KR20180071987A - 청대 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 청대 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 청대 추출물 또는 이의 분획물은 염증 활성 지표 인자들의 활성 및 발현을 감소시키고, 염증성 장질환의 질병활성도를 개선시키는 효과를 나타내어, 염증성 장질환의 예방 및 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

청대 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition comprising an extract of Indigo Pulverata Levis or fractions thereof for prevention or treatment of inflammatory bowel disease}

본 발명은 청대 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

염증성 장질환(Inflammatory Bowel Disease, IBD)은 소장 및 대장에서 면역체계 조절이상으로 인한 만성재발성 염증질환들에 대한 통칭이다. 크론병(Crohn’s disease, CD)과 궤양성 대장염(ulcerative colitis, UC)으로 대표되는 염증성 장질환은 면역반응 조절이상이 중요한 병인일 것으로 알려져 있다(Braus et al., Clin Immunol, 2009, 132, 1-9; McGuckin et al., Inflamm Bowel Dis, 2008, 15, 100-113).

염증성 장질환은 아시아 지역에서는 드문 질병으로 인식되어 왔으나 점차 서구화되어가는 최근의 생활 습관에 의해 동양에서도 염증성 장질환 환자 수가 1980년대 이후 급격히 증가하고 있는 추세이다. 이에 따라 염증성 장질환의 개선과 관련된 연구가 활발히 이루어지고 있으며, 최근에는 염증성 장질환과 관련이 있는 사이토카인이나 세포들이 밝혀지면서 장내 염증과 관련된 특정 분자나 경로를 선택적으로 공격하는 수많은 생물학적 제제가 개발되었다(Sandborn et al., Gastroenterology, 2002, 122: 521-530).

현재 염증성 장질환 치료제로는 프로스타글란딘(prostaglandins)의 생성을 차단하는 5-아미노살리실산(aminosalicylic acid, 5-ASA) 계통 약물, 예를 들어, 살파라진 등을 이용하거나 스테로이드류의 면역억제제를 사용하고 있다.

다만, 설파라진은 복부허실, 두통, 발진, 간질환, 백혈구 감소증, 무과립구증, 남성 불임 등과 같은 부작용이 나타날 수 있다. 또한, 스테로이드류의 면역억제제는 장기적인 예후를 향상시킬 수는 없으며, 유도된 감염성 질환, 2차 부신피질 부전증, 소화성 궤양, 당뇨병, 정신장애 등과 같은 부작용으로 단지 급성인 경우에 한해서만 사용되어야 하는 한계가 있다. 따라서, 부작용이 없는 염증성 장질환의 치료제의 개발이 여전히 필요한 실정이다.

한편, 청대(Indigo Pulverate Levis)는 한국, 중국 및 일본에 자생하는 1년 초본으로 초장은 60~100 cm 내외인 쪽(Persicaria tinctoria H. Gross) 또는 마람(Baphicacanthus cusia Bremek.)의 잎을 발효시켜 얻은 가루를 말한다.

한방에서 예로부터 청대의 효능으로서 여러 가지가 알려져 있는데, 특히 청열해독(淸熱解毒), 살충(殺蟲), 양혈산종(凉血散腫) 등의 효능 있는 것으로 알려져 있으나, 염증인자 억제와 점액성 대변, 혈변, 설사 등의 임상적 증상 완화를 통한 염증성 장질환과 관련된 작용효과 등에 대해서는 알려진 바 없다.

이에, 본 발명자들은 약용식물로부터 염증성 장질환에 대한 치료제를 개발하기 위해 노력한 결과, 청대 추출물 또는 이의 분획물이 염증수치 감소 효과를 나타내며, 특히 분획물에서 현저한 효과를 나타냄을 확인하였다. 또한, 상기 추출물 또는 이의 분획물이 생체 내(in vivo)의 염증성 장질환 모델에서 염증성 장질환의 질병활성도(Disease activity index, DAI)를 유의적으로 낮추므로, 청대 추출물 또는 이의 분획물이 염증성 장질환의 치료 및 예방용 약학적 조성물의 유효성분으로서 유용하게 사용될 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

Braus et al., Clin Immunol, 2009, 132, 1-9 McGuckin et al., Inflamm Bowel Dis, 2008, 15, 100-113 Sandborn et al., Gastroenterology, 2002, 122: 521-530

본 발명의 목적은 청대 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 청대 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 청대 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 염증성 장질환의 예방 또는 치료를 위한 청대 추출물 또는 이의 분획물의 용도를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 염증성 장질환의 예방 또는 치료 효과를 갖는 약제를 생산하기 위한 청대 추출물 또는 이의 분획물의 사용을 제공하는 것이다.

본 발명자들은 염증성 장질환의 예방 및 치료 효과를 가지는 천연물 의약품을 개발하고자 연구한 결과, 청대 추출물 또는 이의 분획물이 염증성 장질환의 예방 및 치료에 우수한 효과를 나타냄을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 청대 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에서 용어 "염증성 장질환"은 장관에 염증을 일으키는 질환을 총칭하는 용어로서, 구체적으로 소장 및 대장에서 면역체계의 조절이상으로 인한 만성재발성 염증질환일 수 있다. 상기 염증성 장질환은 궤양성 대장염 및 크론병을 포함한다.

본 발명의 추출물 또는 이의 분획물의 제조에 사용되는 청대(Indigo Pulverate Levis)는 시판되는 제품을 구입하거나 또는 직접 제조하여 사용할 수 있다.

본 발명의 청대 추출물은 청대의 건조 중량의 1 내지 30배 부피량의 증류수 또는 유기용매 추출물을 모두 포함할 수 있고, 구체적으로 유기용매 추출물, 조추출물 또는 이의 농축물일 수 있다.

상기 유기용매는 탄소수 1 내지 4 의 저급 알코올, 헥산, 아세트산에틸, 디클로로메탄, 에테르, 클로로포름 및 아세톤으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 n-부탄올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 탄소수 1 내지 4의 저급 알코콜은 무수 또는 함수 알코올을 모두 포함할 수 있다. 상기 알코올, 예컨대 에탄올은 1 내지 100%(v/v%), 구체적으로는 30 내지 100%, 보다 구체적으로는 30 내지 80%, 더욱 구체적으로는 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 또는 70% 알코올일 수 있다.

본 발명에 있어서, 청대 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출할 수 있으며, 상기 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올은 에탄올, 메탄올 또는 부탄올일 수 있다. 본 발명의 일 실시양태에 따르면, 청대 추출물은 70% 에탄올로 추출한 추출물일 수 있다.

본 발명의 분획물은 유기용매 분획물일 수 있으며, 상기 유기용매는 헥산, 클로로포름, 에틸 아세테이트 및 부탄올로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다.

본 발명에 있어서, 청대 추출물의 분획물은 청대 추출물을 농축하여 이를 다시 유기용매, 구체적으로 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올을 가하여 순차적으로 얻은 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물 또는 부탄올 분획물일 수 있다.

본 발명의 일 실시태양에 따르면, 청대 추출물의 분획물은 청대를 에탄올로 추출하여 에탄올 추출물을 얻고, 상기 에탄올 추출물에 물을 가한 후, 헥산으로 분획하여 헥산 분획물 층과 물층을 1차로 분리하고, 상기 물층을 클로로포름으로 분획하여 클로로포름 분획물 층과 물층을 2차로 분리하고, 상기 물층을 에틸아세테이트로 분획하여 에틸아세테이트 분획물 층과 물층을 3차로 분리하고, 상기 물층을 부탄올로 분획하여 부탄올 분획물 층을 분리하여, 청대의 에탄올 추출물의 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물을 제조할 수 있다.

본 발명의 청대 추출물 또는 이의 분획물은 의약품 원료로 사용하기에 적합하도록 잔존하는 저급 알코올 및 유기용매를 제거하기 위하여 감압건조, 분무건조, 또는 동결건조 등의 통상적인 건조 방법을 이용하여 분말상태로 제조할 수 있다. 구체적으로, 상기 청대 추출물은 농축된 액상일 수도 있고, 동결건조된 분말형태일 수도 있다. 본 발명의 일 실시양태에 따르면, 청대 추출물은 농축된 액상 형태인 연조 엑스일 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는, 청대 추출물 또는 이의 분획물을 염증성 장질환이 유도된 동물모델에 투여한 결과, 대장의 길이가 증가하고 염증 활성 지표 인자들의 활성 및 발현이 감소되고, 염증성 장질환의 질병활성도가 개선되는 효과를 확인하여, 상기 청대 추출물이 염증성 장질환의 치료 및 예방에 효과적임을 알 수 있었다. 구체적으로, 청대 추출물의 에틸아세테이트 분획물이 가장 우수한 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

본 발명의 약학적 조성물은 염증성 장질환을 예방 또는 치료하기 위한 통상의 방법에 따라 경구 투여용 제형, 예를 들면 정제, 트로키제(troches), 로진지(lozenge), 수용성 또는 유성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캅셀, 시럽 또는 엘릭실제(elixirs) 등으로 제제화될 수 있다.

정제 및 캅셀 등의 제형으로 제제화하기 위해서는 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제; 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제; 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕괴제; 스테아린산 마그네슘, 스테아린산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유가 함유될 수 있다. 캅셀 제형의 경우는 상기에서 언급한 물질 이외에도 지방유와 같은 액체 담체를 함유할 수 있다.

또한, 본 발명의 약제학적 조성물은 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사 주입방식에 의할 수 있다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 상기 조성물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액으로 제조하고 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제제화할 수 있다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물의 투여량은 약제학적으로 유효한 양이어야 한다. "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 예방 또는 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 제제화 방법, 환자의 상태 및 체중, 환자의 성별, 연령, 질환의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간, 배설 속도, 반응 감응성 등과 같은 요인들에 따라 당업자에 의해 다양하게 선택될 수 있다. 유효량은 당업자에게 인식되어 있듯이 처리의 경로, 부형제의 사용 및 다른 약제와 함께 사용할 수 있는 가능성에 따라 변할 수 있다.

본 발명에 따른 청대 추출물 또는 이의 분획물을 유효 성분으로 포함하는 약제학적 조성물의 투여량 또는 복용량은 환자의 나이, 신체적 조건, 몸무게 등에 의해 다양화될 수 있지만, 일반적으로 10 내지 100 ㎎/㎏(몸무게)/1일 범위 내에서 투여하는 것이 바람직하다. 그리고, 1일 유효투입량 범위 내에서 하루에 한번 또는 하루에 여러 번 나누어 투입할 수 있다.

본 발명은 다른 하나의 양태에서, 청대 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 청대 추출물 또는 이의 분획물은 식품에 포함되어 섭취시, 염증성 장질환을 효과적으로 예방 또는 개선할 수 있다.

본 발명의 청대 추출물 또는 이의 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 청대 추출물 또는 이의 분획물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다. 상기 외에 본 발명의 청대 추출물 또는 이의 분획물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 청대 추출물 또는 이의 분획물은 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다.

본 발명은 다른 하나의 양태로서, 청대 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료방법을 제공한다.

본 발명에서 사용된 용어 '청대', '청대 추출물', '분획물', '장 질환' 및 '투여' 등의 용어는 상기에서 설명한 바와 동일하다.

본 발명에서 상기 대상체는 동물을 말하며, 전형적으로 본 발명의 추출물을 이용한 치료로 유익한 효과를 나타낼 수 있는 포유 동물이다. 이러한 대상체의 바람직한 예에는 인간과 같은 영장류가 포함된다. 또한 이와 같은 대상체들에는 염증성 장질환 증상을 갖거나 이와 같은 증상을 가질 위험이 있는 대상체들이 모두 포함된다.

본 발명은 다른 하나의 양태로서, 염증성 장질환의 예방 또는 치료를 위한 청대 추출물 또는 이의 분획물의 용도를 제공한다.

본 발명은 다른 하나의 양태로서, 염증성 장질환의 예방 또는 치료 효과를 갖는 약제를 생산하기 위한 청대 추출물 또는 이의 분획물의 사용을 제공한다.

본 발명에 따른 청대 추출물 또는 이의 분획물은 염증 활성 지표 인자들의 활성 및 발현을 감소시키고, 염증성 장질환의 질병활성도를 개선시키는 효과를 나타내어, 염증성 장질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 피록시캄으로 장질환이 유도된 모델에 청대 추출물 또는 이의 분획물을 투여한 결과 체중 변화를 나타낸 그래프이다;
PXC는 피록시캄 투여군; PXC+1은 피록시캄+청대 70% 에탄올 추출물 투여군; PXC+2는 피록시캄+청대 70% 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 투여군; 및 PXC+3은 피록시캄+청대 70% 에탄올 추출물의 부탄올 분획물 투여군: *는 정상군과의 현저한 차이 및 †는 질환 유발군과의 현저한 차이를 나타냄, 이하 동일.
도 2는 피록시캄으로 장질환이 유도된 모델에 청대 추출물 또는 이의 분획물을 투여한 결과 대장의 길이 변화를 보여주는 도이다.
도 3은 피록시캄으로 장질환이 유도된 모델에 청대 추출물 또는 이의 분획물을 투여한 결과 대장의 길이를 비교한 그래프이다.
도 4는 피록시캄으로 장질환이 유도된 모델에 청대 추출물 또는 이의 분획물을 투여한 결과 장 조직에서의 MPO 발현의 억제를 나타낸 그래프이다.
도 5는 피록시캄으로 장질환이 유도된 모델에 청대 추출물 또는 이의 분획물을 투여한 결과 장 조직에서의 IL-6 발현의 억제를 나타낸 그래프이다.
도 6은 피록시캄으로 장질환이 유도된 모델에 청대 추출물 또는 이의 분획물을 투여한 결과 장 조직에서의 IL-1b 발현의 억제를 나타낸 그래프이다.
도 7은 피록시캄으로 장질환이 유도된 모델에 청대 추출물 또는 이의 분획물을 투여한 결과 장 조직에서의 IL-17 발현의 억제를 나타낸 그래프이다.
도 8은 피록시캄으로 장질환이 유도된 모델에 청대 70% 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 투여한 결과 장질환의 질병활성도(DAI)가 감소함을 보여주는 그래프이다.
도 9는 피록시캄으로 장질환이 유도된 모델에 청대 70% 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 투여한 결과 생존율의 증가를 나타낸 그래프이다;
Log-rank (Mantel-Cox) 검정을 통한 통계적 분석.
도 10은 피록시캄으로 장질환이 유도된 모델에 청대 70% 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 투여한 결과 장 조직의 병리학적 세포파괴의 감소를 현미경으로 확인한 도이다.
도 11은 피록시캄으로 장질환이 유도된 모델에 청대 70% 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 투여한 결과 장 조직의 병리학적 세포파괴를 점수화하여 나타낸 그래프이다.
도 12는 덱스트란 황산 나트륨(DSS)으로 장염증이 유도된 모델에 청대 추출물 또는 이의 분획물을 투여한 결과 체중 변화를 나타낸 그래프이다;
DSS는 덱스트란 황산 나트륨 투여군; DSS+1은 덱스트란 황산 나트륨+청대 70% 에탄올 추출물 투여군; DSS+2는 덱스트란 황산 나트륨+청대 70% 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물 투여군; 및 DSS+3은 덱스트란 황산 나트륨+청대 70% 에탄올 추출물의 부탄올 분획물 투여군: *는 정상군과의 현저한 차이 및 †는 질환 유발군과의 현저한 차이를 나타냄, 이하 동일.
도 13은 덱스트란 황산 나트륨(DSS)으로 장염증이 유도된 모델에 청대 추출물 또는 이의 분획물을 투여한 결과 장염증의 질병활성도(DAI)가 감소함을 보여주는 그래프이다.
도 14는 덱스트란 황산 나트륨(DSS)으로 장염증이 유도된 모델에 청대 추출물 또는 이의 분획물을 투여한 결과 장 조직에서의 IL-6 발현의 억제를 나타낸 그래프이다.
도 15는 덱스트란 황산 나트륨(DSS)으로 장염증이 유도된 모델에 청대 추출물 또는 이의 분획물을 투여한 결과 장 조직에서의 IL-1b 발현의 억제를 나타낸 그래프이다.
도 16은 덱스트란 황산 나트륨(DSS)으로 장염증이 유도된 모델에 청대 추출물 또는 이의 분획물을 투여한 결과 장 조직에서의 IL-17 발현의 억제를 나타낸 그래프이다.
도 17은 덱스트란 황산 나트륨으로 장염증이 유도된 모델에 청대 70% 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 투여한 결과 대장의 길이 증가를 보여주는 도이다.
도 18은 덱스트란 황산 나트륨으로 장염증이 유도된 모델에 청대 70% 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 투여한 결과 대장의 길이 증가를 보여주는 그래프이다.
도 19는 덱스트란 황산 나트륨으로 장염증이 유도된 모델에 청대 추출물을 투여한 결과 대장 조직의 거시적 염증 점수의 억제를 나타낸 그래프이다.
도 20은 덱스트란 황산 나트륨으로 장염증이 유도된 모델에 청대 70% 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 투여한 결과 장 조직의 병리학적 세포파괴의 감소를 현미경으로 확인한 도이다.
도 21은 덱스트란 황산 나트륨으로 장염증이 유도된 모델에 청대 70% 에탄올 추출물의 에틸아세테이트 분획물을 투여한 결과 장 조직의 병리학적 세포파괴를 점수화하여 나타낸 그래프이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 더욱 상세히 설명하고자 한다. 단 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.

실시예 1: 청대 추출물 및 분획물의 제조

청대와 70% 에탄올을 교반하여 48시간 동안 추출하고, 여과하여 용매와 물을 증발시켜 연조엑스(soft extract) 형태의 청대 추출물을 제조하였다. 이후, 상기 추출물에 물을 가하고 헥산(Hexane)을 부가하고 분획하여 유기용매층과 물층을 1차 분리하였다. 상기 1차 분리된 물층에 클로르포름(CHCl3)을 다시 부가하고 분획하여 유기용매층과 물층을 2차 분리하였다. 상기 2차 분리된 물층에 에틸아세테이트(EtOAc)를 다시 부가하여 유기용매층과 물층을 3차 분리하였다. 상기 3차 분리된 물층에 부탄올(BuOH)을 다시 부가하여 유기용매층과 물층을 4차 분리하여 각각의 헥산 분획물, 클로르포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물을 회수하였다. 이하의 실험예들에서는 하기 표 1과 같이 청대 70% 에탄올 추출물, 이의 에틸아세테이트 분획물 및 이의 부탄올 분획물을 시료로 사용하였다.

[표 1]

실험예 1: 청대 추출물의 대장염 장질환 예방 및 치료 실험

대장염 장질환 동물모델을 사용하여 청대 추출물의 염증성 장질환의 예방 및 치료 효과를 확인하였다. 실험에 사용된 대장염 장질환 동물모델은 장질환의 예방 및 치료효과를 확인하기 위해 사용되는 것으로 알려진 IL-10 넉아웃(knock out) 마우스에 피록시캄(piroxicam)을 처리하여 제조하였다(Holgersen et al, J Crohns Colitis, 2014;8;147-60; Hale et al. Inflamm Bowel Dis 2005;11:1060-9).

구체적으로, IL-10이 결핍된 실험용 생쥐에 피록시캄을 혼합한 사료를 섭취시키면서 상기 실시예 1에 따라 제조된 표 1의 청대 추출물 또는 이의 분획물을 13일 동안 1일 1회 경구로 25 mg만큼 각각 투여하였다. 13일의 실험 기간 동안 매일 체중을 측정하였다. 실험 14일 경과 후 실험용 생쥐를 희생하여 대장의 길이를 측정하고 조직을 얻어 ELISA 키트를 사용하여 면역 활성 인자를 측정하였다.

체중 비교 결과, 정상군의 경우 일정 수준의 체중을 유지하였으나, 피록시캄 투여군의 경우 체중이 급격히 감소하였다. 그러나, 청대 추출물 및 이의 분획물 투여군의 경우 피록시캄 단독 투여군에 비해 체중 감소율이 낮음을 확인하였다(도 1).

또한, 대장의 길이 변화를 확인한 결과, 대장염 장질환이 유도된 피록시캄 투여군의 경우 대장의 길이가 감소하였다. 그러나, 청대 추출물 및 이의 분획물 투여군의 경우 피록시캄 단독 투여군에 비해 대장의 길이가 증가하였고, 정상군 수준으로 회복하였음을 확인하였다(도 2 및 도 3).

나아가, 대장염 질환과 관련된 면역 인자의 수준을 비교한 결과, 대장염 장질환이 유도된 피록시캄 투여군의 경우 MPO, IL-6, IL-1b 및 IL-17의 수준이 증가하였다. 그러나, 청대 추출물 및 이의 분획물 투여군의 경우 피록시캄 단독 투여군에 비해 상기 면역 인자들의 수준이 감소하였다(도 4 내지 도 7).

한편, 청대 추출물의 에틸아세테이트 분획물 투여군에 대해서는 13일의 실험 기간 동안 체중, 변의 형태 및 혈변을 관찰하여 대장염 장질환의 질병활성도(Disease activity index, DAI)를 표 2의 방법에 따라 측정하였다.

[표 2]

또한, 실험 14일 경과 후 실험용 생쥐를 희생한 뒤 대장을 분리하여 현미경을 이용하여 대장의 조직학적인 손상 유무를 확인하였고, 표 3의 방법에 따라 대장의 손상 점수를 부여하였다.

[표 3]

실험 결과, 대장염 모델에서 염증을 가장 잘 반영하는 것으로 보고된 바 있는 장질환의 질병활성도(DAI)가 대장염이 유도된 피록시캄 투여군에 비해 유의적으로 개선됨을 확인하였다(도 8).

실험 기간 중 동물모델의 생존률을 조사한 결과, 에틸아세테이트 분획물 투여군은 대장염이 유도된 피록시캄 투여군에 비해 생존률이 높게 나타남을 확인하였다(도 9). 또한, 에틸아세테이트 분획물 투여군에서 대장의 손상 정도가 감소하여 병리학적으로 대장염을 완화시킨 것을 확인하였다(도 10 및 도 11).

상기 실험들을 통해 청대 추출물 및 이의 분획물은 독성을 나타내지 않으면서 대장염 장질환의 예방 및 치료에 우수한 효과가 있음을 확인하였다.

실험예 2: 청대 추출물의 장염증 예방 및 치료 실험

장질환의 예방 및 치료효과를 확인하기 위해 사용되는 것으로 알려진 덱스트란 황산 나트륨(Dextran sodium sulfate)으로 유도된 장염증 동물모델을 사용하여 청대 추출물의 염증성 장질환의 예방 및 치료 효과를 확인하였다(Mizoguchi et al., Prog Mol Biol Transl Sci, 2012:105;263-320; Yan et al., PLos One, 2009: 4;e6073).

구체적으로, 실험용 생쥐(C57BL6)에 상기 실시예 1에 따라 제조된 표 1의 청대 추출물 또는 이의 분획물을 각 그룹에 맞게 1일 1회 경구로 투여하였다. 시료 투여 2일 후 식수 또는 4%의 덱스트란 황산 나트륨이 포함된 식수를 7일 동안 공급하였고, 실험 기간 동안 매일 체중, 변의 형태 및 혈변을 관찰하여 장염증의 질병활성도(Disease activity index, DAI)를 실험예 1과 동일하게 상기 표 2의 기준에 따라 측정하였다. 그리고, 실험 8일 경과 후 실험용 생쥐를 희생하여 대장 조직을 얻어 ELISA 키트를 사용하여 면역 활성 인자를 측정하였다.

실험 결과, 정상군의 경우 서서히 체중이 증가하는데 반해 덱스트란 황산 나트륨 투여군의 경우 체중감소가 급격히 심해졌으나, 청대 추출물 또는 이의 분획물 투여군의 경우 체중 감소폭이 이에 비해 유의하게 감소함을 확인하였다(도 12).

또한, 덱스트란 황산 나트륨 투여군은 장염증의 질병활성도(DAI)가 증가하여 염증성 장질환 모델의 특성이 나타나는 반면, 청대 추출물 및 이의 분획물 투여군은 덱스트란 황산 나트륨 투여군에 비해 질병활성도가 감소함을 확인하였다(도 13).

나아가, 염증성 장질환과 관련된 면역 인자의 수준을 비교한 결과, 염증성 장질환이 유도된 덱스트란 황산 나트륨 투여군의 경우 IL-6, IL-1b 및 IL-17의 수준이 증가하였다. 그러나, 청대 추출물 및 이의 분획물 투여군의 경우 덱스트란 황산 나트륨 단독 투여군에 비해 상기 면역 인자들의 수준이 감소하였다(도 14 내지 도 16).

한편, 청대 추출물의 에틸아세테이트 분획물 투여군의 경우, 농도를 달리하여 투여한 뒤 실험 8일 경과 후 실험용 생쥐를 희생하여 대장의 길이를 측정하였고, 직장과 맹장의 거시적(현미경을 사용하지 않고 장점막 표면을 보고 판단하는 방법) 염증 점수를 표 4의 기준에 따라 측정하였다. 또한, 현미경을 이용하여 대장의 조직학적인 손상 유무를 확인하였고 표 5의 방법에 따라 점수를 측정하였다.

[표 4]

[표 5]

실험 결과, 덱스트란 황산 나트륨 투여군은 정상군에 비해 대장의 길이가 유의적으로 감소한 반면, 에틸아세테이트 분획물 투여군은 덱스트란 황산 나트륨 투여군에 비해 대장의 길이가 유의적으로 증가함을 확인하였다(도 17 및 도 18). 또한, 덱스트란 황산 나트륨 투여군은 조직학적 염증 점수가 증가하여 염증성 장질환 모델의 특성이 나타나는 반면, 에틸아세테이트 분획물 투여군은 덱스트란 황산 나트륨 투여군에 비해 조직학적 염증 점수가 감소함을 확인하였다(도 19). 또한, 에틸아세테이트 분획물 투여군에서 대장의 손상 정도가 감소하여 병리학적으로 대장염을 완화시킨 것을 확인하였다(도 20 및 도 21).

상기 실험들을 통해 청대 추출물 및 이의 분획물은 독성을 나타내지 않으면서 염증성 장질환의 예방 및 치료에 우수한 효과가 있음을 확인하였다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다.

따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (8)

1. 청대 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 청대 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출하는 것인, 염증성 장질환의 약학적 조성물.
3. 제2항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올, 메탄올 또는 부탄올인 것인, 염증성 장질환의 약학적 조성물.
4. 제3항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올인 것인, 염증성 장질환의 약학적 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 분획물은 유기용매 분획물인 것인, 염증성 장질환의 약학적 조성물.
6. 제4항에 있어서, 상기 유기용매는 클로로포름, 헥산, 에틸 아세테이트 및 부탄올로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것인, 염증성 장질환의 약학적 조성물.
7. 제1항에 있어서, 상기 분획물은 헥산, 클로르포름, 에틸아세테이트, 부탄올로 순차적으로 분획하여 얻은 헥산 분회물, 클로르포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물 또는 부탄올 분획물인 것인, 염증성 장질환의 약학적 조성물.
8. 청대 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품.

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