KR20170113596A - 섬유증의 치료를 위한 세니크리비록 - Google Patents

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KR20170113596A
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토비라 쎄라퓨틱스, 인크.
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Abstract

본원 발명은 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물, 및 섬유증, 복막염 및 간 손상과 같은 염증 및 연결 조직 질환 및 장애의 치료에 상기 동일한 것을 함유하는 약제학적 조성물의 용도를 포함한다.

Description

섬유증의 치료를 위한 세니크리비록
관련 출원
본 출원은 2015년 2월 10일에 출원된 미국 가출원 제62/114,304호의 이익을 주장하고, 이의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함되어 있다.
기술분야
본 개시물은 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물, 이를 함유하는 약학적 조성물, 이의 제조 방법, 및 염증 및 결합 조직 질환 및 장애, 특히 섬유증, 복막염, 및 간 손상의 치료시의 이의 용도에 관한 것이다.
세니크리비록 (CVC로도 공지됨)은 (S,E)-8-(4-(2-부톡시에톡시)페닐)-1-(2-메틸프로필)-N-(4-(((1-프로필-1H-이미다졸-5-일)메틸)설피닐)페닐)-1,2,3,4-테트라하이드로벤조[b]아조신-5-카복사마이드의 일반 명칭이다. 세니크리비록 메실레이트의 화학 구조는 도 1에 나타나 있다. 세니크리비록은 이에 결합되어 C-C 케모카인 수용체 유형 2 (CCR2) 및　C-C 케모카인 수용체 유형 5 (CCR5) 수용체 (24)의 활성을 억제한다. 이러한 수용체는 바이러스 예컨대 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)의 세포로의 유입에서 역할을 할뿐만 아니라, 손상 부위로 면역 세포의 유입(recruitment)을 위해 중요하다. 이러한 수용체의 활성의 억제는 항-염증 효과를 가질 수 있다. 보다 최근에는, 염증이 섬유증의 발달에서 작용하는 역할이 조사된 바 있다 [30]. C-C 케모카인 수용체 유형 2 (CCR2) 및 CCR5는 간 섬유증을 촉진시키는 역할을 할 수 있다는 것을 나타내었다 [3, 4, 5, 31 32].
발명의 요약
일 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 이를 필요로 하는 대상체에서의 섬유증 또는 섬유성 질환 또는 병태의 치료 방법을 제공한다. 다른 구현예에서, 섬유증 또는 섬유성 질환 또는 병태는 간 섬유증 또는 신장 섬유증이다. 또 다른 추가의 구현예에서, 간 섬유증은 비-알코올성 지방간염 (NASH)과 관련된다. 또 다른 추가의 구현예에서, 간 섬유증은 비-알코올성 지방 간 질환 (NAFLD)과 관련된다. 또 다른 추가의 구현예에서, 간 섬유증은 간경변 발생과 관련된다. 또 다른 추가의 구현예에서, 간 섬유증은 비-간경변 간 섬유증을 포함한다. 추가의 구현예에서, 대상체는 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)에 감염되어 있다. 추가의 구현예에서, 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물은 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물 및 푸마르산을 포함하는 약학적 조성물로서 제형화된다. 추가의 구현예에서, 대상체는 알코올성 간 질환, HIV 및 HCV 동시-감염, HCV 감염, 2형 진성 당뇨병 (T2DM), 대사 증후군 (MS), 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 질환 또는 병태를 가진다.
일 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 세니크리비록, 또는 이의 염 또는 용매화물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 이를 필요로 하는 대상체에서의 NASH의 치료 방법을 제공하고; 여기서 NASH 또는 NASH와 관련된 간 섬유증은 2형 진성 당뇨병 (T2DM)과 관련된다.
일 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 세니크리비록, 또는 이의 염 또는 용매화물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 이를 필요로 하는 대상체에서의 NASH의 치료 방법을 제공하고; 여기서 NASH 또는 NASH와 관련된 간 섬유증은 대사 증후군 (MS)과 관련된다.
일 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 세니크리비록, 또는 이의 염 또는 용매화물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 이를 필요로 하는 대상체에서의 NASH의 치료 방법을 제공하고; 여기서 간 섬유증은 HIV 및 HCV 동시-감염과 관련된다.
일 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 세니크리비록, 또는 이의 염 또는 용매화물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 이를 필요로 하는 대상체에서의 NASH의 치료 방법을 제공하고; 여기서 간 섬유증은 HCV 감염과 관련된다.
일 구현예에서, 본 발명은 치료 방법을 제공하고, 여기서 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물은 경구용 조성물로 제형화된다.
일 구현예에서, 본 발명은 치료 방법을 제공하고, 여기서 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물은 1일 1회 또는 1일 2회 투여된다.
일 구현예에서, 본 발명은 치료 방법을 제공하고, 여기서 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물은 하나 이상의 추가의 활성제와 공동-투여된다. 추가의 구현예에서, 하나 이상의 추가적인 활성제는 유입 억제제, 뉴클레오사이드 역전사효소 저해제, 뉴클레오타이드 역전사효소 저해제, 비-뉴클레오사이드 역전사효소 저해제, 프로테아제 저해제, 인테그라제 가닥 전달 저해제, 성숙 저해제, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 항레트로바이러스제이다. 추가의 구현예에서, 하나 이상의 추가적인 항레트로바이러스제는 라미부딘, 에파비렌즈, 랄테그라비르, 비베콘, 베비리매트, 알파 인터페론, 지도부딘, 아바카비르, 로피나비르, 리토나비르, 테노포비르, 테노포비르 디소프록실, 테노포비르 전구약물, 엠트리시타빈, 엘비테그라비르, 코비시스타트, 다루나비르, 아타자나비르, 릴피비린, 돌루테그라비르, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가의 구현예에서, 하나 이상의 추가적인 활성제는 하나 이상의 면역계 억제제이다. 추가의 구현예에서, 하나 이상의 추가적인 활성제는 사이클로스포린, 타크롤리무스, 프레드니솔론, 하이드로코르티손, 시롤리무스, 에버롤리무스, 아자티오프린, 마이코페놀산, 메토트렉세이트, 바실릭시마맙, 다클리주맙, 리툭시맙, 항-흉선세포 글로불린, 항-림프구 글로불린, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가의 구현예에서, 하나 이상의 추가적인 활성제는 비제한적으로 N-아세틸-L-시스테인 (NAC)뿐만 아니라 안지오텐신-전환효소 (ACE) 저해제, AT II 길항제, 오베티콜산 (OCA), GFT505, 심투주맙, 또는 이들의 조합과 같은 제제를 포함하는 하나 이상의 항섬유화제이다.
일 구현예에서, 본 발명은 섬유증 또는 섬유성 질환 또는 병태에 대해 치료되는 대상체에서 1종 이상의 생물학적 분자의 수준을 검출하는 단계, 및 1종 이상의 생물학적 분자의 수준에서의 증가 또는 감소에 기초하여 치료 요법을 결정하는 단계를 포함하는 치료 방법을 제공하고, 여기서 생물학적 분자는 리포폴리사카라이드 (LPS), LPs-결합 단백질 (LBP), 16S rDNA, sCD14, 장 지방산 결합 단백질 (I-FABP), 조눌린-1, 콜라겐 1a1 및 3a1, TGF-β, 파이브로넥틴-1, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 본 발명은 섬유증 또는 섬유성 질환 또는 병태에 대해 치료되는 대상체에서의 1종 이상의 생물학적 분자의 수준을 검출하는 단계를 포함하는 치료 방법을 제공하고, 여기서 예정된 표준 수준과 비교되는 1종 이상의 생물학적 분자의 수준에서의 증가 또는 감소는 섬유증 또는 섬유성 질환 또는 병태의 치료 효능을 예측적이게 하고, 생물학적 분자는 리포폴리사카라이드 (LPS), LPs-결합 단백질 (LBP), 16S rDNA, sCD14, 장 지방산 결합 단백질 (I-FABP), 조눌린-1, 콜라겐 1a1 및 3a1, TGF-β, 파이브로넥틴-1, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가의 구현예에서, 1종 이상의 생물학적 분자는 섬유증 또는 섬유성 질환 또는 병태에 대해 치료되는 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 측정된다. 또 다른 추가의 구현예에서, 생물학적 샘플은 혈액, 피부, 모발 소낭, 타액, 경구 점액, 질 점액, 땀, 눈물, 상피성 조직, 소변, 정액, 정액, 정액 장액, 전립선 유체, 사정전 유체 (쿠퍼액), 배설물, 생검, 복수, 뇌척수액, 림프, 뇌, 및 조직 추출물 샘플 또는 생검 샘플로부터 선택된다.
일 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 이를 필요로 하는 대상체에서의 복막염의 치료 방법을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서의 복막염의 치료에 사용하기 위한 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서의 복막염의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조를 위한 치료적 유효량의 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물의 용도를 제공한다. 추가의 구현예에서, 복막염은 감염성 또는 비감염성이다. 추가의 구현예에서, 복막염은 위장관의 천공과 관련된다. 또 다른 추가의 구현예에서, 복막염은 복막으로의 유체의 누출과 관련된다. 또 다른 추가의 구현예에서, 복막염은 이물질과 관련된다.
일 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 세니크리비록, 또는 이의 염 또는 용매화물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 이를 필요로 하는 대상체에서의 감염성 복막염의 치료 방법을 제공한다.
일 구현예에서, 세니크리비록, 또는 이의 염 또는 용매화물은 하나 이상의 추가적인 복막염 치료 및 /또는 제제와 결합하여 투여된다. 추가의 구현예에서, 추가적인 활성제는 1종 이상의 항생제이다. 추가의 구현예에서, 1종 이상의 항생제는 페니실린, 세팔로스포린, 매크롤라이드, 플루오로퀴놀론, 설폰아미드, 테트라사이클린, 및 아미노글리코시드 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 본 발명은 치료적 유효량의 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 이를 필요로 하는 대상체에서의 간 손상의 치료 방법을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서의 급성 간 손상의 치료에 사용하기 위한 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에서의 급성 간 손상의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조를 위한 치료적 유효량의 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물의 공동투여의 용도를 제공한다. 일 구현예에서, 간 손상은 아세트아미노펜-유도된 급성 간 손상이다. 일 구현예에서, 간 손상은 약물-유도된 간 손상이다. 일 구현예에서, 간 손상은 알코올-유도된 간 손상이다. 일 구현예에서, 간 손상은 화학물질-유도된 간 손상이다. 일 구현예에서, 간 손상은 독소-유도된 간 손상이다. 일 구현예에서, 세니크리비록, 또는 이의 염 또는 용매화물은 간 손상에 대한 1종 이상의 추가의 치료 및/또는 제제와 결합하여 투여된다. 추가의 구현예에서, 1종 이상의 활성제는 비-아세틸시스테인 (아세틸시스테인; NAC)이다. 일 구현예에서, NAC는 정맥내로 투여된다. 다른 구현예에서, NAC는 경구로 투여된다. 일 구현예에서, 1종 이상의 추가적인 제제는 글루코코르티코이드이다. 일 구현예에서, 1종 이상의 추가적인 제제는 포스포디에스테라제 저해제이다.
도 1은 세니크리비록 메실레이트의 화학식이다.
도 2는 습식 과립화에 의해 제조되고 다양한 산 가용화 부형제와 혼합되는 세니크리비록 메실레이트의 절대 생체이용률과 경구용 용액으로서 배합되는 비글 견종에서의 세니크리비록 메실레이트의 것을 비교하는 그래프이다.
도 3은 건조제와 함께 패키징되는 40℃ 및 75% 상대 습도에서의 가속화 안정성 시험에 제공되는 상이한 세니크리비록 제형의 총 불순물 및 분해물 함량의 그래프이다.
도 4는 상이한 세니크리비록 제형에 대한 동적 수분 흡수 등온선이다
도 5는 비글 견종에서의 3개의 전처리 상태에서의 상이한 제형으로부터의 세니크리비록의 흡수를 나타낸다.
도 6은 병용 정제에서의 세니크리비록 및 라미부딘의 비글 견종의 절대 생체이용률을 나타낸다.
도 7a-b는 24주에서의 연구 202에서의 참가자의 PBMC에서의 세포내 HIV DNA 수준을 나타낸다. 처리 그룹으로 분리된 기준선 및 24주 사이의 세포내 HIV DNA 수준에서의 배수 변화를 도시하는 산점도. 선 및 오차 막대는 각각 평균 및 표준 오차 측정값을 표시한다. 배수 변화는 교정자로서 각각의 환자의 기준선 샘플와 함께 HIV/GAPDH 다중 qPCR 반응에서의 △△CT를 사용하여 계산되었다. a) 전장 HIV DNA (말기 역전사), B) 강한-정지 HIV DNA (초기 역전사).
도 8a-b는 배양액에서의 R5-트로픽 바이러스 RNA 및 p24에 대한 CVC 및 MVC 효과를 나타낸다. a) 감염후 4시간에서의 CVC 또는 MVC로 처리된 대조군 또는 세포의 배양액에서의 바이러스 수치 수준. 오차 바는 표준 편차를 표시한다. 2개의 독립적인 실험이 표시된다. b) 감염후 4시간에서의 CVC 또는 MVC로 처리된 대조군 또는 세포의 배양액에서의 평균 p24 항원 수준. 오차 바는 표준 편차를 나타낸다. 2개의 독립적인 실험이 표시된다.
도 9는 R5-트로픽 세포내 HIV DNA 수준에 대한 CVC 및 MVC의 효과를 나타낸다. 4시간 이후 약물처리하지 않은 대조군과 비교되는 CVC 또는 MVC-처리된 세포의 세포내 강한-정지 DNA 수준의 평균 배수 변화. 오차 바는 표준 편차를 표시한다. 배수 변화는 교정자로서 4시간에서의 약물처리하지 않은 대조군과 함께 HIV/GAPDH 다중 qPCR 반응에서의 △△CT를 사용하여 계산되었다. 2개의 독립적인 실험이 표시된다.
도 10a-b는 CCR5로의 CVC의 다중 결합 방식을 나타낸다. CCR5의 배위결합은 결합 포켓에서의 마라비록에 결합되는 CCR5 결정 구조로부터 생성되었다 (PDB ID: 4MBS). CVC 결합 부위는 CVC의 도킹 이후 조사되었다. CVC의 도킹된 형태는 착색된 세선으로 나타난다. 7개의 막관통 (7TM) a-나선구조가 나선으로 표시되고, 아미노산 서열의 순서에 따라 (1-7)로 넘버링된다. (a) 원형 표시된 3개의 잠재적 결합 부위 (부위 1 (백색), 부위 2 (검은색) 및 부위 3 (선분홍색))을 갖는 수용체의 세포외 부위로부터의 상면도. (b) CCR5 막전위 공간에서의 측면도. 세포외 루프 2 (ECL2)는 라벨링된다. 2차 구조는 카툰 구조(cartoon structure)로서 표시된다. 모든 이미지를 PyMOL 소프트웨어를 사용하여 처리하였다.
도 11은 CCR5/마라비록 및 CCR5/세니크리비록 사이의 리간드 결합 포켓의 비교를 나타낸다. 리간드 결합 포켓에서의 도킹된 형태, CVC (좌측)의 착색된 세선, 및 MVC, 황색 스틱, (우측)을 나타내는 CCR5의 상면도. CCR5는 분자 표면 표시에 나타나 있다. 주요 잔기: Tyr37, Trp86, Trp94, Leu104, Tyr108, Phe109, Phe112, Thr177, Ile198, Trp248, Tyr251, Leu255 및 Glu283 (이는 gp120 결합과 관련됨)는 포켓 내에 깊숙히 있고, 적색으로 착색된다.
도 12는 신장섬유증의 마우스 UUO 모델에서의 CVC의 평가의 연구 개략도를 나타낸다. 비히클 대조군 및 CVC 투여된 BID; 항-TGF-β1 항체, 화합물 1D11 (양성 대조군) 투여된 QD BID, 1일 2회; CVC, 세니크리비록; ip, 복강내; PBS, 인산염 완충 식염수; QD, 1일 1회; TGF, 변환 성장 인자; UUO, 일방향 요관 폐색.
도 13은 신장섬유증의 마우스 UUO 모델 중의 각 치료 그룹에서의 체중 변화 (5일차)를 나타낸다.
도 14는 신장섬유증의 마우스 UUO 모델 중의 각 치료 그룹에서의 콜라겐 체적 분율 (CVF; %면적)을 나타낸다. 표시된 데이터는 CVC 20 mg/kg/일 그룹에서 동물로부터의 단일 이상값을 제외하고, 이는 본 그룹에서의 임의의 다른 동물보다 2 표준 편차 초과의 CVF 값을 가졌다.
도 15a-b는 가짜 수술(sham-surgery)의 신장피질 조직으로부터의 mRNA 발현을 나타낸다.
도 16은 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물에서 9주까지의 체중 변화를 나타낸다.
도 17a-c는 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물에서 9주까지의 간 중량 및 체중에서의 변화를 나타낸다. 패널 A는 체중에서의 변화를 나타내고, 패널 B는 간 중량에서의 변화를 나타내고, 패털 C는 간 중량 대 체중 비의 변화를 나타낸다.
도 18a-f는 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물에서의 전체 혈액 및 생화학을 나타낸다. 패널 A는 전혈 글루코오스를 나타내고, 패널 B는 혈장 ALT를 나타내고, 패널 C는 혈장 MCP-1을 나타내고, 패널 D는 혈장 MIP-1β를 나타내고, 패널 E는 간 트리글리세리드를 나타내고, 패널 F는 간 히드록시프롤린을 나타낸다.
도 19는 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물에서의 HE-염색된 간 부위를 나타낸다.
도 20은 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 NAFLD 활성 평점을 나타낸다.
도 21은 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 시리어스 레드-염색된 간 부위의 대표적인 현미경사진을 나타낸다.
도 22는 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 F4/80-면역염색된 간 부위의 대표적인 현미경사진을 나타낸다.
도 23은 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 염증 면적의 백분율을 나타낸다.
도 24는 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 F4/80 및 CD206 이중-면역염색된 간 부위의 대표적인 현미경사진을 나타낸다.
도 25는 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 F4/80 양성 세포 중의 F4/80 및 CD206 이중 양성 세포의 백분율을 나타낸다.
도 26은 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 F4/80 및 CD16/32 이중-면역염색된 간 부위의 대표적인 현미경사진을 나타낸다.
도 27은 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 F4/80 양성 세포 중의 F4/80 및 CD16/32 이중 양성 세포의 백분율을 나타낸다.
도 28은 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 M1/M2 비를 나타낸다.
도 29는 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 오일 적색-염색된 간 부위의 대표적인 현미경사진을 나타낸다.
도 30은 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 지방 침착 면적의 백분율을 나타낸다.
도 31은 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 간에서의 TUNEL-양성 세포의 대표적인 현미경사진을 나타낸다.
도 32는 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 TUNEL-양성 세포의 백분율을 나타낸다.
도 33a-d는 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 정량적 RT-PCR을 나타낸다. TNF-α, MCP-1, 콜라겐 유형 1, 및 TIMP-1의 수준을 측정하였다.
도 34a-f는 9주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 정량적 RT-PCR에 대한 미가공 데이터를 나타낸다. 패널 A는 36B4의 수준을 나타내고, 패널 B는 TNF-α의 수준을 나타내고, 패널 C는 TIMP-1의 수준을 나타내고, 패널 D는 콜라겐 유형 1의 수준을 나타내고, 패널 E는 36B4의 수준을 나타내고, 패널 F는 MCP-1의 수준을 나타낸다.
도 35는 6 내지 18주의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 체중 변화를 나타낸다.
도 36은 6 내지 18주의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 생존률 곡선을 나타낸다.
도 37a-c는 18주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 체중 및 간 중량을 나타낸다. 패널 A는 체중을 나타내고, 패널 B는 간 중량을 나타내고, 패널 C는 간-대-체중 비를 나타낸다.
도 38a-c는 18주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 간의 육안 외관을 나타낸다. 패널 A는 단지 비히클로반 처리된 동물의 간을 나타내고, 패널 B는 저용량 세니크리비록으로 처리된 동물의 간을 나타내고, 패널 C는 고용량 세니크리비록으로 처리된 동물의 간을 나타낸다.
도 39는 18주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 가시적 종양 결절의 수를 나타낸다.
도 40은 18주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 가시적 종양 결절의 최대 직경을 나타낸다.
도 41은 18주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 HE-염색된 간 부위의 대표적인 현미경사진을 나타낸다.
도 42는 18주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 GS-면역염색된 간 부위의 대표적인 현미경사진을 나타낸다.
도 43은 18주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 CD31-면역염색된 간 부위의 대표적인 현미경사진을 나타낸다.
도 44는 18주에서의 세니크리비록 (낮거나 높은 용량)으로 처리된 동물의 CD31-양성 면적의 백분율을 나타낸다.
도 45는 코호트(Cohort) 및 연구일 -연구 201(Study Day - Study 201)에 의한 기준선으로부터의 HIV-1 RNA 수준에서의 중앙 변화(median Change)를 나타낸다.
도 46은 시간에 따른 48주까지의 HIV-1 RNA <50 복제/mL를 갖는 대상체의 비율 - 시냅숏 알고리즘 ITT - 연구 202을 나타낸다.
도 47은 시간에 따른 최대 48주까지의 sCD14 수준 (106 pg/mL) - ITT에서의 기준선으로부터의 LS 평균 변화를 나타낸다.
도 48은 기준선, 24주, 및 48주에서의 APRI 및 FIB-4 섬유증 지수 평점에 따라 그룹화된 CVC (집단 데이터)- 및 EFV-처리된 대상체를 나타낸다.
도 49는 기준선 sCD14 - 48주 (ITT)로부터의 변화에 대한 기준선 APRI로부터의 변화의 산점도를 나타낸다.
도 50은 기준선 sCD14 - 48주 (ITT)로부터의 변화에 대한 기준선 FIB-4로부터의 변화의 산점도를 나타낸다.
도 51은 시간에 따른 최대 48주까지의 크레아틴 포스포키나아제 (CPK) - 안전 집단에서의 기준선으로부터의 평균 변화를 나타낸다.
도 52는 중증도 등급 대 cavg (ng/mL) - 48주까지의 CPK 증가의 점 밀도 표시를 나타낸다.
도 53은 중증도 등급 대 cavg (ng/mL) - 48주까지의 ALT 증가의 점 밀도 표시를 나타낸다.
도 54는 중증도 등급 대 cavg (ng/mL) - 48주까지의 AST 증가의 점 밀도 표시를 나타낸다.
도 55는 중증도 등급 대 cavg (ng/mL) - 48주까지의 빌리루빈 증가의 점 밀도 표시를 나타낸다.
도 56a-b는 시간에 따른 최대 48주까지의 총 콜레스테롤, 계산된 LDL 콜레스테롤, HDL 콜레스테롤 및 트리글리세리드 단식시의 기준선으로부터의 평균 변화를 나타낸다.
도 57 a, b, 및 c는 CVC 또는 덱사메타손으로의 처리 이후 티오글리콜레이트 유도된 복막염 모델 마우스의 개개의 체중 데이터를 나타낸다. 패널 A는 체중을 나타내고, 패널 B는 복막 세포 수 (세포/μL)를 나타내고, 패널 C는 복막 혈액 세포 수를 나타낸다.
도 58은 마우스 티오글리콜레이트 유도된 복막염 모델에서의 대식세포/단핵구 모집에 대한 CVC의 효과를 나타내는 그래프이고; N=8인 그룹 2를 제외하고 모든 그룹에 대해 N=6이다.
도 59는 마우스 티오글리콜레이트 유도된 복막염 모델에서의 총 백혈구 모집에 대한 CVC의 효과를 나타내는 그래프이고; N=8인 그룹 2를 제외하고 모든 그룹에 대해 N=6이다.
도 60은 마우스 티오글리콜레이트 유도된 복막염 모델에서의 총 백혈구 및 대식세포/단핵구 모집에 대한 CVC의 효과를 나타내는 그래프이고; N=8인 그룹 2를 제외하고 모든 그룹에 대해 N=6이다.
도 61은 마우스 티오글리콜레이트 유도된 복막염 모델에서의 모든 투여 그룹에 대한 CVC 혈장 수준의 개개의 값을 나타낸다.
도 62 a 및 b는 ALT (a) 및 조직학 (b)에 의해 결정되는 아세트아미노펜-유도된 간 손상이 WT 마우스와 비교하여 ccr2 -/- 에 있어서 상당하게 감소되는 것을 나타내는 그래프이다.
도 63 a 및 b는 ALT (a) 및 조직학 (b)에 의해 결정되는 아세트아미노펜-유도된 간 손상이 야생형 마우스와 비교하여 CCR2-/- 마우스에서의 상당하게 감소되는 것을 나타낸다.
관사("a," "an," 및 "the")와 같은 단수 형태가 편의를 위해 본 출원에 걸쳐 사용되나, 문맥 또는 명확한 설명에서 달리 나타내지 않는 한, 단수 형태는 복수를 포함하는 것으로 의도되는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본원에 언급된 모든 저널 논문, 특허, 특허출원, 공보 등은 모든 목적을 위해 그 전문이 참조로 본원에 포함되어 있는 것으로 이해되어야 한다. 모든 수치 범위는 수치 범위 내의 각각의 모든 수치값을 포함하는 것으로 이해되어야 하고, 개별적으로 모든 각각의 수치값이 나열되는 것으로 해석되어야 한다. 동일한 성분 또는 특성에 관한 모든 수치 범위의 종점은 포괄적이며, 독립적으로 조합가능한 것으로 의도된다.
정의:
하기 논의된 용어를 제외하고, 본 출원에 사용되는 모든 용어는 본 발명의 시점에서의 당업자가 이들이 속하는 것으로 간주하는 의미를 가지는 것으로 의도된다.
"약"은 실질적으로 참조값과 동일한 효과를 가지거나, 또는 실질적으로 동일한 결과를 제공하는 모든 값을 포함한다. 따라서, 용어 "약"에 의해 포함되는 범위는 용어가 사용되는 문맥, 예로서 참조값이 관련되는 파라미터에 따라 변화될 수 있다. 따라서, 문맥에 따라, "약"은 예를 들면 ±15%, ±10%, ±5%, ±4%, ±3%, ±2%, ±1%, 또는 ±1% 미만을 의미할 수 있다. 중요하게는, 용어 "약"이 선행되는 참조값의 모든 열거(recitation)는 또한 참조값 단독의 열거인 것으로 의도된다. 상술한 것에도 불구하고, 본 출원에서 용어 "약"은 약동학적 파라미터, 예컨대 곡선하 면적 (AUC, AUCt, 및 AUC∞ 포함), Cmax, Tmax 등과 관련하여 특별한 의미를 가진다. 약동학적 파라미터에 대한 값과 관련하여 사용되는 경우, 용어 "약"은 참조 파라미터의 80% 내지 125%를 의미한다.
"세니크리비록"은 화학적 화합물 (S)-8-[4-(2-부톡시에톡시)페닐]-1-이소부틸-N-(4-{[(1-프로필-1H-이미다졸-5-일)메틸]설피닐}페닐)-1,2,3,4-테트라하이드로-1-벤즈아조신-5-카복사마이드 (하나 나타난 구조)를 지칭한다. 세니크리비록 물질의 조성의 상세설명은 미국특허출원 공개번호 제2012/0232028호에 개시되어 있고, 이는 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함되어 있다. 관련 제형의 상세설명은 미국출원 제61/823,766호에 개시되어 있고, 이는 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함되어 있다.
Figure pct00001
"본 발명의 화합물" 또는 "본 화합물"은 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물을 지칭한다.
"실질적으로 유사한"은 조성 또는 제형의 동일성 및 양 모두에서 상당한 정도로 참조 조성물 또는 제형과 유사한 조성물 또는 제형을 의미한다.
"약학적으로 허용가능한"은 예를 들면 대상체에의 투여시 수의과 목적을 포함하는 의약 또는 약학에서 사용될 수 있는 물질 또는 방법과 관련된다.
"염" 및 "약학적으로 허용가능한 염"은 모든 산 및 염기 부가염을 포함한다. "산 부가염"은 생물학적이지 않으면 바람직하지 않고, 무기산 및 유기산으로 형성되는 유리 염기의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하는 염을 지칭한다. "염기 부가염"은 생물학적이지 않으면 바람직하지 않고, 유리 산에 대한 무기 염기 또는 유기 염기의 첨가로부터 제조되는 유리 산의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하는 염을 지칭한다. 약학적으로 허용가능한 염의 예는, 비제한적으로, 염기성 잔류물 예컨대 아민의 유기산 부가염 또는 미네랄; 산성 잔류물의 알칼리 또는 유기 부가염; 등 또는 상기 염 중 1종 이상을 포함하는 조합을 포함한다. 약학적으로 허용가능한 염은 활성제의 염 및 4차 암모늄염을 포함한다. 예를 들면, 산성 염은 무기산 예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 설팜산, 인산, 질산 등으로부터 유도된 것을 포함하고; 다른 허용가능한 무기염은 금속염 예컨대 나트륨염, 칼륨염, 세슘염 등; 및 알칼리토 금속염, 예컨대 칼슘염, 마그네슘염 등, 또는 상술한 염 중 1종 이상을 포함하는 조합을 포함한다. 약학적으로 허용가능한 유기염은 유기산 예컨대 아세트산, 프로피온산, 석신산, 글라이콜산, 스테아르산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 파모산, 말레산, 하이드록시말레산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 메실산, 에실산, 베실산, 설파닐산, 2-아세톡시벤조산, 푸마르산, 톨루엔설폰산, 메탄설폰산, 에탄 디설폰산, 옥살산, 이세티온산, HOOC-(CH2)n-COOH (식 중, n은 0-4임) 등으로부터 제조된 염; 유기 아민염 예컨대 트리에틸아민염, 피리딘염, 피콜린염, 에탄올아민염, 트리에탄올아민염, 디사이클로헥실아민염, N,N'-디벤질에틸렌디아민염 등; 및 아미노 산성염 예컨대 아르기네이트, 아스파르기네이트, 글루타메이트 등; 또는 상술한 염 중 1종 이상을 포함하는 조합을 포함한다.
일 구현예에서, 세니크리비록의 산 부가염은 세니크리비록 메실레이트, 예를 들면, (S)-8-[4-(2-부톡시에톡시)페닐]-1-이소부틸-N-(4-{[(1-프로필-1H-이미다졸-5-일)메틸]설피닐}페닐)-1,2,3,4-테트라하이드로-1-벤즈아조신-5-카복사마이드 모노메탄설포노에이트이다. 일 구현예에서, 세니크리비록 메실레이트는 결정성 물질, 예컨대 옅은 녹색을 띤-황색 결정성 분말이다. 일 구현예에서, 세니크리비록 메실레이트은 빙초산, 메탄올, 벤질 알코올, 디메틸설폭사이드, 및 N,N-디메틸포름아미드에 쉽게 용해되고; 피리딘 및 아세트산 무수물에서 용해성이고; 99.5% 에탄올에 난용성이고; 아세토니트릴, 1-옥탄올, 및 테트라하이드로푸란에 약간 용해성이고; 에틸 아세테이트 및 디에틸에테르에 실제로 불용성이다. 일 구현예에서, 세니크리비록 메실레이트는 pH 1 내지 2의 수용액에 쉽게 용해되고; 수중에서 pH 3에서 난용성이고, pH 4 내지 13에서 실제로 불용성이다.
"용매화물"은 용매화 (용매 분자와 본 발명의 활성제의 분자 또는 이온과의 조합)에 의해 형성된 착물, 또는 하나 이상의 용매 분자와 함께 용해된 이온 또는 분자 (본 발명의 활성제)로 이루어진 응집체를 의미한다. 본 발명에서, 바람직한 용매화물은 수화물이다.
"약학적 조성물"은 본 개시내용의 화합물의 제형 및 포유동물, 예를 들면, 인간에게의 생물학적 활성 화합물의 전달을 위한 본 기술분야에서 일반적으로 허용되는 매질을 지칭한다. 이러한 매질은 모든 약학적으로 허용가능한 이의 캐리어, 희석제 또는 부형제를 포함한다.
"치료함"은 질환 또는 병태의 상황, 또는 질환 또는 병태의 증상을 개선하고, 완화하고, 그리고 감소시키는 것을 포함한다.
"투여함"은 경구, 피하, 설하, 점막흡수, 비경구, 정맥내, 동맥내, 구강, 설하, 국소, 질내, 직장, 안와, 귀, 비강, 흡입, 및 경피와 같은 임의의 방식의 투여을 포함한다. "투여함"은 또한 특정 화합물을 포함하는 복용 형태에 대해 처방하거나 약을 조제하는 것을 포함할 수 있다. "투여함"은 또한 특정 화합물 또는 화합물을 포함하는 복용 형태와 관련된 방법을 실시하기 위한 지시를 제공하는 것을 포함할 수 있다.
"치료적 유효량"은 질환, 질병, 또는 다른 바람직하지 않은 의료적 병태를 치료하기 위해 대상체에의 투여시, 활성 물질의 양이 이러한, 질환, 질병, 또는 병태와 관련하여 유익한 효과를 가지기에 충분한 것을 의미한다. 치료적 유효량은 화학적 동일성 및 활성 물질의 제형 형태, 질환 또는 병태 및 이의 중증도, 및 연령, 체중, 및 치료되는 환자의 다른 관련 특성에 따라 변화될 것이다. 주어진 활성 물질의 치료적 유효량을 결정하는 것은 본 기술분야의 통상의 기술범위 내에 있으며, 통상적으로 단지 일반 실험만을 요구한다.
섬유증:
섬유증은 회복 또는 반응 과정에서 장기 또는 조직에서의 과잉의 섬유질 결합 조직의 형성이다. 이는 반응성, 양성, 또는 병리적 상태일 수 있다. 장기 및/또는 조직에서의 결합 조직의 침착(deposition)은 기저 장기 또는 조직의 구조 및 기능을 제거할 수 있다. 섬유증은 섬유질 조직의 과잉의 침작의 이러한 병리적 상태뿐만 아니라 치유시 결합 조직 침작의 과정이다.
섬유증은 모두가 콜라겐 및 글리코사미노글리칸을 포함하는 결합 조직 아래에 위치한 자극받은 세포를 수반하는 반흔 과정(process of scarring)과 유사하다. 수많은 면역 및 염증성 반응을 중재하는 사이토카인은 섬유증의 발달에 기여한다. 지방 축적, 바이러스제, 과도한 알코올 소비, 헤파톡신과 같은 인자로부터 일어난 간세포 손상은 필연적으로 염증성 면역 반응을 유발한다. 간에서의 사이토카인 및 케모카인의 증가된 생산은 이후 전-염증성 대식세포로 성숙하는 전-염증성 단핵구 (전구체 세포)의 모집을 야기한다. 전-염증성 대식세포는 특성에 있어서 전-섬유생성성(pro-fibrogenic)이고, 궁극적으로 세포외 기질 (ECM)의 침착에 주로 관련이 있는 간 성상세포 (HSC)의 활성화를 야기한다.
염증을 생성하는 다양한 면역 세포 집단의 침윤은 급성- 및 만성 간 손상이 후속되는 중심적인 병원 특징이다. 만성 간 염증은 섬유증, 간경변, ESLD, 및 HCC를 야기할 수 있는 연속적인 간세포 손상을 야기한다. 간내 면역 세포들 사이의 상호작용은 쿠퍼 세포 및 HSC의 증가된 활성화 및 이동을 야기하고, 이는 간 섬유증의 발달에 대한 중요한 사건이다. 추가적으로, 간 섬유증의 발병에서의 CCR2 및 CCR5의 역할에 대한 늘어난 증거가 존재한다 [1-7, 9, 31]. C-C 케모카인 부류의 이러한 성분은 전-염증성 단핵구 및 대식세포, 쿠퍼 세포, 및 HSC를 포함하는 전-섬유생성 세포에 의해 발현된다 [1-4]. CCR2 신호전달은 골수-유도된 섬유아세포의 조절을 통한 신장 섬유증의 발병에 있어서 중요한 역할을 한다 [8]. CCR2- 및 CCR5-양성 단핵구뿐만 아니라 CCR5-양성 T 림프구는 국소적으로 방출된 MCP-1 및 RANTES에 의해 부착되고, 신장에서의 만성 간질성 간염에 기여할 수 있다 [10, 11]. 설치류에서, CVC는 간, 장간막 림프절, 및 장간축(gut-liver axis)으로도 기술되는 장에서 높은 분포도를 가진다. 장-간 축에서의 장내 미생물의 파괴 및 이의 다운스트림 효과 모두는 대사 상애 예컨대 비만, 비-알코올성 지방 간 질환 (NAFLD) 및 비-알코올성 지방간염 (NASH)에서 중요한 역할을 한다 [16, 23].
표 1은 간 세포에 의해 발현되는 케모카인을 열거한다 [30].
표 1
Figure pct00002
간 성상 세포 (HSC)의 활성화는 간 섬유증의 발병에 있어서서 중요한 역할을 한다. 간 손상 이후, 간 성상 세포 (HSC)는 활성화되고, 기질 금속 단백질 분해효소 (MMP) 및 이의 특이적 조직 저해제 (TIMP)의 조합을 발현시킨다 [32]. 간 손상의 초기 단계에서, HSC는 MMP-3, MMP-13, 및 우로플라스미노겐 활성제 (uroplasminogen activator, uPA)를 일시적으로 발현하고, 기질 분해 표현형을 나타낸다. 세포외 기질의 분해는 CCR2 또는 CCR5 의존적인 것으로 나타나지 않는다.
활성화된 HSC는 단형핵 및 다형핵 백혈구의 침윤을 유도함으로써 염증성 반응을 증폭시킬 수 있다. 침윤되는 단핵구 및 대식세포는 사이토카인의 증가된 분비 및 산화성 스트레스-관련 생성물의 생성을 포함하는 다수의 메카니즘을 통해 섬유증의 발달에 참여한다. 활성화된 HSC는 CCR2 및 CCR5를 발현할 수 있고, MCP-1, MIP-1α, MIP-1β 및 RANTES을 포함하는 케모카인을 생성한다. CCR2는 HSC 주화성 및 간 섬유증의 발달을 촉진한다. 인간 간 질환에서, 증가된 MCP-1은 대식세포 모집 및 간 섬유증 및 원발성 담즙성 간경변의 중증도와 관련된다. CCR5는 HSC 이동 및 증식을 자극한다.
간 손상 및 HSC 활성화의 말기에서, 패턴은 변화되고, 세포는 간 섬유증에서 축적된 섬유성 콜라겐의 분해를 억제하면서도 정상 간 기질을 분해하는 능력을 갖는 MMP들의 조합을 발현한다. 이러한 패턴은 프로-MMP-2 및 막형 1 (MT1)-MMP 발현의 조합을 특징으로 하고, 이는 활성화 MMP-2의 세포주위 발생 및 정상 간 기질의 국소적 분해를 유도한다. 또한, 간질성 콜라게나아제 (MMP-1/MMP-13)에 의한 섬유성 간 콜라겐의 분해의 보다 전체적인 억제를 야기하는 TIMP-1의 발현에서의 현저한 증가가 존재한다. 만성 알코올성 간 질환과 관련된 간 손상에서, TNF-α, IL-1, IL-6뿐만 아니라 케모카인 IL-8/CXCL8의 생성은 증가된다. TNF-α는 또한 비-알코올성 지방간 질환의 중요한 매개체이다. 이러한 경로는 간 섬유증의 진행에서 중요한 역할을 한다. HSC의 활성화를 억제하고, 활성화된 HSC의 청소능을 가속시키는 것은 간 섬유증의 분해에 대한 효과적인 전략일 수 있다.
케모카인 부류는 염증에 있어서 중요한 조절 역할을 한다. 이러한 부류의 성분은 비제한적으로 CXC 수용체 및 리간드 (비제한적으로 CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, CXCR7, CXCR8, CXCR9, CXCR10, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL4, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CXCL13, CXCL14, CXCL15, CXCL16, 및 CXCL17 포함); CC 케모카인 및 수용체 (비제한적으로 CCL1, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL6, CCL7, CCL8, CCL9, CCL10, CCL11, CCL12, CCL13, CCL14, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18, CCL19, CCL20, CCL21, CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR, 및 CCR10 포함); C 케모카인 (비제한적으로 XCL1, XCL2, 및 XCR1 포함); 및 CX3C 케모카인 (비제한적으로 CS3CL1 및 CX3CR1 포함)을 포함한다. 이러한 분자는 섬유증 장기 또는 조직에서 상향조절될 수 있다. 추가의 구현예에서, 이러한 분자는 섬유증 장기 또는 조직에서 하향조절될 수 있다. 추가의 구현예에서, 이러한 케모카인의 신호전달 경로에서의 분자는 섬유증 장기 또는 조직에서 상향조절될 수 있다. 추가의 구현예에서, 이러한 케모카인의 신호전달 경로에서의 분자는 섬유증 장기 또는 조직에서 하향조절될 수 있다.
섬유증은 비제한적으로 폐, 간, 골수, 관절, 피부, 소화관, 림프절, 혈관, 또는 심장을 포함하는 신체 내의 수많은 조직에서 발생될 수 있고, 전형적으로 염증 또는 손상의 결과이다. 비제한적인 예는 폐 섬유증, 특발성 폐 섬유증, 낭포성 섬유증, 간경변, 심내막심근 섬유증, 심근경색증, 심방 섬유증, 종격 섬유증, 골수섬유증, 후복막 섬유증, 진행성 엄청난 섬유증, 진폐증으로부터의 합병증, 신원발성 전신 섬유증, 크론병, 켈로이드, 경피증/전신 경화증, 관절섬유증, 페이로니병, 듀피트렌 구축,　죽상경화증과 관련된 섬유증, 림프절 섬유증, 및 유착성 피막염을 포함한다.
복막염
복막염 (복막의 염증)은 국소적이거나 또는 전신적일 수 있고, 감염 (대개 복부 외상 또는 염증이 생긴 맹장에서 발생될 수 있는 중공형 복부 장기의 파열에 기인함) 또는 비-감염성 과정으로부터 발생될 수 있다. 복막염의 증상은 부위로의 염증성 인자의 모집에 의해 야기된다.
감염된 복막염의 유형은 비제한적으로 위장관 (예를 들면, 보어하브 증후군, 위궤양, 위 암종, 위궤양, 충수염, 게실염, 메켈 게실, 염증성 장 질환 (IBD), 장 경색, 장 조임(intestinal strangulation), 결장직장 암종, 태변 복막염) 또는 담낭 (담낭염, 복부 외상, 날카로운 이물질의 섭취, 내시경 또는 카테터에 의한 천공, 및 문합 누출)의 일부의 천공; 심지어 중공 내장의 천공 (예를 들면 외상, 외과용 상처, 지속적 외래 복막 투석, 및 복막내 화학요법)이 없는 복막 파괴; 자발적인 박테리아 복막염 (SBP); 또는 전신 감염 (예를 들면, 결핵)에 의해 야기된 복막염을 포함한다.
비-감염성 복막염의 유형은, 비제한적으로, 예를 들면 복막으로의 멸균된 체액의 누출, 예컨대 혈액 (예를 들면, 자궁내막증, 복부 외상), 위액 (예를 들면, 위궤양, 위 암종), 담즙 (예를 들면, 간 생검), 소변 (골반 외상), 멘스트룸(menstruum) (예를 들면, 난관염), 췌장액(췌장염), 또는 심지어 파열된 유피낭종의 성분; 멸균된 복부 수술 (예를 들면, 이물질 반응 및/또는 수술 후 복부에 우연하게 남겨진 섬유성 유착물 또는 멸균된 이물질 뒤에 남겨질 수 있는 국소적 또는 최소 전신적 복막염을 야기하는 수술); 가족성 지중해 열병, TNF 수용체 관련된 주기적 증후군, 포르피린증, 및 전신 홍반성 낭창에 의해 야기될 수 있는 복막염을 포함한다.
급성 간 손상
수많은 화합물은 간을 손상시킬 수 있다. 잘 알려진 간-손상 제제는 비제한적으로 알코올, 비스테로이드성 항-염증성 약물 (NSAID), 글루코코르티코이드, 항생제 (예를 들면, 이소니아지드, 니트로푸란토인, 아목시실린/클라불란산), 히드라진 유도체 약물, 공업용 독소 예컨대 비소, 사염화탄소, 및 염화비닐, 천연물 의약품, 예컨대 아키 열매, 바지아올리안(Bajiaolian) 캄포르, 코팔트라(Copaltra), 사이카신(Cycasin), 가르시니아, 카바잎(Kava leaves), 피롤리지딘 알칼로이드(pyrrolizidine alkaloid), 말 밤나무 잎(Horse chestnut leaves), 바레리안(Valerian), 컴프리(Comfrey), 비타민 A, 저맨더(germander), 관목수풀 잎(chaparral leaf), 아만니타 가엽(Amanita phylloides), 중국 약초 요법 (예를 들면 금불환(Jin Bu Huan), 마황(Ma-huang), 슈 우 피안(Shou Wu Pian), 바이 시안 파이(Bai Xian Pi)), 아세트아미노펜, 스타틴, 니코틴산 (NiacinTM), 아미오다론 (CordaroneTM), 메토트렉세이트 (RheumatrexTM, TrexallTM), 타크린 (CognexTM), 및 디설피람 (AntabuseTM)을 포함한다.
과량의 알코올 소비로 인한 간 손상은 간 질환의 주된 원인이다. 남성에서의 20년 이상 동안의 1일당 60-80g (약 75-100 ml/일), 또는 여성에 대한 20g/일 (약 25 ml/일)의 소비는 7 내지 47%까지 간염 및 섬유증의 위험을 상당하게 증가시키는 것으로 추정된다.
아세트아미노펜 중독 이후의 간 손상은 급성 간부전 (ALF)의 주요 원인 중 하나이다. 다수의 아세트아미노펜 간독성은 대개 급성 간부전 (ALF)을 야기한다. 간에 대한 손상, 또는 간독성은 아세트아미노펜 자체가 아닌, 이의 대사물 중 하나, N-아세틸-p-벤조퀴논이민　(NAPQI)(N-아세틸이미도퀴논으로도 공지되어 있음)으로 부터 생성되고, 이는 간의 천연　항산화제　글루타티온을 감소시키고, 간에서 세포를 직접적인 손상시키고, 이는 간부전을 야기한다. 아세트아미노펜 중독 이후의 간 손상은 간세포의 괴사, 이후 잔류 면역 세포 (예를 들면, 쿠퍼 세포 (KC), 간세포, 동굴모양 내피세포 및 간 성상 세포)의 활성화, 다양한 케모카인 (예를 들면, CCL2)의 방출 및 면역 세포 침윤 (예를 들면, 단핵구, 대식세포, 자연 살해 (NK), NKT 세포 및 T 세포)을 야기한다.
급성 간 손상과 관련된 케모카인은 비제한적으로 CCL2, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL1, CXCL2, CXCL8, 및 CXCL12을 포함한다 [1]. 예를 들면, 이론에 구속됨 없이, 손상되는 경우, 간 세포 예컨대 간세포 및 쿠퍼 세포는 간으로의 단핵구 및 대식세포 침윤을 야기하는 CCL2를 분비한다. 추가적으로, CCL2는 순환하는 단핵구/대식세포의 집단을 증가시키는 골수에서의 증가하는 단핵구 조혈작용 (monocytic hematopoiesis)을 촉진한다. 간에서의 대식세포는 이후 전-염증성 사이토카인 예컨대 TNF-α 및 IFN-γ를 분비한다 [1].
치료적 유용성의 구현예 :
본 발명은 섬유증의 치료 방법을 제공한다. 동물 연구에서의 CVC의 항-섬유증 효과는 CVC 치료가 간경변이 확립된 경우 (TAA)가 아닌 간 손상 (TAA)의 시작시 개시되거나 또는 직후 (TAA; HFD)에 개시되는 경우에 관찰되었다. 이는 CVC의 항-섬유증 효과가 확립된 간 섬유증을 가지고, 질환 진행의 상당한 위험을 가진 집단에서 잘 나타날 수 있음을 제시한다. 이는 하기를 포함한다: 2형 진성 당뇨병 (T2DM) 및 대사 증후군 (MS)과 관련된 비-알코올성 간지방증 (NASH); HIV 및 HCV 공동-감염, 또는 HCV 감염.
NASH
본 발명의 조성물은 비-알코올성 간지방증 (NASH)으로부터 발생된 간 섬유증, 미국인의 2 내지 5%가 발병되는 일반 간 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다. NASH로 인한 간 손상이 알코올성 간 질환의 특성의 일부를 가지지만, 이는 약간의 알코올을 마시거나 또는 마시지 않는 사람에게서 일어난다. NASH에서의 주요 특징은 염증 및 간세포 손상 (벌루닝(ballooning))과 함께 간에서의 지방이다. NASH는 중증일 수 있고, 간병증을 야기할 수 있고, 이에서 간은 영구적으로 손상되고 상처가 되며, 더이상 적절하게 작용할 수 없다. 비알코올성 지방 간 질환 (NAFLD)은 대개 비만 관련 장애, 예컨대 2형 당뇨병 및 대사 증후군과 관련된 일반적인 "무증상" 간 질환이고, 이는 알코올을 약간 마시거나 또는 마시지 않는 사람에게서 발생되고, 다른 분명한 원인이 없이 간에서의 지방의 축적을 특징으로 한다. [32-43] NAFLD의 시작시 그 범위는 간단한 지방증이고, 이는 간에서의 지방의 축적을 특징으로 한다. 염증이 없는 간 지방증은 보통 양성이고, 더디거나 또는 비진행성이다. NASH는 보다 진행성이고 NAFLD의 중증의 하위유형이고, 여기서 지방증은 섬유증이 있거나 또는 없이 간-세포 손상 및 염증에 의해 합병된다.
비만 관련 장애의 증가하는 유병률은 NASH의 유병률에서의 빠른 증가에 기여한다. NAFLD를 갖는 대상체의 대략 10% 내지 20%는 NASH로 진행될 것이다 [44].
NAFLD는 만성 간 질환의 가장 일반적인 원인이다. [45] 대부분의 미국 연구는 NAFLD의 10% 내지 35%의 유병률을 보고하고 있으나; 이러한 비율은 연구 집단 및 진단 방법에 따라 변화된다. [46] 미국 인구의 대략 3분의 1이 비만인 것으로 고려되기 때문에, 미국 인구에서의 NAFLD의 유병률은 약 30%일 것이다. [46] 한 연구는 NAFLD가 미국인의 대략 27% 내지 34%, 또는 추정되는 8600만명 내지 1억 8백만명 환자에게서 발병되는 것을 발견하였다. [44] NAFLD는 미국인에 특유의 것이 아니다. 브라질, 중국, 인도, 아스라엘, 이탈리아, 일본, 한국, 스리랑카, 및 대만을 포함하는 세계의 나머지 국가로부터의 보고는 유병률이 6% 내지 35% (20%의 중앙값)의 범위인 것을 제시한다. [46] 호주/호주인 간 협회의 소화기 학회에 의한 연구는 NAFLD가 50년생 이상 연령의 모든 성인의 40%를 포함하는 550만명 호주인에서 발병되는 것으로 발견하였다. [47] 심각한 비만 환자의 호주인 연구는 이러한 환자의 25%가 NASH를 가지는 것으로 밝혔다. [48]
간 생검은 NASH의 확정적인 진단을 위해 요구된다. 중년의 사람의 미국 연구에서, 이력적으로 확인된 NASH의 유병률은 12.2%이었다. [49] 현재 추정값은 유럽 및 중국에서와 유사한 유병률과 함께 미국에서 대략 900 내지 1500만명 (미국 인군의 3% 내지 5%)으로 NASH 유병률을 평가하고 있다. [46, 50] 비만 인구에서의 NASH의 유병률은 10% 내지 56% (33%의 중앙값)의 범위이다. [46] 캐나다로부터의 마른 사람의 부검 시리즈에서, 지방간 및 섬유증의 유병률은 각각 3% 및 7%이었다. [46] NASH의 유병률은 또한 개발되는 지역에서 증가하고 있고, 이는 보다 좌식의 생활양식 및 높은 지방 및 당/프룩토오스 성분을 갖는 가공식품으로 이루어진 서구화된 식단 [51]이 적용되기 시작한 이러한 이러한 지역에서의 사람에게 발병되고 있다. [52]
NASH는 섬유증이 있거나 없는 간세포 손상을 갖는 염증 및 간 지방증의 존재로 정의되는 심각한 만성 간 질환이다. [34] 만성 간 염증은 섬유증에 대한 전구체이고, 이는 간경변, 말기 간 질환 및 간세포 암종으로 진행될 수 있다. 인슐린 내성 이외, 변경된 지질 축적 및 물질대사, 간 내에서의 콜레스테롤의 축적, 증가된 간 손상을 초래하는 산화적 스트레스, 및 (높은 프룩토오스-함유 식단과 관련되는) 장내 세균의 파괴에 부수적인 세균 전이 [34,53-56] 모두는 NASH의 진전에 기여하는 중요한 공동-인자로서 연루되어 있다. [57-60] 비만 및 당뇨병의 증가되는 확산으로 인해, NASH는 진행성 간 질환의 가장 일반적인 원인, 및 간 이식에 대한 가장 일반적인 증상이 되고 있는 것으로 예상된다. [46, 61-63] 임의의 승인된 치료적 개입의 결핍과 조합되는 NASH의 부담은 미충족된 의료적 필요성을 나타낸다.
추가적인 구현예에서, 간 섬유증은 발생된 간경변과 관련된다. 일부 구현예에서, 간경변은 알코올 손상과 관련된다. 추가의 구현예에서, 간경변은 비제한적으로 간염 B 및 간염 C 감염, 원발성 담즙성 간경변 (PBC), 원발 경화성 담관염, 또는 지방간 질환을 포함하는 간염 감염과 관련된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 간 섬유증 또는 간경변의 위험이 있는 대상체의 치료 방법을 위해 제공한다.
다른 구현예에서, 섬유증은 비경변성 간 섬유증을 포함한다. 다른 추가의 구현예에서, 대상체는 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)에 의해 감염된다. 또 다른 추가의 구현예에서, 대상체는 비제한적으로 HCV (간염 C 바이러스)를 포함하는 간염 바이러스로 감염된다. 추가의 구현예에서, 대상체는 당뇨병을 가진다. 추가의 구현예에서, 대상체는 2형 당뇨병을 가진다. 추가의 구현예에서, 대상체는 1형 당뇨병을 가진다. 추가의 구현예에서, 대상체는 대사 증후군 (MS)을 가진다. 추가의 구현예에서, 대상체는 이러한 질환 또는 장애 중 하나 이상을 가진다. 추가의 구현예에서, 대상체는 이러한 질환 중 하나 이상이 발달되는 위험을 가진다. 추가의 구현예에서, 대상체는 인슐린 내성을 가진다. 추가의 구현예에서, 대상체는 증가된 혈액 글루코오스 농도, 높은 혈압, 증가된 콜레스테롤 수준, 증가된 트리글리세리드 수준을 가지거나, 또는 비만이다. 추가의 구현예에서, 대상체는 다낭성 난소 증후군을 가진다.
일 구현예에서, 본 발명은 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물이 1종 이상의 추가적인 활성제와 공동 투여되는 치료 방법을 제공한다. 추가의 구현예에서, 1종 이상의 추가적인 활성제는 유입 억제제, 뉴클레오사이드 역전사효소 저해제, 뉴클레오타이드 역전사효소 저해제, 비-뉴클레오사이드 역전사효소 저해제, 프로테아제 저해제, 인테그라제 가닥 전달 저해제, 성숙 저해제, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 1종 이상의 항레트로바이러스제이다. 추가의 구현예에서, 1종 이상의 추가적인 항레트로바이러스제는 라미부딘, 에파비렌즈, 랄테그라비르, 비베콘, 베비리매트, 알파 인터페론, 지도부딘, 아바카비르, 로피나비르, 리토나비르, 테노포비르, 테노포비르 디소프록실, 테노포비르 전구약물, 엠트리시타빈, 엘비테그라비르, 코비시스타트, 다루나비르, 아타자나비르, 릴피비린, 돌루테그라비르, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 추가의 구현예에서, 1종 이상의 추가적인 활성제는 1종 이상의 면역계 억제제이다. 추가의 구현예에서, 1종 이상의 추가적인 활성제는 사이클로스포린, 타크롤리무스, 프레드니솔론, 하이드로코르티손, 시롤리무스, 에버롤리무스, 아자티오프린, 마이코페놀산, 메토트렉세이트, 바실릭시마맙, 다클리주맙, 리툭시맙, 항-흉선세포 글로불린, 항-림프구 글로불린, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 구현예는 본원에 기재된 본 치료의 치료 효능을 모니터링하고 및/또는 예측하기 위한 방법을 포함한다. 이러한 방법은 섬유증 또는 섬유성 질환 또는 병태에 대해 치료되는 대상체 (또는 대상체로부터의 생물학적 샘플)에서 1종 이상의 생물학적 분자, 예컨대, 예를 들면, 바이오마커의 수준을 검출하는 단계를 포함하고, 여기서 예정된 표준 수준과 비교되는 1종 이상의 생물학적 분자의 수준에서의 증가 또는 감소는 본 치료의 치료 효능을 나타내거나 이를 예측한다.
일 구현예에서, 본 발명은 섬유증 또는 섬유성 질환 또는 병태에 대해 치료되는 대상체에서의 1종 이상의 생물학적 분자의 수준을 검출하는 단계, 및 1종 이상의 생물학적 분자의 수준에서의 증가 또는 감소에 기초하여 치료 요법을 결정하는 단계를 포함하는 치료 방법을 제공하고, 여기서 생물학적 분자는 리포폴리사카라이드 (LPS), LPS-결합 단백질 (LBP), 16S rDNA, sCD14, 장 지방산 결합 단백질 (I-FABP), 조눌린-1, 콜라겐 1a1 및 3a1, TGF-β, 파이브로넥틴-1, hs-CRP, IL-1β, IL-6, IL-33, 피브리노겐, MCP-1, MIP-1α 및 -1β, RANTES, sCD163, TGF-β, TNF-α, 간세포 세포자멸사의 바이오마커 예컨대 CK-18 (카스파제-분리됨 및 총합), 또는 박테리아 전좌의 바이오마커 예컨대 LPS, LBP, sCD14, 및 I-FABP, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 본 발명은 섬유증 또는 섬유성 질환 또는 병태에 대해 치료되는 대상체에서의 1종 이상의 생물학적 분자의 수준을 검출하는 단계를 포함하는 치료 방법을 제공하고, 여기서 예정된 표준 수준과 비교되는 1종 이상의 생물학적 분자의 수준에서의 증가 또는 감소는 섬유증 또는 섬유성 질환 또는 병태의 치료 효능에 대해 예측적이게 한다.
추가의 구현예에서, 1종 이상의 생물학적 분자는 섬유증 또는 섬유성 질환 또는 병태에 대해 치료되는 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 측정된다. 또 다른 추가의 구현예에서, 생물학적 샘플은 혈액, 피부, 모발 소낭, 타액, 경구 점액, 질 점액, 땀, 눈물, 상피성 조직, 소변, 정액, 정액, 정액 장액, 전립선 유체, 사정전 유체 (쿠퍼액), 배설물, 생검, 복수, 뇌척수액, 림프, 뇌, 및 조직 추출물 샘플 또는 생검 샘플로부터 선택된다.
일 구현예에서, 본 방법은 복막염을 치료하기 위해 세니크리비록을 투여하는 단계를 포함한다. 추가의 구현예에서, 복막염은 감염성 복막염이다. 다른 추가의 구현예에서, 감염성 복막염은 위장관 (예를 들면, 보어하브 증후군, 위궤양, 위 암종, 위궤양, 충수염, 게실염, 메켈 게실, 염증성 장 질환 (IBD), 장 경색, 장 조임(intestinal strangulation), 결장직장 암종, 태변 복막염) 또는 담낭 (담낭염, 복부 외상, 날카로운 이물질의 섭취, 내시경 또는 카테터에 의한 천공, 및 문합 누출)의 일부의 천공; 심지어 중공 내장의 천공 (예를 들면 외상, 외과용 상처, 지속적 외래 복막 투석, 및 복막내 화학요법)이 없는 복막 파괴; 자발적인 박테리아 복막염 (SBP); 또는 전신 감염 (예를 들면, 결핵)에 의해 야기된다. 추가의 구현예에서, 복막염은 비-감염성 복막염이다. 다른 추가의 구현예에서, 비-감염성 복막염은 예를 들면 복막으로의 멸균된 체액의 누출, 예컨대 혈액 (예를 들면, 자궁내막증, 복부 외상), 위액 (예를 들면, 위궤양, 위 암종), 담즙 (예를 들면, 간 생검), 소변 (골반 외상), 멘스트룸(menstruum) (예를 들면, 난관염), 췌장액(췌장염), 또는 심지어 파열된 유피낭종의 성분; 멸균된 복부 수술 (예를 들면, 이물질 반응 및/또는 수술 후 복부에 우연하게 남겨진 섬유성 유착물 또는 멸균된 이물질 뒤에 남겨질 수 있는 국소적 또는 최소 전신적 복막염을 야기하는 수술); 가족성 지중해 열병, TNF 수용체 관련된 주기적 증후군, 포르피린증, 및 전신 홍반성 낭창에 의해 야기되는 복막염이다. 다른 추가의 구현예에서, CVC는 비제한적으로 항생제, 정맥내 수분보충 및 전해질 균형의 보정, 및/또는 수술을 포함하는 1종 이상의 복막염 치료 또는 제제와 결합하여 투여된다.
일 구현예에서, 본 방법은 급성 간 손상을 치료하기 위해 세니크리비록을 투여하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 간 손상은 아세트아미노펜, 알코올, 화학물질, 및/또는 독소에 의해 유도된다. 추가의 구현예에서, 간 손상은 CCR2 및/또는 CCL2 발현을 수반한다. 다른 추가의 구현예에서, CCR2 및/또는 CCL2 발현은 저해된다. 또 다른 추가의 구현예에서, CCR2 및/또는 CCL2 발현은 CVC에 의해 저해된다. 다른 추가의 구현예에서, CVC는 비제한적으로 n-아세틸시스테인 (아세틸시스테인; NAC), 글루코코르티코이드, 코르티코스테로이드, 펜톡시파일린, 포스포디에스테라제 저해제, 항-TNFα, 항산화제의 정맥내 또는 경구 투여, 또는 간 이식을 포함하는 수술을 포함하는 급성 간 손상에 대한 1종 이상의 치료 또는 제제와 결합하여 투여된다.
복용량 및 투여:
특정 대상체의 복용량은 대상체의 나이, 체중, 일반 건강 조건, 성별, 식사, 투여 시간, 투여 경로, 배출 속도 및 치료되는 특정 질환 질병의 정도에 따라 이러한 인자 그리고 다른 인자를 고려하여 결정될 수 있다.
본 발명은 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물이 경구용 조성물로서 제형화되는 치료 방법을 제공한다.
본 발명은 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물이 예를 들면 1일 1회 또는 1일 2회로 투여되는 치료 방법을 제공한다. 복용 형태는 섬유성 질환 또는 병태를 치료하기에 충분한 기간 동안 투여될 수 있다.
경구 투여의 경우, 일일 복용량은 활성제로서 (즉, 본 발명의 화합물로서) 50 kg의 체중의 성인에 대해 약 5 내지 1000 mg, 바람직하게는 약 10 내지 600 mg, 더 바람직하게는 약 10 내지 300 mg, 가장 바람직하게는 약 15 내지 200 mg의 범위 내이고, 약제는 예를 들면 1일당 1회 또는 2 내지 3회 분할 용량으로 투여될 수 있다.
세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물은 경구용 또는 주사용 투여에 적합한 임의의 복용 형태로 제형화될 수 있다. 화합물이 경구로 투여되는 경우, 이는 경구 투여를 위한 고체 복용 형태, 예를 들면, 정제, 캡슐, 알약, 과립 등으로 제형화될 수 있다. 이는 또한 경구 투여를 위한 액체 복용 형태, 예컨대 경구 용액, 경구 현탁액, 시럽 등으로 제형화될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "정제"는 또한 주로 구강 정제, 설하 정제, 구강 웨이퍼, 씹을 수 있는 정제, 분산성 정제, 용해성 정제, 발포정, 지속-방출 정제, 조절-방출 정제, 장용 코팅된 정제 등을 포함하는 경구 투여를 위한 일반적인 정제로, 원형 또는 불규칙 트로키로 화합물 및 적합한 보조 물질을 균일하게 혼합하고 압착함으로써 제조되는 고체 제제를 지칭한다. 본원에서 사용되는 용어 "캡슐"은 화합물, 또는 중공형 캡슐로 적합한 보조 물질과 함께 화합물을 충전하거나 또는 연질의 캡슐 물질에 밀봉하여 제조되는 고체 제제를 지칭한다. 가용성 및 방출 특성에 따라, 캡슐은 경질 캡슐 (일반 캡슐), 연질 캡슐 (연질 쉘 캡슐), 지속-방출 캡슐, 조절-방출 캡슐, 장용 코팅된 캡슐 등으로 구분될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "알약"은 점적 알약, 당의정, 작은 알약 등을 포함하는 적합한 방법을 통해 화합물 및 적합한 보조 물질을 혼합하여 제조되는 구형 또는 유사-구형 고체 제제를 지칭한다. 본원에 사용되는 용어 "과립"은 화합물 및 적합한 보조 물질을 혼합하여 제조되는 건조 과립형 제제를 지칭하고, 특정 입자 크기를 가진다. 과립은 가용성 과립 (일반적으로 과립으로서 지칭됨), 현탁액 과립, 발포성 과립, 장용 코팅된 과립, 지속-방출 과립, 조절-방출 과립 등으로 구분될 수 있다. 본원에 사용되는 용어 "경구용 용액"은 경구 투여를 위한 적합한 용매에 화합물을 용해시켜 제조되는 침강성 액체 제제를 지칭한다. 본원에 사용되는 용어 "경구용 현탁액"은 또한 건식 현탁액 또는 농축된 현탁액을 포함하는 액체 비히클에서의 비가용성 화합물을 분산시킴으로써 제조되는 경구 투여를 위한 현탁액을 지칭한다. 본원에 사용되는 용어 "시럽"은 화합물을 함유하는 농축된 수크로오스 수용액을 지칭한다. 주사용 복용 형태는 제형의 기술 분야에서의 종래의 방법에 의해 제조될 수 있고, 수성 용매 또는 비수성 용매가 선택될 수 있다. 가장 일반적으로 사용되는 수성 용매는 주사용 물뿐만 아니라 0.9% 염화나트륨 용액 또는 다른 적합한 수용액이다. 일반적으로 사용되는 비수성 용매는 식물성 오일, 주로 주사용 대두 오일, 및 알코올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 등의 다른 적합한 수용액이다.
일 구현예에서, 세니크리비록 또는 이의 염 및 푸마르산을 포함하는 약학적 조성물이 제공된다. 특정 구현예에서, 세니크리비록 또는 이의 염은 세니크리비록 메실레이트이다.
추가의 구현예에서, 푸마르산에 대한 세니크리비록 또는 이의 염의 중량비는 약 7:10 내지 약 10:7, 예컨대 약 8:10 내지 약 10:8, 약 9:10 내지 약 10:9, 또는 약 95:100 내지 약 100:95이다. 다른 추가의 구현예에서, 푸마르산은 조성물의 약 15 중량% 내지 약 40 중량%, 예컨대 약 20 중량% 내지 약 30 중량%, 또는 약 25 중량%의 범위의 양으로 존재한다. 다른 추가의 구현예에서, 세니크리비록 또는 이의 염은 조성물의 약 15 중량% 내지 약 40 중량%, 예컨대 약 20 중량% 내지 약 30 중량%, 또는 약 25 중량%의 양으로 존재한다.
다른 추가의 구현예에서, 세니크리비록 또는 이의 염 및 푸마르산의 조성물은 1종 이상의 충전제를 포함한다. 보다 특정한 구현예에서, 1종 이상의 충전제는 미세결정성 셀룰로오스, 제2인산칼슘, 셀룰로오스, 락토오스, 수크로오스, 만니톨, 소르비톨, 전분, 및 탄산칼슘으로부터 선택된다. 예를 들면, 특정 구현예에서, 1종 이상의 충전제는 미세결정성 셀룰로오스이다. 특정 구현예에서, 세니크리비록 또는 이의 염에 대한 1종 이상의 충전제의 중량비는 약 25:10 내지 약 10:8, 예컨대 약 20:10 내지 약 10:10, 또는 약 15:10이다. 다른 특정 구현예에서, 1종 이상의 충전제는 조성물의 약 25 중량% 내지 약 55 중량%, 예컨대 약 30 중량% 내지 약 50 중량% 또는 약 40 중량%의 양으로 존재한다. 다른 추가의 구현예에서, 본 조성물은 1종 이상의 붕해제를 더 포함한다. 보다 특정한 구현예에서, 1종 이상의 붕해제는 가교-결합된 폴리비닐피롤리돈, 가교-결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로오스, 및 나트륨 전분 글리콜레이트로부터 선택된다. 예를 들면, 특정 구현예에서, 1종 이상의 붕해제는 가교-결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로오스이다. 특정 구현예에서, 세니크리비록 또는 이의 염에 대한 1종 이상의 붕해제의 중량비는 약 10:10 내지 약 30:100, 예컨대 약 25:100이다. 다른 특정 구현예에서, 1종 이상의 붕해제는 조성물의 약 2 중량% 내지 약 10 중량%, 예컨대 약 4 중량% 내지 약 8 중량%, 또는 약 6 중량%의 양으로 존재한다. 다른 추가의 구현예에서, 본 조성물은 1종 이상의 윤활제를 더 포함한다. 보다 특정한 구현예에서, 1종 이상의 윤활제는 탈크, 실리카, 스테아린, 마그네슘 스테아레이트, 및 스테아르산으로부터 선택된다. 예를 들면, 특정 구현예에서, 1종 이상의 윤활제는 마그네슘 스테아레이트이다. 특정 구현예에서, 1종 이상의 윤활제는 조성물의 약 0.25 중량% 내지 약 5 중량%, 예컨대 약 0.75 중량% 내지 약 3 중량%, 또는 약 1.25 중량%의 양으로 존재한다.
다른 추가의 구현예에서, 세니크리비록 또는 이의 염 및 푸마르산의 조성물은 표 2의 것과 실질적으로 유사하다. 다른 추가의 구현예에서, 세니크리비록 또는 이의 염 및 푸마르산의 조성물은 표 3 및 4의 것과 실질적으로 유사하다. 다른 추가의 구현예에서, 세니크리비록 또는 이의 염 및 푸마르산의 임의의 조성물은 건조 과립화를 수반하는 공정에 의해 제조된다. 다른 추가의 구현예에서, 세니크리비록 또는 이의 염 및 푸마르산의 임의의 조성물은 건조제와 함께 패키징되는 경우에서 약 75% 상대습도 및 약 40℃로의 6주의 노출 이후에 약 4 중량% 이하, 예컨대 2 중량% 이하의 수분을 가진다. 다른 추가의 구현예에서, 임의의 상술한 조성물은 건조제와 함께 패키징되는 경우에서 약 75% 상대습도 및 약 40℃로의 12주의 노출 이후에 약 2.5%, 예컨대 1.5% 이하의 총 불순물 수준을 가진다. 다른 추가의 구현예에서, 임의의 상술한 조성물의 세니크리비록 또는 이의 염은 경구 투여 이후에의 용액에서의 세니크리비록 또는 이의 염의 생체이용률과 실질적으로 유사한 경구 투여 이후의 평균적인 절대 생체이용률을 가진다. 추가의 구현예에서, 세니크리비록 또는 이의 염은 비글 견종에서 약 10% 내지 약 50%, 예컨대 약 27%의 절대 생체이용률을 가진다.
다른 구현예에서, 세니크리비록 또는 이의 염 및 푸마르산의 조성물을 포함하는 약학적 제형이 제공된다. 추가의 구현예에서, 제형으로의 조성물은 과립의 형태일 수 있다. 다른 추가의 구현예에서, 제형으로의 조성물은 캡슐 쉘 내에 배치된다. 다른 추가의 구현예에서, 제형의 조성물은 사셰(sachet) 내에 배치된다. 다른 추가의 구현예에서, 제형의 조성물은 정제 또는 정제의 성분이다. 또 다른 추가의 구현예에서, 제형의 조성물은 다층형 정제의 하나 이상의 층이다. 다른 추가의 구현예에서, 제형은 하나 이상의 추가적인 약학적 불활성 성분을 포함한다. 다른 추가의 구현예에서, 제형은 표 9의 것과 실질적으로 유사하다. 다른 추가의 구현예에서, 표 9의 것과 실질적으로 유사한 조성물을 갖는 정제가 제공된다. 다른 추가이 구현예에서, 임의의 상기 구현예는 코팅된 기재이다. 다른 구현예에서, 임의의 상술한 구현예를 제조하기 위한 방법이 제공된다. 추가의 구현예에서, 본 방법은 세니크리비록 또는 이의 염 및 푸마르산을 혼화하여 혼화물을 형성하는 단계, 및 혼화물을 건식 과립화하는 단계를 포함한다. 다른 추가의 구현예에서, 본 방법은 1종 이상의 충전제와 세니크리비록 또는 이의 염 및 푸마르산을 혼화하여 혼화물을 형성하는 단계를 더 포함한다. 다른 추가의 구현예에서, 본 방법은 1종 이상의 붕해제와 세니크리비록 또는 이의 염 및 푸마르산을 혼화하여 혼화물을 형성하는 단계를 더 포함한다. 다른 추가의 구현예에서, 본 방법은 1종 이상의 윤활제와 세니크리비록 또는 이의 염 및 푸마르산을 혼화하여 혼화물을 형성하는 단계를 더 포함한다. 다른 추가의 구현예에서, 본 방법은 건식 과립화된 혼화물을 정제로 압착하는 단계를 더 포함한다. 다른 추가의 구현예에서, 본 방법은 캡슐을 건식 과립화된 혼화물로 충전하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명의 화합물은 수혈을 위한 혈액 또는 혈액 유도체에 포함되거나 또는 이와 조합하여 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명의 화합물은 수혈을 위한 혈액 또는 혈액 유도체에 부가되는 잠재적 HIV 저장소를 제거하는 1종 이상의 제제에 포함되거나 또는 이와 조합하여 사용될 수 있다. 보통, 수혈을 위한 혈액 또는 혈액 유도체는 다수의 사람으로부터 수득된 혈액을 혼합하여 제조되고, 일부 경우에서, 비감염된 세포는 HIV 바이러스로 감염된 세포로 오염된다. 이러한 경우, 비감염된 세포는 HIV 바이러스로 감염될 수 있다. 본 발명의 화합물이 잠재적 HIV 저장소를 제거하는 1종 이상의 제제와 함께 수혈을 위한 혈액 또는 혈액 유도체에 부가되는 경우, 바이러스의 감염 및 증식은 방지되거나 또는 조절될 수 있다. 특히, 혈액 유도체가 저장되는 경우, 바이러스의 감염 및 증식은 본 발명의 화합물의 부가에 의해 효과적으로 방지되거나 또는 조절된다. 또한, HIV 바이러스로 오염된 수혈을 위한 혈액 또는 혈액 유도체가 사람에게 투여되는 경우, 사람의 신체에서의 바이러스의 감염 및 증식은 잠재적 HIV 저장소를 제거하는 1종 이상의 제제와 조합하여 혈액 또는 혈액 유도체에 본 발명의 화합물을 첨가하여 방지될 수 있다. 예를 들면, 대개, 경구 투여에 의한 혈액 또는 혈액 유도체의 사용시 HIV 감염성 질환을 방지하기 위해, 복용량은 약 60 kg의 체중의 성인에 대해 CCR5/CCR2 길항제로서 약 0.02 내지 50 mg/kg, 바람직하게는 약 0.05 내지 30 mg/kg, 더 바람직하게는 약 0.1 내지 10 mg/kg의 범위이고, 약제는 1일 1회 또는 2 내지 3회 복용으로 투여될 수 있다. 당연하지만, 복용량 범위가 상기 기재된 바와 같이 1일 복용으로 구분하기 위해 필요한 단위 용량에 기초하여 조절될 수 있지만, 특정 대상체의 복용량은 대상체의 나이, 체중, 일반 건강 조건, 성별, 식사, 투여 시간, 투여 경로, 배출 속도 및 치료되는 특정 질환 질병의 정도에 따라 이러한 인자 그리고 다른 인자를 고려하여 결정될 수 있다. 이러한 경우, 투여 경로는 또한 적절하게 선택되고, 본 발명의 HIV 감염성 질환을 방지하기 위한 약제는 수혈 또는 혈액 유도체를 사용하기 이전에 수혈을 위한 혈액 또는 혈액 유도체에 직접적으로 첨가될 수 있다. 이러한 경우, 바람직하게는, 본 발명의 약제는 수혈 또는 혈액 유도체를 사용하기에 앞서 24시간 직전에, 바람직하게는 12시간 직전에, 더 바람직하게는 6시간 직전에 혈액 또는 혈액 유도체와 혼합된다.
수혈을 위한 혈액 또는 혈액 유도체와 별도로, 본 발명의 조성물이 수혈을 위한 혈액 또는 혈액 유도체 및/또는 다른 활성제와 함께 투여되는 경우, 약제는 바람직하게는 수혈 또는 혈액 유도체를 사용하기는 것과 동시에 내지 1시간 이전에 투여된다. 더 바람직하게는, 예를 들면, 약제는 1일 1회 내지 1일 3회로 투여되고, 투여는 4주간 지속된다.
병용 요법:
본 발명의 화합물은 단독으로 또는 1종 이상의 추가적인 활성제와 조합하여 사용될 수 있다. 1종 이상의 추가적인 활성제는 이를 필요로 하는 대상체에 치료적 효과를 가할 수 있는 임의의 화합물, 분자, 또는 물질일 수 있다. 1종 이상의 추가적인 활성제는 "공동-투여될 수 있고", 즉 별개의 약학적 조성물로서 대상체에게 조절된 방식으로 함께 투여되거나 또는 단일의 약학적 조성물에 혼화될 수 있다. "공동-투여된"은 1종 이상의 추가적인 활성제가 또한 본 화합물과 동시에 투여될 수 있거나, 또는 상이한 시점에서 상이한 빈도를 비롯하여 본 발명의 화합물과 별개로 투여될 수 있다. 1종 이상의 추가적인 활성제는 임의의 공지된 경로, 예컨대 경구로, 정맥내로, 근육내로, 비강으로, 피하로, 질내로, 직장내로 등으로 투여될 수 있고; 치료제는 또한 임의의 종래의 경로에 의해 투여될 수 있다. 다수의 구현예에서, 적어도 하나 및 임의로 1종 이상의 추가적인 활성제 모두는 경구로 투여될 수 있다.
이러한 하나의 추가적인 활성제는 비제한적으로 1종 이상의 항-섬유화제, 항레트로바이러스제, 면역계 억제제, CCR2 및/또는 CCR5 저해제 또는 치료제, n-아세틸시스테인 (아세틸시스테인; NAC), 글루코코르티코이드, 코르티코스테로이드, 펜톡시파일린, 포스포디에스테라제 저해제, 항-TNFα 제제, 항산화제, 및 항생제를 포함한다. 2개 이상의 약제가 조합하여 사용되는 경우, 각 약제의 복용량은 일반적으로 독립적으로 사용되는 경우의 약제의 복용량과 동일하고, 그러나 약제가 다른 약제의 대사를 방해하는 경우, 각 약제의 복용량은 적절하게 조정된다. 각 약제는 동시에 또는 예를 들면 12시간, 24시간, 및 36시간 미만의 시간 간격으로 개별적으로 투여될 수 있다. 본원에 기재된 복용 형태, 예컨대 캡슐은 적절한 간격으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 1일 1회, 1일 2회, 1일 3회 등. 심지어 보다 특별하게는, 복용 형태는 1일 1회로 투여된다. 일 구현예에서, 1종 이상의 항레트로바이러스제는 비제한적으로 유입 억제제, 뉴클레오사이드 역전사효소 저해제, 뉴클레오타이드 역전사효소 저해제, 비-뉴클레오사이드 역전사효소 저해제, 프로테아제 저해제, 인테그라제 저해제, 성숙 저해제, 및 이들의 조합을 포함한다. 일 구현예에서, 1종 이상의 추가적인 항레트로바이러스제는 비제한적으로 라미부딘, 에파비렌즈, 랄테그라비르, 비베콘, 베비리매트, 알파 인터페론, 지도부딘, 아바카비르, 로피나비르, 리토나비르, 테노포비르, 테노포비르 디소프록실, 테노포비르 전구약물, 엠트리시타빈, 엘비테그라비르, 코비시스타트, 다루나비르, 아타자나비르, 릴피비린, 돌루테그라비르, 및 이들의 조합을 포함한다.
일 구현예에서, 1종 이상의 면역계 억제제는 비제한적으로 사이클로스포린, 타크롤리무스, 프레드니솔론, 하이드로코르티손, 시롤리무스, 에버롤리무스, 아자티오프린, 마이코페놀산, 메토트렉세이트, 바실릭시마맙, 다클리주맙, 리툭시맙, 항-흉선세포 글로불린, 항-림프구 글로불린, 및 이들의 조합을 포함한다.
일 구현예에서, 1종 이상의 항생제는 비제한적으로 페니실린 (예를 들면 페니실린 및 아목시실린); 세팔로스포린 (예를 들면 세팔렉신); 매크롤라이드 (예를 들면 에리트로마이신, 클라리트로마이신, 및 아지트로마이신); 플루오로퀴놀론 (예를 들면 오플록사신, 레보플록사신, 및 오플록사신); 설폰아미드 (예를 들면 코-트리목사졸 및 트리메토프림); 테트라사이클린 (예를 들면 테트라사이클린 및 독시사이클린); 아미노글리코시드 (예를 들면 겐타마이신 및 토브라마이신)을 포함한다.
일 구현예에서, 1종 이상의 글루코코르티코이드는 비제한적으로 트리암시놀론, 메틸프레드니솔론 전신제, 베타메타손, 부데소니드, 프레드니솔론, 프레드니손, 하이드로코르티손, 덱사메타손, 및/또는 코르티손을 포함한다.
일 구현예에서, 하나 이상의 항-TNFα 제제는 비제한적으로 인플릭시맙, 에타네르셉트, 아달리무맙, 세르톨리주맙, 및/또는 골리무맙을 포함한다.
일 구현예에서, 하나 이상의 포스포디에스테라제 저해제는 비제한적으로 실데나필, 타달라필, 및/또는 바르데나필을 포함한다.
하기 실시예는 본 발명을 상세하게 설명하나 이의 범위를 제한하는 것으로 해석되지 않는다.
실시예
실시예 1 - 세니크리비록 메실레이트 조성물
산 가용화제의 정체를 제외하고는 동일한 일련의 세니크리비록 메실레이트 조성물은 키(Key) 1L 통(bowl) 과립화기에서 습윤 과립화에 이어서 트레이 건조, 체질, 혼합 및 카버 프레스 상에서의 정제로의 압착에 의해 제조하였다. 제형의 조성은 표 2에 나타낸다.
표 2
Figure pct00003
정제는 비글에 투여하였다. 경구 용액은 또한 대조군으로서 투여하였다. 제형 및 경구 용액의 절대 생물유용성을 결정하였고 도 2에 나타낸다. 상기 결과는 푸마르산을 갖는 세니크리비록 메실레이트가 시험된 다른 임의의 가용화제 보다 상당히 높은 생물유용성을 가짐을 보여준다.
실시예 2: 세니크리비록 메실레이트 조성물
세니크리비록 메실레이트, 푸마르산, 미세결정 셀룰로스, 가교결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로스 및 마그네슘 스테아레이트를 혼합하고, 건조 과립화하고, 밀링하고, 초과립 미세결정 셀룰로스, 가교 결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로스 및 마그네슘 스테아레이트와 블렌딩하고 10kP 초과의 경도 및 0.8% w/w 미만의 이쇄성을 갖는 정제로 압착하였다. 수득한 정제는 표 3에 나타낸 조성을 가졌다.
표 3
Figure pct00004
예를 들어, 실시예 2b (즉, 실시예 2b)에서 성분의 정제 당 농도 퍼센테이지 및 질량은 표 4에 나타낸다.
표 4
Figure pct00005
실시예 3: 세니크리비록 메실레이트 조성물
세니크리비록 메실레이트, 미세결정 셀룰로스, 가교결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로스 및 마그네슘 스테아레이트를 혼합하고, 건조 과립화하고, 건조하고, 밀링하고, 초과립 미세결정 셀룰로스, 가교 결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 푸마르산, 콜로이드성 이산화규소, 및 마그네슘 스테아레이트와 블렌딩하고 10kP 초과의 경도 및 0.8% w/w 미만의 이쇄성을 갖는 정제로 압착하였다. 수득한 정제는 표 5에 나타낸 조성을 가졌다.
표 5
Figure pct00006
주지할만하게, 표 5의 제형은 표 3b의 비율과 동일한 성분 비율을 갖고 단지 각각의 정제를 위해 사용되는 성분의 총량에서만 차이가 있다. 따라서, 표 4는 150mg의 세니크리비록 (유리 염기를 기준으로)을 갖는 정제를 보여주는 반면 표 CC-1은 25mg의 세니크리비록 (유리 염기를 기준으로)을 갖는 정제를 보여주고 표 4에 나타낸 실시예 2b의 150mg의 정제와 동일한 성분 비율을 갖는다.
실시예 4 - 표준
표 6의 시트르산 기반 제형은 다음과 같이 제조하였다. 세니크리비록, 하이드록시프로필 셀룰로스, 만니톨, 및 가교 결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로스를 혼합하고, 습윤 과립화하고, 건조하고, 밀링하고, 미세결정 셀룰로스, 가교 결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 시트르산, 콜로이드성 이산화규소, 탈크 및 마그네슘 스테아레이트와 블렌딩하였다. 수득한 블렌드는 10kP 초과의 경도 및 0.8% w/w 미만의 이쇄성을 갖는 정제로 압착하였다. 상기 정제는 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜 8000, 이산화티탄 및 황색 산화철로 피복하였다. 이와 같이 제조된 상기 피복된 정제는 미국 특허 출원 공개 번호 제2008/031942호에 기재된 것들과 실질적으로 동일하였다(참조: 예를 들어, 표 3).
표 6
Figure pct00007
실시예 5 - 표준
세니크리비록 및 하이프로멜로스 아세테이트 숙시네이트를 메탄올 중에 용해시키고 25중량%의 세니크리비록 (세니크리비록 유리 염기의 중량을 기준으로)을 함유하는 미세 분말로 분무 건조하였다. 상기 분말을 콜로이드성 이산화규소, 미세결정 셀룰로스, 만니톨, 나트륨 라우릴 설페이트, 가교 결합된 나트륨 카복시메틸 셀룰로스 및 마그네슘 스테아레이트와 혼합하였다. 상기 혼합물은 10kP 초과의 경도 및 0.8% w/w 미만의 이쇄성을 갖는 정제로 압착하였다. 정제의 최종 조성은 표 7에 나타낸다.
표 7
Figure pct00008
실시예 6: CVC 제형의 생물유용성
비글에서 실시예 3의 정제의 절대 생물유용성은 세니크리비록 메실레이트의 경구 용액 및 세니크리비록 메실레이트 분말을 함유하는 겔라틴 캡슐 둘다뿐만 아니라 실시예 4 및 5의 정제의 생물유용성과 비교하였다. 상기 결과는 표 8에 나타낸다.
표 8
Figure pct00009
본 실시예는 푸마르산을 갖는 건조 과립화된 정제 중에 세니크리비록의 생물유용성 (실시예 3)이 경구 용액의 생물유용성과 실질적으로 유사하고 푸마르산 (실시예 1b) 또는 시트르산 (실시예 4)을 갖는 습윤 과립화된 정제에서 세니크리비록의 생물유용성 보다 상당히 높고 HPMC-AS (실시예 5)를 갖는 분무 건조된 분산액 중에 무정형 세니크리비록을 갖는 정제 중의 세니크리비록의 생물유용성 보다 2배 초과이다. 이들 결과는 결정 API의 건조 과립화가 습윤 과립화 및 부정형 분무 건조된 분산액 보다 생물유용성에서 상당한 증가를 제공한다는 것이 의심할 이유가 없기 때문에 놀라운 것이다. 이것은 특히 무정형 분무 건조된 분산액이 흔히 불량한 수용성 약물의 생물유용성을 증가시키기 위해 사용되기 때문에 그러하다. 이들 결과는 또한 푸마르산이 시트르산 보다 더 느린 용해 시간을 갖고 CVC API (시트르산에 대해 3:1: API 대 1.06:1 푸마르산:API)에 상대적으로 낮은 산 질량 비율로 사용되기 때문에 놀라운 것이다. 따라서, 푸마르산이 CVC에 대해 시트르산 보다 더 효과적인 가용화제임이 입증된 것은 놀라웠다.
실시예 7: CVC 제형의 가속화된 안정성
실시예 2b의 정제의 가속화된 안정성은 40℃에서 75% 상대적 습도의 환경으로의 노출을 통해 실시예 1b, 4 및 5의 정제의 안정성과 비교하였다. 모든 정제는 연구 동안에 건조제와 함께 팩키징하였다. 도 3에 나타낸 바와 같이, 실시예 2b의 정제는 놀랍게도 다른 습윤 과립화된 정제 보다 훨씬 더 안정하고 분무 건조된 분산 정제와 유사하게 안정하였다. 실시예 2b와 실시예 4의 정제 간의 이러한 안정성 차이는 특히 2개 간에 단지 유의적인 차이가 제형을 제조하는 방법 (건조 과립화 대 습윤 과립화)이기 때문에 놀라운 것이다. 이들 결과는 또한 이것이 과립화 방법이 세니크리비록 생물유용성 및 안정성 둘다에 효과를 가질 수 있음이 이전에 공지되어 있지 않았기 때문에 놀라운 것이다.
실시예 8: CVC 제형의 안정성
실시예 2 및 3의 정제의 안정성은 상기 정제를 6주 동안 40℃에서 75% 상대적 습도 환경으로 노출함에 의해 시험하였다. 모든 정제는 연구 동안에 건조제와 함께 팩키징하였다. 상기 결과는 표 9에 나타내고 이는 정제가 이들 조건하에서 매우 안정함을 보여준다.
표 9
Figure pct00010
실시예 9: CVC 제형의 안정성
25℃에서 동력학적 증기 흡착 등온선은 세니크리비록 메실레이트의 것과 함께 실시예 3 및 4의 정제의 안정성과 서로 관련된다. 흡착은 5% 간격으로 0% 상대 습도 내지 90% 상대 습도로 수행하였다. 각각의 간격에서, 각각의 샘플은 10분 이상이고 30분 이하 동안 평형화시켰다. 평형화는 질량 증가 비율이 분당 또는 30분 후, 이보 다 더 짧은 기간의 어느 시점에서 0.03% w/w 이하인 경우 중지하였다. 도 4에 나타낸 결과는 실시예 2b의 정제가 실시예 4의 정제 보다 상당히 더 안정함을 보여준다. 이러한 결과는 실시예 4 보다 상당히 적은 흡습성인 실시예 3과 일치한다. 실시예 2b와 비교하여 실시예 4의 증가된 흡습성은 실시예 4의 부분적 겔화 및 후속적 감소된 안정성을 유발할 수 있는 보다 높은 이동 물 함량과 관련될 수 있다.
실시예 10: CVC 제형의 생물유용성
실시예 3의 정제의 생물유용성은 실시예 5, 및 비글에서 상이한 위 상태의 겔라틴 캡슐 내 세니크리비록 메실레이트 분말의 생물유용성과 비교하였다. 생물유용성은 각각의 위의 pH가 변화된 상이한 전처리 상태하에 시험하였다. 구체적으로, 펜타가스트릭(pentagastric) 전처리는 최저 pH를 제공하고 어떠한 처리도 중간 pH를 제공하지 않고 파모티딘 처리가 최고 pH를 제공한다.
도 5에 나타낸 결과는 실시예 3의 정제가 시험된 모든 조건하에 보다 높은 생물유용성을 가짐을 보여준다. 실시예 3의 생물유용성은 펜타가스트린 처리되고 비처리된 개 사이에는 변화가 덜한 반면 실시예 4는 펜타가스트린 처리된 개 (최저 위 pH)에서의 생물유용성과 비교하여 단식된 비-처리된 개 (중간 위 pH)에서 훨씬 적은 생물유용성을 보여주었다. 위 산성을 억제하고 위 pH를 상승시키는 H2 수용체 효능제인 파모티딘을 사용한 전처리는 모든 샘플에 대해 생물유용성을 감소시켰지만 실시예 3에 대한 감소는 실시예 4에 대한 것 보다 훨씬 덜하였다.
이들 결과는 푸마르산을 갖는 건조 과립화된 세니크리비록 조성물의 추가의 예상치 않은 이득을 입증한다. 구체적으로, 상기 제형의 약리역학은 잠재적 인간 위 pH 조건의 완전한 범위에 걸쳐 투여되는 경우 분무 건조된 분산액 (실시예 4)의 약리역학 만큼 크게 다양하지 않다. 이러한 결과는 다른 약염기성 항레트로바이러스 약물, 예를 들어, 아타자나비르의 생물유용성이 위 pH에 의해 크게 영향을 받기 때문에 예상치 않고 놀라운 것이다. 상기 약물에 대해, 무산증 환자와 같은 질환 또는 의학적 병태 또는 제산제, 양성자 펌프 억제제 또는 H2 수용체 효능제와 같은 약물의 동시 투여에 의해 유발될 수 있는 위 pH에서의 변화는 생물유용성을 치료학적 수준 아래로 저하시킬 수 있다. 실시예 3의 건조 과립화된 푸마르산 기반 세니크리비록 메실레이트 제형이 위 pH 변화와 같이 생물유용성이 변화하지 않는 경향이 있는 이들 결과는, 실시예 3이 다양한 위 pH 수준을 갖거나 가질 가능성이 있는 환자에서 사용될 수 있는 보다 강한 제형임을 보여준다.
실시예 11a-11c: 세니크리비록 메실레이트 및 라미부딘 제형의 제조
표 10의 세니크리비록 메실레이트 및 라미부딘의 제형은 다음과 같이 제조하였다. 첫째로, 과립내 성분을 혼합하고 건조 과립하여 건조 과립화된 혼합물로서 조성물을 형성하였다. 이러한 건조 과립화된 혼합물을 이어서 초과립 성분과 추가로 혼합하여 혼합물을 형성하였다. 상기 혼합물은 정제로 압착시켰다. 150mg의 CVC 강도 정제 중 비글에서 세니크리비록 (CVC) 및 라미부딘 (3TC)의 절대 생물유용성(실시예 11b 및 11c)을 측정하였다. 상기 결과는 도 6에 나타낸다.
표 10
Figure pct00011
실시예 12: NASH의 마우스 모델에서 이원 CCR2 및 CCR5 길항제 세니크리비록의 항-섬유증 및 항-염증 활성
배경: 비-알콜성 지방간염(NASH)은 지방 축적, 만성 염증(염증 촉진 단핵구 및 대식세포를 포함하는)을 특징으로 하고 섬유증이 존재하는 경우, 이것은 간경변증 또는 간세포 암종을 유도할 수 있다. 현재 NASH에 대해 어떠한 승인된 치료요법이 없다. 증거는 C-C 케모킨 수용체 (CCR) 2형 및 이의 주요 리간드, 단핵구 화학주성 단백질-1이 간에서 염증 촉진 단핵구 집결에 기여함을 시사한다. 세니크리비록(CVC)은 143명의 HIV-1-감염된 성인에서 48주 단계 2b 연구 (NCT01338883)에서 바람직한 안전성 및 관용성을 보여주는 강력한 경구 이원 CCR2/CCR5 길항제이다. CVC는 간세포 암종을 유도하는 식이 유도된 NASH의 마우스 모델에서 평가하였고 상기 모델의 제1 섬유증 단계로부터의 데이터가 제공된다.
방법: NASH는 출생 2일 후 200㎍의 스트렙토조토신의 단일 주사(손상된 당 조절을 유발하는)에 이어서 4주령으로부터 고지방 식이에 의해 수컷 마우스에 유도하였다. 6 내지 9주령으로부터, 3개 그룹의 동물(n=6/그룹)에 하루 2회 경구 위관영양을 통해 0 (비히클), 20 (낮은 용량) 또는 100 (높은 용량) mg/kg/일의 CVC 용량을 투여하였다. 동물은 9주령에 희생시키고 간의 생화학적 유전자 발현 및 조직학적 평가를 수행하였다.
결과: CVC 처리는 체중 또는 간 중량, 전혈당 또는 간 트리글리세라이드에 대해 어떠한 효과도 갖지 않았다. 평균 (±SD) 알라닌 아미노트랜스퍼라제 수준은 대조군과 비교하여 CVC 처리 그룹 둘다에서 상당히 감소하였고(낮은 용량, 높은 용량 및 비히클에 대해 각각 58±12, 51±13 및 133±80 U/L; p<0.05) 간 하이드록시프롤린은 처리된 그룹에서 감소하는 경향이 있다. 실시간 RT-PCR에 의해, 전체 간 용해물 중 콜라겐 1형 mRNA는 CVC 처리로 27 내지 37%까지 감소하였다. 섬유증 면적의 퍼센테이지(시리우스 레드 염색에 의해)는 대조군에 비해 CVC 처리에 의해 상당히 감소하였다(p <0.01): 혈관 주변 공간이 포함되는 경우 20 mg/kg/일, 100 mg/kg/일 및 대조군 각각에 대해 0.66% ± 0.16, 0.64% ± 0.19 및 1.10% ± 0.31; 혈관 주변 공간이 공제되는 경우 각각 0.29% ± 0.14, 0.20% ± 0.06, 및 0.61%± 0.23. 중요하게, 조직학적 비-알콜성 지방 간 질환 활성 스코어 (스코어는 상기 모델에서 비처리된 마우스에 대해 0이다)는 CVC 처리로 상당히 감소하였고 (낮은 용량, 높은 용량 및 비히클 각각에 대해 4.0±0.6, 3.7±0.8 및 5.3±0.5; p<0.05), 이는 주로 감소된 염증 및 벌루닝 스코어로 인한 것이다. 인간에서 이전에 보여진 바와 같이, 혈장 단핵구 화학주성 단백질-1 수준에서 CVC 용량-관련 보충적 증가가 마우스에서 관찰되었고(낮고 높은 용량에 대해 각각 1.1- 및 1.5-배 증가) CCR2의 길항작용과 일치하였다.
결론: 이들 데이터는 HIV-1에 대한 인간 시험에서 현재 연구 제제인 CVC가 임상적 연구를 보증하는 NASH의 마우스 모델에서 항-섬유증 및 항-염증 활성을 가짐을 시사한다. 이들 발견은 CCR2/단핵구 화학주성 단백질-1 축의 파괴가 NASH에 대한 신규 치료 방법일 수 있다는 추가의 증거를 제공한다.
실시예 13: 티오아세트아미드 유도된 간 섬유증 및 간경변의 랫트 모델에서 이원 CCR2/CCR5 길항제인 세니크리비록의 상당한 항-섬유증 활성
배경: C-C 케모킨 수용체 (CCR) 2형 및 5형은 염증 촉진 단핵구 및 마크로파아지, Kupffer 세포 및 간 별 세포(HSC) 상에서 발현되고 이는 간에서 염증 및 섬유조직성장에 기여한다. 세니크리비록 (CVC; 신규하고 강력한 경구 이원 CCR2/CCR5 길항제)는 143　HIV-1-감염된 성인에서 48주 단계 2b 연구(NCT01338883)에서 바람직한 안전성/관용성을 가졌다. 상기 연구는 질환 개시와 비교하여 CVC의 생체내 항-염증성 효과 및 치료 중재 타이밍을 티오아세트아미드(TAA) 유도된 손상으로 인해 간 섬유증이 발생한 랫트에서 평가한다.
방법: 섬유증은 8주 동안 TAA 150mg/kg을 3회/주로 복강내 투여함에 의해 수컷 스프라그-돌리 랫트에서 유도하였다. 랫트(n=4-8/그룹)에 처음 8주 동안 (그룹 1; 조기 중재), 4 내지 8주 동안에 (그룹 2: 섬유증 발생) 또는 TAA 투여의 완료 후 8주 내지 12주 동안 (그룹 3: 간경변 역전) TAA와 동시에 CVC 30 mg/kg/일 (a), CVC 100 mg/kg/일 (b) 또는 비히클 대조군 (c)을 투여하였다. 간의 생화학적 유전자 발현 및 조직학적 평가를 수행하였다.
결과: TAA (그룹 1)와 동시에 개시되는 경우, 30mg (그룹 1a) 및 100　mg(그룹 1b)의 CVC는 콜라겐 형태측정에 의해 평가된 바와 같이 섬유증(각각 49% 및 38%까지; p<0.001)을 감소시켰다. 콜라겐 1형에 대한 단백질 수준은 각각 그룹 1a 및 1b에 대해 30% 및 12%까지 감소한 반면, α-SMA는 각각 17%, 및 22%까지 감소하였다. 처리가 TAA-유도된 손상(그룹 2) 4주 후 개시되는 경우, 통계학적으로 유의적인 항-섬유증 효과는 CVC 30mg (그룹 2a, 콜라겐에서 36% 감소; p<0.001)에 대해 관찰되었지만 CVC 100mg (그룹 2b)에 대해서는 관찰되지 않았다. 처리가 8주에 (간경변 존재) 개시되고 4주 동안 (그룹 3) 계속되는 경우, 섬유조직발생 유전자 발현 또는 섬유증에 대해 CVC의 어떠한 유의적 효과도 없었다.
결론: CVC는 TAA로 인해 비-간경변의 간 섬유증에서 강력한 항-섬유증 제제이다. 상기 약물은 조기 중재(그룹 1)에서 및 섬유증 발생(그룹 2a)에서 효과적이었지만 간경변이 이미 확립된 경우(그룹 3)에는 그렇지 않았다.
실시예 14: 세니크리비록은 낮은 나노몰 농도에서 높은 CCR5 수용체 점령을 달성한다
배경: 세니크리비록(CVC)은 신규하고 하루 1회, 강력한 CCR5 및 CCR2 효능제이고 이는 치료-순수 성인(NCT01338883)에서 HIV-1 감염 치료를 위한 단계 2b 평가를 완료했다. 본 연구의 목적은 CVC, BMS-22 (TOCRIS, CCR2 길항제) 및 승인된 CCR5 길항제, Maraviroc(MVC)로의 처리 후 시험관내 수용체 점령 및 생물학을 평가하는 것이다.
방법: 5 HIV+ 및 5 HIV-대상자로부터의 PBMC는 CVC, BMS-22 또는 MVC로 항온처리함에 이어서 처리하지 않거나,RANTES (CCR5 리간드) 또는 MCP-1 (CCR2 리간드)로 처리하였다. CCR5 또는 CCR2 내재화를 억제하는 각각의 약물의 능력을 평가하였다. CCR5 및 CCR2의 세포-표면 발현은 유동 세포측정에 의해 평가하고 형광 값은 동등한 가용성 형광의 분자(MESF: molecules of equivalent soluble fluorescence)로 전환되었다.
결과: RANTES의 부재하에 CVC 및 MVC 둘다는 CCR5의 세포-표면 발현을 증가시켰다. 상기 효과는 HIV 음성 대상자 (CD4+ 및 CD8+ T 세포)에서 훨씬 큰 정도로 나타났다. CVC는 MVC 보다 낮은 유효 농도에서 RANTES-유도된 CCR5 내재화를 차단하였다. CCR5의 포화가 CVC에 대해 도달되는 유효 농도는 CD4+에 대해 3.1 nM이었고 CD8+ T 세포에 대해 2.3nM이었다(각각 ~91% 및 ~90% 수용체 점령). MVC는 CD4+ 및 CD8+ T 세포 둘다에 대해 12.5nM에서 포화에 도달하였고, 각각 ~86% 및 ~87% 수용체 점령을 나타낸다. CVC 및 MVC는 RANTES의 부재하에 2개의 제제를 사용한 증가된 CCR5 발현의 관찰에 의해 증폭될 수 있는 효과인 높지만 불완전한 CCR5의 포화도를 성취하였다. MCP-1의 부재하에, CVC는 CCR2 내재화를 유도하였고 단핵구 상에 세포-표면 발현을 감소시켰다. BMS-22는 CCR2 세포-표면 발현을 약간 증가시켰다. CVC는 BMS-22 보다 낮은 농도에서 MCP-1 유도된 CCR2 내재화를 차단하였다. 단핵구 CCR2의 포화는 6nM의 CVC에서 도달되었고, ~98% CCR2 점령을 나타낸다. >80% 수용체 점령에 도달하기 위해서는, 평균 18nM의 BMS-22가 요구되었고 이는 1.8nM의 CVC와 대비된다.
결론: CVC는 생체내 MVC 보다 용이하게 RANTES-유도된 CCR5 내재화 (보다 낮은 농도에서)를 차단하였고, CVC가 생체내 MVC 보다 RANTES에 의한 세포 활성화를 차단하는데 보다 효과적임을 지적한다. 처리된 대상자에서 기준선 CCR5 발현 수준은 생체내 CCR5 길항제 활성의 결정인자일 수 있다. CVC는 생체내 낮은 나노몰 농도에서 단핵구 상에 CCR2의 ~98% 수용체 점령을 달성하였고, MCP-1의 부재하에 단핵구 상의 CCR2 발현을 감소시켰다. 감소된 발현과 쌍을 이루는 CVC에 의한 CCR2의 높은 포화는 임상에서 CVC를 사용하여 관찰된 강력한 CCR2 차단을 설명할 수 있다. CVC는 시험관내 강력한 면역조절 활성을 갖고, 만성 HIV 감염에서 중요한 조합된 면역치료제 및 항-레트로바이러스제일 수 있다.
실시예 15: CVC는 HIV 진입을 차단하지만 MVC와 같은 세포외 공간으로 HIV의 재분포를 유도하지 않는다
배경: 생체내에서, CVC는 CCR5-트로픽 바이러스 7을 함유하는 처리-경험이 있는 개체의 단독치료요법 동안에 효능을 나타냈다. 단계 IIb 임상 연구(652-2-202; NCT01338883)에서, CVC는 24주에 비-뉴클레오사이드 역전사 효소 억제제 (NNRTI) 에파비렌즈 (EFV)와 유사한 효능 및 비-뉴클레오사이드 역전사 효소 억제제 (NNRTI) 에파비렌즈 (EFV) 보다 우수한 독성 프로필을 입증하였고, 각각 둘 다가 엠트리시타빈 (FTC)과 테노포비르 (TDF)의 조합으로 투여되는 경우 바람직한 안전성 및 관용성을 갖는다. 본원 발명자는 연구 202(실시예 22)에서 CVC의 항레트로바이러스 효능이 MVC와 함께 관찰된 리바운드 표현형의 결과로서 과소평가될 수 있는 것으로 추정되었다. 따라서, 본원 발명자는 연구 24주차의 바이러스학적 성공을 달성한 30명의 대상자로부터 저장된 PBMC에서 세포내 HIV DNA 감소를 측정함에 의해 연구 202 (실시예 22)의 생체외 준-분석을 수행하였다. 본원 발명자는 또한 CVC 또는 MVC가 유발할 수 있는 임의의 세포-부재 비리온 재분포의 정도를 결정하고 비교하기 위해 시험관내 검정을 수행하였다.
본원 발명자는 현재 CVC가, 바이러스 입자가 리바운드되도록 유발하지 않음을 보여준다. 실제로, 세포내 DNA에서 필적하는 감소는 CVC 또는 EFV로 처리된 개체에서 나타났고, 이는 혈장 바이러스 로딩이 CVC 처리 성공의 정확한 척도임을 시사한다. 구조적 모델링은 MVC 및 CVC로 수득된 결과 간의 차이에 대한 잠재적 설명을 제공한다.
방법: 세포. CD4, CCR5, 및 CXCR4를 발현하는 PM-1 세포는 37℃, 5% CO2에서 10% 태아 소 혈청 (R10 배지)을 함유하는 RPMI-1640 배지에 유지시켰다. 형질감염을 위해 사용되는 293T 세포는 37℃, 5% CO2에서 10% FBS, L-글루타민 및 항생제(D10 배지)에서 DMEM 중에 유지시켰다. 바이러스 스톡. HIV-1 BaL 바이러스는 293T 세포를 플라스미드 pWT/BaL로 형질감염시킴에 의해 제조되었다. 리포펙타민 2000은 형질감염 제제로서 사용하였다. 배양 상등액은 형질감염 48시간 후에 수거하고, 0.45㎛ 공극 필터를 통해 여과하고, 37℃에서 20분동안 바이러스 스톡 ml당 벤조나제 50유닛으로 처리하여 오염 플라스미드 DNA를 제거하였다. 바이러스 스톡은 -80℃에서 동결시켜 벤조나제 활성을 중지시켰다. 벤조나제-처리된 바이러스 스톡은 코드 (cord) 혈액 단핵 세포(CBMC)에서 번식시켰다. CBMC는 HIV-1 BaL로의 감염 전에 R10 배지에서 피토헤마글루티닌 (PHA-M)으로 72시간 동안 자극하였다. 바이러스 증폭 배양물은 후속적으로 인터류킨 2 (IL-2)가 보충된 R10에서 성장시키고 37℃, 5% CO2에서 항온처리하였다.
감염: 본원 발명자는 PM-1 세포를 CVC (20 nM) 및 MVC (50 nM)의 억제 농도의 존재하에 HIV-1 BaL에 노출시켰다. 2개 약물은 바이러스의 첨가 전에 37℃에서 1시간 동안 PM-1 세포와 함께 항온처리하였다. HIV-1 BaL의 p24 항원 500ng을 R10 배지 1ml 중에서 5 X 105 세포 당 항온처리하였다. 문단에서 "무세포(no cell)"로서 기재된 바이러스 유일 대조군은 바이러스 붕괴를 측정하기 위해 사용하였다. 바이러스 흡착은 비-약물 대조군에서 측정되었고, 이로써 HIV-1 BaL의 p24 Ag 500ng이 약물 처리 부재하에 1시간 동안 37℃에서 예비 항온처리된 5 x 105 PM-1 당 첨가하였다. 각각의 약물 처리 및 대조군은 2회 수행하였다. 바이러스 RNA는 제조업자의 지침에 따라 QIAamp 바이러스 RNA 소형 키트를 사용하여 140㎕의 상등액 유체로부터 추출하였다. 샘플은 분석때까지 -80℃에서 저장하였다. 상등액 바이러스 로딩은 프라이머 US1SSF (5'-AACTAGGGAACCCACTGCTTAA-3'), US1SSR (5'- TGAGGGATCTCTAGTTACCAGAGTCA-3') 및 US1SS 프로브 (5'-(FAM) CCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAA) 및 Invitrogen qRT-PCR 슈퍼믹스 키트와 함께 정량적 실시간 역전사 PCR (qRT-PCR)을 사용하여 측정하였다. 사이클링 파라미터는 다음과 같았다: 15분동안 50℃, 10분동안 95℃에 이어서 15초 동안 95℃ 및 1분동안 60℃의 50회 사이클. 모든 값은 2개의 독립적 실험에 대한 복제 시험 결과이다. RNA 카피수는 pBaL/wt의 10배 연속 희석액을 사용하여 정량하여 각각의 검정에 대한 표준 곡선을 작성하고 이전의 연구로부터 공지된 카피수를 갖는 샘플에 대해 보정하였다.
환자 샘플: 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 샘플은 CCR5-트로픽 바이러스를 함유하는 HIV-1 감염된 치료 순수 환자에서 엠트리시타빈/테노포비르 디스프록실 푸마레이트 (FTC/TDF)와 조합된 CVC(100mg 또는 200mg) 또는 EFV의 효능, 안전성 및 관용성을 비교하는 연구 202의 단계 IIb 임상 시험에서 24주차의 바이러스학적 성공을 성취한 30명의 환자들(CVC 100mg, CVC 200mg 및 EFV에 대해 각각 10, 13 및 7명)로부터 수득하였다. 기준선 및 24주차 샘플은 <100,000의 기준선 바이러스 로딩을 갖지만 >1,000 바이러스 RNA 카피물/ml를 갖는 참여자로부터 채취하였고 CD4 카운트는 CVC 또는 EFV를 수용하도록 무작위로 할당된 200개 세포/㎕ 이상이었다.
세포내 DNA qPCR. 총 DNA를 추출하고, 정량하고 -80℃에서 저장하였다. 세포내 강한-스톱(stop) DNA 수준은 상기된 US1SS 프라이머/프로브 세트로 정량하였다. 세포내 전장 DNA 수준은 US1FL 프라이머/프로브 세트 (정배향: 5'-AACTAGGGAACCCACTGCTTAA; 역배향: 5'-CGAGTCCTGCGTCGAGAGA; 프로브: 5'-[FAM] -CCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAA)를 사용하여 정량하였다. 2개의 DNA 수준은 GAPDH 프라이머/프로브 세트 (정배향: 5'-ACCGGGAAGGAAATGAATGG; 역배향: 5'-GCAGGAGCGCAGGGTTAGT; 프로브: 5'-(VIC)-ACCGGCAGGCTTTCCTAACGGCT)와 다중복합체화하여 DNA 인풋을 정상화하고 샘플 통합성을 입증하였다.
통계학적 분석: 만-휘트니 시험을 사용하여 모든 3개의 치료 그룹에 대한 시험관내 세포내 HIV DNA 수준을 분석하였다. 모든 데이터는 프리즘 5 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.
CCR5 중 세니크리비록의 분자 도킹
CCR5 케모킨 수용체의 결정 구조(단백질 데이터 뱅크 확인 번호. [PDB ID] 4MBS)는 연구소 (Research Collaboratory for Structural Bioinformatics (RCSB) Protein Data Bank)를 통해 수득하였고 도킹 표적물로서 사용하였다. CCR5-수용체 길항제인 세니크리비록 (이전에는 TAK-652/TBR-652)의 구조물은 제조원(PubChem)으로부터 수득하였고 리간드로서 사용하였다. 리간드-도킹된 구조물의 최소화는 CCR5 7개 막관통(7TM) α-헬릭스 수용체 공동 내 리간드의 배향을 예측하는 DOCK 계산을 위한 인풋으로서 CCR5 및 CVC를 제조하는 UCSF 키메라를 사용하여 촉진시켰다. 도킹 계산을 수행하고 최대 크기의 그리드 박스를 사용하여 CCR5로의 모든 가능한 도킹 부위를 포함하였다. 결합 부위는 7TM 공동으로부터 15 Å 미만의 모든 잔기들(잔기 Glu283 및 Tyr10 주변)로 이루어진다. 도킹 결과는 분자간 상호작용을 동정하기 위해 프로세싱하였다. 시험 9개 포즈(test nine pose)는 추가의 분석을 위해 유지하였다. 도킹 시스템의 정확도를 확증하기 위해, MVC는 동일한 방법을 사용하여 CCR5에 도킹시키고 결정 구조물과 관련된 이의 배향을 결정하였다. 관찰된 결정 구조와 AutoDock Vina로부터 수득된 예측된 형태 간에 PyMOL을 사용하여 계산된 실효값 편차 (RMSD)는 0.275 Å이었고, 이는 상기 프로토콜이 완전함을 지적한다.
결과
먼저, 본원 발명자는 연구 202 임상 시험 동안에 수득된 바이러스 로딩의 척도를 확인하기 위해 HIV 세포내 DNA를 정량하였다. 상기 임상 연구에서 참여자로부터 단리된 PBMC에서 전장 세포내 HIV DNA 수준 (조기 역전사를 지적하는)의 생체외 분석은 24주차의 모든 그룹에 걸쳐 유사하였다(도 7a). 기준선으로부터 평균 배수 변화는 각각 CVC 그룹 100mg (n=10) 및 CVC 200mg (n=11)에 대해 0.643 및 0.787이었다. EFV 600 mg 그룹 (n = 7)은 24주차의 0.825의 기준선으로부터 평균 배수 변화를 가졌다. 상기 평균치는 통계학적으로 유의적이지 않았다.
이어서, 강한-스톱 세포내 HIV DNA 수준 (후기 역전사를 지적하는)은 24주차의 전장 수준과 동시에 측정하였다(도 7b). 기준선으로부터 평균 배수 변화는 CVC 100mg 그룹에 대해 0.49, CVC 200mg 그룹에 대해 0.63, 및 EFV 600mg 그룹에 대해1.01이었다. 상기 평균치는 통계학적으로 유의적이지 않았다.
CVC 및 MVC 노출 후 세포외 바이러스 수준을 측정하는 시험관내 실험을 또한 수행하였다. 배양 유체 중 바이러스 수준은 진입-억제제 노출된 세포의 감염 후 4시간째에 qRT-PCR 및 P24 ELISA에 의해 측정하였다. 4시간 후, MCV-처리된 세포로부터의 배양 유체는 기준선 (기준선: 1.19 X 1010 카피수/ml, 4시간: 1.67 X 1010 카피수/ml)과 비교하여(도 8a) CVC-처리된 세포에 대한 것 보다 높은 RNA 수준을 나타냈다. (기준선: 506 ng/ml, 4시간: 520 ng/ml) (도 8b). CVC-처리된 세포로부터의 배양 유체 중 바이러스 RNA는 4시간 후 상당히 변화하지 않았다(기준선: 1.19 X 1010 카피수/ml, 4시간: 1.26 X 1010 카피수/ml) (도 8a). CVC 처리를 사용한 4시간 후 P24 수준은 기준선(기준선: 506 ng/ml, 4시간: 192 ng/ml)(도 8b)으로부터 감소하였고 어떠한 세포에 대한 바이러스 RNA 감소 부재 및 어떠한 약물 부재의 대조군은 4시간 후 유사하였고, 각각 1.14 X 1010 카피수/ml, 및 1.1 X 1010 카피수/ml이었다(도 8a). 506 ng/m의 기준선 p24 수준 후, 4시간 후 어떠한 세포 부재의 대조군에 대한 p24 항원 수준은 138 ng/ml이었다. p24 약물 부재 대조군 수준은 244 ng/ml이었다(도 8b).
CVC 및 MVC 처리 후 세포외 바이러스 수준에서 이들 차이는 본원 발명자가 HIV-1 BaL로 감염되기 전에 1시간 동안 CVC 또는 MVC에 노출된 PM-1 세포에서 세포내 강한-스톱 HIV DNA 수준을 조사하도록 촉진시켰다. 총 DNA는 4시간 후 세포 펠렛으로부터 추출하였다. CVC 또는 MVC-처리된 세포의 세포내 강한-스톱 HIV DNA 수준은 약물 부재의 대조군과 비교하였다(도 9). 본원 발명자는 어떠한 약물 부재 대조군과 비교하여 MVC 처리된 세포에서 0.02의 상대적 DNA 수준을 관찰한 반면에 CVC-처리된 세포는 단지 0.1의 상대적 세포내 DNA 수준을 나타냈다. MVC 및 CVC 처리된 세포의 상대적 DNA 수준 간의 차이는 유의적이었다.
MVC (PDB ID 4MBS)와 이것이 복합체화된 CCR5 7TM의 결정 구조물의 존재는 결합 포켓으로 도킹된 CVC와의 CCR5의 모델을 생성하였다. 본원 발명자는 또한 MRV의 CCR5로의 재도킹에 의해 평가된 도킹된 포즈를 예측하였고; 가장 바람직한 에너지를 갖는 상부 포즈는 적당한 배향을 가졌고 결정 구조물에서의 형태와 중첩된다(RMSD < 0.3 Å). 인 실리코 CCR5 도킹 자극은 CVC가 또한 리간드-결합 포켓으로서 공지된 CCR5 구조물내 소수성 포켓에만 결합한다(도 10). 상부 9개 포즈만을 추가의 분석을 위해 유지하였다. CVC가 CCR5로의 도킹후를 나타내고 이들은 3개의 부위로 클러스터링되어 있다는 3개의 상이한 형태가 있다(도 10a, b). 제1 부위(부위 1)는 소수성 포켓으로 깊게 스패닝되어 있고 대형 용적을 채운다(도 10a). 제2 부위(부위 2)는 부분적으로 포켓의 중앙에 위치할뿐만 아니라 또한 TM1과 TM7 간의 CCR5로부터 외부로 튀어 나와 있다(도 10a). 제3 부위(부위 3)에서, 소수의 CVC 포즈는 수용체 공동의 진입부 근처에 위치한다.
CCR5 내 세포외 루프 및 막관통 도메인내 잔기들의 부위-지시된 돌연변이유발은 gp120 결합에 관여하는 주요 잔기들을 동정하였고; 상이한 위치에서의 돌연변이는 CCR5로의 gp120 결합을 폐지시키거나, 손상시키거나 영향을 주었다. CCR5 내 gp120 결합에 대해 중요한 것으로 동정되었던 13개의 주요 잔기들은 Tyr37, Trp86, Trp94, Leu104, Tyr108, Phe109, Phe112, Thr177, Ile198, Trp248, Tyr251, Leu255 및 Glu283이다. 도 11은 결합 포켓에서 CVC(좌측) 및 MVC (우측)의 도킹된 포즈를 갖는 CCR5의 분자 표면 제공을 보여준다. CVC 및 MVC는 각각 ~1285 및 1790 Å2의 분자 표면적을 갖는다(PyMOL을 사용하여 계산됨). MVC는 결합 포켓의 중앙부를 점령한다. gp120 결합을 위해 중요한 것으로 결정되었던 모든 13개 잔기들은 PyMOL에 의해 측정된 바와 같이 MVC 에서 4 Å (정전기 및/또는 소수성 상호작용을 위해 본 연구에 사용된 컷오프 거리) 내에 있다. 대조적으로, 도킹된 CVC 포즈는 MVC에 대해 나타낸 바와 같이 중앙에 있지는 않지만 동일한 포켓을 점령한다(도 11). 차라리, CVC는 도켓의 한 측면으로 이동하고(도 12a/b) CVC의 4 Å 내 CCR5 중 잔기들의 컨센서스를 측정하였다. CVC는 MVC 보다 큰 표면적을 점령하지만, gp120 결합을 위해 중요한 13개 잔기 들 중 7개 만이 CVC의 4 Å 내에 있고, 즉, Tyr37, Trp86, Tyr108, Phe109, Ile198, Leu255 및 Glu283이다. 전체적으로, 이들 자극은 CVC가 CCR5의 결합 포켓에서 MVC와 유사한 영역을 점령함을 시사한다.
논의: 본 연구에서, 본원 발명자는 HIV 진입을 차단하는 둘다 CCR5 길항제인 CVC 및 MVC가 세포외 바이러스 수준에 대해 차등적 효과를 가짐을 관찰하였다.
치료 순수 대상자에서 CVC와 EFV, 둘다를 FTC/TDF와 비교하는 단계 IIb 이중 맹검, 이중 위약 연구에서, CVC 100mg을 투여받은 환자 중 76%는 CVC 200mg을 투여받은 환자 중 73% 및 EFV를 투여받은 환자 중 71%와 비교하여 24주 째에 바이러스학적 성공 (HIV RNA <50 카피수/ml)을 성취하였다. 본원 발명자는 이전에 세포 부재 비리온이 MVC의 존재하에 진입에서의 실패된 시도 후 표적 세포로부터 축출될 수 있기 때문에 MVC가 인공적으로 바이러스 로딩을 증가시킬 수 있음을 보여주었다. 현재 연구는 동일한 효과가 CVC에 대해 나타나는지 그리고 세포내 DNA 측정이 진입 및 역전사 효소 억제제를 비교하는 경우 항바이러스 효능의 보다 정확한 제공일 수 있는지를 해결하기 위해 디자인하였다.
사실, 연구 202 치료 투여군에 걸친 세포내 DNA 수준은 선택된 샘플에서 24주차의 유사하였고(도 7), 의도 대 치료 (ITT) 분석 동안에 관찰된 경향을 반영한다. 전장 HIV-DNA 수준은 또한 24주차의 모든 그룹에 대해 유사하였고 이는 CVC 및 EFV 둘다에 대해 유사한 항바이러스 효능을 시사한다. 강한-스톱 HIV DNA 수준에서 차이는 CVC와 EFV 그룹 간에 관찰되었던 반면 CVC 그룹 둘다는 EFV와 비교하여 바이러스 로딩에서 보다 급격한 감소를 나타내었다. 강한-스톱 HIV DNA 수준이 직접 진입 억제제에 의해 영향을 받음에 따라서 상기 결과가 예측되었다. 바이러스학적 성공 및 세포내 HIV DNA 수준 측면에서 EFV와 CVC 간의 유사성은 상기 이원 CCR5 및 CCR2 억제제의 항바이러스 효능이 바이러스 로딩 측정에 의해 차폐되지 않음을 시사한다.
본원 발명자는 또한 CVC가 시험관내 MVC에 대해서 나타나는 바와 같이 바이러스 축출을 유도할 수 있는지를 요구하였다. 바이러스 정량의 2개의 별도의 측정, qRT-PCR 및 p24 ELISA는 MVC 처리가 감염 후 4시간까지 세포외 바이러스 수준을 유지했음을 부여주었다. 대조적으로, CVC를 사용한 처리가 약물 부재 또는 세포 부재 대조군의 것과 상응하게 4시간 째에 바이러스 수준 감소에서의 감소를 유발하였다(도 8). 표면상으로 유사한 항바이러스 메카니즘에도 불구하고, 세포 부재 바이러스와 CCR5 간의 상호작용과 관련하여 CVC와 MVC 간에 차이가 있는 것으로 나타난다.
시험관내 세포내 강한-스톱 DNA의 추가의 조사는 CVC가 MVC와 비교하여 약간이지만 유의적인 증가를 유도하였음을 보여주었다(도 9). 이것은 바이러스와 수용체간의 해리율에 영향을 주는, CCR5에 대한 2개의 억제제의 차등적 효과로 인한 것일 수 있다. 이것은 gp120이 MVC와 비교하여 CVC-결합된 CCR5와 보다 지속적으로 연합할 수 있다는 가능성을 시사한다.
본원 발명자는 또한 CCR5의 결합 부위를 조사함에 의해 어떻게 CVC가 표적 세포로의 HIV 진입을 억제하는지를 이해하는 것을 목표로하였다. 가공된 인간 CCR5 작제물은 이전에 2.7 Å의 해상도로 MVC와의 복합체로 결정화되었다. 이것은 CCR5의 전장 결정 구조물이 아닐지라도, 인 실리코 도킹 검정에서 CCR5와의 CVC 상호작용을 보다 잘 이해하기 위해 사용되었다. CVC에 대해 모두 알려진 도킹 모델은 또한 MVC에 대해 나타난 바와 같이 CCR5의 7TM 공동으로의 약물의 깊은 침투를 암시한다. 그러나, CVC 도킹된 포즈가 세포외 루프 2와 최근접하게 있지 않지만ECL2는 도킹 후 근접가능하게 유지되었다. 다른 그룹은 CCR5 N-말단 및 ECL2 도메인 둘다가 HIV-1과 CCR5의 상호작용에 중요한 역할을 수행함을 보고하였다. 추가로, gp120의 V3 루프의 스템(stem) 영역은 CCR5 N-말단에 결합하는 것으로 보고되었고 V3 크라운은 ECL2, 및 결합 포켓 내 잔기와 상호작용한다. 본원 발명의 모델을 기준으로, 본원 발명자는 ECL2가 상기 모델에서 노출된 것으로 나타나기 때문에 CVC가 ECL2와의 gp120 V3 루프 상호작용에 직접적으로 간섭하지 않음을 추정할 수 있다.
CCR5가 불활성 상태로 남아있는 경우 CVC가 CCR5 활성화를 차단시킬 수 있음을 감지할 수 있다. 7TM 영역 내 2개의 잔기 Tyr37 및 Trp248은 케모킨 리간드에 결합시 CCR5 활성화를 위해 중요한 것으로 나타났고 이것은 또한 MVC 결합을 위해 중요한 것으로 나타났다. MVC와 유사하게, CVC의 상이한 도킹된 포즈는 소수성 결합 부위에 묻혀 있다. 본원 발명의 모델은 Trp248로의 접근이 CVC에 의해 차단됨을 보여주고; Trp248은 CCR5 활성화를 위해 중요한 것으로 나타났고 이는 케모킨 수용체의 불활성화를 설명한다. 제2 추정은 MVC의 CCR5로의 결합이 CCR5가 CVC의 존재하에 덜 변화될 수 있는 범 형태적 변화를 진행하게 할 수 있다는 것이다.
다른 그룹에 의한 부위 지시된 돌연변이 유발 실험 및 조직 배양 실험 및 본 연구에 제공된 도킹 시뮬레이션을 기준으로, 본원 발명자는 MVC가 소수성 포켓의 중앙을 점령하여, 우선적으로 gp120 결합에 중요한 CCR5내 잔기 일부의 비접근성을 유도함을 추정한다. 이들 잔기들은 또한 직접적인 정전기 또는 소수성 상호작용 및/또는 물-매개 수소 결합을 통한 gp120 결합을 위해 중요할 수 있다. 대조적으로, CVC는 결합 부위를 점령하고 이것은 gp120이 여전히 도킹된 CVC의 존재하에서도 CCR5 결합을 위해 중요한 잔기들의 일부에 근접할 수 있는 것일 수 있다. 이러한 추정은 gp120이 ECL2 전체를 점령하면서 수용체 공동을 부분적으로 메움을 시사하는 부위 지시된 돌연변이유발에 의해 지지된다. 그러나, gp120의 V3 루프가 CCR5 7TM을 침투하는 정도는 아직 알려지지 않았다. 또한, CCR5로부터 gp120의 해리율은 MVC의 존재하에 가속화되는 것으로 보고되었고 이는 후자가 ECL2와 V3 루프 간의 단단한 연합을 방해하기 때문이다. 이들 연구를 토대로, CVC는 ECL2/V3 상호작용에 대해 MVC가 하는 것과는 상이한 효과를 가질 수 있다. CVC와의 복합체에서 CCR5의 결정화뿐만 아니라 해리 및 표면 플라즈마 공명 연구는 상기 논제에 대해 가치있는 정보를 제공한다.
부위-지시된 돌연변이유발 및 생화학적 연구는 CVC와의 CCR5 상호작용을 위해 중요한 잔기들을 해명하기 위해 요구된다. CCR5의 N-말단의 근접 위치를 결정하는 것이 또한 관심 대상이다.
본 연구에서, 본원 발명자는 바이러스 로딩 정량이 CVC의 항바이러스 효능의 정확한 척도이고 CVC에 의한 바이러스 진입 억제가 세포 표면으로부터 세포외 환경으로의 바이러스 입자의 리바운드를 유도하지 않음을 입증하였다. 본원 발명자의 인 실리코 구조 모델링은 CVC와 MVC 간의 기능적 차이를 잠재적으로 설명한다. 추가의 연구는 CVC가 CCR5로의 gp120 결합에 어떻게 영향을 주는지를 이해하기 위해 요구된다.
실시예 16: 신장 섬유증의 마우스 모델에서 이원 CCR5 / CCR2 길항제 세니크리비록의 항-섬유증성 활성
배경: 세니크리비록(CVC)은 단계 2b HIV 개발 (연구 202; NCT01338883)을 완료한 신규한 경구 하루 1회 이원 CCR5/CCR2 길항제이다. CVC는 48주 지속 기간 동안에 CVC로 치료받은 115명의 HIV-1-감염된 성인을 포함하는, 적어도 하나의 용량으로 치료받은 555명의 대상자와 함께 바람직한 안전성 프로필을 갖는다. 최근에, CVC는 식이 유도된, 비-알콜성 지방간염 (NASH)의 마우스 모델 및 티오아세트아미드 유도된 섬유증의 랫트 모델에서 상당한 항-섬유증 활성을 입증하였다. 여기서, 본원 발명자는 일방적 요관 폐색증(UUO)에 의해 유도된 신장 섬유증의 널리 확립된 마우스 모델에서 CVC를 평가하였다.
방법: 시험 동물은 수술 과정 전 (-1일) 날에 체중-일치된 치료 그룹에 할당하였다. 수컷 CD-1 마우스 (N=51; 7 내지 8주령)는 우측 요관의 샴 수술 또는 전체 결찰, 즉 무균성 개복술을 통한 UUO를 진행하였다(도 12). 0일로부터 5일까지: 샴 수술을 받은 마우스는 하루 2회 경구 위관영양법을 통해 비히클 대조군 (0.5% 메틸셀룰로스 + 1% Tween-80)을 투여받았고; 영구적 UUO를 갖는 마우스는 하루 2회 경구 위관영양법을 통해 비히클 대조군, CVC 7 mg/kg/일 또는 CVC 20 mg/kg/일을 투여받았다. 또 다른 그룹은 -1일에서 4일까지 3mg/kg/일로 항-형질전환 성장 인자 TGF-β1 항체인 화합물 1D11 (양성 대조군)을 투여받았고 하루 1회 복강내 주사되었고 0일부터 5일까지 비히클 대조군을 투여받았다. CVC 100 mg/kg/일 그룹(N=9)은 처음에 연구에 포함되었지만 빈사상태로 인해 초기에 종결되었다(어떠한 동물도 5일째에 도달하지 않았기 때문에 어떠한 분석도 수행되지 않았다). 2000 mg/kg/일까지의 CVC 용량은 수술 과정을 포함하지 않은 마우스 독성 연구에서 널리 관용성이었다. 5일째에, 동물을 마취시키고 혈액 및 조직은 희생시키기 전에 수거하였다.
연구 종점: 연구 종점은 다음을 포함했다: a) 체중 및 신장 중량; b) 피크로시리우스 레드 염색의 조직학적 정량적 이미지 분석을 통해 평가되고 (60-70%의 신장 피질 영역의 샘플링을 가능하게 하기 위해 광 현미경[200x]을 사용한 맹검 양상으로 수득되고 평가된 10개 이미지/심부/신장) 폐쇄된 신장으로부터 3개의 해부적으로 뚜렷한 (200 내지 250 μM 이격) 조직 부위 또는 심부에 걸쳐 평균 양성 염색으로서 표현되는 컴포지트 콜라겐 용적 분획 (CVF[% 이미지화된 총 면적])에 의해 정량된 폐색된 신장에서 섬유증; c) 생화학적 분석에 의해 평가된 바와 같은 동결된 신장 피질 조직 생검의 하이드록시프롤린 함량; d) 섬유증 및 염증 촉진성 바이오마커 (MCP-1, 콜라겐 1a1, 콜라겐 3a1, TGF-β1, 피브로넥틴-1, α-평활근 액틴(α-SMA) 및 연결 조직 성장 인자-1(CTGF-1)의 mRNA 발현; HPRT(하이포크산틴 포스포르리보실트랜스퍼라제)로 표준화된 상대적 발현과 함께 Luminex® (제조원: Life Technologies™, Carlsbad, CA, USA) 검정을 통해 평가됨.
통계학적 분석: 데이터는 평균 ± 평균의 표준 오차(SEM)로서 표현된다. 통계학적 분석은 GraphPad Prism® (제조원: GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, USA)을 사용하여 수행하였다. 샴-수술+비히클 대조군 및 UUO+비히클-대조군 그룹 간 및 UUO+비히클-대조군 및 UUO+화합물-1D11 (양성 대조군) 그룹 간의 치료 차이는 쌍을 이루지 않은 t-시험에 의해 분석하였다. UUO+비히클-대조군 및 CVC-용량 그룹 간의 치료 차이는 듀넷 시험(Dunnett's test)(포스트-혹)과 함께 원-웨이 ANOVA (변화량 분석)에 의해 분석하였다.
방법: CVC는 신장 섬유증의 널리 확립된 마우스 UUO 모델에서 콜라겐 용적 분획 또는 CVF (조직학적 폐색된 신장 부위에서 콜라겐에 대해 양성으로 염색된 % 면적)에서의 감소에 의해 정의된 바와 같은 상당한 항염증성 효과를 입증하였다. 폐색된 신장에서 콜라겐 1a1, 콜라겐 3a1, TGF-β1 및 피브로넥틴-1 mRNA 발현이 감소되는 경향이 관찰되었지만 이들은 통계학적 유의성을 성취하지 않았다. 종합해 보면, CVC의 작용 방식, 동물 모델(신장 및 간)에서 항섬유증 활성 및 광범위한 안전성 데이터베이스는 섬유증 질환에서 추가의 평가를 지지한다. NASH 및 간 섬유증을 갖는 비-HIV-감염된 환자에서 개념 증거 연구를 계획한다. HIV-1-감염된 환자에서 단계 III 시험은 또한 지침-바람직한 제3 제제와 동시 투여되는 경우 테노포비르 디소프록실 푸마레이트/엠트리시타빈(TDF/FTC)에 대한 신규 "골격"으로서 CVC/라미부딘(3TC)의 고정된 용량 조합을 평가하기 위해 계획한다.
결과: 체중 및 폐색된 신장 중량: CVC 7 mg/kg/일 및 화합물 1D11 (양성 대조군)은 체중에 어떠한 효과도 갖지 않은 반면 CVC 20 mg/kg/일은 가장 온건하지만 5일째 UUO+비히클-대조군 그룹 (p<0.05) (도 13; 그램[g]으로 나타낸 체중 변화)의 것과 상대적으로 체중에서 유의적 감소 (5%)를 유도하였다. 어떠한 유의적 치료 효과(CVC 또는 화합물 1D11 [양성 대조군])는 UUO+비히클-대조군 그룹에 대하여 폐색되거나 대측성 신장 중량 또는 신장 중량 지수에 대해 관찰되지 않았다 (데이터는 나타내지 않음). 조직학: CVF의 조성 측정 (3개의 심부에 걸쳐 평균화된 % 면적[±SEM])은 샴-수술 그룹 (11.4±1.0-배; p<0.05)에서의 것과 비교하여 UUO+비히클-대조군 그룹에서 상당히 높았다(도 14). CVC 7 및 20 mg/kg/일 및 화합물 1D11 (양성 대조군)은 UUO+비히클-대조군 그룹의 것과 상대적으로 CVF의 조성 측정 (3개의 심부에 걸쳐 평균화된[±SEM])에서 UUO-유도된 증가를 상당히 약화시켰다(각각 28.6±8.8%, 31.8±6.8% 및 50.3±7.3% 감소; p<0.05).
하이드록시프롤린 함량: UUO+비히클-대조군 그룹으로부터 폐색된 신장에서 하이드록시플로린 함량(단백질 %)은 샴-수술 그룹에 상대적으로 상당히 증가하였다(0.72% 대 0.27%; p<0.05) (데이터는 나타내지 않음). 시험된 CVC의 용량은 UUO+비히클-대조군 그룹에 상대적으로 폐색된 신장 하이드록시프롤린 함량에서 UUO-유도된 증가에 영향을 주지 않았지만; 화합물 1D11 (양성 대조군) 그룹은 수준을 상당히 저하시켰다(0.55% 대 0.72%; p<0.05) (데이터는 나타내지 않음).
섬유증 및 염증 촉진 바이오마커 mRNA 발현: 평가된 바이오마커 (MCP-1, 콜라겐 1a1, 콜라겐 3a1, TGF-β1, 피브로넥틴-1, α-SMA 및 CTGF-1) 각각에 대해, UUO+비히클-대조군 그룹에서 mRNA의 발현은 샴수술 그룹에서의 것과 비교하여 상당히 증가하였다(p<0.05) (도 15). CVC 7 및 20 mg/kg/일은 콜라겐 1a1, 콜라겐 3a1, TGF-β1 및 피브로넥틴-1 mRNA 발현에서의 UUO-유도된 증가를 약화시켰다. 그러나, UUO+비히클-대조군 그룹과 비교되는 이들 감소는 통계학적 유의성에 도달하지 않았다. 화합물 1D11 (양성 대조군)은 UUO+비히클-대조군 그룹에 상대적으로 콜라겐 1a1, 콜라겐 3a1, TGF-β1 및 피브로넥틴-1의 mRNA 발현에서 UUO-유도된 증가를 상당히 감소시켰다 (p<0.05). CVC 7 및 20 mg/kg/일 및 화합물 1D11 (양성 대조군)은 UUO+비히클-대조군 그룹과 비교하여 폐색된 신장 피질 MCP-1, α-SMA 및 CTGF-1 mRNA 발현에서 UUO-유도된 증가에 대해 상당한 효과를 갖지 않았다(α-SMA 및 CTGF-1 mRNA에 대해 나타내지 않음 데이터).
결론: CVC는 신장 섬유증의 널리 확립된 마우스 UUO 모델에서 콜라겐 용적 분획 또는 CVF (조직학적 폐색된 신장 부분에서 콜라겐에 대해 양성으로 염색된 % 면적)에서의 감소에 의해 정의된 바와 같이 상당한 항섬유증 효과를 입증하였다. 폐색된 신장에서 콜라겐 1a1, 콜라겐 3a1, TGF-β1 및 피브로넥틴-1 mRNA 발현이 감소되는 경향이 관찰되었지만 이들은 통계학적 유의성을 성취하지 못했다. 종합해 보면, CVC 작용 방식, 동물 모델 (신장 및 간)에서 항섬유증 활성, 및 광범위 안전성 데이터베이스는 섬유증 질환에서 추가의 평가를 지지한다. NASH 및 간 섬유증을 갖는 비-HIV-감염된 환자에서 개념 입증 연구가 계획된다. HIV-1-감염된 환자에서 단계 III 시험은 또한 지침-바람직한 제3 제제와 동시 투여되는 경우 테노포비르 디소프록실 푸마레이트/엠트리시타빈 (TDF/FTC)에 대한 신규 "골격"으로서 CVC/라미부딘(3TC)의 고정된 용량 조합을 평가하기 위해 계획된다.
실시예 17: APRI 및 FIB-4 섬유증 스코어에서의 개선은 48주 동안 세니크리비록을 투여받은 HIV-1 감염된 성인에서 sCD14의 감소와 관련된다
배경 및 목적: 신규한 경구적 하루 1회 CCR2/CCR5 길항제인 세니크리비록 (CVC)는 임상 연구에서 바람직한 안전성 및 항-HIV 활성을 입증하였다. CVC는 간 질환의 2개의 동물 모델에서 항섬유증 활성을 입증하였다. 포스트-혹 분석은 연구 202에서 APRI 및 FIB-4 스코어에 대해 수행하였다(NCT01338883).
방법: CCR5 트로픽 HIV-1, BMI≤35kg/m2를 갖고 어떠한 겉보기 간 질환 부재(즉, ALT/AST 등급≤2, 총 빌리루빈≤ULN, HBV, HCV, 활성 또는 만성 간 질환 또는 간경변증 부재)를 갖는 143명의 성인은 CVC 또는 에파비렌즈(EFV)로 4:1로 무작위 배정하였다. APRI 및 FIB-4 스코어를 계산하였다. 기준선(BL)으로부터 24주 및 48주까지의 스코어 카테고리의 변화는 비-상실 데이터를 갖는 환자에서 평가하였다. APRI에서 BL로부터의 변화 및 FIB-4 스코어 및 MCP-1 (CCR2 리간드) 및 sCD14 (염증 바이오마커) 수준 간의 상호관계를 평가하였다.
결과: BL에서, EFV 보다 CVC에 대해 보다 많은 환자들은 APRI≥0.5 및 FIB-4≥1.45를 가졌고; 이들 역치 이상의 CVC 환자 비율은 24주 및 48주 (표)에 감소하였다. 유의적 상호관련은 24주차의 APRI 스코어 및 MCP-1 수준에서의 변화 (p=0.014), 및 FIB-4 스코어 및 sCD14 수준에서의 변화 (p=0.011), 및 48주차의, APRI (p=0.028) 및 FIB-4 스코어(p=0.007) 및 sCD14 수준에서의 변화 사이에서 관찰되었다. (표 11).
표 11
Figure pct00012
결론: 어떠한 겉보기 간 질환을 갖지 않는 상기 집단에서, CVC 치료는 APRI 및 FIB-4 스코어에서의 개선과 관련되었고 상호 관련성은 48주차의 APRI 및 FIB-4 스코어 및 sCD14 수준에서의 변화간에 관찰되었다. 동물 모델 및 광범위 임상 안전성 데이터에서 입증된 CCR2/CCR5 길항작용인 항섬유증 효과 모두는 간 섬유증에서 CVC의 임상적 연구를 지지한다.
실시예 18: 비- 알콜성 지방간염의 STAM 모델에서 세니크리비록의 생체내 효능 연구
이러한 생체내 효능 연구를 수행하여 비-알콜성 지방간염의 STAM ™ 마우스 모델에서 세니크리비록의 효과를 조사하였다.
재료 및 방법
실험적 디자인 및 치료
연구 그룹
그룹 1-비히클: 18마리의 NASH 마우스에는 경구적으로 6주령부터 하루 2회(9시와 19시) 10mL/kg의 용량으로 비히클을 투여하였다.
그룹 2-세니크리비록 20 mg/kg (CVC-낮은): 18마리의 NASH 마우스에는 6주령부터 하루 2회 10mg/kg의 용량(20mg/kg/일)으로 세니크리비록이 보충된 (9:00 및 19:00) 비히클을 경구적으로 투여하였다.
그룹 3 - 세니크리비록 100 mg/kg (CVC-높은): 18마리의 NASH 마우스에는 6주령부터 하루 2회 50mg/kg의 용량(100mg/kg/일)으로 세니크리비록이 보충된 (9:00 및 19:00) 비히클을 경구적으로 투여하였다..
표 12는 치료 스케줄을 요약한다:
표 12
Figure pct00013
결과
파트 1: CVC의 항-NASH/섬유증을 평가하기 위한 연구
9주차의 체중 변화 및 일반적인 병태(도 16)
체중은 점진적으로 치료 기간 동안에 증가하였다. 치료 기간 동안에 비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 평균 체중에서 어떠한 유의적 차이가 없었다. 본 연구에서 어떠한 동물도 치료 기간 전반에 걸쳐 일반적 병태의 악화를 나타내지 않았다.
9주차의 희생 날짜에서 체중 (도 17a 및 표 13)
비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 평균 체중에 어떠한 유의적 차이가 없었다(비히클: 18.9 ± 3.3 g, CVC-낮은: 19.5 ± 2.0 g, CVC-높은: 18.7 ± 0.9 g).
표 13: 9주차의 체중 및 간 중량
Figure pct00014
9주차의 간 중량 및 간중량 대 체중 비율(도 17b & 17c 및 표 13)
비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 평균 간 중량에서 어떠한 유의적 차이가 없었다(비히클: 1270 ± 326 mg, CVC-낮은: 1334 ± 99 mg, CVC-높은: 1307 ± 119 mg).
비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 평균 간 대 체중 비율에서 어떠한 유의적 차이가 없었다(비히클: 6.6 ± 0.8%, CVC-낮은: 6.9 ± 1.0%, CVC-높은: 7.0 ± 0.8%).
9주차의 전혈 및 생화학
전혈당 데이터는 도 18a-d 및 표 14에 나타낸다.
비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 혈당 수준에서 어떠한 유의적 차이가 없었다(비히클: 590 ± 108 mg/dL, CVC-낮은: 585 ± 91 mg/dL, CVC-높은: 585 ± 91 mg/dL). 4.4.2. 혈장 ALT (도 18b, 표 14). CVC-낮은 및 CVC-높은 그룹은 비히클 그룹과 비교하여 혈장 ALT 수준에서 상당한 감소를 보여주었다(비히클: 133 ± 80 U/L, CVC-낮은: 58 ± 12 U/L, CVC-높은: 52 ± 13 U/L).
표 14: 9주차의 혈액 및 간 생화학
Figure pct00015
혈장 MCP-1 데이터는 도 18c 및 표 14에 나타낸다. CVC-높은 그룹은 비히클 그룹과 비교하여 혈장 MCP-1 수준에서 상당한 증가를 보여주었다. 비히클 그룹 및 CVC-낮은 그룹 간의 혈장 MCP-1 수준에서 어떠한 유의적 차이도 없었다(비히클: 60 ± 4 pg/mL, CVC-낮은: 68 ± 16 pg/mL, CVC-높은: 91 ± 14 pg/mL).
혈장 MIP-1β 데이터는 도 18d, 표 14에 나타낸다. 비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 혈장 MIP-1β 수준에서 어떠한 유의적 차이도 없었다(비히클: 18 ± 5 pg/mL, CVC-낮은: 18 ± 2 pg/mL, CVC-높은: 20 ± 4 pg/mL).
9주차의 간 생화학
간 트리글리세라이드 함량 데이터는 도 18d 및 표 14에 나타낸다. 비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 간 트리글리세라이드 함량에서 어떠한 유의적 차이가 없었다(비히클: 40.8 ± 20.4 mg/g 간, CVC-낮은: 48.5 ± 16.1 mg/g 간, CVC-높은: 51.7 ± 14.1 mg/g 간).
간 하이드록시프롤린 함량 데이터는 도 18e 및 표 14에 나타낸다. 간 하이드록시프롤린 함량은 비히클 그룹과 비교하여 CVC-낮은 및 CVC-높은 그룹에서 감소하는 경향이 있다(비히클: 0.75 ± 0.18㎍/mg, CVC-낮은: 0.63 ± 0.05 ㎍/mg, CVC-높은: 0.62 ± 0.09 ㎍/mg).
9주차의 조직학적 분석
HE 염색 및 NAFLD 활성 스코어 데이터는 도 19 및 20 및 표 15에 나타낸다. 비히클 그룹으로부터 간 부분은 중증의 마이크로 및 마크로소포 지방 침적, 간세포 벌루닝 및 염증 세포 침윤을 나타냈다. CVC-낮은 및 CVC-높은 그룹은 비히클 그룹과 비교하여 염증 세포 침윤 및 간세포 벌루닝에서 적당한 개선을 보여주었고 NAS가 상당히 감소하였다(비히클: 5.3 ± 0.5, CVC-낮은: 4.0 ± 0.6, CVC-높은: 3.7 ± 0.8). HE-염색된 부분의 대표적 광현미경사진은 도 19에 나타낸다.
표 15: 9주차의 NAFLD 활성 스코어
Figure pct00016
시리우스 레드 염색 데이터는 도 21, 22, 23 및 표 16에 나타낸다. 비히클 그룹으로부터 간 부분은 간 소엽의 중심주위 영역에서 콜라겐 침적을 보여주었다. 비히클 그룹과 비교하여, 중심주위 영역에서 콜라겐 침적은 CVC-낮은 및 CVC-높은 그룹에서 현저히 감소하였다. 섬유증 면적(시리우스 레드-양성 면적)은 비히클 그룹과 비교하여 CVC-낮은 및 CVC-높은 그룹에서 상당히 감소하였다(비히클: 1.10 ± 0.31%, CVC-낮은: 0.66 ± 0.16%, CVC-높은: 0.64 ± 0.19%). 변형된 섬유증 면적은 또한 비히클 그룹과 비교하여 CVC-낮은 및 CVC-높은 그룹에서 상당히 감소하였다(비히클: 0.61 ± 0.23%, CVC-낮은: 0.29 ± 0.14%, CVC-높은: 0.20 ±0.06%).
표 16: 9주차의 조직학적 분석
Figure pct00017
Figure pct00018
간의 시리우스 레드 염색된 부분의 대표적 광현미경사진은 도 21에 나타낸다.
F4/80 면역조직화학 데이터는 도 22 및 23 및 표 16에 나타낸다. 비히클 그룹으로부터 간 부분의 F4/80 면역염색은 간 소엽에서 F4/80+ 세포의 축적을 입증하였다. 비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 F4/80+ 세포의 수 및 크기에서뿐만 아니라 염증 면적의 퍼센테이지(F4/80-양성 면적)에서 어떠한 유의적 차이도 없었다(비히클: 4.99 ± 1.10%, CVC-낮은: 4.77 ± 1.02%, CVC-높은: 4.96 ± 0.60%).
F4/80-면역염색된 부분의 대표적 광현미경사진은 도 22에 나타낸다.
F4/80+CD206+ 및 F4/80+CD16/32+ 면역조직화학 데이터는 도 24, 25, 26, 27, 28, 및 표 16에 나타낸다. 비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간에 마크로파아지에서 F4/80+CD206+ 세포의 퍼센테이지에서 어떠한 유의적 차이도 없었다(비히클: 34.3 ± 4.2%, CVC-낮은: 34.7 ± 6.3%, CVC-높은: 33.1 ± 3.0%). 비히클 그룹 및 CVC-낮은 그룹 간의 마이크로파아지에서 F4/80+CD16/32+ 세포의 퍼센테이지에서 어떠한 유의적 차이도 없었다. F4/80+CD16/32+ 세포의 퍼센테이지는 비히클과 비교하여 CVC-높은 그룹에서 증가하는 경향이 있다(비히클: 33.5 ± 3.7%, CVC-낮은: 38.7 ± 7.6%, CVC-높은: 41.5 ± 8.2%). 비히클 그룹 및 CVC-낮은 그룹 간의 M1/M2 비율에서 어떠한 유의적 차이도 없었다. CVC-높은 그룹에서, M1/M2 비율은 비히클과 비교하여 증가하는 경향이 있다(비히클: 99.6 ± 20.2%, CVC-낮은: 112.3 ± 17.0%, CVC-높은: 125.1 ± 21.9%).
F4/80 및 CD206, F4/80 및 CD16/32 이중-면역염색된 부분의 대표적 광현미경 사진은 도 24 및 26에 나타낸다.
오일 레드 염색 데이터는 도 29, 30 및 표 16에 나타낸다. 비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 지방 침적에서뿐만 아니라 지방 침적 면적(오일 양성 면적)의 퍼센테이지에서 어떠한 유의적 차이도 없었다(비히클: 9.66 ± 5.02%, CVC-낮은: 6.51 ± 3.88%, CVC-높은: 7.23 ± 3.59%).
오일 레드 염색된 부분의 대표적 광현미경 사진은 도 29에 나타낸다.
TUNEL 염색 데이터는 도 31, 32 및 표 16에 나타낸다. TUNEL-양성 세포의 퍼센테이지는 비히클 그룹과 비교하여 CVC-낮은 그룹에서 상당히 증가하였다. 비히클 그룹 및 CVC-낮은 그룹 간의 TUNEL-양성 세포의 퍼센테이지에서 어떠한 유의적 차이도 없었다(비히클: 36.0 ± 3.7%, CVC-낮은: 43.3 ± 2.9%, CVC-높은: 39.0 ± 5.3%).
간에서 TUNEL-양성 세포의 대표적 광현미경 사진은 도 31에 나타낸다.
9주차 데이터에서 유전자 발현 분석은 도 33 및 표 17-18에 나타낸다.
표 17: 9주차의 유전자 발현 분석
Figure pct00019
표 18: 9주차의 P 값
Figure pct00020
TNFα
비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 TNFα mRNA 발현 수준에서 어떠한 유의적 차이도 없었다(비히클: 1.00 ± 0.24, CVC-낮은: 1.16 ± 0.39, CVC-높은: 1.09 ± 0.23).
MCP-1
비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간에 MCP-1 mRNA에서 어떠한 유의적 차이가 없었다(비히클: 1.00 ± 0.31, CVC-낮은: 1.05 ± 0.50, CVC-높은: 1.00 ± 0.53).
콜라겐 1형
콜라겐 1형 mRNA 발현 수준은 비히클 그룹과 비교하여 CVC-낮은 그룹에서 상당히 하향 조절되었다. 콜라겐 1형 mRNA 발현 수준은 비히클 그룹과 비교하여 CVC-높은 그룹에서 하향 조절되는 경향이 있다. (비히클: 1.00 ± 0.42, CVC-낮은: 0.63 ± 0.10, CVC-높은: 0.73 ± 0.04).
TIMP-1
비히클 그룹 및 CVC-낮은 및 CVC-높은 그룹 간에 TIMP-1 mRNA 발현 수준에서 어떠한 유의적 차이도 없었다(비히클: 1.00 ± 0.46, CVC-낮은: 0.75 ± 0.32, CVC-높은: 0.80 ± 0.20).
파트 2: CVC의 항-HCC 효과를 평가하기 위한 연구
체중은 18주까지 변화한다(도 35)
체중은 치료 기간 동안에 점진적으로 증가하였다. 치료 기간 동안에 비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간에 평균 체중에서 어떠한 유의적 차이가 없었다.
생존 분석 데이터는 도 36에 나타낸다. 12마리의 마우스 중 4마리는 비히클 그룹에서 59일 (ID112), 75일 (ID113, 115) 및 84일 (ID116)에 죽었다(투여 첫날은 0일로서 지정하였다). 12마리의 마우스 중 6마리는 CVC-낮은 그룹에서 62일 (ID209), 64일 (ID217), 75일 (ID212), 76일 (ID213), 84일 (ID215) 및 86일 (ID208)에 죽었다. 12마리의 마우스 중 5마리는 CVC-높은 그룹에서 62일 (ID317), 65일 (ID312), 70일 (ID316), 78일 (ID314) 및 85일 (ID309)에 죽었다. NASH의 전형적인 간 병변을 제외하고는 죽은 동물에서 어떠한 비정상적인 것이 발견되지 않았다. 비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 생존율에서 어떠한 유의적 차이도 없었다. 위탁자 지시에 의해, 나머지 동물은 스케줄된 것 보다 일찍이 18주령에서 희생시켰다(20주령에서 희생시키기로 스케줄됨).
18주 데이터에서 희생 날짜에서 체중은 도 37a 및 표 19에 나타낸다. 체중은 비히클 그룹과 비교하여 CVC-높은 그룹에서 감소하는 경향이 있다. 비히클 그룹 및 CVC-낮은 그룹 간의 평균 체중에서 어떠한 유의적 차이도 없었다(비히클: 23.0 ± 2.3 g, CVC-낮은: 22.9 ± 3.5 g, CVC-높은: 20.8 ± 2.7 g).
표 19: 18주차의 체중 및 간 중량
Figure pct00021
18주 데이터에서 간 중량 및 간 중량 대 체중 비율은 도 37b 및 37c 및 표 19에 나타낸다. 비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 평균 간 중량에서 어떠한 유의적 차이도 없었다(비히클: 1782 ± 558 mg, CVC-낮은: 1837 ± 410 mg, CVC-높은: 1817 ± 446 mg). 비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 평균 간 중량 대 체중 비율에서 어떠한 유의적 차이가 없었다(비히클: 7.7 ± 2.2%, CVC-낮은: 8.3 ± 2.8%, CVC-높은: 8.8 ± 2.3%).
18주에 간의 거시적 분석
간의 거시적 외관은 도 38a-38c에 나타낸다.
간 표면상에 형성된 가시적 종양 결절의 수는 도 39 및 표 20에 나타낸다. 비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 개체 마우스 당 간 종양 결절의 수에서 어떠한 유의적 차이도 없었다(비히클: 2.4 ± 4.1, CVC-낮은: 1.5 ± 1.9, CVC-높은: 3.6 ± 2.5).
표 20: 18주에 간의 거시적 분석
Figure pct00022
간 표면 상에 형성된 가시적 종양 결절의 최대 직경은 도 40 및 표 20에 나타낸다. 비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간의 종양의 최대 직경에서 어떠한 유의적 차이도 없었다(비히클: 4.0 ± 4.7 mm, CVC-낮은: 4.8 ± 5.4 mm, CVC-높은: 5.3 ± 5.1 mm).
18주에 조직학적 분석
HE 염색 데이터는 도 41에 나타낸다. HE 염색은 비히클 그룹에서 염증 세포의 침윤, 거대혈관 및 미세혈관 지방 침적, 간세포 벌루닝, 변화된 병소 및 결절 병변을 밝혔다. 비히클 그룹에서 8마리의 마우스 중 6마리는 HCC 병변을 나타냈다. HCC 병변은 CVC-낮은 그룹에서 6마리의 마우스 중 5 마리 및 CVC-높은 그룹에서 7마리의 마우스 중 6마리에서 검출되었다. 어떠한 명백한 차이가 비히클 그룹 및 CVC-낮은 또는 CVC-높은 그룹 간에 발견되지 않았다.
HE-염색된 부분의 대표적인 광현미경 사진은 도 41에 나타낸다.
GS 면역조직화학 데이터는 도 42에 나타낸다. 상기 부분에서 GS-양성 결절은 각각 비히클 그룹에서 8마리의 마우스 중 6마리, CVC-낮은 그룹에서 6마리의 마우스 중 5마리 및 CVC-높은 그룹에서 7마리의 마우스 중 7마리에서 검출되었다.
GS-염색된 부분의 대표적인 광현미경 사진은 도 42에 나타낸다.
CD31 면역조직화학 데이터는 도 43 및 44 및 표 21에 나타낸다. CD31-양성 면적은 비히클 그룹과 비교하여 CVC-낮은 그룹에서 감소하는 경향이 있다. CD31-양성 면적은 비히클 그룹과 비교하여 CVC-높은 그룹에서 증가하는 경향 있다 (비히클: 2.71 ± 1.36%, CVC-낮은: 1.47 ± 1.10%, CVC-높은: 3.68 ± 1.37%).
CD31 염색된 부분의 대표적인 광현미경 사진은 도 43에 나타낸다.
표 21: 18주차의 조직학적 분석
Figure pct00023
표 22: 18주차의 P값
Figure pct00024
요약 및 논의
9주차 분석에서, 낮고 높은 용량의 CVC를 사용한 치료는 용량 의존적 방식으로 섬유증 면적을 상당히 감소시켰고, 이는 본 연구에서 CVC의 항-섬유증 효과를 입증한다. 낮고 높은 용량의 CVC를 사용한 치료는 또한 콜라겐 1형 및 간 하이드록시프롤린 함량의 mRNA 발현 수준을 감소시켰고 이는 이의 항-섬유증 성질을 지지한다. CVC 치료 그룹은 용량 의존적 방식으로 비히클 그룹과 비교하여 혈장 ALT 수준 및 NAS를 상당히 감소시켰다. NAS에서의 개선은 소염 염증 및 간 세포 벌루닝에서의 감소로 인한 것일 수 있다. 간세포 벌루닝은 산화 스트레스 유도된 간세포 손상으로부터 유래되고 NASH의 질환 진행과 관련되기 때문에[26; 27], CVC가 간 세포 손상 및 벌루닝을 억제함에 의해 NASH 병리학을 개선시킴을 강하게 시사한다. 함께, CVC는 본 연구에서 잠재적 항-NASH 및 간 보호 효과를 갖는다.
인간에서 나타난 바와 같이, 혈장 MCP-1 수준은 본 연구에서 CVC를 사용한 치료에 의해 증가하였고 이는 CVC에 의한 CCR2의 용량 의존적 길항작용을 지적하지만 혈장 MIP-1β 수준은 치료에 의해 임의의 상당한 변화를 보여주지 않았다. CVC의 작용 메카니즘을 조사하기 위해, 본원 발명자는 대식세포의 집단에 대한 CVC의 효과를 평가하였다. 예비 결과는 CVC가 비히클 그룹과 비교하여 높은 M1/M2 비율의 경향을 보여줌을 입증하였고, 이는 CVC가 염증 발생 간에서 대식세포 아집단의 균형을 조절함에 의해 섬유 조직 성장을 억제할 수 있음을 시사한다. 이것은 추가로 향후 연구된다.
18주차 분석에서, NASH 유래된 HCC의 효과는 CVC 치료 그룹에서 관찰되지 않았다. 결론적으로, CVC는 본 연구에서 항-NASH, 간 보호 및 항-섬유증 효과를 보여주었다.
실시예 19: CVC 및 대사물의 수용체-결합 성질
CVC는 5.9 nmol/L의 50% 억제 농도(IC50)를 갖는 CCR2 길항제로서 시험관내 고유 성질을 갖는다. CVC는 용량 의존적으로 RANTES, MIP-1α, 및 MIP-1β의 CCR5-발현 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포로의 결합을 억제하였고 IC50은 각각 3.1, 2.3, 및 2.3 nmol/L이었다. CVC는 인간에서 생체외 CD4+에 대해 3.1nM 및 CD8+ T-세포에 대해 2.3nM의 농도로 CCR5에 대한 ≥ 90% 수용체 점령을 달성하였다[4]. CVC는 MCP-1의 CCR2b로의 결합을 억제하였고 IC50은 5.9 nmol/L였다. CVC는 인간에서 생체외 6nM에서 단핵구 상에 CCR2에 대해 ~98% 수용체 점령을 달성하였고 MCP-1의 부재하에 단핵구 상에서 CCR2 발현을 감소시켰다. CVC는 리간드의 CCR3 및 CCR4로의 결합을 단지 약하게 억제하였다. CVC는 리간드의 CCR1 또는 CCR7으로의 결합을 억제하지 않았다. CVC는 RANTES-유도된 Ca2+ 이동을 차단하였다.
CVC의 2개의 대사물(M-I 및 M-II)은 동물 연구에서 검출되었고 (실시예 20 참조); M-II는 원숭이 및 개에서 주요 대사물이었고, M-I는 모든 종에서 소수 대사물이었다. M-I는 RANTES의 CCR5-발현 세포로의 결합을 억제하였고 IC50은 6.5 nmol/L이고, 이는 CVC의 IC50의 대략 2배이다. M-II는 RANTES의 결합에 대해 어떠한 효과를 갖지 않았다.
실시예 20: 대사물의 동정
사육 동물에서 3mg/kg으로 [14C]-CVC의 단일 용량의 경구 투여 후, 변화되지 않는 CVC는 랫트 및 개의 혈장에서 검출되는 주요 성분이었고, 총 14C에 대한 CVC의 AUC0-24 비율은 각각 58.9% 및 47.4%였다[44]. 원숭이에서, 상기 비율은 단지 12.9%였고, 반면, 상대적으로 대량의 대사물 M-II가 검출되었으며, 총 14C에 대한 M-II의 AUC0-24 비율은 34.3%였다. 특히, 개 및 원숭이에서, M-II의 양은 IV 투여 후 보다 경구 투여 후 상당히 높았다. 이들 결과는 CVC가 전신 순환계에 도달하기 전에 M-II로 대사될 수 있음을 시사한다. M-I, T-1184803, 및 T-1169518을 포함하는 소수 대사물이 또한 랫트, 개 및 원숭이의 혈장에서 검출되었다. 대사물 M-I가 CVC의 설피닐 잔기의 산화에 의해 형성되고 M-II가 [(1-프로필-1H-이미다졸-5-일)메틸]설피닐 그룹의 C-S 결합의 절단과 함께 설피닐 잔기의 후속적 환원에 이어서 S-메틸화에 의해 형성되는 것으로 추정된다.
임상적 시험
실시예 21: HIV-1 감염된 성인 대상자에서 단기 효능 데이터
방법
CCR5-트로픽 HIV-1 감염을 갖는 대상자에서 10일 동안 CVC의 단독치료요법의 항바이러스 활성, PK, 안전성 및 관용성을 평가하는 단계 2a 이중 맹검, 무작위 배정된 위약 조절된 용량 상승 연구. 참여자는 항레트로바이러스 치료를 받은 적이 있어야 하고 CCR5 길항제 순수이고, HIV-1 RNA 수준은 적어도 5000 카피수/mL이고 적어도 250 세포/mm3의 CD4+ 세포 계수를 수행하였다. 10명의 대상자 그룹은 후속적으로 CVC (25, 50, 75, 100, 또는 150 mg) 또는 일치하는 위약을 수용하도록 코호트 당 4:1 대상자 비율로 입회시켰다. 모든 대상자는 10일 동안 CVC 또는 위약의 하루 1회 용량을 투여받았고 이어서 40일로 이어진다.
데모그래픽 및 다른 기준선 특징
총 54명의 대상자를 본 연구에 입회하였다. 데모그래픽은 일반적으로 용량 그룹에 걸쳐 유사하였다. 각각의 용량 그룹에서 대다수의 대상자는 수컷이었고 (66.7% 내지 100%), 메디안 나이는 33.5세 (위약 그룹) 내지 45.0세 (150mg 그룹) 범위였다. 대부분의 대상자는 코카시안 또는 아프리카 미국인이었다. 메디안 BMI는 22.9 kg/m2 (100mg 그룹) 내지 27.4 kg/m2 (25mg 그룹) 범위였다. 메디안 HIV-1 RNA 값은 4.00 log10 카피수/mL (150mg 그룹) 내지 4.60 log10 카피수/mL (75mg 그룹) 범위였다. 메디안 CD4+ 세포 계수는 150mg 그룹 (508.0 세포/mm3)에서 최고였고 나머지 그룹에 걸쳐 402.0 내지 460.0 세포/mm3 범위였다.
효능 및 안전성 결과
CVC는 치료 완료 후 지속하는 HIV-1 RNA 수준에 대한 강력한 효과를 보여주었다. 25, 50, 75, 및 150mg 용량에 대한 기준으로부터 메디안 나디르 변화는 CCR5-길항제 순수 치료-경험이 있는 HIV-1 감염된 대상자에서 각각 -0.7, -1.6, -1.8, 및 -1.7 log10 카피수/mL였다. 이들 결과는 CVC의 강력한 길항성 CCR5 활성을 입증한다. HIV-1 RNA 수준에서 평균 변화는 도 45에 나타낸다.
MCP-1 (또한 CCL2로서 공지된 염증 촉진 단핵구 상에서 발현된 케모킨 공수용체인 CCR2의 리간드), hs-CRP, 및 IL-6에서 변화의 탐구 평가를 수행하였고 MCP-1에서 상당한 용량 의존적 증가가 관찰되었다(표 23).
10일째, 최소 제곱 평균 MCP-1 수준은 위약 그룹에서의 약간의 감소와 비교하여 25, 50, 75, 및 150mg 용량 그룹에서 기준선에서 보다 56.3, 94.2, 34.4, 및 334.3 pg/mL 더 높았다. 50- 및 150mg 용량에서, 이들 결과는 통계학적으로 유의적이었다(각각 p=0.024 및 p<0.001). 이들 결과는 CVC의 강력한 길항성 CCR2를 입증한다. CVC는 상기 10일 연구에서 전체 hs-CRP 또는 IL-6 수준에 대해 효과를 갖지 않았다.
표 23
Figure pct00025
부작용
세니크리비록은 일반적으로 연구된 용량에서 매우 관용성이었고 어떠한 안전성 문제도 동정되지 않았다. 어떠한 사망, SAE 또는 다른 유의적 AE가 없었고 AE 때문에 어떠한 중단도 없었다. 대부분의 치료-우발적 AE는 중증도에 있어서 경미하거나 약하였다. 150mg의 CVC (즉, 연구된 최고 용량)를 투여받은 대상자는 다른 용량 그룹에서의 대상자와 비교하여 보다 많은 Aes를 가졌지만, AE의 중증도는 모든 용량 그룹에 걸쳐 유사하였다. 본 연구에서 대부분의 (≥ 10%) 치료 우발적 AE는 구역 (18.5%), 설사 (16.7%), 두통 (14.8%), 및 피곤(11.0%)이었다.
실험 안전성
관찰 기간 동안에 25 mg (2명의 대상자), 50 mg (2명의 대상자), 100 mg (1명의 대상자), 및 150 mg (1명의 대상자) 용량 그룹에서 ALT 및/또는 AST 상승을 갖는 6명의 대상자가 있었고 1명의 대상자가 위약 그룹에서 AST 상승을 갖는다. 모든 상승은 등급 1이었고 1 이상의 상승을 가졌고 세쿠엘라 없이 분리된 2명의 대상자(50mg 용량 그룹에서 둘다)를 제외하고는 단리되었다. 단일 초과의 상승을 가졌던 2명의 대상자는 50mg 용량 그룹에 있었고 상기 대상자 중 하나는 기준선에서 등급 1 상승된 AST를 가졌다. 치료 동안에 100mg 및 150mg 용량 그룹에서 대상자에서 관찰된 AST 상승 (각각의 용량 그룹에서 1명의 대상자에서 관찰된)은 치료 계속 동안에 정상 값으로 복귀하였다. ALT 또는 AST에서 등급 2 내지 4 상승은 상기 연구 동안에 발생하지 않았다.
단지 등급 3 이상의 연구 비정상은 용량 투여 전에 존재하는 25mg 용량 그룹에서 등급 3 차인산염 혈증이었고,등급 4는 기준선에서 등급 3 트리글리세라이드를 가졌던 대상자에서 50mg 용량 그룹에서 트리글리세라이드를 상승시켰고 등급 3 및 4 아밀라제 및 리파제 각각은 췌장염의 이전 병력을 갖는 대상자에 있었다.
심혈관 안전성 및 신체 검사
등급 3 심장 수축 고혈압은 기준선에서 심장 수축 혈압에서 등급 2 상승을 가졌던 150mg 용량 그룹의 대상자에서 관찰되었다. 임상적으로 관련된 신체 검사 또는 ECG 발견이 없었다.
이전에 기재된 바와 같이, CVC는 CCR5 및 CCR2 길항제로서 이원 활성을 가졌다. MCP-1 (또한 CCL2로서 공지된 CCR2의 리간드), hs-CRP, 및 IL-6에서 변화의 탐구 평가를 수행하였고 MCP-1에서 상당한 용량 의존적 증가가 관찰되었다(표 24 참조). 10일째에, 최소 제곱 평균 MCP-1 수준은 위약 그룹에서 약간의 감소와 비교하여 각각 25, 50, 75, 및 150 mg 용량 그룹에서 기준에서 보다 56.3, 94.2, 34.4, 및 334.3 pg/mL 더 높았다. 50 및 150mg 용량에서, 이들 결과는 상당히 유의적이었다(각각 p=0.024 및 p<0.001). 이들 결과는 CVC의 강력한 길항성 CCR2 활성을 입증한다. CVC는 상기 10일 연구에서 전체적으로 hs-CRP 또는 IL-6 수준에 대한 효과를 갖지 않았다.
표 24: 코호트에 의한 MCP-1 수준의 요약 - 연구 201
Figure pct00026
내성 데이터
연구 201에서, 약물 내성 시험은 기준선, 7일 및 40일에서 (또는 적용되는 경우 "조기 종결" 방문에서)에서 수행하였다. 가치 있는 샘플을 갖는 모든 대상자는 CVC에 완전히 민감한 채로 남아 있었다.
바이러스 굴성
연구 201에서 모든 대상자는 이들의 바이러스가 CXCR4 트로픽 또는 이원/혼합된 것을 배제하기 위해 바이러스 굴성에 대해 시험되었다. 모든 대상자는 선별검사에서 CCR5-트로픽 바이러스를 가졌다(증진된 민감성 프로필 검정을 기준으로). CVC에 대한 총 39명의 대상자는 치료 후 가치있는 샘플을 가졌고 이들 대상자 중 1명 (CVC 150mg 용량 그룹에서)은 10일째에 이원/혼합된-트로픽 바이러스를 갖는 것으로 밝혀졌다. 추가의 시험(상이한 검정을 사용한 또 다른 실험에서)은 상기 대상자가 기준선에서 주로 CXCR4-트로픽 바이러스를 가짐을 밝혔고, 따라서, 이러한 대상자는 포함 기준에 따라 상기 연구에 입회시키지 말아야 한다. 상기 대상자는 CVC 치료에 응답하지 않았고; 상기 대상자의 HIV-1 RNA에서 최대 감소는 기준선 값 미만의 0.13 log10 카피수/mL 였다.
약리역학적/약동력학적 관계
연구 201에서 시험된 모든 용량에 대해, 노출에서 용량 이상의 비례적 증가는 거의 모든 100mg 용량 코호트에 대해 사용되었던 "제형 F1"에 대해 관찰되었다.
약물 반응은 하기의 최대 효과 (Emax) 모델을 사용하여 특징분석하였다:
Figure pct00027
여기서, E는 효과이고, E0는 기준선 효과이고(0으로 고정된), Imax는 최대 억제이고, C는 PK 변수를 지칭하고(AUC0 -24, Cmax, 또는 안정 상태의 농도 [Css]), IC50은 최대 억제의 50%에 상응하는 PK 변수의 값이고 γ는 S자 모양 정도를 기재하는 형태 파라미터이다.
PK/PD 모델에서 CVC의 Emax는 -1.43 log10 카피수/mL였다. Emax 모델을 기준으로, 25, 50, 75, 및 150 mg 용량에 대한 CVC의 평균 Css은 약물의 최대 억제 효과의 54.9%, 79.8%, 85.9%, 및 95.9%를 유도하는 것으로 예측되었다. 따라서, 75 및 150 mg QD의 용량 수준은 강력한 항바이러스 활성을 나타냈고, PD 효과는 HIV-1 감염된 대상자에서 CVC Emax의 80% 초과였다.
실시예 22: HIV-1 감염된 성인 대상자에서 장기 효능 데이터
연구 202의 효능 결과
연구 디자인 및 목적
이것은 승인된 항레트로바이러스 제제 에파비렌즈(EFV, Sustiva®)와 비교하여 CVC 100mg 및 CVC 200mg의 효능 및 안전성을 평가하는 무작위 배정된, 이중 맹검, 이중 위약, 및 48주 비교 연구였고, 모두는 유일하게 CCR5-트로픽 바이러스를 갖는 HIV-1 감염된 항레트로바이러스 치료 순수 성인 대상자에서 승인된 항레트로바이러스 제제 엠트리시타빈/테노포비르 디소프록실 푸마레이트 (FTC/TDF)와 병용하여 투여하였다. HIV-2, B형 및/또는 C형 간염, 간의 간경변증 또는 임의의 공지된 활성 또는 만성 활성 간 질환의 병력을 갖는 대상자는 연구로부터 배제하였다.
대략적으로 150명의 대상자들은 CVC 100 mg + 위약, CVC 200 mg + 위약 또는 승인된 항바이러스제 에파비렌즈 (EFV) + 위약에 대해 2:2:1의 비율로 무작위 배정하도록 계획되었고(143명의 대상자들은 실제로 무작위 배정되었다), 모두는 고정된 용량 조합 제형 (TRUVADA®)에서 개방 표지 연구 약물로서 제공된 승인된 항바이러스 제제 엠트리시타빈/테노포비르 디소프록실 푸마레이트 (FTC/TDF)와 조합하였다. 약리역학적 평가는 제1 25 연구 대상자에서 수행되어 적절한 CVC 혈장 노출이 연구 집단의 나머지에 입회하기 전에 CVC 100 mg 및 CVC 200 mg의 선택된 용량에서 달성되었음을 확인하였다.
데모그래픽 및 기준선 특징
대부분의 대상자는 남성 (94%)이고 백인 (62%)이었고 평균 나이는 35세이고 평균 체질량 지수는 26.2 kg/m2 이었다. 전체적으로, 대상자의 32%는 흑인/아프리칸 아메리칸이었다. 추가로, 무작위 배정된 대상자의 24%는 히스파닉 민족성을 가졌다.
기준선에서, HIV-1 감염의 메디안 지속 기간 (즉, 제1 양성 HIV-1 시험 후 통지된 동의 날자까지의 시간[개월])은 8개월이었고, 평균 HIV-1 RNA는 4.50 log10 카피수/mL이었고(대상자의 80%는 < 100,000 카피수/mL의 바이러스 로딩을 가졌다), 평균 CD4+ 세포 계수는 402 세포/mm3였다(대상자의 58%는 CD4+ 세포 계수 ≥ 350 세포/mm3를 가졌다).
1차 효능 결과
1차 효능 종점은 24주차의 바이러스학적 반응이었고, FDA 스냅샷 알고리듬(Snapshot Algorithm)을 사용한 HIV-1 RNA < 50 카피수/ml로서 정의된다. 바이러스학적 성공(반응)을 갖는 대상자의 퍼센테이지는 3개의 치료 투여군 중에서 유사하였다(CVC 100 mg과 함께 76%, CVC 200 mg과 함께 73%, 및 EFV와 함께 71%). EFV 투여군에서 보다 많은 대상자는 미성숙하게 CVC 100 mg 투여군(59명의 대상자들 중 17명, 29%) 및 CVC 200 mg 투여군(56명의 대상자들 중 15명, 27%)에서 보다 연구 (28명의 대상자 중 11명, 39%)를 중단시켰다.
48주 데이터는 24주차의 관찰된 데이터와 일치하였다. 시간 경과에 따른 바이러스학적 성공을 갖는 대상자의 퍼센테이지는 일반적으로 3개의 치료 투여군 중에서 유사하였지만 48주에 EFV 투여군과 비교하여 CVC 투여군에서 보다 높았다(CVC 100 mg과 함께 68%, CVC 200 mg과 함께 64%, 및 EFV와 함께 50%).
2차 및 탐구 분석
염증의 바이오마커
탐구 분석으로서, 염증 바이오마커 MCP-1, sCD14, 높은 민감성 C-반응성 단백질 [hs-CRP], 인터류킨-6 [IL-6], D-이량체, 및 피브리노겐의 수준을 측정하였다. 기준선 값 및 MCP-1, sCD14, hs-CRP, IL-6, D-이량체 및 피브리노겐의 24주 및 48주에 기준선으로부터의 변화는 표 25에 요약한다.
표 25
Figure pct00028
Figure pct00029
용량-반응은 CCR2의 리간드인 MCP-1의 시간 경과에 따라 CVC가 증가하는 것으로 관찰되었고, MCP-1은 EFV 투여군에서 기준선 값으로 유지되었다(도 46 참조). EFV와 CVC 100mg 및 CVC 200mg 치료 투여군 간의 플라스마 MCP-1의 기준선으로부터 변화의 차이는 24주 및 48주차의 통계학적으로 유의적이었다(p<0.001)(표 25 참조).
추가로, 48주 치료 동안의 감소는 CVC 치료 투여군 둘다에서 sCD14 (반복 sCD14 분석의 선형 혼합된 모델 분석, 하기 참조)에 대해 관찰되었고, 증가는 동일한 관찰 기간 동안에 EFV 투여군에서 sCD14에 대해 관찰되었다(도 47 참조). 가용성 CD14는 단핵구 활성화의 바이오마커이고 독립적으로 HIV-감염된 환자에서 대형 장기 코호트 연구에서 이환율 및 사망율과 관련되고 만성 바이러스 간염을 갖는 환자 및 중증 간 섬유증을 갖는 환자에서 최악의 임상 결과와 관련되었다.
sCD14 샘플은 2개의 별도의 배치에서 본래에 분석하였다: 배치 1은 24주 1차 분석까지 이끄는 샘플을 포함했고 배치 2는 32주 및 48주 (연구 말기) 샘플을 포함하였다. 2개-배치 분석으로부터 기준선으로부터 sCD14의 변화에 대한 결과는 표 25에 제공된다. 1개의 배치에 분석된 모든 기록보관 샘플의 반복 분석은 시점에 걸친 분석에서 일관성에 대해 수행하였다. 공변수의 효과에 대해 제어하기 위해, 선형 혼합된 모델 반복된 측정 분석은 sCD14 (2013년 9월자 분석)에서 기준선으로부터 변화에 대해 수행하였다. CVC200mg 투여군에서 기준선으로부터 32주까지의 변화를 제외하고는, 48주의 치료 (LS 수단) 기간 동안에 용량 둘다 (100 및 200mg)에서 CVC로 관측된 sCD14 수준의 감소는 EFV와 관찰된 증가와 비교하여 통계학적으로 유의적이었다(p<0.05) (표 26 및 도 47 참조).
표 26
Figure pct00030
염증의 다른 바이오마커 (hs-CRP, IL-6, D-이량체)의 변화는 CVC 및 EFV 치료 그룹에서 유사하였다.
APRI 및 FIB-4 스코어
추가로, 엄중한 적격성 기준에 따른 어떠한 겉보기 간 질환(HIV-1 감염 및 ALT/AST 등급 ≥ 2 부재, 총 빌리루빈 > ULN, HBV 및/또는 HCV, 활성 또는 만성 간 질환, 간경변 또는 BMI > 35 kg/m2)이 없는 대상자를 입회한 본 연구로부터의 데이터의 포스트-혹 분석에서, 표준 생화학적 값, 혈소판, ALT, AST 및 연령(FIB-4) 스코어와 조합된 AST-대-혈소판 비율 지수(APRI) 및 비침입성 간 섬유증 지수 스코어에서의 개선은 시간경과에 따라 ≥ 10%의 모든 CVC-치료된 대상자(CVC 100mg 및 200mg에 대한 풀링된 데이터)에서 관찰되었다(도 48). EFV 투여군에서, 24주차의 대상자의 5% 및 48주에 대상자의 6%는 기준선으로부터 하나의 카테고리에 의해 APRI 스코어에서 감소하였고; EFV로 치료받은 어떠한 대상자도 모든 대상자가 기준선에서 스코어 < 1.45를 갖는 하나의 카테고리에 의해 FIB-4 스코어에서 감소하지 않았다.
상기 언급된 바와 같이, 본 연구에서, CVC는 또한 단핵구 활성화의 중요한 마커인 sCD14에 대해 상당한 효과를 가졌다. 상기된 동일한 포스트-혹 분석에서, 통계학적으로 유의적인 상호관련성은 24주차의 CVC-치료받은 대상자에서 FIB-4 스코어 및 sCD14 수준 간에 및 48주차의 APRI 및 FIB-4 스코어 및 sCD14 수준 간에 관찰되었다. 48주 결과는 도 49 및 도 50에 나타낸다.
안전성 결과
노출 정도
연구 치료 약물 (CVC 또는 EFV)의 흡수의 평균 지속 기간은 EFV 치료 투여군에서 보다 CVC 투여군에서 보다 길었고 (EFV와 함께 36.2주에 대해 각각 CVC 100mg 및 200mg과 함께 41.2 및 40.9주), 이것은 EFV 투여군에서 보다 높은 중단 비율에 의해 구동되었다.
모든 부작용의 요약
종합적으로, 51명의 대상자 (88%), 48명의 대상자 (84%), 및 27명의 대상자(96%)는 CVC 100 mg, CVC 200 mg, 및 EFV 투여군에서 각각 적어도 1 AE를 가졌다. 가장 흔하게 보고된 AE (임의의 3개 치료 투여군에서 ≥ 10%의 대상자에서 바람직한 용어)는 구역, 상부 호흡기 감염, 설사, 두통, 발진, 피로, 현기증, 비인두염, 비정상적 꿈, 불면증, 임파선염, 우울증, 및 매독이다(표 27). 이들 가장 흔하게 보고된 AE로부터, 두통, 피로 및 상부 호흡기 감염이 EFV 투여군에서 보다 CVC 투여군에서 보다 흔하게 보고되었고; 현기증, 비정상적 꿈, 불면증, 임파선염, 우울증 및 매독이 CVC 투여군에서 보다 EFV 투여군에서 보다 흔하게 보고되었다.
표 27
Figure pct00031
대부분의 AE는 약하거나 경미하였다(등급 1 또는 등급 2). 등급 3 또는 4 AE는 표 29에 요약한다. 등급 ≥ 3 AE를 경험한 대상자의 퍼센테이지는 EFV 투여군 (15%)에서 보다 CVC 투여군 (총 4%)에서 보다 낮았다. EFV 투여군에서 하나의 대상자 (대상자 06007)는 자살 충동의 등급 4 AE를 가졌고 이는 중증인 것으로 고려되었다. 어떠한 등급 4 AE도 CVC-치료된 대상자에서 보고되지 않았다. 등급 ≥ 3 AEs (바람직한 용어)의 어떠한 것도 1명 초과의 대상자에서 보고되지 않았다. 표 28은 사망, SAEs, AEs, 중증도에 의한 AEs, 연구 약물 치료와 관련된 AEs, 및 중단을 초래한 AE의 개요를 제공한다.
표 28
Figure pct00032
표 29
Figure pct00033
심각한 부작용 사례는 표 30에 요약한다.
표 30 - 48주에 걸친 심각한 부작용 사례를 갖는 대상자의 수(%)-안전성 집단
Figure pct00034
중단을 초래한 부작용 사례
연구 약물 치료의 중단을 초래한 AEs는 표 31에 요약한다. 종합적으로, 연구 약물 치료의 중단을 초래한 AEs는 CVC 200mg 투여군에서 1명의 대상자 (2%) 및 EFV 투여군에서 6명의 대상자 (21%)에서 발생하였다. 1명 초과의 대상자에서 보고되었던 것으로서, 연구 약물 치료의 중단을 초래한 AEs(선호 용어)는 EFV 투여군에서 3명 및 2명의 대상자 각각에서 보고된 불면증 및 현기증이었고, CVC 200mg 투여군에서 1명의 대상자 및 EFV 투여군에서 1명의 대상자에서 보고된 우울증이었다(불면증, 현기증 및 우울증은 모두 EFV에 대해 공통된 AEs이다).
표 31 -48주에 거친 연구 약물 치료의 중단을 초래한 부작용 사례를 갖는 대상자(%)의 수 - 안전성 집단
Figure pct00035
등급화된 치료-우발적 연구 비정상을 갖는 대상자 수의 개요는 표 32에 나타낸다.
표 32
Figure pct00036
등급 3 또는 4 (최악의 독성 등급) 치료-우발적 연구 비정상은 표 33에 요약한다. CVC 200mg 투여군에서 보다 흔하게 관찰되었던 CPK에서의 비정상을 제외하고는 치료 투여군 간의 등급 3 또는 등급 4 연구 비정상을 갖는 대상자의 퍼센테이지에는 어떠한 차이도 없었다.
표 33 - 48주에 걸친 치료-우발적 등급 3 또는 등급 4 (최악의 등급; DAIDS) 연구 파라미터-안전성 집단
Figure pct00037
크레아틴 포스포키나제 (CPK)에서 등급 3 또는 4 증가는 다른 2개의 치료 투여군에서 보다는 CVC 200mg에서 보다 흔하게 관찰되었다. CVC 투여군에서 CPK에서 등급 3 또는 4 증가를 갖는 12명의 대상자 (CVC 100mg과 함께 3명의 대상자 및 CVC 200mg과 함께 9명의 대상자)로부터, 11명의 대상자는 하나의 단일 시점에서 관찰되었던 CPK 상승을 가졌다(8명의 대상자는 등급 3을 가졌고 3명의 대상자는 등급 4 상승을 가졌다)(주지: 이들 11명의 대상자 [대상자 48015] 중 1명은 8주 및 36주에 단리된 등급 3 CPK 상승을 가졌다). 12번째 대상자(대상자 42001)는 후속적 방문에서 연속 치료하면서, 정상적인 값으로 복귀된 2개의 연속 CPK 상승 (등급 3에 이어서 등급 4)을 가졌다. CPK 상승의 어떠한 것도 임상적 증상과 관련되지 않았고; 어떠한 대상자도 CPK 상승으로 인해 중단되지 않았고 CVC와 EFV 투여군 간의 근골격 장애와 관련된 AEs에는 어떠한 차이가 없었다.
CPK에서 기준선으로부터의 변화는 도 51에 나타낸다. 어떠한 명백한 경향이 시간 경과에 따른 실제 값에서 또는 임의의 치료 투여군에서 기준선으로부터의 변화에서 CPK에 대해 관찰되지 않았다.
목적하는 선택된 간 파라미터에서 등급화된 치료-우발적 연구 비정상을 갖는 대상자의 수는 표 34에 나타낸다. 어떠한 등급 4 ALT 또는 AST 상승도 관찰되지 않았다. 1개의 등급 3 AST 상승을 제외하고는, 모든 ALT 및 AST 상승은 등급 1 또는 등급 2이었다. 1명의 대상자 (CVC 100mg 투여군에서 48015)에서 등급 3 AST 상승은 하나의 단일 시점에서 관찰되었고 비대칭이었고; 대상자는 등급 3 AST 상승으로 인한 연구 약물 치료를 중단하지 않았고 AST 상승과 관련된 AE를 보고하지 않았다. 추가로, 등급 3 AST 상승을 갖는 상기 대상자는 어떠한 등급화된 빌리루빈 상승을 갖지 않았지만, 등급 3 AST 상승과 동일한 연구 방문에서 하나의 단일 등급 3 CPK 증가를 가졌다. 빌리루빈에서 모든 비정상은 등급 1 또는 등급 2이었다. ALT, AST 및 빌리루빈 상승의 다수는 일시적이고 계속되는 치료시 후속적 방문에서 기준선 값으로 복귀하였고 임의의 임상적 증상과 관련이 없었고 중단을 유도하지 않았다.
표 34- 48주에 걸친 선택된 간 파라미터에서 치료 우발적 최악 등급 (DAIDS) 연구 비정상-안전성 집단
Figure pct00038
24주 및 48주에 탐구 분석을 수행하여 치료-우발적 연구 부작용을 갖는 대상자에서 CVC 노출을 평가하였다. 특정 목적하는 것은 CPK 상승이고 CVC 200mg 투여군에서 CPK 비정상의 증가된 경우 및 목적하는 간 파라미터(AST, ALT, 및 빌리루빈)가 주어진다. 노출 파라미터 둘다(Cavg 및 Cmin)는 연구 비정상과의 가능한 관계를 탐구하기 위해 합리적인 것으로 고려되었지만 Cavg은 이것이 전체 CVC 노출을 반영하는 것이라면 가장 적절한 것으로 고려되었다.
연구 치료 투여군 중에서 차이에 의한 CPK 상승에 대한 용량-반응 관계에 대한 가능한 시그날에도 불구하고, 이들 광범위 탐구 분석 어느것도 임의의 노출-반응 관계를 해명할 수 없었다. > 2의 CPK 중증도 등급의 가능성에 대한 Ln 노출을 평가하는 로지스틱 회귀 분석 아웃풋은 CVC 노출과 CPK 상승 간의 관련성을 동정하지 못했다. CVC 노출에 대한 CPK 상승의 빈도 또는 중증도를 증가시키는데 어떠한 경향이 없었다.
유사한 분석은 ALT, AST, 및 빌리루빈 상승에 대해 수행되지 않았고, 또한 CVC 노출과 간-관련 연구 비정상 간의 어떠한 명백한 관계도 밝히지 못했다(도 52 - 도 55).
대사적 파라미터
단식 방문에서 등급화된 치료-우발적 단식 연구 비정상을 갖는 대상자의 수는 표 35에 나타낸다. 총 콜레스테롤, LDL 콜레스테롤, 트리글리세라이드 또는 글루코스에서 모든 비정상은 등급 1 또는 등급 2이었다. 총 콜레스테롤 및 LDL 콜레스테롤을 갖는 대상자의 퍼센테이지는 EFV 투여군에서 보다 CVC 투여군에서 보다 낮았고 이는 CVC 치료 동안에 콜레스테롤에서 시간 경과에 따른 감소와 일치한다(도 56).
표 35- 48주에 걸친 단식 방문에서 치료-우발적 최악 등급 (DAIDS) 단식 연구 비정상
Figure pct00039
HbA1c, HOMA-IR, 단식 LDL, 단식 HDL, 단식 총 콜레스테롤, 단식 총 콜레스테롤/HDL 비율 및 단식 트리글리세라이드에서 평균 기준선 값 및 기준선으로부터의 변화는 표 36에 나타낸다. 대사적 파라미터에서 기준선으로부터 평균 변화는 도 56에 나타낸다. 감소는 주로 LDL 콜레스테롤의 감소로 인해, 총 콜레스테롤에서 CVC 치료 (CVC 100mg 및 200mg)둘다 동안에 관찰되었다(표 36 참조). 대조적으로, 증가는 HDL 콜레스테롤뿐만 아니라 LDL 콜레스테롤에서 EFV 치료 동안에 관찰되었다. 단식 총 콜레스테롤/HDL 비율에서 작고 상응하는 감소는 모든 치료 투여군에서 관찰되었다. 시간 경과에 따른 어떠한 주지할만 변화도 글루코스, 인슐린, HOMA-IR, HbA1c, 및 트리글리세라이드에서 관찰되지 않았다(표 36 참조).
표 36 - 48주에 걸친 단식 대사 연구 파라미터에서 기준선으로부터 평균 변화 - 안전성 집단
Figure pct00040
Figure pct00041
기준선으로부터 어떠한 주지할만한 변화도 24주 및 48주에서 허리 대 둔부에서 임의의 치료 투여군에서 관찰되지 않았다.
심혈관 안전성
치료 기간 동안에 최악의 치료-우발적 ECG 비정상은 표 37에 요약한다. > 30-60 msec의 QTc 증가를 갖는 대상자의 비율은 EFV 투여군과 비교하여 CVC 투여군에 대해 보다 낮았다. 단지 1명의 대상자는 CVC 100mg 투여군에서 > 60 msec의 QTc 증가를 가졌다. 어떠한 대상자도 지속적이거나 병리학적으로 지속된 QTc를 갖지 않았다.
ECG 파라미터에서 어떠한 임상적 관련 변화도 임의의 치료 투여군에서 치료 기간 동안에 관찰되지 않았다.
표 37- 48주에 걸친 치료 기간 동안에 최악의 치료-우발적 ECG 비정상
Figure pct00042
필수 징후
어떠한 임상적으로 관련 없는 평균 변화는 임의의 치료 투여군에서 임의의 필수 징후 파라미터 (심장 수축기 및 심장 확장기 혈압, 심박수)에 대해 관찰되지 않았다. 단계 2 시험 MCP-1 단백질 및 유전자 발현으로부터 MCP-1에 관한 데이터 관찰은 상이한 정도의 간 손상 및 섬유증을 갖는 만성 간 질환을 갖는 환자의 간 조직에서 상향 조절되는 것으로 나타났다. 이전에 나타낸 바와 같이, 혈장 MCP-1 수준에서 보충적 증가는 비임상 및 임상 연구에서 CVC 치료 후 관찰되었고, 이는 강력한 CCR2 차단을 시사한다. 남성에서 CVC에 의한 CCR2 길항작용에 부수적인 MCP-1 수준에서 지속적 보충적 증가의 영향이 현재 알려지지 않았지만, 가용한 데이터는 안전성 데이터의 48주를 기준으로 간 파라미터에서 간담즙성 장애 또는 비정상의 증가된 위험을 시사하지 않는다.
염증 발생의 어떠한 징후도 고용량의 1000 mg/kg/일의 미시적 평가에 의해 간을 포함하는 임의의 조직에서 또는 임상적 병리 파라미터에서 나타나지 않았고, 여기서, 만성 (3 및 9개월) 원숭이 독성 연구에서 혈장 MCP-1 수준은 대조군 보다 ~ 5-배였다.
사실, NASH의 마우스 모델에서 관찰된 100 mg/kg/일의 용량에서 CVC의 항-염증 효과는 상당히 증가된 혈장 MCP-1 수준과 연계하여 나타났다. 추가로, 48주 동안 CVC-치료된 대상자에서 관찰된 APRI 및 FIB-4 섬유증 지수 스코어에서 개선은 상당하고 지속적인 MCP-1 상승에도 불구하고 나타났다. 또한 상기 연구에서, CVC는 일반적으로 48주까지 동안 CVC 100mg 및 200mg으로 치료받은 115명의 대상자에서 매우 관용성이었다.
1세 및 2세에 NAS에서 및 간 섬유증 단계 (NASH CRN 시스템 및 Ishak)에서의 변화는 조직학에 의해 평가된다. 간 생검에 대한 콜라겐의 형태측정 정량적 평가에서의 변화가 또한 평가된다. 효능 종점과 MCP-1 혈장 수준 간의 상호관계는 CVC 치료와 관찰된 지속적 MCP-1 증가가 NASH로 인한 간 섬유증을 갖는 대상자에서 잠재적 위험을 부과하는지의 여부를 결정하기 위해 평가된다.
실시예 23: 염증 발생 및 면역 기능의 바이오마커
용량-반응은 시간 경과에 따라 단핵구 상에서 발견된 케모킨 수용체인 CCR2의 리간드인 MCP-1의 증가에서 CVC와 함께 관찰되었고, MCP-1은 EFV 투여군에서 기준선 값으로 유지하였다. EFV 및 CVC 100mg 및 CVC 200mg 치료 투여군 간의 혈장 MCP-1의 기준선으로부터 변화의 차이는 24주 및 48주에 통계학적으로 유의적이었고(p<0.001), 이는 CVC에 의한 강력하고 용량-의존적 CCR2 차단을 시사한다. 추가로, 제1 24주 동안의 감소는 CVC 치료 투여군 둘다에서 HIV 감염에서 단핵구 활성화의 바이오마커이고 사망율의 독립적 예측 인자인 sCD14에 대해 관찰되었고, 증가는 동일한 관찰 기간 동안에 EFV 투여군에서 sCD14에 대해 관찰되었다. 24주 내지 48주에서, sCD14 수준은 CVC 치료된 대상자에서 기준선 값으로 복귀한 반면, 이들은 EFV-치료받은 대상자에서 계속 상승하였다. CVC 투여군 및 EFV 투여군 간의 기준선으로부터의 변화 차이는 24주 및 48주에 통계학적으로 유의적이었고(p<0.001) 또한 반복 분석에서 48주에서 유의적이었다. 이들 결과는 감소하는 단핵구 활성화에 대한 CVC의 잠재적 효과를 지적한다.
치료 투여군 간에 어떠한 의미있는 차이도 다른 염증 발생 바이오마커 (hs-CRP, 피브리노겐, IL-6, 및 D-이량체) 및 면역 기능의 바이오마커 (CD4+ T 세포 또는 CD8+ T 세포에 대한 총 CD38+ 발현 및 총 HLA DR+ 발현)에서 기준선으로부터의 변화에서 관찰되지 않았다.
실시에 24: 세균 전위와 관련된 바이오마커의 측정
CVC-치료받은 대상자에서 sCD14 수준의 감소는 또한 HIV 감염을 갖는 환자 [15] 및 NASH를 갖는 환자들 [16-18], 알콜성 간 질환을 갖는 환자들 [17,19], HIV/HCV 동시 감염을 갖는 환자들 [20] 및 간경변을 갖는 환자들 [21]에서 통상적으로 관찰된 현상인 세균 전위의 감소와 동일할 수 있다. 세균 전위는 장세포의 단단한 접합부(TJs)의 파괴 결과로서 비롯되고 누출 관으로서 통상적으로 기재된 현상인 장 점막 장벽을 포함한다. 관 통합성에서의 감소는 또한 부조화 및 세균 과성장으로서도 언급되는, 면역 결핍 및/또는 관 미생물총에서 유의적 변화와 관련되었다. 리포폴리사카라이드(LPS) 및 16S 리보솜 DNA (16S rDNA)와 같은 미생물 생성물의 후속적 전위는 면역 활성화에 기여한다. 그람 음성 세균의 세포 벽 성분인 LPS는 막 또는 가용성 CD14 (sCD14; 단핵구의 LPS 활성화시 생성됨) 및 골수 분화-2 (MD-2)-TLR4 복합체에 결합한다[14].
리포폴리사카라이드는 단핵구 및 대식세포에서 염증 발생 사이토킨, 특히 TNF-α의 가장 강력한 유도제이다. 높은 혈장 sCD14 수준은 간 염증 발생, 섬유증 및 질환 진행의 다른 마커와 독립적인 HBV 및 HCV 감염에서 질환 진행을 예측했다 [20]. 장 기원의 세균 생성물, 가장 주지할만하게 LPS를 포함하는 내독소로의 노출은 간 염증발생, 간세포 손상 및 간 섬유증을 초래한다[22]. TLR-4 의존적 메카니즘을 통한 쿠퍼(Kupffer) 세포의 활성화 및 간 성상 세포의 후속적 활성화는 둘다 섬유 조직 성장의 강력한 구동제이다[19].
이러한 추정은 연구 652-2-202, 후속적 간 손상 연구 652-1-121 및 간 섬유증 PoC 연구 652-2-203으로부터의 보관된 샘플에서 세균 전위의 바이오마커를 시험함에 의해 평가된다. 이들 바이오마커는 LPS, LPS-결합 단백질 (LBP), sCD14, 장 지방산 결합 단백질 (I-FABP)을 포함한다.
실시예 25 - CVC 임상 단계 1 데이터 및 단계 2에 기반한 결론
HIV-감염된 대상자 CVC에서 데이터는 48주까지 동안 CVC로 치료받은 115명의 대상자를 포함하는, HIV-감염된 대상자 (n=159)에서 2개 단계 2 연구뿐만 아니라 건강한 지원자 대상자 (n=390)에서 14개 단일 용량 및 다중 용량의 생물유용성 연구 및 DDI 연구에서 평가되었다.
단독의 CVC가 주어지는 단계 1 연구에서 관찰된 가장 흔한 부작용은 단계 1 연구 유닛에서 통상적으로 보고된 조건과 일치하였다. 전체적으로, 부작용의 패턴은 CVC가 일반적으로 10일 동안 800mg까지의 CVC의 단일 용량 및 200mg까지의 다중 하루 용량을 평가하는 이들 단계 1 연구에서 매우 관용성이었음을 시사한다. 이들 연구에 걸쳐 관찰된 트랜스아미나제 상승 빈도 및 정도는 과학 문헌에서 단계 1 연구를 위해 기재된 패턴과 일치하였다. CVC는 25 내지 150mg 용량에서 단계 2a 10일 CVC 단독치료요법 연구(n=44) 및 CVC 100 mg 및 CVC 200 mg의 용량에서 단계 2b 48주 효능 및 안전성 연구 (n=115)에서 평가되었다. 2개의 연구에서 및 모든 용량에서 CVC는 바람직한 부작용 프로필을 제공하였다. 단계 2b 연구로부터 48주 데이터를 기준으로 CVC는 간담즙성 장애 또는 트랜스아미나제 상승의 증가된 위험과 관련되지 않았다. 총 및 LDL 콜레스테롤에서 감소는 상기 연구에서 CVC 치료받은 대상자에서 관찰되었다. ECG 파라미터에서 임상적 관련 변화 또는 임의의 필수 징후 파라미터에 대한 변화는 48주 치료 기간 동안에 관찰되지 않았다. 어떠한 명백한 용량 또는 부작용에 대한 노출 관계, 연구 비정상 (CPK, ALT, AST 및 빌리루빈 상승을 포함하는) 또는 용량 제한 독성도 관찰되지 않았다.
단계 1 프로그램로부터의 데이터 및 HIV 감염된 대상자의 연구로부터의 단계 2 데이터를 기준으로, 본원 발명자는 연구 652-2-203(1년에 1차 연구 종점)에서 2년의 기간 동안 NASH로 인해 간 섬유증을 갖는 대상자의 치료에서 하루 1회 복용되는 CVC 150mg을 평가하는 것을 계획한다. 연구의 크로스오버 디자인은 1년의 위약 처리에 이어서 1년의 CVC 치료뿐만 아니라 2년 연속의 CVC 처리의 안전성 및 효능을 평가한다. NASH로 인한 간 섬유증에 대한 CVC 치료의 표준 평가의 영향은 간 생검 및 조직학적 개선의 다른 측정으로부터의 조직학적 데이터를 기준으로 수행한다. 안전성 및 관용성을 평가하고 간 또는 다른 기관 독성의 징후에 대해 주의깊은 모니터링을 수행하고 이는 독립적 데이터 모니터링 위원회에 의한 주기적 데이터 검토를 포함한다. 상기 연구는 CVC의 소염 및 항-섬유증 활성 및 NASH로 인한 간 섬유증에 대한 이의 영향을 설명하고 CVC 150mg의 안전성 및 관용성의 평가를 위한 추가의 데이터를 제공할 것으로 예상된다.
실시예 26 - NASH에서 간 조직학적 개선을 평가하기 위한 CVC의 연구
CVC가 소염 및 항-섬유증 활성을 갖는지 그리고 일반적으로 매우 관용성인지를 지적하는 비임상적 및 임상적 데이터를 기준으로, 토비라는 NASH로 인한 간 섬유증을 갖는 대상자에서 단계 2 연구에서 CVC를 조사하는 것을 계획한다. 상기 단계 2 연구는 2형 진성 당뇨병 (T2DM), 높은 체질량 지수 (BMI) (> 25 kg/m2)를 포함하는 적어도 1개의 기여 인자의 존재로 인해 질환 진행 위험에 처한 간 섬유증 및 기관 (National Cholesterol Education Program (NCEP))에 의해 정의된 바와 같은 대사 증후군(MS)의 적어도 1개의 기준, 브릿징 섬유증 및/또는 확정적인 NASH (NAS ≥ 5)를 갖는 성인 대상자에서 NASH의 치료를 위한 CVC의 효능을 평가한다.
단계 2 연구는 상기 중증 병태를 치료하고 NASH로 인한 간 섬유증을 갖는환자의 상당히 충족되지 않는 의학적 필요성을 해결하기 위한 CVC의 잠재력을 평가하는 것을 계획한다. 상기 연구는 NASH로 인한 간 섬유증을 갖는 대상자에서 위약과 비교하는 경우 CVC 150mg의 효능 및 안전성을 평가하도록 디자인된 무작위 배정된 이중 맹검 위약 조절된 연구이다. 상기 연구 집단은 질환 진행의 위험에 처한 NASH (NAS ≥ 4)로 인한 간 섬유증 (NASH 임상 연구 네트워크 [CRN] 단계 1-3)을 갖는 대상자들로 이루어진다.
CVC 150mg의 용량(DP7 제형)은 하기의 고려 사항을 기준으로 하는 연구 652-2-203에서 간 섬유증을 갖는 대상자에서 NASH의 치료를 위해 평가된다:
CVC는 주로 CCR2 및 CCR5 공동 수용체의 길항작용으로 인해 소염 및 항-섬유증 활성 둘다 및 염증 촉진 단핵구의 간 손상 부위로의 집결, 이동 및 침윤에 대한 결과적인 효과를 제공하는 것으로 예측된다. 따라서, 본 연구에 사용하기 위한 용량을 선택하기 위한 1차 고려사항은 CVC 혈장 노출이 CCR2 및 CCR5의 거의 최대 길항작용을 제공하기에 충분함을 확보하는 것이다.
CVC에 의한 CCR2 및 CCR5 길항작용은 HIV-1 감염의 치료 (단계 2a 연구 652-2-201 및 단계 2b 연구 652-2-202)에서 시험관내 및 생체외 연구에서 및 CVC의 2개의 임상적 연구에서 평가되었다. 각각의 경우에, CCR2 및 CCR5의 강력하고 농도의존적 길항작용이 관찰되었다. CCR2 및 CCR5 길항작용의 임상적 증거는 각각 이들 2개의 단계 2 연구에서 혈장 MCP-1 (CCR2의 리간드) 농도에서 기준선으로부터의 변화 및 혈장 HIV-RNA(HIV 진입을 위해 요구되는 CCR5 공수용체)에서의 변화 각각을 측정함에 의해 확립하였다.
연구 652-2-202에서, CVC 100 mg 및 CVC 200 mg (DP6 제형)의 용량은 48주(CVC 섭취의 평균 [SE] 지속기간: 41.1[1.33] 주)까지 동안 115명의 HIV-1 감염된 대상자에서 평가되었고 HIV 감염의 치료에서 효과적이고 매우 관용성인 것으로 밝혀졌다. 증가하는 CVC 혈장 농도가 개선된 바이러스학적 결과와 상호 관련됨을 보여주는 노출-반응 분석을 기준으로, CVC 200 mg은 단계 3 연구에서 HIV 감염의 치료를 위한 항바이러스 제제로서 CVC의 추가의 평가를 위해 적당한 용량인 것으로 고려되었다.
그러나 CVC 혈장 노출은 CVC가 동일한 투여 용량 조건하에 투여되는 경우 HIV-감염된 대상자와 비교하여 비-HIV 감염된 건강한 지원자 대상자에서 보다 높은 나타난다(연구 652-1-111, 652-1-110, 652-2-202). CVC 150mg의 용량은 연구 652 2 203에서 간 섬유증을 갖는 대상자에서 NASH의 치료에 대해 평가될 것이다. 참조 가용한 데이터를 기준으로, 이러한 용량은 치료학적 관련 범위 내에 있는 것으로 고려되고 CVC 200mg의 노출에 상응할 수 있는, NASH 및 간 섬유증을 갖는 대상자에서 노출을 제공하는 것으로 예상되고 이것은 연구 652-2-202에서 평가되었고 강력한 CCR2 및 CCR5 길항작용을 유도하는 것으로 밝혀졌다.
총 250명의 대상자(치료 투여군 당 125명의 대상자)가 계획되고 총 연구 치료 지속 기간은 2년일 것이다. 연구 집단은 ≥ 1 기여 인자(들)의 존재로 인해 질환 진행의 증가된 위험에 처해 있는 NASH (NAS ≥ 4) 및 간 섬유증(단계 1 내지 3 [NASH CRN 시스템])을 갖는 대상자를 포함한다:
2형 진성 당뇨병의 문서화된 증거
NCEP에 의해 정의된 바와 같이 대사성 증후군의 하기 기준의 적어도 1개를 갖는 높은 BMI (> 25 kg/m2):
중앙 비만: 가슴 둘레 ≥ 102 cm 또는 40 인치 (남성), ≥ 88 cm 또는 35인치 (여성)
이상지질혈증: TG ≥ 1.7 mmol/L (150 mg/dL)
이상지질혈증: HDL-콜레스테롤 < 40 mg/dL (남성), < 50 mg/dL (여성)
혈압 ≥ 130/85 mmHg (또는 고혈압에 대해 치료됨)
단식 혈장 글루코스 ≥ 6.1 mmol/L (110 mg/dL); 또는
브릿징 섬유증 (NASH CRN 단계 3) 및/또는 한정된 NASH (NAS ≥ 5).
2개의 치료 기간이 있다. 1차 치료 기간은 1년 동안 이중 맹검 무작위 배정된 치료 (CVC 150mg 또는 매칭 위약)로 이루어진다. 대상자 및 연구자는 기간 1 동안에 치료 할당에 맹검으로 유지된다. 2차 치료 기간 동안에, CVC 150mg으로 본래에 무작위 배정된 대상자는 추가의 해 동안에 계속 치료 받고 위약으로 본래에 무작위 배정된 대상자는 위약으로부터 CVC 150mg으로 전환된다.
대상자는 연구 약물을 2년 동안 하루 1회 (QD) 투여 받는다. 상기 연구는 2개의 치료 기간을 포함한다: 1차 치료 기간 (제1 년) 및 2차 치료 기간 (제2 년). 적격의 대상자는 치료의 제1 년 (1차 치료 기간) 동안에 CVC (n=126) 또는 매칭 위약 (n=126)을 투여 받도록 할당된다. 2차 치료 기간 동안에, 위약 치료받은 대상자의 절반(기준선에서 무작위 배정된)은 CVC로 전환되고 다른 절반은 제2 년 치료 동안 위약으로 유지한다. 기준선(제1 일)에서 선별검사 평가 후, 적격 대상자는 선별검사 (4 또는 ≥ 5) 및 섬유증 단계(≤ 2 또는 > 2)에서 NAS의해 계층화된 변경된 블록 무작위 배정을 사용하여 치료 투여군에 할당된다. 적격의 대상자는 하기의 3개의 치료 투여군 중 하나로 2:1:1의 비율로 무작위 배정된다:
표 38
Figure pct00043
CVC 및 매칭 위약은 이중 맹검 연구 약물로서 투여된다. 연구 약물(CVC/매칭 위약)은 매일 아침 음식을 섭취해야 한다.
1차 종점 (제1 년) 생검은 2차 치료 기간 개시 전 1차 치료 기간의 종료 전 1개월이내에 수행되어야만 한다. 최종 (2년차) 생검은 연구 약물을 사용한 치료 종료 전 1개월 이내에 수행되어야만 한다.
입회는 20명 이하의 대상자가 무작위 배정되고 치료받을 때까지 제한 수의 장소에서 개시될 것이고 안전성 데이터는 데이터 모니터링 위원회(DMC)에 의해 검토된다. 제1 DMC 검토는 하기 중 무엇이 먼저 수행되든, 제1 대상자가 입회되기 3개월 이내에 수행하거나 20명 이하의 대상자가 무작위 배정되고 적어도 10명의 대상자가 1개월 동안 치료받는 경우 수행된다. 나머지 연구 대상자의 후속적 입회는 DMC가 이들 제1 10명 내지 20명 대상자들에 대한 안전성 데이터를 평가하고 상기 연구가 계속될 수 있는지를 결정하면 수행된다.
1차 치료 기간 동안에, 모든 대상자는 제1 월의 2주차 및 4주차에 안전성 평가를 진행한다. 추가로, 1차 20명 대상자는 제1 월의 1주차 및 3주차에 안전성 평가를 진행한다. 모든 대상자는 제2 월 동안에 2주 마다 연구 방문 평가를 진행하고 제3 월 내지 제6 월 동안에 매달 방문 평가를 진행하고 제8 월, 제10 월및 제12 월에 방문 평가를 진행한다. 2차 치료 기간 동안에, 대상자는 제13 월 내지 제15 월, 및 제18 월, 제21 월 및 제24 월 동안에 매월 방문을 진행한다.
주요 평가
연구 동안에:
간 생검은 선별검사시에, 1차 종점 (제1 년: 1차 치료 기간의 종료 전 1개월 이내에 및 2차 치료 기간 개시 전) 및 2년차 (치료 종료 전 1개월 이내)에 채취한다.
염증 촉진 사이토킨, 염증 발생의 바이오마커, 간 세포 아폽토시스의 바이오마커, 세균 전위의 바이오마커, 단식 대사성 파라미터, 신장 파라미터 및 eGFR은 기준선에서 및 제3 월, 제6 월, 제12 월, 제15 월, 제18 월, 및 제24 월에 측정된다.
가용한 부위에서, 비 침입성 간 이미지화 (예를 들어, 초음파 일시적 탄성계[TE], 2차원 자기 공명 탄성계[MRE], 어쿠스틱 방사선 포스 임펄스 [ARFI])의 평가는 기준선 및 제6 월. 제12 월, 제18 월 및 제24 월에 수행한다.
CVC에 대한 약리역학적 샘플은 기준선에서 (치료 개시 직전 사전 용량 샘플), 제0.5 월, 제3 월 및 제15 월에 (사전 용량 및 적어도 1시간 사후 용량) 및 제6 월, 제12 월, 제18 월 및 제24 월(사전 용량)에서 수거된다.
중량, 가슴 둘레, 둔부 둘레, 팔 둘레 및 삼두근 피지후는 기준선에서 및 제3 월, 제6 월, 제12 월, 제15 월, 제18 월, 및 제24 월에서 수행한다. 키는 선별검사 시 및 제12 월에 수행한다.
신체 검사 및 연구 분석은 각각의 방문시 수행한다. ECG는 기준선 및 제3 월, 제6 월, 제12 월, 제15 월, 제18 월, 및 제24 월에 수행된다.
부작용 및 동시 약물 치료는 각각의 방문시 평가된다.
통지된 동의서 및 NASH, 간 섬유증 및 간 생검 과정에 대한 환자 교육 자료는 선별검사 방문시 검토된다.
연구 약물 다이어리는 연구 약물이 분배되는 동일한 시점에 각각의 대상자에게 제공된다. 상기 다이어리는 모든 치료차 방문 및 조기 중단 방문에서 검토된다.
대상자는 연구 이후 평가의 종료를 위해 이들의 마지막 치료를 받은지 1개월 후 클리닉에 복귀한다.
상기 연구의 1차 효능 목적은 선별검사 생검과 상대적으로 1년차에 비알콜성 지방 간 질환(NAFLD) 활성 스코어(NAS)에서 간 조직학적 개선을 평가하는 것이고, 이것은 소엽 염증 발생 및 벌루닝 카테고리 둘다에서 적어도 1-포인트 개선을 갖는 NAS에서 최소 2-포인트 개선 및 섬유증 단계의 동시 악화 부재 (브릿징 섬유증 또는 간경변으로의 진행으로서 정의되는 악화와 함께)로 정의된다.
2차 효능 목적은 2년차에 섬유증 단계 (브릿징 섬유증 또는 간경변으로의 진행으로서 정의되는 악화)의 동시 악화 부재와 함께 NASH의 해소; 1년차에 섬유증 단계 (브릿징 섬유증 또는 간경변으로의 진행으로서 정의되는 악화)의 동시 악화 부재와 함께 NASH의 해소; 간 섬유증을 갖는 성인 대상자에서 NASH 치료의 1 및 2년 동안의 CVC의 안전성 및 관용성; 집단 PK 분석에서 CVC의 혈장 PK의 특징 분석; 1개 초과의 카테고리에서 적어도 1-포인트 개선을 갖는 NAS에서 최소 2-포인트 개선에 의해 정의되고 섬유증 단계 (브릿징 섬유증 또는 간경변으로의 진행으로서 정의되는 악화)의 동시 악화 부재와 함께 2년차에 NAS에서 간 조직학적 개선의 평가; 1년차 및 2년차에 간 생검 상에 형태측정 정량 콜라겐에서 변화에 의해 측정된 바와 같이 간 섬유증을 갖는 성인 대상자에서 CVC 대 위약의 효능의 평가; 1년차 및 2년차에 조직학적 섬유증 단계(비알콜성 지방간염 임상 연구 네트워크 [NASH CRN] 시스템 및 Ishak)에서 변화의 평가; 1년차 및 2년차에서 간 조직 섬유 조직 발생 단백질 (알파-평활근 액틴 [α-SMA])에서 변화 형태의 평가; 제3 월, 제6 월,제12 월, 제18 월 및 제24 월에서 간 파라미터 및 단식 대사성 파라미터에서 기준선으로부터의 변화의 평가; 제3 월, 제6 월, 제12 월, 제15 월, 제18 월, 및 제24 월에 중량, BMI, 가슴 둘레, 가슴-둔부 비율, 팔 둘레 및 삼두근 피지후에 기준선으로부터의 변화의 평가를 포함한다.
3차 목적은 제6 월, 제12 월, 제18 월 및 제24 월 (가용한 장소에서)에서 비침입성 간 이미지화 방법 (예를 들어, 초음파 일시적 탄성계 [TE], 2차원 자기 공명 탄성계[MRE], 어쿠스틱 방사선 포스 임펄스 [ARFI]); 제3 월, 제6 월, 제12 월, 제15 월, 제18 월, 및 제24 월에서 염증 발생의 염증 촉진 사이토킨 및 바이오마커에서 기준선으로부터의 변화; 제3 월, 제6 월, 제12 월, 제15 월, 제18 월, 및 제24 월에서 신장 파라미터에서 및 평가된 사구체 여과율 (eGFR)에서 기준선으로부터의 변화; 및 제3 월, 제6 월, 제12 월, 제15 월, 제18 월, 및 제24 월에서 세균 전위와 관련된 바이오마커에서 기준선으로부터의 변화의 평가를 포함한다.
실시예 27 - 마우스에서 티오글리콜레이트 유도된 복막염 모델에서 세니크리비록의 효과
요약: 마우스 티오글리콜레이트 유도된 복막염 모델은 소염 세포의 집결을 평가하고 대식세포의 활성화를 평가하기 위해 통상적으로 사용되는 임상전 모델이다. 상기 연구의 목적은 마우스 티오글리콜레이트-유도된 복막염 (TIP) 모델에서 세니크리비록(CVC)의 효과를 평가하는 것이었다. 1일 내지 5일로부터, 동물에 비히클, CVC 또는 양성 대조군을 경구 위관영양법에 의해 투여하였고 10 mL/kg의 용량 용적으로 투여하였다. 그룹 2 내지 5에서 하루 2회 (BID) 용량 투여는 대략 12시간에 의해 분리되어 있다. 4일째에, 비히클, CVC 또는 양성 대조군의 용량 투여 2시간 후(BID 그룹을 위한 제1 투여 후 2시간), 동물에 1mL/동물의 용적에서 식염수 (그룹 1) 또는 3.85% 티오글리콜레이트 (TG)의 복강내 주사를 투여하였다.
표 39- 실험 설계
Figure pct00044
하기의 파라미터 및 종료 시점을 본 연구에서 평가하였다: 임상적 징후, 체중, 복막 세척 세포 계수, 말초 혈액 세포 계수 및 약리역학적 평가. 체중에 대한 어떠한 치료 관련 임상적 징후 또는 효과가 없었다. 어떠한 명백한 변화가 순환 혈액 세포 계수에서 관찰되지 않았다. 쥐 티오글리콜레이트 복막 모델에서 CVC 투여 후, 명백한 용량 관련 감소는 총 백혈구 및 단핵구 집단 둘다에 대한 복막 염증 세포 집결에서 관찰되었다. 3개의 용량 수준에서 CVC의 혈장 노출에서 용량 관련 증가가 있었다. CVC는 소정의 BID가 QD와 비교하는 경우 보다 효과적인 것으로 나타났고 이는 마우스에서 BID 투여 용량 및 공지된 단기 밤감기(약 2시간)와 함께 성취된 보다 높은 혈장 농도와 일치한다.
연구 디자인: 1일 내지 5일로 부터, 동물에 10mL/kg의 용량 용적으로 경구 위관영양법에 의해 비히클(0.5% (w/v) 메틸셀룰로스, DI 물 중 1% Tween® 80 (pH~ 1.3), CVC, 또는 양성 대조군 (덱사메타손(Dex), 로트 071M1180V)을 투여하였다. 그룹 2 내지 5에서 BID 용량 투여는 대략 12시간에 의해 분리되어 있다. 제형은 일단 전체 연구를 위해 제조하고 용량 투여 각각의 날에 부분 표본으로 하였다.
4일째에, 비히클, CVC 또는 양성 대조군의 용량 투여 2시간에 (BID 그룹에 대해 제1 투여 후 2시간), 동물에 1mL/동물의 용적으로 식염수 (그룹 1) 또는 3.85%의 티오글리콜레이트의 복강내 주사(그룹 2 내지 7)를 투여하였다. 덱사메타손은 이것이 다양한 동물 모델에서 염증 발생을 감소시키는 것으로 공지된 코르티코스테로이드이기 때문에 본 실험에서 양성 대조군으로서 사용하였다. 쥐 염증 발생 모델은 경구로 투여되는 경우 덱사메타손에 대한 유효 용량 범위가 0.3 내지 3 mg/kg QD임을 지적한다. 이를 기반으로, 1mg/kg의 중간 용량은 상기 특정 연구를 위해 선택하였다.
생전 과정, 관찰 및 측정: 이환율/사망율 체크는 적어도 하루 1회 수행하였다. 체중은 용량 투여 전 및 검시 전 기록하였다.
말단 과정: 모든 동물을 CO2 절식에 의해 티오글리콜레이트 주사 후 48시간에 안락사시키고, 복막 세척은 0.01M EDTA를 함유하는 2.5mL의 빙냉 멸균 Ca2+/Mg2+-부재 PBS로 수행하였다. 상기 세척은 초기 천공 부위를 통해 2.5ml의 제2 주사와 함께 반복하고 샘플을 각각의 동물에 대해 풀링하였다.
상기 세척 유체를 Advia 분석기를 사용한 전체 및 차등적 세포 계수를 위한 습윤 빙 펜딩 프로세싱 상에 위치시켰다. 세척 수거 후, 혈액 샘플 (0.7mL)은 심장내 천공에 의한 각각의 마우스로부터 또는 대정맥으로부터 수거하였다 (수거 시간을 기록하였다). 0.5mL의 혈액은 EDTA 튜브에 위치시키고, 임상 병리로 이전시키고 Advia 분석기를 사용하여 차등적 세포 계수에 대해 분석하였다. 0.2mL의 혈액을 K2EDTA 튜브에 위치시키고 혈장으로 프로세싱하였다. 상기 혈장은 원심분리 (4℃에서 10분 동안 3000rpm)에 의해 수거하고 건조 빙상에 위치시켰다. 상기 샘플을 분석하여 CVC 혈장 수준을 결정하였다. 혈액 수거 후, 동물을 이어서 복부 대동맥의 절개에 의해 방혈시켰다.
통계학적 분석: 포스트-혹 듀넷 통계학적 분석을 사용한 원-웨이 ANOVA는 세척 및 혈액 샘플로부터 수득된 차등적 세포 계수에 대해 수행하였다. 상기 분석은 그룹 2와 비교하여 수행하였다.
결과
사망율: 연구 수행 동안에 어떠한 사망율도 발생하지 않았다.
임상적 관찰: 상기 연구의 수행 동안에 어떠한 비범상적 임상 징후도 주지되지 않았다.
체중: CVC 투여 후 (1일 내지 6일) 체중에서 어떠한 주지할마한 변화도 없었다. 덱사메타손 그룹 (그룹 7)으로부터의 체중은 1일 부터 6일까지 약간 감소하였다. 체중 데이터는 도 57a, b 및 c에서 제공된다.
복막 세척: 단핵구/대식세포 및 총 백혈구에서의 증가는 티오글리콜레이트로 유도된 모든 그룹에서 관찰되었다. CVC의 명백한 용량 관련 효과는 TG 대조군 (그룹 2)과 비교하는 경우 관찰되었고, 용량 ≥ 20 mg/kg에서 통계학적 유의성(p<0.05)을 달성한다. 또한, CVC는 BID로 수행되는 경우 QD와 비교하여 보다 효과적인 것으로 나타났는데 20 mg/kg BID (10 mg/kg/용량)에서 관찰된 집결에서의 감소가 20 mg/kg QD에서 관찰된 것 보다 컸다. 티오글리콜레이트 대조군 (그룹 2)와 비교하여, 총 백혈구의 감소는 그룹 3 내지 6에 대해 각각 0.8, 22.2, 57.6 및 14.2%이었고, 단핵구에서의 감소는 그룹 3 내지 6에 대해 각각 5.7, 45.2, 76.5 및 26.0%이었다. 덱사메타손은 총 백혈구 계수를 26.6%까지 감소시키고 단핵구를 38.1%까지 감소시켰다. 데이터는 도 57-60에 나타낸다.
혈액 세포 평가: 어떠한 명백한 변화가 순환 혈액 세포 계수에서 관찰되지 않았다. 약간의 차이는 총 백혈구 및 단핵구에 대한 그룹 수단에서 관찰되었지만, 상기 차이는 개별 변화와 관련되는 것으로 고려되고 총 백혈구는 상기 마우스 종에 대한 이력 범위 (280 내지 3870 세포/μL)내에 있다. 그룹 평균 요약은 표 40에 제공되고 개별 데이터는 도 57에 나타낸다.
PK 분석: BID 용량 투여 후, 대략적인 트로프 (용량 투여 후 14시간)에서 CVC의 혈장 수준은 용량 관련 방식으로 증가하였다. 20 mg/kg/일에서, 보다 낮은 혈장 수준은 BID 용량 투여와 비교하여 QD 용량 투여와 함께 나타났다. 상기 데이터는 표 40에 요약한다.
표 40- 순환 혈액 세포 계수 (평균 + 표준 오차)
Figure pct00045
동물은 표 41에 명시된 바와 같이 용량 투여받았다.
표 41 - 실험 설계
Figure pct00046
1일 내지 5일까지 경구 위관영양법에 의해 시험 제품을 동물에게 투여하였다. 그룹 2 내지 5에서 하루 2회 (BID) 용량 투여는 대략 12시간에 의해 분리되어 있다. 혈액 샘플은 혈장 수준의 평가를 위해 6일째 수거하였다. 샘플은 K2EDTA 튜브에 위치된 대정맥으로부터 또는 심장내 천공에 의해 수거하였고, 혈장으로 프로세싱하였다. 샘플은 분석때까지 -70 내지 -90℃에서 동결 저장하였다. 1차 종점에 의해 지시된 희생 시간으로 인해 (티오글리콜레이트 투여 후 48시간), 샘플은 그룹 2 내지 5에 대해 용량 투여 후 대략 14시간에 수거하였고 나머지 그룹에 대해 용량 투여 후 26시간에 수거하였다. 어떠한 샘플도 동물 105, 201, 303 및 503에 대해 수거되지 않았다.
혈장 내 CVC의 수준은 이전에 확인된 LC/MS/MS 원숭이 혈장 방법 (50 μL 검정, 범위 10.0 - 1920 ng/mL)을 사용하여 KCAS (Shawnee, KS)에 의해 결정하였다.
표 42는 CVC를 투여받은 각각의 용량 그룹에 대해 평균 혈장 수준을 제공한다. 모든 용량 그룹에 대한 개별 값은 도 61에 제공된다. 어떠한 검출가능한 CVC도 그룹 1, 2 및 7에서 주지되지 않았다.
표 42 - 6일째 마우스에서 CVC의 혈장 수준(평균 및 표준 편차)
Figure pct00047
BID 용량 투여 후, 대략 트로프 (용량 투여 후 ~14-16 시간)에서 CVC의 혈장 수준은 용량 관련 방식으로 증가하였다. 20 mg/kg/일에서, 보다 낮은 혈장 수준은 BID 용량 투여와 비교하여 QD 용량 투여에서 나타났다.
결론: 쥐 티오글리콜레이트 복막염 모델에서 CVC 투여 후, 명백한 용량 관련 감소는 총 백혈구 및 단핵구 집단 둘다에 대한 복막 염증 세포 집결에서 관찰되었다. 3개의 용량 수준에서 CVC의 혈장 노출에서 용량 관련된 증가가 있었다. CVC는 BID가 주어지는 경우 QD와 비교하여 보다 효과적인 것으로 나타났고 이것은 마우스에서 BID 용량 투여 및 공지된 단기 반감기(약 2시간)를 사용하여 성취된 보다 높은 혈장 농도와 일치한다.
실시예 28- CCR2 + 침윤 단핵구는 CCR2 및 CCL2를 억제하는 아세트아미노펜 -유도된 급성 간 손상 치료학적 관련성을 촉진한다
배경 및 목적: 아세트아미노펜 (APAP) 중독 후 간 손상은 급성 간 부전증 (ALF)의 주요 과정 중 하나이다. APAP는 간세포의 괴사에 이어서 쿠퍼 세포(KC)와 같은 체류 면역 세포의 활성화, 다양한 케모킨 (예를 들어, CCL2)의 방출 및 면역 세포 침윤 (예를 들어, 단핵구)을 유발한다. CCR2+ 단핵구는 APAP-유도된 손상을 촉진시키고 CCR2 또는 CCL2를 약리학적으로 차단하는 치료학적 잠재력이 조사되었다.
방법: C57BL/6J (WT) 및 Ccr2-/- 마우스는 APAP의 정맥내 주사 (250mg/kg 체중)에 의해 ALF에 적용하였다. 간 손상 및 면역 세포 표현형은 강력한 CCL2 억제제인 mNOX-E36 s.c. 또는 경구 CCR2/CCR5 길항제 세니크리비록 (CVC)로 처리된 WT 마우스에서뿐만 아니라 Ccr2-/- 및 WT 마우스에서 분석하였다.
결과: Ccr2-/- 마우스는 조직학 및 감소된 ALT 값 (p<0.05, 도 62)에 의해 결정된 바와 같이 APAP 주사한지 12시간 후 WT 마우스와 비교하여 상당히 감소된 간 손상을 보여주었다. 유동 세포 측정 분석은 Ccr2-/- 마우스의 간에서 염증 촉진 Ly6C+ 단핵구 유래된 대식세포의 상당히 감소된 수를 밝힌 반면, 호중구 또는 다른 면역 세포 서브세트의 수는 WT 마우스와 유사하게 잔류하였다. 간 IL1β, TNF-α 및 CCL2는 WT 및 Ccr2-/- 마우스 둘다에서 유사하게 증가하면서, IL10은 Ccr2-/- 마우스 기원의 간에서 보다 높았고 (p<0.05), 이와 함께 간 대식세포에 대한 차등적 마커 발현 (CD1d, CD68)을 나타낸다. 약리학적 억제제로서, mNOX-E36 또는 CVC 둘다는 APAP-유도된 간에서 단핵구 축적을 상당히 감소시킬 수 있고 이는 간 손상 (ALT 수준, mNOX에 대해 p p<0.05 및 CVC에 대해 p<0.01)으로부터 상당한 보호를 유발한다.
결론: 케모킨 수용체 CCR2 또는 이의 리간드 CCL2 (MCP-1)를 억제함에 의해 염증 촉진 단핵구의 해로운 작용을 표적화하는 것은 아세트아미노펜 과용량 투여 후 간 손상을 제한하기 위한 전망있는 치료학적 작용이다.
실시예 29: 이원 CCR2 / CCR5 길항제인 세니크리비록은 실험 급성 간 손상에서 염증 촉진 CCR2+ 단핵구 침윤에서 강력하고 상당한 감소를 초래한다
연구의 목적: 급성 간 부전증은 (ALF)은 간 기능이 급속히 악화되고 제한된 치료하적 선택으 갖는 생명에 위협적인 병태이다. 마우스 모델에서, 사염화탄소 (CC14) 또는 아세트아미노펜 (APAP)과 같은 독성제에 의한 간 손상은 CCR2-CCL2 (a.k.a. MCP-1) 케모킨 경로를 통해 염증 촉진 단핵구의 간으로의 침윤을 초래한다. 세니크리비록 (CVC)은 경구 하루 1회 CCR2/CCR5 길항제이고 현재 NASH 및 간 섬유증을 갖는 성인에서 단계-2b 임상 시험에서 평가되었다. CVC는 생체내 CC14 및 APAP-유도된 급성 간 손상에서 단핵구 침윤을 억제하는 것에 대해 평가하였다.
방법: C57BL/6J (WT) 및 CCR2-결핍 마우스는 CCl4 (0.6 ml/kg IP) 또는 APAP (250 mg/kg IV)에 의해 ALF에 적용하였다. 2개의 모델에서, 마우스는 경구 위관영양법에 의해 CVC (100 mg/kg) 또는 비히클을 투여받았다. 간 손상 및 면역 세포 표현형이 분석되었다. 기계론적 연구를 위해, 단핵구-유래된 대식세포 서브세트 및 체류 대식세포 (Kupffer 세포)는 손상된 간으로부터 FACS에 의해 분류하였고 어레이-기반 나노스트링 유전자 발현 분석에 적용하였다.
결과: CCl4 및 APAP 둘다는 케모킨 수용체 CCR2에 의존하여 손상된 간에서 Ly6C+, 단핵구-유래된 대식세포의 신속하고 거대한 축적을 유도하였다. CVC의 경구 투여는 CC14 및 APAP-유도된 급성 간 손상 둘다에 대해 혈액에서 염증 촉진 Ly6C+ 단핵구(p<0.01) 및 간에서 단핵구 유래된 대식세포를 상당히 감소시켰다. CVC 치료는 CC14 후 36시간 째에 간에서 Ly6C+ 단핵구-유래된 대식세포를 5.49% ± 0.49 (간 백혈구의)로터 0.95% ± 0.14로 감소시켰고 APAP 후 12시간 째에 6.01% ± 0.66으로부터 0.95% ± 0.11로 감소시켰다(2개의 모델에 대해 p<0.001, 83-84% 감소). CVC에 의한 단핵구의 침윤 억제는 ALT에서 4365 U/L ± 951로부터 1088 U/L ± 486까지의 감소 (p<0.01, 75% 감소) 및 괴사 면적 분획에서 27.9% ± 4.05로부터 10.9% ± 3.50까지의 감소 (p<0.01, 61% 감소)에 의해 APAP-유도된 간 손상으로부터 상당한 보호와 관련되었다. 추가로, 나노스트링 유전자 분석은 급성 간 손상에서 이들의 Ly6C-CCR2-대응물과 비교하여 Ly6C+ CCR2+ 단핵구 유래된 대식세포에서 케모킨, 케모킨 수용체 및 톨형 수용체의 상향 조절된 발현을 밝혔다. 이어서, 골수 유래된 단핵구의 적응성 전달은 APAP 유도된 간 손상을 악화시켰고, 이는 추가로 ALF에서 CCR2+ 단핵구의 염증 촉진 표현형을 확증한다.
결론: CVC는 급성 간 손상의 모델에서 염증 촉진 단핵구의 간으로의 침윤의 강력한 억제제이다. 추가로, CVC는 아세트아미노펜 과용량 투여 후 간 손상을 제한하기 위한 전망있는 치료학적 선택으로서 고려될 수 있다.
실시예 30: CCR2 + 침윤 단핵구는 아세트아미노펜 유도된 급성 간 손상을 촉진시킨다 - CCR2 및 CCL2를 억제하는 치료학적 관련성
배경 및 목적: 아세트아미노펜 (APAP) 중독 후 간 손상은 급성 간 부전증 (ALF)의 주요 과정 중 하나이다. APAP는 간세포의 괴사에 이어서 쿠퍼 세포 (KC)와 같은 체류 면역 세포의 활성화, 다양한 케모킨 (예를 들어, CCL2)의 방출 및 면역 세포 침윤 (예를 들어, 단핵구)을 유발한다. 본원 발명자는 CCR2+ 단핵구가 APAP 유도된 손상을 촉진시키는 것으로 추정하였고 CCR2 또는 CCL2를 약리학적으로 차단하는 치료학적 잠재력을 조사하였다.
방법: C57BL/6J (WT) 및 Ccr2-/- 마우스는 APAP (250 mg/kg 체중)의 정맥내 주사에 의해 ALF에 적용하였다. 간 손상 및 면역 세포 표현형은 강력한 CCL2 억제제인 mNOX-E36 s.c.로 처리되거나 경구 CCR2/CCR5 길항제 세니크리비록 (CVC)으로 처리된 WT 마우스에서뿐만 아니라 Ccr2-/- 및 WT 마우스에서 분석되었다. 제제 둘다의 인간 대응물은 현재 상이한 징후 (각각 당뇨 신경병증 또는 NASH)에 대한 단계 II 시험에서 시험되었다.
결과: Ccr2-/- 마우스는 조직학에 의해 결정된 바와 같이 APAP 주사 후 12시간 째에 WT 마우스와 비교하여 상당히 감소된 간 손상 및 감소된 ALT 값 (p<0.05, 도 63)을 보여주었다. 유동 세포측정 분석은 Ccr2-/- 마우스의 간에서 상당히 감소된 수의 염증 촉진 Ly6C+ 단핵구 유래된 대식세포를 밝혔고, 반면, 호중구 또는 다른 면역 세포 서브세트의 수는 WT 마우스와 유사하게 잔류하였다. 간 IL1β, TNF-α 및 CCL2가 WT 및 Ccr2-/- 마우스 둘 다에서 유사하게 증가되었지만, IL 10은 Ccr2-/- 마우스 기원의 간에서 보다 높았고(p<0.05), 이와 함께 간 대식세포 상에서 차등적 마커 발현 (CD1d, CD68)을 나타냈다. 약리학적 억제제 mNOX-E36 또는 CVC 둘다는 APAP 손상된 간에서 단핵구 축적을 상당히 감소시킬 수 있고, 간 손상으로부터 상당한 보호를 초래한다(ALT 수준, mNOX에 대해 p<0.05 및 CVC에 대해 p<0.01).
결론: 케모킨 수용체 CCR2 또는 이의 리간드 CCL2 (MCP-1)를 억제함에 의해 염증 촉진 단핵구의 치명적 작용을 표적화하는 것은 아세트아미노펜 과용량 투여 후 간 손상을 제한하기 위한 전망있는 치료학적 선택이다.
실시예 31: 간 및 신장 섬유증의 동물 모델에서 이원 CCR2 / CCR5 길항제 세니크리비록의 항섬유증 효과
배경 및 목적: C-C 케모킨 수용체 2형 (CCR2) 및 5형 (CCR5)과 CCL2 및 CCL5를 포함하는 이들의 리간드 간의 상호작용은 간 성상 세포 활성화뿐만 아니라 단핵구/대식세포 집결 및 조직 침윤을 촉진시킴에 의해 섬유 조직 발생을 매개한다. 세니크리비록(CVC)은 수용체 둘다에 대해 나노몰 효능을 갖는 경구 이원 CCR2/CCR5 길항제이다. CVC의 소염 및 항섬유증 효과는 염증 및 섬유증의 임상전 모델 범위에서 평가되었다.
방법: 단핵구/대식세포 집결은 티오글리콜레이트-유도된 복막염의 마우스 모델에서 생체내 평가하였다. CCL2-유도된 화학주성은 마우스 단핵구에 대해 생체외 평가되었다. CVC 항섬유증 효과는 간 섬유증의 티오아세트아미드 유도된 랫트 모델 및 식이 유도된 비-알콜성 지방간염 (NASH) 및 신장 섬유증의 마우스 모델에서 평가되었다. 연구 평가는 체중 및 간/신장 중량, 간 기능 시험, 간/신장 형태 및 콜라겐 침적, 섬유 조직 발생 유전자 및 단백질 발현, 및 약리역학적 분석을 포함했다.
결과: CVC는 생체내 단핵구/대식세포의 집결 및 생체외 단핵구 이동 둘다를 감소시켰다. CVC는 항섬유증 효과를 보여주었고, 콜라겐 침적 (p < 0.05), 및 섬유증의 3개의 동물 모델에 걸친 콜라겐 1형 단백질 및 mRNA 발현이 상당히 감소된다. NASH 모델에서, CVC는 비-알콜성 지방 간 질환 활성 스코어를 상당히 감소시켰다(p < 0.05 대 대조군). CVC 처리는 체중 또는 간/신장 중량에 대해 주지할만한 효과를 갖지 않았다.
결론: CVC는 동물 섬유증 모델 범위에서 소염 및 항섬유증 활성을 나타냈고, 이는 섬유증 질환에 대한 인간 시험을 지지한다. NASH 및 간 섬유증을 갖는 성인에서 단계 2b 연구는 현재 진행 중이다(CENTAUR 연구 652-2-203; NCT02217475).
본원의 상세한 설명은 본 발명의 다양한 양상 및 구현예를 기재하지만 달리 특정되지 않는 경우 이들 중 어떠한 것도 제한하는 것으로서 의도되지 않는다. 실제로, 본원 발명을 판독한 당업자는 본 발명의 범위 및 취지로부터 벗어나는 것 없이 만들어질 수 있는 변형, 변화 및 조정을 고려할 것이고 이 모두는 달리 특정되지 않는 경우 본 발명의 일부인 것으로 고려된다. 출원인은 따라서 본원에 기재된 발명이 첨부된 청구범위에 의해서만 제한됨을 고려한다.
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Claims (21)

  1. 치료학적 유효량의 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물을 이를 필요로 하는 대상자에게 투여함을 포함하는, 상기 대상자에서 복막염을 치료하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 복막염이 감염되거나 비감염된, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물이 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물 및 푸마르산을 포함하는 약제학적 조성물로서 제형화된, 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 복막염이 위장관의 천공과 관련된, 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 복막염이 복막으로의 유체의 누출과 관련된, 방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 복막염이 외부 신체와 관련된, 방법.
  7. 치료학적 유효량의 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물을 이를 필요로 하는 대상자에게 투여함을 포함하는, 상기 대상자에서 급성 간 손상을 치료하는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 급성 간 손상이 알콜 유도된, 아세트아미노펜 유도된, 독소 유도된 및/또는 화학적 유도된 간 손상인, 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물이 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물 및 푸마르산을 포함하는 약제학적 조성물로서 제형화된, 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물이 경구 조성물로서 제형화된, 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물이 하루 1회 또는 하루 2회 투여되는, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물이 하나 이상의 추가의 활성제 또는 치료제와 동시 투여되는, 방법.
  13. 제12항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가의 활성제 또는 치료제가 하나 이상의 항생제, 글루코코르티코이드, 코르티코스테로이드, 펜톡시필린, 포스포디에스테라제 억제제, 항-TNFα 제제 및 항-산화제인, 방법.
  14. 제13항에 있어서, 하나 이상의 항생제가 페니실린, 세팔로스포린, 마크롤리드, 플루오로퀴놀론, 설폰아미드, 테트라사이클린 및 아미노글리코사이드 또는 이의 조합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
  15. 제12항에 있어서, 상기 하나 이상의 추가의 활성제 또는 치료제가 n-아세틸시스테인 (아세틸시스테인; NAC)인, 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 NAC가 정맥내로 투여되는, 방법.
  17. 제15항에 있어서, 상기 NAC가 경구 투여되는, 방법.
  18. 복막염 치료를 필요로 하는 대상자에서 복막염 치료에 사용하기 위한 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물.
  19. 급성 간 손상 치료를 필요로 하는 대상자에서 급성 간 손상 치료에 사용하기 위한 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물.
  20. 복막염의 치료를 필요로 하는 대상자에서 복막염 치료에 사용하기 위한 약물의 제조를 위한 치료학적 유효량의 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물의 용도.
  21. 급성 간 손상 치료를 필요로 하는 대상자에서 급성 간 손상 치료에 사용하기 위한 약물의 제조를 위한 치료학적 유효량의 세니크리비록 또는 이의 염 또는 용매화물의 동시 투여의 용도.
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