * 2019-01-15 2025-11-18 University Of Massachusetts Eggshell particle containing hydrogels and prepolymer compositions for biomedical applications
US12195755B2 (en) 2019-05-20 2025-01-14 Brown University Placental lipid bilayer for cell-free molecular interaction studies
US12509559B2 (en) 2019-10-28 2025-12-30 Brown University Bacterial beta-lactamase responsive hydrogels
KR102246788B1 (ko) * 2021-02-24 2021-04-30 송성은 수용성난각막단백질 및 수용성고분자키토산을 포함하는 상처 드레싱용 실리카 하이드로겔 패치, 및 이의 제조방법
EP4169507A1 (en) * 2021-10-21 2023-04-26 Philipps-Universität Marburg Composition, method for its preparation and its use for increasing the solubility of active substances
WO2025133828A1 (en) * 2023-12-18 2025-06-26 Osiris Therapeutics, Inc. Sterilized hydrogel compositions and related methods

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH02231426A (ja) * 1989-03-03 1990-09-13 Q P Corp 皮膚塗布用製剤
KR20000038061A (ko) * 1998-12-03 2000-07-05 김효근 상처치료용 드레싱제의 제조방법

Family Cites Families (95)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA721555A (en) 1965-11-16 Neuhauser Irene Egg shell membrane biological dressings
GB949946A (en) 1959-10-08 1964-02-19 Irene Neuhauser Improvements in or relating to products for use in healing
US3196075A (en) 1960-10-03 1965-07-20 Neuhauser Irene Assisting healing of skin-denuded areas on the human body with dried fibrous egg-shell membrane products and compositions therefor
US3194732A (en) * 1960-10-03 1965-07-13 Neuhauser Irene Assisting healing of skin-denuded areas on the body with dried non-fibrous egg-shellmembrane products and compositions therefor
FR1348353A (fr) 1960-10-08 1964-01-10 Fabrication de produits à base de membrane de coquille d'oeuf
US3400199A (en) 1965-02-26 1968-09-03 Leslie L. Balassa Wound-healing cartilage powder
BE677335A (ko) 1966-03-03 1966-09-05
US3558771A (en) 1968-02-12 1971-01-26 Leslie L Balassa Process for using eggshell compositions for promoting wound healing
US3804949A (en) 1968-02-12 1974-04-16 Lescarden Ltd Process of promoting healing of wounds
GB1251720A (ko) 1969-02-03 1971-10-27
FR2035769A1 (en) 1969-03-11 1970-12-24 Balassa Leslie Chitin and egg-shell prepns for cicatrising wounds
JPS5015581A (ko) 1973-06-07 1975-02-19
JPS6192443A (ja) 1984-10-11 1986-05-10 Hitachi Ltd 光学的記録再生装置の制御方式
JPS63309273A (ja) 1987-06-12 1988-12-16 Q P Corp 卵殻膜シ−ト
US5196185A (en) 1989-09-11 1993-03-23 Micro-Collagen Pharmaceutics, Ltd. Collagen-based wound dressing and method for applying same
JPH04187976A (ja) 1990-11-22 1992-07-06 Matsushita Refrig Co Ltd 冷蔵庫
JPH0515581A (ja) 1991-07-16 1993-01-26 Q P Corp 卵殻膜シートおよびその製造法
JPH06192443A (ja) 1991-11-28 1994-07-12 Q P Corp 再形成卵殻膜の製造方法
GB9208731D0 (en) 1992-04-22 1992-06-10 Squibb & Sons Inc Hydrocolloid wound gel
JP3393559B2 (ja) 1993-10-15 2003-04-07 株式会社ノエビア 皮膚外用剤
DE4408494A1 (de) 1994-03-14 1995-09-21 Hauni Werke Koerber & Co Kg Verfahren und Vorrichtung zum Fördern von Filterstäben
JPH07277949A (ja) 1994-04-07 1995-10-24 Nippon Fine Chem Co Ltd 浴用剤組成物
JPH0977949A (ja) 1994-11-07 1997-03-25 Heraeus Inc 水性銀組成物
JPH09241146A (ja) 1996-03-06 1997-09-16 Noevir Co Ltd 皮膚外用剤
ATE264119T1 (de) 1996-07-11 2004-04-15 Coloplast As Hydrokolloid-wundgel
US6274163B1 (en) 1998-04-08 2001-08-14 Keraplast Technologies, Ltd. Keratinous protein material for wound healing applications and method
JP3643690B2 (ja) 1998-02-05 2005-04-27 株式会社ノエビア 皮膚外用剤
US6541447B1 (en) 1999-09-01 2003-04-01 B & M Healthcare Technologies, Inc. Wound healing composition and method for use thereof
CN1079257C (zh) 1999-11-16 2002-02-20 唐永奎 烧烫伤散
US7067116B1 (en) 2000-03-23 2006-06-27 Warner-Lambert Company Llc Fast dissolving orally consumable solid film containing a taste masking agent and pharmaceutically active agent at weight ratio of 1:3 to 3:1
US7494669B2 (en) 2001-02-28 2009-02-24 Carrington Laboratories, Inc. Delivery of physiological agents with in-situ gels comprising anionic polysaccharides
JP2002212069A (ja) 2001-12-10 2002-07-31 Noevir Co Ltd 皮膚外用剤
JP3897600B2 (ja) 2002-01-10 2007-03-28 株式会社ノエビア 皮膚外用剤
JP3678415B2 (ja) 2002-01-10 2005-08-03 株式会社ノエビア 皮膚外用剤
JP4187976B2 (ja) 2002-02-06 2008-11-26 株式会社 アルマード 絆創膏
JP2003246741A (ja) 2002-02-25 2003-09-02 Q P Corp 経口用肌改善剤及び肌改善用食品組成物、並びに肌改善方法
JP2004018471A (ja) 2002-06-18 2004-01-22 Shiseido Co Ltd Ｉｖ型、ｖｉｉ型コラーゲン産生促進剤および皮膚基底膜ケア用組成物
EP1541748A4 (en) 2002-07-05 2008-02-20 Idemitsu Technofine Co Ltd FIBER PROCESSING AGENT AND FIBER PROCESSED THEREFOR
JP3814247B2 (ja) 2002-12-13 2006-08-23 三菱重工業株式会社 予混合強制点火式ガスエンジン
CN1202162C (zh) 2003-02-28 2005-05-18 清华大学 鸡蛋壳膜的溶解和成膜方法
US6946551B2 (en) 2003-03-12 2005-09-20 New Life Resources, Llc Preparation of hyaluronic acid from eggshell membrane
US20040180025A1 (en) 2003-03-12 2004-09-16 New Life Resources, Llc Therapeutic, nutraceutical and cosmetic applications for eggshell membrane and processed eggshell membrane preparations
US20080063677A1 (en) * 2004-03-10 2008-03-13 New Life Resources, Llc Therapeutic, nutraceutical and cosmetic applications for eggshell membrane and processed eggshell membrane preparations
US9248146B2 (en) 2003-10-24 2016-02-02 Adhesives Research, Inc. Dissolvable adhesive films for delivery of pharmaceutical or cosmetic agents
CA2543324C (en) 2003-10-24 2011-02-01 Adhesives Research, Inc. Rapidly disintegrating films for delivery of pharmaceutical or cosmetic agents
GB2407580B (en) 2003-10-28 2009-02-25 Univ Cambridge Tech Biomaterial
JP2005194401A (ja) 2004-01-07 2005-07-21 Idemitsu Technofine Co Ltd ポリウレタン樹脂組成物、ポリウレタン樹脂皮膜およびその製造方法、積層体およびその製造方法
US8580315B2 (en) 2004-03-10 2013-11-12 Esm Technologies, Llc Anti-inflammatory activity of eggshell membrane and processed eggshell membrane preparations
CN1233423C (zh) 2004-04-28 2005-12-28 唐宝辉 生物胶原止血绵及其生产工艺
ITMI20040943A1 (it) 2004-05-11 2004-08-11 Icim Internat S R L Composizione farmaceutica cicatrizzante
JP2006069892A (ja) 2004-08-31 2006-03-16 Iwatomo Kk 化粧品
WO2006078824A2 (en) 2005-01-18 2006-07-27 Biova, L.L.C. Eggshell membrane separation method
JP2006326018A (ja) 2005-05-27 2006-12-07 Almado Co Ltd 生理用ナプキン及び生理用ナプキン用付加トップシート
ITMI20051569A1 (it) 2005-08-11 2007-02-12 Biokosmes S R L Composizione cicatrizzante
JP2007197393A (ja) 2006-01-30 2007-08-09 Yukio Hasebe 歯磨
US8604073B2 (en) 2006-03-27 2013-12-10 Ethicon, Inc. Antimicrobial composition
JP2008007419A (ja) 2006-06-27 2008-01-17 Ifuji Sangyo Co Ltd 鶏卵卵殻膜を原料とするタンパク質分解酵素による卵殻膜加水分解物とその製法、並びにこれらを添加した機能物
US20080146869A1 (en) * 2006-10-30 2008-06-19 Hector Chow Adjustable Gastric Band Having Anti-Microbial Coatings
EP2020455A3 (en) 2007-07-30 2010-06-02 Idemitsu Technofine Co. Ltd Fiber, fiber assembly, and fiber producing method
CA2734577A1 (en) * 2007-08-16 2009-02-26 Carnegie Mellon University Inflammation-regulating compositions and methods
US20100254961A1 (en) 2007-09-05 2010-10-07 Taiyokagaku Co., Ltd. Water-soluble electrospun sheet
JP2009089858A (ja) 2007-10-05 2009-04-30 Kakui Kk 創傷面被覆脱脂綿シート体の製造方法及び創傷面被覆脱脂綿シート体
US8197852B2 (en) 2007-10-17 2012-06-12 Biova, L.L.C. Process for solubilizing protein from a proteinaceous material and compositions thereof
US8211477B2 (en) 2007-10-17 2012-07-03 Biova, L.L.C. Solubilized protein composition obtained from eggshell membrane
US7597280B2 (en) 2008-02-19 2009-10-06 Eggshell Resources Inc. Apparatus for separating the organic membrane portion and the mineral portion of broken egg shells
NZ600649A (en) * 2008-02-22 2013-12-20 Angiotech Int Ag Anti-infective device comprising a catheter and an anti-infective composition
CN101288669A (zh) 2008-06-02 2008-10-22 陈铭 一种外用治疗压疮的药粉剂
CN101317965B (zh) 2008-06-27 2010-11-03 王德振 一种治疗癌症的中药制剂
CN102149394A (zh) 2008-07-10 2011-08-10 伊兰·埃利亚斯 利用蛋壳多肽的方法
CN101439114B (zh) 2008-12-31 2011-08-10 赵皓 一种治疗烧烫伤的中药及其制备方法
US20100266646A1 (en) 2009-01-30 2010-10-21 HemCon Medical Technologies, (IP) Ltd. Assemblies, systems, and methods for skin treatment incorporating oxidized cellulose
CN101822783A (zh) 2009-03-04 2010-09-08 魏蕙荣 一种外用治疗压疮的中西药粉剂
US20120142631A1 (en) 2009-04-20 2012-06-07 Apex Laboratories Private Limited Medicinal antidiaper rash cream incorporating a biopolymer and a process to make it
CN101575771A (zh) 2009-06-08 2009-11-11 清华大学 一种采用禽蛋壳膜蛋白制备共混型电纺纤维膜的方法
CN101697815A (zh) 2009-06-23 2010-04-28 张志祥 蛋膜素粉的一种提取方法
CN101837094B (zh) 2010-05-04 2011-09-28 赵宗仙 一种用于治疗褥疮的外用中药制剂
TR201006790A2 (tr) 2010-08-17 2010-12-21 Durmuş Ercan Yumurta kabuk zarından hazırlanan yara örtü malzemesi
TR201007545A2 (tr) 2010-09-15 2011-02-21 Durmuş Ercan Yumurta kabuk tozu ve yumurta kabuk zarı partikülleri içeren ağız sağlığında kullanılacak jel
US20130337080A1 (en) 2011-01-10 2013-12-19 Esm Technologies, Llc Dietary Supplements For Promotion of Growth, Repair and Maintenance of Bone and Joints
WO2012112410A2 (en) 2011-02-14 2012-08-23 Mimedx Group Inc. Micronized placental tissue compositions and methods for making and using the same
US8344106B1 (en) 2011-08-03 2013-01-01 Robert den Hoed Collagen mixture and method of making the same
JP6054020B2 (ja) 2011-08-12 2016-12-27 株式会社ファーマフーズ リジルオキシダーゼ活性を有する卵殻膜粉末
CN102517363A (zh) 2011-11-16 2012-06-27 淮安鸿玛生物科技有限公司 鸡蛋膜胶原多肽的生产方法和应用
KR20130103406A (ko) 2012-03-08 2013-09-23 유키오 하세베 난각막 함유 미분말, 정제, 난각막 함유 미분말의 제조방법 및 정제의 제조방법
JP6122667B2 (ja) 2012-03-14 2017-04-26 長谷部　由紀夫 卵殻膜含有微粉末、錠剤、卵殻膜含有微粉末の製造方法および錠剤の製造方法
CN103300357A (zh) 2012-03-15 2013-09-18 长谷部由纪夫 含蛋壳膜的微粉末、片剂、含蛋壳膜的微粉末的制造方法以及片剂的制造方法
US8904664B2 (en) 2012-08-15 2014-12-09 Mimedx Group, Inc. Dehydration device and methods for drying biological materials
JP5998350B2 (ja) 2013-03-27 2016-09-28 国立大学法人 東京大学 卵殻膜成分を含む肝保護剤ならびにそれを用いた医薬組成物、食品添加物および食品
CN103275205B (zh) 2013-05-08 2014-12-03 江苏福旦生物医药有限公司 一种水溶性禽蛋膜活性肽生产方法
US10166260B2 (en) * 2013-05-24 2019-01-01 Blaine Laboratories, Inc. Wound care product with egg shell membrane
WO2015009256A1 (en) 2013-07-17 2015-01-22 Ercan Durmus Bone graft from ostrich eggshell powder and its preparation method
WO2015058790A1 (en) 2013-10-22 2015-04-30 Agroplas As Method of processing eggshell residues
AU2015340635B2 (en) 2014-10-28 2021-03-11 Biovotec As Micronized eggshell membrane particles and the use thereof to promote the healing of wounds
EP3313464B1 (en) 2015-06-24 2020-08-26 Biovotec AS Tissue engineering scaffolds comprising particulate egg shell membrane
GB201519923D0 (en) 2015-11-11 2015-12-23 Biovotec Dac And Biovotec As Dry biocompatible disintegrateable films for delivering particulate egg shell membrane to a wound

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH02231426A (ja) * 1989-03-03 1990-09-13 Q P Corp 皮膚塗布用製剤
KR20000038061A (ko) * 1998-12-03 2000-07-05 김효근 상처치료용 드레싱제의 제조방법

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021251747A1 (ko) * 2020-06-10 2021-12-16 서울대학교산학협력단 생체적합성이 향상된 난각막을 포함하는 피부 재생 또는 상처 치료용 지지체 및 이의 제조방법
KR20210153474A (ko) * 2020-06-10 2021-12-17 서울대학교산학협력단 생체적합성이 향상된 난각막을 포함하는 피부 재생 또는 상처 치료용 지지체 및 이의 제조방법

Also Published As

Publication number Publication date
DK3212204T3 (da) 2019-08-12
CA2963595A1 (en) 2016-05-06
EP3212204B1 (en) 2019-07-03
AU2015340635A1 (en) 2017-05-25
CN107106733A (zh) 2017-08-29
NZ731569A (en) 2024-05-31
JP6772160B2 (ja) 2020-10-21
US20170319629A1 (en) 2017-11-09
JP2017534681A (ja) 2017-11-24
EP3212204A1 (en) 2017-09-06
US20250082691A1 (en) 2025-03-13
ES2739227T3 (es) 2020-01-29
CA2963595C (en) 2023-07-11
AU2015340635B2 (en) 2021-03-11
PL3212204T3 (pl) 2019-11-29
KR102683921B1 (ko) 2024-07-11
WO2016066718A1 (en) 2016-05-06
PT3212204T (pt) 2019-08-07
US12390495B2 (en) 2025-08-19
US11992508B2 (en) 2024-05-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102683921B1 (ko) 미분화된 알껍데기 막 입자, 및 상처 치유를 촉진시키기 위한 이것의 용도
Yin et al. Rhein incorporated silk fibroin hydrogels with antibacterial and anti-inflammatory efficacy to promote healing of bacteria-infected burn wounds
Tarusha et al. Alginate membranes loaded with hyaluronic acid and silver nanoparticles to foster tissue healing and to control bacterial contamination of non-healing wounds
Priya et al. Bilayer cryogel wound dressing and skin regeneration grafts for the treatment of acute skin wounds
US10932952B2 (en) Dry biocompatible disintegratable films for delivering particulate egg shell membrane to a wound
KR102702872B1 (ko) 미립자 난각막을 포함하는 조직 공학 스캐폴드
Xiong et al. Derma-like antibacterial polysaccharide gel dressings for wound care
JP2019104749A (ja) 創傷治癒のための組成物および使用方法
Uraloğlu et al. An evaluation of five different dressing materials on split‐thickness skin graft donor site and full‐thickness cutaneous wounds: an experimental study
Marchant et al. Review of the role of biofilms in equine wounds: Clinical indications and treatment strategies
JP2019511468A (ja) 慢性創傷を治療するための組成物及び方法
CA2988364C (en) Tissue engineering scaffolds comprising particulate egg shell membrane
Yao et al. Emerging Biomedical Engineering Therapies for Infected Diabetic Foot Ulcers: Toward Antibacterial Functionalization and Pathology‐Responsive Regulation
Liu et al. Analgesic antibacterial anti-inflammatory pregabalin-functionalized hyaluronic acid-chitosan hydrogel for painless burn wound repair

Legal Events

Date Code Title Description
PA0105 International application

St.27 status event code: A-0-1-A10-A15-nap-PA0105

PG1501 Laying open of application

St.27 status event code: A-1-1-Q10-Q12-nap-PG1501

R17-X000 Change to representative recorded

St.27 status event code: A-3-3-R10-R17-oth-X000

AMND Amendment
E13-X000 Pre-grant limitation requested

St.27 status event code: A-2-3-E10-E13-lim-X000

P11-X000 Amendment of application requested

St.27 status event code: A-2-2-P10-P11-nap-X000

P13-X000 Application amended

St.27 status event code: A-2-2-P10-P13-nap-X000

PA0201 Request for examination

St.27 status event code: A-1-2-D10-D11-exm-PA0201

E902 Notification of reason for refusal
PE0902 Notice of grounds for rejection

St.27 status event code: A-1-2-D10-D21-exm-PE0902

T11-X000 Administrative time limit extension requested

St.27 status event code: U-3-3-T10-T11-oth-X000

T11-X000 Administrative time limit extension requested

St.27 status event code: U-3-3-T10-T11-oth-X000

AMND Amendment
P11-X000 Amendment of application requested

St.27 status event code: A-2-2-P10-P11-nap-X000

P13-X000 Application amended

St.27 status event code: A-2-2-P10-P13-nap-X000

E601 Decision to refuse application
PE0601 Decision on rejection of patent

St.27 status event code: N-2-6-B10-B15-exm-PE0601

AMND Amendment
P11-X000 Amendment of application requested

St.27 status event code: A-2-2-P10-P11-nap-X000

P13-X000 Application amended

St.27 status event code: A-2-2-P10-P13-nap-X000

PX0901 Re-examination

St.27 status event code: A-2-3-E10-E12-rex-PX0901

PX0701 Decision of registration after re-examination

St.27 status event code: A-3-4-F10-F13-rex-PX0701

X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant
PR0701 Registration of establishment

St.27 status event code: A-2-4-F10-F11-exm-PR0701

PR1002 Payment of registration fee

St.27 status event code: A-2-2-U10-U12-oth-PR1002

Fee payment year number: 1

PG1601 Publication of registration

St.27 status event code: A-4-4-Q10-Q13-nap-PG1601