KR20200044793A - Aav의 전달을 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 아데노-관련 바이러스(AAV) 입자의 제조, 제작, 제제화 및 치료적 사용을 위한 조성물 및 방법을 제공한다.

Description

AAV의 전달을 위한 조성물 및 방법

관련 출원에 대한 참조

본 출원은 "Compositions and methods for delivery of AAV across the blood brain barrier" 표제의 2017년 8월 3일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/540,776호, "Compositions and methods for delivery of AAV" 표제의 2017년 9월 29일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/565,264호, 및 "Compositions and methods for delivery of AAV" 표제의 2017년 10월 16일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/572,706호의 이익을 주장하고; 이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용된다.

서열 목록에 대한 참조

본 출원은 전자 양식의 서열 목록과 함께 제출되고 있다. 상기 서열 목록은 2018년 8월 3일자로 작성되고 크기가 6,728,739 바이트인 20571050PCTSL.txt 명칭의 파일로서 제공된다. 상기 전자 양식의 서열 목록 내 정보는 이의 전문이 본원에 참조로 인용된다.

본 발명의 분야

본 발명은 개선된 생체분포를 위한 아데노-관련 바이러스 캡시드의 설계, 제조, 생산, 사용 및/또는 제제화를 위한 조성물, 방법 및 프로세스에 관한 것이다.

아데노-관련 바이러스(AAV) 벡터는 치료 유전자 이동을 위한 유망한 후보이며 임상 시험에서 안전하고 효과적인 것으로 입증되었다.

신체의 일부 시스템으로 AAV를 전달하는 것은 특히 어려운 것으로 입증되었으며, 충분한 수준의 유전자 이동을 위한 침습 수술이 필요하다. 일부 신체 시스템의 경우, 정맥내 전달은, 부분적으로 세포 내로의 비효율적인 형질도입으로 인해, 유전자 이동을 제한하였다. 정맥내 전달에 의해 투여될 수 있지만 다수의 질환을 치료하는데 중요한 영역을 효율적으로 표적화할 수 있는 AAV 벡터에 대한 기술이 여전히 필요하다.

전달이 어려운 시스템의 한 예는 중추 신경계이다. 중추 신경계(CNS) 영역으로 AAV의 전달은 특히 어려운 것으로 입증되었으며, 충분한 수준의 유전자 이동을위한 침습 수술이 필요하다(참조: 예를 들어, Bevan et al. Mol Ther. 2011 Nov; 19(11): 1971-1980). 정맥내 전달은 역사적으로, 어느 정도는 혈액 뇌 장벽(BBB)의 존재로 인해, CNS로의 유전자 이동을 제한하였다. 정맥내 전달에 의해 투여될 수 있지만 다수의 CNS 질환을 치료하는데 중요한 CNS의 표적 영역 및 혈액 뇌 장벽을 효율적으로 관통할 수 있는 AAV 벡터에 대한 기술이 여전히 필요하다.

전달이 어려운 시스템의 또 다른 예는 심혈관계이다. 심혈관계로 AAV의 전달은 특히 어려운 것으로 입증되었으며, 충분한 수준의 유전자 이동을 위한 침습 수술이 필요하다. 정맥내 전달은 역사적으로, 어느 정도는 심근 세포로의 비효율적인 형질도입으로 인해, 심혈관계로의 유전자 이동을 제한하였다. 정맥내 전달에 의해 투여될 수 있지만 다수의 질환을 치료하는데 중요한 심혈관계 영역을 효율적으로 표적화할 수 있는 AAV 벡터에 대한 기술이 여전히 필요하다.

본 발명은 정맥내 전달 후 CNS 조직의 효율적인 형질도입을 허용하는 조작된 캡시드 단백질을 갖는 신규한 AAV 입자를 제공함으로써 이러한 요구를 해결한다. 또한, 이들 AAV 입자의 바이러스 게놈은 임의의 수의 CNS 질환의 필요에 맞게 변경되어 혈액 뇌 장벽을 관통하고 CNS 조직을 표적화하기 위한 플랫폼 캡시드를 제공할 수 있다.

본 발명은 캡시드 및 바이러스 게놈을 포함하는 아데노-관련 바이러스(AAV) 입자를 제공한다.

AAV 입자는, 이에 제한되지는 않지만, VOY101, VOY201, AAVPHP.B (PHP.B), AAVPHP.A (PHP.A), AAVG2B-26, AAVG2B-13, AAVTH1.1-32, AAVTH1.1-35, AAVPHP.B2 (PHP.B2), AAVPHP.B3 (PHP.B3), AAVPHP.N/PHP.B-DGT, AAVPHP.B-EST, AAVPHP.B-GGT, AAVPHP.B-ATP, AAVPHP.B-ATT-T, AAVPHP.B-DGT-T, AAVPHP.B-GGT-T, AAVPHP.B-SGS, AAVPHP.B-AQP, AAVPHP.B-QQP, AAVPHP.B-SNP(3), AAVPHP.B-SNP, AAVPHP.B-QGT, AAVPHP.B-NQT, AAVPHP.B-EGS, AAVPHP.B-SGN, AAVPHP.B-EGT, AAVPHP.B-DST, AAVPHP.B-DST, AAVPHP.B-STP, AAVPHP.B-PQP, AAVPHP.B-SQP, AAVPHP.B-QLP, AAVPHP.B-TMP, AAVPHP.B-TTP, AAVPHP.S/G2A12, AAVG2A15/G2A3 (G2A3), AAVG2B4 (G2B4), AAVG2B5 (G2B5), PHP.S, AAV1, AAV2, AAV2G9, AAV3, AAV3a, AAV3b, AAV3-3, AAV4, AAV4-4, AAV5, AAV6, AAV6.1, AAV6.2, AAV6.1.2, AAV7, AAV7.2, AAV8, AAV9, AAV9.11, AAV9.13, AAV9.16, AAV9.24, AAV9.45, AAV9.47, AAV9.61, AAV9.68, AAV9.84, AAV9.9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV16.3, AAV24.1, AAV27.3, AAV42.12, AAV42-1b, AAV42-2, AAV42-3a, AAV42-3b, AAV42-4, AAV42-5a, AAV42-5b, AAV42-6b, AAV42-8, AAV42-10, AAV42-11, AAV42-12, AAV42-13, AAV42-15, AAV42-aa, AAV43-1, AAV43-12, AAV43-20, AAV43-21, AAV43-23, AAV43-25, AAV43-5, AAV44.1, AAV44.2, AAV44.5, AAV223.1, AAV223.2, AAV223.4, AAV223.5, AAV223.6, AAV223.7, AAV1-7/rh.48, AAV1-8/rh.49, AAV2-15/rh.62, AAV2-3/rh.61, AAV2-4/rh.50, AAV2-5/rh.51, AAV3.1/hu.6, AAV3.1/hu.9, AAV3-9/rh.52, AAV3-11/rh.53, AAV4-8/r11.64, AAV4-9/rh.54, AAV4-19/rh.55, AAV5-3/rh.57, AAV5-22/rh.58, AAV7.3/hu.7, AAV16.8/hu.10, AAV16.12/hu.11, AAV29.3/bb.1, AAV29.5/bb.2, AAV106.1/hu.37, AAV114.3/hu.40, AAV127.2/hu.41, AAV127.5/hu.42, AAV128.3/hu.44, AAV130.4/hu.48, AAV145.1/hu.53, AAV145.5/hu.54, AAV145.6/hu.55, AAV161.10/hu.60, AAV161.6/hu.61, AAV33.12/hu.17, AAV33.4/hu.15, AAV33.8/hu.16, AAV52/hu.19, AAV52.1/hu.20, AAV58.2/hu.25, AAVA3.3, AAVA3.4, AAVA3.5, AAVA3.7, AAVC1, AAVC2, AAVC5, AAV-DJ, AAV-DJ8, AAVF3, AAVF5, AAVH2, AAVrh.72, AAVhu.8, AAVrh.68, AAVrh.70, AAVpi.1, AAVpi.3, AAVpi.2, AAVrh.60, AAVrh.44, AAVrh.65, AAVrh.55, AAVrh.47, AAVrh.69, AAVrh.45, AAVrh.59, AAVhu.12, AAVH6, AAVLK03, AAVH-1/hu.1, AAVH-5/hu.3, AAVLG-10/rh.40, AAVLG-4/rh.38, AAVLG-9/hu.39, AAVN721-8/rh.43, AAVCh.5, AAVCh.5R1, AAVcy.2, AAVcy.3, AAVcy.4, AAVcy.5, AAVCy.5R1, AAVCy.5R2, AAVCy.5R3, AAVCy.5R4, AAVcy.6, AAVhu.1, AAVhu.2, AAVhu.3, AAVhu.4, AAVhu.5, AAVhu.6, AAVhu.7, AAVhu.9, AAVhu.10, AAVhu.11, AAVhu.13, AAVhu.15, AAVhu.16, AAVhu.17, AAVhu.18, AAVhu.20, AAVhu.21, AAVhu.22, AAVhu.23.2, AAVhu.24, AAVhu.25, AAVhu.27, AAVhu.28, AAVhu.29, AAVhu.29R, AAVhu.31, AAVhu.32, AAVhu.34, AAVhu.35, AAVhu.37, AAVhu.39, AAVhu.40, AAVhu.41, AAVhu.42, AAVhu.43, AAVhu.44, AAVhu.44R1, AAVhu.44R2, AAVhu.44R3, AAVhu.45, AAVhu.46, AAVhu.47, AAVhu.48, AAVhu.48R1, AAVhu.48R2, AAVhu.48R3, AAVhu.49, AAVhu.51, AAVhu.52, AAVhu.54, AAVhu.55, AAVhu.56, AAVhu.57, AAVhu.58, AAVhu.60, AAVhu.61, AAVhu.63, AAVhu.64, AAVhu.66, AAVhu.67, AAVhu.14/9, AAVhu.t 19, AAVrh.2, AAVrh.2R, AAVrh.8, AAVrh.8R, AAVrh.10, AAVrh.12, AAVrh.13, AAVrh.13R, AAVrh.14, AAVrh.17, AAVrh.18, AAVrh.19, AAVrh.20, AAVrh.21, AAVrh.22, AAVrh.23, AAVrh.24, AAVrh.25, AAVrh.31, AAVrh.32, AAVrh.33, AAVrh.34, AAVrh.35, AAVrh.36, AAVrh.37, AAVrh.37R2, AAVrh.38, AAVrh.39, AAVrh.40, AAVrh.46, AAVrh.48, AAVrh.48.1, AAVrh.48.1.2, AAVrh.48.2, AAVrh.49, AAVrh.51, AAVrh.52, AAVrh.53, AAVrh.54, AAVrh.56, AAVrh.57, AAVrh.58, AAVrh.61, AAVrh.64, AAVrh.64R1, AAVrh.64R2, AAVrh.67, AAVrh.73, AAVrh.74, AAVrh8R, AAVrh8R A586R 돌연변이체, AAVrh8R R533A 돌연변이체, AAAV, BAAV, 염소 AAV, 소 AAV, AAVhE1.1, AAVhEr1.5, AAVhER1.14, AAVhEr1.8, AAVhEr1.16, AAVhEr1.18, AAVhEr1.35, AAVhEr1.7, AAVhEr1.36, AAVhEr2.29, AAVhEr2.4, AAVhEr2.16, AAVhEr2.30, AAVhEr2.31, AAVhEr2.36, AAVhER1.23, AAVhEr3.1, AAV2.5T, AAV-PAEC, AAV-LK01, AAV-LK02, AAV-LK03, AAV-LK04, AAV-LK05, AAV-LK06, AAV-LK07, AAV-LK08, AAV-LK09, AAV-LK10, AAV-LK11, AAV-LK12, AAV-LK13, AAV-LK14, AAV-LK15, AAV-LK16, AAV-LK17, AAV-LK18, AAV-LK19, AAV-PAEC2, AAV-PAEC4, AAV-PAEC6, AAV-PAEC7, AAV-PAEC8, AAV-PAEC11, AAV-PAEC12, AAV-2-프리(pre)-miRNA-101, AAV-8h, AAV-8b, AAV-h, AAV-b, AAV SM 10-2, AAV 셔플 100-1, AAV 셔플 100-3, AAV 셔플 100-7, AAV 셔플 10-2, AAV 셔플 10-6, AAV 셔플 10-8, AAV 셔플 100-2, AAV SM 10-1, AAV SM 10-8, AAV SM 100-3, AAV SM 100-10, BNP61 AAV, BNP62 AAV, BNP63 AAV, AAVrh.50, AAVrh.43, AAVrh.62, AAVrh.48, AAVhu.19, AAVhu.11, AAVhu.53, AAV4-8/rh.64, AAVLG-9/hu.39, AAV54.5/hu.23, AAV54.2/hu.22, AAV54.7/hu.24, AAV54.1/hu.21, AAV54.4R/hu.27, AAV46.2/hu.28, AAV46.6/hu.29, AAV128.1/hu.43, 진성 유형(true type) AAV (ttAAV), UPENN AAV 10, 일본 AAV 10 혈청형, AAV CBr-7.1, AAV CBr-7.10, AAV CBr-7.2, AAV CBr-7.3, AAV CBr-7.4, AAV CBr-7.5, AAV CBr-7.7, AAV CBr-7.8, AAV CBr-B7.3, AAV CBr-B7.4, AAV CBr-E1, AAV CBr-E2, AAV CBr-E3, AAV CBr-E4, AAV CBr-E5, AAV CBr-e5, AAV CBr-E6, AAV CBr-E7, AAV CBr-E8, AAV CHt-1, AAV CHt-2, AAV CHt-3, AAV CHt-6.1, AAV CHt-6.10, AAV CHt-6.5, AAV CHt-6.6, AAV CHt-6.7, AAV CHt-6.8, AAV CHt-P1, AAV CHt-P2, AAV CHt-P5, AAV CHt-P6, AAV CHt-P8, AAV CHt-P9, AAV CKd-1, AAV CKd-10, AAV CKd-2, AAV CKd-3, AAV CKd-4, AAV CKd-6, AAV CKd-7, AAV CKd-8, AAV CKd-B1, AAV CKd-B2, AAV CKd-B3, AAV CKd-B4, AAV CKd-B5, AAV CKd-B6, AAV CKd-B7, AAV CKd-B8, AAV CKd-H1, AAV CKd-H2, AAV CKd-H3, AAV CKd-H4, AAV CKd-H5, AAV CKd-H6, AAV CKd-N3, AAV CKd-N4, AAV CKd-N9, AAV CLg-F1, AAV CLg-F2, AAV CLg-F3, AAV CLg-F4, AAV CLg-F5, AAV CLg-F6, AAV CLg-F7, AAV CLg-F8, AAV CLv-1, AAV CLv1-1, AAV Clv1-10, AAV CLv1-2, AAV CLv-12, AAV CLv1-3, AAV CLv-13, AAV CLv1-4, AAV Clv1-7, AAV Clv1-8, AAV Clv1-9, AAV CLv-2, AAV CLv-3, AAV CLv-4, AAV CLv-6, AAV CLv-8, AAV CLv-D1, AAV CLv-D2, AAV CLv-D3, AAV CLv-D4, AAV CLv-D5, AAV CLv-D6, AAV CLv-D7, AAV CLv-D8, AAV CLv-E1, AAV CLv-K1, AAV CLv-K3, AAV CLv-K6, AAV CLv-L4, AAV CLv-L5, AAV CLv-L6, AAV CLv-M1, AAV CLv-M11, AAV CLv-M2, AAV CLv-M5, AAV CLv-M6, AAV CLv-M7, AAV CLv-M8, AAV CLv-M9, AAV CLv-R1, AAV CLv-R2, AAV CLv-R3, AAV CLv-R4, AAV CLv-R5, AAV CLv-R6, AAV CLv-R7, AAV CLv-R8, AAV CLv-R9, AAV CSp-1, AAV CSp-10, AAV CSp-11, AAV CSp-2, AAV CSp-3, AAV CSp-4, AAV CSp-6, AAV CSp-7, AAV CSp-8, AAV CSp-8.10, AAV CSp-8.2, AAV CSp-8.4, AAV CSp-8.5, AAV CSp-8.6, AAV CSp-8.7, AAV CSp-8.8, AAV CSp-8.9, AAV CSp-9, AAV.hu.48R3, AAV.VR-355, AAV3B, AAV4, AAV5, AAVF1/HSC1, AAVF11/HSC11, AAVF12/HSC12, AAVF13/HSC13, AAVF14/HSC14, AAVF15/HSC15, AAVF16/HSC16, AAVF17/HSC17, AAVF2/HSC2, AAVF3/HSC3, AAVF4/HSC4, AAVF5/HSC5, AAVF6/HSC6, AAVF7/HSC7, AAVF8/HSC8 및/또는 AAVF9/HSC9 및 이들의 변이체와 같은 캡시드 또는 펩타이드 삽입물을 포함할 수 있다. 일 측면에서, AAV 입자의 캡시드는 VOY101이다. 일 측면에서, AAV 입자의 캡시드는 VOY201이다. 일 측면에서, AAV 입자는 펩타이드 삽입물을 포함하고, 펩타이드 삽입물은 AAVPHP.N이다. 일 측면에서, AAV 입자는 펩타이드 삽입물을 포함하고, 펩타이드 삽입물은 AAVPHP.B이다. 일 측면에서, AAV 입자는 펩타이드 삽입물을 포함하고, 펩타이드 삽입물은 AAVPHP.A이다. 일 측면에서, AAV 입자는 펩타이드 삽입물을 포함하고, 펩타이드 삽입물은 AAVPHP.S이다.

일 측면에서, AAV 입자는 2개의 역위 말단 반복부(ITR) 사이의 핵산 서열 위치를 포함하는 바이러스 게놈을 포함한다.

일 측면에서, 바이러스 게놈은 AAV 입자의 전달시 심근 세포를 형질도입시킨다. 전달은, 이에 제한되지는 않지만, 정맥내 투여 또는 경동맥내 동맥 전달과 같은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의한 것일 수 있다.

일 측면에서, 캡시드는 AAV 입자의 전달 후 혈액 뇌 장벽을 투과한다. 전달은, 이에 제한되지는 않지만, 정맥내 투여 또는 경동맥내 동맥 전달과 같은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의한 것일 수 있다.

본 발명의 AAV 입자는 투여 후 CNS 구조물을 형질도입시킬 수 있다. CNS 구조물의 비제한적인 예는 뇌, 척수, 뇌간 핵, 소뇌, 대뇌, 운동 피질, 미상핵, 시상, 시상하부, 경추 척수, 흉추 척수, 요추 척수, 선조체, 흑질, 해마, 편도체 및/또는 대뇌 피질을 포함한다.

일 측면에서, AAV 입자는, 발현될 때, 세포 내 관심 유전자(예를 들어, SOD1, HTT, APOE, 및 MAPT)의 발현을 저해하거나 억제하는 핵산 서열을 포함하는 바이러스 게놈을 포함한다. 핵산 서열은 독립적으로 길이가 30개 이하의 뉴클레오타이드일 수 있는 센스 가닥 서열 및 안티센스 가닥 서열을 포함하고, 센스 및/또는 안티센스 가닥은 적어도 1개 또는 적어도 2개의 뉴클레오타이드의 3' 돌출부(overhang)를 포함할 수 있다. 센스 서열 및 안티센스 가닥 서열은 적어도 4개의 뉴클레오타이드 길이(예를 들어, 적어도 17개의 뉴클레오타이드 길이, 19개 내지 21개의 뉴클레오타이드 길이, 또는 19개의 뉴클레오타이드 길이)의 상보성 영역을 공유할 수 있다. 안티센스 가닥은 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 또는 98% 초과, 또는 99% 초과의 비율로 AAV 입자로부터 절제될 수 있다. 안티센스 가닥은 센스 가닥의 절제보다 (예를 들어, 2배, 5배, 10배 또는 10배 이상) 큰 비율로 AAV 입자로부터 절제될 수 있다.

AAV 입자를 포함하는 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)이 본원에 제공된다. AAV 입자는 관심 단백질(예를 들어, 항체, AADC, APOE2, 프라탁신(Frataxin), ATP2A2 및/또는 S100A1)을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 바이러스 게놈을 포함할 수 있다. AAV 입자는, 발현될 때, 세포 내 관심 유전자(예를 들어, SOD1, HTT, APOE 및/또는 MAPT)의 발현을 저해하거나 억제하는 핵산 서열을 포함하는 바이러스 게놈을 포함할 수 있다.

AAV 입자를 사용하는 방법이 본원에 제공된다.

일 측면에서, 세포(예를 들어, 포유동물 세포, 또는 CNS의 포유동물 세포, 또는 심근 세포) 내 표적 유전자의 발현을 억제하는 방법이 제공된다.

일 측면에서, 포유동물 세포(예를 들어, CNS의 포유동물 세포, 또는 심근 세포)와 같은 세포에서 표적 유전자의 발현을 증가시키는 방법이 제공된다.

일 측면에서, 본원에 기재된 AAV 입자를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 투여함으로써 대상체에서 신경계 질환을 치료 및/또는 개선하는 방법이 제공된다. 투여는 정맥내 또는 경동맥내 동맥 전달에 의한 것일 수 있다. 상기 방법은 관심 단백질(예를 들어, 항체, AADC, APOE2 및/또는 프라탁신)의 발현을 증가시키는데 사용될 수 있다. 상기 방법은 관심 유전자(예를 들어, SOD1, HTT, APOE 및/또는 MAPT)의 발현량을 감소시키는데 사용될 수 있다.

일 측면에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 투여에 의해 대상체에서 관심 단백질 또는 유전자의 수준을 변경시키는 방법이 제공된다. 투여는 정맥내 또는 경동맥내 동맥 전달에 의한 것일 수 있다. 상기 방법은 관심 단백질(예를 들어, 항체, AADC, APOE2, 프라탁신, ATP2A2 및/또는 S100A1)의 발현을 증가시키는데 사용될 수 있다. 상기 방법은 관심 유전자(예를 들어, SOD1, HTT, APOE 및/또는 MAPT)의 발현량을 감소시키는데 사용될 수 있다.

본원에 기재된 AAV 입자의 조성물을 투여함으로써 심혈관 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 심혈관 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 전달은, 이에 제한되지는 않지만, 정맥내 투여 또는 경동맥내 동맥 전달과 같은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의한 것일 수 있다.

본원에 기재된 AAV 입자의 조성물을 투여함으로써 심부전 치료가 필요한 대상체에서 심부전을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 전달은, 이에 제한되지는 않지만, 정맥내 투여 또는 경동맥내 동맥 전달과 같은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의한 것일 수 있다.

본 발명의 다양한 구현예의 세부사항은 하기 설명에 기재되어 있다. 본 발명의 다른 특징, 목적 및 이점은 상세한 설명, 도면 및 청구범위로부터 명백해질 것이다. 상세한 설명에서, 단수 형태는 문맥상 달리 명백하게 지시되지 않는 한, 복수형을 또한 포함한다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 분야의 숙련가가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 모순이 있는 경우, 본 설명이 우선할 것이다.

상기 및 다른 목적, 특징 및 이점은 첨부된 도면에 도시된 바와 같이, 본 발명의 특정 구현예에 대한 다음의 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. 도면은 반드시 축척대로 도시된 것은 아니며, 대신에 본 발명의 다양한 구현예의 원리를 설명하는데 중점을 둔다.
도 1은 본 발명의 바이러스 게놈의 개략도이다.

본 발명의 하나 이상의 구현예의 세부사항은 아래의 첨부된 설명에 기재되어 있다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 임의의 재료 및 방법이 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 바람직한 물질 및 방법이 이제 설명된다. 본 발명의 다른 특징, 목적 및 이점은 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다. 상세한 설명에서, 단수 형태는 문맥상 달리 명백하게 지시되지 않는 한, 복수형을 또한 포함한다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 분야의 숙련가가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 모순이 있는 경우, 본 설명이 우선할 것이다.

I. 본 발명의 조성물

아데노 -관련 바이러스 ( AAV ) 및 AAV 입자

파르보비리다에 계열의 바이러스는 단일 가닥 DNA 게놈을 특징으로 하는 작은 비-외피보유 이십면체 캡시드 바이러스이다. 파르보비리다에 계열 바이러스는 다음의 2가지 아과로 이루어진다: 척추동물을 감염시키는 파르보바이러스아과(Parvovirinae), 및 무척추동물을 감염시키는 덴소바이러스아과(Densovirinae). 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 쉽게 조작되는, 비교적 간단한 구조로 인해, 이 바이러스 계열은 생물학적 도구로 유용하다. 바이러스의 게놈은 기능적 재조합 바이러스, 또는 표적 세포, 조직, 기관 또는 유기체로 전달될 수 있는, 목적하는 페이로드로 로딩되거나 이를 발현 또는 전달하도록 조작된 바이러스 입자의 어셈블리를 위한 최소 구성요소를 함유하도록 변형될 수 있다.

파르보바이러스 및 파르보바이러스아과 계열의 다른 구성원은 일반적으로 문헌(참조: Kenneth I. Berns, "Parvoviridae: The Viruses and Their Replication," Chapter 69 in FIELDS VIROLOGY (3d Ed. 1996), 이의 내용은 이의 전문이 참조로 인용됨)에 기재되어 있다.

인간, 영장류, 소, 개, 말 및 양을 포함하지만 이로 제한되지 않는 척추 동물 숙주에서 복제할 수 있는 아데노-관련 바이러스 (AAV)를 포함하는 데펜도바이러스(Dependovirus) 속을 포함한다.

AAV 바이러스 게놈은 길이가 대략 5,000개의 뉴클레오티드(nt)인 선형, 단일-가닥 DNA(ssDNA) 분자이다. AAV 바이러스 게놈은 페이로드 영역 및 적어도 하나의 역위 말단 반복부(ITR) 또는 ITR 영역을 포함할 수 있다. ITR은 전통적으로 비-구조 단백질(Rep 유전자에 의해 인코딩됨) 및 구조 단백질(캡시드 유전자 또는 Cap 유전자에 의해 인코딩됨)을 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 측면에 있다. 어떠한 이론으로 국한시키고자 하는 것은 아니지만, AAV 바이러스 게놈은 전형적으로 2개의 ITR 서열을 포함한다. AAV 벡터 게놈은 에너지적으로 안정한 이중 가닥 영역을 형성하는 ssDNA의 5' 및 3' 말단의 자기-상보적 말단 145nt에 의해 정의된 특징적인 T-형 헤어핀 구조를 포함한다. 이중 가닥 헤어핀 구조는 숙주 바이러스 복제 세포의 내인성 DNA 폴리머라제 복합체에 대한 프라이머로서 기능함으로써 DNA 복제 기원으로서 작용하는 것을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 다수의 기능을 포함한다.

인코딩된 이종 페이로드 이외에, AAV 입자는 임의의 자연 발생 및/또는 재조합 AAV 혈청형 뉴클레오타이드 서열 또는 변이체의 바이러스 게놈을 전체적으로 또는 부분적으로 포함할 수 있다. AAV 변이체는 일반적으로 물리적 및 기능적 등가물이고, 유사한 메커니즘에 의해 복제되고, 유사한 메커니즘에 의해 어셈블리되는 작제물을 생성하기 위해 핵산(게놈 또는 캡시드) 및 아미노산 수준(캡시드)에서 유의미한 상동성 서열을 가질 수 있다. 문헌 [Chiorini et al.,　J. Vir.　71: 6823-33(1997)]; [Srivastava et al.,　J. Vir.　45:555-64 (1983)]; [Chiorini et al.,　J. Vir.　73:1309-1319 (1999)]; [Rutledge et al.,　J. Vir.　72:309-319 (1998)]; 및 [Wu et al.,　J. Vir.　74: 8635-47 (2000)]은 그 전문이 본원에 참조로 인용된다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 복제 결함이 있어 바이러스 게놈 내에 기능적 Rep 및 Cap 단백질을 인코딩하는 서열이 결여된 재조합 AAV 바이러스 벡터이다. 이러한 결함 있는 AAV 입자는 대부분 또는 모든 모계 코딩 서열이 결여되어 있고, 본질적으로 하나 또는 2개의 AAV ITR 서열, 및 세포, 조직, 기관 또는 유기체로의 전달을 위해 관심 핵산만을 운반할 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자의 바이러스 게놈은 그 안에 인코딩된 코딩 서열의 복제, 전사 및 번역을 제공하는 적어도 하나의 제어 요소(control element)를 포함한다. 코딩 서열이 적절한 숙주 세포에서 복제, 전사 및/또는 번역될 수 있는 한, 모든 제어 요소가 항상 존재할 필요는 없다. 발현 제어 요소의 비제한적인 예는 전사 개시 및/또는 종결을 위한 서열, 프로모터 및/또는 인핸서 서열, 스플라이싱 및 폴리아데닐화 신호와 같은 효율적인 RNA 처리 신호, 세포질 mRNA를 안정화시키는 서열, 번역 효율을 향상시키는 서열(예를 들어, 코작(Kozak) 공통 서열), 단백질 안정성을 향상시키는 서열, 및/또는 단백질 처리 및/또는 분비를 향상시키는 서열을 포함한다.

본 발명에 따르면, 치료제 및/또는 진단제에 사용하기 위한 AAV 입자는 관심 핵산 페이로드 또는 카고(cargo)의 형질도입에 필요한 최소 구성요소로 증류 또는 감소된 바이러스를 포함한다. 이러한 방식으로, AAV 입자는 야생형 바이러스에서 발견되는 유해한 복제 및/또는 통합 특징 없이 특이적 전달을 위한 비히클로 조작된다.

본 발명의 AAV 입자는 재조합적으로 생성될 수 있으며, 아데노-관련 바이러스(AAV) 모 또는 기준 서열에 기초할 수 있다. 본원에 사용된 "벡터"는 본원에 기재된 핵산과 같은 이종 분자를 수송하거나, 형질도입시키거나 또는 달리 이의 운반체로서 작용하는 임의의 분자 또는 모이어티이다.

단일 가닥 AAV 바이러스 게놈(예를 들어, ssAAV)에 추가하여, 본 발명은 또한 자기-상보적 AAV(scAAV) 바이러스 게놈을 제공한다. scAAV 벡터 게놈은 이중 가닥 DNA를 형성하기 위해 함께 어닐링되는 DNA 가닥을 함유한다. 두 번째 가닥 합성을 생략함으로써, scAAV는 세포에서 신속하게 발현할 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 scAAV이다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 ssAAV이다.

위형(pseudotyped) AAV 입자와 같은 AAV 입자의 제조 및/또는 변형 방법은 당해 분야에 개시되어 있다(PCT 특허 공개 공보 WO200028004호; WO200123001호; WO2004112727호; WO 2005005610호 및 WO 2005072364호, 이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

AAV 입자는 전달 효율을 향상시키도록 변형될 수 있다. 이러한 변형된 AAV 입자는 효율적으로 패키징될 수 있고, 표적 세포를 고주파에서 최소 독성으로 성공적으로 감염시키는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서 AAV 입자의 캡시드는 US 특허 출원 공개 공보 US 20130195801호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 방법에 따라서 조작된다.

일 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드를 인코딩하는 페이로드 영역을 포함하는 AAV 입자는 포유동물 세포로 도입될 수 있다.

AAV 혈청형

본 발명의 AAV 입자는 임의의 천연 또는 재조합 AAV 혈청형을 포함하거나 이로부터 유래될 수 있다. 본 발명에 따르면, AAV 입자는 혈청형을 이용하거나 혈청형을 기초로 할 수 있거나 다음 중 어느 것으로부터 선택된 펩타이드를 포함할 수 있다: VOY101, VOY201, AAVPHP.B (PHP.B), AAVPHP.A (PHP.A), AAVG2B-26, AAVG2B-13, AAVTH1.1-32, AAVTH1.1-35, AAVPHP.B2 (PHP.B2), AAVPHP.B3 (PHP.B3), AAVPHP.N/PHP.B-DGT, AAVPHP.B-EST, AAVPHP.B-GGT, AAVPHP.B-ATP, AAVPHP.B-ATT-T, AAVPHP.B-DGT-T, AAVPHP.B-GGT-T, AAVPHP.B-SGS, AAVPHP.B-AQP, AAVPHP.B-QQP, AAVPHP.B-SNP(3), AAVPHP.B-SNP, AAVPHP.B-QGT, AAVPHP.B-NQT, AAVPHP.B-EGS, AAVPHP.B-SGN, AAVPHP.B-EGT, AAVPHP.B-DST, AAVPHP.B-DST, AAVPHP.B-STP, AAVPHP.B-PQP, AAVPHP.B-SQP, AAVPHP.B-QLP, AAVPHP.B-TMP, AAVPHP.B-TTP, AAVPHP.S/G2A12, AAVG2A15/G2A3 (G2A3), AAVG2B4 (G2B4), AAVG2B5 (G2B5), PHP.S, AAV1, AAV2, AAV2G9, AAV3, AAV3a, AAV3b, AAV3-3, AAV4, AAV4-4, AAV5, AAV6, AAV6.1, AAV6.2, AAV6.1.2, AAV7, AAV7.2, AAV8, AAV9, AAV9.11, AAV9.13, AAV9.16, AAV9.24, AAV9.45, AAV9.47, AAV9.61, AAV9.68, AAV9.84, AAV9.9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV16.3, AAV24.1, AAV27.3, AAV42.12, AAV42-1b, AAV42-2, AAV42-3a, AAV42-3b, AAV42-4, AAV42-5a, AAV42-5b, AAV42-6b, AAV42-8, AAV42-10, AAV42-11, AAV42-12, AAV42-13, AAV42-15, AAV42-aa, AAV43-1, AAV43-12, AAV43-20, AAV43-21, AAV43-23, AAV43-25, AAV43-5, AAV44.1, AAV44.2, AAV44.5, AAV223.1, AAV223.2, AAV223.4, AAV223.5, AAV223.6, AAV223.7, AAV1-7/rh.48, AAV1-8/rh.49, AAV2-15/rh.62, AAV2-3/rh.61, AAV2-4/rh.50, AAV2-5/rh.51, AAV3.1/hu.6, AAV3.1/hu.9, AAV3-9/rh.52, AAV3-11/rh.53, AAV4-8/r11.64, AAV4-9/rh.54, AAV4-19/rh.55, AAV5-3/rh.57, AAV5-22/rh.58, AAV7.3/hu.7, AAV16.8/hu.10, AAV16.12/hu.11, AAV29.3/bb.1, AAV29.5/bb.2, AAV106.1/hu.37, AAV114.3/hu.40, AAV127.2/hu.41, AAV127.5/hu.42, AAV128.3/hu.44, AAV130.4/hu.48, AAV145.1/hu.53, AAV145.5/hu.54, AAV145.6/hu.55, AAV161.10/hu.60, AAV161.6/hu.61, AAV33.12/hu.17, AAV33.4/hu.15, AAV33.8/hu.16, AAV52/hu.19, AAV52.1/hu.20, AAV58.2/hu.25, AAVA3.3, AAVA3.4, AAVA3.5, AAVA3.7, AAVC1, AAVC2, AAVC5, AAV-DJ, AAV-DJ8, AAVF3, AAVF5, AAVH2, AAVrh.72, AAVhu.8, AAVrh.68, AAVrh.70, AAVpi.1, AAVpi.3, AAVpi.2, AAVrh.60, AAVrh.44, AAVrh.65, AAVrh.55, AAVrh.47, AAVrh.69, AAVrh.45, AAVrh.59, AAVhu.12, AAVH6, AAVLK03, AAVH-1/hu.1, AAVH-5/hu.3, AAVLG-10/rh.40, AAVLG-4/rh.38, AAVLG-9/hu.39, AAVN721-8/rh.43, AAVCh.5, AAVCh.5R1, AAVcy.2, AAVcy.3, AAVcy.4, AAVcy.5, AAVCy.5R1, AAVCy.5R2, AAVCy.5R3, AAVCy.5R4, AAVcy.6, AAVhu.1, AAVhu.2, AAVhu.3, AAVhu.4, AAVhu.5, AAVhu.6, AAVhu.7, AAVhu.9, AAVhu.10, AAVhu.11, AAVhu.13, AAVhu.15, AAVhu.16, AAVhu.17, AAVhu.18, AAVhu.20, AAVhu.21, AAVhu.22, AAVhu.23.2, AAVhu.24, AAVhu.25, AAVhu.27, AAVhu.28, AAVhu.29, AAVhu.29R, AAVhu.31, AAVhu.32, AAVhu.34, AAVhu.35, AAVhu.37, AAVhu.39, AAVhu.40, AAVhu.41, AAVhu.42, AAVhu.43, AAVhu.44, AAVhu.44R1, AAVhu.44R2, AAVhu.44R3, AAVhu.45, AAVhu.46, AAVhu.47, AAVhu.48, AAVhu.48R1, AAVhu.48R2, AAVhu.48R3, AAVhu.49, AAVhu.51, AAVhu.52, AAVhu.54, AAVhu.55, AAVhu.56, AAVhu.57, AAVhu.58, AAVhu.60, AAVhu.61, AAVhu.63, AAVhu.64, AAVhu.66, AAVhu.67, AAVhu.14/9, AAVhu.t 19, AAVrh.2, AAVrh.2R, AAVrh.8, AAVrh.8R, AAVrh.10, AAVrh.12, AAVrh.13, AAVrh.13R, AAVrh.14, AAVrh.17, AAVrh.18, AAVrh.19, AAVrh.20, AAVrh.21, AAVrh.22, AAVrh.23, AAVrh.24, AAVrh.25, AAVrh.31, AAVrh.32, AAVrh.33, AAVrh.34, AAVrh.35, AAVrh.36, AAVrh.37, AAVrh.37R2, AAVrh.38, AAVrh.39, AAVrh.40, AAVrh.46, AAVrh.48, AAVrh.48.1, AAVrh.48.1.2, AAVrh.48.2, AAVrh.49, AAVrh.51, AAVrh.52, AAVrh.53, AAVrh.54, AAVrh.56, AAVrh.57, AAVrh.58, AAVrh.61, AAVrh.64, AAVrh.64R1, AAVrh.64R2, AAVrh.67, AAVrh.73, AAVrh.74, AAVrh8R, AAVrh8R A586R 돌연변이체, AAVrh8R R533A 돌연변이체, AAAV, BAAV, 염소 AAV, 소 AAV, AAVhE1.1, AAVhEr1.5, AAVhER1.14, AAVhEr1.8, AAVhEr1.16, AAVhEr1.18, AAVhEr1.35, AAVhEr1.7, AAVhEr1.36, AAVhEr2.29, AAVhEr2.4, AAVhEr2.16, AAVhEr2.30, AAVhEr2.31, AAVhEr2.36, AAVhER1.23, AAVhEr3.1, AAV2.5T, AAV-PAEC, AAV-LK01, AAV-LK02, AAV-LK03, AAV-LK04, AAV-LK05, AAV-LK06, AAV-LK07, AAV-LK08, AAV-LK09, AAV-LK10, AAV-LK11, AAV-LK12, AAV-LK13, AAV-LK14, AAV-LK15, AAV-LK16, AAV-LK17, AAV-LK18, AAV-LK19, AAV-PAEC2, AAV-PAEC4, AAV-PAEC6, AAV-PAEC7, AAV-PAEC8, AAV-PAEC11, AAV-PAEC12, AAV-2-프리-miRNA-101, AAV-8h, AAV-8b, AAV-h, AAV-b, AAV SM 10-2, AAV 셔플 100-1, AAV 셔플 100-3, AAV 셔플 100-7, AAV 셔플 10-2, AAV 셔플 10-6, AAV 셔플 10-8, AAV 셔플 100-2, AAV SM 10-1, AAV SM 10-8, AAV SM 100-3, AAV SM 100-10, BNP61 AAV, BNP62 AAV, BNP63 AAV, AAVrh.50, AAVrh.43, AAVrh.62, AAVrh.48, AAVhu.19, AAVhu.11, AAVhu.53, AAV4-8/rh.64, AAVLG-9/hu.39, AAV54.5/hu.23, AAV54.2/hu.22, AAV54.7/hu.24, AAV54.1/hu.21, AAV54.4R/hu.27, AAV46.2/hu.28, AAV46.6/hu.29, AAV128.1/hu.43, 진성 유형 AAV (ttAAV), UPENN AAV 10, 일본 AAV 10 혈청형, AAV CBr-7.1, AAV CBr-7.10, AAV CBr-7.2, AAV CBr-7.3, AAV CBr-7.4, AAV CBr-7.5, AAV CBr-7.7, AAV CBr-7.8, AAV CBr-B7.3, AAV CBr-B7.4, AAV CBr-E1, AAV CBr-E2, AAV CBr-E3, AAV CBr-E4, AAV CBr-E5, AAV CBr-e5, AAV CBr-E6, AAV CBr-E7, AAV CBr-E8, AAV CHt-1, AAV CHt-2, AAV CHt-3, AAV CHt-6.1, AAV CHt-6.10, AAV CHt-6.5, AAV CHt-6.6, AAV CHt-6.7, AAV CHt-6.8, AAV CHt-P1, AAV CHt-P2, AAV CHt-P5, AAV CHt-P6, AAV CHt-P8, AAV CHt-P9, AAV CKd-1, AAV CKd-10, AAV CKd-2, AAV CKd-3, AAV CKd-4, AAV CKd-6, AAV CKd-7, AAV CKd-8, AAV CKd-B1, AAV CKd-B2, AAV CKd-B3, AAV CKd-B4, AAV CKd-B5, AAV CKd-B6, AAV CKd-B7, AAV CKd-B8, AAV CKd-H1, AAV CKd-H2, AAV CKd-H3, AAV CKd-H4, AAV CKd-H5, AAV CKd-H6, AAV CKd-N3, AAV CKd-N4, AAV CKd-N9, AAV CLg-F1, AAV CLg-F2, AAV CLg-F3, AAV CLg-F4, AAV CLg-F5, AAV CLg-F6, AAV CLg-F7, AAV CLg-F8, AAV CLv-1, AAV CLv1-1, AAV Clv1-10, AAV CLv1-2, AAV CLv-12, AAV CLv1-3, AAV CLv-13, AAV CLv1-4, AAV Clv1-7, AAV Clv1-8, AAV Clv1-9, AAV CLv-2, AAV CLv-3, AAV CLv-4, AAV CLv-6, AAV CLv-8, AAV CLv-D1, AAV CLv-D2, AAV CLv-D3, AAV CLv-D4, AAV CLv-D5, AAV CLv-D6, AAV CLv-D7, AAV CLv-D8, AAV CLv-E1, AAV CLv-K1, AAV CLv-K3, AAV CLv-K6, AAV CLv-L4, AAV CLv-L5, AAV CLv-L6, AAV CLv-M1, AAV CLv-M11, AAV CLv-M2, AAV CLv-M5, AAV CLv-M6, AAV CLv-M7, AAV CLv-M8, AAV CLv-M9, AAV CLv-R1, AAV CLv-R2, AAV CLv-R3, AAV CLv-R4, AAV CLv-R5, AAV CLv-R6, AAV CLv-R7, AAV CLv-R8, AAV CLv-R9, AAV CSp-1, AAV CSp-10, AAV CSp-11, AAV CSp-2, AAV CSp-3, AAV CSp-4, AAV CSp-6, AAV CSp-7, AAV CSp-8, AAV CSp-8.10, AAV CSp-8.2, AAV CSp-8.4, AAV CSp-8.5, AAV CSp-8.6, AAV CSp-8.7, AAV CSp-8.8, AAV CSp-8.9, AAV CSp-9, AAV.hu.48R3, AAV.VR-355, AAV3B, AAV4, AAV5, AAVF1/HSC1, AAVF11/HSC11, AAVF12/HSC12, AAVF13/HSC13, AAVF14/HSC14, AAVF15/HSC15, AAVF16/HSC16, AAVF17/HSC17, AAVF2/HSC2, AAVF3/HSC3, AAVF4/HSC4, AAVF5/HSC5, AAVF6/HSC6, AAVF7/HSC7, AAVF8/HSC8 및/또는 AAVF9/HSC9 및 이들의 변이체.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV1(US20030138772호의 서열번호 6 및 64), AAV2(US20030138772호의 서열번호 7 및 70), AAV3(US20030138772호의 서열번호 8 및 71), AAV4(US20030138772호의 서열번호 63), AAV5(US20030138772호의 서열번호 114), AAV6(US20030138772호의 서열번호 65), AAV7(US20030138772호의 서열번호 1-3), AAV8(US20030138772호의 서열번호 4 및 95), AAV9(US20030138772호의 서열번호 5 및 100), AAV10(US20030138772호의 서열번호 117), AAV11(US20030138772호의 서열번호 118), AAV12(US20030138772호의 서열번호 119), AAVrh10(US20030138772호의 서열번호 81의 아미노산 1 내지 738), AAV16.3(US20030138772호의 서열번호 10), AAV29.3/bb.1(US20030138772호의 서열번호 11), AAV29.4(US20030138772호의 서열번호 12), AAV29.5/bb.2(US20030138772호의 서열번호 13), AAV1.3(US20030138772호의 서열번호 14), AAV13.3(US20030138772호의 서열번호 15), AAV24.1(US20030138772호의 서열번호 16), AAV27.3(US20030138772호의 서열번호 17), AAV7.2(US20030138772호의 서열번호 18), AAVC1(US20030138772호의 서열번호 19), AAVC3(US20030138772호의 서열번호 20), AAVC5(US20030138772호의 서열번호 21), AAVF1(US20030138772호의 서열번호 22), AAVF3(US20030138772호의 서열번호 23), AAVF5(US20030138772호의 서열번호 24), AAVH6(US20030138772호의 서열번호 25), AAVH2(US20030138772호의 서열번호 26), AAV42-8(US20030138772호의 서열번호 27), AAV42-15(US20030138772호의 서열번호 28), AAV42-5b(US20030138772호의 서열번호 29), AAV42-1b(US20030138772호의 서열번호 30), AAV42-13(US20030138772호의 서열번호 31), AAV42-3a(US20030138772호의 서열번호 32), AAV42-4(US20030138772호의 서열번호 33), AAV42-5a(US20030138772호의 서열번호 34), AAV42-10(US20030138772호의 서열번호 35), AAV42-3b(US20030138772호의 서열번호 36), AAV42-11(US20030138772호의 서열번호 37), AAV42-6b(US20030138772호의 서열번호 38), AAV43-1(US20030138772호의 서열번호 39), AAV43-5(US20030138772호의 서열번호 40), AAV43-12(US20030138772호의 서열번호 41), AAV43-20(US20030138772호의 서열번호 42), AAV43-21(US20030138772호의 서열번호 43), AAV43-23(US20030138772호의 서열번호 44), AAV43-25(US20030138772호의 서열번호 45), AAV44.1(US20030138772호의 서열번호 46), AAV44.5(US20030138772호의 서열번호 47), AAV223.1(US20030138772호의 서열번호 48), AAV223.2(US20030138772호의 서열번호 49), AAV223.4(US20030138772호의 서열번호 50), AAV223.5(US20030138772호의 서열번호 51), AAV223.6(US20030138772호의 서열번호 52), AAV223.7(US20030138772호의 서열번호 53), AAVA3.4(US20030138772호의 서열번호 54), AAVA3.5(US20030138772호의 서열번호 55), AAVA3.7(US20030138772호의 서열번호 56), AAVA3.3(US20030138772호의 서열번호 57), AAV42.12(US20030138772호의 서열번호 58), AAV44.2(US20030138772호의 서열번호 59), AAV42-2(US20030138772호의 서열번호 9), 또는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 출원 공개 공보 US20030138772호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV2(US20150159173호의 서열번호 7 및 23), rh20(US20150159173호의 서열번호 1), rh32/33(US20150159173호의 서열번호 2), rh39(US20150159173호의 서열번호 3, 20 및 36), rh46(US20150159173호의 서열번호 4 및 22), rh73(US20150159173호의 서열번호 5), rh74(US20150159173호의 서열번호 6), AAV6.1(US20150159173호의 서열번호 29), rh.8(US20150159173호의 서열번호 41), rh.48.1(US20150159173호의 서열번호 44), hu.44(US20150159173호의 서열번호 45), hu.29(US20150159173호의 서열번호 42), hu.48(US20150159173호의 서열번호 38), rh54(US20150159173호의 서열번호 49), AAV2(US20150159173호의 서열번호 7), cy.5(US20150159173호의 서열번호 8 및 24), rh.10(US20150159173호의 서열번호 9 및 25), rh.13(US20150159173호의 서열번호 10 및 26), AAV1(US20150159173호의 서열번호 11 및 27), AAV3(US20150159173호의 서열번호 12 및 28), AAV6(US20150159173호의 서열번호 13 및 29), AAV7(US20150159173호의 서열번호 14 및 30), AAV8(US20150159173호의 서열번호 15 및 31), hu.13(US20150159173호의 서열번호 16 및 32), hu.26(US20150159173호의 서열번호 17 및 33), hu.37(US20150159173호의 서열번호 18 및 34), hu.53(US20150159173호의 서열번호 19 및 35), rh.43(US20150159173호의 서열번호 21 및 37), rh2(US20150159173호의 서열번호 39), rh.37(US20150159173호의 서열번호 40), rh.64(US20150159173호의 서열번호 43), rh.48(US20150159173호의 서열번호 44), ch.5(US20150159173호의 서열번호 46), rh.67(US20150159173호의 서열번호 47), rh.58(US20150159173호의 서열번호 48), 또는 이에 제한되지는 않지만, Cy5R1, Cy5R2, Cy5R3, Cy5R4, rh.13R, rh.37R2, rh.2R, rh.8R, rh.48.1, rh.48.2, rh.48.1.2, hu.44R1, hu.44R2, hu.44R3, hu.29R, ch.5R1, rh64R1, rh64R2, AAV6.2, AAV6.1, AAV6.12, hu.48R1, hu.48R2, 및 hu.48R3을 포함하는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 출원 공개 공보 US20150159173호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV9(US7198951호의 서열번호 1-3), AAV2(US7198951호의 서열번호 4), AAV1(US7198951호의 서열번호 5), AAV3(US7198951호의 서열번호 6), 및 AAV8(US7198951호의 서열번호 7)과 같은 미국 특허 US 7198951호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV9.9, AAV9.11, AAV9.13, AAV9.16, AAV9.24, AAV9.45, AAV9.47, AAV9.61, AAV9.68, AAV9.84와 같은 엔 풀리체를라 등(N Pulicherla et al., Molecular Therapy 19(6):1070-1078 (2011), 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 의해 기재된 AAV9 서열의 돌연변이이거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV3B(US 6156303호의 서열번호 1 및 10), AAV6(US 6156303호의 서열번호 2, 7 및 11), AAV2(US 6156303호의 서열번호 3 및 8), AAV3A(US 6156303호의 서열번호 4 및 9), 또는 이들의 유도체와 같은 미국 특허 US 6156303호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV8(US20140359799호의 서열번호 1), AAVDJ(US20140359799호의 서열번호 2 및 3), 또는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 출원 공개 공보 US20140359799호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, 혈청형은, 그림 등(Grimm et al., Journal of Virology 82(12): 5887-5911 (2008), 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 의해 기재된 바와 같이, AAVDJ 또는 이의 변이체, 예를 들어 AAVDJ8(또는 AAV-DJ8)일 수 있다. AAVDJ8의 아미노산 서열은 헤파린 결합 도메인(HBD)을 제거하기 위해 2개 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 미국 특허 7,588,772호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에서 서열번호 1로 기재된 AAV-DJ 서열은 2개의 돌연변이를 포함할 수 있다: (1) 아미노산 587에서의 아르기닌(R; Arg)이 글루타민(Q; Gln)으로 변경된 R587Q 및 (2) 아미노산 590에서의 아르기닌(R; Arg)이 트레오닌(T; Thr)으로 변경된 R590T. 또 다른 비제한적인 예로서, 3개의 돌연변이를 포함할 수 있다: (1) 아미노산 406에서의 라이신 (K; Lys)이 아르기닌(R; Arg)으로 변경된 K406R, (2) 아미노산 587에서의 아르기닌(R; Arg)이 글루타민(Q; Gln)으로 변경된 R587Q 및 (3) 아미노산 590에서의 아르기닌(R; Arg)이 트레오닌(T; Thr)으로 변경된 R590T.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV4(WO1998011244의 서열번호 1-20)와 같은 국제 공개 공보 WO1998011244호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 AAV4의 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은 이의 전문이 본원에 참조로 인용된 국제 공개 공보 WO2014144229호에 기재된 AAV2G9를 생성하기 위한 AAV2 서열에서의 돌연변이이거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV3-3(WO2005033321호의 서열번호 217), AAV1(WO2005033321호의 서열번호 219 및 202), AAV106.1/hu.37(WO2005033321호의 서열번호 10), AAV114.3/hu.40(WO2005033321호의 서열번호 11), AAV127.2/hu.41(WO2005033321호의 서열번호6 및 8), AAV128.3/hu.44(WO2005033321호의 서열번호 81), AAV130.4/hu.48(WO2005033321호의 서열번호 78), AAV145.1/hu.53(WO2005033321호의 서열번호 176 및 177), AAV145.6/hu.56(WO2005033321호의 서열번호 168 및 192), AAV16.12/hu.11(WO2005033321호의 서열번호 153 및 57), AAV16.8/hu.10(WO2005033321호의 서열번호 156 및 56), AAV161.10/hu.60(WO2005033321호의 서열번호 170), AAV161.6/hu.61(WO2005033321호의 서열번호 174), AAV1-7/rh.48(WO2005033321호의 서열번호 32), AAV1-8/rh.49(WO2005033321호의 서열번호 103 및 25), AAV2(WO2005033321호의 서열번호 211 및 221), AAV2-15/rh.62(WO2005033321호의 서열번호 33 및 114), AAV2-3/rh.61(WO2005033321호의 서열번호 21), AAV2-4/rh.50(WO2005033321호의 서열번호 23 및 108), AAV2-5/rh.51(WO2005033321호의 서열번호 104 및 22), AAV3.1/hu.6(WO2005033321호의 서열번호 5 및 84), AAV3.1/hu.9(WO2005033321호의 서열번호 155 및 58), AAV3-11/rh.53(WO2005033321호의 서열번호 186 및 176), AAV3-3(WO2005033321호의 서열번호 200), AAV33.12/hu.17(WO2005033321호의 서열번호4), AAV33.4/hu.15(WO2005033321호의 서열번호 50), AAV33.8/hu.16(WO2005033321호의 서열번호 51), AAV3-9/rh.52(WO2005033321호의 서열번호 96 및 18), AAV4-19/rh.55(WO2005033321호의 서열번호 117), AAV4-4(WO2005033321호의 서열번호 201 및 218), AAV4-9/rh.54(WO2005033321호의 서열번호 116), AAV5(WO2005033321호의 서열번호 199 및 216), AAV52.1/hu.20(WO2005033321호의 서열번호 63), AAV52/hu.19(WO2005033321호의 서열번호 133), AAV5-22/rh.58(WO2005033321호의 서열번호 27), AAV5-3/rh.57(WO2005033321호의 서열번호 105), AAV5-3/rh.57(WO2005033321호의 서열번호 26), AAV58.2/hu.25(WO2005033321호의 서열번호 49), AAV6(WO2005033321호의 서열번호 203 및 220), AAV7(WO2005033321호의 서열번호 222 및 213), AAV7.3/hu.7(WO2005033321호의 서열번호 55), AAV8(WO2005033321호의 서열번호 223 및 214), AAVH-1/hu.1(WO2005033321호의 서열번호 46), AAVH-5/hu.3(WO2005033321호의 서열번호 44), AAVhu.1(WO2005033321호의 서열번호 144), AAVhu.10(WO2005033321호의 서열번호 156), AAVhu.11(WO2005033321호의 서열번호 153), AAVhu.12(WO2005033321 서열번호 59), AAVhu.13(WO2005033321호의 서열번호 129), AAVhu.14/AAV9(WO2005033321호의 서열번호 123 및 3), AAVhu.15(WO2005033321호의 서열번호 147), AAVhu.16(WO2005033321호의 서열번호 148), AAVhu.17(WO2005033321호의 서열번호 83), AAVhu.18(WO2005033321호의 서열번호 149), AAVhu.19(WO2005033321호의 서열번호 133), AAVhu.2(WO2005033321호의 서열번호 143), AAVhu.20(WO2005033321호의 서열번호 134), AAVhu.21(WO2005033321호의 서열번호 135), AAVhu.22(WO2005033321호의 서열번호 138), AAVhu.23.2(WO2005033321호의 서열번호 137), AAVhu.24(WO2005033321호의 서열번호 136), AAVhu.25(WO2005033321호의 서열번호 146), AAVhu.27(WO2005033321호의 서열번호 140), AAVhu.29(WO2005033321호의 서열번호 132), AAVhu.3(WO2005033321호의 서열번호 145), AAVhu.31(WO2005033321호의 서열번호 121), AAVhu.32(WO2005033321호의 서열번호 122), AAVhu.34(WO2005033321호의 서열번호 125), AAVhu.35(WO2005033321호의 서열번호 164), AAVhu.37(WO2005033321호의 서열번호 88), AAVhu.39(WO2005033321호의 서열번호 102), AAVhu.4(WO2005033321호의 서열번호 141), AAVhu.40(WO2005033321호의 서열번호 87), AAVhu.41(WO2005033321호의 서열번호 91), AAVhu.42(WO2005033321호의 서열번호 85), AAVhu.43(WO2005033321호의 서열번호 160), AAVhu.44(WO2005033321호의 서열번호 144), AAVhu.45(WO2005033321호의 서열번호 127), AAVhu.46(WO2005033321호의 서열번호 159), AAVhu.47(WO2005033321호의 서열번호 128), AAVhu.48(WO2005033321호의 서열번호 157), AAVhu.49(WO2005033321호의 서열번호 189), AAVhu.51(WO2005033321호의 서열번호 190), AAVhu.52(WO2005033321호의 서열번호 191), AAVhu.53(WO2005033321호의 서열번호 186), AAVhu.54(WO2005033321호의 서열번호 188), AAVhu.55(WO2005033321호의 서열번호 187), AAVhu.56(WO2005033321호의 서열번호 192), AAVhu.57(WO2005033321호의 서열번호 193), AAVhu.58(WO2005033321호의 서열번호 194), AAVhu.6(WO2005033321호의 서열번호 84), AAVhu.60(WO2005033321호의 서열번호 184), AAVhu.61(WO2005033321호의 서열번호 185), AAVhu.63(WO2005033321호의 서열번호 195), AAVhu.64(WO2005033321호의 서열번호 196), AAVhu.66(WO2005033321호의 서열번호 197), AAVhu.67(WO2005033321호의 서열번호 198), AAVhu.7(WO2005033321호의 서열번호 150), AAVhu.8(WO2005033321 서열번호 12), AAVhu.9(WO2005033321호의 서열번호 155), AAVLG-10/rh.40(WO2005033321호의 서열번호 14), AAVLG-4/rh.38(WO2005033321호의 서열번호 86), AAVLG-4/rh.38(WO2005033321호의 서열번호 7), AAVN721-8/rh.43(WO2005033321호의 서열번호 163), AAVN721-8/rh.43(WO2005033321호의 서열번호 43), AAVpi.1(WO2005033321 서열번호 28), AAVpi.2(WO2005033321 서열번호 30), AAVpi.3(WO2005033321 서열번호 29), AAVrh.38(WO2005033321호의 서열번호 86), AAVrh.40(WO2005033321호의 서열번호 92), AAVrh.43(WO2005033321호의 서열번호 163), AAVrh.44(WO2005033321 서열번호 34), AAVrh.45(WO2005033321 서열번호 41), AAVrh.47(WO2005033321 서열번호 38), AAVrh.48(WO2005033321호의 서열번호 115), AAVrh.49(WO2005033321호의 서열번호 103), AAVrh.50(WO2005033321호의 서열번호 108), AAVrh.51(WO2005033321호의 서열번호 104), AAVrh.52(WO2005033321호의 서열번호 96), AAVrh.53(WO2005033321호의 서열번호 97), AAVrh.55(WO2005033321 서열번호 37), AAVrh.56(WO2005033321호의 서열번호 152), AAVrh.57(WO2005033321호의 서열번호 105), AAVrh.58(WO2005033321호의 서열번호 106), AAVrh.59(WO2005033321 서열번호 42), AAVrh.60(WO2005033321 서열번호 31), AAVrh.61(WO2005033321호의 서열번호 107), AAVrh.62(WO2005033321호의 서열번호 114), AAVrh.64(WO2005033321호의 서열번호 99), AAVrh.65(WO2005033321 서열번호 35), AAVrh.68(WO2005033321 서열번호 16), AAVrh.69(WO2005033321 서열번호 39), AAVrh.70(WO2005033321 서열번호 20), AAVrh.72(WO2005033321 서열번호 9), 또는 이에 제한되지는 않지만, AAVcy.2, AAVcy.3, AAVcy.4, AAVcy.5, AAVcy.6, AAVrh.12, AAVrh.17, AAVrh.18, AAVrh.19, AAVrh.21, AAVrh.22, AAVrh.23, AAVrh.24, AAVrh.25, AAVrh.25/42 15, AAVrh.31, AAVrh.32, AAVrh.33, AAVrh.34, AAVrh.35, AAVrh.36, AAVrh.37, AAVrh14를 포함하는 이들의 변이체와 같은 국제 공개 공보 WO2005033321호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다. 변이체의 비제한적인 예는 WO2005033321호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)의 서열번호 13, 15, 17, 19, 24, 36, 40, 45, 47, 48, 51-54, 60-62, 64-77, 79, 80, 82, 89, 90, 93-95, 98, 100, 101, 109-113, 118-120, 124, 126, 131, 139, 142, 151,154, 158, 161, 162, 165-183, 202, 204-212, 215, 219, 224-236을 포함한다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAVrh8R(WO2015168666호의 서열번호 9), AAVrh8R A586R 돌연변이체(WO2015168666호의 서열번호 10), AAVrh8R R533A 돌연변이체(WO2015168666호의 서열번호 11), 또는 이들의 변이체와 같은 국제 공개 공보 WO2015168666호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAVhE1.1(US9233131호의 서열번호 44), AAVhEr1.5(US9233131호의 서열번호 45), AAVhER1.14(US9233131호의 서열번호 46), AAVhEr1.8(US9233131호의 서열번호 47), AAVhEr1.16(US9233131호의 서열번호 48), AAVhEr1.18(US9233131호의 서열번호 49), AAVhEr1.35(US9233131호의 서열번호 50), AAVhEr1.7(US9233131호의 서열번호 51), AAVhEr1.36(US9233131호의 서열번호 52), AAVhEr2.29(US9233131호의 서열번호 53), AAVhEr2.4(US9233131호의 서열번호 54), AAVhEr2.16(US9233131호의 서열번호 55), AAVhEr2.30(US9233131호의 서열번호 56), AAVhEr2.31(US9233131호의 서열번호 58), AAVhEr2.36(US9233131호의 서열번호 57), AAVhER1.23(US9233131호의 서열번호 53), AAVhEr3.1(US9233131호의 서열번호 59), AAV2.5T(US9233131호의 서열번호 42), 또는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 US9233131호에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV-PAEC(US20150376607호의 서열번호 1), AAV-LK01(US20150376607호의 서열번호 2), AAV-LK02(US20150376607호의 서열번호 3), AAV-LK03(US20150376607호의 서열번호 4), AAV-LK04(US20150376607호의 서열번호 5), AAV-LK05(US20150376607호의 서열번호 6), AAV-LK06(US20150376607호의 서열번호 7), AAV-LK07(US20150376607호의 서열번호 8), AAV-LK08(US20150376607호의 서열번호 9), AAV-LK09(US20150376607호의 서열번호 10), AAV-LK10(US20150376607호의 서열번호 11), AAV-LK11(US20150376607호의 서열번호 12), AAV-LK12(US20150376607호의 서열번호 13), AAV-LK13(US20150376607호의 서열번호 14), AAV-LK14(US20150376607호의 서열번호 15), AAV-LK15(US20150376607호의 서열번호 16), AAV-LK16(US20150376607호의 서열번호 17), AAV-LK17(US20150376607호의 서열번호 18), AAV-LK18(US20150376607호의 서열번호 19), AAV-LK19(US20150376607호의 서열번호 20), AAV-PAEC2(US20150376607호의 서열번호 21), AAV-PAEC4(US20150376607호의 서열번호 22), AAV-PAEC6(US20150376607호의 서열번호 23), AAV-PAEC7(US20150376607호의 서열번호 24), AAV-PAEC8(US20150376607호의 서열번호 25), AAV-PAEC11(US20150376607호의 서열번호 26), AAV-PAEC12(US20150376607호의 서열번호 27), 또는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 출원 공개 공보 US20150376607호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV-2-프리-miRNA-101(US9163261호의 서열번호 1), 또는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 US9163261호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV-8h(US20150376240호의 서열번호 6), AAV-8b(US20150376240호의 서열번호 5), AAV-h(US20150376240호의 서열번호 2), AAV-b(US20150376240호의 서열번호 1), 또는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 출원 공개 공보 US20150376240호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV SM 10-2(US20160017295호의 서열번호 22), AAV 셔플 100-1(US20160017295호의 서열번호 23), AAV 셔플 100-3(US20160017295호의 서열번호 24), AAV 셔플 100-7(US20160017295호의 서열번호 25), AAV 셔플 10-2(US20160017295호의 서열번호 34), AAV 셔플 10-6(US20160017295호의 서열번호 35), AAV 셔플 10-8(US20160017295호의 서열번호 36), AAV 셔플 100-2(US20160017295호의 서열번호 37), AAV SM 10-1(US20160017295호의 서열번호 38), AAV SM 10-8(US20160017295호의 서열번호 39), AAV SM 100-3(US20160017295호의 서열번호 40), AAV SM 100-10(US20160017295호의 서열번호 41), 또는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 출원 공개 공보 US20160017295호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, BNP61 AAV(US20150238550호의 서열번호 1), BNP62 AAV(US20150238550호의 서열번호 3), BNP63 AAV(US20150238550호의 서열번호 4), 또는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 출원 공개 공보 US20150238550호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAVrh.50(US20150315612호의 서열번호 108), AAVrh.43(US20150315612호의 서열번호 163), AAVrh.62(US20150315612호의 서열번호 114), AAVrh.48(US20150315612호의 서열번호 115), AAVhu.19(US20150315612호의 서열번호 133), AAVhu.11(US20150315612호의 서열번호 153), AAVhu.53(US20150315612호의 서열번호 186), AAV4-8/rh.64(US20150315612호의 서열번호 15), AAVLG-9/hu.39(US20150315612호의 서열번호 24), AAV54.5/hu.23(US20150315612호의 서열번호 60), AAV54.2/hu.22(US20150315612호의 서열번호 67), AAV54.7/hu.24(US20150315612호의 서열번호 66), AAV54.1/hu.21(US20150315612호의 서열번호 65), AAV54.4R/hu.27(US20150315612호의 서열번호 64), AAV46.2/hu.28(US20150315612호의 서열번호 68), AAV46.6/hu.29(US20150315612호의 서열번호 69), AAV128.1/hu.43(US20150315612호의 서열번호 80), 또는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 공개 공보 US20150315612호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, 진성 유형 AAV(ttAAV)(WO2015121501호의 서열번호 2), "UPenn AAV10"(WO2015121501호의 서열번호 8), "일본 AAV10"(WO2015121501호의 서열번호 9), 또는 이들의 변이체와 같은 국제 공개 공보 WO2015121501호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

본 발명에 따르면, AAV 캡시드 혈청형 선택 또는 사용은 다양한 종으로부터 기원할 수 있다. 일 구현예에서, AAV는 조류 AAV(AAAV)일 수 있다. AAAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAAV (US 9,238,800의 서열번호 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 및 14), 또는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 US 9238800호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일 구현예에서, AAV는 소 AAV(BAAV)일 수 있다. BAAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, BAAV(US 9,193,769호의 서열번호 1 및 6), 또는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 US 9,193,769호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다. BAAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, BAAV(US7,427,396호의 서열번호 5 및 6), 또는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 US7,427,396호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일 구현예에서, AAV는 염소 AAV일 수 있다. 염소 AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, 염소 AAV(US7,427,396호의 서열번호 3), 또는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 US7,427,396호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

다른 구현예에서 AAV는 2개 이상의 모계 혈청형으로부터 하이브리드 AAV로 조작될 수 있다. 일 구현예에서, AAV는 AAV2 및 AAV9로부터의 서열을 포함하는 AAV2G9일 수 있다. AAV2G9 AAV 혈청형은 미국 특허 출원 공개 공보 US20160017005호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일 구현예에서, AAV는 문헌(참조: Pulicherla et al. (Molecular Therapy 19(6):1070-1078 (2011); 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 아미노산 390-627(VP1 넘버링) 내 돌연변이를 갖는 AAV9 캡시드 라이브러리에 의해 생성된 혈청형일 수 있다. 혈청형 및 상응하는 뉴클레오타이드 및 아미노산 치환은 AAV9.1 (G1594C; D532H), AAV6.2 (T1418A 및 T1436X; V473D 및 I479K), AAV9.3 (T1238A; F413Y), AAV9.4 (T1250C 및 A1617T; F417S), AAV9.5 (A1235G, A1314T, A1642G, C1760T; Q412R, T548A, A587V), AAV9.6 (T1231A; F411I), AAV9.9 (G1203A, G1785T; W595C), AAV9.10 (A1500G, T1676C; M559T), AAV9.11 (A1425T, A1702C, A1769T; T568P, Q590L), AAV9.13 (A1369C, A1720T; N457H, T574S), AAV9.14 (T1340A, T1362C, T1560C, G1713A; L447H), AAV9.16 (A1775T; Q592L), AAV9.24 (T1507C, T1521G; W503R), AAV9.26 (A1337G, A1769C; Y446C, Q590P), AAV9.33 (A1667C; D556A), AAV9.34 (A1534G, C1794T; N512D), AAV9.35 (A1289T, T1450A, C1494T, A1515T, C1794A, G1816A; Q430L, Y484N, N98K, V606I), AAV9.40 (A1694T, E565V), AAV9.41 (A1348T, T1362C; T450S), AAV9.44 (A1684C, A1701T, A1737G; N562H, K567N), AAV9.45 (A1492T, C1804T; N498Y, L602F), AAV9.46 (G1441C, T1525C, T1549G; G481R, W509R, L517V), 9.47 (G1241A, G1358A, A1669G, C1745T; S414N, G453D, K557E, T582I), AAV9.48 (C1445T, A1736T; P482L, Q579L), AAV9.50 (A1638T, C1683T, T1805A; Q546H, L602H), AAV9.53 (G1301A, A1405C, C1664T, G1811T; R134Q, S469R, A555V, G604V), AAV9.54 (C1531A, T1609A; L511I, L537M), AAV9.55 (T1605A; F535L), AAV9.58 (C1475T, C1579A; T492I, H527N), AAV.59 (T1336C; Y446H), AAV9.61 (A1493T; N498I), AAV9.64 (C1531A, A1617T; L511I), AAV9.65 (C1335T, T1530C, C1568A; A523D), AAV9.68 (C1510A; P504T), AAV9.80 (G1441A,;G481R), AAV9.83 (C1402A, A1500T; P468T, E500D), AAV9.87 (T1464C, T1468C; S490P), AAV9.90 (A1196T; Y399F), AAV9.91 (T1316G, A1583T, C1782G, T1806C; L439R, K528I), AAV9.93 (A1273G, A1421G, A1638C, C1712T, G1732A, A1744T, A1832T; S425G, Q474R, Q546H, P571L, G578R, T582S, D611V), AAV9.94 (A1675T; M559L) 및 AAV9.95 (T1605A; F535L)일 수 있지만 이에 제한되지 않는다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAVF1/HSC1(WO2016049230호의 서열번호 2 및 20), AAVF2/HSC2(WO2016049230호의 서열번호 3 및 21), AAVF3/HSC3(WO2016049230호의 서열번호 5 및 22), AAVF4/HSC4(WO2016049230호의 서열번호 6 및 23), AAVF5/HSC5(WO2016049230호의 서열번호 11 및 25), AAVF6/HSC6(WO2016049230호의 서열번호 7 및 24), AAVF7/HSC7(WO2016049230호의 서열번호 8 및 27), AAVF8/HSC8(WO2016049230호의 서열번호 9 및 28), AAVF9/HSC9(WO2016049230호의 서열번호 10 및 29), AAVF11/HSC11(WO2016049230호의 서열번호 4 및 26), AAVF12/HSC12(WO2016049230호의 서열번호 12 및 30), AAVF13/HSC13(WO2016049230호의 서열번호 14 및 31), AAVF14/HSC14(WO2016049230호의 서열번호 15 및 32), AAVF15/HSC15(WO2016049230호의 서열번호 16 및 33), AAVF16/HSC16(WO2016049230호의 서열번호 17 및 34), AAVF17/HSC17(WO2016049230호의 서열번호 13 및 35), 또는 이들의 변이체 또는 유도체와 같은 국제 공개 공보 WO2016049230호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV CBr-E1(US8734809호의 서열번호 13 및 87), AAV CBr-E2(US8734809호의 서열번호 14 및 88), AAV CBr-E3(US8734809호의 서열번호 15 및 89), AAV CBr-E4(US8734809호의 서열번호 16 및 90), AAV CBr-E5(US8734809호의 서열번호 17 및 91), AAV CBr-e5(US8734809호의 서열번호 18 및 92), AAV CBr-E6(US8734809호의 서열번호 19 및 93), AAV CBr-E7(US8734809호의 서열번호 20 및 94), AAV CBr-E8(US8734809호의 서열번호 21 및 95), AAV CLv-D1(US8734809호의 서열번호 22 및 96), AAV CLv-D2(US8734809호의 서열번호 23 및 97), AAV CLv-D3(US8734809호의 서열번호 24 및 98), AAV CLv-D4(US8734809호의 서열번호 25 및 99), AAV CLv-D5(US8734809호의 서열번호 26 및 100), AAV CLv-D6(US8734809호의 서열번호 27 및 101), AAV CLv-D7(US8734809호의 서열번호 28 및 102), AAV CLv-D8(US8734809호의 서열번호 29 및 103), AAV CLv-E1(US8734809호의 서열번호 13 및 87), AAV CLv-R1(US8734809호의 서열번호 30 및 104), AAV CLv-R2(US8734809호의 서열번호 31 및 105), AAV CLv-R3(US8734809호의 서열번호 32 및 106), AAV CLv-R4(US8734809호의 서열번호 33 및 107), AAV CLv-R5(US8734809호의 서열번호 34 및 108), AAV CLv-R6(US8734809호의 서열번호 35 및 109), AAV CLv-R7(US8734809호의 서열번호 36 및 110), AAV CLv-R8(US8734809호의 서열번호 X 및 X), AAV CLv-R9(US8734809호의 서열번호 X 및 X), AAV CLg-F1(US8734809호의 서열번호 39 및 113), AAV CLg-F2(US8734809호의 서열번호 40 및 114), AAV CLg-F3(US8734809호의 서열번호 41 및 115), AAV CLg-F4(US8734809호의 서열번호 42 및 116), AAV CLg-F5(US8734809호의 서열번호 43 및 117), AAV CLg-F6(US8734809호의 서열번호 43 및 117), AAV CLg-F7(US8734809호의 서열번호 44 및 118), AAV CLg-F8(US8734809호의 서열번호 43 및 117), AAV CSp-1(US8734809호의 서열번호 45 및 119), AAV CSp-10(US8734809호의 서열번호 46 및 120), AAV CSp-11(US8734809호의 서열번호 47 및 121), AAV CSp-2(US8734809호의 서열번호 48 및 122), AAV CSp-3(US8734809호의 서열번호 49 및 123), AAV CSp-4(US8734809호의 서열번호 50 및 124), AAV CSp-6(US8734809호의 서열번호 51 및 125), AAV CSp-7(US8734809호의 서열번호 52 및 126), AAV CSp-8(US8734809호의 서열번호 53 및 127), AAV CSp-9(US8734809호의 서열번호 54 및 128), AAV CHt-2(US8734809호의 서열번호 55 및 129), AAV CHt-3(US8734809호의 서열번호 56 및 130), AAV CKd-1(US8734809호의 서열번호 57 및 131), AAV CKd-10(US8734809호의 서열번호 58 및 132), AAV CKd-2(US8734809호의 서열번호 59 및 133), AAV CKd-3(US8734809호의 서열번호 60 및 134), AAV CKd-4(US8734809호의 서열번호 61 및 135), AAV CKd-6(US8734809호의 서열번호 62 및 136), AAV CKd-7(US8734809호의 서열번호 63 및 137), AAV CKd-8(US8734809호의 서열번호 64 및 138), AAV CLv-1(US8734809호의 서열번호 35 및 139), AAV CLv-12(US8734809호의 서열번호 66 및 140), AAV CLv-13(US8734809호의 서열번호 67 및 141), AAV CLv-2(US8734809호의 서열번호 68 및 142), AAV CLv-3(US8734809호의 서열번호 69 및 143), AAV CLv-4(US8734809호의 서열번호 70 및 144), AAV CLv-6(US8734809호의 서열번호 71 및 145), AAV CLv-8(US8734809호의 서열번호 72 및 146), AAV CKd-B1(US8734809호의 서열번호 73 및 147), AAV CKd-B2(US8734809호의 서열번호 74 및 148), AAV CKd-B3(US8734809호의 서열번호 75 및 149), AAV CKd-B4(US8734809호의 서열번호 76 및 150), AAV CKd-B5(US8734809호의 서열번호 77 및 151), AAV CKd-B6(US8734809호의 서열번호 78 및 152), AAV CKd-B7(US8734809호의 서열번호 79 및 153), AAV CKd-B8(US8734809호의 서열번호 80 및 154), AAV CKd-H1(US8734809호의 서열번호 81 및 155), AAV CKd-H2(US8734809호의 서열번호 82 및 156), AAV CKd-H3(US8734809호의 서열번호 83 및 157), AAV CKd-H4(US8734809호의 서열번호 84 및 158), AAV CKd-H5(US8734809호의 서열번호 85 및 159), AAV CKd-H6(US8734809호의 서열번호 77 및 151), AAV CHt-1(US8734809호의 서열번호 86 및 160), AAV CLv1-1(US8734809호의 서열번호 171), AAV CLv1-2(US8734809호의 서열번호 172), AAV CLv1-3(US8734809호의 서열번호 173), AAV CLv1-4(US8734809호의 서열번호 174), AAV Clv1-7(US8734809호의 서열번호 175), AAV Clv1-8(US8734809호의 서열번호 176), AAV Clv1-9(US8734809호의 서열번호 177), AAV Clv1-10(US8734809호의 서열번호 178), AAV.VR-355(US8734809호의 서열번호 181), AAV.hu.48R3(US8734809호의 서열번호 183), 또는 이들의 변이체 또는 유도체와 같은 미국 특허 US 8734809호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV CHt-P2(WO2016065001호의 서열번호 1 및 51), AAV CHt-P5(WO2016065001호의 서열번호 2 및 52), AAV CHt-P9(WO2016065001호의 서열번호 3 및 53), AAV CBr-7.1(WO2016065001호의 서열번호 4 및 54), AAV CBr-7.2(WO2016065001호의 서열번호 5 및 55), AAV CBr-7.3(WO2016065001호의 서열번호 6 및 56), AAV CBr-7.4(WO2016065001호의 서열번호 7 및 57), AAV CBr-7.5(WO2016065001호의 서열번호 8 및 58), AAV CBr-7.7(WO2016065001호의 서열번호 9 및 59), AAV CBr-7.8(WO2016065001호의 서열번호 10 및 60), AAV CBr-7.10(WO2016065001호의 서열번호 11 및 61), AAV CKd-N3(WO2016065001호의 서열번호 12 및 62), AAV CKd-N4(WO2016065001호의 서열번호 13 및 63), AAV CKd-N9(WO2016065001호의 서열번호 14 및 64), AAV CLv-L4(WO2016065001호의 서열번호 15 및 65), AAV CLv-L5(WO2016065001호의 서열번호 16 및 66), AAV CLv-L6(WO2016065001호의 서열번호 17 및 67), AAV CLv-K1(WO2016065001호의 서열번호 18 및 68), AAV CLv-K3(WO2016065001호의 서열번호 19 및 69), AAV CLv-K6(WO2016065001호의 서열번호 20 및 70), AAV CLv-M1(WO2016065001호의 서열번호 21 및 71), AAV CLv-M11(WO2016065001호의 서열번호 22 및 72), AAV CLv-M2(WO2016065001호의 서열번호 23 및 73), AAV CLv-M5(WO2016065001호의 서열번호 24 및 74), AAV CLv-M6(WO2016065001호의 서열번호 25 및 75), AAV CLv-M7(WO2016065001호의 서열번호 26 및 76), AAV CLv-M8(WO2016065001호의 서열번호 27 및 77), AAV CLv-M9(WO2016065001호의 서열번호 28 및 78), AAV CHt-P1(WO2016065001호의 서열번호 29 및 79), AAV CHt-P6(WO2016065001호의 서열번호 30 및 80), AAV CHt-P8(WO2016065001호의 서열번호 31 및 81), AAV CHt-6.1(WO2016065001호의 서열번호 32 및 82), AAV CHt-6.10(WO2016065001호의 서열번호 33 및 83), AAV CHt-6.5(WO2016065001호의 서열번호 34 및 84), AAV CHt-6.6(WO2016065001호의 서열번호 35 및 85), AAV CHt-6.7(WO2016065001호의 서열번호 36 및 86), AAV CHt-6.8(WO2016065001호의 서열번호 37 및 87), AAV CSp-8.10(WO2016065001호의 서열번호 38 및 88), AAV CSp-8.2(WO2016065001호의 서열번호 39 및 89), AAV CSp-8.4(WO2016065001호의 서열번호 40 및 90), AAV CSp-8.5(WO2016065001호의 서열번호 41 및 91), AAV CSp-8.6(WO2016065001호의 서열번호 42 및 92), AAV CSp-8.7(WO2016065001호의 서열번호 43 및 93), AAV CSp-8.8(WO2016065001호의 서열번호 44 및 94), AAV CSp-8.9(WO2016065001호의 서열번호 45 및 95), AAV CBr-B7.3(WO2016065001호의 서열번호 46 및 96), AAV CBr-B7.4(WO2016065001호의 서열번호 47 및 97), AAV3B(WO2016065001호의 서열번호 48 및 98), AAV4(WO2016065001호의 서열번호 49 및 99), AAV5(WO2016065001호의 서열번호 50 및 100), 또는 이들의 변이체 또는 유도체와 같은 국제 공개 공보 WO2016065001호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다..

일 구현예에서, AAV는 표 1에서 발견된 것들 중 어느 것으로부터 선택된 혈청형일 수 있다.

일 구현예에서, AAV는 표 1의 서열, 서열의 단편 또는 이의 변이체를 포함할 수 있다.

일 구현예에서, AAV는 표 1에 기재된 서열, 단편 또는 변이체에 의해 인코딩될 수 있다.

일 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV9(WO2015038958호의 서열번호 2 및 11 또는 본원에서 각각 서열번호 135 및 136), PHP.B(WO2015038958호의 서열번호 8 및 9, 본원에서 서열번호 3 및 4), G2B-13(WO2015038958호의 서열번호 12, 본원에서 서열번호 5), G2B-26(WO2015038958호의 서열번호 13, 본원에서 서열번호 3), TH1.1-32(WO2015038958호의 서열번호 14, 본원에서 서열번호 6), TH1.1-35(WO2015038958호의 서열번호 15, 본원에서 서열번호 7) 또는 이들의 변이체와 같은 국제 특허 공개 공보 WO2015038958호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다. 또한, WO2015038958호에 기재된 임의의 표적화 펩타이드 또는 아미노산 삽입물은, 이에 제한되지는 않지만, AAV9(DNA 서열에 대한 서열번호 135 및 아미노산 서열에 대한 서열번호 136)와 같은 임의의 모 AAV 혈청형에 삽입될 수 있다. 일 구현예에서, 아미노산 삽입물은 모 AAV의 아미노산 586 내지 592 사이에 삽입된다(예를 들어, AAV9). 또 다른 구현예에서, 아미노산 삽입물은 모 AAV 서열의 아미노산 588 내지 589 사이에 삽입된다. 아미노산 삽입물은 다음의 아미노산 서열 중 어느 것일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다: TLAVPFK(WO2015038958호의 서열번호 1; 본원에서 서열번호 1260), KFPVALT(WO2015038958호의 서열번호 3; 본원에서 서열번호 1261), LAVPFK(WO2015038958호의 서열번호 31; 본원에서 서열번호 1262), AVPFK(WO2015038958호의 서열번호 32; 본원에서 서열번호 1263), VPFK(WO2015038958호의 서열번호 33; 본원에서 서열번호 1264), TLAVPF(WO2015038958호의 서열번호 34; 본원에서 서열번호 1265), TLAVP(WO2015038958호의 서열번호 35; 본원에서 서열번호 1266), TLAV(WO2015038958호의 서열번호 36; 본원에서 서열번호 1267), SVSKPFL(WO2015038958호의 서열번호 28; 본원에서 서열번호 1268), FTLTTPK(WO2015038958호의 서열번호 29; 본원에서 서열번호 1269), MNATKNV(WO2015038958호의 서열번호 30; 본원에서 서열번호 1270), QSSQTPR(WO2015038958호의 서열번호 54; 본원에서 서열번호 1271), ILGTGTS(WO2015038958호의 서열번호 55; 본원에서 서열번호 1272), TRTNPEA(WO2015038958호의 서열번호 56; 본원에서 서열번호 1273), NGGTSSS(WO2015038958호의 서열번호 58; 본원에서 서열번호 1274), 또는 YTLSQGW(WO2015038958호의 서열번호 60; 본원에서 서열번호 1275). 아미노산 삽입물을 인코딩할 수 있는 뉴클레오타이드 서열의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: AAGTTTCCTGTGGCGTTGACT(WO2015038958호의 서열번호 3; 본원에서 서열번호 1276), ACTTTGGCGGTGCCTTTTAAG(WO2015038958호의 서열번호 24 및 49; 본원에서 서열번호 1277), AGTGTGAGTAAGCCTTTTTTG(WO2015038958호의 서열번호 25; 본원에서 서열번호 1278), TTTACGTTGACGACGCCTAAG(WO2015038958호의 서열번호 26; 본원에서 서열번호 1279), ATGAATGCTACGAAGAATGTG(WO2015038958호의 서열번호 27; 본원에서 서열번호 1280), CAGTCGTCGCAGACGCCTAGG(WO2015038958호의 서열번호 48; 본원에서 서열번호 1281), ATTCTGGGGACTGGTACTTCG(WO2015038958호의 서열번호 50 및 52; 본원에서 서열번호 1282), ACGCGGACTAATCCTGAGGCT(WO2015038958호의 서열번호 51; 본원에서 서열번호 1283), AATGGGGGGACTAGTAGTTCT(WO2015038958호의 서열번호 53; 본원에서 서열번호 1284), 또는 TATACTTTGTCGCAGGGTTGG(WO2015038958호의 서열번호 59; 본원에서 서열번호 1285).

일 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV9(WO2017100671호의 서열번호 45, 본원에서 서열번호 9), PHP.N(WO2017100671호의 서열번호 46, 본원에서 서열번호 2), PHP.S(WO2017100671호의 서열번호 47, 본원에서 서열번호 8), 또는 이들의 변이체와 같은 국제 특허 공개 공보 WO2017100671(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다. 또한, WO2017100671에 기재된 임의의 표적화 펩타이드 또는 아미노산 삽입물은 이에 제한되지는 않지만 AAV9(서열번호 9 또는 서열번호 131)와 같은 임의의 모 AAV 혈청형에 삽입될 수 있다. 일 구현예에서, 아미노산 삽입물은 모 AAV의 아미노산 586 내지 592 사이에 삽입된다(예를 들어, AAV9). 또 다른 구현예에서, 아미노산 삽입물은 모 AAV 서열의 아미노산 588 내지 589 사이에 삽입된다. 아미노산 삽입물은 다음의 아미노산 서열 중 어느 것일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다: AQTLAVPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 1; 본원에서 서열번호 1286), AQSVSKPFLAQ(WO2017100671호의 서열번호 2; 본원에서 서열번호 1287), AQFTLTTPKAQ(WO2017100671호의 서열 목록 중 서열번호 3; 본원에서 서열번호 1288), DGTLAVPFKAQ(WO2017100671호의 서열 목록 중 서열번호 4; 본원에서 서열번호 1289), ESTLAVPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 5; 본원에서 서열번호 1290), GGTLAVPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 6; 본원에서 서열번호 1291), AQTLATPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 7 및 33; 본원에서 서열번호 1292), ATTLATPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 8; 본원에서 서열번호 1293), DGTLATPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 9; 본원에서 서열번호 1294), GGTLATPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 10; 본원에서 서열번호 1295), SGSLAVPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 11; 본원에서 서열번호 1296), AQTLAQPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 12; 본원에서 서열번호 1297), AQTLQQPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 13; 본원에서 서열번호 1298), AQTLSNPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 14; 본원에서 서열번호 1299), AQTLAVPFSNP(WO2017100671호의 서열번호 15; 본원에서 서열번호 1300), QGTLAVPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 16; 본원에서 서열번호 1301), NQTLAVPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 17; 본원에서 서열번호 1302), EGSLAVPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 18; 본원에서 서열번호 1303), SGNLAVPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 19; 본원에서 서열번호 1304), EGTLAVPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 20; 본원에서 서열번호 1305), DSTLAVPFKAQ(WO2017100671의 표 1의 서열번호 21; 본원에서 서열번호 1306), AVTLAVPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 22; 본원에서 서열번호 1307), AQTLSTPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 23; 본원에서 서열번호 1308), AQTLPQPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 24 및 32; 본원에서 서열번호 1309), AQTLSQPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 25; 본원에서 서열번호 1310), AQTLQLPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 26; 본원에서 서열번호 1311), AQTLTMPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 27, 및 34 및 WO2017100671호의 서열 목록 중 서열번호 35; 본원에서 서열번호 1312), AQTLTTPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 28; 본원에서 서열번호 1313), AQYTLSQGWAQ(WO2017100671호의 서열번호 29; 본원에서 서열번호 1314), AQMNATKNVAQ(WO2017100671호의 서열번호 30; 본원에서 서열번호 1315), AQVSGGHHSAQ(WO2017100671호의 서열번호 31; 본원에서 서열번호 1316), AQTLTAPFKAQ(WO2017100671의 표 1의 서열번호 35; 본원에서 서열번호 1317), AQTLSKPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 36; 본원에서 서열번호 1318), QAVRTSL(WO2017100671호의 서열번호 37; 본원에서 서열번호 1319), YTLSQGW(WO2017100671호의 서열번호 38; 본원에서 서열번호 1275), LAKERLS(WO2017100671호의 서열번호 39; 본원에서 서열번호 1320), TLAVPFK(WO2017100671호의 서열 목록 중 서열번호 40; 본원에서 서열번호 1260), SVSKPFL(WO2017100671호의 서열번호 41; 본원에서 서열번호 1268), FTLTTPK(WO2017100671호의 서열번호 42; 본원에서 서열번호 1269), MNSTKNV(WO2017100671호의 서열번호 43; 본원에서 서열번호 1321), VSGGHHS(WO2017100671호의 서열번호 44; 본원에서 서열번호 1322), SAQTLAVPFKAQAQ(WO2017100671호의 서열번호 48; 본원에서 서열번호 1323), SXXXLAVPFKAQAQ(WO2017100671호의 서열번호 49(여기서 X는 임의의 아미노산일 수 있음); 본원에서 서열번호 1324), SAQXXXVPFKAQAQ(WO2017100671호의 서열번호 50(여기서 X는 임의의 아미노산일 수 있음); 본원에서 서열번호 1325), SAQTLXXXFKAQAQ(WO2017100671호의 서열번호 51(여기서 X는 임의의 아미노산일 수 있음); 본원에서 서열번호 1326), SAQTLAVXXXAQAQ(WO2017100671호의 서열번호 52(여기서 X는 임의의 아미노산일 수 있음); 본원에서 서열번호 1327), SAQTLAVPFXXXAQ(WO2017100671호의 서열번호 53(여기서 X는 임의의 아미노산일 수 있음); 본원에서 서열번호 1328), TNHQSAQ(WO2017100671의서열번호 65; 본원에서 서열번호 1329), AQAQTGW(WO2017100671호의 서열번호 66; 본원에서 서열번호 1330), DGTLATPFK(WO2017100671호의 서열번호 67; 본원에서 서열번호 1331), DGTLATPFKXX(WO2017100671호의 서열번호 68(여기서 X는 임의의 아미노산일 수 있음); 본원에서 서열번호 1332), LAVPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 80; 본원에서 서열번호 1333), VPFKAQ(WO2017100671호의 서열번호 81; 본원에서 서열번호 1334), FKAQ(WO2017100671호의 서열번호 82; 본원에서 서열번호 1335), AQTLAV(WO2017100671호의 서열번호 83; 본원에서 서열번호 1336), AQTLAVPF(WO2017100671호의 서열번호 84; 본원에서 서열번호 1337), QAVR(WO2017100671호의 서열번호 85; 본원에서 서열번호 1338), AVRT(WO2017100671호의 서열번호 86; 본원에서 서열번호 1339), VRTS(WO2017100671호의 서열번호 87; 본원에서 서열번호 1340), RTSL(WO2017100671호의 서열번호 88; 본원에서 서열번호 1341), QAVRT(WO2017100671호의 서열번호 89; 본원에서 서열번호 1342), AVRTS(WO2017100671호의 서열번호 90; 본원에서 서열번호 1343), VRTSL(WO2017100671호의 서열번호 91; 본원에서 서열번호 1344), QAVRTS(WO2017100671호의 서열번호 92; 본원에서 서열번호 1345), 또는 AVRTSL(WO2017100671호의 서열번호 93; 본원에서 서열번호 1346).

아미노산 삽입물을 인코딩할 수 있는 뉴클레오타이드 서열의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: GATGGGACTTTGGCGGTGCCTTTTAAGGCACAG(WO2017100671호의 서열번호 54; 본원에서 서열번호 1347), GATGGGACGTTGGCGGTGCCTTTTAAGGCACAG(WO2017100671호의 서열번호 55; 본원에서 서열번호 1348), CAGGCGGTTAGGACGTCTTTG(WO2017100671호의 서열번호 56; 본원에서 서열번호 1349), CAGGTCTTCACGGACTCAGACTATCAG(WO2017100671호의 서열번호 57 및 78; 본원에서 서열번호 1350), CAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTAAAATCG(WO2017100671호의 서열번호 58; 본원에서 서열번호 1351), ACTCATCGACCAATACTTGTACTATCTCTCTAGAAC(WO2017100671호의 서열번호 59; 본원에서 서열번호 1352), GGAAGTATTCCTTGGTTTTGAACCCA(WO2017100671호의 서열번호 60; 본원에서 서열번호 1353), GGTCGCGGTTCTTGTTTGTGGAT(WO2017100671호의 서열번호 61; 본원에서 서열번호 1354), CGACCTTGAAGCGCATGAACTCCT(WO2017100671호의 서열번호 62; 본원에서 서열번호 1355), GTATTCCTTGGTTTTGAACCCAACCGGTCTGCGCCTGTGCMNNMNNMNNMNNMNNMNNMNNTTGGGCACTCTGGTGGTTTGTC(WO2017100671호의 서열번호 63(여기서 N은 A, C, T, 또는 G일 수 있음); 본원에서 서열번호 1356), GTATTCCTTGGTTTTGAACCCAACCGGTCTGCGCMNNMNNMNNAAAAGGCACCGCCAAAGTTTG(WO2017100671호의 서열번호 69(여기서 N은 A, C, T, 또는 G일 수 있음); 본원에서 서열번호 1357), GTATTCCTTGGTTTTGAACCCAACCGGTCTGCGCCTGTGCMNNMNNMNNCACCGCCAAAGTTTGGGCACT(WO2017100671호의 서열번호 70(여기서 N은 A, C, T, 또는 G일 수 있음); 본원에서 서열번호 1358), GTATTCCTTGGTTTTGAACCCAACCGGTCTGCGCCTGTGCCTTAAAMNNMNNMNNCAAAGTTTGGGCACTCTGGTGG(WO2017100671호의 서열번호 71(여기서 N은 A, C, T, 또는 G일 수 있음); 본원에서 서열번호 1359), GTATTCCTTGGTTTTGAACCCAACCGGTCTGCGCCTGTGCCTTAAAAGGCACMNNMNNMNNTTGGGCACTCTGGTGGTTTGTG(WO2017100671호의 서열번호 72(여기서 N은 A, C, T, 또는 G일 수 있음); 본원에서 서열번호 1360), ACTTTGGCGGTGCCTTTTAAG(WO2017100671호의 서열번호 74; 본원에서 서열번호 1277), AGTGTGAGTAAGCCTTTTTTG(WO2017100671호의 서열번호 75; 본원에서 서열번호 1278), TTTACGTTGACGACGCCTAAG(WO2017100671호의 서열번호 76; 본원에서 서열번호 1279), TATACTTTGTCGCAGGGTTGG(WO2017100671호의 서열번호 77; 본원에서 서열번호 1285), 또는 CTTGCGAAGGAGCGGCTTTCG(WO2017100671호의 서열번호 79; 본원에서 서열번호 1361).

일 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV1(US9624274호의 서열번호 181), AAV6(US9624274호의 서열번호 182), AAV2(US9624274호의 서열번호 183), AAV3b(US9624274호의 서열번호 184), AAV7(US9624274호의 서열번호 185), AAV8(US9624274호의 서열번호 186), AAV10(US9624274호의 서열번호 187), AAV4(US9624274호의 서열번호 188), AAV11(US9624274호의 서열번호 189), bAAV(US9624274호의 서열번호 190), AAV5(US9624274호의 서열번호 191), GPV(US9624274호의 서열번호 192; 본원에서 서열번호 992), B19(US9624274호의 서열번호 193; 본원에서 서열번호 993), MVM(US9624274호의 서열번호 194; 본원에서 서열번호 994), FPV(US9624274호의 서열번호 195; 본원에서 서열번호 995), CPV(US9624274호의 서열번호 196; 본원에서 서열번호 996) 또는 이들의 변이체와 같은 미국 특허 US 9624274호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다. 또한, US 9624274에 기재된 임의의 구조적 단백질 삽입물은 이에 제한되지는 않지만 AAV2(US9624274호의 서열번호 183)와 같은 임의의 모 AAV 혈청형의 I-453 및 I-587(이에 제한되지 않음)에 삽입될 수 있다. 아미노산 삽입물은 다음의 아미노산 서열 중 어느 것일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다: VNLTWSRASG(US9624274호의 서열번호 50; 본원에서 서열번호 1362), EFCINHRGYWVCGD(US9624274호의 서열번호 55; 본원에서 서열번호 1363), EDGQVMDVDLS(US9624274호의 서열번호 85; 본원에서 서열번호 1364), EKQRNGTLT(US9624274호의 서열번호 86; 본원에서 서열번호 1365), TYQCRVTHPHLPRALMR(US9624274호의 서열번호 87; 본원에서 서열번호 1366), RHSTTQPRKTKGSG(US9624274호의 서열번호 88; 본원에서 서열번호 1367), DSNPRGVSAYLSR(US9624274호의 서열번호 89; 본원에서 서열번호 1368), TITCLWDLAPSK(US9624274호의 서열번호 90; 본원에서 서열번호 1369), KTKGSGFFVF(US9624274호의 서열번호 91; 본원에서 서열번호 1370), THPHLPRALMRS(US9624274호의 서열번호 92; 본원에서 서열번호 1371), GETYQCRVTHPHLPRALMRSTTK(US9624274호의 서열번호 93; 본원에서 서열번호 1372), LPRALMRS(US9624274호의 서열번호 94; 본원에서 서열번호 1373), INHRGYWV(US9624274호의 서열번호 95; 본원에서 서열번호 1374), CDAGSVRTNAPD(US9624274호의 서열번호 60; 본원에서 서열번호 1375), AKAVSNLTESRSESLQS(US9624274호의 서열번호 96; 본원에서 서열번호 1376), SLTGDEFKKVLET(US9624274호의 서열번호 97; 본원에서 서열번호 1377), REAVAYRFEED(US9624274호의 서열번호 98; 본원에서 서열번호 1378), INPEIITLDG(US9624274호의 서열번호 99; 본원에서 서열번호 1379), DISVTGAPVITATYL(US9624274호의 서열번호 100; 본원에서 서열번호 1380), DISVTGAPVITA(US9624274호의 서열번호 101; 본원에서 서열번호 1381), PKTVSNLTESSSESVQS(US9624274호의 서열번호 102; 본원에서 서열번호 1382), SLMGDEFKAVLET(US9624274호의 서열번호 103; 본원에서 서열번호 1383), QHSVAYTFEED(US9624274호의 서열번호 104; 본원에서 서열번호 1384), INPEIITRDG(US9624274호의 서열번호 105; 본원에서 서열번호 1385), DISLTGDPVITASYL(US9624274호의 서열번호 106; 본원에서 서열번호 1386), DISLTGDPVITA(US9624274호의 서열번호 107; 본원에서 서열번호 1387), DQSIDFEIDSA(US9624274호의 서열번호 108; 본원에서 서열번호 1388), KNVSEDLPLPTFSPTLLGDS(US9624274호의 서열번호 109; 본원에서 서열번호 1389), KNVSEDLPLPT(US9624274호의 서열번호 110; 본원에서 서열번호 1390), CDSGRVRTDAPD(US9624274호의 서열번호 111; 본원에서 서열번호 1391), FPEHLLVDFLQSLS(US9624274호의 서열번호 112; 본원에서 서열번호 1392), DAEFRHDSG(US9624274호의 서열번호 65; 본원에서 서열번호 1393), HYAAAQWDFGNTMCQL(US9624274호의 서열번호 113; 본원에서 서열번호 1394), YAAQWDFGNTMCQ(US9624274호의 서열번호 114; 본원에서 서열번호 1395), RSQKEGLHYT(US9624274호의 서열번호 115; 본원에서 서열번호 1396), SSRTPSDKPVAHWANPQAE(US9624274호의 서열번호 116; 본원에서 서열번호 1397), SRTPSDKPVAHWANP(US9624274호의 서열번호 117; 본원에서 서열번호 1398), SSRTPSDKP(US9624274호의 서열번호 118; 본원에서 서열번호 1399), NADGNVDYHMNSVP(US9624274호의 서열번호 119; 본원에서 서열번호 1400), DGNVDYHMNSV(US9624274호의 서열번호 120; 본원에서 서열번호 1401), RSFKEFLQSSLRALRQ(US9624274호의 서열번호 121; 본원에서 서열번호 1402); FKEFLQSSLRA(US9624274호의 서열번호 122; 본원에서 서열번호 1403), 또는 QMWAPQWGPD(US9624274호의 서열번호 123; 본원에서 서열번호 1404).

일 구현예에서, AAV 혈청형은 고유 AAV2 캡시드 단백질의 아미노산 위치 585 내지 590에서의 하나 이상의 아미노산의 변형을 포함하는 AAV 캡시드 단백질과 같은, 그러나 이에 제한되지 않는, 미국 특허 US 9475845호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다. 또한, 변형은, 이에 제한되지는 않지만, 아미노산 서열 RGNRQA(US9475845호의 서열번호 3; 본원에서 서열번호 1405), SSSTDP(US9475845호의 서열번호 4; 본원에서 서열번호 1406), SSNTAP(US9475845호의 서열번호 5; 본원에서 서열번호 1407), SNSNLP(US9475845호의 서열번호 6; 본원에서 서열번호 1408), SSTTAP(US9475845호의 서열번호 7; 본원에서 서열번호 1409), AANTAA(US9475845호의 서열번호 8; 본원에서 서열번호 1410), QQNTAP(US9475845호의 서열번호 9; 본원에서 서열번호 1411), SAQAQA(US9475845호의 서열번호 10; 본원에서 서열번호 1412), QANTGP(US9475845호의 서열번호 11; 본원에서 서열번호 1413), NATTAP(US9475845호의 서열번호 12; 본원에서 서열번호 1414), SSTAGP(US9475845호의 서열번호 13 및 20; 본원에서 서열번호 1415), QQNTAA(US9475845호의 서열번호 14; 본원에서 서열번호 1416), PSTAGP(US9475845호의 서열번호 15; 본원에서 서열번호 1417), NQNTAP(US9475845호의 서열번호 16; 본원에서 서열번호 1418), QAANAP(US9475845호의 서열번호 17; 본원에서 서열번호 1419), SIVGLP(US9475845호의 서열번호 18; 본원에서 서열번호 1420), AASTAA(US9475845호의 서열번호 19, 및 27; 본원에서 서열번호 1421), SQNTTA(US9475845호의 서열번호 21; 본원에서 서열번호 1422), QQDTAP(US9475845호의 서열번호 22; 본원에서 서열번호 1423), QTNTGP(US9475845호의 서열번호 23; 본원에서 서열번호 1424), QTNGAP(US9475845호의 서열번호 24; 본원에서 서열번호 1425), QQNAAP(US9475845호의 서열번호 25; 본원에서 서열번호 1426), 또는 AANTQA(US9475845호의 서열번호 26; 본원에서 서열번호 1427)를 초래할 수 있다. 일 구현예에서, 아미노산 변형은 고유 AAV2 캡시드 단백질에서의 아미노산 위치 262 내지 265 또는 또 다른 AAV의 캡시드 단백질에서의 상응하는 위치에서 표적화 서열로의 치환이다. 표적화 서열은 임의의 아미노산 서열, NGRAHA(US9475845호의 서열번호 38; 본원에서 서열번호 1428), QPEHSST(US9475845호의 서열번호 39 및 50; 본원에서 서열번호 1429), VNTANST(US9475845호의 서열번호 40; 본원에서 서열번호 1430), HGPMQKS(US9475845호의 서열번호 41; 본원에서 서열번호 1431), PHKPPLA(US9475845호의 서열번호 42; 본원에서 서열번호 1432), IKNNEMW(US9475845호의 서열번호 43; 본원에서 서열번호 1433), RNLDTPM(US9475845호의 서열번호 44; 본원에서 서열번호 1434), VDSHRQS(US9475845호의 서열번호 45; 본원에서 서열번호 1435), YDSKTKT(US9475845호의 서열번호 46; 본원에서 서열번호 1436), SQLPHQK(US9475845호의 서열번호 47; 본원에서 서열번호 1437), STMQQNT(US9475845호의 서열번호 48; 본원에서 서열번호 1438), TERYMTQ(US9475845호의 서열번호 49; 본원에서 서열번호 1439), DASLSTS(US9475845호의 서열번호 51; 본원에서 서열번호 1440), DLPNKKT(US9475845호의 서열번호 52; 본원에서 서열번호 1441), DLTAARL(US9475845호의 서열번호 53; 본원에서 서열번호 1442), EPHQFNY(US9475845호의 서열번호 54; 본원에서 서열번호 1443), EPQSNHT(US9475845호의 서열번호 55; 본원에서 서열번호 1444), MSSWPSQ(US9475845호의 서열번호 56; 본원에서 서열번호 1445), NPKHNAT(US9475845호의 서열번호 57; 본원에서 서열번호 1446), PDGMRTT(US9475845호의 서열번호 58; 본원에서 서열번호 1447), PNNNKTT(US9475845호의 서열번호 59; 본원에서 서열번호 1448), QSTTHDS(US9475845호의 서열번호 60; 본원에서 서열번호 1449), TGSKQKQ(US9475845호의 서열번호 61; 본원에서 서열번호 1450), SLKHQAL(US9475845호의 서열번호 62; 본원에서 서열번호 1451), SPIDGEQ(US9475845호의 서열번호 63; 본원에서 서열번호 1452), WIFPWIQL(US9475845호의 서열번호 64 및 112; 본원에서 서열번호 1453), CDCRGDCFC(US9475845호의 서열번호 65; 본원에서 서열번호 1454), CNGRC(US9475845호의 서열번호 66; 본원에서 서열번호 1455), CPRECES(US9475845호의 서열번호 67; 본원에서 서열번호 1456), CTTHWGFTLC(US9475845호의 서열번호 68 및 123; 본원에서 서열번호 1457), CGRRAGGSC(US9475845호의 서열번호 69; 본원에서 서열번호 1458), CKGGRAKDC(US9475845호의 서열번호 70; 본원에서 서열번호 1459), CVPELGHEC(US9475845호의 서열번호 71 및 115; 본원에서 서열번호 1460), CRRETAWAK(US9475845호의 서열번호 72; 본원에서 서열번호 1461), VSWFSHRYSPFAVS(US9475845호의 서열번호 73; 본원에서 서열번호 1462), GYRDGYAGPILYN(US9475845호의 서열번호 74; 본원에서 서열번호 1463), XXXYXXX(US9475845호의 서열번호 75; 본원에서 서열번호 1464), YXNW(US9475845호의 서열번호 76; 본원에서 서열번호 1465), RPLPPLP(US9475845호의 서열번호 77; 본원에서 서열번호 1466), APPLPPR(US9475845호의 서열번호 78; 본원에서 서열번호 1467), DVFYPYPYASGS(US9475845호의 서열번호 79; 본원에서 서열번호 1468), MYWYPY(US9475845호의 서열번호 80; 본원에서 서열번호 1469), DITWDQLWDLMK(US9475845호의 서열번호 81; 본원에서 서열번호 1470), CWDDXWLC(US9475845호의 서열번호 82; 본원에서 서열번호 1471), EWCEYLGGYLRCYA(US9475845호의 서열번호 83; 본원에서 서열번호 1472), YXCXXGPXTWXCXP(US9475845호의 서열번호 84; 본원에서 서열번호 1473), IEGPTLRQWLAARA(US9475845호의 서열번호 85; 본원에서 서열번호 1474), LWXXX(US9475845호의 서열번호 86; 본원에서 서열번호 1475), XFXXYLW(US9475845호의 서열번호 87; 본원에서 서열번호 1476), SSIISHFRWGLCD(US9475845호의 서열번호 88; 본원에서 서열번호 1477), MSRPACPPNDKYE(US9475845호의 서열번호 89; 본원에서 서열번호 1478), CLRSGRGC(US9475845호의 서열번호 90; 본원에서 서열번호 1479), CHWMFSPWC(US9475845호의 서열번호 91; 본원에서 서열번호 1480), WXXF(US9475845호의 서열번호 92; 본원에서 서열번호 1481), CSSRLDAC(US9475845호의 서열번호 93; 본원에서 서열번호 1482), CLPVASC(US9475845호의 서열번호 94; 본원에서 서열번호 1483), CGFECVRQCPERC(US9475845호의 서열번호 95; 본원에서 서열번호 1484), CVALCREACGEGC(US9475845호의 서열번호 96; 본원에서 서열번호 1485), SWCEPGWCR(US9475845호의 서열번호 97; 본원에서 서열번호 1486), YSGKWGW(US9475845호의 서열번호 98; 본원에서 서열번호 1487), GLSGGRS(US9475845호의 서열번호 99; 본원에서 서열번호 1488), LMLPRAD(US9475845호의 서열번호 100; 본원에서 서열번호 1489), CSCFRDVCC(US9475845호의 서열번호 101; 본원에서 서열번호 1490), CRDVVSVIC(US9475845호의 서열번호 102; 본원에서 서열번호 1491), MARSGL(US9475845호의 서열번호 103; 본원에서 서열번호 1492), MARAKE(US9475845호의 서열번호 104; 본원에서 서열번호 1493), MSRTMS(US9475845호의 서열번호 105; 본원에서 서열번호 1494), KCCYSL(US9475845호의 서열번호 106; 본원에서 서열번호 1495), MYWGDSHWLQYWYE(US9475845호의 서열번호 107; 본원에서 서열번호 1496), MQLPLAT(US9475845호의 서열번호 108; 본원에서 서열번호 1497), EWLS(US9475845호의 서열번호 109; 본원에서 서열번호 1498), SNEW(US9475845호의 서열번호 110; 본원에서 서열번호 1499), TNYL(US9475845호의 서열번호 111; 본원에서 서열번호 1500), WDLAWMFRLPVG(US9475845호의 서열번호 113; 본원에서 서열번호 1501), CTVALPGGYVRVC(US9475845호의 서열번호 114; 본원에서 서열번호 1502), CVAYCIEHHCWTC(US9475845호의 서열번호 116; 본원에서 서열번호 1503), CVFAHNYDYLVC(US9475845호의 서열번호 117; 본원에서 서열번호 1504), CVFTSNYAFC(US9475845호의 서열번호 118; 본원에서 서열번호 1505), VHSPNKK(US9475845호의 서열번호 119; 본원에서 서열번호 1506), CRGDGWC(US9475845호의 서열번호 120; 본원에서 서열번호 1507), XRGCDX(US9475845호의 서열번호 121; 본원에서 서열번호 1508), PXXX(US9475845호의 서열번호 122; 본원에서 서열번호 1509), SGKGPRQITAL(US9475845호의 서열번호 124; 본원에서 서열번호 1510), AAAAAAAAAXXXXX(US9475845호의 서열번호 125; 본원에서 서열번호 1511), VYMSPF(US9475845호의 서열번호 126; 본원에서 서열번호 1512), ATWLPPR(US9475845호의 서열번호 127; 본원에서 서열번호 1513), HTMYYHHYQHHL(US9475845호의 서열번호 128; 본원에서 서열번호 1514), SEVGCRAGPLQWLCEKYFG(US9475845호의 서열번호 129; 본원에서 서열번호 1515), CGLLPVGRPDRNVWRWLC(US9475845호의 서열번호 130; 본원에서 서열번호 1516), CKGQCDRFKGLPWEC(US9475845호의 서열번호 131; 본원에서 서열번호 1517), SGRSA(US9475845호의 서열번호 132; 본원에서 서열번호 1518), WGFP(US9475845호의 서열번호 133; 본원에서 서열번호 1519), AEPMPHSLNFSQYLWYT(US9475845호의 서열번호 134; 본원에서 서열번호 1520), WAYXSP(US9475845호의 서열번호 135; 본원에서 서열번호 1521), IELLQAR(US9475845호의 서열번호 136; 본원에서 서열번호 1522), AYTKCSRQWRTCMTTH(US9475845호의 서열번호 137; 본원에서 서열번호 1523), PQNSKIPGPTFLDPH(US9475845호의 서열번호 138; 본원에서 서열번호 1524), SMEPALPDWWWKMFK(US9475845호의 서열번호 139; 본원에서 서열번호 1525), ANTPCGPYTHDCPVKR(US9475845호의 서열번호 140; 본원에서 서열번호 1526), TACHQHVRMVRP(US9475845호의 서열번호 141; 본원에서 서열번호 1527), VPWMEPAYQRFL(US9475845호의 서열번호 142; 본원에서 서열번호 1528), DPRATPGS(US9475845호의 서열번호 143; 본원에서 서열번호 1529), FRPNRAQDYNTN(US9475845호의 서열번호 144; 본원에서 서열번호 1530), CTKNSYLMC(US9475845호의 서열번호 145; 본원에서 서열번호 1531), CXXTXXXGXGC(US9475845호의 서열번호 146; 본원에서 서열번호 1532), CPIEDRPMC(US9475845호의 서열번호 147; 본원에서 서열번호 1533), HEWSYLAPYPWF(US9475845호의 서열번호 148; 본원에서 서열번호 1534), MCPKHPLGC(US9475845호의 서열번호 149; 본원에서 서열번호 1535), RMWPSSTVNLSAGRR(US9475845호의 서열번호 150; 본원에서 서열번호 1536), SAKTAVSQRVWLPSHRGGEP(US9475845호의 서열번호 151; 본원에서 서열번호 1537), KSREHVNNSACPSKRITAAL(US9475845호의 서열번호 152; 본원에서 서열번호 1538), EGFR(US9475845호의 서열번호 153; 본원에서 서열번호 1539), AGLGVR(US9475845호의 서열번호 154; 본원에서 서열번호 1540), GTRQGHTMRLGVSDG(US9475845호의 서열번호 155; 본원에서 서열번호 1541), IAGLATPGWSHWLAL(US9475845호의 서열번호 156; 본원에서 서열번호 1542), SMSIARL(US9475845호의 서열번호 157; 본원에서 서열번호 1543), HTFEPGV(US9475845호의 서열번호 158; 본원에서 서열번호 1544), NTSLKRISNKRIRRK(US9475845호의 서열번호 159; 본원에서 서열번호 1545), LRIKRKRRKRKKTRK(US9475845호의 서열번호 160; 본원에서 서열번호 1546), GGG, GFS, LWS, EGG, LLV, LSP, LBS, AGG, GRR, GGH 및 GTV일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

일 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, AAV2의 부위-특이적 돌연변이된 캡시드 단백질(US 20160369298호의 서열번호 97; 본원에서 서열번호 1547) 또는 이들의 변이체와 같은 미국 공개 공보 US 20160369298호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있으며, 여기서 특이적 부위는 VP1의 부위 R447, G453, S578, N587, N587+1, S662 또는 이의 단편으로부터 선택된 적어도 하나의 부위이다.

또한, 미국 특허 출원 공개 공보 US20160369298호에 기재된 임의의 돌연변이된 서열은, 이에 제한되지는 않지만, 다음 서열 중 어느 것일 수 있거나 이를 가질 수 있다: SDSGASN(US20160369298호의 서열번호 1 및 서열번호 231; 본원에서 서열번호 1548), SPSGASN(US20160369298호의 서열번호 2; 본원에서 서열번호 1549), SHSGASN(US20160369298호의 서열번호 3; 본원에서 서열번호 1550), SRSGASN(US20160369298호의 서열번호 4; 본원에서 서열번호 1551), SKSGASN(US20160369298호의 서열번호 5; 본원에서 서열번호 1552), SNSGASN(US20160369298호의 서열번호 6; 본원에서 서열번호 1553), SGSGASN(US20160369298호의 서열번호 7; 본원에서 서열번호 1554), SASGASN(US20160369298호의 서열번호 8, 175, 및 221; 본원에서 서열번호 1555), SESGTSN(US20160369298호의 서열번호 9; 본원에서 서열번호 1556), STTGGSN(US20160369298호의 서열번호 10; 본원에서 서열번호 1557), SSAGSTN(US20160369298호의 서열번호 11; 본원에서 서열번호 1558), NNDSQA(US20160369298호의 서열번호 12; 본원에서 서열번호 1559), NNRNQA(US20160369298호의 서열번호 13; 본원에서 서열번호 1560), NNNKQA(US20160369298호의 서열번호 14; 본원에서 서열번호 1561), NAKRQA(US20160369298호의 서열번호 15; 본원에서 서열번호 1562), NDEHQA(US20160369298호의 서열번호 16; 본원에서 서열번호 1563), NTSQKA(US20160369298호의 서열번호 17; 본원에서 서열번호 1564), YYLSRTNTPSGTDTQSRLVFSQAGA(US20160369298호의 서열번호 18; 본원에서 서열번호 1565), YYLSRTNTDSGTETQSGLDFSQAGA(US20160369298호의 서열번호 19; 본원에서 서열번호 1566), YYLSRTNTESGTPTQSALEFSQAGA(US20160369298호의 서열번호 20; 본원에서 서열번호 1567), YYLSRTNTHSGTHTQSPLHFSQAGA(US20160369298호의 서열번호 21; 본원에서 서열번호 1568), YYLSRTNTSSGTITISHLIFSQAGA(US20160369298호의 서열번호 22; 본원에서 서열번호 1569), YYLSRTNTRSGIMTKSSLMFSQAGA(US20160369298호의 서열번호 23; 본원에서 서열번호 1570), YYLSRTNTKSGRKTLSNLSFSQAGA(US20160369298호의 서열번호 24; 본원에서 서열번호 1571), YYLSRTNDGSGPVTPSKLRFSQRGA(US20160369298호의 서열번호 25; 본원에서 서열번호 1572), YYLSRTNAASGHATHSDLKFSQPGA(US20160369298호의 서열번호 26; 본원에서 서열번호 1573), YYLSRTNGQAGSLTMSELGFSQVGA(US20160369298호의 서열번호 27; 본원에서 서열번호 1574), YYLSRTNSTGGNQTTSQLLFSQLSA(US20160369298호의 서열번호 28; 본원에서 서열번호 1575), YFLSRTNNNTGLNTNSTLNFSQGRA(US20160369298호의 서열번호 29; 본원에서 서열번호 1576), SKTGADNNNSEYSWTG(US20160369298호의 서열번호 30; 본원에서 서열번호 1577), SKTDADNNNSEYSWTG(US20160369298호의 서열번호 31; 본원에서 서열번호 1578), SKTEADNNNSEYSWTG(US20160369298호의 서열번호 32; 본원에서 서열번호 1579), SKTPADNNNSEYSWTG(US20160369298호의 서열번호 33; 본원에서 서열번호 1580), SKTHADNNNSEYSWTG(US20160369298호의 서열번호 34; 본원에서 서열번호 1581), SKTQADNNNSEYSWTG(US20160369298호의 서열번호 35; 본원에서 서열번호 1582), SKTIADNNNSEYSWTG(US20160369298호의 서열번호 36; 본원에서 서열번호 1583), SKTMADNNNSEYSWTG(US20160369298호의 서열번호 37; 본원에서 서열번호 1584), SKTRADNNNSEYSWTG(US20160369298호의 서열번호 38; 본원에서 서열번호 1585), SKTNADNNNSEYSWTG(US20160369298호의 서열번호 39; 본원에서 서열번호 1586), SKTVGRNNNSEYSWTG(US20160369298호의 서열번호 40; 본원에서 서열번호 1587), SKTADRNNNSEYSWTG(US20160369298호의 서열번호 41; 본원에서 서열번호 1588), SKKLSQNNNSKYSWQG(US20160369298호의 서열번호 42; 본원에서 서열번호 1589), SKPTTGNNNSDYSWPG(US20160369298호의 서열번호 43; 본원에서 서열번호 1590), STQKNENNNSNYSWPG(US20160369298호의 서열번호 44; 본원에서 서열번호 1591), HKDDEGKF(US20160369298호의 서열번호 45; 본원에서 서열번호 1592), HKDDNRKF(US20160369298호의 서열번호 46; 본원에서 서열번호 1593), HKDDTNKF(US20160369298호의 서열번호 47; 본원에서 서열번호 1594), HEDSDKNF(US20160369298호의 서열번호 48; 본원에서 서열번호 1595), HRDGADSF(US20160369298호의 서열번호 49; 본원에서 서열번호 1596), HGDNKSRF(US20160369298호의 서열번호 50; 본원에서 서열번호 1597), KQGSEKTNVDFEEV(US20160369298호의 서열번호 51; 본원에서 서열번호 1598), KQGSEKTNVDSEEV(US20160369298호의 서열번호 52; 본원에서 서열번호 1599), KQGSEKTNVDVEEV(US20160369298호의 서열번호 53; 본원에서 서열번호 1600), KQGSDKTNVDDAGV(US20160369298호의 서열번호 54; 본원에서 서열번호 1601), KQGSSKTNVDPREV(US20160369298호의 서열번호 55; 본원에서 서열번호 1602), KQGSRKTNVDHKQV(US20160369298호의 서열번호 56; 본원에서 서열번호 1603), KQGSKGGNVDTNRV(US20160369298호의 서열번호 57; 본원에서 서열번호 1604), KQGSGEANVDNGDV(US20160369298호의 서열번호 58; 본원에서 서열번호 1605), KQDAAADNIDYDHV(US20160369298호의 서열번호 59; 본원에서 서열번호 1606), KQSGTRSNAAASSV(US20160369298호의 서열번호 60; 본원에서 서열번호 1607), KENTNTNDTELTNV(US20160369298호의 서열번호 61; 본원에서 서열번호 1608), QRGNNVAATADVNT(US20160369298호의 서열번호 62; 본원에서 서열번호 1609), QRGNNEAATADVNT(US20160369298호의 서열번호 63; 본원에서 서열번호 1610), QRGNNPAATADVNT(US20160369298호의 서열번호 64; 본원에서 서열번호 1611), QRGNNHAATADVNT(US20160369298호의 서열번호 65; 본원에서 서열번호 1612), QEENNIAATPGVNT(US20160369298호의 서열번호 66; 본원에서 서열번호 1613), QPPNNMAATHEVNT(US20160369298호의 서열번호 67; 본원에서 서열번호 1614), QHHNNSAATTIVNT(US20160369298호의 서열번호 68; 본원에서 서열번호 1615), QTTNNRAAFNMVET(US20160369298호의 서열번호 69; 본원에서 서열번호 1616), QKKNNNAASKKVAT(US20160369298호의 서열번호 70; 본원에서 서열번호 1617), QGGNNKAADDAVKT(US20160369298호의 서열번호 71; 본원에서 서열번호 1618), QAAKGGAADDAVKT(US20160369298호의 서열번호 72; 본원에서 서열번호 1619), QDDRAAAANESVDT(US20160369298호의 서열번호 73; 본원에서 서열번호 1620), QQQHDDAAYQRVHT(US20160369298호의 서열번호 74; 본원에서 서열번호 1621), QSSSSLAAVSTVQT(US20160369298호의 서열번호 75; 본원에서 서열번호 1622), QNNQTTAAIRNVTT(US20160369298호의 서열번호 76; 본원에서 서열번호 1623), NYNKKSDNVDFT(US20160369298호의 서열번호 77; 본원에서 서열번호 1624), NYNKKSENVDFT(US20160369298호의 서열번호 78; 본원에서 서열번호 1625), NYNKKSLNVDFT(US20160369298호의 서열번호 79; 본원에서 서열번호 1626), NYNKKSPNVDFT(US20160369298호의 서열번호 80; 본원에서 서열번호 1627), NYSKKSHCVDFT(US20160369298호의 서열번호 81; 본원에서 서열번호 1628), NYRKTIYVDFT(US20160369298호의 서열번호 82; 본원에서 서열번호 1629), NYKEKKDVHFT(US20160369298호의 서열번호 83; 본원에서 서열번호 1630), NYGHRAIVQFT(US20160369298호의 서열번호 84; 본원에서 서열번호 1631), NYANHQFVVCT(US20160369298호의 서열번호 85; 본원에서 서열번호 1632), NYDDDPTGVLLT(US20160369298호의 서열번호 86; 본원에서 서열번호 1633), NYDDPTGVLLT(US20160369298호의 서열번호 87; 본원에서 서열번호 1634), NFEQQNSVEWT(US20160369298호의 서열번호 88; 본원에서 서열번호 1635), SQSGASN(US20160369298호의 서열번호 89 및 서열번호 241; 본원에서 서열번호 1636), NNGSQA(US20160369298호의 서열번호 90; 본원에서 서열번호 1637), YYLSRTNTPSGTTTWSRLQFSQAGA(US20160369298호의 서열번호 91; 본원에서 서열번호 1638), SKTSADNNNSEYSWTG(US20160369298호의 서열번호 92; 본원에서 서열번호 1639), HKDDEEKF(US20160369298호의 서열번호 93, 209, 214, 219, 224, 234, 239, 및 244; 본원에서 서열번호 1640), KQGSEKTNVDIEEV(US20160369298호의 서열번호 94; 본원에서 서열번호 1641), QRGNNQAATADVNT(US20160369298호의 서열번호 95; 본원에서 서열번호 1642), NYNKKSVNVDFT(US20160369298호의 서열번호 96; 본원에서 서열번호 1643), SQSGASNYNTPSGTTTQSRLQFSTSADNNNSEYSWTGATKYH(US20160369298호의 서열번호 106; 본원에서 서열번호 1644), SASGASNFNSEGGSLTQSSLGFSTDGENNNSDFSWTGATKYH(US20160369298호의 서열번호 107; 본원에서 서열번호 1645), SQSGASNYNTPSGTTTQSRLQFSTDGENNNSDFSWTGATKYH(US20160369298호의 서열번호 108; 본원에서 서열번호 1646), SASGASNYNTPSGTTTQSRLQFSTSADNNNSEFSWPGATTYH(US20160369298호의 서열번호 109; 본원에서 서열번호 1647), SQSGASNFNSEGGSLTQSSLGFSTDGENNNSDFSWTGATKYH(US20160369298호의 서열번호 110; 본원에서 서열번호 1648), SASGASNYNTPSGSLTQSSLGFSTDGENNNSDFSWTGATKYH(US20160369298호의 서열번호 111; 본원에서 서열번호 1649), SQSGASNYNTPSGTTTQSRLQFSTSADNNNSDFSWTGATKYH(US20160369298호의 서열번호 112; 본원에서 서열번호 1650), SGAGASNFNSEGGSLTQSSLGFSTDGENNNSDFSWTGATKYH(US20160369298호의 서열번호 113; 본원에서 서열번호 1651), SGAGASN(US20160369298호의 서열번호 176; 본원에서 서열번호 1652), NSEGGSLTQSSLGFS(US20160369298호의 서열번호 177, 185, 193 및 202; 본원에서 서열번호 1653), TDGENNNSDFS(US20160369298호의 서열번호 178; 본원에서 서열번호 1654), SEFSWPGATT(US20160369298호의 서열번호 179; 본원에서 서열번호 1655), TSADNNNSDFSWT(US20160369298호의 서열번호 180; 본원에서 서열번호 1656), SQSGASNY(US20160369298호의 서열번호 181, 187, 및 198; 본원에서 서열번호 1657), NTPSGTTTQSRLQFS(US20160369298호의 서열번호 182, 188, 191, 및 199; 본원에서 서열번호 1658), TSADNNNSEYSWTGATKYH(US20160369298호의 서열번호 183; 본원에서 서열번호 1659), SASGASNF(US20160369298호의 서열번호 184; 본원에서 서열번호 1660), TDGENNNSDFSWTGATKYH(US20160369298호의 서열번호 186, 189, 194, 197, 및 203; 본원에서 서열번호 1661), SASGASNY(US20160369298호의 서열번호 190 및 서열번호 195; 본원에서 서열번호 1662), TSADNNNSEFSWPGATTYH(US20160369298호의 서열번호 192; 본원에서 서열번호 1663), NTPSGSLTQSSLGFS(US20160369298호의 서열번호 196; 본원에서 서열번호 1664), TSADNNNSDFSWTGATKYH(US20160369298호의 서열번호 200; 본원에서 서열번호 1665), SGAGASNF(US20160369298호의 서열번호 201; 본원에서 서열번호 1666), CTCCAGVVSVVSMRSRVCVNSGCAGCTDHCVVSRNSGTCVMSACACAA(US20160369298호의 서열번호 204; 본원에서 서열번호 1667), CTCCAGAGAGGCAACAGACAAGCAGCTACCGCAGATGTCAACACACAA(US20160369298호의 서열번호 205; 본원에서 서열번호 1668), SAAGASN(US20160369298호의 서열번호 206; 본원에서 서열번호 1669), YFLSRTNTESGSTTQSTLRFSQAG(US20160369298호의 서열번호 207; 본원에서 서열번호 1670), SKTSADNNNSDFS(US20160369298호의 서열번호 208, 228, 및 253; 본원에서 서열번호 1671), KQGSEKTDVDIDKV(US20160369298호의 서열번호 210; 본원에서 서열번호 1672), STAGASN(US20160369298호의 서열번호 211; 본원에서 서열번호 1673), YFLSRTNTTSGIETQSTLRFSQAG(US20160369298호의 서열번호 212 및 서열번호 247; 본원에서 서열번호 1674), SKTDGENNNSDFS(US20160369298호의 서열번호 213 및 서열번호 248; 본원에서 서열번호 1675), KQGAAADDVEIDGV(US20160369298호의 서열번호 215 및 서열번호 250; 본원에서 서열번호 1676), SEAGASN(US20160369298호의 서열번호 216; 본원에서 서열번호 1677), YYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAG(US20160369298호의 서열번호 217, 232 및 242; 본원에서 서열번호 1678), SKTSADNNNSEYS(US20160369298호의 서열번호 218, 233, 238, 및 243; 본원에서 서열번호 1679), KQGSEKTNVDIEKV(US20160369298호의 서열번호 220, 225 및 245; 본원에서 서열번호 1680), YFLSRTNDASGSDTKSTLLFSQAG(US20160369298호의 서열번호 222; 본원에서 서열번호 1681), STTPSENNNSEYS(US20160369298호의 서열번호 223; 본원에서 서열번호 1682), SAAGATN(US20160369298호의 서열번호 226 및 서열번호 251; 본원에서 서열번호 1683), YFLSRTNGEAGSATLSELRFSQAG(US20160369298호의 서열번호 227; 본원에서 서열번호 1684), HGDDADRF(US20160369298호의 서열번호 229 및 서열번호 254; 본원에서 서열번호 1685), KQGAEKSDVEVDRV(US20160369298호의 서열번호 230 및 서열번호 255; 본원에서 서열번호 1686), KQDSGGDNIDIDQV(US20160369298호의 서열번호 235; 본원에서 서열번호 1687), SDAGASN(US20160369298호의 서열번호 236; 본원에서 서열번호 1688), YFLSRTNTEGGHDTQSTLRFSQAG(US20160369298호의 서열번호 237; 본원에서 서열번호 1689), KEDGGGSDVAIDEV(US20160369298호의 서열번호 240; 본원에서 서열번호 1690), SNAGASN(US20160369298호의 서열번호 246; 본원에서 서열번호 1691), 및 YFLSRTNGEAGSATLSELRFSQPG(US20160369298호의 서열번호 252; 본원에서 서열번호 1692). 아미노산 돌연변이된 부위를 인코딩할 수 있는 뉴클레오타이드 서열의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: AGCVVMDCAGGARSCASCAAC(US20160369298호의 서열번호 97; 본원에서 서열번호 1693), AACRACRRSMRSMAGGCA(US20160369298호의 서열번호 98; 본원에서 서열번호 1694), CACRRGGACRRCRMSRRSARSTTT(US20160369298호의 서열번호 99; 본원에서 서열번호 1695), TATTTCTTGAGCAGAACAAACRVCVVSRSCGGAMNCVHSACGMHSTCAVVSCTTVDSTTTTCTCAGSBCRGSGCG(US20160369298호의 서열번호 100; 본원에서 서열번호 1696), TCAAMAMMAVNSRVCSRSAACAACAACAGTRASTTCTCGTGGMMAGGA(US20160369298호의 서열번호 101; 본원에서 서열번호 1697), AAGSAARRCRSCRVSRVARVCRATRYCGMSNHCRVMVRSGTC(US20160369298호의 서열번호 102; 본원에서 서열번호 1698), CAGVVSVVSMRSRVCVNSGCAGCTDHCVVSRNSGTCVMSACA(US20160369298호의 서열번호 103; 본원에서 서열번호 1699), AACTWCRVSVASMVSVHSDDTGTGSWSTKSACT(US20160369298호의 서열번호 104; 본원에서 서열번호 1700), TTGTTGAACATCACCACGTGACGCACGTTC(US20160369298호의 서열번호 256; 본원에서 서열번호 1701), TCCCCGTGGTTCTACTACATAATGTGGCCG(US20160369298호의 서열번호 257; 본원에서 서열번호 1702), TTCCACACTCCGTTTTGGATAATGTTGAAC(US20160369298호의 서열번호 258; 본원에서 서열번호 1703), AGGGACATCCCCAGCTCCATGCTGTGGTCG(US20160369298호의 서열번호 259; 본원에서 서열번호 1704), AGGGACAACCCCTCCGACTCGCCCTAATCC(US20160369298호의 서열번호 260; 본원에서 서열번호 1705), TCCTAGTAGAAGACACCCTCTCACTGCCCG(US20160369298호의 서열번호 261; 본원에서 서열번호 1706), AGTACCATGTACACCCACTCTCCCAGTGCC(US20160369298호의 서열번호 262; 본원에서 서열번호 1707), ATATGGACGTTCATGCTGATCACCATACCG(US20160369298호의 서열번호 263; 본원에서 서열번호 1708), AGCAGGAGCTCCTTGGCCTCAGCGTGCGAG(US20160369298호의 서열번호 264; 본원에서 서열번호 1709), ACAAGCAGCTTCACTATGACAACCACTGAC(US20160369298호의 서열번호 265; 본원에서 서열번호 1710), CAGCCTAGGAACTGGCTTCCTGGACCCTGTTACCGCCAGCAGAGAGTCTCAAMAMMAVNSRVCSRSAACAACAACAGTRASTTCTCCTGGMMAGGAGCTACCAAGTACCACCTCAATGGCAGAGACTCTCTGGTGAATCCCGGACCAGCTATGGCAAGCCACRRGGACRRCRMSRRSARSTTTTTTCCTCAGAGCGGGGTTCTCATCTTTGGGAAGSAARRCRSCRVSRVARVCRATRYCGMSNHCRVMVRSGTCATGATTACAGACGAAGAGGAGATCTGGAC(US20160369298호의 서열번호 266; 본원에서 서열번호 1711), TGGGACAATGGCGGTCGTCTCTCAGAGTTKTKKT(US20160369298호의 서열번호 267; 본원에서 서열번호 1712), AGAGGACCKKTCCTCGATGGTTCATGGTGGAGTTA(US20160369298호의 서열번호 268; 본원에서 서열번호 1713), CCACTTAGGGCCTGGTCGATACCGTTCGGTG(US20160369298호의 서열번호 269; 본원에서 서열번호 1714), 및 TCTCGCCCCAAGAGTAGAAACCCTTCSTTYYG(US20160369298호의 서열번호 270; 본원에서 서열번호 1715).

일부 구현예에서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, WO2016134375호의 서열번호 9, 및 서열번호 10과 같은 국제 특허 공개 공보 WO2016134375호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 안구 세포 표적화 펩타이드를 포함할 수 있다. 또한, WO2016134375호에 기재된 임의의 안구 세포 표적화 헵타이드 또는 아미노산은, 이에 제한되지는 않지만, AAV2(WO2016134375호의 서열번호 8; 본원에서 서열번호 1716), 또는 AAV9(WO2016134375호의 서열번호 11; 본원에서 서열번호 1717)와 같은 임의의 모 AAV 혈청형에 삽입될 수 있다. 일부 구현예에서, 삽입과 같은 변형은 AAV2 단백질에서 P34-A35, T138-A139, A139-P140, G453-T454, N587-R588 및/또는 R588-Q589에서 이루어진다. 특정 구현예에서, 삽입은 AAV9의 D384, G385, 1560, T561, N562, E563, E564, E565, N704 및/또는 Y705에서 이루어진다. 안구 세포 표적화 펩타이드는 다음의 아미노산 서열 중 어느 것일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다: GSTPPPM(WO2016134375호의 서열번호 1; 본원에서 서열번호 1718), 또는 GETRAPL(WO2016134375호의 서열번호 4; 본원에서 서열번호 1719).

일부 구현예에서, AAV 혈청형은 미국 특허 출원 공개 공보 US20170145405호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같이 변형될 수 있다. AAV 혈청형은 변형된 AAV2(예를 들어, Y444F, Y500F, Y730F 및/또는 S662V에서의 변형), 변형된 AAV3(예를 들어, Y705F, Y731F 및/또는 T492V에서의 변형), 및 변형된 AAV6(예를 들어, S663V 및/또는 T492V에서의 변형)을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은 국제 공개 공보 WO2017083722호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같이 변형될 수 있다. AAV 혈청형은 AAV1(Y705+731F+T492V), AAV2(Y444+500+730F+T491V), AAV3(Y705+731F), AAV5, AAV5(Y436+693+719F), AAV6(VP3 변이체 Y705F/Y731F/T492V), AAV8(Y733F), AAV9, AAV9(VP3 변이체 Y731F), 및 AAV10(Y733F)을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 혈청형은 아미노산 SPAKFA(WO2017015102호의 서열번호 24; 본원에서 서열번호 1720) 또는 NKDKLN(WO2017015102호의 서열번호 2; 본원에서 서열번호 1721)을 포함하는 조작된 에피토프를, 국제 특허 공개 공보 WO2017015102(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같이 포함할 수 있다. 에피토프는 AAV8(WO2017015102호의 서열번호 3)의 VP1 캡시드 및/또는 AAV3B(서열번호 3)의 잔기 664 내지 668의 넘버링에 기초하여 아미노산 665 내지 670의 영역에 삽입될 수 있다.

일 구현예에서, AAV 혈청형은 AAV1의 아미노산 잔기 262-268, 370-379, 451-459, 472-473, 493-500, 528-534, 547-552, 588- 597, 709-710, 716-722 중 하나 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7개)에서의 치환을 임의의 조합으로 포함하거나 AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAVrh32.33, 소 AAV 또는 조류 AAV에서의 동등한 아미노산 잔기를 포함할 수 있는 캡시드 단백질을 갖는 AAV 변이체와 같은, 그러나 이에 제한되지 않는, 국제 특허 공개 공보 WO2017058892호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 서열일 수 있거나 이를 가질 수 있다. 아미노산 치환은 WO2017058892호에 기재된 임의의 아미노산 서열일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 일 구현예에서, AAV는 AAV1(WO2017058892호의 서열번호 1)의 잔기 256L, 258K, 259Q, 261S, 263A, 264S, 265T, 266G, 272H, 385S, 386Q, S472R, V473D, N500E 547S, 709A, 710N, 716D, 717N, 718N, 720L, A456T, Q457T, N458Q, K459S, T492S, K493A, S586R, S587G, S588N, T589R 및/또는 722T에서의 아미노산 치환을 임의의 조합으로, AAV5(WO2017058892호의 서열번호 5)의 244N, 246Q, 248R, 249E, 250I, 251K, 252S, 253G, 254S, 255V, 256D, 263Y, 377E, 378N, 453L, 456R, 532Q, 533P, 535N, 536P, 537G, 538T, 539T, 540A, 541T, 542Y, 543L, 546N, 653V, 654P, 656S, 697Q, 698F, 704D, 705S, 706T, 707G, 708E, 709Y 및/또는 710R에서의 아미노산 치환을 임의의 조합으로, AAV5(WO2017058892호의 서열번호 5)의 248R, 316V, 317Q, 318D, 319S, 443N, 530N, 531S, 532Q, 533P, 534A, 535N, 540A, 541T, 542Y, 543L, 545G, 546N, 697Q, 704D, 706T, 708E, 709Y 및/또는 710R에서의 아미노산 치환을 임의의 조합으로, AAV6(WO2017058892호의 서열번호 6)의 264S, 266G, 269N, 272H, 457Q, 588S 및/또는 589I에서의 아미노산 치환을 임의의 조합으로, AAV8(WO2017058892호의 서열번호 8)의 457T, 459N, 496G, 499N, 500N, 589Q, 590N 및/또는 592A에서의 아미노산 치환을 임의의 조합으로, AAV9(WO2017058892호의 서열번호 9)의 451I, 452N, 453G, 454S, 455G, 456Q, 457N 및/또는 458Q에서의 아미노산 치환을 임의의 조합으로 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, AAV는 국제 공개 공보 WO 2017066764호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같이, VP1의 위치 155, 156 및 157 또는 VP2의 위치 17, 18, 19 및 20에서의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 아미노산 서열은 N-S-S, S-X-S, S-S-Y, N-X-S, N-S-Y, S-X-Y 및 N-X-Y일 수 있지만, 이에 제한되지 않으며, 여기서 N, X 및 Y는 독립적으로 비-세린 또는 비-트레오닌 아미노산이지만, 이에 제한되지 않으며, 여기서 AAV는 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 및 AAV12일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, AAV는 VP1의 위치 156, 157 또는 158 또는 VP2의 위치 19, 20 또는 21에서의 적어도 하나의 아미노산의 결실을 포함할 수 있으며, 여기서 AAV는 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 및 AAV12일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

일 구현예에서, AAV는 문헌(참조: Deverman et al., Nature Biotechnology 34(2):204-209 (2016), 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같이 Cre-재조합-기반 AAV 표적화된 진화(Cre-recombination-based AAV targeted evolution; CREATE)에 의해 생성된 혈청형일 수 있다. 일 구현예에서, 이러한 방식으로 생성된 AAV 혈청형은 다른 AAV 혈청형과 비교하여 CNS 형질도입 및/또는 뉴런 및 성상 세포 트로피즘(tropism)을 개선시켰다. 비제한적인 예로서, AAV 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, PHP.B, PHP.B2, PHP.B3, PHP.A, PHP.S, G2A12, G2A15, G2A3, G2B4, 및 G2B5와 같은 펩타이드를 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 이들 AAV 혈청형은 아미노산 588 내지 589 사이의 7-아미노산 삽입물을 갖는 AAV9(서열번호 9 또는 136) 유도체일 수 있다. 이들 7-아미노산 삽입물의 비제한적인 예는 TLAVPFK(PHP.B; 서열번호 1260), SVSKPFL(PHP.B2; 서열번호 1268), FTLTTPK(PHP.B3; 서열번호 1269), YTLSQGW(PHP.A; 서열번호 1275), QAVRTSL(PHP.S; 서열번호 1319), LAKERLS(G2A3; 서열번호 1320), MNSTKNV(G2B4; 서열번호 1321) 및/또는 VSGGHHS(G2B5; 서열번호 1322)를 포함한다.

일 구현예에서, AAV 혈청형은 문헌(참조: Jackson et al, Frontiers in Molecular Neuroscience 9:154 (2016), 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같을 수 있다.

본원에 언급되고/되거나 기재된 DNA 및 RNA 서열에서, 단일 문자 기호는 다음의 의미를 갖는다: 아데닌의 경우 A; 시토신의 경우 C; 구아닌의 경우 G; 티민의 경우 T; 우라실의 경우 U; 아데닌 또는 티민과 같은 약염기의 경우 W; 시토신 및 구아닌과 같은 강한 뉴클레오타이드의 경우 S; 아데닌 및 시토신과 같은 아미노 뉴클레오타이드의 경우 M; 구아닌 및 티민과 같은 케토 뉴클레오타이드의 경우 K, 퓨린 아데닌 및 구아닌의 경우 R; 피리미딘 시토신 및 티민의 경우 Y; A가 아닌 임의의 염기의 경우 B(예를 들어, 시토신, 구아닌, 및 티민); C가 아닌 임의의 염기의 경우 D(예를 들어, 아데닌, 구아닌, 및 티민); G가 아닌 임의의 염기의 경우 H(예를 들어, 아데닌, 시토신, 및 티민); T가 아닌 임의의 염기의 경우 V(예를 들어, 아데닌, 시토신, 및 구아닌); 임의의 뉴클레오타이드(이는 갭이 아님)의 경우 N; 및 제로의 경우 Z.

본원에 언급되고/되거나 기재된 임의의 아미노산 서열에서, 단일 문자 기호는 다음의 의미를 갖는다: 글리신의 경우 G(Gly); 알라닌의 경우 A(Ala); 류신의 경우 L(Leu); 메티오닌의 경우 M(Met); 페닐알라닌의 경우 F(Phe); 트립토판의 경우 W(Trp); 라이신의 경우 K(Lys); 글루타민의 경우 Q(Gln); 글루탐산의 경우 E(Glu); 세린의 경우 S(Ser); 프롤린의 경우 P(Pro); 발린의 경우 V(Val); 이소류신의 경우 I(Ile); 시스테인의 경우 C(Cys); 티로신의 경우 Y(Tyr); 히스티딘의 경우 H(His); 아르기닌의 경우 R(Arg); 아스파라진의 경우 N(Asn); 아스파르트산의 경우 D(Asp); 트레오닌의 경우 T(Thr); 아스파르트산 또는 아스파라진의 경우 B(Asx); 류신 또는 이소류신의 경우 J(Xle); 피로라이신의 경우 O(Pyl); 셀레노시스테인의 경우 U(Sec); 임의의 아미노산의 경우 X(Xaa); 및 글루타민 또는 글루탐산의 경우 Z(Glx).

일부 구현예에서, AAV 혈청형은 PHP.B 또는 AAV9이다. 일부 구현예에서, AAV 혈청형은 시냅신 프로모터와 쌍을 이루어, 편재성이 더한 프로모터(즉, CBA 또는 CMV)가 사용되는 경우에 비해 뉴런 형질도입을 향상시킨다.

일 구현예에서, AAV 혈청형은 AAVPHP.N (PHP.N) 펩타이드 또는 이의 변이체를 포함하는 혈청형이다.

일 구현예에서 AAV 혈청형은 AAVPHP.B (PHP.B) 펩타이드, 또는 이의 변이체를 포함하는 혈청형이다.

일 구현예에서, AAV 혈청형은 AAVPHP.A (PHP.A) 펩타이드, 또는 이의 변이체를 포함하는 혈청형이다.

일 구현예에서, AAV 혈청형은 PHP.S 펩타이드, 또는 이의 변이체를 포함하는 혈청형이다.

일 구현예에서, AAV 혈청형은 PHP.B2 펩타이드, 또는 이의 변이체를 포함하는 혈청형이다.

일 구현예에서, AAV 혈청형은 PHP.B3 펩타이드, 또는 이의 변이체를 포함하는 혈청형이다.

일 구현예에서, AAV 혈청형은 G2B4 펩타이드, 또는 이의 변이체를 포함하는 혈청형이다.

일 구현예에서, AAV 혈청형은 G2B5 펩타이드, 또는 이의 변이체를 포함하는 혈청형이다.

일 구현예에서, AAV 혈청형은 VOY101, 또는 이의 변이체이다. 바람직한 일 구현예에서, VOY101은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 캡시드 서열은 서열번호 1809의 핵산 서열을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 혈청형은 VOY201, 또는 이의 변이체이다. 바람직한 일 구현예에서, VOY201은 서열번호 1810의 핵산 서열을 포함한다.

일 구현예에서 AAV 캡시드는 정맥내 투여 후 혈액 뇌 장벽을 투과할 수 있는 것이다. 이러한 AAV 캡시드의 비제한적인 예는 이에 제한되지는 않지만 AAVPHP.N (PHP.N), AAVPHP.B (PHP.B), PHP.S, G2A3, G2B4, G2B5, G2A12, G2A15, PHP.B2, PHP.B3, 및 AAVPHP.A (PHP.A)와 같은 펩타이드 삽입물을 포함하는 VOY101, VOY201 또는 AAV 캡시드를 포함한다. 일 구현예에서, 혈액 뇌 장벽 투과 캡시드는 VOY101이다. 일 구현예에서, 혈액 뇌 장벽 투과 캡시드는 VOY201이다. 일 구현예에서, 혈액 뇌 장벽 투과 캡시드는 PHP.A 펩타이드 삽입물을 포함한다. 일 구현예에서, 혈액 뇌 장벽 투과 캡시드는 PHP.B 펩타이드 삽입물을 포함한다. 일 구현예에서, 혈액 뇌 장벽 투과 캡시드는 PHP.B2 펩타이드 삽입물을 포함한다. 일 구현예에서, 혈액 뇌 장벽 투과 캡시드는 PHP.B3 펩타이드 삽입물을 포함한다. 일 구현예에서, 혈액 뇌 장벽 투과 캡시드는 G2A3 펩타이드 삽입물을 포함한다. 일 구현예에서, 혈액 뇌 장벽 투과 캡시드는 G2B4 펩타이드 삽입물을 포함한다. 일 구현예에서, 혈액 뇌 장벽 투과 캡시드는 G2B5 펩타이드 삽입물을 포함한다. 일 구현예에서, 혈액 뇌 장벽 투과 캡시드는 PHP.N 펩타이드 삽입물을 포함한다. 일 구현예에서, 혈액 뇌 장벽 투과 캡시드는 PHP.S 펩타이드 삽입물을 포함한다.

바이러스 게놈 구성요소: 역위 말단 반복부( ITR )

본 발명의 AAV 입자는 적어도 하나의 ITR 영역 및 페이로드 영역을 갖는 바이러스 게놈을 포함한다. 일 구현예에서, 바이러스 게놈은 2개의 ITR을 갖는다. 이들 2개의 ITR은 5' 및 3' 말단에서 페이로드 영역의 측면에 있다. ITR은 복제를 위한 인지 부위를 포함하는 복제 기원으로 기능한다. ITR은 상보적이고 대칭적으로 배열될 수 있는 서열 영역을 포함한다. 본 발명의 바이러스 게놈 내로 통합된 ITR은 천연 발생 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 재조합적으로 유도된 폴리뉴클레오타이드 서열로 구성될 수 있다.

ITR은 표 1에 열거된 혈청형 중 어느 것, 또는 이의 유도체으로부터 선택된, 캡시드와 동일한 혈청형으로부터 유도될 수 있다. ITR은 캡시드와 상이한 혈청형의 것일 수 있다. 일 구현예에서, AAV 입자는 하나 초과의 ITR을 갖는다. 비제한적인 예에서, AAV 입자는 2개의 ITR을 포함하는 바이러스 게놈을 갖는다. 일 구현예에서, ITR은 서로 동일한 혈청형의 것이다. 또 다른 구현예에서, ITR은 상이한 혈청형의 것이다. 비제한적인 예는 캡시드와 동일한 혈청형을 갖는 0개, 1개 또는 2개 모두의 ITR을 포함한다. 일 구현예에서 AAV 입자의 바이러스 게놈의 두 ITR은 모두 AAV2 ITR이다.

독립적으로, 각각의 ITR은 약 100 내지 약 150개의 뉴클레오타이드 길이일 수 있다. ITR은 약 100 내지 105개의 뉴클레오타이드 길이, 106 내지 110개의 뉴클레오타이드 길이, 111 내지 115개의 뉴클레오타이드 길이, 116 내지 120개의 뉴클레오타이드 길이, 121 내지 125개의 뉴클레오타이드 길이, 126 내지 130개의 뉴클레오타이드 길이, 131 내지 135개의 뉴클레오타이드 길이, 136 내지 140개의 뉴클레오타이드 길이, 141 내지 145개의 뉴클레오타이드 길이 또는 146 내지 150개의 뉴클레오타이드 길이일 수 있다. 일 구현예에서, ITR은 140 내지 142개의 뉴클레오타이드 길이이다. ITR 길이의 비제한적인 예는 102, 105, 130, 140, 141, 142, 145개의 뉴클레오타이드 길이, 및 이와 적어도 90% 동일성을 갖거나 이와 적어도 95% 동일성을 갖거나 이와 적어도 98% 동일성을 갖거나 또는 이와 적어도 99% 동일성을 갖는 것들이다.

바이러스 게놈 구성요소: 프로모터

일 구현예에서, 바이러스 게놈의 페이로드 영역은 전이유전자(transgene) 표적 특이성 및 발현을 향상시키기 위한 적어도 하나의 요소를 포함한다(참조: 예를 들어, 문헌 [Powell et al. Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015]; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 전이유전자 표적 특이성 및 발현을 향상시키기 위한 요소의 비제한적인 예는 프로모터, 내인성 miRNA, 전사후 제어 요소(PRE), 폴리아데닐화(PolyA) 신호 서열 및 업스트림 인핸서(USE), CMV 인핸서 및 인트론을 포함한다.

당업자는 표적 세포에서 본 발명의 폴리펩타이드의 발현이 종 특이적, 유도성, 조직-특이적, 또는 세포 주기-특이적인 프로모터를 포함하지만, 이에 제한되지 않는, 특정 프로모터를 필요로 할 수 있음을 인식할 수 있다(Parr et al., Nat. Med.3:1145-9 (1997); 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

일 구현예에서, 프로모터는 AAV 입자의 바이러스 게놈의 페이로드 영역에 인코딩된 폴리펩타이드(들)의 발현을 유도할 때 효율적인 것으로 간주된다.

일 구현예에서, 프로모터는 표적화되는 세포에서 발현을 유도할 때 효율적인 것으로 간주되는 프로모터이다.

일 구현예에서, 프로모터는 표적화되는 세포에 대한 트로피즘을 갖는 프로모터이다.

일 구현예에서, 프로모터는 표적화된 조직에서 일정 기간 동안 페이로드의 발현을 유도한다. 프로모터에 의해 유도된 발현은 1시간, 2,시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 2주, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 3주, 22일, 23일, 24일, 25일, 26일, 27일, 28일, 29일, 30일, 31일, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 1년, 13개월, 14개월, 15개월, 16개월, 17개월, 18개월, 19개월, 20개월, 21개월, 22개월, 23개월, 2년, 3년, 4년, 5년, 6년, 7년, 8년, 9년, 10년 또는 10년 초과 기간 동안일 수 있다. 발현은 1-5시간, 1-12시간, 1-2일, 1-5일, 1-2주, 1-3주, 1-4주, 1-2개월, 1-4개월, 1-6개월, 2-6개월, 3-6개월, 3-9개월, 4-8개월, 6-12개월, 1-2년, 1-5년, 2-5년, 3-6년, 3-8년, 4-8년 또는 5-10년 동안일 수 있다. 비제한적인 예로서, 프로모터는 신경 조직 내 페이로드의 지속적인 발현을 위한 약한 프로모터이다.

일 구현예에서, 프로모터는 적어도 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 1년, 2년, 3년 4년, 5년, 6년, 7년, 8년, 9년, 10년, 11년, 12년, 13년, 14년, 15년, 16년, 17년, 18년, 19년, 20년, 21년, 22년, 23년, 24년, 25년, 26년, 27년, 28년, 29년, 30년, 31년, 32년, 33년, 34년, 35년, 36년, 37년, 38년, 39년, 40년, 41년, 42년, 43년, 44년, 45년, 46년, 47년, 48년, 49년, 50년, 55년, 60년, 65년, 또는 65년 초과 동안 본 발명의 폴리펩타이드의 발현을 유도한다.

프로모터는 천연 발생 또는 비-천연 발생 프로모터일 수 있다. 프로모터의 비제한적인 예는 바이러스 프로모터, 식물 프로모터 및 포유동물 프로모터를 포함한다. 일부 구현예에서, 프로모터는 사람 프로모터일 수 있다. 일부 구현예에서, 프로모터는 절단되거나 돌연변이될 수 있다.

대부분의 조직에서 발현을 유도하거나 촉진시키는 프로모터는 사람 연장 인자 1α-서브유닛(EF1α), 거대세포바이러스(CMV) 전초기 인핸서 및/또는 프로모터, 치킨 β-액틴(CBA) 및 이의 유도체 CAG, β 글루쿠로니다제(GUSB), 또는 유비퀴틴 C(UBC)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 조직-특이적 발현 요소는 비제한저으로 근육 특이적 프로모터, B 세포 프로모터, 단핵구 프로모터, 백혈구 프로모터, 대식세포 프로모터, 췌장 샘꽈리세포 프로모터, 내피 세포 프로모터, 폐 조직 프로모터, 성상세포 프로모터, 또는 뉴런 또는 뉴런의 아형, 성상세포, 또는 희소돌기아교세포로의 발현을 제한하는데 사용될 수 있는 신경계 프로모터와 같은 특정 세포 유형으로 발현을 제한하는데 사용될 수 있다.

근육-특이적 프로모터의 비제한적인 예는 포유동물 근육 크레아틴 키나아제(MCK) 프로모터, 포유동물 데스민(DES) 프로모터, 포유동물 트로포닌 I(TNNI2) 프로모터, 및 포유동물 골격 알파-액틴(ASKA) 프로모터를 포함한다(참조: 예를 들어 미국 특허 출원 공개 공보 US 20110212529호, 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

뉴런에 대한 조직-특이적 발현 요소의 비제한적인 예는 뉴런-특이적 에놀라아제(NSE), 혈소판-유래 성장 인자(PDGF), 혈소판-유래 성장 인자 B-사슬(PDGF-β), 시냅신(Syn), 메틸-CpG 결합 단백질 2(MeCP2), Ca^{2 +}/칼모듈린-의존성 단백질 키나아제 II(CaMKII), 대사형 글루타메이트 수용체 2(mGluR2), 신경필라멘트 경질(NFL) 또는 중질(NFH), β-글로빈 꼬마유전자(minigene) nβ2, 프리프로엔케팔린(PPE), 엔케팔린(Enk) 및 흥분성 아미노산 수송체 2(EAAT2) 프로모터를 포함한다. 성상세포에 대한 조직-특이적 발현 요소의 비제한적인 예는 아교 섬유질 산성 단백질(GFAP) 및 EAAT2 프로모터를 포함한다. 희소돌기아교세포에 대한 조직-특이적 발현 요소의 비제한적인 예는 미엘린 염기성 단백질(MBP) 프로모터를 포함한다.

일 구현예에서, 프로모터는 1 kb 미만일 수 있다. 프로모터는 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800 또는 800개 초과의 뉴클레오타이드 길이를 가질 수 있다. 프로모터는 200-300, 200-400, 200-500, 200-600, 200-700, 200-800, 300-400, 300-500, 300-600, 300-700, 300-800, 400-500, 400-600, 400-700, 400-800, 500-600, 500-700, 500-800, 600-700, 600-800 또는 700-800개 사이의 길이를 가질 수 있다.

일 구현예에서, 프로모터는 이에 제한되지는 않지만 CMV 및 CBA와 같은 동일한 또는 상이한 출발 또는 모계 프로모터의 2개 이상의 구성요소의 조합일 수 있다. 각각의 구성요소는 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800 또는 800개 초과의 길이를 가질 수 있다. 각각의 구성요소는 200-300, 200-400, 200-500, 200-600, 200-700, 200-800, 300-400, 300-500, 300-600, 300-700, 300-800, 400-500, 400-600, 400-700, 400-800, 500-600, 500-700, 500-800, 600-700, 600-800 또는 700-800개 사이의 길이를 가질 수 있다. 일 구현예에서, 프로모터는 382개의 뉴클레오타이드 CMV-인핸서 서열과 260개의 뉴클레오타이드 CBA-프로모터 서열의 조합이다.

일 구현예에서, 바이러스 게놈은 편재하는 프로모터를 포함한다. 편재하는 프로모터의 비제한적인 예는 CMV, CBA(유도체 CAG, CBh 등 포함), EF-1α, PGK, UBC, GUSB (hGBp), 및 UCOE(HNRPA2B1-CBX3의 프로모터)를 포함한다.

유 등(Yu et al., Molecular Pain 2011, 7:63; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)은 렌티바이러스 벡터를 사용하여 래트 DRG 세포 및 1차 DRG 세포에서 CAG, EFIα, PGK 및 UBC 프로모터 하에 eGFP의 발현을 평가하고, UBC가 다른 3개의 프로모터보다 더 약한 발현을 보여주었고 모든 프로모터에 대해 나타나는 아교세포 발현이 불과 10 내지 12%임을 밝혀냈다. 소더블롬 등(Soderblom et al., E. Neuro 2015, 2(2): ENEURO.0001-15; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)은 운동 피질에서 주사 후 CMV 및 UBC 프로모터를 사용한 AAV8에서 및 CMV 프로모터를 사용한 AAV2에서의 eGFP의 발현을 평가하였다. UBC 또는 EFIα 프로모터를 함유하는 플라스미드의 비강내 투여는 CMV 프로모터를 사용한 발현보다 더 많은 지속적인 기도 발현을 보여주었다(참조: 예를 들어, Gill et al., Gene Therapy 2001, Vol. 8, 1539-1546; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 후세인 등(Husain et al., Gene Therapy 2009, 16(7): 927-932; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)은 hGUSB 프로모터, HSV-1LAT 프로모터 및 NSE 프로모터를 갖는 HβH 작제물을 평가하였고, 상기 HβH 작제물이 마우스 뇌에서 NSE보다 더 약한 발현을 보여주었음을 밝혀냈다. 파시니 및 월프(Passini and Wolfe, J. Virol. 2001, 12382-12392, 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)는 신생아 마우스에서 심실내 주사 후 HβH 벡터의 장기 효과를 평가하고 적어도 1년 동안 지속적 발현이 있음을 밝혀냈다. 모든 뇌 영역에서의 저발현은 CMV-lacZ, CMV-luc, EF, GFAP, hENK, nAChR, PPE, PPE + wpre, NSE (0.3 kb), NSE (1.8 kb) 및 NSE (1.8 kb + wpre)와 비교하여 NFL 및 NFH 프로모터가 사용될 때 수 등(Xu et al., Gene Therapy 2001, 8, 1323-1332; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 의해 밝혀졌다. 수 등은 프로모터 활성이 내림차순으로 NSE(1.8 kb), EF, NSE(0.3 kb), GFAP, CMV, hENK, PPE, NFL 및 NFH였음을 밝혀냈다. NFL은 650-뉴클레오타이드 프로모터이고, NFH는 920 뉴클레오타이드 프로모터이고, 이 둘 다는 간에서 부재이지만 NFH는 감각 자기수용 뉴런, 뇌 및 척수에서 풍부하고 NFH는 심장에 존재한다. SCN8A는 DRG, 척수 및 뇌 전반에 걸쳐 발현하는 470개의 뉴클레오타이드 프로모터이고, 특히 고발현은 해마 뉴런 및 소뇌 푸르키네 세포, 피질, 시상 및 시상하부에서 나타났다(참조: 예를 들어, 문헌 [Drews et al. Identification of evolutionary conserved, functional noncoding elements in the promoter region of the sodium channel gene SCN8A, Mamm Genome (2007) 18:723-731]; 및 [Raymond et al. Expression of Alternatively Spliced Sodium Channel α-subunit genes, Journal of Biological Chemistry (2004) 279(44) 46234-46241]; 이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

상기 언급된 유, 소더블롬, 길(Gill), 후세인, 파시니, 수, 드류스(Drews) 또는 레이몬드(Raymond)에 의해 교시된 임의의 프로모터가 본 발명에 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 프로모터는 세포 특이적이 아니다.

일 구현예에서, 프로모터는 유비퀴틴 c(UBC) 프로모터이다. UBC 프로모터는 300-350개의 뉴클레오타이드 크기를 가질 수 있다. 비제한적인 예로서, UBC 프로모터는 332개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 프로모터는 β-글루쿠로니다제(GUSB) 프로모터이다. GUSB 프로모터는 350-400개의 뉴클레오타이드 크기를 가질 수 있다. 비제한적인 예로서, GUSB 프로모터는 378개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 프로모터는 신경필라멘트 경질(NFL) 프로모터이다. NFL 프로모터는 600-700개의 뉴클레오타이드 크기를 가질 수 있다. 비제한적인 예로서, NFL 프로모터는 650개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 프로모터는 신경필라멘트 중질(NFH) 프로모터이다. NFH 프로모터는 900-950개의 뉴클레오타이드 크기를 가질 수 있다. 비제한적인 예로서, NFH 프로모터는 920개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 프로모터는 SCN8A 프로모터이다. SCN8A 프로모터는 450-500개의 뉴클레오타이드 크기를 가질 수 있다. 비제한적인 예로서, SCN8A 프로모터는 470개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 프로모터는 프라탁신(FXN) 프로모터이다.

일 구현예에서, 프로모터는 포스포글리세레이트 키나아제 1(PGK) 프로모터이다.

일 구현예에서, 프로모터는 치킨 β-액틴(CBA) 프로모터이다.

일 구현예에서, 프로모터는 거대세포바이러스(CMV) 프로모터이다.

일 구현예에서, 프로모터는 H1 프로모터이다.

일 구현예에서, 프로모터는 조작된 프로모터이다.

일 구현예에서, 프로모터는 간 또는 골격근 프로모터이다. 간 프로모터의 비제한적인 예는 사람 α-1-항트립신(hAAT) 및 티록신 결합 글로불린(TBG)을 포함한다. 골격근 프로모터의 비제한적인 예는 데스민, MCK 또는 합성 C5-12를 포함한다.

일 구현예에서, 프로모터는 RNA pol III 프로모터이다. 비제한적인 예로서, RNA pol III 프로모터는 U6이다. 비제한적인 예로서, RNA pol III 프로모터는 H1이다.

일 구현예에서, 프로모터는 심근 세포-특이적 프로모터이다. 심근 세포-특이적 프로모터의 비제한적인 예는 αMHC, cTnT, 및 CMV-MLC2k를 포함한다.

일 구현예에서, 바이러스 게놈은 2개의 프로모터를 포함한다. 비제한적인 예로서, 프로모터는 EF1α 프로모터 및 CMV 프로모터이다.

일 구현예에서, 바이러스 게놈은 인핸서 요소, 프로모터 및/또는 5'UTR 인트론을 포함한다. "인핸서"로 본원에서 또한 언급되는, 인핸서 요소는 CMV 인핸서일 수 있지만, 이에 제한되지 않고, 프로모터는 CMV, CBA, UBC, GUSB, NSE, 시냅신, MeCP2, 및 GFAP 프로모터일 수 있지만, 이에 제한되지 않고 5'UTR/인트론은 SV40, 및 CBA-MVM일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 비제한적인 예로서, 조합하여 사용되는, 인핸서, 프로모터 및/또는 인핸서는 다음과 같을 수 있다: (1) CMV 인핸서, CMV 프로모터, SV40 5'UTR 인트론; (2) CMV 인핸서, CBA 프로모터, SV 40 5'UTR 인트론; (3) CMV 인핸서, CBA 프로모터, CBA-MVM 5'UTR 인트론; (4) UBC 프로모터; (5) GUSB 프로모터; (6) NSE 프로모터; (7) 시냅신 프로모터; (8) MeCP2 프로모터 및 (9) GFAP 프로모터.

일 구현예에서, 바이러스 게놈은 조작된 프로모터를 포함한다.

또 다른 구현예에서, 바이러스 게놈은 천연 발현 단백질로부터의 프로모터를 포함한다.

바이러스 게놈 구성요소: 미번역 영역(UTR)

정의상, 유전자의 야생형 미번역 영역(UTR)은 전사되지만 번역되지 않는다. 일반적으로, 5' UTR은 전사 개시 부위에서 개시하여 개시 코돈에서 종료되고, 3' UTR은 정지 코돈 직후에 개시하여 전사를 위한 종결 신호까지 계속된다.

특정 표적 기관의 풍부하게 발현된 유전자에서 전형적으로 발견되는 특징은 안정성 및 단백질 생산을 향상시키기 위해 UTR로 조작될 수 있다. 비제한적인 예로서, 간에서 정상적으로 발현된 mRNA로부터의 5' UTR(예를 들어, 알부민, 혈청 아밀로이드 A, 아포지단백질 A/B/E, 트랜스페린, 알파 태아단백질, 에리트로포이에틴 또는 인자 VIII)은 간 세포주 또는 간에서의 발현을 향상시키기 위해 본 발명의 AAV 입자의 바이러스 게놈에 사용될 수 있다.

어떠한 이론으로 국한시키고자 하는 것은 아니지만, 야생형 5' 비번역 영역(UTR)은 번역 개시에서 역할을 하는 특징을 포함한다. 리보솜이 많은 유전자의 번역을 개시하는 과정에 관여하는 것으로 흔히 알려진 코작 서열은 일반적으로 5' UTR에 포함된다. 코작 서열은 공통 CCR(A/G)CCAUGG를 가지며, 여기서 R은 개시 코돈(ATG)의 업스트림에서 세 번째 염기인 퓨린(아데닌 또는 구아닌)이고, 이는 또 다른 'G'가 뒤따른다.

일 구현예에서, 바이러스 게놈 내 5'UTR은 코작 서열을 포함한다.

일 구현예에서, 바이러스 게놈 내 5'UTR은 코작 서열을 포함하지 않는다.

어떠한 이론으로 국한시키고자 하는 것은 아니지만, 야생형 3' UTR은 그 안에 내재된 아데노신 및 우리딘의 연장부(stretch)를 갖는 것으로 알려져 있다. 이들 AU 풍부 시그니처는 특히 회전율(rates of turnover)을 갖는 유전자에서 널리 퍼져있다. 이의 서열 특징 및 기능적 특성에 기초하여, AU 풍부 요소(ARE)는 3가지 클래스로 분리될 수 있다(Chen et al, 1995, 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨): 이에 제한되지는 않지만 c-Myc 및 MyoD와 같은 클래스 I ARE는 U-풍부 영역 내에 AUUUA 모티프의 여러 분산된 사본을 함유한다. 이에 제한되지는 않지만 GM-CSF 및 TNF-a와 같은 클래스 II ARE는 2개 이상의 중첩된 UUAUUUA(U/A)(U/A) 노나머(nonamer)를 갖는다. 이에 제한되지는 않지만 c-Jun 및 미오게닌과 같은 클래스 III ARES는 그다지 잘 확립되어 있지 않다. 이들 U 풍부 영역은 AUUUA 모티프를 함유하지 않는다. ARE에 결합하는 대부분의 단백질은 메신저를 불안정화시키는 것으로 알려져 있는 반면, ELAV 계열의 구성원, 특히 HuR은 mRNA의 안정성을 증가시키는 것으로 기록되었다. HuR은 3가지 클래스 모두의 ARE에 결합한다. 핵산 분자의 3' UTR로 HuR 특이적 결합 부위를 조작하는 것은 HuR 결합을 유도하여, 생체내에서 메신저의 안정화를 초래할 것이다.

3'UTR AU 풍부 요소(ARE)의 도입, 제거 또는 변형은 폴리뉴클레오타이드의 안정성을 조절하기 위해 사용될 수 있다. 특정 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, 바이러스 게놈의 페이로드 영역을 조작할 때, ARE의 하나 이상의 사본을 도입하여 폴리뉴클레오타이드를 덜 안정적으로 만들어 번역을 축소하고 결과로 생성된 단백질의 생산을 감소시킬 수 있다. 마찬가지로, ARE가 식별되고 제거되거나 돌연변이되어 세포내 안정성을 증가시키고, 따라서 결과로 생성된 단백질의 번역 및 생산을 증가시킬 수 있다.

일 구현예에서, 바이러스 게놈의 3' UTR은 poly-A 테일의 주형 첨가를 위한 올리고(dT) 서열을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 바이러스 게놈은 적어도 하나의 miRNA 씨드(seed), 결합 부위 또는 전체 서열을 포함할 수 있다. 마이크로RNA(또는 miRNA 또는 miR)는 핵산 표적 부위에 결합하고 핵산 분자 안정성을 감소시키거나 번역을 억제함으로써 유전자 발현을 하향-조절하는 19-25개의 뉴클레오티드 비코딩 RNA이다. 마이크로RNA 서열은 "씨드" 영역, 즉 성숙한 마이크로RNA의 위치 2-8 영역의 서열을 포함하며, 이 서열은 핵산의 miRNA 표적 서열에 대한 완벽한 왓슨-크릭 상보성(Watson-Crick complementarity)을 갖는다.

일 구현예에서, 바이러스 게놈은 적어도 하나의 miRNA 결합 부위, 전체 서열 또는 씨드 영역을 포함시키거나 변형하거나 제거하도록 조작될 수 있다.

당업계에 공지된 임의의 유전자로부터의 임의의 UTR은 AAV 입자의 바이러스 게놈에 통합될 수 있다. 이들 UTR, 또는 이들의 일부는 이들이 선택된 유전자에서와 동일한 배향으로 배치될 수 있거나 배향 또는 위치에서 변경될 수 있다. 일 구현예에서, AAV 입자의 바이러스 게놈에 사용된 UTR은 당업계에 공지된 하나 이상의 다른 5'UTR 또는 3'UTR로 역전되거나, 단축되거나, 연장되거아 만들어질 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, UTR과 관련하여 용어 "변경된"은 UTR이 기준 서열과 비교하여 어떤 방식으로 변경되었음을 의미한다. 예를 들어, 3' 또는 5' UTR은 상기 교시된 바와 같이 배향 또는 위치의 변화에 의해 야생형 또는 고유 UTR에 비해 변경될 수 있거나 추가의 뉴클레오타이드의 도입, 뉴클레오타이드의 결실, 뉴클레오타이드의 교환 또는 전위에 의해 변경될 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자의 바이러스 게놈은 야생형 UTR의 변이체가 아닌 적어도 하나의 인공 UTR을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 바이러스 게놈은 단백질이 공통의 기능, 구조, 특징 또는 특성을 공유하는 전사체 군으로부터 선택된 UTR을 포함한다.

바이러스 게놈 구성요소: 폴리아데닐화 서열

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자의 바이러스 게놈은 적어도 하나의 폴리아데닐화 서열을 포함한다. AAV 입자의 바이러스 게놈은 페이로드 코딩 서열의 3' 말단 및 3'ITR의 5' 말단 사이의 폴리아데닐화 서열을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열 또는 "polyA 서열"은 0개 내지 약 500개의 뉴클레오타이드 길이 범위일 수 있다. 폴리아데닐화 서열은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 및 500개의 뉴클레오타이드 길이일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 50-100개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 50-150개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 50-160개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 50-200개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 60-100개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 60-150개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 60-160개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 60-200개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 70-100개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 70-150개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 70-160개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 70-200개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 80-100개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 80-150개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 80-160개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 80-200개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 90-100개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 90-150개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 90-160개의 뉴클레오타이드 길이이다.

일 구현예에서, 폴리아데닐화 서열은 90-200개의 뉴클레오타이드 길이이다.

바이러스 게놈 구성요소: 인트론

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자의 바이러스 게놈은 인트론과 같이 전이유전자 표적 특이성 및 발현을 향상시키기 위한 적어도 하나의 요소를 포함한다(참조: 예를 들어, 문헌 [Powell et al. Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, Discov. Med, 2015, 19(102): 49-57]; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 인트론의 비제한적인 예는 MVM(67-97 bps), F.IX 절단된 인트론 1(300 bps), β-글로빈 SD/면역글로불린 중쇄 스플라이스 수용체(250 bps), 아데노바이러스 스플라이스 공여체/면역글로빈 스플라이스 수용체(500 bps), SV40 후기 스플라이스 공여체/스플라이스 수용체(19S/16S)(180 bps) 및 하이브리드 아데노바이러스 스플라이스 공여체/IgG 스플라이스 수용체(230 bps)를 포함한다.

일 구현예에서, 인트론 또는 인트론 부분은 100-500개의 뉴클레오타이드 길이일 수 있다. 인트론은 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490 또는 500개의 뉴클레오타이드의 길이를 가질 수 있다. 인트론은 80-100, 80-120, 80-140, 80-160, 80-180, 80-200, 80-250, 80-300, 80-350, 80-400, 80-450, 80-500, 200-300, 200-400, 200-500, 300-400, 300-500, 또는 400-500개의 뉴클레오타이드 사이의 길이를 가질 수 있다.

바이러스 게놈 구성요소: 스터퍼(Stuffer) 서열

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자의 바이러스 게놈은 스터퍼 또는 필러 서열과 같이 패키징 효율 및 발현을 개선시키기 위한 적어도 하나의 요소를 포함한다. 스터퍼 서열의 비제한적인 예는 알부민 및/또는 알파-1 항트립신을 포함한다. 스터퍼 서열로 사용하기 위해 임의의 공지된 바이러스, 포유동물 또는 식물 서열이 조작될 수 있다.

일 구현예에서, 스터퍼 또는 필러 서열은 약 100-3500개의 뉴클레오타이드 길이일 수 있다. 스터퍼 서열은 약 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200, 1300, 1400, 1500, 1600, 1700, 1800, 1900, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900 또는 3000개의 뉴클레오타이드의 길이를 가질 수 있다.

바이러스 게놈 구성요소: miRNA

일 구현예에서, 바이러스 게놈은 전이유전자의 발현을 감소시키기 위해 miRNA를 인코딩하는 적어도 하나의 서열을 포함하며 특정 조직이다. miRNAs 및 이들의 표적화된 조직은 당업계에 잘 알려져 있다. 비제한적인 예로서, miR-122 miRNA는 바이러스 게놈에서 인코딩되어 간에서 바이러스 게놈의 발현을 감소시킬 수 있다.

AAV 제조

본 발명은 바이러스 복제 세포에서 바이러스 게놈 복제에 의한 파르보바이러스 입자, 예를 들어 AAV 입자의 제조 방법을 제공한다.

본 발명에 따르면, 페이로드 영역을 포함하는 바이러스 게놈은 바이러스 복제 세포에서 생산된 AAV 입자에 도입될 것이다. AAV 입자의 제조 방법은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 문헌(참조: 미국 특허 US6204059호, US5756283호, US6258595호, US6261551호, US6270996호, US6281010호, US6365394호, US6475769호, US6482634호, US6485966호, US6943019호, US6953690호, US7022519호, US7238526호, US7291498호 및 US7491508호, US5064764호, US6194191호, US6566118호, US8137948호; 또는 국제 공개 공보 WO1996039530호, WO1998010088호, WO1999014354호, WO1999015685호, WO1999047691호, WO2000055342호, WO2000075353호 및 WO2001023597호; [Methods In Molecular Biology, ed. Richard, Humana Press, NJ (1995)]; [O'Reilly et al., Baculovirus Expression Vectors, A Laboratory Manual, Oxford Univ. Press (1994)]; [Samulski et al.,J. Vir.63:3822-8 (1989)]; [Kajigaya et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 88: 4646-50 (1991)]; [Ruffing et al., J. Vir. 66:6922-30 (1992)]; [Kimbauer et al., Vir., 219:37-44 (1996)]; [Zhao et al., Vir.272:382-93 (2000)]; 이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재되어 있다. 일 구현예에서, AAV 입자는 국제 특허 공개 공보 WO2015191508(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 방법을 사용하여 제조된다.

재조합 AAV 바이러스 입자의 제조에 통상적으로 사용된 바이러스 복제 세포는 HEK293 세포, COS 세포, HeLa 세포, KB 세포, 및 미국 특허 US6156303호, US5387484호, US5741683호, US5691176호, 및 US5688676호; 미국 특허 출원 공개 공보 2002/0081721호, 및 국제 특허 공개 공보 WO 2000047757호, WO 2000024916호, 및 WO 1996017947호(이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 다른 포유동물 세포주를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

일부 구현예에서, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는 형질도입 효율이 향상된(증가된, 개선된) AAV 입자를 생성하는 방법을 제공한다: 1) 백미드(bacmid) 벡터 및 바이러스 작제물 벡터 및/또는 AAV 페이로드 작제물 벡터를 사용하여 적격 박테리아 세포를 공-형질감염시키는 단계, 2) 결과로 생성된 바이러스 작제물 발현 벡터 및 AAV 페이로드 작제물 발현 벡터를 분리하고 바이러스 복제 세포를 별도로 형질감염시키는 단계, 3) 결과로 생성된 페이로드 및 바이러스 작제물 발현 벡터 또는 AAV 페이로드 작제물 발현 벡터를 포함하는 바이러스 작제물 입자를 분리하고 정제하는 단계, 4) AAV 페이로드 및 바이러스 작제물 발현 벡터 또는 AAV 페이로드 작제물 발현 벡터를 포함하는 바이러스 작제물 입자 둘 다를 갖는 바이러스 복제 세포를 공-감염시키는 단계, 및 5) 바이러스 게놈을 포함하는 AAV 입자를 수거하고 정제하는 단계.

일부 구현예에서, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는 AAV 입자를 생성하는 방법을 제공한다: 1) 이에 제한되지는 않지만 HEK293 세포와 같은 포유동물 세포를 페이로드 영역, rep 및 cap 유전자를 발현시키는 작제물 및 헬퍼 작제물과 동시에 공-형질감염시키는 단계, 2) 바이러스 게놈을 포함하는 AAV 입자를 수거하고 정제하는 단계.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자의 바이러스 게놈은 임의로 선택 마커를 인코딩한다. 선택 마커는 수용체, CD 마커, 렉틴, 인테그린, 또는 이의 절단된 버전을 포함하지만, 이에 제한되지 않는, 세포의 표면에서 발현되는 임의의 단백질과 같은 세포-표면 마커를 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 선택 마커 수용체 유전자는 문헌(참조: 국제 공개 공보 1996023810호 및 WO 1996030540호; [Heim et al., Current Biology 2:178-182 (1996)]; [Heim et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1995)]; 또는 [Heim et al., Science 373:663-664 (1995)]; 이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재되어 있다.

게놈 크기

일 구현예에서, 본원에 기재된 페이로드를 포함하는 AAV 입자는 단일 가닥 또는 이중 가닥 바이러스 게놈일 수 있다. 바이러스 게놈의 크기는 소형, 중형, 대형 또는 최대 크기일 수 있다. 추가로, 바이러스 게놈은 프로모터 및 polyA 테일을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 페이로드를 포함하는 바이러스 게놈은 소형 단일 가닥 바이러스 게놈일 수 있다. 소형 단일 가닥 바이러스 게놈은 2.1 내지 3.5 kb 크기, 예를 들어 약 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 및 3.5 kb 크기일 수 있다. 비제한적인 예로서, 소형 단일 가닥 바이러스 게놈은 3.2 kb 크기일 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 소형 단일 가닥 바이러스 게놈은 2.2 kb 크기일 수 있다. 추가로, 바이러스 게놈은 프로모터 및 polyA 테일을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 페이로드를 포함하는 바이러스 게놈은 소형 이중 가닥 바이러스 게놈일 수 있다. 소형 이중 가닥 바이러스 게놈은 1.3 내지 1.7 kb 크기, 예를 들어 약 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 및 1.7 kb 크기일 수 있다. 비제한적인 예로서, 소형 이중 가닥 바이러스 게놈은 1.6 kb 크기일 수 있다. 추가로, 바이러스 게놈은 프로모터 및 polyA 테일을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 페이로드를 포함하는 바이러스 게놈 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드, siRNA 또는 dsRNA, 또는 miRNA는 중형 단일 가닥 바이러스 게놈일 수 있다. 중형 단일 가닥 바이러스 게놈은 3.6 내지 4.3 kb 크기, 예를 들어 약 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2 및 4.3 kb 크기일 수 있다. 비제한적인 예로서, 중형 단일 가닥 바이러스 게놈은 4.0 kb 크기일 수 있다. 추가로, 바이러스 게놈은 프로모터 및 polyA 테일을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 페이로드를 포함하는 바이러스 게놈은 중형 이중 가닥 바이러스 게놈일 수 있다. 중형 이중 가닥 바이러스 게놈은 1.8 내지 2.1 kb 크기, 예를 들어 약 1.8, 1.9, 2.0, 및 2.1 kb 크기일 수 있다. 비제한적인 예로서, 중형 이중 가닥 바이러스 게놈은 2.0 kb 크기일 수 있다. 추가로, 바이러스 게놈은 프로모터 및 polyA 테일을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 페이로드를 포함하는 바이러스 게놈은 대형 단일 가닥 바이러스 게놈일 수 있다. 대형 단일 가닥 바이러스 게놈은 4.4 내지 6.0 kb 크기, 예를 들어 약 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9 및 6.0 kb 크기일 수 있다. 비제한적인 예로서, 대형 단일 가닥 바이러스 게놈은 4.7 kb 크기일 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 대형 단일 가닥 바이러스 게놈은 4.8 kb 크기일 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 대형 단일 가닥 바이러스 게놈은 6.0 kb 크기일 수 있다. 추가로, 바이러스 게놈은 프로모터 및 polyA 테일을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 페이로드를 포함하는 바이러스 게놈은 대형 이중 가닥 바이러스 게놈일 수 있다. 대형 이중 가닥 바이러스 게놈은 2.2 내지 3.0 kb 크기, 예를 들어 약 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 및 3.0 kb 크기일 수 있다. 비제한적인 예로서, 대형 이중 가닥 바이러스 게놈은 2.4 kb 크기일 수 있다. 추가로, 바이러스 게놈은 프로모터 및 polyA 테일을 포함할 수 있다.

본 발명의 페이로드

본 발명의 AAV 입자는 적어도 하나의 페이로드 영역을 포함한다. 본원에 사용된 "페이로드" 또는 "페이로드 영역"은 바이러스 게놈에 의해 또는 그 안에 인코딩된 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 영역 또는 이러한 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 영역의 발현 산물, 예를 들어, 전이유전자, 폴리펩타이드 또는 다중-폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 또는 조절 핵산(modulatory nucleic acid) 또는 조절 핵산(regulatory nucleic acid)을 나타낸다. 본 발명의 페이로드는 전형적으로 폴리펩타이드 또는 이들의 단편 또는 변이체를 인코딩힌다.

페이로드 영역은 mRNA의 자연 조직과 유사하거나 이를 반영하는 영역을 반영하도록 구성될 수 있다.

페이로드 영역은 코딩 및 비-코딩 핵산 서열의 조합을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 페이로드 영역은 코딩 또는 비-코딩 RNA를 인코딩할 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 하나 초과의 관심 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 페이로드 영역을 갖는 바이러스 게놈을 포함한다. 이러한 구현예에서, 하나 초과의 폴리펩타이드를 인코딩하는 바이러스 게놈은 복제되어 바이러스 입자로 패키징될 수 있다. 하나 초과의 폴리펩타이드를 포함하는 바이러스 입자로 형질도입된 표적 세포는 단일 세포에서 각각의 폴리펩타이드를 발현시킬 수 있다.

일 구현예에서, AAV 페이로드 영역은 도 1에 도시된 구성요소를 포함할 수 있다. 페이로드 영역(110)은 바이러스 게놈(100) 내에 위치한다. 페이로드 영역(110)의 5' 및/또는 3' 말단에는 적어도 하나의 역위 말단 반복부(ITR)(120)가 있을 수 있다. 일 구현예에서, 페이로드 영역 내에는, 프로모터 영역(130), 인트론 영역(140) 및 코딩 영역(150)이 있다.

AAV 입자 페이로드 영역이 폴리펩타이드를 인코딩하는 경우, 폴리펩타이드는 펩타이드 또는 단백질일 수 있다. 비제한적인 예로서, 페이로드 영역은 이에 제한되지는 않지만 ApoE2, ApoE3 및/또는 ApoE4와 같이 아포지질단백질 E(APOE)의 적어도 하나의 대립유전자를 인코딩할 수 있다. 두 번째 비제한적인 예로서, 페이로드 영역은 사람 또는 영장류 프라탁신 단백질, 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 페이로드 영역은 항체 또는 이의 단편을 인코딩할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 페이로드 영역은 사람 AADC, 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 페이로드 영역은 사람 ATP2A2, 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩할 수 있다. 추가의 또 다른 예로서, 페이로드 영역은 사람 S100A1, 또는 이의 단편 또는 변이체를 인코딩할 수 있다. 본원에 기재된 폴리펩타이드를 인코딩하는 AAV 바이러스 게놈은 사람 질환, 바이러스, 감염 수의학 분야 및 다양한 생체내 및 시험관내 세팅에 유용할 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 신경계 질환 및/또는 장애의 치료, 예방, 완화 또는 개선을 위한 의약 분야에 유용하다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 타우병증의 치료, 예방, 완화 또는 개선을 위한 의약 분야에 유용하다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 알츠하이머병의 치료, 예방, 완화 또는 개선을 위한 의약 분야에 유용하다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 프리드리히 실조증(Friedreich's 운동실조), 또는 프라탁신 단백질의 손실 또는 부분적 손실에 기인하는 임의의 질환의 치료, 예방, 완화 또는 개선을 위한 의약 분야에 유용하다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 파킨슨병의 치료, 예방, 완화 또는 개선을 위한 의약 분야에 유용하다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 근위축성 측삭경화증의 치료, 예방, 완화 또는 개선을 위한 의약 분야에 유용하다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 헌팅턴병의 치료, 예방, 완화 또는 개선을 위한 의약 분야에 유용하다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 심혈관 질환의 치료, 예방, 완화 또는 개선을 위한 의약 분야에 유용하다.

폴리펩타이드 및 변이체의 성질

본 발명의 바이러스 게놈의 페이로드 영역에 의해 인코딩된 아미노산 서열은 하나 이상의 핵산, 핵산의 단편 또는 상기 언급된 것들 중 어느 것의 변이체에 의해 독립적으로 인코딩될 수 있는, 전체 폴리펩타이드, 다수의 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드의 단편으로 변역될 수 있다. 본원에 사용된 "폴리펩타이드"는 가장 흔히 펩타이드 결합에 의해 함께 연결된 아미노산 잔기(천연 또는 비천연)의 중합체를 의미한다. 본원에 사용된 상기 용어는 임의의 크기, 구조 또는 기능의 단백질, 폴리펩타이드, 및 펩타이드를 나타낸다. 일부 경우에, 인코딩된 폴리펩타이드는 약 50개 미만의 아미노산이며, 이때 폴리펩타이드는 펩타이드라고 불린다. 폴리펩타이드가 펩타이드인 경우, 이는 적어도 약 2, 3, 4, 또는 적어도 5개 아미노산 잔기 길이일 것이다. 따라서, 폴리펩타이드는 유전자 산물, 천연 발생 폴리펩타이드, 합성 폴리펩타이드, 상동체, 오솔로그(ortholog), 파라로그(paralog), 단편 및 다른 등가물, 변이체, 및 전술한 것의 유사체를 포함한다. 폴리펩타이드는 단일 분자일 수 있거나 다중-분자 복합체 예를 들어 이량체, 삼량체 또는 사량체일 수 있다. 이는 또한 단일 사슬 또는 다중사슬 폴리펩타이드를 포함할 수 있으며, 결합되거나 연결될 수 있다. 용어 폴리펩타이드는 또한 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 천연 발생 아미노산의 인공 화학적 유사체인 아미노산 중합체에 적용될 수 있다.

용어 "폴리펩타이드 변이체"는 고유 또는 기준 서열과 아미노산 서열이 상이한 분자를 나타낸다. 아미노산 서열 변이체는 고유 또는 기준 서열과 비교하여, 아미노산 서열 내의 특정 위치에서 치환, 결실 및/또는 삽입을 가질 수 있다. 보통, 변이체는 고유 또는 기준 서열과 적어도 약 50% 동일성(상동성)을 가질 것이며, 바람직하게는, 이는 고유 또는 기준 서열과 적어도 약 80%, 더 바람직하게는 적어도 약 90% 동일할(상동일) 것이다.

일부 구현예에서 "변이체 모방체"가 제공된다. 본원에 사용된 용어 "변이체 모방체"는 활성화 서열을 모방할 수 있는 하나 이상의 아미노산을 함유하는 것이다. 예를 들어, 글루타메이트는 포스포로-트레오닌 및/또는 포스포로-세린의 모방체 역할을 할 수 있다. 대안적으로, 변이체 모방체는 불활성화 또는 모방체를 함유하는 불활성화 생성물을 초래할 수 있으며, 예를 들어, 페닐알라닌은 티로신에 대한 불활성화 치환으로 작용할 수 있거나; 또는 알라닌은 세린에 대한 불활성화 치환으로 작용할 수 있다.

용어 "아미노산 서열 변이체"는 고유 또는 개시 서열과 비교하여 아미노산 서열에서 약간의 차이가 있는 분자를 나타낸다. 아미노산 서열 변이체는 아미노산 서열 내의 특정 위치에서 치환, 결실 및/또는 삽입을 가질 수 있다. "고유" 또는 "개시" 서열을 야생형 서열과 혼동해서는 안된다. 본원에 사용된 고유 또는 개시 서열은 비교될 수 있는 최초 분자를 지칭하는 상대적 용어이다. "고유" 또는 "개시" 서열 또는 분자는 야생형(천연에서 발견되는 서열)을 나타낼 수 있지만 야생형 서열일 필요는 없다.

일반적으로, 변이체는 고유 서열에 대해 적어도 약 70% 상동성을 가질 것이며, 바람직하게는, 고유 서열에 대해 적어도 약 80%, 더 바람직하게는 적어도 약 90% 상동일 것이다. 아미노산 서열에 적용된 "상동성"은 서열을 정렬하고, 필요하면, 최대 상동성 백분율을 달성하기 위해 갭을 도입한 후 제2 서열의 아미노산 서열 내의 잔기와 동일한 후보 아미노산 서열 내 잔기의 백분율로서 정의된다. 정렬을 위한 방법 및 컴퓨터 프로그램은 당업계에 잘 알려져 있다. 상동성은 동일성 백분율의 계산에 의존하지만 계산에 도입된 갭과 페널티로 인해 값이 달라질 수 있음이 이해된다.

아미노산 서열에 적용된 "상동체"는 제2 종의 제2 서열과 상당한 동일성을 갖는 다른 종의 상응하는 서열을 의미한다.

"유사체"는 모 폴리펩타이드의 특성을 계속 유지하는 아미노산 잔기의 하나 이상의 아미노산 변경, 예를 들어, 치환, 첨가 또는 결실에 의해 달라지는 폴리펩타이드 변이체를 포함하는 것으로 의도된다.

서열 태그 또는 아미노산, 예를 들어 하나 이상의 라이신이 본 발명의 펩타이드 서열에 첨가될 수 있다(예를 들어, N-말단 또는 C-말단에서). 서열 태그는 펩타이드 정제 또는 국소화에 사용될 수 있다. 라이신은 펩타이드 용해도를 증가시키거나 비오티닐화를 가능하게 하기 위해 사용될 수 있다. 대안적으로, 펩타이드 또는 단백질의 아미노산 서열의 카복시 및 아미노 말단 영역에 위치한 아미노산 잔기는 임의로 결실되어 절단된 서열을 제공할 수 있다. 예를 들어, 가용성이거나 고체 지지체에 연결된 더 큰 서열의 일부로서의 서열의 발현과 같이 서열의 용도에 따라 특정 아미노산(예를 들어, C-말단 또는 N-말단 잔기)이 대안적으로 결실될 수 있다.

단백질을 언급할 때 "치환형 변이체"는 고유 또는 개시 서열 내 적어도 하나의 아미노산 잔기가 제거되고 동일한 위치에 상이한 아미노산이 그 자리에 삽입된 것이다. 치환은 분자 내의 하나의 아미노산만이 치환되는 단일 치환일 수 있거나, 또는 둘 이상의 아미노산이 동일한 분자에서 치환되는 다중 치환일 수 있다.

본원에 사용된 용어 "보존적 아미노산 치환"은 크기, 전하 또는 극성이 유사한 상이한 아미노산을 갖는 서열에 일반적으로 존재하는 아미노산의 치환을 나타낸다. 보존적 치환의 예는 또 다른 비극성 잔기에 대한 이소류신, 발린 및 류신과 같은 비극성(소수성) 잔기의 치환을 포함한다. 마찬가지로, 보존적 치환의 예는 아르기닌과 라이신 사이, 글루타민과 아스파라진 사이, 그리고 글리신과 세린 사이와 같은 또 다른 잔기에 대한 하나의 극성(친수성) 잔기의 치환을 포함한다. 추가로, 또 다른 잔기에 대한 라이신, 아르기닌 또는 히스티딘과 같은 염기성 잔기의 치환, 또는 또 다른 산성 잔기에 대한 아스파르트산 또는 글루탐산과 같은 산성 잔기의 치환은 보존적 치환의 추가적인 예이다. 비-보존적 치환의 예로는 시스테인, 글루타민, 글루탐산 또는 라이신과 같은 극성(친수성) 잔기에 대한 이소류신, 발린, 류신, 알라닌, 메티오닌과 같은 비극성(소수성) 아미노산 잔기의 치환 및/또는 비극성 잔기에 대한 극성 잔기의 치환을 포함한다.

단백질을 언급할 때 "삽입형 변이체"는 고유 또는 개시 서열 내 특정 위치에 있는 아미노산에 바로 인접하여 삽입된 하나 이상의 아미노산을 갖는 것이다. 아미노산에 "바로 인접하여"는 아미노산의 알파-카복시 또는 알파-아미노 관능 그룹에 연결된 것을 의미한다.

단백질을 언급할 때 "결실형 변이체"는 고유 또는 개시 아미노산 서열 내 하나 이상의 아미노산이 제거된 것이다. 일반적으로, 결실 변이체는 분자의 특정 영역에서 하나 이상의 아미노산이 결실될 것이다.

본원에 사용된 용어 "유도체"는 용어 "변이체"와 동의어로 사용되며, 기준 분자 또는 개시 분자에 대해 임의의 방식으로 변형 또는 변경된 분자를 나타낸다. 일부 구현예에서, 유도체는 유기 단백질성 또는 비-단백질성 유도체화제로 변형된 고유 또는 개시 단백질, 및 번역후 변형을 포함한다. 공유 변형은 전통적으로 단백질의 표적화된 아미노산 잔기를 선택된 측쇄 또는 말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시키거나, 선택된 재조합 숙주 세포에서 기능하는 번역후 변형의 메카니즘을 이용함으로써 도입된다. 결과로 생성된 공유 유도체는 생물학적 활성, 면역검정, 또는 재조합 당단백질의 면역친화성 정제를 위한 항-단백질 항체의 제조에 중요한 잔기를 동정하는 프로그램에 유용하다. 이러한 변형은 당해 기술분야의 통상의 기술 내에 있으며 과도한 실험 없이 수행된다.

번역후 특정 변형은 발현된 폴리펩타이드에 대한 재조합 숙주 세포의 작용 결과이다. 글루타미닐 및 아스파라지닐 잔기는 종종 상응하는 글루타밀 및 아스파르틸 잔기로 번역후 탈아미드화된다. 대안적으로, 이들 잔기는 약산성 조건하에 탈아미드화된다. 이들 잔기 중 어느 형태도 본 발명에 따라 사용되는 단백질에 존재할 수 있다.

다른 번역후 변형은 프롤린 및 라이신의 하이드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 하이드록실 그룹의 인산화, 라이신, 아르기닌 및 히스티딘 측쇄의 알파-아미노 그룹의 메틸화를 포함한다(T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)).

단백질을 언급할 때 "특징"은 분자의 구별되는 아미노산 서열-기반 구성요소로 정의된다. 본 발명의 단백질의 특징은 표면 발현(surface manifestation), 국소 입체 형태, 접힘, 루프, 하프-루프, 도메인, 하프-도메인, 부위, 말단 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.

단백질을 언급할 때 본원에서 사용되는 용어 "표면 발현"은 최외곽 표면에 나타나는 단백질의 폴리펩타이드 기반 구성요소를 나타낸다.

단백질을 언급할 때 본원에서 사용되는 용어 "국소 입체 형태"는 단백질의 한정가능한 공간 내에 위치한 단백질의 폴리펩티드 기반 구조적 발현을 의미한다.

단백질을 언급할 때 본원에서 사용되는 용어 "접힘"은 에너지 최소화시 아미노산 서열의 결과적인 입체구조를 의미한다. 접힘은 접힘 과정의 2차 또는 3차 수준에서 발생할 수 있다. 2차 수준 접힘의 예로는 베타 시트 및 알파 나선이 포함된다. 3차 수준 접힘의 예로는 에너지 힘의 응집 또는 분리로 인해 형성된 도메인 및 영역이 포함된다. 이러한 방식으로 형성된 영역은 소수성 및 친수성 포켓 등을 포함한다.

단백질 입체구조와 관련하여 본원에 사용된 용어 "턴(turn)"은 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 골격 방향을 변경하고 1, 2, 3개 이상의 아미노산 잔기를 포함할 수 있는 휨(bend)을 의미한다.

단백질을 언급할 때 본원에서 사용되는 용어 "루프"는 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 골격 방향을 역전시키고 4개 이상의 아미노산 잔기를 포함하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 구조적 특징을 나타낸다. 올리바(Oliva) 등은 단백질 루프의 적어도 5개의 부류를 확인하였다(Oliva et al., J. Mol Biol, 266 (4): 814-830; 1997).

단백질을 언급할 때 본원에서 사용되는 용어 "하프-루프"는 그것이 유래된 루프로서 아미노산 잔기의 수의 적어도 절반을 갖는 식별된 루프의 일부를 나타낸다. 루프는 항상 짝수의 아미노산 잔기를 함유하지는 않을 수 있음이 이해된다. 따라서, 루프가 홀수의 아미노산을 함유하거나 포함하는 것으로 식별되는 경우, 홀수 루프의 하프-루프는 루프의 정수 부분 또는 다음 정수 부분(루프의 아미노산 수/2+/-0.5 아미노산)을 포함할 것이다. 예를 들어, 7개 아미노산 루프로 식별된 루프는 3개 아미노산 또는 4개 아미노산(7/2=3.5+/-0.5는 3 또는 4임)의 하프-루프를 생성할 수 있다.

단백질을 언급할 때 본원에서 사용되는 용어 "도메인"은 하나 이상의 식별가능한 구조적 또는 기능적 특성 또는 성질(예를 들어, 결합 능력, 단백질-단백질 상호작용을 위한 부위로서의 역할)을 갖는 폴리펩타이드의 모티프를 나타낸다.

단백질을 언급할 때 본원에서 사용되는 용어 "하프-도메인"은 그것이 유래된 도메인으로서 아미노산 잔기의 수의 적어도 절반을 갖는 식별된 도메인의 일부를 의미한다. 도메인이 항상 짝수의 아미노산 잔기를 함유하지는 않을 수 있음이 이해된다. 따라서, 도메인이 홀수의 아미노산을 함유하거나 포함하는 것으로 식별되는 경우, 홀수 도메인의 하프-도메인은 도메인의 정수 부분 또는 다음 정수 부분(도메인의 아미노산 수/2+/-0.5 아미노산)을 포함할 것이다. 예를 들어, 7개 아미노산 도메인으로 식별된 도메인은 3개 아미노산 또는 4개 아미노산(7/2=3.5+/-0.5는 3 또는 4임)의 하프-도메인을 생성할 수 있다. 또한, 서브-도메인은 도메인 또는 하프-도메인 내에서 식별될 수 있으며, 이들 서브도메인은 이들이 유래된 도메인 또는 하프 도메인에서 식별된 모든 구조적 또는 기능적 특성보다 못하다는 것이 이해된다. 또한, 본원의 임의의 도메인 유형을 포함하는 아미노산은 폴리펩타이드 골격을 따라 인접할 필요는 없음(즉, 비인접 아미노산은 도메인, 하프-도메인 또는 서브도메인을 생성하기 위해 구조적으로 접힐 수 있음)이 이해된다.

단백질을 언급할 때 본원에서 사용되는 용어 "부위"는 아미노산 기반 구현예와 관련하여, "아미노산 잔기" 및 "아미노산 측쇄"와 동의어로 사용된다. 부위는 본 발명의 폴리펩타이드 기반 분자 내에서 변형, 조작, 변경, 유도체화 또는 변화될 수 있는 펩타이드 또는 폴리펩타이드 내의 위치를 나타낸다.

단백질을 언급할 때 본원에서 사용되는 용어 "말단(들)"은 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 맨 끝을 나타낸다. 이러한 맨 끝은 펩타이드 또는 폴리펩타이드의 처음 또는 마지막 부위에만 제한되지 않고 말단 영역에 추가 아미노산을 포함할 수 있다. 본 발명의 폴리펩타이드 기반 분자는 N-말단(유리 아미노 그룹(NH2)을 갖는 아미노산으로 종결됨) 및 C-말단(유리 카복실 그룹(COOH)을 갖는 아미노산으로 종결됨) 둘 모두를 갖는 것을 특징으로 할 수 있다. 본 발명의 단백질은 일부 경우에 이황화 결합 또는 비공유력에 의해 함께 결합된 다수의 폴리펩타이드 사슬(다량체, 올리고머)로 구성된다. 이러한 종류의 단백질은 다수의 N- 및 C-말단을 가질 것이다. 대안적으로, 폴리펩타이드의 말단은, 경우에 따라, 유기 접합체와 같은 비-폴리펩타이드 기반 모이어티로 시작하거나 끝나도록 변형될 수 있다.

임의의 특징이 본 발명의 분자의 구성요소로서 식별 또는 정의되면, 이들 특징의 임의의 몇몇 조작 및/또는 변형은 이동, 교환, 반전, 결실, 무작위화 또는 복제에 의해 수행될 수 있다. 또한, 특징의 조작은 본 발명의 분자에 대한 변형과 동일한 결과를 초래할 수 있는 것으로 이해된다. 예를 들어, 도메인의 결실을 수반하는 조작은 전장 분자보다 짧은 길이를 인코딩하기 위한 핵산의 변형과 마찬가지로 분자 길이의 변경을 초래할 수 있다.

변형 및 조작은 부위 특이적 돌연변이유발과 같은 당업계에 공지된 방법에 의해 달성될 수 있다. 이어서, 생성된 변형된 분자는 시험관내 또는 생체내 검정, 예를 들어 본원에 기재된 것들 또는 당업계에 공지된 임의의 다른 적합한 스크리닝 검정을 사용하여 활성을 시험할 수 있다.

페이로드 : 관심 단백질을 인코딩하는 핵산

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 관심 단백질을 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다.

아포지질단백질 E(APOE)

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 아포지질단백질 E(APOE) 유전자(예를 들어, ApoE2, ApoE3 및/또는 ApoE4)의 대립유전자를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 서열 MKVLWAALLVTFLAGCQA(서열번호 1722)를 갖는 아미노산 신호 펩타이드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 서열 MSSGASRKSWDPGNPWPPDWPITGRKMKVLWAALLVTFLAGCQA(서열번호 1723)를 갖는 아미노산 신호 펩타이드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 표 2에 기재된, 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열, 또는 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 표 2에 기재된, 핵산 서열, 또는 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 서열번호 1724의 하나 이상의 변이체를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다. 변이체는 다음의 변이체 중 하나 이상을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다: E21K(서열번호 1724의 위치 21에서 아미노산 E(Glu)가 K(Lys)로 변경됨), E31K(서열번호 1724의 위치 31에서 아미노산 E(Glu)가 K(Lys)로 변경됨), R43C(서열번호 1724의 위치 43에서 아미노산 R(Arg)이 C(Cys)로 변경됨), L46P(서열번호 1724의 위치 46에서 아미노산 L(Leu)이 P(Pro)로 변경됨), T60A(서열번호 1724의 위치 60에서 아미노산 T(Thr)가 A(Ala)로 변경됨), Q64H(서열번호 1724의 위치 64에서 아미노산 Q(Gln)가 H(His)로 변경됨), Q99K(서열번호 1724의 위치 99에서 아미노산 Q(Gln)가 K(Lys)로 변경됨), P102R(서열번호 1724의 위치 102에서 아미노산 P(Pro)가 R(Arg)로 변경됨), A117T(서열번호 1724의 위치 117에서 아미노산 A(Ala)가 T(Thr)로 변경됨), A124V(서열번호 1724의 위치 124에서 아미노산 A(Ala)가 V(Val)로 변경됨), C130R(서열번호 1724의 위치 130에서 아미노산 C(Cys)가 R(Arg)로 변경됨), G145D(서열번호 1724의 위치 145에서 아미노산 G(Gly)가 D(Asp)로 변경됨), G145GEVQAMLG(서열번호 1724의 위치 145에서 아미노산 G(Gly)가 GEVQAMLG(Gly-Glu-Val-Gln-Ala-Met-Leu-Gly)로 변경됨), R152Q(서열번호 1724의 위치 152에서 아미노산 R(Arg)이 Q(Gln)로 변경됨), R154C(서열번호 1724의 위치 154에서 아미노산 R(Arg)이 C(Cys)로 변경됨), R154S(서열번호 1724의 위치 154에서 아미노산 R(Arg)이 S(Ser)로 변경됨), R160C(서열번호 1724의 위치 160에서 아미노산 R(Arg)이 C(Cys)로 변경됨), R163H(서열번호 1724의 위치 163에서 아미노산 R(Arg)이 H(His)로 변경됨), R163P(서열번호 1724의 위치 163에서 아미노산 R(Arg)이 P(Pro)로 변경됨), K164E(서열번호 1724의 위치 164에서 아미노산 K(Lys)가 E(Glu)로 변경됨), K164Q(서열번호 1724의 위치 164에서 아미노산 K(Lys)가 Q(Gln)로 변경됨), A170P(서열번호 1724의 위치 170에서 아미노산 A(Ala)가 P(Pro)로 변경됨), R176C(서열번호 1724의 위치 176에서 아미노산 R(Arg)이 C(Cys)로 변경됨), R242Q(서열번호 1724의 위치 242에서 아미노산 R(Arg)이 Q(Gln)로 변경됨), R246C(서열번호 1724의 위치 246에서 아미노산 R(Arg)이 C(Cys)로 변경됨), V254E(서열번호 1724의 위치 254에서 아미노산 V(Val)가 E(Glu)로 변경됨), EE262-263KK(서열번호 1724의 위치 262-263에서 아미노산 EE(Glu-Glu)가 KK(Lys-Lys)로 변경됨), R269G(서열번호 1724의 위치 269에서 아미노산 R(Arg)이 G(Gly)로 변경됨), L270E(서열번호 1724의 위치 270에서 아미노산 L(Leu)이 E(Glu)로 변경됨), R292H(서열번호 1724의 위치 292에서 아미노산 R(Arg)이 H(His)로 변경됨), S314R(서열번호 1724의 위치 314에서 아미노산 S(Ser)가 R(Arg)로 변경됨), 아미노산 167의 제거 또는 이들의 조합. 비제한적인 예로서, AAV 입자의 페이로드 영역은 서열번호 1724의 위치 130에서 아미노산 C(Cys)가 R(Arg)로 변경된 아미노산 서열을 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다. 비제한적인 예로서, AAV 입자의 페이로드 영역은 서열번호 1724의 위치 176에서 아미노산 R(Arg)이 C(Cys)로 변경된 아미노산 서열을 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다. 비제한적인 예로서, AAV 입자의 페이로드 영역은 서열번호 1724의 위치 130에서 아미노산 C(Cys)가 R로 변경되고 서열번호 1724의 위치 176에서 아미노산 R(Arg)이 C(Cys)로 변경된 아미노산 서열을 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 서열번호 1722 또는 1723으로 제시된 신호 펩타이드 서열을 포함하는 ApoE 분자를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다. 비제한적인 예로서, 신호 펩타이드는 세포 처리 중에 절단되어 서열번호 1725, 1727, 1729, 1731, 및 1733으로 제시된 성숙한 펩타이드를 생성할 수 있다. 대안적으로, AAV 입자의 페이로드 영역은 서열번호 1725, 1727, 1729, 1731, 및 1733으로 제시된 바와 같이, 신호 펩타이드 서열이 결여된 ApoE 분자를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 서열번호 1725의 하나 이상의 변이체를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다. 변이체는 다음의 변이체 중 하나 이상을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다: C112R(서열번호 1725의 위치 112에서 아미노산 C(Cys)가 R(Arg)로 변경됨), 또는 R158C(서열번호 1725의 위치 158에서 아미노산 R(Arg)이 C(Cys)로 변경됨).

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 ApoE2를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열(cys112, cys158)을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 ApoE3을 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열(cys112, arg158)을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 ApoE4를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열(arg112, arg158)을 포함한다.

프라탁신(FXN)

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 프라탁신(FXN)을 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 표 3에 기재된, 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열, 또는 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 표 3에 기재된, 핵산 서열, 또는 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함한다.

방향족 L-아미노산 데카복실라아제 ( AADC )

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 방향족 L-아미노산 데카복실라아제(AADC)를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 표 4에 기재된, 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열, 또는 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 표 4에 기재된, 핵산 서열, 또는 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함한다.

ATP아제 근형질/소포체 Ca2 + 수송 2( ATP2A2 )

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 ATP아제 근형질/소포체 Ca2+ 수송 2(ATP2A2)를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 표 5에 기재된, 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열, 또는 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 표 5에 기재된, 핵산 서열, 또는 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함한다.

S100 칼슘 결합 단백질 A1(S100A1)

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 S100 칼슘 결합 단백질 A1(S100A1)을 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 표 6에 기재된, 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열, 또는 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 표 6에 기재된, 핵산 서열, 또는 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함한다.

항 타우 쌍나선 필라멘트(Tau- PHFs ) 항체

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 비정상적으로 접힌 타우 단백질(Tau-PHF)에 의해 형성된 쌍나선 필라멘트(PHF)에 특이적인 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함한다. 페이로드 영역은 또한, 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 핵산 서열 사이의 링커 영역을 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 링커 영역은 퓨린(furin) 절단 인식 서열(서열번호 1811로 나타낸 핵산 서열) 및/또는 2A 시스-작용성 하이드롤라아제 요소(서열번호 1812로 나타낸 핵산 서열)를 포함한다. 비제한적인 예로서, 링커 영역의 핵산 서열은 서열번호 1813이다. 비제한적인 예로서, 타우 쌍나선 필라멘트에 특이적으로 결합하는 항체는 PHF-1이다. PHF-1 항체는 본 개시내용에 교시된 바와 같은 중쇄 및 경쇄를 포함할 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 표 7에 기재된, 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산 서열, 또는 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 표 7에 기재된, 핵산 서열, 또는 이의 단편, 또는 이의 변이체를 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 (5'에서 3') PHF-1의 코작(서열번호 1817), 중쇄(서열번호 1814), 링커 영역(퓨린 절단 인식 서열(서열번호 1811) 및 2A 시스-작용성 하이드롤라아제 요소 서열(서열번호 1812) 포함), 경쇄 서열(서열번호 1812), 및 WO2015035190(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)의 도 5A에 기재된 정지 코돈 TAG를 포함하는 핵산 서열 서열번호 1816을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 (5'에서 3') PHF-1의 코작(서열번호 1817), 경쇄(서열번호 1815), 링커 영역(퓨린 절단 인식 서열(서열번호 1811) 및 2A 시스-작용성 하이드롤라아제 요소 서열(서열번호 1812) 포함), 중쇄(서열번호 1814), 및 정지 코돈 TAG를 포함하는 핵산 서열 서열번호 1818을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 WO2015035190(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)의 도 5A에 교시된 바와 같은 PHF-1의 중쇄 및/또는 경쇄를 인코딩하는 핵산을 포함하며, 여기서 WO2015035190에서 PHF-1의 중쇄 및/또는 경쇄는 변경되었다(예를 들어, 변형 및/또는 돌연변이되었다). 상기 서열은 분자의 상태 또는 구조를 변화시키기 위해 돌연변이되거나 변형될 수 있다. 비제한적인 예로서, 상기 서열은 아미노산의 첨가, 아미노산 치환 및/또는 아미노산의 결실을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 경쇄 아미노산 서열의 시작에서 제2 메티오닌을 제거하도록 경쇄 서열이 변경된, PHF-1의 경쇄를 인코딩하는 핵산을 포함한다. 비제한적인 예로서, AAV 입자의 페이로드 영역은 표 8에 나타낸 바와 같이 PHF-1의 경쇄를 인코딩하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 (5'에서 3') 코작(서열번호 1817), 중쇄(서열번호 1814), 링커 영역(퓨린 절단 인식 서열(서열번호 1811) 및 2A 시스-작용성 하이드롤라아제 요소 서열(서열번호 1812) 포함), PHF-1의 경쇄 서열의 5' 말단에서 하나의 "ATG" 코돈을 갖는 경쇄 서열(서열번호 1819), 및 정지 코돈 TAG을 포함하는 핵산 서열 서열번호 1820을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 페이로드 영역은 (5'에서 3') 코작(서열번호 1817), 경쇄 서열의 5' 말단에서 하나의 "ATG" 코돈을 갖는 경쇄 서열(서열번호 1819), 링커 영역(퓨린 절단 인식 서열(서열번호 1811) 및 2A 시스-작용성 하이드롤라아제 요소 서열(서열번호 1812) 포함), PHF-1의 중쇄(서열번호 1814), 및 정지 코돈 TAG를 포함하는 핵산 서열 서열번호 1821을 포함한다.

페이로드 : 페이로드로서 조절 폴리뉴클레오타이드

본 발명의 AAV 입자는 치료제로서 하나 이상의 조절 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어 RNA 또는 DNA 분자를 포함하는 적어도 하나의 페이로드 영역을 포함한다. 예시적인 조절 폴리뉴클레오타이드는 miRNAs, dsRNA 및 siRNA 듀플렉스(duplex)일 수 있다. RNA 간섭 매개 유전자 사일런싱은 표적화된 유전자 발현을 특이적으로 억제할 수 있다. 따라서, 본 발명은 관심 유전자를 표적화하는 소형 이중 가닥 RNA(dsRNA) 분자(소형 간섭 RNA, siRNA), 이러한 siRNA를 포함하는 약제학적 조성물, 및 이의 설계 공정을 제공한다. 본 발명은 또한, 신경계 질환을 치료하기 위해 관심 유전자의 유전자 발현 및 단백질 생산을 억제하기 위한 이의 사용 방법을 제공한다.

본 발명은 유전자 발현 및/또는 단백질 생산을 방해하기 위해 관심 유전자의 mRNA를 표적화하는 소형 간섭 RNA(siRNA) 듀플렉스(및 이를 인코딩하는 조절 폴리뉴클레오타이드)를 제공한다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA 듀플렉스는 각각의 뉴클레오타이드 서열의 임의의 세그먼트를 따라 관심 유전자를 표적으로 할 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA 듀플렉스는 단일-뉴클레오타이드 다형태(SNP)의 위치 또는 뉴클레오타이드 서열 내의 변이체에서 관심 유전자를 표적으로 할 수 있다.

일부 구현예에서, 이러한 siRNA 분자, 또는 siRNA 분자의 단일 가닥을 인코딩하는 핵산 서열은 AAV 입자의 바이러스 게놈에 삽입되고, 세포, 구체적으로 중추 신경계의 세포로 도입된다.

AAV 입자는 몇몇 독특한 특징으로 인해 siRNA 전달에 대해 조사되었다. 상기 특징의 비제한적인 예는 다음을 포함한다: (i) 분열 세포와 비-분열 세포 모두를 감염시키는 능력; (ii) 사람 세포를 포함하여 광범위한 감염성 숙주 범위; (iii) 야생형 AAV는 어떠한 질환과도 관련이 없으며 감염된 세포에서 복제되는 것으로 보이지 않았음; (iv) 벡터에 대한 세포-매개 면역 반응의 결여 및 (v) 숙주 염색체에서의 비-통합적 성질로 인해 장기 발현 가능성이 감소됨. 또한, AAV 입자로의 감염은 세포 유전자 발현의 패턴 변화에 최소한의 영향을 미친다(Stilwell and Samulski et al., Biotechniques, 2003, 34, 148-150; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

본 발명의 인코딩된 siRNA 듀플렉스는 함께 하이브리드화하여 듀플렉스 구조를 형성하는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 함유하며, 여기서 안티센스 가닥은 표적화된 유전자의 핵산 서열에 상보적이고, 센스 가닥은 표적화된 유전자의 핵산 서열에 상동성이다. 일부 측면에서, 안티센스 가닥의 5'말단은 5' 포스페이트 그룹을 가지며 센스 가닥의 3'말단은 3'하이드록실 그룹을 함유한다. 다른 측면에서, 각 가닥의 3'말단에는 돌출부가 없거나 1 또는 2개의 뉴클레오타이드 돌출부가 있다.

본 발명에 따르면, 관심 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스의 각 가닥은 약 19 내지 25개, 19 내지 24개 또는 19 내지 21개의 뉴클레오타이드 길이, 바람직하게는 약 19개의 뉴클레오타이드, 20개의 뉴클레오타이드, 21개의 뉴클레오타이드, 22개의 뉴클레오타이드, 23개의 뉴클레오타이드, 24개의 뉴클레오타이드, 또는 25개의 뉴클레오타이드 길이이다. 일부 측면에서, siRNA는 변형되지 않은 RNA 분자일 수 있다.

다른 측면에서, siRNA는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오타이드, 예를 들어 염기, 당 또는 골격 변형을 함유할 수 있다.

일 구현예에서, siRNA 또는 dsRNA는 서로 상보적인 적어도 2개의 서열을 포함한다. dsRNA는 제1 서열을 갖는 센스 가닥 및 제2 서열을 갖는 안티센스 가닥을 포함한다. 안티센스 가닥은 표적 유전자를 인코딩하는 mRNA의 적어도 일부에 실질적으로 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하며, 상보성 영역은 30개 이하의 뉴클레오타이드, 및 적어도 15개의 뉴클레오타이드 길이이다. 일반적으로, dsRNA는 19 내지 25, 19 내지 24 또는 19 내지 21개의 뉴클레오타이드 길이이다. 일부 구현예에서, dsRNA는 약 15 내지 약 25개의 뉴클레오타이드 길이이고, 다른 구현예에서 dsRNA는 약 25 내지 약 30개의 뉴클레오타이드 길이이다. 일부 구현예에서, dsRNA는 약 15개의 뉴클레오타이드 길이, 16개의 뉴클레오타이드 길이, 17개의 뉴클레오타이드 길이, 18개의 뉴클레오타이드 길이, 19개의 뉴클레오타이드, 20개의 뉴클레오타이드, 21개의 뉴클레오타이드, 22개의 뉴클레오타이드, 23개의 뉴클레오타이드, 24개의 뉴클레오타이드 길이, 25개의 뉴클레오타이드 길이, 26개의 뉴클레오타이드 길이, 27개의 뉴클레오타이드 길이, 28개의 뉴클레오타이드 길이, 29개의 뉴클레오타이드 길이, 또는 30개의 뉴클레오타이드 길이이다.

dsRNA는, 직접 투여되거나 표적 단백질을 발현시키는 세포와 접촉할 때 발현 벡터에 인코딩되는지에 관계없이, 예를 들어 본원에 기재된 방법에 의해 검정될 때 단백질의 발현을 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35% 또는 적어도 40% 이상 억제한다.

본 발명에 따르면, siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA 분자가 설계되고, 배양된 세포에서 표적 유전자의 발현(예를 들어, 표적 유전자의 mRNA 수준)을 감소시키는 능력을 시험한다. siRNA 설계 툴은 당업계에서 이용가능하다. 관심 유전자에 대한 siRNA 듀플렉스를 설계하기 위해 임의의 상용 소프트웨어가 사용될 수 있다.

본 발명에 따르면, siRNA 듀플렉스의 핵산, siRNA 듀플렉스의 하나의 가닥 또는 관심 유전자를 표적화하는 dsRNA를 갖는 페이로드 영역을 포함하는 AAV 입자가 생성되고, AAV 입자 혈청형은, 이에 제한되지는 않지만, VOY101, VOY201, AAVPHP.B (PHP.B), AAVPHP.A (PHP.A), AAVG2B-26, AAVG2B-13, AAVTH1.1-32, AAVTH1.1-35, AAVPHP.B2 (PHP.B2), AAVPHP.B3 (PHP.B3), AAVPHP.N/PHP.B-DGT, AAVPHP.B-EST, AAVPHP.B-GGT, AAVPHP.B-ATP, AAVPHP.B-ATT-T, AAVPHP.B-DGT-T, AAVPHP.B-GGT-T, AAVPHP.B-SGS, AAVPHP.B-AQP, AAVPHP.B-QQP, AAVPHP.B-SNP(3), AAVPHP.B-SNP, AAVPHP.B-QGT, AAVPHP.B-NQT, AAVPHP.B-EGS, AAVPHP.B-SGN, AAVPHP.B-EGT, AAVPHP.B-DST, AAVPHP.B-DST, AAVPHP.B-STP, AAVPHP.B-PQP, AAVPHP.B-SQP, AAVPHP.B-QLP, AAVPHP.B-TMP, AAVPHP.B-TTP, AAVPHP.S/G2A12, AAVG2A15/G2A3 (G2A3), AAVG2B4 (G2B4), AAVG2B5 (G2B5), PHP.S, AAV1, AAV2, AAV2G9, AAV3, AAV3a, AAV3b, AAV3-3, AAV4, AAV4-4, AAV5, AAV6, AAV6.1, AAV6.2, AAV6.1.2, AAV7, AAV7.2, AAV8, AAV9, AAV9.11, AAV9.13, AAV9.16, AAV9.24, AAV9.45, AAV9.47, AAV9.61, AAV9.68, AAV9.84, AAV9.9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV16.3, AAV24.1, AAV27.3, AAV42.12, AAV42-1b, AAV42-2, AAV42-3a, AAV42-3b, AAV42-4, AAV42-5a, AAV42-5b, AAV42-6b, AAV42-8, AAV42-10, AAV42-11, AAV42-12, AAV42-13, AAV42-15, AAV42-aa, AAV43-1, AAV43-12, AAV43-20, AAV43-21, AAV43-23, AAV43-25, AAV43-5, AAV44.1, AAV44.2, AAV44.5, AAV223.1, AAV223.2, AAV223.4, AAV223.5, AAV223.6, AAV223.7, AAV1-7/rh.48, AAV1-8/rh.49, AAV2-15/rh.62, AAV2-3/rh.61, AAV2-4/rh.50, AAV2-5/rh.51, AAV3.1/hu.6, AAV3.1/hu.9, AAV3-9/rh.52, AAV3-11/rh.53, AAV4-8/r11.64, AAV4-9/rh.54, AAV4-19/rh.55, AAV5-3/rh.57, AAV5-22/rh.58, AAV7.3/hu.7, AAV16.8/hu.10, AAV16.12/hu.11, AAV29.3/bb.1, AAV29.5/bb.2, AAV106.1/hu.37, AAV114.3/hu.40, AAV127.2/hu.41, AAV127.5/hu.42, AAV128.3/hu.44, AAV130.4/hu.48, AAV145.1/hu.53, AAV145.5/hu.54, AAV145.6/hu.55, AAV161.10/hu.60, AAV161.6/hu.61, AAV33.12/hu.17, AAV33.4/hu.15, AAV33.8/hu.16, AAV52/hu.19, AAV52.1/hu.20, AAV58.2/hu.25, AAVA3.3, AAVA3.4, AAVA3.5, AAVA3.7, AAVC1, AAVC2, AAVC5, AAV-DJ, AAV-DJ8, AAVF3, AAVF5, AAVH2, AAVrh.72, AAVhu.8, AAVrh.68, AAVrh.70, AAVpi.1, AAVpi.3, AAVpi.2, AAVrh.60, AAVrh.44, AAVrh.65, AAVrh.55, AAVrh.47, AAVrh.69, AAVrh.45, AAVrh.59, AAVhu.12, AAVH6, AAVLK03, AAVH-1/hu.1, AAVH-5/hu.3, AAVLG-10/rh.40, AAVLG-4/rh.38, AAVLG-9/hu.39, AAVN721-8/rh.43, AAVCh.5, AAVCh.5R1, AAVcy.2, AAVcy.3, AAVcy.4, AAVcy.5, AAVCy.5R1, AAVCy.5R2, AAVCy.5R3, AAVCy.5R4, AAVcy.6, AAVhu.1, AAVhu.2, AAVhu.3, AAVhu.4, AAVhu.5, AAVhu.6, AAVhu.7, AAVhu.9, AAVhu.10, AAVhu.11, AAVhu.13, AAVhu.15, AAVhu.16, AAVhu.17, AAVhu.18, AAVhu.20, AAVhu.21, AAVhu.22, AAVhu.23.2, AAVhu.24, AAVhu.25, AAVhu.27, AAVhu.28, AAVhu.29, AAVhu.29R, AAVhu.31, AAVhu.32, AAVhu.34, AAVhu.35, AAVhu.37, AAVhu.39, AAVhu.40, AAVhu.41, AAVhu.42, AAVhu.43, AAVhu.44, AAVhu.44R1, AAVhu.44R2, AAVhu.44R3, AAVhu.45, AAVhu.46, AAVhu.47, AAVhu.48, AAVhu.48R1, AAVhu.48R2, AAVhu.48R3, AAVhu.49, AAVhu.51, AAVhu.52, AAVhu.54, AAVhu.55, AAVhu.56, AAVhu.57, AAVhu.58, AAVhu.60, AAVhu.61, AAVhu.63, AAVhu.64, AAVhu.66, AAVhu.67, AAVhu.14/9, AAVhu.t 19, AAVrh.2, AAVrh.2R, AAVrh.8, AAVrh.8R, AAVrh.10, AAVrh.12, AAVrh.13, AAVrh.13R, AAVrh.14, AAVrh.17, AAVrh.18, AAVrh.19, AAVrh.20, AAVrh.21, AAVrh.22, AAVrh.23, AAVrh.24, AAVrh.25, AAVrh.31, AAVrh.32, AAVrh.33, AAVrh.34, AAVrh.35, AAVrh.36, AAVrh.37, AAVrh.37R2, AAVrh.38, AAVrh.39, AAVrh.40, AAVrh.46, AAVrh.48, AAVrh.48.1, AAVrh.48.1.2, AAVrh.48.2, AAVrh.49, AAVrh.51, AAVrh.52, AAVrh.53, AAVrh.54, AAVrh.56, AAVrh.57, AAVrh.58, AAVrh.61, AAVrh.64, AAVrh.64R1, AAVrh.64R2, AAVrh.67, AAVrh.73, AAVrh.74, AAVrh8R, AAVrh8R A586R 돌연변이체, AAVrh8R R533A 돌연변이체, AAAV, BAAV, 염소 AAV, 소 AAV, AAVhE1.1, AAVhEr1.5, AAVhER1.14, AAVhEr1.8, AAVhEr1.16, AAVhEr1.18, AAVhEr1.35, AAVhEr1.7, AAVhEr1.36, AAVhEr2.29, AAVhEr2.4, AAVhEr2.16, AAVhEr2.30, AAVhEr2.31, AAVhEr2.36, AAVhER1.23, AAVhEr3.1, AAV2.5T, AAV-PAEC, AAV-LK01, AAV-LK02, AAV-LK03, AAV-LK04, AAV-LK05, AAV-LK06, AAV-LK07, AAV-LK08, AAV-LK09, AAV-LK10, AAV-LK11, AAV-LK12, AAV-LK13, AAV-LK14, AAV-LK15, AAV-LK16, AAV-LK17, AAV-LK18, AAV-LK19, AAV-PAEC2, AAV-PAEC4, AAV-PAEC6, AAV-PAEC7, AAV-PAEC8, AAV-PAEC11, AAV-PAEC12, AAV-2-프리-miRNA-101, AAV-8h, AAV-8b, AAV-h, AAV-b, AAV SM 10-2, AAV 셔플 100-1, AAV 셔플 100-3, AAV 셔플 100-7, AAV 셔플 10-2, AAV 셔플 10-6, AAV 셔플 10-8, AAV 셔플 100-2, AAV SM 10-1, AAV SM 10-8, AAV SM 100-3, AAV SM 100-10, BNP61 AAV, BNP62 AAV, BNP63 AAV, AAVrh.50, AAVrh.43, AAVrh.62, AAVrh.48, AAVhu.19, AAVhu.11, AAVhu.53, AAV4-8/rh.64, AAVLG-9/hu.39, AAV54.5/hu.23, AAV54.2/hu.22, AAV54.7/hu.24, AAV54.1/hu.21, AAV54.4R/hu.27, AAV46.2/hu.28, AAV46.6/hu.29, AAV128.1/hu.43, 진성 유형 AAV (ttAAV), UPENN AAV 10, 일본 AAV 10 혈청형, AAV CBr-7.1, AAV CBr-7.10, AAV CBr-7.2, AAV CBr-7.3, AAV CBr-7.4, AAV CBr-7.5, AAV CBr-7.7, AAV CBr-7.8, AAV CBr-B7.3, AAV CBr-B7.4, AAV CBr-E1, AAV CBr-E2, AAV CBr-E3, AAV CBr-E4, AAV CBr-E5, AAV CBr-e5, AAV CBr-E6, AAV CBr-E7, AAV CBr-E8, AAV CHt-1, AAV CHt-2, AAV CHt-3, AAV CHt-6.1, AAV CHt-6.10, AAV CHt-6.5, AAV CHt-6.6, AAV CHt-6.7, AAV CHt-6.8, AAV CHt-P1, AAV CHt-P2, AAV CHt-P5, AAV CHt-P6, AAV CHt-P8, AAV CHt-P9, AAV CKd-1, AAV CKd-10, AAV CKd-2, AAV CKd-3, AAV CKd-4, AAV CKd-6, AAV CKd-7, AAV CKd-8, AAV CKd-B1, AAV CKd-B2, AAV CKd-B3, AAV CKd-B4, AAV CKd-B5, AAV CKd-B6, AAV CKd-B7, AAV CKd-B8, AAV CKd-H1, AAV CKd-H2, AAV CKd-H3, AAV CKd-H4, AAV CKd-H5, AAV CKd-H6, AAV CKd-N3, AAV CKd-N4, AAV CKd-N9, AAV CLg-F1, AAV CLg-F2, AAV CLg-F3, AAV CLg-F4, AAV CLg-F5, AAV CLg-F6, AAV CLg-F7, AAV CLg-F8, AAV CLv-1, AAV CLv1-1, AAV Clv1-10, AAV CLv1-2, AAV CLv-12, AAV CLv1-3, AAV CLv-13, AAV CLv1-4, AAV Clv1-7, AAV Clv1-8, AAV Clv1-9, AAV CLv-2, AAV CLv-3, AAV CLv-4, AAV CLv-6, AAV CLv-8, AAV CLv-D1, AAV CLv-D2, AAV CLv-D3, AAV CLv-D4, AAV CLv-D5, AAV CLv-D6, AAV CLv-D7, AAV CLv-D8, AAV CLv-E1, AAV CLv-K1, AAV CLv-K3, AAV CLv-K6, AAV CLv-L4, AAV CLv-L5, AAV CLv-L6, AAV CLv-M1, AAV CLv-M11, AAV CLv-M2, AAV CLv-M5, AAV CLv-M6, AAV CLv-M7, AAV CLv-M8, AAV CLv-M9, AAV CLv-R1, AAV CLv-R2, AAV CLv-R3, AAV CLv-R4, AAV CLv-R5, AAV CLv-R6, AAV CLv-R7, AAV CLv-R8, AAV CLv-R9, AAV CSp-1, AAV CSp-10, AAV CSp-11, AAV CSp-2, AAV CSp-3, AAV CSp-4, AAV CSp-6, AAV CSp-7, AAV CSp-8, AAV CSp-8.10, AAV CSp-8.2, AAV CSp-8.4, AAV CSp-8.5, AAV CSp-8.6, AAV CSp-8.7, AAV CSp-8.8, AAV CSp-8.9, AAV CSp-9, AAV.hu.48R3, AAV.VR-355, AAV3B, AAV4, AAV5, AAVF1/HSC1, AAVF11/HSC11, AAVF12/HSC12, AAVF13/HSC13, AAVF14/HSC14, AAVF15/HSC15, AAVF16/HSC16, AAVF17/HSC17, AAVF2/HSC2, AAVF3/HSC3, AAVF4/HSC4, AAVF5/HSC5, AAVF6/HSC6, AAVF7/HSC7, AAVF8/HSC8 및/또는 AAVF9/HSC9 및 이들의 변이체와 같은 캡시드 및/또는 펩타이드 삽입물일 수 있거나 이를 포함할 수 있다.

일 구현예에서, siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA 분자는 표적 단백질의 발현을 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 비제한적인 예로서, 표적 단백질의 발현은 50-90% 감소될 수 있다.

일 구현예에서, siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA 분자는 표적 mRNA의 발현을 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 비제한적인 예로서, 표적 mRNA의 발현은 50-90% 감소될 수 있다.

일 구현예에서, siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA 분자는 CNS의 적어도 하나의 영역에서 표적 단백질 및/또는 mRNA의 발현을 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 표적 단백질 및/또는 mRNA의 발현은 CNS의 적어도 하나의 영역에서 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 감소된다. 비제한적인 예로서, 뉴런(예를 들어, 피질 뉴런)에서 표적 단백질 및 mRNA의 발현은 50-90% 감소된다. 비제한적인 예로서, 뉴런(예를 들어, 피질 뉴런)에서 표적 단백질 및 mRNA의 발현은 40-50% 감소된다.

일부 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 적어도 하나의 siRNA 듀플렉스의 핵산 서열을 포함하는 본 발명의 AAV 입자는 질환, 예를 들어, 신경 장애 또는 심혈관 질환의 치료 및/또는 개선을 필요로 하는 대상체에게 투여된다. AAV 입자 혈청형은 이에 제한되지는 않지만 VOY101, VOY201, AAVPHP.B (PHP.B), AAVPHP.A (PHP.A), AAVG2B-26, AAVG2B-13, AAVTH1.1-32, AAVTH1.1-35, AAVPHP.B2 (PHP.B2), AAVPHP.B3 (PHP.B3), AAVPHP.N/PHP.B-DGT, AAVPHP.B-EST, AAVPHP.B-GGT, AAVPHP.B-ATP, AAVPHP.B-ATT-T, AAVPHP.B-DGT-T, AAVPHP.B-GGT-T, AAVPHP.B-SGS, AAVPHP.B-AQP, AAVPHP.B-QQP, AAVPHP.B-SNP(3), AAVPHP.B-SNP, AAVPHP.B-QGT, AAVPHP.B-NQT, AAVPHP.B-EGS, AAVPHP.B-SGN, AAVPHP.B-EGT, AAVPHP.B-DST, AAVPHP.B-DST, AAVPHP.B-STP, AAVPHP.B-PQP, AAVPHP.B-SQP, AAVPHP.B-QLP, AAVPHP.B-TMP, AAVPHP.B-TTP, AAVPHP.S/G2A12, AAVG2A15/G2A3 (G2A3), AAVG2B4 (G2B4), AAVG2B5, PHP.S, AAV1, AAV2, AAV2G9, AAV3, AAV3a, AAV3b, AAV3-3, AAV4, AAV4-4, AAV5, AAV6, AAV6.1, AAV6.2, AAV6.1.2, AAV7, AAV7.2, AAV8, AAV9, AAV9.11, AAV9.13, AAV9.16, AAV9.24, AAV9.45, AAV9.47, AAV9.61, AAV9.68, AAV9.84, AAV9.9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV16.3, AAV24.1, AAV27.3, AAV42.12, AAV42-1b, AAV42-2, AAV42-3a, AAV42-3b, AAV42-4, AAV42-5a, AAV42-5b, AAV42-6b, AAV42-8, AAV42-10, AAV42-11, AAV42-12, AAV42-13, AAV42-15, AAV42-aa, AAV43-1, AAV43-12, AAV43-20, AAV43-21, AAV43-23, AAV43-25, AAV43-5, AAV44.1, AAV44.2, AAV44.5, AAV223.1, AAV223.2, AAV223.4, AAV223.5, AAV223.6, AAV223.7, AAV1-7/rh.48, AAV1-8/rh.49, AAV2-15/rh.62, AAV2-3/rh.61, AAV2-4/rh.50, AAV2-5/rh.51, AAV3.1/hu.6, AAV3.1/hu.9, AAV3-9/rh.52, AAV3-11/rh.53, AAV4-8/r11.64, AAV4-9/rh.54, AAV4-19/rh.55, AAV5-3/rh.57, AAV5-22/rh.58, AAV7.3/hu.7, AAV16.8/hu.10, AAV16.12/hu.11, AAV29.3/bb.1, AAV29.5/bb.2, AAV106.1/hu.37, AAV114.3/hu.40, AAV127.2/hu.41, AAV127.5/hu.42, AAV128.3/hu.44, AAV130.4/hu.48, AAV145.1/hu.53, AAV145.5/hu.54, AAV145.6/hu.55, AAV161.10/hu.60, AAV161.6/hu.61, AAV33.12/hu.17, AAV33.4/hu.15, AAV33.8/hu.16, AAV52/hu.19, AAV52.1/hu.20, AAV58.2/hu.25, AAVA3.3, AAVA3.4, AAVA3.5, AAVA3.7, AAVC1, AAVC2, AAVC5, AAV-DJ, AAV-DJ8, AAVF3, AAVF5, AAVH2, AAVrh.72, AAVhu.8, AAVrh.68, AAVrh.70, AAVpi.1, AAVpi.3, AAVpi.2, AAVrh.60, AAVrh.44, AAVrh.65, AAVrh.55, AAVrh.47, AAVrh.69, AAVrh.45, AAVrh.59, AAVhu.12, AAVH6, AAVLK03, AAVH-1/hu.1, AAVH-5/hu.3, AAVLG-10/rh.40, AAVLG-4/rh.38, AAVLG-9/hu.39, AAVN721-8/rh.43, AAVCh.5, AAVCh.5R1, AAVcy.2, AAVcy.3, AAVcy.4, AAVcy.5, AAVCy.5R1, AAVCy.5R2, AAVCy.5R3, AAVCy.5R4, AAVcy.6, AAVhu.1, AAVhu.2, AAVhu.3, AAVhu.4, AAVhu.5, AAVhu.6, AAVhu.7, AAVhu.9, AAVhu.10, AAVhu.11, AAVhu.13, AAVhu.15, AAVhu.16, AAVhu.17, AAVhu.18, AAVhu.20, AAVhu.21, AAVhu.22, AAVhu.23.2, AAVhu.24, AAVhu.25, AAVhu.27, AAVhu.28, AAVhu.29, AAVhu.29R, AAVhu.31, AAVhu.32, AAVhu.34, AAVhu.35, AAVhu.37, AAVhu.39, AAVhu.40, AAVhu.41, AAVhu.42, AAVhu.43, AAVhu.44, AAVhu.44R1, AAVhu.44R2, AAVhu.44R3, AAVhu.45, AAVhu.46, AAVhu.47, AAVhu.48, AAVhu.48R1, AAVhu.48R2, AAVhu.48R3, AAVhu.49, AAVhu.51, AAVhu.52, AAVhu.54, AAVhu.55, AAVhu.56, AAVhu.57, AAVhu.58, AAVhu.60, AAVhu.61, AAVhu.63, AAVhu.64, AAVhu.66, AAVhu.67, AAVhu.14/9, AAVhu.t 19, AAVrh.2, AAVrh.2R, AAVrh.8, AAVrh.8R, AAVrh.10, AAVrh.12, AAVrh.13, AAVrh.13R, AAVrh.14, AAVrh.17, AAVrh.18, AAVrh.19, AAVrh.20, AAVrh.21, AAVrh.22, AAVrh.23, AAVrh.24, AAVrh.25, AAVrh.31, AAVrh.32, AAVrh.33, AAVrh.34, AAVrh.35, AAVrh.36, AAVrh.37, AAVrh.37R2, AAVrh.38, AAVrh.39, AAVrh.40, AAVrh.46, AAVrh.48, AAVrh.48.1, AAVrh.48.1.2, AAVrh.48.2, AAVrh.49, AAVrh.51, AAVrh.52, AAVrh.53, AAVrh.54, AAVrh.56, AAVrh.57, AAVrh.58, AAVrh.61, AAVrh.64, AAVrh.64R1, AAVrh.64R2, AAVrh.67, AAVrh.73, AAVrh.74, AAVrh8R, AAVrh8R A586R 돌연변이체, AAVrh8R R533A 돌연변이체, AAAV, BAAV, 염소 AAV, 소 AAV, AAVhE1.1, AAVhEr1.5, AAVhER1.14, AAVhEr1.8, AAVhEr1.16, AAVhEr1.18, AAVhEr1.35, AAVhEr1.7, AAVhEr1.36, AAVhEr2.29, AAVhEr2.4, AAVhEr2.16, AAVhEr2.30, AAVhEr2.31, AAVhEr2.36, AAVhER1.23, AAVhEr3.1, AAV2.5T, AAV-PAEC, AAV-LK01, AAV-LK02, AAV-LK03, AAV-LK04, AAV-LK05, AAV-LK06, AAV-LK07, AAV-LK08, AAV-LK09, AAV-LK10, AAV-LK11, AAV-LK12, AAV-LK13, AAV-LK14, AAV-LK15, AAV-LK16, AAV-LK17, AAV-LK18, AAV-LK19, AAV-PAEC2, AAV-PAEC4, AAV-PAEC6, AAV-PAEC7, AAV-PAEC8, AAV-PAEC11, AAV-PAEC12, AAV-2-프리-miRNA-101, AAV-8h, AAV-8b, AAV-h, AAV-b, AAV SM 10-2, AAV 셔플 100-1, AAV 셔플 100-3, AAV 셔플 100-7, AAV 셔플 10-2, AAV 셔플 10-6, AAV 셔플 10-8, AAV 셔플 100-2, AAV SM 10-1, AAV SM 10-8, AAV SM 100-3, AAV SM 100-10, BNP61 AAV, BNP62 AAV, BNP63 AAV, AAVrh.50, AAVrh.43, AAVrh.62, AAVrh.48, AAVhu.19, AAVhu.11, AAVhu.53, AAV4-8/rh.64, AAVLG-9/hu.39, AAV54.5/hu.23, AAV54.2/hu.22, AAV54.7/hu.24, AAV54.1/hu.21, AAV54.4R/hu.27, AAV46.2/hu.28, AAV46.6/hu.29, AAV128.1/hu.43, 진성 유형 AAV (ttAAV), UPENN AAV 10, 일본 AAV 10 혈청형, AAV CBr-7.1, AAV CBr-7.10, AAV CBr-7.2, AAV CBr-7.3, AAV CBr-7.4, AAV CBr-7.5, AAV CBr-7.7, AAV CBr-7.8, AAV CBr-B7.3, AAV CBr-B7.4, AAV CBr-E1, AAV CBr-E2, AAV CBr-E3, AAV CBr-E4, AAV CBr-E5, AAV CBr-e5, AAV CBr-E6, AAV CBr-E7, AAV CBr-E8, AAV CHt-1, AAV CHt-2, AAV CHt-3, AAV CHt-6.1, AAV CHt-6.10, AAV CHt-6.5, AAV CHt-6.6, AAV CHt-6.7, AAV CHt-6.8, AAV CHt-P1, AAV CHt-P2, AAV CHt-P5, AAV CHt-P6, AAV CHt-P8, AAV CHt-P9, AAV CKd-1, AAV CKd-10, AAV CKd-2, AAV CKd-3, AAV CKd-4, AAV CKd-6, AAV CKd-7, AAV CKd-8, AAV CKd-B1, AAV CKd-B2, AAV CKd-B3, AAV CKd-B4, AAV CKd-B5, AAV CKd-B6, AAV CKd-B7, AAV CKd-B8, AAV CKd-H1, AAV CKd-H2, AAV CKd-H3, AAV CKd-H4, AAV CKd-H5, AAV CKd-H6, AAV CKd-N3, AAV CKd-N4, AAV CKd-N9, AAV CLg-F1, AAV CLg-F2, AAV CLg-F3, AAV CLg-F4, AAV CLg-F5, AAV CLg-F6, AAV CLg-F7, AAV CLg-F8, AAV CLv-1, AAV CLv1-1, AAV Clv1-10, AAV CLv1-2, AAV CLv-12, AAV CLv1-3, AAV CLv-13, AAV CLv1-4, AAV Clv1-7, AAV Clv1-8, AAV Clv1-9, AAV CLv-2, AAV CLv-3, AAV CLv-4, AAV CLv-6, AAV CLv-8, AAV CLv-D1, AAV CLv-D2, AAV CLv-D3, AAV CLv-D4, AAV CLv-D5, AAV CLv-D6, AAV CLv-D7, AAV CLv-D8, AAV CLv-E1, AAV CLv-K1, AAV CLv-K3, AAV CLv-K6, AAV CLv-L4, AAV CLv-L5, AAV CLv-L6, AAV CLv-M1, AAV CLv-M11, AAV CLv-M2, AAV CLv-M5, AAV CLv-M6, AAV CLv-M7, AAV CLv-M8, AAV CLv-M9, AAV CLv-R1, AAV CLv-R2, AAV CLv-R3, AAV CLv-R4, AAV CLv-R5, AAV CLv-R6, AAV CLv-R7, AAV CLv-R8, AAV CLv-R9, AAV CSp-1, AAV CSp-10, AAV CSp-11, AAV CSp-2, AAV CSp-3, AAV CSp-4, AAV CSp-6, AAV CSp-7, AAV CSp-8, AAV CSp-8.10, AAV CSp-8.2, AAV CSp-8.4, AAV CSp-8.5, AAV CSp-8.6, AAV CSp-8.7, AAV CSp-8.8, AAV CSp-8.9, AAV CSp-9, AAV.hu.48R3, AAV.VR-355, AAV3B, AAV4, AAV5, AAVF1/HSC1, AAVF11/HSC11, AAVF12/HSC12, AAVF13/HSC13, AAVF14/HSC14, AAVF15/HSC15, AAVF16/HSC16, AAVF17/HSC17, AAVF2/HSC2, AAVF3/HSC3, AAVF4/HSC4, AAVF5/HSC5, AAVF6/HSC6, AAVF7/HSC7, AAVF8/HSC8 및/또는 AAVF9/HSC9 및 이들의 변이체와 같은 펩타이드이거나 이를 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 적어도 하나의 siRNA 듀플렉스의 핵산 서열을 포함하는 AAVPHP.B 입자(PHP.B 펩타이드 삽입물을 포함하는 AAV 입자)는 신경계 질환의 치료 및/또는 개선을 필요로 하는 대상체에게 투여된다.

일부 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 적어도 하나의 siRNA 듀플렉스의 핵산 서열을 포함하는 AAVPHP.A 입자(PHP.A 펩타이드 삽입물을 포함하는 AAV 입자)는 신경계 질환의 치료 및/또는 개선을 필요로 하는 대상체에게 투여된다.

일부 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 적어도 하나의 siRNA 듀플렉스의 핵산 서열을 포함하는 AAVPHP.N 입자(PHP.N 펩타이드 삽입물을 포함하는 AAV 입자)는 신경계 질환의 치료 및/또는 개선을 필요로 하는 대상체에게 투여된다.

일부 구현예에서, PHP.S 펩타이드 삽입물을 포함하는 AAV 입자는 관심 유전자를 표적화하는 적어도 하나의 siRNA 듀플렉스의 핵산 서열을 포함하고, AAV 입자는 신경계 질환의 치료 및/또는 개선을 필요로 하는 대상체에게 투여된다.

일부 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 적어도 하나의 siRNA 듀플렉스의 핵산 서열을 포함하는 VOY101의 혈청형을 갖는 AAV 입자는 신경계 질환의 치료 및/또는 개선을 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일 구현예에서, VOY101 캡시드는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, VOY101 캡시드는 서열번호 1809의 핵산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 적어도 하나의 siRNA 듀플렉스의 핵산 서열을 포함하는 VOY201의 혈청형을 갖는 AAV 입자는 신경계 질환의 치료 및/또는 개선을 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 일 구현예에서, VOY201 캡시드는 서열번호 1810의 핵산 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 적어도 하나의 siRNA 듀플렉스의 핵산 서열을 포함하는 AAV9의 변이체의 혈청형을 갖는 AAV 입자는 신경계 질환의 치료 및/또는 개선을 필요로 하는 대상체에게 투여된다.

일부 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 적어도 하나의 siRNA 듀플렉스(예를 들어, 페이로드)의 핵산 서열을 포함하는 제1 AAV 입자는 대상체로의 투여를 위해 선택될 수 있으며, 여기서 상기 제1 AAV 입자는 동일한 페이로드를 포함하는 제2 AAV 입자와 비교하여 세포(예를 들어, 성상세포)에 더 높은 수준의 바이러스 게놈을 제공한다. 일 구현예에서, 제1 바이러스 게놈의 수준은 제2 AAV 입자의 대상체의 세포 내 수준과 비교하여 세포(예를 들어, 성상세포)에서 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 9배 이상 더 높을 수 있다. 일 구현예에서, 제1 바이러스 게놈의 수준은 세포(예를 들어, 성상세포)에서 제2 바이러스 게놈의 수준보다 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 99% 이상 더 높을 수 있다. 일 구현예에서, 제1 바이러스 게놈의 수준은 세포(예를 들어, 성상세포)에서 제2 바이러스 게놈의 수준보다 1-10%, 5-10%, 10-15%, 10-20%, 15-20%, 20-30%, 25-30%, 25-35%, 30-35%, 30-40%, 35-40%, 35-45%, 40-45%, 40-50%, 45-50%, 45-55%, 50-55%, 50-60%, 55-60%, 55-65%, 60-65%, 60-70%, 65-70%, 65-75%, 70-75%, 70-80%, 75-80%, 75-85%, 80-85%, 80-90%, 85-90%, 85-95%, 90-95%, 90-99%, 또는 95-99% 더 높을 수 있다.

일부 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 적어도 하나의 siRNA 듀플렉스의 핵산 서열을 포함하는 제1 AAV 입자는 대상체로의 투여를 위해 선택될 수 있으며, 여기서 상기 제1 입자는 대상체의 간에서 발견된 양과 비교하여 성상세포에 더 높은 바이러스 게놈을 제공한다. 제1 입자는 간에서의 양과 비교하여 성상세포에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 9배 이상 더 많은 바이러스 게놈을 제공할 수 있다.

일부 구현예에서, siRNA 분자 또는 이러한 siRNA 분자를 포함하는 AAV 입자는, 예를 들어, 조가비핵으로의 주입에 의해 대상체의 중추 신경계로 직접 도입될 수 있다.

일부 구현예에서, siRNA 분자 또는 이러한 siRNA 분자를 포함하는 AAV 입자는, 예를 들어, 대상체의 시상으로의 주입에 의해 대상체의 중추 신경계로 직접 도입될 수 있다.

일부 구현예에서, siRNA 분자 또는 이러한 siRNA 분자를 포함하는 AAV 입자는, 예를 들어, 대상체의 백질로의 주입에 의해 대상체의 중추 신경계로 직접 도입될 수 있다.

일부 구현예에서, siRNA 분자 또는 이러한 siRNA 분자를 포함하는 AAV 입자는, 예를 들어, 대상체로의 정맥내 투여에 의해 대상체의 중추 신경계에 도입될 수 있다.

일부 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 적어도 하나의 siRNA 듀플렉스를 포함하는 AAV 입자는 단독 요법으로 또는 질환의 치료를 위한 병용 요법으로, 예를 들어, 신경원 변성의 치료를 위한 하나 이상의 신경보호제와 함께 사용될 수 있다.

siRNA 분자

본 발명은 신경 장애를 치료하기 위한 유전자 발현의 RNA 간섭(RNAi) 유도 억제에 관한 것이다. 관심 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA(본원에서 총체적으로 "siRNA 분자"로 언급됨)가 본원에 제공된다. 상기 siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA는 세포, 예를 들어, 성상세포 또는 미세아교세포, 피질, 해마, 내비(entorhinal), 시상, 감각 또는 운동 뉴런에서 표적 유전자 발현을 감소시키거나 사일런싱하여 신경계 질환의 증상을 개선시킬 수 있다.

RNAi(또한, 전사후 유전자 사일런싱(PTGS), 진압(quelling) 또는 동시-억제로서 공지됨)는 RNA 분자가 전형적으로 특이적 mRNA 분자의 파괴를 유발함으로써 유전자 발현을 서열 특이적 방식으로 억제하는 전사후 유전자 사일런싱 과정이다. RNAi의 활성 성분은 소위 소형 간섭 RNA(siRNA)인 짧은/소형 이중 가닥 RNA(dsRNA)이고, 이는 전형적으로 15 내지 30개의 뉴클레오타이드(예를 들어, 19 내지 25개, 19 내지 24개 또는 19 내지 21개의 뉴클레오타이드) 및 2개의 뉴클레오타이드 3' 돌출부를 함유하고, 표적 유전자의 핵산 서열과 매칭된다. 이들 짧은 RNA 종은 보다 큰 dsRNA의 다이서(Dicer)-매개된 절단에 의해 생체내에서 자연적으로 생성될 수 있고 이들은 포유동물 세포에서 기능한다.

마이크로RNA(miRNA)로 명명되는 천연적으로 발현된 소형 RNA 분자는 mRNA의 발현을 조절함으로써 유전자 사일런싱을 유발한다. miRNA 함유 RNA 유도된 사일런싱 복합체(RISC)는 씨드 영역으로 불리는 miRNA의 5' 영역에서 뉴클레오타이드 2 내지 7과 완전한 서열 상보성, 및 이의 3' 영역과 다른 염기쌍을 제공하는 mRNA를 표적화한다. 유전자 발현의 miRNA 매개된 하향 조절은 표적 mRNA의 절단, 표적 mRNA의 번역 억제, 또는 mRNA 붕괴에 의해 유발될 수 있다. miRNA 표적화 서열은 일반적으로 표적 mRNA의 3'-UTR에 위치한다. 단일 miRNA는 다양한 유전자 기원의 100개 초과의 전사체를 표적화할 수 있고, 하나의 mRNA는 상이한 miRNA에 의해 표적화될 수 있다.

특이적 mRNA를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA는 시험관내에서 설계되고 합성될 수 있고, RNAi 프로세스를 활성화시키기 위해 세포로 도입될 수 있다. 엘바쉬르(Elbashir) 등은 21-뉴클레오타이드 siRNA 듀플렉스(소형 간섭 RNA로 지칭됨)가 포유동물 세포에서 면역 반응을 유도하지 않으면서 강력하고 특이적인 유전자 녹다운(knockdown)을 수행할 수 있음을 입증하였다(Elbashir SM et al., Nature, 2001, 411, 494-498). 이러한 최초 보고 이후, siRNA에 의한 전사후 유전자 사일런싱은 포유동물 세포에서 유전학적 분석을 위한 강력한 도구로서 부각되었고 새로운 치료제를 제조하기 위한 잠재력을 갖는다.

시험관내 합성된 siRNA 분자는 RNAi를 활성화시키기 위해 세포로 도입될 수 있다. 세포로 도입될 때, 내인성 dsRNA와 유사한 외인성 siRNA 듀플렉스는 siRNA 듀플렉스의 2개의 가닥 중 하나(즉, 안티센스 가닥)에 상보적인 RNA 서열에 대한 게놈의 검색을 용이하게 하는 다중유닛 복합체인, RNA 유도 사일런싱 복합체(RISC)를 형성하기 위해 어셈블리될 수 있다. 프로세스 동안, siRNA의 센스 가닥(또는 패신저 가닥)은 복합체로부터 소실되는 한편, siRNA의 안티센스 가닥(또는 가이드 가닥)은 이의 상보적 RNA와 매칭된다. 특히, siRNA 함유 RISC 복합체의 표적은 완전한 서열 상보성을 제공하는 mRNA이다. 이어서, siRNA 매개 유전자 사일런싱이 발생하여 표적을 절단하고, 방출하고 분해시킨다.

표적 mRNA와 상동성인 센스 가닥과 표적 mRNA에 상보적인 안티센스 가닥으로 구성된 siRNA 듀플렉스는 단일 가닥 (ss)-siRNA(예를 들어, 안티센스 가닥 RNA 또는 안티센스 올리고뉴클레오타이드)의 사용과 비교하여 표적 RNA 파괴에 대한 효율성 측면에서 훨씬 더 유리하다. 많은 경우에, 상응하는 듀플렉스의 효과적인 유전자 사일런싱 효능을 달성하기 위해 보다 높은 농도의 ss-siRNA를 필요로 한다.

임의의 전술한 분자는 AAV 입자 또는 바이러스 게놈에 의해 인코딩될 수 있다.

표적 유전자

본 발명의 조절 폴리뉴클레오타이드로 치료될 수 있는 신경계 질환의 비제한적인 예는 타우병증, 알츠하이머병, 헌팅턴병 및/또는 근위축성 측삭경화증을 포함한다. 표적 유전자는 이에 제한되지는 않지만 본원에 열거된 것들과 같은 임의의 신경계 질환과 관련된 임의의 유전자일 수 있다.

일 구현예에서, 표적 유전자는 아포지질단백질 E (APOE) 유전자의 대립유전자(예를 들어, ApoE2, ApoE3 및/또는 ApoE4)이다. 비제한적인 예로서, 표적 유전자는 APOE이고 표적 유전자는 표 2에 교시된 서열 중 하나, 이의 단편 또는 변이체를 갖는다.

또 다른 구현예에서, 표적 유전자는 슈퍼옥사이드 디스뮤타아제(SOD1)이다. 비제한적인 예로서, 표적 유전자는 SOD1이고 표적 유전자는 서열번호 1753의 서열(NCBI 참조 번호 NM_000454.4), 이의 단편 또는 변이체를 갖는다.

또 다른 구현예에서, 표적 유전자는 헌팅틴(HTT)이다. 비제한적인 예로서, 표적 유전자는 서열번호 1754의 뉴클레오타이드 서열(NCBI 참조 번호 NM_002111.7), 이의 단편 또는 변이체를 갖는 HTT이다. 비제한적인 예로서, 표적 유전자는 HTT이고, 표적 유전자는 서열번호 1755의 아미노산 서열(NCBI 참조 번호 NP_002102.4), 이의 단편 또는 변이체를 인코딩한다.

또 다른 구현예에서, 표적 유전자는 미세소관-관련 단백질 타우(MAPT)이다. 비제한적인 예로서, 표적 유전자는 표 9에 나타낸 임의의 핵산 서열의 뉴클레오타이드 서열, 이의 단편 또는 변이체를 갖는 MAPT이다. 비제한적인 예로서, 표적 유전자는 MAPT이고 표적 유전자는 표 9에 나타낸 임의의 아미노산 서열의 아미노산 서열, 이의 단편 또는 변이체를 인코딩한다.

siRNA 듀플렉스의 설계 및 서열

siRNA를 설계하기 위한 일부 가이드라인은 당업계에서 제안되어 왔다. 이들 가이드라인은 일반적으로 사일런싱될 유전자 내 영역을 표적화하는, 19-뉴클레오타이드 듀플렉스 영역, 대칭 2-3 뉴클레오타이드 3' 돌출부, 5-포스페이트 및 3-하이드록실 그룹을 생성하는 것을 권장한다. siRNA 서열 선호도를 지배할 수 있는 다른 법칙은 (i) 안티센스 가닥의 5' 말단에서의 A/U; (ii) 센스 가닥의 5' 말단에서의 G/C; (iii) 안티센스 가닥의 5' 말단 3분의 1에서 적어도 5개의 A/U 잔기; 및 (iv) 길이가 9개 초과인 뉴클레오타이드의 임의의 GC 연장부의 부재를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 상기 고려 사항에 따라, 표적 유전자의 특정 서열과 함께, 포유동물 표적 유전자 발현을 억제하기 위해 필수적인, 매우 효과적인 siRNA 분자가 용이하게 설계될 수 있다.

본 발명에 따르면, 관심 유전자를 표적화하는 siRNA 분자(예를 들어, siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA)가 설계된다. 상기 siRNA 분자는 특이적으로, 표적 유전자 발현 및 단백질 생산을 억제할 수 있다. 일부 측면에서, siRNA 분자는 세포에서 표적 유전자 변이체, 즉, 신경계 질환에서 식별된 전사체를 선택적으로 "녹아웃(knock out)"하도록 설계되고 사용된다. 일부 측면에서, siRNA 분자는 세포에서 표적 유전자 변이체를 선택적으로 "녹다운"하도록 설계되고 사용된다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자는 센스 가닥 및 상보적인 안티센스 가닥을 포함하며, 이들 두 가닥은 함께 하이브리드화되어 듀플렉스 구조를 형성한다. 안티센스 가닥은 표적-특이적 RNAi를 유도하기 위해 표적 mRNA 서열에 대해 충분한 상보성을 가지며, 즉, siRNA 분자는 RNAi 기구 또는 프로세스에 의해 표적 mRNA의 파괴를 유발하기에 충분한 서열을 갖는다.

일부 구현예에서, 안티센스 가닥 및 표적 mRNA 서열은 100% 상보성을 갖는다. 안티센스 가닥은 표적 mRNA 서열의 임의의 부분에 상보적일 수 있다.

다른 구현예에서, 안티센스 가닥 및 표적 mRNA 서열은 적어도 하나의 미스매치(mismatch)를 포함한다. 비제한적인 예로서, 안티센스 가닥 및 표적 mRNA 서열은 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-99%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-99%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-99%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-99%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-99%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-99%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 90-95%, 90-99% 또는 95-99% 상보성을 갖는다.

본 발명에 따르면, siRNA 분자는 약 10-50개 이상의 뉴클레오타이드 길이, 즉 10-50개의 뉴클레오타이드(또는 뉴클레오타이드 유사체)를 포함하는 각각의 가닥을 갖는다. 바람직하게는, siRNA 분자는 각 가닥에서 약 15-30개, 예를 들어, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 뉴클레오타이드 길이를 가지며, 여기서 가닥 중 하나는 표적 영역에 충분히 상보적이다. 일 구현예에서, siRNA 분자는 약 19 내지 25, 19 내지 24 또는 19 내지 21개의 뉴클레오타이드 길이를 갖는다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자는 약 19개의 뉴클레오타이드 내지 약 25개의 뉴클레오타이드, 및 3'-말단에서 2개의 돌출 뉴클레오타이드를 포함하는 합성 RNA 듀플렉스일 수 있다. 일부 측면에서, siRNA 분자는 변형되지 않은 RNA 분자일 수 있다. 다른 측면에서, siRNA 분자는 적어도 하나의 변형된 뉴클레오타이드, 예를 들어 염기, 당 또는 골격 변형을 함유할 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자는 안티센스 서열 및 센스 서열, 또는 이의 단편 또는 변이체를 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 안티센스 서열 및 센스 서열은 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-99%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-99%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-99%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-99%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-99%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-99%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 90-95%, 90-99% 또는 95-99% 상보성을 갖는다.

DNA 발현 플라스미드는 세포에서 본 발명의 siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA를 안정적으로 발현시키고 표적 유전자의 장기 억제를 달성하는데 사용될 수 있다. 일 측면에서, siRNA 듀플렉스의 센스 및 안티센스 가닥은 전형적으로 짧은 스페이서 서열에 의해 연결되어 짧은 헤어핀 RNA(shRNA)라고 불리는 스템-루프 구조의 발현을 유도한다. 헤어핀은 다이서에 의해 인식되고 절단되어 성숙한 siRNA 분자를 생성한다.

다른 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자는 세포로의 전달을 위해 AAV 입자에 인코딩될 수 있다. 일 구현예에서, siRNA는 ITR의 측면에 있는 AAV 바이러스 게놈에 삽입될 수 있다.

본 발명에 따르면, 관심 유전자의 mRNA를 표적화하는 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산을 포함하는 AAV 입자는 AAV 입자 혈청형을 포함할 수 있고/있거나 이에 제한되지는 않지만 VOY101, VOY201, AAVPHP.B (PHP.B), AAVPHP.A (PHP.A), AAVG2B-26, AAVG2B-13, AAVTH1.1-32, AAVTH1.1-35, AAVPHP.B2 (PHP.B2), AAVPHP.B3 (PHP.B3), AAVPHP.N/PHP.B-DGT, AAVPHP.B-EST, AAVPHP.B-GGT, AAVPHP.B-ATP, AAVPHP.B-ATT-T, AAVPHP.B-DGT-T, AAVPHP.B-GGT-T, AAVPHP.B-SGS, AAVPHP.B-AQP, AAVPHP.B-QQP, AAVPHP.B-SNP(3), AAVPHP.B-SNP, AAVPHP.B-QGT, AAVPHP.B-NQT, AAVPHP.B-EGS, AAVPHP.B-SGN, AAVPHP.B-EGT, AAVPHP.B-DST, AAVPHP.B-DST, AAVPHP.B-STP, AAVPHP.B-PQP, AAVPHP.B-SQP, AAVPHP.B-QLP, AAVPHP.B-TMP, AAVPHP.B-TTP, AAVPHP.S/G2A12, AAVG2A15/G2A3 (G2A3), AAVG2B4 (G2B4), AAVG2B5, PHP.S, AAV1, AAV2, AAV2G9, AAV3, AAV3a, AAV3b, AAV3-3, AAV4, AAV4-4, AAV5, AAV6, AAV6.1, AAV6.2, AAV6.1.2, AAV7, AAV7.2, AAV8, AAV9, AAV9.11, AAV9.13, AAV9.16, AAV9.24, AAV9.45, AAV9.47, AAV9.61, AAV9.68, AAV9.84, AAV9.9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV16.3, AAV24.1, AAV27.3, AAV42.12, AAV42-1b, AAV42-2, AAV42-3a, AAV42-3b, AAV42-4, AAV42-5a, AAV42-5b, AAV42-6b, AAV42-8, AAV42-10, AAV42-11, AAV42-12, AAV42-13, AAV42-15, AAV42-aa, AAV43-1, AAV43-12, AAV43-20, AAV43-21, AAV43-23, AAV43-25, AAV43-5, AAV44.1, AAV44.2, AAV44.5, AAV223.1, AAV223.2, AAV223.4, AAV223.5, AAV223.6, AAV223.7, AAV1-7/rh.48, AAV1-8/rh.49, AAV2-15/rh.62, AAV2-3/rh.61, AAV2-4/rh.50, AAV2-5/rh.51, AAV3.1/hu.6, AAV3.1/hu.9, AAV3-9/rh.52, AAV3-11/rh.53, AAV4-8/r11.64, AAV4-9/rh.54, AAV4-19/rh.55, AAV5-3/rh.57, AAV5-22/rh.58, AAV7.3/hu.7, AAV16.8/hu.10, AAV16.12/hu.11, AAV29.3/bb.1, AAV29.5/bb.2, AAV106.1/hu.37, AAV114.3/hu.40, AAV127.2/hu.41, AAV127.5/hu.42, AAV128.3/hu.44, AAV130.4/hu.48, AAV145.1/hu.53, AAV145.5/hu.54, AAV145.6/hu.55, AAV161.10/hu.60, AAV161.6/hu.61, AAV33.12/hu.17, AAV33.4/hu.15, AAV33.8/hu.16, AAV52/hu.19, AAV52.1/hu.20, AAV58.2/hu.25, AAVA3.3, AAVA3.4, AAVA3.5, AAVA3.7, AAVC1, AAVC2, AAVC5, AAV-DJ, AAV-DJ8, AAVF3, AAVF5, AAVH2, AAVrh.72, AAVhu.8, AAVrh.68, AAVrh.70, AAVpi.1, AAVpi.3, AAVpi.2, AAVrh.60, AAVrh.44, AAVrh.65, AAVrh.55, AAVrh.47, AAVrh.69, AAVrh.45, AAVrh.59, AAVhu.12, AAVH6, AAVLK03, AAVH-1/hu.1, AAVH-5/hu.3, AAVLG-10/rh.40, AAVLG-4/rh.38, AAVLG-9/hu.39, AAVN721-8/rh.43, AAVCh.5, AAVCh.5R1, AAVcy.2, AAVcy.3, AAVcy.4, AAVcy.5, AAVCy.5R1, AAVCy.5R2, AAVCy.5R3, AAVCy.5R4, AAVcy.6, AAVhu.1, AAVhu.2, AAVhu.3, AAVhu.4, AAVhu.5, AAVhu.6, AAVhu.7, AAVhu.9, AAVhu.10, AAVhu.11, AAVhu.13, AAVhu.15, AAVhu.16, AAVhu.17, AAVhu.18, AAVhu.20, AAVhu.21, AAVhu.22, AAVhu.23.2, AAVhu.24, AAVhu.25, AAVhu.27, AAVhu.28, AAVhu.29, AAVhu.29R, AAVhu.31, AAVhu.32, AAVhu.34, AAVhu.35, AAVhu.37, AAVhu.39, AAVhu.40, AAVhu.41, AAVhu.42, AAVhu.43, AAVhu.44, AAVhu.44R1, AAVhu.44R2, AAVhu.44R3, AAVhu.45, AAVhu.46, AAVhu.47, AAVhu.48, AAVhu.48R1, AAVhu.48R2, AAVhu.48R3, AAVhu.49, AAVhu.51, AAVhu.52, AAVhu.54, AAVhu.55, AAVhu.56, AAVhu.57, AAVhu.58, AAVhu.60, AAVhu.61, AAVhu.63, AAVhu.64, AAVhu.66, AAVhu.67, AAVhu.14/9, AAVhu.t 19, AAVrh.2, AAVrh.2R, AAVrh.8, AAVrh.8R, AAVrh.10, AAVrh.12, AAVrh.13, AAVrh.13R, AAVrh.14, AAVrh.17, AAVrh.18, AAVrh.19, AAVrh.20, AAVrh.21, AAVrh.22, AAVrh.23, AAVrh.24, AAVrh.25, AAVrh.31, AAVrh.32, AAVrh.33, AAVrh.34, AAVrh.35, AAVrh.36, AAVrh.37, AAVrh.37R2, AAVrh.38, AAVrh.39, AAVrh.40, AAVrh.46, AAVrh.48, AAVrh.48.1, AAVrh.48.1.2, AAVrh.48.2, AAVrh.49, AAVrh.51, AAVrh.52, AAVrh.53, AAVrh.54, AAVrh.56, AAVrh.57, AAVrh.58, AAVrh.61, AAVrh.64, AAVrh.64R1, AAVrh.64R2, AAVrh.67, AAVrh.73, AAVrh.74, AAVrh8R, AAVrh8R A586R 돌연변이체, AAVrh8R R533A 돌연변이체, AAAV, BAAV, 염소 AAV, 소 AAV, AAVhE1.1, AAVhEr1.5, AAVhER1.14, AAVhEr1.8, AAVhEr1.16, AAVhEr1.18, AAVhEr1.35, AAVhEr1.7, AAVhEr1.36, AAVhEr2.29, AAVhEr2.4, AAVhEr2.16, AAVhEr2.30, AAVhEr2.31, AAVhEr2.36, AAVhER1.23, AAVhEr3.1, AAV2.5T, AAV-PAEC, AAV-LK01, AAV-LK02, AAV-LK03, AAV-LK04, AAV-LK05, AAV-LK06, AAV-LK07, AAV-LK08, AAV-LK09, AAV-LK10, AAV-LK11, AAV-LK12, AAV-LK13, AAV-LK14, AAV-LK15, AAV-LK16, AAV-LK17, AAV-LK18, AAV-LK19, AAV-PAEC2, AAV-PAEC4, AAV-PAEC6, AAV-PAEC7, AAV-PAEC8, AAV-PAEC11, AAV-PAEC12, AAV-2-프리-miRNA-101, AAV-8h, AAV-8b, AAV-h, AAV-b, AAV SM 10-2, AAV 셔플 100-1, AAV 셔플 100-3, AAV 셔플 100-7, AAV 셔플 10-2, AAV 셔플 10-6, AAV 셔플 10-8, AAV 셔플 100-2, AAV SM 10-1, AAV SM 10-8, AAV SM 100-3, AAV SM 100-10, BNP61 AAV, BNP62 AAV, BNP63 AAV, AAVrh.50, AAVrh.43, AAVrh.62, AAVrh.48, AAVhu.19, AAVhu.11, AAVhu.53, AAV4-8/rh.64, AAVLG-9/hu.39, AAV54.5/hu.23, AAV54.2/hu.22, AAV54.7/hu.24, AAV54.1/hu.21, AAV54.4R/hu.27, AAV46.2/hu.28, AAV46.6/hu.29, AAV128.1/hu.43, 진성 유형 AAV (ttAAV), UPENN AAV 10, 일본 AAV 10 혈청형, AAV CBr-7.1, AAV CBr-7.10, AAV CBr-7.2, AAV CBr-7.3, AAV CBr-7.4, AAV CBr-7.5, AAV CBr-7.7, AAV CBr-7.8, AAV CBr-B7.3, AAV CBr-B7.4, AAV CBr-E1, AAV CBr-E2, AAV CBr-E3, AAV CBr-E4, AAV CBr-E5, AAV CBr-e5, AAV CBr-E6, AAV CBr-E7, AAV CBr-E8, AAV CHt-1, AAV CHt-2, AAV CHt-3, AAV CHt-6.1, AAV CHt-6.10, AAV CHt-6.5, AAV CHt-6.6, AAV CHt-6.7, AAV CHt-6.8, AAV CHt-P1, AAV CHt-P2, AAV CHt-P5, AAV CHt-P6, AAV CHt-P8, AAV CHt-P9, AAV CKd-1, AAV CKd-10, AAV CKd-2, AAV CKd-3, AAV CKd-4, AAV CKd-6, AAV CKd-7, AAV CKd-8, AAV CKd-B1, AAV CKd-B2, AAV CKd-B3, AAV CKd-B4, AAV CKd-B5, AAV CKd-B6, AAV CKd-B7, AAV CKd-B8, AAV CKd-H1, AAV CKd-H2, AAV CKd-H3, AAV CKd-H4, AAV CKd-H5, AAV CKd-H6, AAV CKd-N3, AAV CKd-N4, AAV CKd-N9, AAV CLg-F1, AAV CLg-F2, AAV CLg-F3, AAV CLg-F4, AAV CLg-F5, AAV CLg-F6, AAV CLg-F7, AAV CLg-F8, AAV CLv-1, AAV CLv1-1, AAV Clv1-10, AAV CLv1-2, AAV CLv-12, AAV CLv1-3, AAV CLv-13, AAV CLv1-4, AAV Clv1-7, AAV Clv1-8, AAV Clv1-9, AAV CLv-2, AAV CLv-3, AAV CLv-4, AAV CLv-6, AAV CLv-8, AAV CLv-D1, AAV CLv-D2, AAV CLv-D3, AAV CLv-D4, AAV CLv-D5, AAV CLv-D6, AAV CLv-D7, AAV CLv-D8, AAV CLv-E1, AAV CLv-K1, AAV CLv-K3, AAV CLv-K6, AAV CLv-L4, AAV CLv-L5, AAV CLv-L6, AAV CLv-M1, AAV CLv-M11, AAV CLv-M2, AAV CLv-M5, AAV CLv-M6, AAV CLv-M7, AAV CLv-M8, AAV CLv-M9, AAV CLv-R1, AAV CLv-R2, AAV CLv-R3, AAV CLv-R4, AAV CLv-R5, AAV CLv-R6, AAV CLv-R7, AAV CLv-R8, AAV CLv-R9, AAV CSp-1, AAV CSp-10, AAV CSp-11, AAV CSp-2, AAV CSp-3, AAV CSp-4, AAV CSp-6, AAV CSp-7, AAV CSp-8, AAV CSp-8.10, AAV CSp-8.2, AAV CSp-8.4, AAV CSp-8.5, AAV CSp-8.6, AAV CSp-8.7, AAV CSp-8.8, AAV CSp-8.9, AAV CSp-9, AAV.hu.48R3, AAV.VR-355, AAV3B, AAV4, AAV5, AAVF1/HSC1, AAVF11/HSC11, AAVF12/HSC12, AAVF13/HSC13, AAVF14/HSC14, AAVF15/HSC15, AAVF16/HSC16, AAVF17/HSC17, AAVF2/HSC2, AAVF3/HSC3, AAVF4/HSC4, AAVF5/HSC5, AAVF6/HSC6, AAVF7/HSC7, AAVF8/HSC8 및/또는 AAVF9/HSC9 및 이들의 변이체와 같은 펩타이드 삽입을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA는 표적 mRNA를 억제(또는 분해)한다. 따라서, siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA는 세포, 예를 들어 뉴런 또는 성상세포에서 표적 유전자 발현을 실질적으로 억제하는데 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 표적 유전자 발현의 억제는 적어도 약 20%, 바람직하게는 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 억제를 나타낸다. 따라서, 표적화된 유전자의 단백질 산물은 적어도 약 20%, 바람직하게는 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 억제될 수 있다.

일부 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 siRNA 분자는 임의의 이용가능한 설계 툴을 사용하여 설계될 수 있다. 본 발명에 따르면, siRNA 분자를 설계하고 배양된 세포에서 표적 유전자 mRNA 수준을 감소시키는 능력에 대해 시험한다.

일 구현예에서, siRNA 분자를 설계하고 배양된 세포에서 ApoE2 수준을 감소시키는 능력에 대해 시험한다.

일 구현예에서, siRNA 분자를 설계하고 배양된 세포에서 ApoE3 수준을 감소시키는 능력에 대해 시험한다.

일 구현예에서, siRNA 분자를 설계하고 배양된 세포에서 ApoE4 수준을 감소시키는 능력에 대해 시험한다.

일 구현예에서, siRNA 분자를 설계하고 배양된 세포에서 SOD1 수준을 감소시키는 능력에 대해 시험한다.

일 구현예에서, siRNA 분자를 설계하고 배양된 세포에서 HTT 수준을 감소시키는 능력에 대해 시험한다.

일 구현예에서, siRNA 분자를 설계하고 배양된 세포에서 타우 수준을 감소시키는 능력에 대해 시험한다.

일 구현예에서, siRNA 분자는 가이드 가닥에 대한 miRNA 씨드 매치를 포함한다. 또 다른 구현예에서, siRNA 분자는 패신저 가닥에 대한 miRNA 씨드 매치를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA는 가이드 또는 패신저 가닥에 대한 씨드 매치를 포함하지 않는다.

일 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA는 가이드 가닥에 대해 유의미한 전장 오프 표적(off target)이 거의 없을 수 있다. 또 다른 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA는 패신저 가닥에 대해 유의미한 전장 오프 표적이 거의 없을 수 있다. 관심 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA는 패신저 가닥에 대한 전장 오프 표적이 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 1-5%, 2-6%, 3-7%, 4-8%, 5-9%, 5-10%, 6-10%, 5-15%, 5-20%, 5-25% 5-30%, 10-20%, 10-30%, 10-40%, 10-50%, 15-30%, 15-40%, 15-45%, 20-40%, 20-50%, 25-50%, 30-40%, 30-50%, 35-50%, 40-50%, 45-50% 미만일 수 있다. 또 다른 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA는 가이드 가닥 또는 패신저 가닥에 대해 유의미한 전장 오프 표적이 거의 없을 수 있다. 관심 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA는 가이드 또는 패신저 가닥에 대한 전장 오프 표적이 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 1-5%, 2-6%, 3-7%, 4-8%, 5-9%, 5-10%, 6-10%, 5-15%, 5-20%, 5-25% 5-30%, 10-20%, 10-30%, 10-40%, 10-50%, 15-30%, 15-40%, 15-45%, 20-40%, 20-50%, 25-50%, 30-40%, 30-50%, 35-50%, 40-50%, 45-50% 미만일 수 있다.

일 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA는 시험관내에서 활성이 높을 수 있다. 또 다른 구현예에서, siRNA 분자는 시험관내에서 활성이 낮을 수 있다. 또 다른 구현예에서, 관심 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA는 시험관내에서 가이드 가닥 활성이 높고 패신저 가닥 활성이 낮을 수 있다.

일 구현예에서, siRNA 분자는 시험관내에서 가이드 가닥 활성이 높고 패신저 가닥 활성이 낮다. 가이드 가닥에 의한 표적 녹다운(KD)은 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 99.5% 또는 100%일 수 있다. 가이드 가닥에 의한 표적 녹다운은 60-65%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 60-99%, 60-99.5%, 60-100%, 65-70%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 65-99%, 65-99.5%, 65-100%, 70-75%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 70-99%, 70-99.5%, 70-100%, 75-80%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 75-99%, 75-99.5%, 75-100%, 80-85%, 80-90%, 80-95%, 80-99%, 80-99.5%, 80-100%, 85-90%, 85-95%, 85-99%, 85-99.5%, 85-100%, 90-95%, 90-99%, 90-99.5%, 90-100%, 95-99%, 95-99.5%, 95-100%, 99-99.5%, 99-100% 또는 99.5-100%일 수 있다. 비제한적인 예로서, 가이드 가닥에 의한 표적 녹다운(KD)은 70% 초과이다.

일 구현예에서, 가장 가까운 오프 표적에 대한 패신저 가닥의 IC₅₀은 표적에 대한 가이드 가닥의 IC₅₀에 100을 곱한 값보다 크다. 비제한적인 예로서, 가장 가까운 오프 표적에 대한 패신저 가닥의 IC₅₀이 표적에 대한 가이드 가닥의 IC₅₀에 100을 곱한 값보다 크면, siRNA 분자는 시험관내에서 가이드 가닥 활성이 높고 패신저 가닥 활성이 낮다고 일컬어진다.

일 구현예에서, 가이드 가닥의 5' 프로세싱은 시험관내 또는 생체내에서 5' 말단에서 시간의 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100%의 올바른 개시(n)를 갖는다. 비제한적인 예로서, 가이드 가닥의 5' 프로세싱은 정확하고 시험 관내에서 5' 말단에서 시간의 적어도 99%의 올바른 개시(n)를 갖는다. 비제한적인 예로서, 가이드 가닥의 5' 프로세싱은 정확하고 생체내에서 5' 말단에서 시간의 적어도 99%의 올바른 개시(n)를 갖는다.

일 구현예에서, 발현된 가이드 대 패신저(G:P)(안티센스 대 센스로도 지칭됨) 가닥 비는 시험관내 또는 생체내에서 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1;1, 2:10, 2:9, 2:8, 2:7, 2:6, 2:5, 2:4, 2:3, 2:2, 2:1, 3:10, 3:9, 3:8, 3:7, 3:6, 3:5, 3:4, 3:3, 3:2, 3:1, 4:10, 4:9, 4:8, 4:7, 4:6, 4:5, 4:4, 4:3, 4:2, 4:1, 5:10, 5:9, 5:8, 5:7, 5:6, 5:5, 5:4, 5:3, 5:2, 5:1, 6:10, 6:9, 6:8, 6:7, 6:6, 6:5, 6:4, 6:3, 6:2, 6:1, 7:10, 7:9, 7:8, 7:7, 7:6, 7:5, 7:4, 7:3, 7:2, 7:1, 8:10, 8:9, 8:8, 8:7, 8:6, 8:5, 8:4, 8:3, 8:2, 8:1, 9:10, 9:9, 9:8, 9:7, 9:6, 9:5, 9:4, 9:3, 9:2, 9:1, 10:10, 10:9, 10:8, 10:7, 10:6, 10:5, 10:4, 10:3, 10:2, 10:1, 1:99, 5:95, 10:90, 15:85, 20:80, 25:75, 30:70, 35:65, 40:60, 45:55, 50:50, 55:45, 60:40, 65:35, 70:30, 75:25, 80:20, 85:15, 90:10, 95:5, 또는 99:1이다. 가이드 대 패신저 비는 가이드 가닥의 절제 후 가이드 가닥 대 패신저 가닥의 비를 나타낸다. 예를 들어, 80:20의 가이드 대 패신저 비는 전구체에서 잘려나간 2개의 패신저 가닥마다 8개의 가이드 가닥을 가질 것이다. 비제한적인 예로서, 가이드-대-패신저 가닥 비는 시험관내에서 80:20이다. 비제한적인 예로서, 가이드-대-패신저 가닥 비는 생체내에서 80:20이다. 비제한적인 예로서, 가이드-대-패신저 가닥 비는 시험관내에서 8:2이다. 비제한적인 예로서, 가이드-대-패신저 가닥 비는 생체내에서 8:2이다. 비제한적인 예로서, 가이드-대-패신저 가닥 비는 시험관내에서 9:1이다. 비제한적인 예로서, 가이드-대-패신저 가닥 비는 생체 내에서 9:1이다.

일 구현예에서, 발현된 패신저 대 가이드(P:G)(센스 대 안티센스로도 지칭됨) 가닥 비는 시험관내 또는 생체내에서 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1;1, 2:10, 2:9, 2:8, 2:7, 2:6, 2:5, 2:4, 2:3, 2:2, 2:1, 3:10, 3:9, 3:8, 3:7, 3:6, 3:5, 3:4, 3:3, 3:2, 3:1, 4:10, 4:9, 4:8, 4:7, 4:6, 4:5, 4:4, 4:3, 4:2, 4:1, 5:10, 5:9, 5:8, 5:7, 5:6, 5:5, 5:4, 5:3, 5:2, 5:1, 6:10, 6:9, 6:8, 6:7, 6:6, 6:5, 6:4, 6:3, 6:2, 6:1, 7:10, 7:9, 7:8, 7:7, 7:6, 7:5, 7:4, 7:3, 7:2, 7:1, 8:10, 8:9, 8:8, 8:7, 8:6, 8:5, 8:4, 8:3, 8:2, 8:1, 9:10, 9:9, 9:8, 9:7, 9:6, 9:5, 9:4, 9:3, 9:2, 9:1, 10:10, 10:9, 10:8, 10:7, 10:6, 10:5, 10:4, 10:3, 10:2, 10:1, 1:99, 5:95, 10:90, 15:85, 20:80, 25:75, 30:70, 35:65, 40:60, 45:55, 50:50, 55:45, 60:40, 65:35, 70:30, 75:25, 80:20, 85:15, 90:10, 95:5, 또는 99:1이다. 패신저 대 가이드 비는 가이드 가닥의 절제 후 패신저 가닥 대 가이드 가닥의 비를 나타낸다. 예를 들어, 80:20의 패신저 대 가이드 비는 전구체에서 잘려나간 2개의 가이드 가닥마다 8개의 패신저 가닥을 가질 것이다. 비제한적인 예로서, 패신저-대-가이드 가닥 비는 시험관내에서 80:20이다. 비제한적인 예로서, 패신저-대-가이드 가닥 비는 생체내에서 80:20이다. 비제한적인 예로서, 패신저-대-가이드 가닥 비는 시험관내에서 8:2이다. 비제한적인 예로서, 패신저-대-가이드 가닥 비는 생체내에서 8:2이다. 비제한적인 예로서, 패신저-대-가이드 가닥 비는 시험관내에서 9:1이다. 비제한적인 예로서, 패신저-대-가이드 가닥 비는 생체 내에서 9:1이다.

일 구현예에서, dsRNA를 인코딩하는 바이러스 게놈의 완전성(integrity)은 작제물의 전체 길이의 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 99% 초과이다. 비제한적인 예로서, 바이러스 게놈의 완전성은 작제물의 전체 길이의 80%이다.

일 구현예에서, 패신저 및/또는 가이드 가닥은 유럽 특허 공개 공보 EP1752536호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 개괄된 방법 및 법칙에 기초하여 설계된다. 비제한적인 예로서, 서열의 3'-말단 염기는 아데닌, 티민 또는 우라실이다. 비제한적인 예로서, 서열의 5'-말단 염기는 구아닌 또는 시토신이다. 비제한적인 예로서, 3'-말단 서열은 아데닌, 티민 및 우라실 중 하나 이상의 염기가 풍부한 7개 염기를 포함한다. 비제한적인 예로서, 염기값은 세포독성을 발현시키지 않으면서 RNA 간섭을 유발하는 그러한 수준이다.

분자 스캐폴드

일 구현예에서, siRNA 분자는 분자 스캐폴드를 또한 포함하는 조절 폴리뉴클레오타이드에서 인코딩될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "분자 스캐폴드"는 후속적 분자를 설계하거나 제조하기 위한 서열 또는 구조적 기초를 형성하는 프레임워크 또는 출발 분자이다.

일 구현예에서, 페이로드(예를 들어, siRNA, miRNA 또는 본원에 기재된 다른 RNAi 제제)를 포함하는 조절 폴리뉴클레오타이드는 임의의 길이일 수 있고, 야생형 microRNA 서열로부터 전적으로 또는 부분적으로 유래되거나 완전히 인공적일 수 있는 적어도 하나의 5' 플랭킹 서열을 포함하는 분자 스캐폴드를 포함한다. 3' 플랭킹 서열은 크기 및 기원에서 5' 플랭킹 서열을 반영할 수 있다. 플랭킹 서열 중 어느 하나는 부재할 수 있다. 일 구현예에서, 5' 및 3' 플랭킹 서열 둘 다 부재하다. 3' 플랭킹 서열은 임의로 하나 이상의 CNNC 모티프를 함유할 수 있고, 여기서 "N"은 임의의 뉴클레오타이드를 나타낸다.

일부 구현예에서 5' 및 3' 플랭킹 서열은 길이가 동일하다.

일부 구현예에서 5' 플랭킹 서열은 1-10개의 뉴클레오타이드 길이, 5-15개의 뉴클레오타이드 길이, 10-30개의 뉴클레오타이드 길이, 20-50개의 뉴클레오타이드 길이, 40개 초과의 뉴클레오타이드 길이, 50개 초과의 뉴클레오타이드 길이, 100개 초과의 뉴클레오타이드 길이 또는 200개 초과의 뉴클레오타이드 길이이다.

일부 구현예에서, 5' 플랭킹 서열은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 또는 500개의 뉴클레오타이드 길이일 수 있다.

일부 구현예에서 3' 플랭킹 서열은 1-10개의 뉴클레오타이드 길이, 5-15개의 뉴클레오타이드 길이, 10-30개의 뉴클레오타이드 길이, 20-50개의 뉴클레오타이드 길이, 40개 초과의 뉴클레오타이드 길이, 50개 초과의 뉴클레오타이드 길이, 100개 초과의 뉴클레오타이드 길이 또는 200개 초과의 뉴클레오타이드 길이이다.

일부 구현예에서, 3' 플랭킹 서열은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 493, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 또는 500개의 뉴클레오타이드 길이일 수 있다.

일부 구현예에서 5' 및 3' 플랭킹 서열은 서열이 동일하다. 일부 구현예에서 이들은 서로 정렬될 때 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 20% 또는 30% 이상 상이하다.

일 구현예에서, 분자 스캐폴드는 적어도 하나의 3' 플랭킹 영역을 포함한다. 비제한적인 예로서, 3' 플랭킹 영역은 임의의 길이일 수 있고 야생형 microRNA 서열로부터 전적으로 또는 부분적으로 유래되거나 완전히 인공적 서열일 수 있는 3' 플랭킹 서열을 포함할 수 있다.

스템 루프 구조의 스템을 형성하는 것은 최소 적어도 하나의 페이로드 서열이다. 일부 구현예에서, 페이로드 서열은 표적 서열에 부분적으로 상보적이거나 표적 서열에 하이브리드화될 수 있는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 페이로드는 siRNA 분자 또는 siRNA 분자의 단편이다.

일부 구현예에서, 스템 루프의 5' 아암(arm)은 센스 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 스템 루프의 3' 아암은 안티센스 서열을 포함한다. 안티센스 서열은, 일부 경우에, 5' 가장 말단에서 "G" 뉴클레오타이드를 포함한다.

다른 구현예에서, 센스 서열은 3' 아암에 있을 수 있는 한편 안티센스 서열은 스템 루프 구조의 스템의 5' 아암에 있다.

센스 및 안티센스 서열은 이들의 길이의 상당 부분에 걸쳐 완전히 상보적일 수 있다. 다른 구현예에서, 센스 서열 및 안티센스 서열은 독립적으로 가닥의 길이의 적어도 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 또는 99%에 걸쳐 적어도 70, 80, 90, 95 또는 99% 상보적일 수 있다.

센스 서열의 동일성 또는 안티센스 서열의 상동성 모두 표적에 100% 상보적일 필요는 없다.

스템 루프 구조의 센스 및 안티센스 서열을 분리하는 것은 루프(루프 모티프로도 알려짐)이다. 루프는 임의이 길이, 4-30개의 뉴클레오타이드, 4-20개의 뉴클레오타이드, 4-15개의 뉴클레오타이드, 5-15개의 뉴클레오타이드, 6-12개의 뉴클레오타이드, 6개의 뉴클레오타이드, 7개의 뉴클레오타이드, 8개의 뉴클레오타이드, 9개의 뉴클레오타이드, 10개의 뉴클레오타이드, 11개의 뉴클레오타이드 및/또는 12개의 뉴클레오타이드 길이일 수 있다.

일부 구현예에서, 루프는 적어도 하나의 UGUG 모티프를 포함한다. 일부 구현예에서, UGUG 모티프는 루프의 5' 말단에 위치한다.

스페이서 영역은 하나 이상의 모듈을 서로 분리시키기 위해 조절 폴리뉴클레오타이드에 존재할 수 있다. 하나 이상의 이러한 스페이서 영역이 존재할 수 있다.

일 구현예에서, 8-20개, 즉, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 뉴클레오타이드의 스페이서 영역이 센스 서열과 플랭킹 서열 사이에 존재할 수 있다.

일 구현예에서, 스페이서는 13개의 뉴클레오타이드이고, 센스 서열과 플랭킹 서열의 5' 말단 사이에 위치한다. 일 구현예에서, 스페이서는 대략 1회의 서열의 나선형 턴을 형성하기에 충분한 길이를 갖는다.

일 구현예에서, 8-20개, 즉, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 뉴클레오타이드의 스페이서 영역이 안티센스 서열과 플랭킹 서열 사이에 존재할 수 있다.

일 구현예에서, 스페이서 서열은 10-13개, 즉, 10, 11, 12 또는 13개의 뉴클레오타이드이며, 안티센스 서열과 플랭킹 서열의 3' 말단 사이에 위치한다. 일 구현예에서, 스페이서는 대략 1회의 서열의 나선형 턴을 형성하기에 충분한 길이를 갖는다.

일 구현예에서, 조절 폴리뉴클레오타이드는 5'에서 3' 방향으로 5' 플랭킹 서열, 5' 아암, 루프 모티프, 3' 아암 및 3' 플랭킹 서열을 포함한다. 비제한적인 예로서, 5' 아암은 센스 서열을 포함할 수 있으며, 3' 아암은 안티센스 서열을 포함한다. 또 다른 비제한적인 예에서, 5' 아암은 안티센스 서열을 포함하고, 3' 아암은 센스 서열을 포함한다.

일 구현예에서, 5' 아암, 페이로드(예를 들어, 센스 및/또는 안티센스 서열), 루프 모티프 및/또는 3' 아암 서열은 변경될 수 있다(예를 들어, 1개 이상의 뉴클레오타이드의 치환, 뉴클레오타이드의 첨가 및/또는 뉴클레오타이드의 결실). 상기 변경은 작제물의 기능에 유리한 변화를 야기할 수 있다(예를 들어, 표적 서열의 녹다운 증가, 작제물의 분해 감소, 오프 표적 영향 감소, 페이로드의 효율 증가, 및 페이로드의 분해 감소).

일 구현예에서, 조절 폴리뉴클레오타이드의 분자 스캐폴드는 가이드 가닥의 절제율이 패신저 가닥의 절제율보다 더 크도록 정렬된다. 가이드 또는 패신저 가닥의 절제율은, 독립적으로, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 99% 초과일 수 있다. 비제한적인 예로서, 가이드 가닥의 절제율은 적어도 80%이다. 또 다른 비제한적인 예로서, 가이드 가닥의 절제율은 적어도 90%이다.

일 구현예에서, 가이드 가닥의 절제율은 패신저 가닥의 절제율보다 크다. 일 측면에서, 가이드 가닥의 절제율은 패신저 가닥보다 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 99% 초과로 더 클 수 있다.

일 구현예에서, 가이드 가닥의 절제 효율은 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 99% 초과이다. 비제한적인 예로서, 가이드 가닥의 절제 효율은 80% 초과이다.

일 구현예에서, 가이드 가닥의 절제 효율은 분자 스캐폴드로부터의 패신저 가닥의 절제보다 더 크다. 가이드 가닥의 절제는 분자 스캐폴드로부터의 패신저 가닥의 절제보다 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 10배 초과로 더 효율적일 수 있다.

일 구현예에서, 분자 스캐폴드는 이중-기능 표적화 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함한다. 본원에 사용된 "이중-기능 표적화" 조절 폴리뉴클레오타이드는 가이드 및 패신저 가닥 둘 다 동일한 표적을 녹다운하거나 가이드 및 패신저 가닥이 상이한 표적을 녹다운하는 폴리뉴클레오타이드이다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 조절 폴리뉴클레오타이드의 분자 스캐폴드는 5' 플랭킹 영역, 루프 영역 및 3' 플랭킹 영역을 포함한다. 본원에 기재된 분자 스캐폴드에 사용될 수 있는 5' 플랭킹 영역, 루프 영역 및 3' 플랭킹 영역에 대한 서열의 비제한적인 예는 표 10 내지 12에 나타나 있다.

표 8-10에 기재된 임의의 영역은 본원에 기재된 분자 스캐폴드에 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 분자 스캐폴드는 표 10에 열거된 하나의 5' 플랭킹 영역을 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 분자 스캐폴드는 5' 플랭킹 영역 5F1, 5F2, 5F3, 5F4, 5F5, 5F6, 5F7, 5F8 또는 5F9를 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 분자 스캐폴드는 표 11에 열거된 하나의 루프 모티프 영역을 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 분자 스캐폴드는 루프 모티프 영역 L1, L2, L3, L4, L5, L6, L7, L8, L9, 또는 L10을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 분자 스캐폴드는 표 12에 열거된 하나의 3' 플랭킹 영역을 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 분자 스캐폴드는 3' 플랭킹 영역 3F1, 3F2, 3F3, 3F4, 3F5, 3F6, 3F7 또는 3F8을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 분자 스캐폴드는 표 10 및 11에 기재된 적어도 하나의 5' 플랭킹 영역 및 적어도 하나의 루프 모티프 영역을 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 분자 스캐폴드는 5F1 및 L1, 5F1 및 L2, 5F1 및 L3, 5F1 및 L4, 5F1 및 L5, 5F1 및 L6, 5F1 및 L7, 5F1 및 L8, 5F1 및 L9, 5F1 및 L10, 5F2 및 L1, 5F2 및 L2, 5F2 및 L3, 5F2 및 L4, 5F2 및 L5, 5F2 및 L6, 5F2 및 L7, 5F2 및 L8, 5F2 및 L9, 5F2 및 L10, 5F3 및 L1, 5F3 및 L2, 5F3 및 L3, 5F3 및 L4, 5F3 및 L5, 5F3 및 L6, 5F3 및 L7, 5F3 및 L8, 5F3 및 L9, 5F3 및 L10, 5F4 및 L1, 5F4 및 L2, 5F4 및 L3, 5F4 및 L4, 5F4 및 L5, 5F4 및 L6, 5F4 및 L7, 5F4 및 L8, 5F4 및 L9, 5F4 및 L10, 5F5 및 L1, 5F5 및 L2, 5F5 및 L3, 5F5 및 L4, 5F5 및 L5, 5F5 및 L6, 5F5 및 L7, 5F5 및 L8, 5F5 및 L9, 5F5 및 L10, 5F6 및 L1, 5F6 및 L2, 5F6 및 L3, 5F6 및 L4, 5F6 및 L5, 5F6 및 L6, 5F6 및 L7, 5F6 및 L8, 5F6 및 L9, 5F6 및 L10, 5F7 및 L1, 5F7 및 L2, 5F7 및 L3, 5F7 및 L4, 5F7 및 L5, 5F7 및 L6, 5F7 및 L7, 5F7 및 L8, 5F7 및 L9, 5F7 및 L10, 5F8 및 L1, 5F8 및 L2, 5F8 및 L3, 5F8 및 L4, 5F8 및 L5, 5F8 및 L6, 5F8 및 L7, 5F8 및 L8, 5F8 및 L9, 5F8 및 L10, 5F9 및 L1, 5F9 및 L2, 5F9 및 L3, 5F9 및 L4, 5F9 및 L5, 5F9 및 L6, 5F9 및 L7, 5F9 및 L8, 5F9 및 L9, 또는 5F9 및 L10을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 분자 스캐폴드는 표 11 및 표 12에 기재된 적어도 하나의 3' 플랭킹 영역 및 적어도 하나의 루프 모티프 영역을 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 분자 스캐폴드는 3F1 및 L1, 3F1 및 L2, 3F1 및 L3, 3F1 및 L4, 3F1 및 L5, 3F1 및 L6, 3F1 및 L7, 3F1 및 L8, 3F1 및 L9, 3F1 및 L10, 3F2 및 L1, 3F2 및 L2, 3F2 및 L3, 3F2 및 L4, 3F2 및 L5, 3F2 및 L6, 3F2 및 L7, 3F2 및 L8, 3F2 및 L9, 3F2 및 L10, 3F3 및 L1, 3F3 및 L2, 3F3 및 L3, 3F3 및 L4, 3F3 및 L5, 3F3 및 L6, 3F3 및 L7, 3F3 및 L8, 3F3 및 L9, 3F3 및 L10, 3F4 및 L1, 3F4 및 L2, 3F4 및 L3, 3F4 및 L4, 3F4 및 L5, 3F4 및 L6, 3F4 및 L7, 3F4 및 L8, 3F4 및 L9, 3F4 및 L10, 3F5 및 L1, 3F5 및 L2, 3F5 및 L3, 3F5 및 L4, 3F5 및 L5, 3F5 및 L6, 3F5 및 L7, 3F5 및 L8, 3F5 및 L9, 3F5 및 L10, 3F6 및 L1, 3F6 및 L2, 3F6 및 L3, 3F6 및 L4, 3F6 및 L5, 3F6 및 L6, 3F6 및 L7, 3F6 및 L8, 3F6 및 L9, 3F6 및 L10, 3F7 및 L1, 3F7 및 L2, 3F7 및 L3, 3F7 및 L4, 3F7 및 L5, 3F7 및 L6, 3F7 및 L7, 3F7 및 L8, 3F7 및 L9, 3F7 및 L10, 3F8 및 L1, 3F8 및 L2, 3F8 및 L3, 3F8 및 L4, 3F8 및 L5, 3F8 및 L6, 3F8 및 L7, 3F8 및 L8, 3F8 및 L9, 또는 3F8 및 L10을 포함할 수 있다.

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5F7, L3 및 3F2; 5F7, L3 및 3F3; 5F7, L3 및 3F4; 5F7, L3 및 3F5; 5F7, L3 및 3F6; 5F7, L3 및 3F7; 5F7, L3 및 3F8; 5F8, L3 및 3F1; 5F8, L3 및 3F2; 5F8, L3 및 3F3; 5F8, L3 및 3F4; 5F8, L3 및 3F5; 5F8, L3 및 3F6; 5F8, L3 및 3F7; 5F8, L3 및 3F8; 5F9, L3 및 3F1; 5F9, L3 및 3F2; 5F9, L3 및 3F3; 5F9, L3 및 3F4; 5F9, L3 및 3F5; 5F9, L3 및 3F6; 5F9, L3 및 3F7; 5F9, L3 및 3F8; 5F1, L4 및 3F1; 5F1, L4 및 3F2; 5F1, L4 및 3F3; 5F1, L4 및 3F4; 5F1, L4 및 3F5; 5F1, L4 및 3F6; 5F1, L4 및 3F7; 5F1, L4 및 3F8; 5F2, L4 및 3F1; 5F2, L4 및 3F2; 5F2, L4 및 3F3; 5F2, L4 및 3F4; 5F2, L4 및 3F5; 5F2, L4 및 3F6; 5F2, L4 및 3F7; 5F2, L4 및 3F8; 5F3, L4 및 3F1; 5F3, L4 및 3F2; 5F3, L4 및 3F3; 5F3, L4 및 3F4; 5F3, L4 및 3F5; 5F3, L4 및 3F6; 5F3, L4 및 3F7; 5F3, L4 및 3F8; 5F4, L4 및 3F1; 5F4, L4 및 3F2; 5F4, L4 및 3F3; 5F4, L4 및 3F4; 5F4, L4 및 3F5; 5F4, L4 및 3F6; 5F4, L4 및 3F7; 5F4, L4 및 3F8; 5F5, L4 및 3F1; 5F5, L4 및 3F2; 5F5, L4 및 3F3; 5F5, L4 및 3F4; 5F5, L4 및 3F5; 5F5, L4 및 3F6; 5F5, L4 및 3F7; 5F5, L4 및 3F8; 5F6, L4 및 3F1; 5F6, L4 및 3F2; 5F6, L4 및 3F3; 5F6, L4 및 3F4; 5F6, L4 및 3F5; 5F6, L4 및 3F6; 5F6, L4 및 3F7; 5F6, L4 및 3F8; 5F7, L4 및 3F1; 5F7, L4 및 3F2; 5F7, L4 및 3F3; 5F7, L4 및 3F4; 5F7, L4 및 3F5; 5F7, L4 및 3F6; 5F7, L4 및 3F7; 5F7, L4 및 3F8; 5F8, L4 및 3F1; 5F8, L4 및 3F2; 5F8, L4 및 3F3; 5F8, L4 및 3F4; 5F8, L4 및 3F5; 5F8, L4 및 3F6; 5F8, L4 및 3F7; 5F8, L4 및 3F8; 5F9, L4 및 3F1; 5F9, L4 및 3F2; 5F9, L4 및 3F3; 5F9, L4 및 3F4; 5F9, L4 및 3F5; 5F9, L4 및 3F6; 5F9, L4 및 3F7; 5F9, L4 및 3F8; 5F1, L5 및 3F1; 5F1, L5 및 3F2; 5F1, L5 및 3F3; 5F1, L5 및 3F4; 5F1, L5 및 3F5; 5F1, L5 및 3F6; 5F1, L5 및 3F7; 5F1, L5 및 3F8; 5F2, L5 및 3F1; 5F2, L5 및 3F2; 5F2, L5 및 3F3; 5F2, L5 및 3F4; 5F2, L5 및 3F5; 5F2, L5 및 3F6; 5F2, L5 및 3F7; 5F2, L5 및 3F8; 5F3, L5 및 3F1; 5F3, L5 및 3F2; 5F3, L5 및 3F3; 5F3, L5 및 3F4; 5F3, L5 및 3F5; 5F3, L5 및 3F6; 5F3, L5 및 3F7; 5F3, L5 및 3F8; 5F4, L5 및 3F1; 5F4, L5 및 3F2; 5F4, L5 및 3F3; 5F4, L5 및 3F4; 5F4, L5 및 3F5; 5F4, L5 및 3F6; 5F4, L5 및 3F7; 5F4, L5 및 3F8; 5F5, L5 및 3F1; 5F5, L5 및 3F2; 5F5, L5 및 3F3; 5F5, L5 및 3F4; 5F5, L5 및 3F5; 5F5, L5 및 3F6; 5F5, L5 및 3F7; 5F5, L5 및 3F8; 5F6, L5 및 3F1; 5F6, L5 및 3F2; 5F6, L5 및 3F3; 5F6, L5 및 3F4; 5F6, L5 및 3F5; 5F6, L5 및 3F6; 5F6, L5 및 3F7; 5F6, L5 및 3F8; 5F7, L5 및 3F1; 5F7, L5 및 3F2; 5F7, L5 및 3F3; 5F7, L5 및 3F4; 5F7, L5 및 3F5; 5F7, L5 및 3F6; 5F7, L5 및 3F7; 5F7, L5 및 3F8; 5F8, L5 및 3F1; 5F8, L5 및 3F2; 5F8, L5 및 3F3; 5F8, L5 및 3F4; 5F8, L5 및 3F5; 5F8, L5 및 3F6; 5F8, L5 및 3F7; 5F8, L5 및 3F8; 5F9, L5 및 3F1; 5F9, L5 및 3F2; 5F9, L5 및 3F3; 5F9, L5 및 3F4; 5F9, L5 및 3F5; 5F9, L5 및 3F6; 5F9, L5 및 3F7; 또는 5F9, L5 및 3F8을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 분자 스캐폴드는 당업계에 공지된 하나 이상의 링커를 포함할 수 있다. 링커는 영역 또는 하나의 분자 스캐폴드를 또 다른 것으로부터 분리할 수 있다. 비제한적인 예로서, 분자 스캐폴드는 폴리시스트론성(polycistronic)일 수 있다.

일 구현예에서, 조절 폴리뉴클레오타이드는 다음의 특성 중 적어도 하나를 사용하여 설계된다: 루프 변이체, 씨드 미스매치/벌지(bulge)/워블(wobble) 변이체, 스템 미스매치, 루프 변이체 및 기저 스템 미스매치 변이체, 씨드 미스매치 및 기저 스템 미스매치 변이체, 스템 미스매치 및 기저 스템 미스매치 변이체, 씨드 워블 및 기저 스템 워블 변이체, 또는 스템 서열 변이체.

세포로의 도입

siRNA 분자는 표적 세포의 내부에서 관심 유전자를 표적화하기 위해 표적 세포로 전달될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포는 포유동물 기원 세포, 사람 기원 세포, 배아 줄기 세포, 유도만능 줄기세포, 신경 줄기 세포, 신경 전구 세포, 및 분화 신경 세포를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

일부 구현예에서, siRNA 분자(예를 들어, siRNA 듀플렉스)는 AAV 입자와 같은 바이러스 벡터를 사용하여 표적 세포로 도입될 수 있다. 이들 AAV 입자는 형질감염으로 쉽게 변형될 수 없는 세포, 예를 들어 뉴런 내로 siRNA 분자의 진입을 용이하게 하도록 조작되고 최적화된다. 또한, 일부 합성 바이러스 벡터는 shRNA를 세포 게놈으로 통합시키는 능력을 보유하여 안정한 siRNA 발현 및 표적 유전자의 장기 녹다운을 초래한다. 이러한 방식으로, 바이러스 벡터는 야생형 바이러스에서 발견되는 유해한 복제 및/또는 통합 특징 없이 특이적 전달을 위한 비히클로 조작된다.

일부 구현예에서, siRNA 분자는 세포를, 친유성 담체 및 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자를 포함하는 조성물과 접촉시킴으로써 세포로 도입된다. 다른 구현예에서, siRNA 분자는 세포를, 세포에서 전사될 때 siRNA 분자를 생성할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자로 형질감염 또는 감염시킴으로써 세포로 도입된다. 일부 구현예에서, siRNA 분자는 세포에서 전사될 때 siRNA 분자를 생성할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자를 세포에 주입함으로써 세포로 도입된다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 세포로 형질도입될 수 있다.

다른 구현예에서, siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 전기천공법에 의해 세포로 전달될 수 있다(예를 들어 미국 특허 출원 공개 공보 20050014264호; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

본원에 기재된 siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자를 도입하는 다른 방법은 미국 특허 출원 공개 공보 20120264807호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같은 광화학적 내재화를 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 이에 제한되지는 않지만, 사람, 개, 마우스, 래트 또는 원숭이와 같은 임의의 관련 종으로부터의 AAV 입자가 세포로 도입될 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 치료될 질환과 관련된 세포로 도입될 수 있다. 비제한적인 예로서, 상기 질환은 타우병증 및/또는 알츠하이머병이고, 표적 세포는 내비 피질, 해마 또는 피질 뉴런이다.

일 구현예에서, AAV 입자는 표적 서열의 내인성 발현 수준이 높은 세포로 도입될 수 있다.

또 다른 구현예에서, AAV 입자는 표적 서열의 내인성 발현 수준이 낮은 세포로 도입될 수 있다.

일 구현예에서, 세포는 AAV 형질도입 효율이 높은 것들일 수 있다.

다른 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 중추 신경계로 siRNA 분자를 전달하기 위해 사용될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 6,180,613호; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

일부 측면에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 비-바이러스 기원으로부터의 펩타이드를 포함하는 변형된 캡시드를 추가로 포함할 수 있다. 다른 측면에서, AAV 입자는 뇌 및 척수로 인코딩된 siRNA 듀플렉스의 전달을 용이하게 하기 위해 CNS 특이적(예를 들어, CNS 또는 CNS 조직에 대해 트로피즘) 키메라 캡시드를 함유할 수 있다. 예를 들어, CNS 트로피즘을 나타내는 AAV 변이체로부터의 캡 뉴클레오타이드 서열의 정렬은 가변 영역(VR) 서열 및 구조를 식별하도록 구성될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 폴리시스트론성 분자인 siRNA 분자를 인코딩할 수 있다. siRNA 분자는 siRNA 분자들의 영역들 사이에 하나 이상의 링커를 추가로 포함할 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 본원에 기재된 siRNA 서열 또는 듀플렉스 중 적어도 하나를 인코딩하는 적어도 하나의 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 발현 벡터 또는 바이러스 게놈은, 5'에서 3'로 언급된 ITR 내지 ITR에, ITR, 프로모터, 인트론, 조절 폴리뉴클레오타이드, polyA 서열 및 ITR을 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 인코딩된 siRNA 분자는 이에 제한되지는 않지만 CMV, U6, H1, CBA 또는 SV40 인트론을 갖는 CBA 프로모터와 같은 발현 벡터 내 프로모터의 다운스트림에 위치할 수 있다. 또한, 인코딩된 siRNA 분자는 또한 발현 벡터에서 폴리아데닐화 서열의 업스트림에 위치할 수 있다. 비제한적인 예로서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 다운스트림 및/또는 폴리아데닐화 서열의 업스트림 방향으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 또는 30개 초과의 뉴클레오타이드 내에 위치할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 다운스트림 및/또는 폴리아데닐화 서열의 업스트림 방향으로 1-5, 1-10, 1-15, 1-20, 1-25, 1-30, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-30, 10-15, 10-20, 10-25, 10-30, 15-20, 15-25, 15-30, 20-25, 20-30 또는 25-30개의 뉴클레오타이드 내에 위치할 수 있다. 비제한적인 예로서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 다운스트림 및/또는 폴리아데닐화 서열의 업스트림 방향의 처음 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25% 또는 25% 초과의 뉴클레오타이드 내에 위치할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 다운스트림 및/또는 폴리아데닐화 서열의 업스트림 방향의 처음 1-5%, 1-10%, 1-15%, 1-20%, 1-25%, 5-10%, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 10-15%, 10-20%, 10-25%, 15-20%, 15-25%, 또는 20-25% 내에 위치할 수 있다.

일 구현예에서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 폴리아데닐화 서열의 업스트림에 위치할 수 있다. 또한, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 이에 제한되지는 않지만 CMV, U6, CBA 또는 SV40 인트론을 갖는 CBA 프로모터와 같은 프로모터의 다운스트림에 위치할 수 있다. 비제한적인 예로서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 다운스트림 및/또는 폴리아데닐화 서열의 업스트림 방향으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 또는 30개 초과의 뉴클레오타이드 내에 위치할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 다운스트림 및/또는 폴리아데닐화 서열의 업스트림 방향으로 1-5, 1-10, 1-15, 1-20, 1-25, 1-30, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-30, 10-15, 10-20, 10-25, 10-30, 15-20, 15-25, 15-30, 20-25, 20-30 또는 25-30개의 뉴클레오타이드 내에 위치할 수 있다. 비제한적인 예로서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 다운스트림 및/또는 폴리아데닐화 서열의 업스트림 방향의 처음 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25% 또는 25% 초과의 뉴클레오타이드 내에 위치할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 다운스트림 및/또는 폴리아데닐화 서열의 업스트림 방향의 처음 1-5%, 1-10%, 1-15%, 1-20%, 1-25%, 5-10%, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 10-15%, 10-20%, 10-25%, 15-20%, 15-25%, 또는 20-25% 내에 위치할 수 있다.

일 구현예에서, 인코딩된 siRNA 분자는 scAAV에 위치할 수 있다.

일 구현예에서, 인코딩된 siRNA 분자는 ssAAV에 위치할 수 있다.

일 구현예에서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 플립(flip) ITR의 5' 말단 인근에 위치할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 플립 ITR의 3' 말단 인근에 위치할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 플롭(flop) ITR의 5' 말단 인근에 위치할 수 있다. 또 다른 구현에에서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 플롭 ITR의 3' 말단 인근에 위치할 수 있다. 일 구현예에서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 플립 ITR의 5' 말단과 플롭 ITR의 3' 말단 사이에 위치할 수 있다. 일 구현예에서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 플립 ITR의 3' 말단과 플립 ITR의 5' 말단 사이에(예를 들어, 플립 ITR의 5' 말단과 플롭 ITR의 3' 말단 또는 플롭 ITR의 3' 말단과 플립 ITR의 5' 말단 사이의 중간에) 위치할 수 있다. 비제한적인 예로서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 ITR(예를 들어, 플립 또는 플롭 ITR)의 5' 또는 3' 말단의 다운스트림 방향으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 또는 30개 초과의 뉴클레오타이드 내에 위치할 수 있다. 비제한적인 예로서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 ITR(예를 들어, 플립 또는 플롭 ITR)의 5' 또는 3' 말단의 업스트림 방향으로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 또는 30개 초과의 뉴클레오타이드 내에 위치할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 ITR(예를 들어, 플립 또는 플롭 ITR)의 5' 또는 3' 말단의 다운스트림 방향으로 1-5, 1-10, 1-15, 1-20, 1-25, 1-30, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-30, 10-15, 10-20, 10-25, 10-30, 15-20, 15-25, 15-30, 20-25, 20-30 또는 25-30개의 뉴클레오타이드 내에 위치할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 ITR(예를 들어, 플립 또는 플롭 ITR)의 5' 또는 3' 말단의 업스트림 방향으로 1-5, 1-10, 1-15, 1-20, 1-25, 1-30, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-30, 10-15, 10-20, 10-25, 10-30, 15-20, 15-25, 15-30, 20-25, 20-30 또는 25-30개 내에 위치할 수 있다. 비제한적인 예로서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 ITR(예를 들어, 플립 또는 플롭 ITR)의 5' 또는 3' 말단의 업스트림 방향의 처음 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25% 또는 25% 초과의 뉴클레오타이드 내에 위치할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 인코딩된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 ITR(예를 들어, 플립 또는 플롭 ITR)의 5' 또는 3' 말단의 다운스트림 방향의 처음 1-5%, 1-10%, 1-15%, 1-20%, 1-25%, 5-10%, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 10-15%, 10-20%, 10-25%, 15-20%, 15-25%, 또는 20-25% 내에 위치할 수 있다.

일 구현예에서, siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자가 CNS 전달을 위해 제제화될 수 있다. 뇌 혈관 장벽을 관통하는 제제가 사용될 수 있다. 혈액 뇌 장벽의 효율적인 관통을 위해 조작된 캡시드가 사용될 수 있다. 상기 캡시드 또는 펩타이드 삽입물의 비제한적인 예는 VOY101, VOY201, AAVPHP.N, AAVPHP.A, AAVPHP.B, PHP.B2, PHP.B3, G2A3, G2B4, G2B5, PHP.S, 및 이들의 변이체를 포함한다. 예를 들어, 뇌 혈관 장벽 내피로 siRNA 분자를 표적화할 수 있는 일부 세포 투과 펩타이드가 관심 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스를 제제화하는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 관심 페이로드(예를 들어, 프라탁신, APOE, 타우)에 대한 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자가 CNS 전달을 위해 제제화될 수 있다. 뇌 혈관 장벽을 관통하는 제제가 사용될 수 있다. 혈액 뇌 장벽의 효율적인 관통을 위해 조작된 캡시드가 사용될 수 있다. 상기 캡시드 또는 펩타이드 삽입물의 비제한적인 예는 VOY101, VOY201, AAVPHP.N, AAVPHP.A, AAVPHP.B, PHP.B2, PHP.B3, G2A3, G2B4, G2B5, PHP.S, 및 이들의 변이체를 포함한다. 예를 들어, 뇌 혈관 장벽 내피로 페이로드를 전달하는 일부 세포 투과 펩타이드가 관심 유전자의 페이로드를 제제화하는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 CNS에 직접 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 벡터는 ApoE2를 표적화하는 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 비제한적인 예로서, 벡터는 ApoE3을 표적화하는 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 비제한적인 예로서, 벡터는 ApoE4를 표적화하는 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 비제한적인 예로서, 벡터는 SOD1을 표적화하는 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 비제한적인 예로서, 벡터는 HTT를 표적화하는 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 비제한적인 예로서, 벡터는 타우를 표적화하는 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다.

특정 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자의 조성물은 벡터 또는 siRNA 분자가 중추 신경계에 도입되어 CNS 조직 및/또는 세포 내로 침투하는 것을 용이하게 하는 방식으로 투여될 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 척수 및/또는 뇌간 내 운동 뉴런 및 성상세포를 표적화하기 위해 siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA에 대한 치료적 유효량으로 대상체에게(예를 들어, 경막내 투여를 통해 대상체의 CNS에) 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA는 표적 단백질 또는 mRNA의 발현을 감소시킬 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA는 표적 유전자 또는 단백질을 억제하고 표적 유전자 또는 단백질 매개 독성을 감소시킬 수 있다. 표적 단백질 및/또는 mRNA뿐만 아니라 표적 유전자 및/또는 단백질 매개 독성의 감소는 거의 염증 증가 없이 달성될 수 있다.

II. 제제 및 전달

약제학적 조성물

본 발명에 따르면 AAV 입자는 약제학적 조성물로 제조될 수 있다. 상기 조성물은 반드시 하나 이상의 활성 성분 및, 대개, 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 것으로 이해될 것이다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물 중 활성 성분(예를 들어 AAV 입자), 약제학적으로 허용되는 부형제 및/또는 임의의 추가 성분의 상대량은, 치료되는 대상체의 정체성(identity), 사이즈 및/또는 상태에 따라, 그리고 조성물이 투여될 경로에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 조성물은 0.1% 내지 99%(w/w)의 활성 성분을 포함할 수 있다. 예로서, 조성물은 0.1% 내지 100%, 예를 들어, 0.5 내지 50%, 1 내지 30%, 5 내지 80%, 적어도 80%(w/w)의 활성 성분을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자 약제학적 조성물은 적어도 하나의 페이로드를 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 약제학적 조성물은 1, 2, 3, 4 또는 5개의 페이로드를 갖는 AAV 입자를 함유할 수 있다.

본원에 제공된 약제학적 조성물의 설명이 주로 사람에게 투여하기에 적합한 약제학적 조성물에 관한 것이지만, 이러한 조성물은 일반적으로 임의의 다른 동물, 예를 들어, 비-사람 동물, 예를 들어 비-사람 포유동물에게 투여하기에 적합한 것으로 숙련가에 의해 이해될 것이다. 조성물을 다양한 동물에게 투여하기에 적합하도록 하기 위해 사람에게 투여하기에 적합한 약제학적 조성물의 변형이 잘 이해되고 있으며, 보통의 숙련된 수의 약리학자는 경우에 따라 단순히 통상적인 실험으로 상기 변형을 설계하고/하거나 수행할 수 있다. 약제학적 조성물의 투여가 고려되는 대상체는 사람 및/또는 다른 영장류; 소, 돼지, 말, 양, 고양이, 개, 마우스, 래트와 같은 시판되는 관련 포유동물을 포함하는 포유동물, 가금류, 닭, 오리, 거위 및/또는 터키와 같은 시판되는 관련 조류를 포함하는 조류를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

일부 구현예에서, 조성물은 사람, 사람 환자 또는 대상체에게 투여된다.

제제

본 발명의 제제는, 이에 제한되지는 않지만, 염수, 리포좀을 포함할 수 있으며, 이러한 제조 방법은 활성 성분을 지질 나노입자, 중합체, 펩타이드, 단백질, 바이러스 벡터로 형질감염된 세포(예를 들어, 대상체로의 이동 또는 이식을 위해) 및 이들의 조합과 결합시키는 단계를 포함한다.

본원에 기재된 약제학적 조성물의 제제는 약리학 분야에서 공지되거나 이후 개발된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 본원에 사용된 용어 "약제학적 조성물"은 적어도 하나의 활성 성분 및 임의로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 조성물을 나타낸다.

일반적으로 부형제 및/또는 하나 이상의 다른 보조 성분. 본원에 사용된 어구 "활성 성분"은 일반적으로 본 발명의 폴리펩타이드를 인코딩하는 페이로드 영역을 보유하는 AAV 입자 또는 본원에 기재된 바와 같이 AAV 입자의 바이러스 게놈에 의해 인코딩된 최종 산물을 나타낸다.

본원에 기재된 AAV 입자 및 약제학적 조성물의 제제는 약리학 분야에 공지되거나 이후 개발된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 이러한 제조 방법은 활성 성분을 부형제 및/또는 하나 이상의 다른 보조 성분과 결합시킨 후, 필요하고/하거나 바람직한 경우, 생성물을 목적하는 단일-용량 또는 다중-용량 단위로 분할, 성형 및/또는 패키징하는 단계를 포함한다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물이 단일 단위 용량으로서 및/또는 다수의 단일 단위 용량으로서 벌크로 제조되고, 패키징되고/되거나 시판될 수 있다. 본원에 사용된 "단위 용량"은 소정량의 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물의 개별 양을 나타낸다. 활성 성분의 양은 일반적으로 대상체에게 투여되는 활성 성분의 투여량 및/또는 상기 투여량의 간편한 분획, 예를 들어, 상기 투여량의 2분의 1 또는 3분의 1과 동일하다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 pH 약 7.0에서 0.001% 플루론산(F-68)으로 PBS에서 제제화될 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 제제는 적어도 하나의 발현된 기능적 페이로드의 발현을 위해 충분한 AAV 입자를 함유할 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 1, 2, 3, 4 또는 5개의 기능적 페이로드를 인코딩하는 바이러스 게놈을 함유할 수 있다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 제제는 관심 단백질을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 적어도 하나의 AAV 입자를 함유할 수 있다. 관심 단백질은 항체, AADC, APOE2, 프라탁신, ATP2A2 및/또는 S100A1을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 제제는 본원에 기재된 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 적어도 하나의 AAV 입자를 함유할 수 있다. 일 구현예에서, siRNA 분자는 하나의 표적 부위에서의 관심 유전자를 표적화할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 제제는 다수의 AAV 입자를 포함하며, 각각의 AAV 입자는 상이한 표적 부위에서 관심 유전자를 표적화하는 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 표적 유전자는 2, 3, 4, 5개 또는 5개 초과의 부위에서 표적화될 수 있다. 일 구현예에서, 표적 유전자는 SOD1, HTT, APOE, 및 MAPT를 포함할 수 있지만 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 따르면, AAV 입자는 CNS 전달을 위해 제제화될 수 있다. 뇌 혈관 장벽을 관통하는 제제가 사용될 수 있다. 예를 들어, 뇌 혈관 장벽 내피로 분자를 표적화할 수 있는 일부 세포 투과 펩타이드가 제제화에 사용될 수 있다(예를 들어, Mathupala, Expert Opin Ther Pat., 2009, 19, 137-140; 이들의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

다른 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 다른 조직 및 기관, 예를 들어, 심혈관 조직으로의 전달을 위해 제제화될 수 있다.

부형제 및 희석제

본 발명의 AAV 입자는 (1) 용해도 증가; (2) 세포 형질감염 또는 형질도입 증가; (3) 페이로드의 지속된 또는 지연된 방출 허용; (4) 생체분포 변경(예를 들어, 바이러스 입자를 특정 조직 또는 세포형으로 표적화); (5) 인코딩된 단백질의 번역 증가; (6) 인코딩된 단백질의 방출 프로파일 변경 및/또는 (7) 본 발명의 페이로드의 조절가능한 발현 허용을 위해 하나 이상의 부형제 또는 희석제를 사용하여 제제화될 수 있다.

일부 구현예에서, 약제학적으로 허용되는 부형제는 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 순도일 수 있다. 일부 구현예에서, 부형제는 사람 및 수의용으로 승인되어 있다. 일부 구현예에서, 부형제는 미국 식품의약국에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 부형제는 의약품 등급일 수 있다. 일부 구현예에서, 부형제는 미국 약전(USP), 유럽 약전(EP), 영국 약전 및/또는 국제 약전의 표준을 충족시킬 수 있다.

본원에 사용된 부형제는 특정의 목적하는 투여 형태에 적합한 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 희석제, 또는 다른 액체 비히클, 분산 또는 현탁 조제, 표면 활성제, 등장제, 증점제 또는 유화제, 보존제 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 약제학적 조성물을 제제화하기 위한 다양한 부형제 및 상기 조성물을 제조하기 위한 기술은 당업계에 공지되어 있다(참조: Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro, Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006; 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 통상적인 부형제 매질의 사용은 본 발명의 범위 내에서 고려될 수 있지만, 임의의 통상적인 부형제 매질이 예를 들어, 임의의 바람직하지 않은 생물학적 효과를 생성하거나 달리 약제학적 조성물의 임의의 다른 성분(들)과 유해한 방식으로 상호작용함으로써 물질 또는 이의 유도체와 양립할 수 없는 한에 있어서는 제외된다.

예시적인 희석제는 탄산칼슘, 탄산나트륨, 인산칼슘, 인산이칼슘, 황산칼슘, 인산수소칼슘, 인산나트륨 락토스, 수크로스, 셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스, 카올린, 만니톨, 소르비톨, 이노시톨, 염화나트륨, 무수 전분, 옥수수전분, 분당(powdered sugar) 등 및/또는 이들의 조합을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

비활성 성분

일부 구현예에서, AAV 입자 제제는 적어도 하나의 비활성 성분을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "비활성 성분"은 제제에 포함된 약제학적 조성물의 활성 성분의 활성에 기여하지 않는 하나 이상의 제제를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 발명의 제제에 사용될 수 있는 비활성 성분 전부 또는 일부가 미국 식품의약국(FDA)에 의해 승인될 수 있거나 어떠한 것도 승인되지 않을 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자 약제학적 조성물은, 이에 제한되지는 않지만, 1,2,6-헥산트리올; 1,2-디미리스토일-Sn-글리세로-3-(포스포-S-(1-글리세롤)); 1,2-디미리스토일-Sn-글리세로-3-포스포콜린; 1,2-디올레오일-Sn-글리세로-3-포스포콜린; 1,2-디팔미토일-Sn-글리세로-3-(포스포-Rac-(1-글리세롤)); 1,2-디스테아로일-Sn-글리세로-3-(포스포-Rac-(1-글리세롤)); 1,2-디스테아로일-Sn-글리세로-3-포스포콜린; 1-O-톨릴바이구아나이드; 2-에틸-1,6-헥산디올; 아세트산; 빙초산; 아세트산 무수물; 아세톤; 아세톤 중아황산나트륨; 아세틸화 라놀린 알코올; 아세틸화 모노글리세라이드; 아세틸시스테인; 아세틸트립토판, DL-; 아크릴레이트 코폴리머; 아크릴산-이소옥틸 아크릴레이트 코폴리머; 아크릴계 접착제 788; 활성탄; 애드코트(Adcote) 72A103; 접착 테이프; 아디프산; 에어로텍스 수지(Aerotex Resin) 3730; 알라닌; 응집 알부민; 콜로이드성 알부민; 사람 알부민; 알코올; 무수 알코올; 변성 알코올; 희석 알코올; 알파덱스(Alfadex); 알긴산; 알킬 암모늄 설폰산 베타인; 알킬 아릴 나트륨 설포네이트; 알란토인; 알릴 .알파.-이오논; 아몬드 오일; 알파-테르피네올; 알파-토코페롤; 알파-토코페롤 아세테이트, Dl-; 알파-토코페롤, Dl-; 아세트산알루미늄; 알루미늄 클로르하이드록시 알란토이네이트; 수산화알루미늄; 수산화알루미늄 - 수크로스, 수화; 수산화알루미늄 겔; 수산화알루미늄 겔 F 500; 수산화알루미늄 겔 F 5000; 알루미늄 모노스테아레이트; 산화알루미늄; 알루미늄 폴리에스테르; 규산알루미늄; 알루미늄 전분 옥테닐석시네이트; 알루미늄 스테아레이트; 염기성초산알루미늄; 무수 황산알루미늄; 아메르콜(Amerchol) C; 아메르콜-Cab; 아미노메틸프로판올; 암모니아; 암모니아수; 강암모니아수; 암모늄 아세테이트; 수산화암모늄; 암모늄 라우릴 설페이트; 암모늄 노녹시놀-4 설페이트; C-12-C-15 선형 1차 알코올 에톡실레이트의 암모늄염; 황산암모늄; 암모닉스(Ammonyx); 암포테릭(Amphoteric)-2; 암포테릭-9; 아네톨; 무수 시트르산; 무수 덱스트로스; 무수 락토스; 무수 삼나트륨 시트레이트; 아니씨드 오일; 아녹시드(Anoxid) Sbn; 소포제; 안티피린; 아파플루란(Apaflurane); 살구씨 오일 페그(peg)-6 에스테르; 아쿠아포르(Aquaphor); 아르기닌; 알라셀(Arlacel); 아스코르브산; 아스코르빌 팔미테이트; 아스파르트산; 발삼 페루(Balsam Peru); 황산바륨; 밀랍; 합성 밀랍; 베헤네스(Beheneth)-10; 벤토나이트; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤젠설폰산; 벤제토늄 클로라이드; 벤조도데시늄 브로마이드; 벤조산; 벤질 알코올; 벤질 벤조에이트; 벤질 클로라이드; 베타덱스(Betadex); 비밥시타이드(Bibapcitide); 비스무스 서브갈레이트; 붕산; 브로크리나트(Brocrinat); 부탄; 부틸 알코올; 비닐 메틸 에테르의 부틸 에스테르/말레산 무수물 코폴리머(125000 Mw); 부틸 스테아레이트; 부틸화 하이드록시아니솔; 부틸화 하이드록시톨루엔; 부틸렌 글리콜; 부틸파라벤; 부티르산; C20-40 파레스(Pareth)-24; 카페인; 칼슘; 탄산칼슘; 염화칼슘; 칼슘 글루셉테이트; 수산화칼슘; 칼슘 락테이트; 칼코부트롤(Calcobutrol); 칼디아미드 나트륨; 칼록세테이트 삼나트륨(Caloxetate Trisodium); 칼테리돌 칼슘(Calteridol Calcium); 캐나다 발삼; 카프릴산/카프르산 트리글리세라이드; 카프릴산/카프르산/스테아르산 트리글리세라이드; 캡탄; 캡티솔(Captisol); 카라멜; 카보머(Carbomer) 1342; 카보머 1382; 카보머 934; 카보머 934p; 카보머 940; 카보머 941; 카보머 980; 카보머 981; 카보머 단독중합체 유형 B(가교된 알릴 펜타에리트리톨); 카보머 단독중합체 유형 C(가교된 알릴 펜타에리트리톨); 이산화탄소; 카복시 비닐 코폴리머; 카복시메틸셀룰로스; 카복시메틸셀룰로스 나트륨; 카복시폴리메틸렌; 카라기난; 카라기난 염; 피마자 오일; 시더 리프 오일(Cedar Leaf Oil); 셀룰로스; 셀룰로스, 미세결정질; 세라신트(Cerasynt)-Se; 세레신; 세테아레스(Ceteareth)-12; 세테아레스-15; 세테아레스-30; 세테아릴 알코올/세테아레스-20; 세테아릴 에틸헥사노에이트; 세테스(Ceteth)-10; 세테스-2; 세테스-20; 세테스-23; 세토스테아릴 알코올; 세트리모늄 클로라이드; 세틸 알코올; 세틸 에스테르 왁스; 세틸 팔미테이트; 세틸피리디늄 클로라이드; 클로로부탄올; 클로로부탄올 반수화물; 무수 클로로부탄올; 클로로크레졸; 클로로자일레놀; 콜레스테롤; 콜레스(Ch올레스); 콜레스-24; 시트레이트; 시트르산; 시트르산 일수화물; 시트르산, 함수; 코카마이드 에테르 설페이트; 코카민 옥사이드; 코코 베타인; 코코 디에탄올아미드; 코코 모노에탄올아미드; 코코아 버터; 코코-글리세라이드; 코코넛 오일; 수소화 코코넛 오일; 코코넛 오일/팜 커넬 오일 글리세라이드, 수소화; 코코일 카프릴로카프레이트; 콜라 니티다 씨드 추출물(Cola Nitida Seed Extract); 콜라겐; 착색 현탁액(Coloring Suspension); 옥수수 오일; 면실유; 크림 베이스; 크레아틴; 크레아티닌; 크레졸; 크로스카르멜로스 나트륨; 크로스포비돈; 황산동; 무수 황산동; 사이클로메티콘; 사이클로메티콘/디메티콘 코폴리올; 시스테인; 시스테인 하이드로클로라이드; 무수시스테인 하이드로클로라이드; 시스테인, Dl-; D&C 레드 넘버 28; D&C 레드 넘버 33; D&C 레드 넘버 36; D&C 레드 넘버 39; D&C 옐로우 넘버 10; 달팜프리딘(Dalfampridine); 도버트(Daubert) 1-5 Pestr(매트(Matte)) 164z; 데실 메틸 설폭사이드; 데하이닥 왁스(Dehydag Wax) Sx; 데하이드로아세트산; 데하이물스(Dehymuls) E; 데나토늄 벤조에이트; 데옥시콜린산; 덱스트란; 덱스트란 40; 덱스트린; 덱스트로스; 덱스트로스 일수화물; 덱스트로스 용액; 디아트리조산; 디아졸리디닐 우레아; 디클로로벤질 알코올; 디클로로디플루오로메탄; 디클로로테트라플루오로에탄; 디에탄올아민; 디에틸 피로카보네이트; 디에틸 세바케이트; 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르; 디에틸헥실 프탈레이트; 디하이드록시알루미늄 아미노아세테이트; 디이소프로판올아민; 디이소프로필 아디페이트; 디이소프로필 디리놀레에이트; 디메티콘 350; 디메티콘 코폴리올; 디메티콘 Mdx4-4210; 디메티콘 의료용 체액(Medical Fluid) 360; 디메틸 이소소르바이드; 디메틸 설폭사이드; 디메틸아미노에틸 메타크릴레이트 - 부틸 메타크릴레이트 - 메틸 메타크릴레이트 코폴리머; 디메틸디옥타데실암모늄 벤토나이트; 디메틸실록산/메틸비닐실록산 코폴리머; 디노셉(Dinoseb) 암모늄 염; 디팔미토일포스파티딜글리세롤, Dl-; 디프로피렌 글리콜; 이나트륨 코코암포디아세테이트; 이나트륨 라우레스 설포석시네이트; 이나트륨 라우릴 설포석시네이트; 이나트륨 설포살리실레이트; 디소페닌(Disofenin); 디비닐벤젠 스티렌 코폴리머; Dmdm 히단토인; 도코산올; 도쿠세이트 나트륨; 듀로-택(Duro-Tak) 280-2516; 듀로-택 387-2516; 듀로-택 80-1196; 듀로-택 87-2070; 듀로-택 87-2194; 듀로-택 87-2287; 듀로-택 87-2296; 듀로-택 87-2888; 듀로-택 87-2979; 에데테이트 칼슘 이나트륨; 에데테이트 이나트륨; 에데테이트 이나트륨 무수; 에데테이트 나트륨; 에데트산; 계란 인지질; 엔트수폰(Entsufon); 엔트수폰 나트륨; 에피락토스; 에피테트라사이클린 하이드로클로라이드; 에센스 부케(Essence Bouquet) 9200; 에탄올아민 하이드로클로라이드; 에틸 아세테이트; 에틸 올레에이트; 에틸셀룰로스; 에틸렌 글리콜; 에틸렌 비닐 아세테이트 코폴리머; 에틸렌디아민; 에틸렌디아민 디하이드로클로라이드; 에틸렌-프로필렌 코폴리머; 에틸렌-비닐 아세테이트 코폴리머(28% 비닐 아세테이트); 에틸렌-비닐 아세테이트 코폴리머(9% 비닐아세테이트); 에틸헥실 하이드록시스테아레이트; 에틸파라벤; 유칼립톨; 엑사메타짐(Exametazime); 식용 지방; 경질 지방; 지방산 에스테르; 지방산 펜타에리트리올 에스테르; 지방산; 지방 알코올 시트레이트; 지방 알코올; Fd&C 블루 넘버 1; Fd&C 그린 넘버 3; Fd&C 레드 넘버 4; Fd&C 레드 넘버 40; Fd&C 옐로우 넘버 10(델리스테드(Delisted)); Fd&C 옐로우 넘버 5; Fd&C 옐로우 넘버 6; 염화제이철; 산화제이철; 플레이버(Flavor) 89-186; 플레이버 89-259; 플레이버 Df-119; 플레이버 Df-1530; 플레이버 인핸서; 플레이버 피그(Flavor Fig) 827118; 플레이버 라즈베리 Pfc-8407; 플레이버 로디아(Flavor Rhodia) 의약품 넘버 Rf 451; 플루오로클로로하이드로카본; 포름알데히드; 포름알데히드 용액; 분별화 코코넛 오일; 프레이그런스(Fragrance) 3949-5; 프레이그런스 520a; 프레이그런스 6.007; 프레이그런스 91-122; 프레이그런스 9128-Y; 프레이그런스 93498g; 프레이그런스 Balsam Pine No. 5124; 프레이그런스 부케 10328; 프레이그런스 케모덤(Fragrance Chemoderm) 6401-B; 프레이그런스 케모덤 6411; 프레이그런스 크림 넘버 73457; 프레이그런스 Cs-28197; 프레이그런스 펠톤(Fragrance Felton) 066m; 프레이그런스 피르메니히(Fragrance Firmenich) 47373; 프레이그런스 기보단(Fragrance Givaudan) Ess 9090/1c; 프레이그런스 H-6540; 프레이그런스 허벌(Fragrance Herbal) 10396; 프레이그런스 Nj-1085; 프레이그런스 P O Fl-147; 프레이그런스 Pa 52805; 프레이그런스 페라 덤(Fragrance Pera Derm) D; 프레이그런스 Rbd-9819; 프레이그런스 쇼 머지(Fragrance Shaw Mudge) U-7776; 프레이그런스 Tf 044078; 프레이그런스 웅거러(Fragrance Ungerer) 허니서클 K 2771; 프레이그런스 웅거러 N5195; 프럭토스; 산화가돌리늄; 갈락토스; 감마 사이클로덱스트린; 젤라틴; 가교 젤라틴; 겔폼 스폰지(Gelfoam Sponge); 젤란검(저급 아실); 겔바(Gelva) 737; 겐티스산; 겐티스산 에탄올아미드; 글루셉테이트 나트륨; 글루셉테이트 나트륨 이수화물; 글루코노락톤; 글루쿠론산; 글루탐산, Dl-; 글루타티온; 글리세린; 수소화 로진의 글리세롤 에스테르; 글리세릴 시트레이트; 글리세릴 이소스테아레이트; 글리세릴 라우레이트; 글리세릴 모노스테아레이트; 글리세릴 올레에이트; 글리세릴 올레에이트/프로필렌 글리콜; 글리세릴 팔미테이트; 글리세릴 리시놀레에이트; 글리세릴 스테아레이트; 글리세릴 스테아레이트 - 라우레스-23; 글리세릴 스테아레이트/페그 스테아레이트; 글리세릴 스테아레이트/페그-100 스테아레이트; 글리세릴 스테아레이트/페그-40 스테아레이트; 글리세릴 스테아레이트-스테아르아미도에틸 디에틸아민; 글리세릴 트리올레에이트; 글리신; 글리신 하이드로클로라이드; 글리콜 디스테아레이트; 글리콜 스테아레이트; 구아니딘 하이드로클로라이드; 구아 검; 헤어 컨디셔너(18n195-1m); 헵탄; 헤타스타치(Hetastarch); 헥실렌 글리콜; 고밀도 폴리에틸렌; 히스티딘; 사람 알부민 미소구체; 히알루로네이트 나트륨; 하이드로카본; 가소화된 하이드로카본 겔; 염산; 희석 염산; 하이드로코르티손; 하이드로겔 중합체; 과산화수소; 수소화 피마자 오일; 수소화 팜유; 수소화 팜/팜 커넬 오일 페그-6 에스테르; 수소화 폴리부텐 635-690; 하이드록사이드 이온; 하이드록시에틸 셀룰로스; 하이드록시에틸피페라진 에탄 설폰산; 하이드록시메틸 셀룰로스; 하이드록시옥타코사닐 하이드록시스테아레이트; 하이드록시프로필 셀룰로스; 하이드록시프로필 메틸셀룰로스 2906; 하이드록시프로필-베타-사이클로덱스트린; 하이프로멜로스 2208 (15000 Mpa.S); 하이프로멜로스 2910 (15000 Mpa.S); 하이프로멜로스; 이미드우레아; 요오드; 요오드옥사민산; 아이오페타민 하이드로클로라이드(Iofetamine Hydrochloride); 아이리쉬 모스(Irish Moss) 추출물; 이소부탄; 이소세테스-20; 이소류신; 이소옥틸 아크릴레이트; 이소프로필 알코올; 이소프로필 이소스테아레이트; 이소프로필 미리스테이트; 이소프로필 미리스테이트 - 미리스틸 알코올; 이소프로필 팔미테이트; 이소프로필 스테아레이트; 이소스테아르산; 이소스테아릴 알코올; 염화나트륨 등장 용액; 젤렌(Jelene); 카올린; 카톤(Kathon) Cg; 카톤 Cg II; 락테이트; 락트산; 락트산, Dl-; 락트산, L-; 락토바이오산(Lactobionic Acid); 락토스; 락토스 일수화물; 락토스, 함수; 라네스(Laneth); 라놀린; 라놀린 알코올 - 미네랄 오일; 라놀린 알코올; 라놀린 무수; 라놀린 콜레스테롤; 라놀린 비이온성 유도체; 에톡실화 라놀린; 수소화 라놀린; 라우르알코늄 클로라이드; 라우라민 옥사이드; 라우르디모늄 가수분해 동물 콜라겐; 라우레스 설페이트; 라우레스-2; 라우레스-23; 라우레스-4; 라우르산 디에탄올아미드; 라우릭 미리스틱 디에탄올아미드; 라우로일 사르코신; 라우릴 락테이트; 라우릴 설페이트; 라반둘라 앙구스티폴리아 플라워링 탑(Lavandula Angustifolia Flowering Top); 레시틴; 무표백 레시틴; 계란 레시틴; 수소화 레시틴; 레시틴, 수소화 대두; 레시틴, 대두; 레몬 오일; 류신; 레불린산; 리도페닌(Lidofenin); 경질 미네랄 오일; 경질 미네랄 오일(85 Ssu); 리모넨, (+/-)-; 리포콜(Lipocol) Sc-15; 라이신; 라이신 아세테이트; 라이신 일수화물; 마그네슘 알루미늄 실리케이트; 마그네슘 알루미늄 실리케이트 수화물; 염화마그네슘; 질산마그네슘; 마그네슘 스테아레이트; 말레산; 만니톨; 마프로픽스(Maprofix); 메브로페닌(Mebrofenin); 의료용 접착제 변형(Medical Adhesive Modified) S-15; 의료용 안티폼(Medical Antiform) A-F 에멀젼; 메드로네이트 이나트륨; 메드론산; 메글루민; 멘톨; 메타크레졸; 메타인산; 메탄설폰산; 메티오닌; 메틸 알코올; 메틸 글루세스(Methyl Gluceth)-10; 메틸 글루세스-20; 메틸 글루세스-20 세스키스테아레이트; 메틸 글루코스 세스키스테아레이트; 메틸 라우레이트; 메틸 피롤리돈; 메틸 살리실레이트; 메틸 스테아레이트; 메틸보론산; 메틸셀룰로스(4000 Mpa.S); 메틸셀룰로스; 메틸클로로이소티아졸리논; 메틸렌 블루; 메틸이소티아졸리논; 메틸파라벤; 미세결정질 왁스; 미네랄 오일; 모노 및 디글리세라이드; 모노스테아릴 시트레이트; 모노티오글리세롤; 멀티스테롤 추출물; 미리스틸 알코올; 미리스틸 락테이트; 미리스틸-.감마.-피콜리늄 클로라이드; N-(카바모일-메톡시 페그-40)-1,2-디스테아로일-세팔린 나트륨; N,N-디메틸아세트아미드; 니아신아미드; 니옥심(Nioxime); 질산; 질소; 노녹시놀 요오드; 노녹시놀-15; 노녹시놀-9; 노르플루란(Norflurane); 오트밀; 옥타데센-1/말레산 코폴리머; 옥탄산; 옥티살레이트; 옥톡시놀(Octoxynol)-1; 옥톡시놀-40; 옥톡시놀-9; 옥틸도데칸올; 옥틸페놀 폴리메틸렌; 올레산; 올레스(Oleth)-10/올레스-5; 올레스-2; 올레스-20; 올레일 알코올; 올레일 올레에이트; 올리브 오일; 옥시드로네이트 이나트륨; 옥시퀴놀린; 팜 커넬 오일; 팔미타민 옥사이드; 파라벤; 파라핀; 파라핀, 화이트 소프트; 파르퓸 크림(Parfum Creme) 45/3; 피넛 오일; 정제된 피넛 오일; 펙틴; 페그 6-32 스테아레이트/글리콜 스테아레이트; 페그 식물성 오일; 페그-100 스테아레이트; 페그-12 글리세릴 라우레이트; 페그-120 글리세릴 스테아레이트; 페그-120 메틸 글루코스 디올레에이트; 페그-15 코카민; 페그-150 디스테아레이트; 페그-2 스테아레이트; 페그-20 소르비탄 이소스테아레이트; 페그-22 메틸 에테르/도데실 글리콜 코폴리머; 페그-25 프로필렌 글리콜 스테아레이트; 페그-4 디라우레이트; 페그-4 라우레이트; 페그-40 피마자 오일; 페그-40 소르비탄 디이소스테아레이트; 페그-45/도데실 글리콜 코폴리머; 페그-5 올레에이트; 페그-50 스테아레이트; 페그-54 수소화 피마자 오일; 페그-6 이소스테아레이트; 페그-60 피마자 오일; 페그-60 수소화 피마자 오일; 페그-7 메틸 에테르; 페그-75 라놀린; 페그-8 라우레이트; 페그-8 스테아레이트; 페곡솔(Pegoxol) 7 스테아레이트; 펜타데카락톤; 펜타에리트리톨 코코에이트; 펜타나트륨 펜테테이트; 펜테테이트 칼슘 트리나트륨; 펜테트산(Pentetic Acid); 페퍼민트 오일; 퍼플루트렌(Perflutren); 퍼퓸(Perfume) 25677; 퍼퓸 부케; 퍼퓸 E-1991; 퍼퓸 Gd 5604; 퍼퓸 Tana 90/42 Scba; 퍼퓸 W-1952-1; 페트롤라툼(Petrolatum); 페트롤라툼, 백색; 석유 증류물; 페놀; 액화 페놀; 페노닙(Phenonip); 페녹시에탄올; 페닐알라닌; 페닐에틸 알코올; 페닐수은 아세테이트; 페닐수은 니트레이트; 계란 포스파티딜 글리세롤; 인지질; 계란 인지질; 포스포리폰(Phospholipon) 90g; 인산; 솔잎 오일(피너스 실베스트리스(Pinus Sylvestris)); 피페라진 육수화물; 플라스티베이스(Plastibase)-50w; 폴라크릴린(Polacrilin); 폴리드로늄 클로라이드(Polidronium Chloride); 폴록사머(Poloxamer) 124; 폴록사머 181; 폴록사머 182; 폴록사머 188; 폴록사머 237; 폴록사머 407; 폴리(비스(P-카복시페녹시)프로판 무수물):세박산; 폴리(디메틸실록산/메틸비닐실록산/메틸하이드로겐실록산) 디메틸비닐 또는 디메틸하이드록시 또는 트리메틸 말단차단; 폴리(Dl-락틱-Co-글리콜산), (50:50; 폴리(Dl-락틱-Co-글리콜산), 에틸 에스테르 종결, (50:50; 폴리아크릴산(250000 Mw); 폴리부텐(1400 Mw); 폴리카보필; 폴리에스테르; 폴리에스테르 폴리아민 코폴리머; 폴리에스테르 레이온; 폴리에틸렌 글리콜 1000; 폴리에틸렌 글리콜 1450; 폴리에틸렌 글리콜 1500; 폴리에틸렌 글리콜 1540; 폴리에틸렌 글리콜 200; 폴리에틸렌 글리콜 300; 폴리에틸렌 글리콜 300-1600; 폴리에틸렌 글리콜 3350; 폴리에틸렌 글리콜 400; 폴리에틸렌 글리콜 4000; 폴리에틸렌 글리콜 540; 폴리에틸렌 글리콜 600; 폴리에틸렌 글리콜 6000; 폴리에틸렌 글리콜 8000; 폴리에틸렌 글리콜 900; 산화제이철 블랙(<1%)을 함유하는 폴리에틸렌 고밀도; 황산바륨(20-24%)을 함유하는 폴리에틸렌 저밀도; 폴리에틸렌 T; 폴리에틸렌 테레프탈레이트; 폴리글락틴(Polyglactin); 폴리글리세릴-3 올레에이트; 폴리글리세릴-4 올레에이트; 폴리하이드록시에틸 메타크릴레이트; 폴리이소부틸렌; 폴리이소부틸렌(1100000 Mw); 폴리이소부틸렌(35000 Mw); 폴리이소부틸렌 178-236; 폴리이소부틸렌 241-294; 폴리이소부틸렌 35-39; 폴리이소부틸렌 저분자량; 폴리이소부틸렌 중간 분자량; 폴리이소부틸렌/폴리부텐 접착제; 폴리락타이드; 폴리올; 폴리옥시에틸렌 - 폴리옥시프로필렌 1800; 폴리옥시에틸렌 알코올; 폴리옥시에틸렌 지방산 에스테르; 폴리옥시에틸렌 프로필렌; 폴리옥실 20 세토스테아릴 에테르; 폴리옥실 35 피마자 오일; 폴리옥실 40 수소화 피마자 오일; 폴리옥실 40 스테아레이트; 폴리옥실 400 스테아레이트; 폴리옥실 6 및 폴리옥실 32 팔미토스테아레이트; 폴리옥실 디스테아레이트; 폴리옥실 글리세릴 스테아레이트; 폴리옥실 라놀린; 폴리옥실 팔미테이트; 폴리옥실 스테아레이트; 폴리프로필렌; 폴리프로필렌 글리콜; 폴리쿼터늄-10; 폴리쿼터늄-7 (70/30 아크릴아미드/대드맥(Dadmac); 폴리실록산; 폴리소르베이트 20; 폴리소르베이트 40; 폴리소르베이트 60; 폴리소르베이트 65; 폴리소르베이트 80; 폴리우레탄; 폴리비닐 아세테이트; 폴리비닐 알코올; 폴리비닐 클로라이드; 폴리비닐 클로라이드-폴리비닐 아세테이트 코폴리머; 폴리비닐피리딘; 파피 씨드(Poppy Seed) 오일; 포타쉬(Potash); 칼륨 아세테이트; 칼륨 명반; 탄산수소칼륨; 아황산수소칼륨; 염화칼륨; 칼륨 시트레이트; 수산화칼륨; 메타중아황산칼륨; 이염기성 인산칼륨; 일염기성 인산칼륨; 칼륨 비누; 칼륨 소르베이트; 포비돈 아크릴레이트 코폴리머; 포비돈 하이드로겔; 포비돈 K17; 포비돈 K25; 포비돈 K29/32; 포비돈 K30; 포비돈 K90; 포비돈 K90f; 포비돈/에이코센 코폴리머; 포비돈; Ppg-12/Smdi 코폴리머; Ppg-15 스테아릴 에테르; Ppg-20 메틸 글루코스 에테르 디스테아레이트; Ppg-26 올레에이트; 생성물 Wat; 프롤린; 프로물겐(Promulgen) D; 프로물겐 G; 프로판; 추진제 A-46; 프로필 갈레이트; 프로필렌 카보네이트; 프로필렌 글리콜; 프로필렌 글리콜 디아세테이트; 프로필렌 글리콜 디카프릴레이트; 프로필렌 글리콜 모노라우레이트; 프로필렌 글리콜 모노팔미토스테아레이트; 프로필렌 글리콜 팔미토스테아레이트; 프로필렌 글리콜 리시놀레에이트; 프로필렌 글리콜/디아졸리디닐 우레아/메틸파라벤/프로필파르벤; 프로필파라벤; 프로타민 설페이트; 단백질 가수분해물; Pvm/Ma 코폴리머; 쿼터늄-15; 쿼터늄-15 시스-형태; 쿼터늄-52; Ra-2397; Ra-3011; 사카린; 사카린 나트륨; 무수 사카린 나트륨; 홍화유; Sd 알코올 3a; Sd 알코올 40; Sd 알코올 40-2; Sd 알코올 40b; 세피네오(Sepineo) P 600; 세린; 참깨 오일; 시어 버터; 실라스틱(Silastic) 브랜드 의료 등급 튜빙; 실라스틱 의료용 접착제, 실리콘 타입 A; 덴탈 실리카; 규소; 이산화규소; 콜로이드성 이산화규소; 실리콘; 실리콘 접착제 4102; 실리콘 접착제 4502; 실리콘 접착제 Bio-Psa Q7-4201; 실리콘 접착제 Bio-Psa Q7-4301; 실리콘 에멀젼; 실리콘/폴리에스테르 필름 스트립; 시메티콘; 시메티콘 에멀젼; 시폰(Sipon) Ls 20np; 소다회; 나트륨 아세테이트; 무수 나트륨 아세테이트; 나트륨 알킬 설페이트; 나트륨 아스코르베이트; 나트륨 벤조에이트; 탄산수소나트륨; 황산수소나트륨; 중아황산나트륨; 붕산나트륨; 붕산나트륨 십수화물; 탄산나트륨; 탄산나트륨 십수화물; 탄산나트륨 일수화물; 나트륨 세토스테아릴 설페이트; 염소산나트륨; 염화나트륨; 염화나트륨 주사액; 염화나트륨 주사액, 정균성; 나트륨 콜레스테릴 설페이트; 나트륨 시트레이트; 나트륨 코코일 사르코시네이트; 나트륨 데속시콜레이트; 나트륨 디티오나이트; 나트륨 도데실벤젠설포네이트; 나트륨 포름알데히드 설폭실레이트; 나트륨 글루코네이트; 수산화나트륨; 차아염소산나트륨; 요오드화나트륨; 나트륨 락테이트; 나트륨 락테이트, L-; 나트륨 라우레스-2 설페이트; 나트륨 라우레스-3 설페이트; 나트륨 라우레스-5 설페이트; 나트륨 라우로일 사르코시네이트; 나트륨 라우릴 설페이트; 나트륨 라우릴 설포아세테이트; 메타중아황산나트륨; 질산나트륨; 인산나트륨; 인산나트륨 이수화물; 인산나트륨, 이염기성; 인산나트륨, 이염기성, 무수; 인산나트륨, 이염기성, 이수화물; 인산나트륨, 이염기성, 십이수화물; 인산나트륨, 이염기성, 칠수화물; 인산나트륨, 일염기성; 인산나트륨, 일염기성, 무수; 인산나트륨, 일염기성, 이수화물; 인산나트륨, 일염기성, 일수화물; 나트륨 폴리아크릴레이트(2500000 Mw); 피로인산나트륨 ; 나트륨 피롤리돈 카복실레이트; 나트륨 전분 글리콜레이트; 나트륨 석시네이트 육수화물; 황산나트륨; 무수 황산나트륨; 황산나트륨 십수화물; 아황산나트륨; 나트륨 설포석시네이티드 운데사이클레닉 모노알킬올아미드; 나트륨 타르트레이트; 나트륨 티오글리콜레이트; 나트륨 티오말레이트; 나트륨 티오설페이트; 무수 나트륨 티오설페이트; 나트륨 트리메타포스페이트; 나트륨 크실렌설포네이트; 소마이(Somay) 44; 소르브산; 소르비탄; 소르비탄 이소스테아레이트; 소르비탄 모노라우레이트; 소르비탄 모노올레에이트; 소르비탄 모노팔미테이트; 소르비탄 모노스테아레이트; 소르비탄 세스키올레에이트; 소르비탄 트리올레에이트; 소르비탄 트리스테아레이트; 소르비톨; 소르비톨 용액; 대두 가루; 대두 오일; 스피어민트 오일; 경랍(Spermaceti); 스쿠알란; 안정된 옥시클로로 복합체; 제일주석 2-에틸헥사노에이트; 염화제일주석; 무수 염화제일주석; 플루오르화제일주석; 제일주석 타르트레이트; 전분; 전분 1500, 예비젤라틴화; 옥수수 전분; 스테아르알코늄 클로라이드; 스테아르알코늄 헥토라이트/프로필렌 카보네이트; 스테아르아미도에틸 디에틸아민; 스테아레스(Steareth)-10; 스테아레스-100; 스테아레스-2; 스테아레스-20; 스테아레스-21; 스테아레스-40; 스테아르산; 스테아르산 디에탄올아미드; 스테아록시트리메틸실란; 스테아르트리모늄 가수분해 동물 콜라겐; 스테아릴 알코올; 흡입용 멸균수; 스티렌/이소프렌/스티렌 블록 코폴리머; 석시머(Succimer); 석신산; 수크랄로스; 수크로스; 수크로스 디스테아레이트; 수크로스 폴리에스테르; 설프아세트아미드 나트륨; 설포부틸에테르 베타-사이클로덱스트린; 이산화황; 황산; 아황산; 서팍톨(Surfactol) Qs; 타가토스, D-; 탈크; 톨유; 탤로(Tallow) 글리세라이드; 타르타르산; 타르타르산, Dl-; 테녹스(Tenox); 테녹스-2; 3급-부틸 알코올; 3급-부틸 하이드로퍼옥사이드; 3급-부틸하이드로퀴논; 테트라키스(2-메톡시이소부틸이소시아나이드)구리(I) 테트라플루오로보레이트; 테트라프로필 오르소실리케이트; 테트로포스민(Tetrofosmin); 테오필린; 티메로살; 트레오닌; 티몰; 주석; 이산화티탄; 토코페롤; 토코페르솔란(Tocophersolan); 총 비경구 영양, 지질 에멀젼; 트리아세틴; 트리카프릴린; 트리클로로모노플루오로메탄; 트리데세스(Trideceth)-10; 트리에탄올아민 라우릴 설페이트; 트리플루오로아세트산; 트리글리세라이드, 중간 사슬; 트리하이드록시스테아린; 트리라네스-4 포스페이트; 트리라우레스-4 포스페이트; 삼나트륨 시트레이트 이수화물; 트리나트륨 Hedta; 트리톤(Triton) 720; 트리톤 X-200; 트롤라민; 트로만타딘; 트로메타민(TRIS); 트립토판; 틸록사폴(Tyloxapol); 티로신; 운데실렌산; 유니온 76 암스코-레스(Union 76 Amsco-Res) 6038; 우레아; 발린; 식물성 오일; 수소화 식물성 오일 글리세라이드; 수소화 식물성 오일; 베르세타미드(Versetamide); 비스카린(Viscarin); 비스코스(Viscose)/면; 비타민 E; 유화 왁스; 위코비(Wecobee) Fs; 화이트 세레신 왁스; 백랍; 크산탄 검; 아연; 아연 아세테이트; 탄산아연; 염화아연; 및 산화아연과 같은 적어도 하나의 비활성 성분을 포함한다.

본원에 개시된 AAV 입자의 약제학적 조성물 제제는 양이온 또는 음이온을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 상기 제제는, 이에 제한되지는 않지만, Zn2+, Ca2+, Cu2+, Mn2+, Mg+ 및 이들의 조합과 같은 금속 양이온을 포함한다. 비제한적인 예로서, 제제는 금속 양이온을 갖는 중합체 및 복합체를 포함할 수 있다(참조: 예를 들어, 미국 특허 6,265,389호 및 제6,555,525호, 이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

본 발명의 제제는 또한 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 염을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 "약제학적으로 허용되는 염"은 모 화합물이 기존의 산 또는 염기 모이어티를 이의 염 형태로 전환시킴으로써(예를 들어, 유리 염기 그룹을 적합한 유기산과 반응시킴으로써) 변형된 개시된 화합물의 유도체를 나타낸다. 약제학적으로 허용되는 염의 예는 아민과 같은 염기성 잔기의 무기 또는 유기산 염; 카복실산과 같은 산성 잔기의 알칼리 또는 유기 염 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 대표적인 산 부가염은 아세테이트, 아세트산, 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤젠설포네이트, 벤젠 설폰산, 벤조에이트, 바이설페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르설포네이트, 시트레이트, 사이클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵토네이트, 헥사노에이트, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드로요오다이드, 2-하이드록시-에탄설포네이트, 락토비오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 석시네이트, 설페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔설포네이트, 운데카노에이트, 발레레이트 염 등을 포함한다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등, 및 무독성 암모늄, 4급 암모늄, 및 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 에틸아민 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 아민 양이온을 포함한다. 본 발명의 약제학적으로 허용되는 염은 예를 들어, 무독성 무기산 또는 유기산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 무독성 염을 포함한다.

본 발명의 약제학적으로 허용되는 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 모 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 상기 염은 이들 화합물의 유리 산 또는 유리 염기 형태를, 물 또는 유기 용매, 또는 상기 2가지 혼합물 중의 화학양론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시켜 제조될 수 있으며; 일반적으로, 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴과 같은 비수성 매질이 바람직하다. 적합한 염의 목록은 문헌(참조: [Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.H. Stahl and C.G. Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008] 및 [Berge et al., Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977)]; 이들 각각의 내용은 이들의 내용이 본원에 참조로 인용됨)에서 발견된다.

본원에 사용된 용어 "약제학적으로 허용되는 용매화물"은 적절한 용매 분자가 결정 격자 내로 혼입된 본 발명의 화합물을 의미한다. 적절한 용매는 투여되는 용량에서 생리학적으로 허용된다. 용매화물은 유기 용매, 물 또는 이들의 혼합물을 포함하는 용액으로부터 결정화, 재결정화 또는 침전에 의해 제조될 수 있다. 적절한 용매의 예로는 에탄올, 물(예를 들어, 일수화물, 이수화물 및 삼수화물), N-메틸피롤리디논(NMP), 디메틸 설폭사이드(DMSO), N,N '-디메틸포름아미드(DMF), N'-디메틸아세트아미드(DMAC), 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논(DMEU), 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라하이드로-2-(1H)-피리미디논(DMPU), 아세토니트릴(ACN), 프로필렌 글리콜, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 2-피롤리돈, 벤질 벤조에이트 등이 있다. 물이 용매인 경우, 용매화물은 "수화물"이라고 한다.

III. 투여 및 투약

투여

일 구현예에서, AAV 입자는 (예를 들어, 공지된 평가 방법을 사용하여 결정된) 대상체의 신경계 질환 증상을 감소시키기 위한 치료적 유효량으로 대상체에게(예를 들어, 대상체의 CNS에) 투여될 수 있다.

본 발명의 AAV 입자는 치료학적으로 효과적인 결과를 유도하는 임의의 전달 경로에 의해 투여될 수 있다. 이들은, 이에 제한되지는 않지만, 장(장내), 위장, 경막외(경질막 내로), 경구(입에 의한), 경피, 대뇌내(대뇌 내로), 뇌실내(뇌실 내로), 연막하(연막과 CNS 실질 사이), 경동맥내 동맥(경동맥내 동맥 내로), 표피(피부 위로 적용), 피내(피부 자체에), 피하(피부 아래), 비강 투여(코를 통해), 정맥내(정맥 내로), 정맥내 볼루스(intravenous bolus), 정맥내 점적, 동맥내(동맥 내로), 전신, 근육내(근육 내로), 심장내(심장 내로), 골내 주입(골수 내로), 경막내(척추관 내로), 뇌실질내(뇌 조직 내로), 복강내(복막 내로 주입 또는 주사), 방광내 주입, 유리체내(눈을 통해), 해면내 주사(병적 캐비티 내로) 강내(음경의 기저 내로), 질내 투여, 자궁내, 양막외 투여, 경피(전신 분포를 위해 온전한 피부를 통해 확산), 경점막(점막을 통해 확산), 질경유, 흡입법(코흡입), 설하, 구순하, 관장, 점안제(결막 위로), 또는 점이제로, 귀(귀 내로 또는 귀를 거쳐), 협측(뺨을 향하여), 결막, 피부, 치과적(치아 또는 치아들로), 전기-침투(electro-osmosis), 자궁경내, 굴내(endosinusial), 기관내, 체외, 혈액투석, 침윤, 사이질, 복강내, 양막내, 관절내, 담도내, 기관지내, 활액낭내, 연골내(연골 내), 미추내(intracaudal)(마미신경 내), 수조내(대조 소뇌연수조(cisterna magna cerebellomedularis) 내), 각막내(각막 내), 치아 치관내, 관상동맥내(관상동맥 내), 음경내 해면체(음경의 음경해면체의 팽창 공간 내), 층판내(디스크 내), 관내(샘관 내), 십이지장내(십이지장 내), 경막내(경막 내 또는 아래), 표피내(표피에), 식도내(식도에), 위내(위 내), 치은내(잇몸 내), 회장내(소장의 원위 부분 내), 병변내(국소 병변 내 또는 국소 병변으로 직접 도입됨), 강내(관의 내강 내), 림프내(림프 내), 척수내(뼈의 골수강 내), 수막내(뇌척수막 내), 심근내(심근 내), 안구내(눈 내), 난소내(난소 내), 심막내(심막 내), 흉강내(흉막 내), 전립선내(전립선 내), 폐내(폐 또는 이의 기관지 내), 부비강내(코 또는 안와주위 부비강 내), 척수강내(척주 내), 활액내(관절의 윤활강 내), 힘줄내(힘줄 내), 고환내(고환 내), 경막내(뇌척수축의 임의의 수준에서 뇌척수액 내), 흉곽내(흉곽 내), 관내(기관의 세관 내), 종양내(종양 내), 고실내(중이(aurus media) 내), 혈관내(혈관 또는 혈관들 내), 심실내(심실 내), 이온도입법(iontophoresis)(가용성 염의 이온이 체조직으로 이동하는 전류에 의한 것), 관주(개방 상처 또는 신체 공동을 세척하거나 플러싱하기 위해), 후두(후두 상에 직접적으로), 코위(코를 통해 위로), 폐쇄 드레싱 기술(영역을 폐색시키는 드레싱에 의해 커버되는 국소 경로 투여), 안과적(외안에), 구강인두(입 및 인두에 직접적으로), 비경구, 경피적, 관절주위, 경막주위, 신경주위, 치주, 직장, 호흡기(국소 또는 전신 효과를 위해 경구로 또는 비강으로의 흡입에 의한 기도 내), 안구뒤(뇌교 뒤에 또는 안구 뒤에), 연조직, 지주막, 결막하, 점막하, 국소, 경태반(태반을 통해 또는 태반을 관통하여), 기관경유(기관 벽을 통해), 경고실(고실을 관통하거나 고실을 통해), 요관(요관에), 요도(요도에), 질, 미추 차단, 진단, 신경 차단, 담도 관류, 심장 관류, 체외광선치료(photopheresis) 또는 척추를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

일부 구현예에서, AAV 입자 및 AAV 입자를 포함하는 조성물은 이들이 혈관-뇌 장벽, 혈관 장벽, 또는 다른 상피 장벽을 관통할 수 있게 하는 방식으로 투여될 수 있다. 본 발명의 AAV 입자는 액체 용액 또는 현탁액, 액체 용액 또는 액체 용액 중 현탁액을 위해 적합한 고체 형태로서 임의의 적절한 형태로 투여될 수 있다. AAV 입자는 임의의 적절하고 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 제제화될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 단일 경로 투여를 통해 대상체에게 전달될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 다중-부위 투여 경로를 통해 대상체에게 전달될 수 있다. AAV 입자는 2, 3, 4, 5개 또는 5개 초과의 부위에서 투여될 수 있다.

일 구현예에서, 대상체는 볼루스 주입을 사용하여 본 발명의 AAV 입자가 투여될 수 있다.

일 구현예에서, 대상체는 수 분, 수 시간 또는 수 일의 기간에 걸쳐 지속적 전달을 사용하여 본 발명의 AAV 입자가 투여될 수 있다. 주입 속도는 대상체, 분포, 제제 또는 또 다른 전달 파라미터에 따라 변할 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 근육내 전달 경로에 의해 전달될 수 있다. (참조: 예를 들어, 미국 특허 6506379호; 이들의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 근육내 투여의 비제한적인 예는 정맥내 주사 또는 피하 주사를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 안구내 전달 경로에 의해 전달될 수 있다. 안구내 투여의 비제한적인 예는 유리체내 주사를 포함한다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 말초 주사에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 말초 주사의 비제한적인 예는 복강내, 근육내, 정맥내, 결막 또는 관절 주사를 포함한다. AAV 입자의 말초 투여는 중추 신경계, 예를 들어, 운동 뉴런으로 수송될 수 있다는 것이 당업계에 개시되어 있었다(예를 들어, 미국 특허 출원 공개 공보 20100240739호; 및 제20100130594호; 이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

일 구현예에서, AAV 입자는 CSF 경로 내로 주사에 의해 전달될 수 있다. CSF 경로로의 전달의 비제한적인 예는 경막내 및 뇌실내 투여를 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자는 전신 전달에 의해 전달될 수 있다. ccc비제한적인 예로서, 전신 전달은 혈관내 투여에 의한 것일 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 두개내 전달에 의해 대상체에게 투여될 수 있다(참조: 예를 들어, 미국 특허 8,119,611호; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 주사에 의해 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 AAV 입자는 주사에 의해 대상체에게 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 근육 주사에 의해 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 AAV 입자는 근육 투여에 의해 대상체에게 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 근육내 투여에 의해 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 AAV 입자는 근육내 투여에 의해 대상체에게 투여될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 대상체에게 투여되고 대상체의 근육을 형질도입시킨다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 근육내 투여에 의해 투여된다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 뇌실질내 주사를 통해 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 AAV 입자는 뇌실질내 투여에 의해 대상체에게 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 정맥내 투여에 의해 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 AAV 입자는 정맥내 투여에 의해 대상체에게 투여될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 정맥내 전달을 통해 투여될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 경동맥내 동맥 전달을 통해 투여될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 단일 용량 정맥내 전달을 통해 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 단일 용량 정맥내 전달은 1회성 치료일 수 있다. 신경계 질환의 맥락에서, 단일 용량 정맥내 전달은 신경계 질환 및/또는 관련 증상이 있는 대상체에 대해 장기간 완화를 초래할 수 있다. 완화는 수 분, 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59분 또는 59분 초과; 수 시간 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48시간, 또는 48시간 초과; 수 일, 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31일, 또는 31일 초과; 수 주, 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16주, 또는 16주 초과; 수 개월, 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24개월, 또는 24개월 초과; 수 년, 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15년, 또는 15년 초과 동안 지속될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 DRG 통각수용성 뉴런(nociceptive neuron)으로의 정맥내 전달을 통해 투여될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 DRG 통각수용성 뉴런으로의 단일 용량 정맥내 전달을 통해 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 단일 용량 정맥내 전달은 1회성 치료일 수 있다. 신경계 질환의 맥락에서, 단일 용량 정맥내 전달은 신경계 질환 및/또는 관련 증상이 있는 대상체에 대해 장기간 완화를 초래할 수 있다. 완화는 수 분 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59분 또는 59분 초과; 수 시간 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48시간, 또는 48시간 초과; 수 일 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31일, 또는 31일 초과; 수 주 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16주, 또는 16주 초과; 수 개월 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24개월, 또는 24개월 초과; 수 년 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15년, 또는 15년 초과 동안 지속될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 경막내 주사에 의해 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 AAV 입자는 경막내 주사에 의해 투여될 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 척수 운동 뉴런 및/또는 성상 세포를 형질도입시키기 위해 치료적 유효량으로 대조에 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 경막내로 투여될 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 척수 운동 뉴런 및/또는 성상세포를 형질도입시키기 위해 치료적 유효량으로 경막내 주입을 사용하여 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 단일 용량 경막내 주사를 통해 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 단일 용량 경막내 주사는 1회성 치료일 수 있다. 신경계 질환의 맥락에서, 단일 용량 경막내 주사는 신경계 질환 및/또는 관련 증상이 있는 대상체에 대해 장기간 완화를 초래할 수 있다. 완화는 수분 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59분 또는 59분 초과; 수 시간 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48시간, 또는 48시간 초과; 수 일 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31일, 또는 31일 초과; 수 주 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16주, 또는 16주 초과; 수 개월 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24개월, 또는 24개월 초과; 수 년 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15년, 또는 15년 초과 동안 지속될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 DRG 통각수용성 뉴런으로의 경막내 주사를 통해 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 DRG 통각수용성 뉴런으로의 단일 용량 경막내 주사를 통해 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 단일 용량 경막내 주사는 1회성 치료일 수 있다. 신경계 질환의 맥락에서, 단일 용량 경막내 주사는 신경계 질환 및/또는 관련 증상이 있는 대상체에 대해 장기간 완화를 초래할 수 있다. 완화는 수 분 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59분 또는 59분 초과; 수 시간 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48시간, 또는 48시간 초과; 수 일 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31일, 또는 31일 초과; 수 주 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16주, 또는 16주 초과; 수 개월 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24개월, 또는 24개월 초과; 수 년 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15년, 또는 15년 초과 동안 지속될 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자는 C1에서 경막내(IT) 주입을 통해 투여된다. 주입은 1, 2, 3, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15시간 또는 15시간 초과 동안 일어날 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 뇌실질내 주사에 의해 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 AAV 입자는 뇌실질내 주사에 의해 대상체에게 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 뇌실질내 주사 및 경막내 주사에 의해 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 AAV 입자는 뇌실질내 주사 및 경막내 주사를 통해 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 피하 주사에 의해 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 AAV 입자는 피하 주사에 의해 대상체에게 투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 국소로 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 AAV 입자는 국소로 대상체에게 투여될 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 뇌로의 직접적인 주사에 의해 전달될 수 있다. 비제한적인 예로서, 뇌 전달은 선조체내 투여에 의한 것일 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 선조체내 주사를 통해 투여될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 선조체내 주사 및 본원에 기재된 또 다른 투여 경로를 통해 투여될 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 하나 초과의 투여 경로에 의해 전달될 수 있다. 병용 투여의 비제한적인 예로서, AAV 입자는 경막내 및 뇌실내, 또는 정맥내 및 뇌실질내 투여에 의해 전달될 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 신경계 질환이 있는 대상체에 대해 기능 및/또는 생존을 개선시키기 위해 치료적 유효량으로 CNS에 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 벡터는 정맥내 투여될 수 있다.

AAV 입자는 "치료적으로 유효한" 양, 즉, 질환과 관련된 적어도 하나의 증상을 완화 및/또는 예방하거나 대상체의 상태 개선을 제공하기에 충분한 양으로 투여될 수 있다.

일 구현예에서, 카테터는 다중-부위 전달을 위해 척추 내 하나 초과의 부위에 위치할 수 있다. AAV 입자는 연속적 및/또는 볼루스 주입으로 전달될 수 있다. 각각의 전달 부위는 상이한 투여 요법일 수 있거나 동일한 투여 요법이 각각의 전달 부위에 사용될 수 있다. 비제한적인 예로서, 전달 부위는 경추 및 요추 영역에 있을 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 전달 부위는 경추 영역에 있을 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 전달 부위는 요추 영역에 있을 수 있다.

일 구현예에서, 대상체는 본원에 기재된 AAV 입자의 전달 전에 척추 해부학 및 병리학에 대해 분석될 수 있다. 비제한적인 예로서, 척추측만증이 있는 대상체는 척추측만증이 없는 대상체와 비교하여 투여 요법 및/또는 카테터 위치가 상이할 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자의 전달 동안 대상체의 척추 방향은 지면에 수직일 수 있다.

또 다른 구현예에서, AAV 입자의 전달 동안 대상체의 척추 방향은 지면에 수평일 수 있다.

일 구현예에서, 대상체의 척추는 AAV 입자의 전달 동안 지면과 비교하여 비스듬히 있을 수 있다. 지면과 비교하여 대상체의 척추의 각도는 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150 또는 180도일 수 있다.

일 구현예에서, 전달 방법 및 지속시간은 척수에 광범위한 형질도입을 제공하도록 선택된다. 비제한적인 예로서, 경막내 전달은 척수의 문측(문측)-미추 길이를 따라 광범위한 형질도입을 제공하기 위해 사용된다. 또 다른 비제한적인 예로서, 다중-부위 주입은 척수의 문측-미추 길이를 따라 보다 균일한 형질도입을 제공한다. 또 다른 비제한적인 예로서, 장기간 주입은 척수의 문측-미추 길이를 따라 보다 균일한 형질도입을 제공한다.

비경구 및 주사 투여

일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물, AAV 입자는 비경구로 투여될 수 있다. 경구 및 비경구 투여용 액체 투여 형태는 약제학적으로 허용되는 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및/또는 엘릭시르를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 활성 성분에 더하여, 액체 투여 형태는 당업계에 통상적으로 사용되는 불활성 희석제, 예를 들어, 물 또는 다른 용매, 가용화제, 유화제 예를 들어 에틸 알코올, 이소프로필 알코올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 디메틸포름아미드, 오일(특히, 면실유, 낙화생유, 옥수수유, 배아유, 올리브유, 피마자유 및 참깨유), 글리세롤, 테트라하이드로푸르푸릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 불활성 희석제 이외에, 경구 조성물은 보조제 예를 들어 습윤제, 유화제 및 현탁제, 감미제, 착향제 및/또는 방향제를 포함할 수 있다. 비경구 투여를 위한 특정 구현예에서, 조성물은 가용화제 예를 들어 크레모포르(CREMOPHOR^®), 알코올, 오일, 변성유, 글리콜, 폴리소르베이트, 사이클로덱스트린, 중합체 및/또는 이들의 조합과 혼합된다. 다른 구현예에서, 하이드록시프로필셀룰로스와 같은 계면활성제가 포함된다.

주사용 제제, 예를 들어, 멸균 주사용 수성 또는 유성 현탁액은 적절한 분산제, 습윤제 및/또는 현탁제를 사용하여 공지된 기술에 따라 제제화될 수 있다. 멸균 주사용 제제는, 예를 들어, 1,3-부탄디올 중의 용액과 같이 무독성의 비경구로 허용되는 희석제 및/또는 용매 중의 멸균 주사용 용액, 현탁액 및/또는 에멀젼일 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액, U.S.P., 및 염화나트륨 등장 용액이 있다. 멸균 고정유가 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용된다. 이러한 목적을 위해, 합성 모노글리세라이드 또는 디글리세라이드를 포함하는 임의의 무자극성(bland) 고정유가 사용될 수 있다. 올레산과 같은 지방산이 주사제의 제조에 사용될 수있다. 올레산과 같은 지방산이 주사제의 제조에 사용될 수 있다.

주사용 제제는, 예를 들어, 박테리아-보유 필터를 통한 여과에 의해 및/또는 사용 전에 멸균수 또는 다른 멸균 주사용 매질에 용해되거나 분산될 수 있는 멸균 고체 조성물의 형태로 멸균제를 혼입시킴으로써 멸균될 수 있다.

활성 성분의 효과를 연장시키기 위해, 피하 또는 근육내 주사액으로부터 활성 성분의 흡수를 늦추는 것이 종종 바람직하다. 이것은 수 용해도가 불량한 결정성 또는 비정질 물질의 액체 현탁액을 사용하여 달성될 수 있다. 활성 성분의 흡수 속도는 해리 속도에 따라 달라지며, 해리 속도는 또한 결정 크기 및 결정형에 따라 달라질 수 있다. 대안적으로, 비경구로 투여된 약물 형태의 지연된 흡수는 오일 비히클에 약물을 용해시키거나 현탁시켜 달성된다. 주사용 데포 형태는 폴리락타이드-폴리글리콜라이드와 같은 생분해성 중합체에서 약물의 마이크로캡슐 매트릭스를 형성함으로써 제조된다. 약물 대 중합체의 비 및 사용된 특정 중합체의 성질에 따라, 약물 방출 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 중합체의 예로는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물)이 포함된다. 데포 주사용 제제는 약물을 신체 조직과 혼화되는 리포좀 또는 마이크로에멀전에 포획함으로써 제조된다.

데포 투여

본원에 기재된 바와 같이, 일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물, AAV 입자는 연장된 방출을 위해 데포로 제제화된다. 일반적으로, 특정 기관 또는 조직("표적 조직")은 투여를 위해 표적화된다.

본 발명의 일부 측면에서, 본 발명의 약제학적 조성물, AAV 입자는 표적 조직 내에 또는 근위에 공간적으로 유지된다. 표적 조직(하나 이상의 표적 세포 포함)을 약제학적 조성물, AAV 입자와, 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99, 99.9, 99.99% 또는 99.99% 초과의 조성물이 표적 조직에 유지됨을 의미하는, 표적 조직에 이들이 상당히 유지되도록 하는 조건하에 접촉시켜 약제학적 조성물, AAV 입자를 포유동물 대상체의 표적 조직에 제공하는 방법이 제공된다. 유리하게는, 체류는 하나 이상의 표적 세포에 진입된 약제학적 조성물 및 AAV 입자의 양을 측정함으로써 결정된다. 예를 들어, 대상체에게 투여된 약제학적 조성물, AAV 입자의 적어도 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.9%, 99.99% 또는 99.99% 이상이 투여 후 일정 기간에 세포내에 존재한다. 예를 들어, 포유동물 대상체로의 근육내 주사는 본 발명의 약제학적 조성물, AAV 입자 및 하나 이상의 형질감염 시약을 포함하는 수성 조성물을 사용하여 수행될 수 있으며, 체류는 표적 세포에 존재하는 약제학적 조성물, AAV 입자의 양을 측정함으로써 결정된다.

본 발명의 특정 측면은 표적 조직(하나 이상의 표적 세포 포함)을 약제학적 조성물, AAV 입자와, 이러한 표적 조직에 이들이 상당히 유지되도록 하는 조건하에 접촉시킴으로써 포유동물 대상체의 표적 조직에 본 발명의 약제학적 조성물, AAV 입자를 제공하는 방법에 관한 것이다. 약제학적 조성물, AAV 입자는 적어도 하나의 표적 세포에서 관심 효과를 초래하기에 충분한 활성 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물, AAV 입자는 일반적으로 하나 이상의 세포 침투제를 포함하지만, "네이키드(naked)" 제제(예를 들어 세포 침투제 또는 다른 제제가 없는 제제)이 또한 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 또는 없이 고려된다.

폐 투여

일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물, AAV 입자는 폐 투여에 적합한 제제로 제조, 패키징 및/또는 판매될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 투여는 협강을 통한 것이다. 일부 구현예에서, 제제는 활성 성분을 포함하는 건조 입자를 포함할 수 있다. 이러한 구현예에서, 건조 입자는 직경이 약 0.5nm 내지 약 7nm 또는 약 1nm 내지 약 6nm일 수 있다. 일부 구현예에서, 제제는 추진제의 스트림이 분말을 분산시키도록 유도될 수 있는 건조 분말 저장소를 포함하는 장치를 사용하여 투여하기 위한 건조 분말의 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, 자체-추진 용매/분말 분배 용기가 사용될 수 있다. 이러한 구현예에서, 활성 성분은 밀봉된 용기에서 저비점 추진제에 용해되고/되거나 현탁될 수 있다. 상기 분말은 입자를 포함할 수 있는데, 중량 기준으로 상기 입자의 적어도 98%는 직경이 0.5nm 초과이고, 수 기준으로 상기 입자의 적어도 95%는 직경이 7nm 미만이다. 대안적으로, 중량 기준으로 입자의 적어도 95%는 직경이 1nm 초과이고, 수 기준으로 입자의 적어도 90%는 직경이 6nm 미만이다. 건조 분말 조성물은 당과 같은 고체 미분 희석제를 포함할 수 있으며 단위 용량 형태로 편리하게 제공된다.

저비점 추진제는 일반적으로 대기압에서 비점이 65℉ 미만인 액체 추진제를 포함한다. 일반적으로, 추진제는 조성물의 50% 내지 99.9%(w/w)를 구성할 수 있으며, 활성 성분은 조성물의 0.1% 내지 20%(w/w)를 구성할 수 있다. 추진제는 추가의 성분 예를 들어 액체 비-이온성 및/또는 고체 음이온성 계면활성제 및/또는 고체 희석제(활성 성분을 포함하는 입자와 동일한 정도의 입자 크기를 가질 수 있음)를 또한 포함할 수 있다.

폐 전달을 위해 제제화된 약제학적 조성물은 용액 및/또는 현탁액의 액적 형태로 활성 성분을 제공할 수 있다. 상기 제제는 활성 성분을 포함하는, 임의로 멸균된, 수성 및/또는 희석된 알코올성 용액 및/또는 현탁액으로 제조, 패키징 및/또는 판매될 수 있으며, 임의의 분무 및/또는 원자화 장치를 사용하여 편리하게 투여될 수 있다. 상기 제제는 또한 착향제 예를 들어 사카린 나트륨, 휘발성 오일, 완충제, 표면 활성제 및/또는 보존제 예를 들어 메틸하이드록시벤조에이트를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 하나 이상의 추가 성분을 포함할 수 있다. 이 투여 경로에 의해 제공된 액적은 평균 직경이 약 0.1nm 내지 약 200nm의 범위일 수 있다.

비강내 , 코 및 협측 투여

일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물, AAV 입자는 코 및/또는 비강내로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 폐 투여에 유용한 본원에 기재된 제제는 또한 비강내 전달에도 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 비강내 투여를 위한 제제는 평균 입자 크기가 0.2μm 내지 500μm인, 활성 성분을 포함하는 조대한 분말을 포함한다. 상기 제제는 코를 들이쉬는 방식으로, 즉, 코에 가까이 유지된 분말의 용기로부터 비강을 통해 빠르게 흡입함으로써 투여된다.

비강 투여에 적합한 제제는, 예를 들어, 약 0.1%(w/w) 내지 100%(w/w)의 활성 성분을 포함할 수 있으며, 본원에 기재된 추가 성분 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 협측 투여에 적합한 제제로 제조, 패키징 및/또는 판매될 수 있다. 상기 제제는, 예를 들어, 통상적인 방법을 사용하여 제조된 정제 및/또는 로젠지의 형태일 수 있고, 예를 들어, 0.1% 내지 20%(w/w)의 활성 성분을 포함할 수 있으며, 나머지는 경구 용해성 및/또는 분해성 조성물 및, 임의로, 하나 본원에 기재된 이상의 추가 성분을 포함한다. 대안적으로, 협측 투여에 적합한 제제는 활성 성분을 포함하는 분말 및/또는 에어로졸화 및/또는 원자화 용액 및/또는 현탁액을 포함할 수 있다. 상기 분말화, 에어로졸화 및/또는 에어로졸화 제제는, 분산될 때, 약 0.1nm 내지 약 200nm 범위의 평균 입자 및/또는 액적 크기를 포함할 수 있으며, 또한 본원에 기재된 임의의 추가 성분 중 하나 이상을 포함할 수 있다.

눈 또는 귀 투여

일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물, AAV 입자는 눈 및/또는 귀 투여에 적합한 제제로 제조, 패키징 및/또는 판매될 수 있다. 상기 제제는, 예를 들어, 수성 및/또는 유성 액제 부형제 중의 활성 성분의 0.1/1.0%(w/w) 용액 및/또는 현탁액을 포함하는 예를 들어 점안액 및/또는 점이액의 형태일 수 있다. 상기 점적액은 또한, 완충제, 염 및/또는 본원에 기재된 임의의 다른 추가 성분 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 다른 안과용으로 투여될 수 있는 유용한 제제는 활성 성분을 미세결정질 형태 및/또는 리포좀 제제로 포함하는 것들을 포함한다. 망막하 삽입물이 또한 투여 형태로 사용될 수 있다.

전달, 용량 및 요법

본 발명은 이를 필요로 하는 대상체에게 본 발명에 따른 AAV 입자를 투여하는 방법을 제공한다. 본 발명의 약제학적, 진단적, 또는 예방적 AAV 입자 및 조성물은 질환, 장애 및/또는 병태를 예방, 치료, 관리 또는 진단하는데 효과적인 임의의 양 및 임의의 투여 경로를 사용하여 대상체에게 투여될 수 있다. 필요한 정확한 양은 대상체의 종, 연령 및 일반적인 상태, 질환의 중증도, 특정 조성, 투여 방식, 활성 방식 등에 따라 대상체마다 달라질 것이다. 대상체는 사람, 포유동물 또는 동물일 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 전형적으로 투여 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 단위 투여 형태로 제제화된다. 그러나, 본 발명의 조성물의 1일 총 사용량은 타당한 의학적 판단 범위 내에서 담당의에 의해 결정될 수 있음이 이해될 것이다. 임의의 특정 개체에 대한 특정 치료적으로 효과적인, 예방적으로 효과적인 또는 적절한 진단 용량 수준은 치료되는 장애 및 장애의 중증도; 사용된 특정 페이로드의 활성; 사용된 특정 조성물; 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별 및 식이; 사용된 특정 AAV 입자의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 속도; 치료 기간; 사용된 특정 AAV 입자와 병용하여 또는 동시에 사용되는 약물; 및 의학 분야에서 잘 알려진 유사 인자를 포함하는 다양한 인자에 따라 달라질 것이다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자의 전달은 AAV 입자의 전달 결과로서 최소의 심각한 부작용(SAE)을 초래한다.

일 구현예에서, AAV 입자는 다중-용량 요법으로 전달될 수 있다. 다중-용량 요법은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10회 또는 10회 초과의 용량일 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 다중-부위 투여 경로를 통해 대상체에게 전달될 수 있다. 대상체는 2, 3, 4, 5개 또는 5개 초과의 부위에서 AAV 입자가 투여될 수 있다.

특정 구현예에서, 본 발명에 따른 AAV 입자 약제학적 조성물은 목적하는 치료, 진단 또는 예방 효과를 얻기 위해, 하루에 1회 이상, 1일 대상체의 체중 1kg당 약 0.0001mg 내지 약 100mg, 약 0.001mg 내지 약 0.05mg, 약 0.005mg 내지 약 0.05mg, 약 0.001mg 내지 약 0.005mg, 약 0.05mg 내지 약 0.5mg, 약 0.01mg 내지 약 50mg, 약 0.1mg 내지 약 40mg, 약 0.5mg 내지 약 30mg, 약 0.01mg 내지 약 10mg, 약 0.1mg 내지 약 10mg, 또는 약 1mg 내지 약 25mg을 전달하기에 충분한 투여 수준으로 투여될 수 있다. 상기 투여 농도는 kg당 바이러스 게놈 (vg)으로 또는 당업자에 의해 투여된 총 바이러스 게놈으로 전환될 수 있음이 이해될 것이다.

특정 구현예에서, 본 발명에 따른 AAV 입자 약제학적 조성물은 부위당 약 10 내지 약 600μl, 부위당 50 내지 약 500μl, 부위당 100 내지 약 400μl, 부위당 120 내지 약 300μl, 부위당 140 내지 약 200μl, 부위당 약 160μl로 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 부위당 50μl 및/또는 부위당 150μl로 투여될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물의 세포로의 전달은 [VG/시간 = mL/시간 * VG/mL]로 정의된 전달 속도를 포함하며 여기서 VG는 바이러스 게놈이고, VG/mL는 조성물 농도이고, mL/시간은 장기간 전달 속도이다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 AAV 입자를 포함하는 조성물의 세포로의 전달은 약 1x10⁶ VG(바이러스 게놈) 내지 약 1x10¹⁶ VG의 대상체당 총 농도를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 전달은 대상체당 약 1x10⁶, 2x10⁶, 3x10⁶, 4x10⁶, 5x10⁶, 6x10⁶, 7x10⁶, 8x10⁶, 9x10⁶, 1x10⁷, 2x10⁷, 3x10⁷, 4x10⁷, 5x10⁷, 6x10⁷, 7x10⁷, 8x10⁷, 9x10⁷, 1x10⁸, 2x10⁸, 3x10⁸, 4x10⁸, 5x10⁸, 6x10⁸, 7x10⁸, 8x10⁸, 9x10⁸, 1x10⁹, 2x10⁹, 3x10⁹, 4x10⁹, 5x10⁹, 6x10⁹, 7x10⁹, 8x10⁹, 9x10⁹, 1x10¹⁰, 2x10¹⁰, 3x10¹⁰, 4x10¹⁰, 5x10¹⁰, 6x10¹⁰, 7x10¹⁰, 8x10¹⁰, 9x10¹⁰, 1x10¹¹, 2x10¹¹, 2.1x10¹¹, 2.2x10¹¹, 2.3x10¹¹, 2.4x10¹¹, 2.5x10¹¹, 2.6x10¹¹, 2.7x10¹¹, 2.8x10¹¹, 2.9x10¹¹, 3x10¹¹, 4x10¹¹, 5x10¹¹, 6x10¹¹, 7x10¹¹, 7.1x10¹¹, 7.2x10¹¹, 7.3x10¹¹, 7.4x10¹¹, 7.5x10¹¹, 7.6x10¹¹, 7.7x10¹¹, 7.8x10¹¹, 7.9x10¹¹, 8x10¹¹, 9x10¹¹, 1x10¹², 1.1 x10¹², 1.2x10¹², 1.3x10¹², 1.4x10¹², 1.5x10¹², 1.6x10¹², 1.7x10¹², 1.8x10¹², 1.9x10¹², 2x10¹², 3x10¹², 4x10¹², 4.1x10¹², 4.2x10¹², 4.3x10¹², 4.4x10¹², 4.5x10¹²,4.6x10¹², 4.7x10¹², 4.8x10¹², 4.9x10¹², 5x10¹², 6x10¹², 6.1x10¹², 6.2x10¹², 6.3x10¹², 6.4x10¹², 6.5x10¹², 6.6x10¹², 6.7x10¹², 6.8x10¹², 6.9x10¹², 7x10¹², 8x10¹², 8.1x10¹², 8.2x10¹², 8.3x10¹², 8.4x10¹², 8.5x10¹², 8.6x10¹², 8.7x10¹², 8.8 x10¹², 8.9x10¹², 9x10¹², 1x10¹³, 2x10¹³, 3x10¹³, 4x10¹³, 5x10¹³, 6x10¹³, 6.7x10¹³, 7x10¹³, 8x10¹³, 9x10¹³, 1x10¹⁴, 2x10¹⁴, 3x10¹⁴, 4x10¹⁴, 5x10¹⁴, 6x10¹⁴, 7x10¹⁴, 8x10¹⁴, 9x10¹⁴, 1x10¹⁵, 2x10¹⁵, 3x10¹⁵, 4x10¹⁵, 5x10¹⁵, 6x10¹⁵, 7x10¹⁵, 8x10¹⁵, 9x10¹⁵, 또는 1x10¹⁶ VG의 조성물 농도를 포함할 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 AAV 입자를 포함하는 조성물의 세포로의 전달은 약 1x10⁶ VG/kg 내지 약 1x10¹⁶ VG/kg의 대상체당 총 농도를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 전달은 약 1x10⁶, 2x10⁶, 3x10⁶, 4x10⁶, 5x10⁶, 6x10⁶, 7x10⁶, 8x10⁶, 9x10⁶, 1x10⁷, 2x10⁷, 3x10⁷, 4x10⁷, 5x10⁷, 6x10⁷, 7x10⁷, 8x10⁷, 9x10⁷, 1x10⁸, 2x10⁸, 3x10⁸, 4x10⁸, 5x10⁸, 6x10⁸, 7x10⁸, 8x10⁸, 9x10⁸, 1x10⁹, 2x10⁹, 3x10⁹, 4x10⁹, 5x10⁹, 6x10⁹, 7x10⁹, 8x10⁹, 9x10⁹, 1x10¹⁰, 2x10¹⁰, 3x10¹⁰, 4x10¹⁰, 5x10¹⁰, 6x10¹⁰, 7x10¹⁰, 8x10¹⁰, 9x10¹⁰, 1x10¹¹, 2x10¹¹, 2.1x10¹¹, 2.2x10¹¹, 2.3x10¹¹, 2.4x10¹¹, 2.5x10¹¹, 2.6x10¹¹, 2.7x10¹¹, 2.8x10¹¹, 2.9x10¹¹, 3x10¹¹, 4x10¹¹, 5x10¹¹, 6x10¹¹, 7x10¹¹, 7.1x10¹¹, 7.2x10¹¹, 7.3x10¹¹, 7.4x10¹¹, 7.5x10¹¹, 7.6x10¹¹, 7.7x10¹¹, 7.8x10¹¹, 7.9x10¹¹, 8x10¹¹, 9x10¹¹, 1x10¹², 1.1 x10¹², 1.2x10¹², 1.3x10¹², 1.4x10¹², 1.5x10¹², 1.6x10¹², 1.7x10¹², 1.8x10¹², 1.9x10¹², 2x10¹², 3x10¹², 4x10¹², 4.1x10¹², 4.2x10¹², 4.3x10¹², 4.4x10¹², 4.5x10¹²,4.6x10¹², 4.7x10¹², 4.8x10¹², 4.9x10¹², 5x10¹², 6x10¹², 6.1x10¹², 6.2x10¹², 6.3x10¹², 6.4x10¹², 6.5x10¹², 6.6x10¹², 6.7x10¹², 6.8x10¹², 6.9x10¹², 7x10¹², 8x10¹², 8.1x10¹², 8.2x10¹², 8.3x10¹², 8.4x10¹², 8.5x10¹², 8.6x10¹², 8.7x10¹², 8.8 x10¹², 8.9x10¹², 9x10¹², 1x10¹³, 2x10¹³, 3x10¹³, 4x10¹³, 5x10¹³, 6x10¹³, 6.7x10¹³, 7x10¹³, 8x10¹³, 9x10¹³, 1x10¹⁴, 2x10¹⁴, 3x10¹⁴, 4x10¹⁴, 5x10¹⁴, 6x10¹⁴, 7x10¹⁴, 8x10¹⁴, 9x10¹⁴, 1x10¹⁵, 2x10¹⁵, 3x10¹⁵, 4x10¹⁵, 5x10¹⁵, 6x10¹⁵, 7x10¹⁵, 8x10¹⁵, 9x10¹⁵, 또는 1x10¹⁶ VG/kg의 조성물 농도를 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 상기 전달은 1x10¹³ VG/kg의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 2.1x10¹² VG/kg의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 1x10¹³ VG/kg의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 6.7x10¹² VG/kg의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 7x10¹² VG/kg의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 2x10¹³ VG/kg의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 3x10¹¹ VG/kg의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 3x10¹² VG/kg의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 3x10¹³ VG/kg의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 6.3x10¹² VG/kg의 조성물 농도를 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자의 중추 신경계(예를 들어, 실질) 세포로의 전달은 약 1x10⁶ VG 내지 약 1x10¹⁶ VG의 총량을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 전달은 약 1x10⁶, 2x10⁶, 3x10⁶, 4x10⁶, 5x10⁶, 6x10⁶, 7x10⁶, 8x10⁶, 9x10⁶, 1x10⁷, 2x10⁷, 3x10⁷, 4x10⁷, 5x10⁷, 6x10⁷, 7x10⁷, 8x10⁷, 9x10⁷, 1x10⁸, 2x10⁸, 3x10⁸, 4x10⁸, 5x10⁸, 6x10⁸, 7x10⁸, 8x10⁸, 9x10⁸, 1x10⁹, 2x10⁹, 3x10⁹, 4x10⁹, 5x10⁹, 6x10⁹, 7x10⁹, 8x10⁹, 9x10⁹, 1x10¹⁰, 1.9x10¹⁰, 2x10¹⁰, 3x10¹⁰, 3.73x10¹⁰, 4x10¹⁰, 5x10¹⁰, 6x10¹⁰, 7x10¹⁰, 8x10¹⁰, 9x10¹⁰, 1x10¹¹, 2x10¹¹, 2.5x10¹¹, 3x10¹¹, 4x10¹¹, 5x10¹¹, 6x10¹¹, 7x10¹¹, 8x10¹¹, 9x10¹¹, 1x10¹², 2x10¹², 3x10¹², 4x10¹², 5x10¹², 6x10¹², 6.1x10¹², 6.2x10¹², 6.3x10¹², 6.4x10¹², 6.5x10¹², 6.6x10¹², 6.7x10¹², 6.8x10¹², 6.9x10¹², 7x10¹², 8x10¹², 9x10¹², 1x10¹³, 2x10¹³, 3x10¹³, 4x10¹³, 5x10¹³, 6x10¹³, 7x10¹³, 8x10¹³, 9x10¹³, 1x10¹⁴, 2x10¹⁴, 3x10¹⁴, 4x10¹⁴, 5x10¹⁴, 6x10¹⁴, 7x10¹⁴, 8x10¹⁴, 9x10¹⁴, 1x10¹⁵, 2x10¹⁵, 3x10¹⁵, 4x10¹⁵, 5x10¹⁵, 6x10¹⁵, 7x10¹⁵, 8x10¹⁵, 9x10¹⁵, 또는 1x10¹⁶ VG의 총량을 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 상기 총량은 1x10¹³ VG이다. 또 다른 비제한적인 예로서, 상기 총량은 2.1x10¹² VG이다. 또 다른 비제한적인 예로서, 상기 총량은 6.3x10¹² VG이다.

일 구현예에서, 1회 용량당 약 10⁵ 내지 10⁶ 바이러스 게놈(유닛)이 투여될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명에 따른 AAV 입자를 포함하는 조성물의 세포로의 전달은 약 1x10⁶ VG/mL 내지 약 1x10¹⁶ VG/mL의 총 농도를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 전달은 약 1x10⁶, 2x10⁶, 3x10⁶, 4x10⁶, 5x10⁶, 6x10⁶, 7x10⁶, 8x10⁶, 9x10⁶, 1x10⁷, 2x10⁷, 3x10⁷, 4x10⁷, 5x10⁷, 6x10⁷, 7x10⁷, 8x10⁷, 9x10⁷, 1x10⁸, 2x10⁸, 3x10⁸, 4x10⁸, 5x10⁸, 6x10⁸, 7x10⁸, 8x10⁸, 9x10⁸, 1x10⁹, 2x10⁹, 3x10⁹, 4x10⁹, 5x10⁹, 6x10⁹, 7x10⁹, 8x10⁹, 9x10⁹, 1x10¹⁰, 2x10¹⁰, 3x10¹⁰, 4x10¹⁰, 5x10¹⁰, 6x10¹⁰, 7x10¹⁰, 8x10¹⁰, 9x10¹⁰, 1x10¹¹, 2x10¹¹, 3x10¹¹, 4x10¹¹, 5x10¹¹, 6x10¹¹, 7x10¹¹, 8x10¹¹, 9x10¹¹, 1x10¹², 1.1x10¹², 1.2x10¹², 1.3x10¹², 1.4x10¹², 1.5x10¹², 1.6x10¹², 1.7x10¹², 1.8x10¹², 1.9x10¹², 2x10¹², 2.1x10¹², 2.2x10¹², 2.3x10¹², 2.4x10¹², 2.5x10¹², 2.6x10¹², 2.7x10¹², 2.8x10¹², 2.9x10¹², 3x10¹², 3.1x10¹², 3.2x10¹², 3.3x10¹², 3.4x10¹², 3.5x10¹², 3.6x10¹², 3.7x10¹², 3.8x10¹², 3.9x10¹², 4x10¹², 4.1x10¹², 4.2x10¹², 4.3x10¹², 4.4x10¹², 4.5x10¹², 4.6x10¹², 4.7x10¹², 4.8x10¹², 4.9x10¹², 5x10¹², 6x10¹², 6.1x10¹², 6.2x10¹², 6.3x10¹², 6.4x10¹², 6.5x10¹², 6.6x10¹², 6.7x10¹², 6.8x10¹², 6.9x10¹², 7x10¹², 8x10¹², 9x10¹², 1x10¹³, 2x10¹³, 3x10¹³, 4x10¹³, 5x10¹³, 6x10¹³, 6.7x10¹³, 7x10¹³, 8x10¹³, 9x10¹³, 1x10¹⁴, 2x10¹⁴, 3x10¹⁴, 4x10¹⁴, 5x10¹⁴, 6x10¹⁴, 7x10¹⁴, 8x10¹⁴, 9x10¹⁴, 1x10¹⁵, 2x10¹⁵, 3x10¹⁵, 4x10¹⁵, 5x10¹⁵, 6x10¹⁵, 7x10¹⁵, 8x10¹⁵, 9x10¹⁵, 또는 1x10¹⁶ VG/mL의 조성물 농도를 포함할 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자의 중추 신경계(예를 들어, 실질) 세포로의 전달은 약 1x10⁶ VG/mL 내지 약 1x10¹⁶ VG/mL의 조성물 농도를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 전달은 약 1x10⁶, 2x10⁶, 3x10⁶, 4x10⁶, 5x10⁶, 6x10⁶, 7x10⁶, 8x10⁶, 9x10⁶, 1x10⁷, 2x10⁷, 3x10⁷, 4x10⁷, 5x10⁷, 6x10⁷, 7x10⁷, 8x10⁷, 9x10⁷, 1x10⁸, 2x10⁸, 3x10⁸, 4x10⁸, 5x10⁸, 6x10⁸, 7x10⁸, 8x10⁸, 9x10⁸, 1x10⁹, 2x10⁹, 3x10⁹, 4x10⁹, 5x10⁹, 6x10⁹, 7x10⁹, 8x10⁹, 9x10⁹, 1x10¹⁰, 2x10¹⁰, 3x10¹⁰, 4x10¹⁰, 5x10¹⁰, 6x10¹⁰, 7x10¹⁰, 8x10¹⁰, 9x10¹⁰, 1x10¹¹, 2x10¹¹, 3x10¹¹, 4x10¹¹, 5x10¹¹, 6x10¹¹, 7x10¹¹, 8x10¹¹, 9x10¹¹, 1x10¹², 2x10¹², 3x10¹², 4x10¹², 5x10¹², 6x10¹², 6.1x10¹², 6.2x10¹², 6.3x10¹², 6.4x10¹², 6.5x10¹², 6.6x10¹², 6.7x10¹², 6.8x10¹², 6.9x10¹², 7x10¹², 8x10¹², 9x10¹², 1x10¹³, 2x10¹³, 3x10¹³, 4x10¹³, 5x10¹³, 6x10¹³, 7x10¹³, 8x10¹³, 9x10¹³, 1x10¹⁴, 2x10¹⁴, 3x10¹⁴, 4x10¹⁴, 5x10¹⁴, 6x10¹⁴, 7x10¹⁴, 8x10¹⁴, 9x10¹⁴, 1x10¹⁵, 2x10¹⁵, 3x10¹⁵, 4x10¹⁵, 5x10¹⁵, 6x10¹⁵, 7x10¹⁵, 8x10¹⁵, 9x10¹⁵, 또는 1x10¹⁶ VG/mL의 조성물 농도를 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 상기 전달은 1x10¹³ VG/mL의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 2.1x10¹² VG/mL의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 1x10¹³ VG/mL의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 2x10¹³ VG/mL의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 3x10¹¹ VG/mL의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 3x10¹² VG/mL의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 6.3x10¹² VG/mL의 조성물 농도를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 전달은 3x10¹³ VG/mL의 조성물 농도를 포함한다.

특정 구현예에서, 목적하는 투여량은 다중 투여(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14회 이상 투여)를 사용하여 전달될 수 있다. 다중 투여가 사용되는 경우, 본원에 기재된 것들과 같은 분할된 투여 용법이 사용될 수 있다. 본원에 사용된 "분할 용량"은 "단일 단위 용량" 또는 총 하루 용량을 2회 이상의 용량으로 분할한 것, 예를 들어, "단일 단위 용량"의 2회 이상의 투여이다. 본원에 사용된 "단일 단위 용량"은 하나의 용량으로/한꺼번에/단일 경로로/단일 접촉점으로, 즉, 단일 투여 사건으로 투여되는 임의의 치료제의 용량이다.

본 발명의 AAV 입자의 목적하는 투여량은 "펄스 용량" 또는 "연속적 유동"으로서 투여될 수 있다. 본원에 사용된 "펄스 용량"은 일정 기간 동안 설정된 빈도로 투여되는 임의의 치료제의 일련의 단일 단위 용량이다. 본원에 사용된 "연속적 유동"은 단일 경로/단일 접촉점, 즉 연속적 투여 사건으로 일정 기간 동안 연속적으로 투여되는 치료제의 용량이다. 24시간 기간 내에 제공되거나 처방되는 양인, 1일 총용량은 이들 방법 중 임의의 것으로, 또는 이들 방법의 조합으로, 또는 약제학적 투여에 적합한 임의의 다른 방법으로 투여될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자의 대상체로의 전달은 대상체에서 표적 유전자의 활성 조절을 제공한다. 활성 조절은 대상체에서 표적 단백질의 생산 증가 또는 대상체에서 표적 단백질의 생산 감소일 수 있다. 활성 조절은 적어도 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 1년, 13개월, 14개월, 15개월, 16개월, 17개월, 18개월, 19개월, 20개월, 20개월, 21개월, 22개월, 23개월, 2년, 3년, 4년, 5년, 6년, 7년, 8년, 9년, 10년 또는 10년 초과 동안일 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 단일 용량, 1회성 치료를 사용하여 대상체에게 투여될 수 있다. 1회성 치료 용량은 당업계에 공지되고/되거나 본원에 기재된 임의의 방법으로 투여될 수 있다. 본원에 사용된 "1회성 치료"는 한 번만 투여되는 조성물을 나타낸다. 필요한 경우, 적절한 효능에 도달하도록 부스터 용량을 대상체에게 투여할 수 있다. 부스터는 1회성 치료 후 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 1년, 13개월, 14개월, 15개월, 16개월, 17개월, 18개월, 19개월, 20개월, 21개월, 22개월, 23개월, 24개월, 2년, 3년, 4년, 5년, 6년, 7년, 8년, 9년, 10년 또는 10년 넘게 투여될 수 있다.

전달 방법

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자 또는 약제학적 조성물은 미국 특허 8,999,948호 또는 국제 공개 번호 WO2014178863호(이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 질환의 치료 방법을 사용하여 투여되거나 전달될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자 또는 약제학적 조성물은 미국 특허 출원 공개 공보 20150126590호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같이 알츠하이머병 또는 다른 신경퇴행성 병태에서 유전자 요법을 전달하는 방법을 사용하여 투여되거나 전달될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자 또는 약제학적 조성물은 미국 특허 6,436,708호 및 제8,946,152호, 및 국제 공개 공보 WO2015168666호(이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같이 CNS 유전자 요법의 전달 방법을 사용하여 투여되거나 전달될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자 또는 약제학적 조성물은 유럽 특허 출원 제EP2678433호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 AAV 입자를 사용한 단백질 전달 방법을 사용하여 투여되거나 전달될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자 또는 약제학적 조성물은 미국 특허 US 6,211,163호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 혈류에 DNA를 전달하는 방법을 사용하여 투여되거나 전달될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자 또는 약제학적 조성물은 미국 특허 7,588,757호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 중추 신경계로의 페이로드 전달 방법을 사용하여 투여되거나 전달될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자 또는 약제학적 조성물은 미국 특허 8,283,151호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 페이로드 전달 방법을 사용하여 투여되거나 전달될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자 또는 약제학적 조성물은 국제 특허 공개 공보 WO2001089583호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 글루탐산 데카복실라아제(GAD) 전달 벡터를 사용한 페이로드 전달 방법을 사용하여 투여되거나 전달될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 the AAV 입자 또는 약제학적 조성물은 국제 특허 공개 공보 WO2012057363호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 신경 세포로의 페이로드 전달 방법을 사용하여 투여되거나 전달될 수 있다.

세포로의 전달

본 발명은 상기 기재된 임의의 AAV 입자를 세포 또는 조직 또는 기관에 전달하는 방법으로, 세포 또는 조직 또는 기관을 상기 AAV 입자와 접촉시키는 단계 또는 세포 또는 조직 또는 기관을 상기 AAV 입자를 포함하는 제제과 접촉시키는 단계, 또는 세포 또는 조직 또는 기관을 AAV 입자를 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 임의의 기재된 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법이 제공된다. 세포 또는 조직 또는 기관으로 AAV 입자를 전달하는 방법은 시험관내, 생체외 또는 생체내에서 달성될 수 있다.

대상체로의 전달

본 발명은 임의의 상기 기재된 AAV 입자를 포유동물 대상체를 포함하는 대상체에게 전달하는 방법으로, 상기 AAV 입자를 대상체에게 투여하는 단계 또는 상기 AAV 입자를 포함하는 제제를 대상체에게 투여하는 단계 또는 약제학적 조성물을 포함하는 임의의 기재된 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다.

일 구현예에서, 포유동물 대상체는 사람이다. 일부 측면에서, 사람 대상체는 질환, 예를 들어, 신경계 질환, 또는 심혈관 질환이 있는 환자이다.

병용물

AAV 입자는 하나 이상의 다른 치료제, 예방제, 연구 제제 또는 진단제와 병용하여 사용될 수 있다. "병용하여"는 이러한 전달 방법이 본 발명의 범위 내에 있지만, 제제가 동시에 투여되고/되거나 함께 전달되도록 제제화되어야 함을 의미하는 것은 아니다. 조성물은 하나 이상의 다른 목적하는 치료제 또는 의료 절차와 동시에, 이전에 또는 이후에 투여될 수 있다. 일반적으로, 각각의 제제는 상기 제제에 대해 결정된 용량 및/또는 시간 스케쥴로 투여될 것이다. 일부 구현예에서, 본 발명은 생체이용률을 개선하고, 대사를 감소 및/또는 변형시키고, 이들의 배설을 억제하고/하거나 체내에서 이들의 분포를 변형시킬 수 있는 제제와 병용된 약제학적, 예방, 연구 또는 진단 조성물의 전달을 포함한다.

발현 측정

바이러스 게놈으로부터 페이로드의 발현은 당업계에 공지된 다양한 방법, 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 면역화학(예를 들어, IHC), 동일계 혼성화(in situ hybridization; ISH), 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA), 친화성 ELISA, ELISPOT, 유세포 분석, 면역세포학, 표면 플라즈몬 공명 분석, 동역학 배제 검정(kinetic exclusion assay), 액체 크로마토그래피-질량분석법(LCMS), 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), BCA 검정, 면역전기영동, 웨스턴 블롯, SDS-PAGE, 단백질 면역침전 및/또는 PCR을 사용하여 결정될 수 있다.

생체이용률

AAV 입자는, 본원에 기재된 바와 같이 전달제를 갖는 조성물로 제제화될 때, 본원에 기재된 전달제가 없는 조성물과 비교하여 생체이용률의 증가를 나타낼 수 있다. 본원에 사용된 용어 "생체이용률"은 포유동물에게 투여되는 주어진 양의 AAV 입자 또는 발현된 페이로드의 전신 이용률을 나타낸다. 생체이용률은 다음의 조성물의 곡선하 면적(AUC) 또는 최대 혈청 또는 혈장 농도(C_max)를 측정함으로써 평가될 수 있다. AUC는 가로 좌표(X-축)와 함께 시간에 대한 세로 좌표(Y-축)를 따라 화합물(예를 들어, AAV 입자 또는 발현된 페이로드)의 혈청 또는 혈장 농도를 플롯팅하는 곡선하 면적을 결정하는 것이다. 일반적으로, 특정 화합물에 대한 AUC는 당업자에게 공지되고 문헌(참조: G. S. Banker, Modern Pharmaceutics, Drugs and the Pharmaceutical Sciences, v. 72, Marcel Dekker, New York, Inc., 1996, 이들의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 계산될 수 있다.

C_max 값은 포유동물에게 AAV 입자의 투여 후 포유동물의 혈청 또는 혈장에서 달성된 AAV 입자 또는 발현된 페이로드의 최대 농도이다. C_max 값은 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 본원에 사용된 어구 "생체이용률 증가" 또는 "약동학 개선"은 포유동물에서 AUC, C_max, 또는 C_min으로 측정된, 제1 AAV 입자 또는 발현된 페이로드의 전신 이용률이, 본원에 기재된 전달제와 함께 공-투여될 때, 공-투여되지 않은 경우보다 더 크다는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 생체이용률은 적어도 약 2%, 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100% 증가할 수 있다.

치료 윈도우 (Therapeutic Window)

본원에 사용된 "치료 윈도우"는 치료 효과를 유발할 가능성이 높은, 혈장 농도 범위 또는 작용 부위에서의 치료 활성 물질 수준의 범위를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 치료 윈도우는 적어도 약 2%, 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 또는 약 100% 증가할 수 있다.

분포량(Volume of Distribution)

본원에 사용된 용어 "분포량"은 혈액 또는 혈장에서와 동일한 농도로 체내 약물의 총량을 함유하는데 필요할 수 있는 유체 용적을 나타내며: V_dist는 체내 약물의 양/혈액 또는 혈장 내 약물의 농도이다. 예를 들어, 10 mg 용량 및 10 mg/L의 혈장 농도의 경우, 분포량은 1리터일 것이다. 분포량은 약물이 혈관외 조직에 존재하는 정도를 반영한다. 다량의 분포는 혈장 단백질 결합과 비교된 화합물이 조직 성분에 결합하는 경향을 반영한다. 임상 환경에서, V_dist는 정상 상태 농도를 달성하기 위한 로딩 용량을 결정하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 분포량은 적어도 약 2%, 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70% 감소할 수 있다.

생물학적 효과

일 구현예에서, 동물에게 전달되는 AAV 입자의 생물학적 효과는 동물에서 페이로드 발현을 분석함으로써 분류될 수 있다. 페이로드 발현은 본 발명의 AAV 입자가 투여된 포유동물로부터 수집된 생물학적 샘플을 분석함으로써 결정될 수 있다. 예를 들어, 포유동물에게 전달된 AAV 입자에 의해 인코딩된 단백질에 대한 50-200 pg/ml의 단백질 발현은 포유동물에서 치료적 유효량의 단백질인 것으로 보일 수 있다.

IV. 본 발명의 방법 및 조성물의 용도

유전자 발현

본 발명의 AAV 입자, 상기 AAV 입자를 포함하는 조성물은 세포, 조직, 기관 또는 대상체에서 관심 유전자의 발현을 조절하는데 사용될 수 있다.

본 발명에 따르면, 세포, 조직, 기관 또는 대상체에서 표적 단백질의 발현을 증가시키는 방법이 제공되며; 상기 방법은 표적 단백질을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 기능적 페이로드를 포함하는 AAV 입자의 유효량을 세포, 조직, 기관 또는 대상체에서 투여하는 단계를 포함한다.

따라서, 표적 단백질은 적어도 약 10%, 바람직하게는 적어도 약 10%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 증가될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자, 조성물 및 제제는 뉴런, 성상세포 및/또는 희소돌기아교세포와 같은 CNS의 세포에서 표적 단백질의 발현을 증가시키기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 유전자는 항체, AADC, APOE2, 및 프라탁신을 포함하지만 이에 제한되지 않는 단백질을 인코딩할 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자, 조성물 및 제제는 세포, 조직, 기관 또는 대상체에서 관심 유전자의 발현을 감소, 저해 및 억제하기 위해 사용될 수 있다. 따라서, AAV 입자는 관심 표적 유전자에 특이적인 siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA를 포함하는 적어도 하나의 기능적 페이로드를 포함한다.

일부 구현예에서, 본 발명은 세포 내 표적 유전자 발현을 억제/사일런싱하기 위한 방법을 제공한다. 따라서, siRNA 듀플렉스 또는 인코딩된 dsRNA는 이에 제한되지는 않지만 성상세포 또는 미세아교세포, 피질, 해마, 내비, 시상, 운동 또는 일차 감각 뉴런과 같은 세포 내 표적 유전자 발현을 실질적으로 억제하기 위해 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 표적 유전자 발현의 억제는 적어도 약 20%, 예를 들어 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%의 억제를 나타낸다. 따라서, 표적화된 유전자의 단백질 산물은 적어도 약 20%, 바람직하게는 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 억제될 수 있다.

일부 구현예에서, 억제될 유전자는 SOD1, HTT, APOE 및/또는 MAPT를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

신경계 질환

다양한 신경계 질환은 본 발명의 약제학적 조성물, AAV 입자, 특히 혈액 뇌 장벽 관통 AAV 입자로 치료될 수 있다. 비제한적인 예로서, 신경계 질환은 may be 투명중격 부재, 산 리파제 질환(Acid Lipase Disease), 산 말타제 결핍증, 후천성 간질성 언어상실증(Acquired Epileptiform Aphasia), 급성 파종 뇌척수염, 주의력 결핍-과다행동 장애(ADHD), 에이디 동공(Adie's Pupil), 에이디 증후군, 부신백질이영양증, 뇌량 무발생, 실인증, 에카르디 증후군(Aicardi Syndrome), 에카르디-구티에레스 증후군 장애, AIDS - 신경계 합병증, 알렉산더병(Alexander Disease), 알퍼병(Alpers' Disease), 교대성 편마비, 알츠하이머병, 근위축성 측삭경화증(ALS), 무뇌증, 동맥류, 안젤만 증후군, 혈관종증, 산소결핍증, 항인지질 증후군, 실어증, 행위상실증, 거미막낭, 거미막염, 아놀드-키아리 기형(Arnold-Chiari Malformation), 동정맥 기형, 아스퍼거 증후군, 운동실조, 모세혈관확장성 실조증, 운동실조 및 소뇌 또는 척수소뇌 변성, 심방 세동 및 뇌졸중, 주의력 결핍-과잉행동 장애, 자폐 스펙트럼 장애, 자율신경 실조증, 요통, 바쓰 증후군(Barth Syndrome), 바텐병(Batten Disease), 베커 근긴장증(Becker's Myotonia), 베체트병, 벨 마비(Bell's Palsy), 양성 본태성 안검경련, 양성 국소 근위축증, 양성 두개강내 고혈압, 베른하르트-로스 증후군(Bernhardt-Roth Syndrome), 빈스완거병(Binswanger's Disease), 안검경련, 블로크-설즈버거 증후군(Bloch-Sulzberger Syndrome), 상완신경총 출산 손상, 상완신경총 손상, 브래드버리-에글스턴 증후군(Bradbury-Eggleston Syndrome), 뇌 및 척추 종양, 뇌 동맥류, 뇌 손상, 브라운-세커드 증후군(Brown-Sequard Syndrome), 구척수 근위축증, 피질하 경색 및 백색질뇌병증이 있는 대뇌 상염색체 우성 동맥병증(CADASIL), 카나반병(Canavan Disease), 손목터널증후군, 작열통, 해면종(Cavernomas), 해면상혈관종, 해면상 혈관기형, 중심 경추 척수 증후군(Central Cervical Cord Syndrome), 중심 척수 증후군, 중추 통증 증후군, 뇌교 중심부 수초용해증, 두부 장애, 세라미다아제 결핍, 소뇌 변성, 소뇌 형성저하증, 뇌동맥류, 뇌동맥경화증, 뇌 위축증, 뇌 각기병, 뇌 해면상 혈관기형, 대뇌성 거인증, 뇌저산소증, 뇌성마비, 뇌-눈-얼굴-골격 증후군(COFS), 샤르코-마리-투스병(Charcot-Marie-Tooth Disease), 키아리 기형(Chiari Malformation), 콜레스테롤 에스테르 축적병, 무도증, 가시세포증가무도병, 만성 염증성 탈수초성 다발신경병증(CIDP), 만성 기립성 조절장애, 만성 통증, 코케인 증후군(Cockayne Syndrome) II형, 코핀 로우리 증후군(Coffin Lowry Syndrome), 거대후두각, 혼수, 복합부위 통증 증후군, 선천성 양측안면신경마비, 선천성 근무력증, 선천성 근병증, 선천성 혈관 해면상 혈관기형(Congenital Vascular Cavernous Malformations), 피질기저핵 변성, 두개동맥염, 두개골유합증, 크리 뇌염(Cree encephalitis), 크로이츠펠트-야콥병, 누적 외상 장애, 쿠싱 증후군(Cushing's Syndrome), 거세포봉입체증, 사이토메갈로바이러스 감염, 댄싱 아이즈-댄싱 피트 증후군(Dancing Eyes-Dancing Feet Syndrome), 댄디-워커 증후군(Dandy-Walker Syndrome), 도슨병(Dawson Disease), 데 모르시에르 증후군(De Morsier's Syndrome), 데제린-클룸프케 마비(Dejerine-Klumpke Palsy), 치매, 치매 -다발경색, 치매 - 문의성, 치매 -피질하, 루이소체 치매, 치상 소뇌 운동실조(Dentate Cerebellar Ataxia), 치아적색 위축(Dentatorubral Atrophy), 피부근육염, 발달적 행동곤란, 데빅 증후군(Devic's Syndrome), 당뇨병성 신경병증, 광범위 경화증, 드라베 증후군(Dravet Syndrome), 자율신경기능이상, 난필증, 난독증, 연하곤란, 행동곤란, 마이오클로누스성소뇌근실조(Dyssynergia Cerebellaris Myoclonica), 진행성소뇌성공동운동장애, 근긴장이상, 조기 영아 간질 뇌병증, 빈안장 증후군(Empty Sella Syndrome), 뇌염, 기면성 뇌염, 뇌류, 뇌병증, 뇌병증(가족성 영아), 뇌삼차신경혈관종증, 간질, 간질성 편마비, 에르브 마비(Erb's Palsy), 에르브-뒤시엔느 및 데제린-클룸프케 마비(Erb-Duchenne and Dejerine-Klumpke Palsies), 본태성 떨림, 엑스트라폰틴 수초용해(Extrapontine Myelinolysis), 파브리병(Fabry Disease), 파르 증후군(Fahr's Syndrome), 실신발작, 가족성 자율신경기능이상, 가족성 혈관종, 가족성 특발성 기저핵 석회화, 가족성 주기성 마비, 가족성 경련성 마비, 파버병(Farber's Disease), 열성 경련, 섬유근육 형성이상, 피셔 증후군(Fisher Syndrome), 저긴장 영아증후군, 족하수, 프리드리히 실조증, 전두측두엽 치매, 고쉐병(Gaucher Disease), 전신성 강글리오시드증, 게르스트만 증후군(Gerstmann's Syndrome), 게르스트만-슈트라우슬러-샤인커병(Gerstmann-Straussler-Scheinker Disease), 거대측삭 신경병증, 거대세포 동맥염, 거대세포 내포 질환, 공세포 백색질형성장애, 설인신경통, 글리코겐 축적병, 길랑-바레 증후군(Guillain-Barre Syndrome), 할러포르덴-스파츠병(Hallervorden-Spatz Disease), 두부 손상, 두통, 편두통 연속, 편측얼굴 연축, 편마비 교대, 유전성 신경병증, 유전성 경직하반신마비, 유전성 다발신경염성 실조(Heredopathia Atactica Polyneuritiformis), 대상포진, 귀대상포진, 히라야마 증후군, 홀메스-아디 증후군(Holmes-Adie syndrome), 전전뇌증, HTLV-1 관련 척수병증, 휴스 증후군(Hughes Syndrome), 헌팅턴병, 수두무뇌증, 수두증, 수두증 - 정상압, 물척수증, 고코르티솔증, 수면과다, 근육긴장항진, 근긴장저하, 저산소증, 면역-매개 뇌척수염, 봉입체 근염, 색소실조증, 영아 근긴장저하, 영아 신경측삭퇴행위축, 영아 피탄산 축적병, 영아 레프섬병, 영아 연축, 염증성 근육병증, 대후두공뇌탈출기형, 장성지방이영양증, 두개내 낭종, 두개내 고혈압, 이삭 증후군(Isaacs' Syndrome), 주버트 증후군(Joubert Syndrome), 컨스-세이어 증후군(Kearns-Sayre Syndrome), 케네디병(Kennedy's Disease), 킨즈본 증후군(Kinsbourne syndrome), 클라인-레빈 증후군(Kleine-Levin Syndrome), 클리펠-파일 증후군(Klippel-Feil Syndrome), 클리펠-트레노네이 증후군(Klippel-Trenaunay Syndrome; KTS), 클뤼바-뷰시 증후군(Kluver-Bucy Syndrome), 코르사코프 기억상실 증후군(Korsakoff's Amnesic Syndrome), 크라베병(Krabbe Disease), 쿠겔베르그-웰란더병(Kugelberg-Welander Disease), 쿠루(Kuru), 람베르트-이튼 근무력 증후군(Lambert-Eaton Myasthenic Syndrome), 랜도-크레프너 증후군(Landau-Kleffner Syndrome), 외측 대퇴 피신경 포착, 연수 외측 증후군, 학습 장애, 라이병(Leigh's Disease), 레녹스-가스토 증후군(Lennox-Gastaut Syndrome), 레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan Syndrome), 백색질형성장애, 레바인-크릿츨리 증후군(Levine-Critchley Syndrome), 루이소체 치매, 지질축적병, 유지방성 단백증, 뇌회결손, 락트인 증후군(Locked-In Syndrome), 루게릭병, 루푸스 - 신경학적 후유증, 라임병 - 신경학적 합병증, 마카도-조셉병(Machado-Joseph Disease), 큰뇌증, 대뇌증, 멜케르손-로젠탈 증후군(Melkersson-Rosenthal Syndrome), 뇌수막염, 뇌수막염 및 뇌염, 멘케스병(Menkes Disease), 대퇴감각이상증, 이염색 백색질장애, 소두증, 편두통, 밀러 피셔 증후군(Miller Fisher Syndrome), 미니 뇌졸중, 미토콘드리아 근병증, 뫼비우스 증후군, 단일사지 근위축증, 운동 뉴런 질환, 모야모야병, 점액지질증, 뮤코다당증, 다발경색 치매, 다초점 운동 신경병증, 다발성 경화증, 다계통 위축, 기립성 저혈압을 동반한 다계통 위축, 근이영양증, 근무력증 - 선천성, 중증근무력증, 수초탈락성 광범위 경화증(Myelinoclastic Diffuse Sclerosis), 영아의 간대성 근경련성뇌증, 근육간대경련, 근병증, 근병증- 선천성, 근병증 -갑상샘독성, 근긴장증, 선천성 근긴장증, 기면증, 신경가시적혈구증가증(Neuroacanthocytosis), 뇌 철분 축적을 동반한 신경변성, 신경섬유종증, 신경이완제 악성 증후군, AIDS의 신경학적 합병증, 라임병의 신경학적 합병증, 사이토메갈로바이러스 감염의 신경학적 결과, 폼페병의 신경 증상(Neurological Manifestations of Pompe Disease), 루푸스의 신경학적 후유증(Neurological Sequelae Of Lupus), 시신경척수염, 신경근긴장증, 뉴런 세로이드 리포푸스신증, 뉴런 이동 장애(Neuronal Migration Disorder), 신경병증- 유전성, 신경사르코이드증, 신경매독, 신경독성, 모반 해면(Nevus Cavernosus), 니만피크병(Niemann-Pick Disease), 오설리번-맥러드 증후군(O'Sullivan-McLeod Syndrome), 후두 신경통, 오타하라 증후군(Ohtahara Syndrome), 올리브다리뇌소뇌 위축(Olivopontocerebellar Atrophy), 안간대 간대성 근경련증(Opsoclonus Myoclonus), 기립성 저혈압, 과사용 증후군, 통증 -만성, 판토테네이트 키나아제-관련 신경변성, 방종양성 증후군, 감각이상, 파킨슨병, 발작성 무도무정위운동, 발작성 편두통, 패리-롬버그(Parry-Romberg), 펠리제우스-메르츠바하병(Pelizaeus-Merzbacher Disease), 페나 쇼케이어 II 증후군(Pena Shokeir II Syndrome), 신경주위 낭종, 주기성 마비, 말초 신경병증, 뇌실주위 백질연화증, 지속 식물 상태, 전반적 발달 장애, 피탄산 축적병, 피크병, 핀체드 신경(Pinched Nerve), 이상근 증후군, 뇌하수체 종양, 다발성근염, 폼페병(Pompe Disease), 공뇌증, 폴리오후 증후군(Post-Polio Syndrome), 대상포진후 신경통, 감염후 뇌척수염, 체위성 저혈압, 체위성 기립 빈맥 증후군, 체위성 빈맥 증후군, 원발성 덴타툼 위축(Primary Dentatum Atrophy), 원발성 측삭경화증, 원발 진행성 실어증, 프라이온병(Prion disease), 진행성 편측얼굴 위축, 진행성 보행 운동 실조, 진행성 다초점 백색질뇌병증, 진행성 경화 회백질위축증, 진행성 핵상 마비, 안면실인증, 슈도-토치 증후군(Pseudo-Torch syndrome), 가성톡소플라스마증 증후군(Pseudotoxoplasmosis syndrome), 가뇌종양, 심인성 운동(Psychogenic Movement), 램지 헌트 증후군(Ramsay Hunt Syndrome) I, 램지 헌트 증후군 II, 라스무센 뇌염(Rasmussen's 뇌염), 반사 교감신경 이상증 증후군(Reflex Sympathetic Dystrophy Syndrome), 레프섬병(Refsum Disease), 레프섬병 - 영아, 반복성 운동 장애, 반복성 긴장 손상(Repetitive Stress Injuries), 하지불안 증후군, 레트로바이러스-관련 척수병증, 레트 증후군(Rett Syndrome), 라이 증후군(Reye's Syndrome), 류마티스 뇌염, 릴리-데이 증후군(Riley-Day Syndrome), 천골 신경근 낭종, 세인트 비투스 댄스(Saint Vitus Dance), 침샘 질환, 샌드호프병(Sandhoff Disease), 쉴더병(Schilder's Disease), 분열뇌증, 세이텔버거병(Seitelberger Disease), 발작 장애, 문의성 치매, 중격-시신경 형성이상, 영아기 중증 근간대성 간질(SMEI), 흔들린 아이 증후군, 대상포진, 샤이-드레거 증후군(Shy-Drager Syndrome), 쇼그렌 증후군, 수면무호흡증, 수면병, 소토스 증후군(Sotos Syndrome), 경직, 이분척추, 척수 경색, 척수 손상, 척수 종양, 척추 근위축증, 척수소뇌 위축, 척수소뇌 변성, 스틸-리처드슨-올스제브스키 증후군(Steele-Richardson-Olszewski Syndrome), 전신근간직증후군(Stiff-Person Syndrome), 줄무늬체흑색질 변성, 뇌졸중, 스터지-웨버 증후군(Sturge-Weber Syndrome), 아급성 경화성 범뇌염, 피질하 동맥경화 뇌병증, 짧게 지속되는, 편측성, 신경통형 (SUNCT) 두통, 연하곤란, 시데남 무도병, 실신, 매독성 척수 경화증, 척수물구멍증, 척수공동증, 전신 홍반 루푸스, 척수매독, 지연성 운동장애, 탈로브 낭종(Tarlov Cysts), 테이삭스병(Tay-Sachs Disease), 측두동맥염, 계류 척수 증후군, 톰센 근긴장증(Thomsen's Myotonia), 흉곽출구증후군, 갑상샘중독성근질환, 동통성 틱, 토드 마비(Todd's Paralysis), 투렛 증후군(Tourette Syndrome), 일과성 허혈성 발작, 전염성 해면모양뇌병, 횡단척수염, 외상성 뇌손상, 떨림, 삼차 신경통, 열대성경성대마비, 트로이어 증후군(Troyer Syndrome), 결절성 경화증, 혈관 발기 종양(Vascular Erectile Tumor), 중추 및 말초 신경계의 혈관염 증후군, 폰 에코노모병(Von Economo's Disease), 폰 힙펠-린다우병(Von Hippel-Lindau Disease; VHL), 폰 레클링하우젠병(Von Recklinghausen's Disease), 발렌베르크 증후군(Wallenberg's Syndrome), 베르드니히-호프만병(Werdnig-Hoffman Disease), 베르니케-코르사코프 증후군(Wernicke-Korsakoff Syndrome), 웨스트 증후군(West Syndrome), 편타(Whiplash), 휘플병(Whipple's Disease), 윌리엄스 증후군(Williams Syndrome), 윌슨병(Wilson Disease), 월만병(Wolman's Disease), X-연관 척추 및 연수 근위축증.

본 발명은 추가로 본 발명의 AAV 입자 또는 약제학적 조성물 중 어느 것의 약제학적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 사람 대상체를 포함하는 포유동물 대상체에서 신경 장애를 치료하거나 개선하는 방법을 제공한다. 일 구현예에서, AAV 입자는 혈액 뇌 장벽 관통 입자이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법에 따라서 치료되는 신경 장애는 타우병증, 알츠하이머병(AD), 근위축성 측삭경화증(ALS), 헌팅턴병(HD), 파킨슨병(PD) 및/또는 프리드리히 실조증(FA)을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체에서 적어도 하나의 신경 장애 증상이 완화되고/되거나 치료된다.

본 발명은 질환 진행을 늦추거나 중지시키거나 역전시키기 위해 치료학적 유효량의 본 발명의 AAV 입자를 사람 대상체를 포함하여, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 방법을 제공한다. 비제한적인 예로서, 질환 진행은 당업자에게 공지된 시험 또는 진단 도구(들)에 의해 측정될 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 질환 진행은 뇌, CSF 또는 대상체의 다른 조직의 병리학적 특징의 변화에 의해 측정될 수 있다.

타우병증

타우병증은 미세소관 관련 단백질 타우의 기능장애 및/또는 응집을 특징으로 하는 신경퇴행성 질환 그룹이다. 타우는 일반적으로 인산화 정도에 기초하여 미세소관과 관련이 있는 것으로 알려진 매우 가용성인 단백질이다. 타우는 이의 독특한 구조를 감안할 때 특히 뉴런 세포에서 세포내 트래피킹 과정의 중요한 구성요소로 간주된다. 타우의 과인산화는 미세소관에 대한 이의 결합 및 미세소관 어셈블리 활성을 저하시킨다. 또한, 타우의 과인산화는 이것이 미스폴딩(misfolding)되고 응집되기 쉽게 한다. 타우병증에서, 타우는 과인산화되고, 미스폴딩되고, 쌍나선 필라멘트(PHF), 꼬인 리본(twisted ribbon) 또는 직선 필라멘트의 NFT로서 응집된다. 이러한 NFT는 주로 임박한 뉴런 세포 사멸을 나타내는 것으로 간주되며, 광범위한 뉴런 세포 손실에 기여하여 다양한 행동 및 인지 결손을 초래하는 것으로 생각된다.

최초 유전적으로 정의된 타우병증은, 타우 유전자에서의 돌연변이가 염색체 17에 연결된 전두엽 치매 및 파킨슨증(FTDP-17)으로 알려진 상염색체 우성 유전성 타우병증을 유발하는 것으로 밝혀졌을 때 설명되었다. 이것은 타우의 변화가 뇌의 신경퇴행성 변화를 초래할 수 있다는 최초의 인과적 증거였다. 이들 분자들은 아밀로이드형성성이 더 높은 것으로 간주되는데, 이는 과인산화될 가능성이 높고 NFT로 응집될 가능성이 높다는 것을 의미한다(Hutton, M. et al., 1998, Nature 393(6686):702-5).

다른 공지된 타우병증은 알츠하이머병(AD), 전두측두엽 치매(FTD), 전두측두엽 변성(Frontotemporal lobar degeneration; FTLD), 만성 외상성 뇌병증(CTE), 진행성 핵상 마비(PSP), 다운 증후군, 피크병, 피질기저핵 변성(CBD), 근위축성 측삭경화증(ALS), 프라이온병, 크로이츠펠트-야콥병(CJD), 다계통 위축, 매듭-단독 치매(Tangle-only dementia), 및 진행성 피질하 신경아교증을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

타우병증은 AD와 같이, 타우 단백질 오작동 및 응집과 주로 관련되어 있지만, ApoE는 또한 이 질환 그룹의 발병기전에서 역할을 하는 것으로 간주된다. 콜레스테롤 트래피킹 분자인 ApoE는 처음에 NFT가 또한 ApoE에 대해 면역반응성인 것으로 밝혀졌을 때 타우병증에서 역할을 하는 것으로 의심되었다. 타우병증에서 타우와 ApoE 간의 상관관계를 조사한 결과 모순된 결과를 나타냈지만 ApoE4와 증가된 NFT 부하 간의 연관성을 시사한다. 그러나, 인지 감소와의 상관관계는 밝혀지지 않았다. 이 분야의 연구는 여전히 활발히 진행되고 있다.

타우병증에 대한 치료는 아직 확인되지 않았지만, 일부 증상 완화가 제공될 수 있다. 본 발명의 AAV 입자의 전달은 타우병증을 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 경우에, 본 발명의 방법은 타우병증 발병이 의심되는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 AAV 입자의 전달은 NFT 축적을 감소시킬 수 있다. 또한, NFT 부하의 이러한 감소는 인지, 언어 또는 행동 분야의 개선과 관련되거나 관련되지 않을 수 있다.

일 구현예에서, ApoE2, ApoE3 또는 ApoE4 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 AAV 입자의 전달은 타우병증을 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, ApoE2, ApoE3 또는 ApoE4 유전자 및/또는 단백질 발현의 사일런싱을 위한 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 AAV 입자의 전달은 타우병증을 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 타우 유전자 및/또는 단백질 발현의 사일런싱을 위한 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 AAV 입자의 전달은 타우병증을 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 조절 폴리뉴클레오타이드는 siRNA 듀플렉스 또는 siRNA 듀플렉스를 인코딩하는 핵산 또는 인코딩된 dsRNA이다.

일 구현예에서, 항-타우 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 본 발명의 AAV 입자의 전달은 타우병증을 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 조성물은 타우병증에 대한 하나 이상의 공지된 또는 탐색적 치료와 함께 사용된다. 상기 치료의 비제한적인 예는 타우 응집 억제제, 예를 들어 메틸렌 블루, 페노티아진, 안트라퀴논, n-페닐아민 또는 로다민, 미세소관 안정화제 예를 들어 NAP, 탁솔 또는 파클리탁셀, 키나아제 또는 포스파타아제 억제제 예를 들어 GSK3β(리튬) 또는 PP2A를 표적화하는 것들 및/또는 타우 포스포-에피토프에 의한 면역화 또는 항-타우 항체로의 처리를 포함한다.

알츠하이머병

알츠하이머병(AD)은 쇠약성 신경퇴행성 질환이고, 오늘날 노인 치매의 주요 원인이며, 현재 미국에서는 추산 5백만 명이 앓고 있으며, 전세계적으로는 3천5백만 명이 넘는 사람들이 앓고 있다. AD는 대체로 극도의 건망증 질환으로, 정상적인 생활을 하는 능력이 엄청나게 손상된다. 상기 질환의 임상 양상으로는 점진적인 기억력 저하, 집행 기능(의사 결정) 및 언어가 포함되다. AD가 있는 개체는 종종 악액질, 폐렴 또는 패혈증과 같은 이차 질병으로 사망한다.

AD는 가장 잘-알려진 타우병증일 수 있지만, 종종 아밀로이드계 장애로 특징지워진다. AD 뇌는 2가지 형태의 병리학적 응집체, β-아밀로이드(Aβ)로 구성된 세포외 플라크 및 과인산화된 미세소관 관련 단백질 타우로 구성된 세포내 신경섬유 매듭(NFT)의 존재를 특징으로 한다. 초기의 유전적 발견에 기초하여, β-아밀로이드 변형은 질환을 개시시키는 것으로 생각되었고, 타우의 변화는 다운스트림으로 간주되었다. 이러한 이유로, 대부분의 임상 시험은 Aβ-중심이었다.

질환의 전통적인 특징(Aβ 및 타우)에 추가하여, 아포지질단백질 E는 후기 발병 AD(Aβ 프로세싱에서의 변형과 유전적으로 관련되지 않고 AD 집단의 99%를 차지하는 AD의 형태)의 발병기전에서 중요한 위험 인자인 것으로 입증되었다. 다른 아포지질단백질과 마찬가지로 ApoE는 특정 지질단백질 입자의 구조에 기여하고, 특정 세포 표면 수용체로 지질단백질 트래피킹(trafficking)을 유도하며, 중요한 콜레스테롤 수송체이다. ApoE는 다양한 세포 유형에서 발현되며, 간 및 뇌에서 가장 높은 발현 수준을 나타낸다. 뇌에서는, ApoE가 주로 성상세포 및 미세아교세포에서 발현되며, 시냅스 연결 및 시냅스형성(synaptogenesis)의 유지에 기여하는 것으로 생각된다. ApoE는 혈액 뇌 장벽, 선천성 면역계, 시냅스 기능 및 Aβ 축적에서의 역할을 통해 AD 발병에 기여하는 것으로 생각된다.

ApoE의 가장 일반적인 3가지 변이체는 ApoE2, ApoE3 및 ApoE4이며, ApoE2 및 ApoE4는 AD의 발생과 관련하여 차별적 위험을 수반한다. ApoE2는 AD의 위험을 감소시키고 발병 연령을 지연시키는 보호적 대립유전자인 것으로 간주되는 반면, ApoE4는 AD의 발생 위험을 상당히 증가시키고 질환 발병 연령을 낮추는 반대 효과를 갖는다. 또한, ApoE2는 축적된 Aβ의 부담 감소와 관련이 있는 반면, ApoE4는 Aβ 부하 증가와 관련이 있다.

AD의 초기 발병 형태(AD 사례의 5% 미만을 차지하는 65세 이전)는 아밀로이드 베타 전구체 단백질(APP), 프레세닐린 1(PS1 또는 PSEN1) 또는 프레세닐린 2( PS2 또는 PSEN2)의 가족성 돌연변이에 의해 야기될 수 있다. 일반적인 증상으로는 기억의 점진적인 감소, 집행 기능, 언어 및 기타 인지 영역이 있다. 이러한 증상은 종종 뇌의 아밀로이드 플라크 및/또는 신경섬유 매듭, 뉴런 소실, 시냅스 소실, 뇌 위축 및/또는 염증에 의해 발생된다.

AD에 대한 증상 치료는 수년 동안 이용 가능했지만, 질환의 진행을 변화시킬 수 있는 것은 아무도 없었다. 본 발명의 AAV 입자의 전달은 AD 및 다른 타우병증을 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 경우에, 본 발명의 방법은 AD 또는 다른 타우병증 발병이 의심되는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 AAV 입자의 전달은 대상체의 뇌 및 심혈관계 모두에서 Aβ 부담을 감소시키거나 NFT 축적을 감소시킬 수 있다. 또한, Aβ 또는 NFT 부하의 이러한 감소는 인지, 언어 또는 행동 분야의 개선과 관련되거나 관련되지 않을 수 있다.

일 구현예에서, ApoE2, ApoE3 또는 ApoE4 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 AAV 입자의 전달은 AD 및 다른 타우병증을 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, ApoE2, ApoE3 또는 ApoE4 유전자 및/또는 단백질의 사일런싱을 위한 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 AAV 입자의 전달은 AD 및 다른 타우병증을 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 타우 유전자 및/또는 단백질의 사일런싱을 위한 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 AAV 입자의 전달은 AD 및 다른 타우병증을 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 조절 폴리뉴클레오타이드는 siRNA 듀플렉스 또는 siRNA 듀플렉스를 인코딩하는 핵산 또는 인코딩된 dsRNA이다.

일 구현예에서, 항-타우 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 AAV 입자의 전달은 AD 및 다른 타우병증을 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 조성물은 AD 또는 타우병증에 대한 하나 이상의 공지된 또는 탐색적 치료와 함께 사용된다. 상기 치료의 비제한적인 예는 콜린에스테라아제 억제제(도네페질, 리바스티그민, 갈란타민), NMDA 수용체 길항제 예를 들어 메만틴, 항정신병약, 항우울제, 항경련제, 세크레타아제 억제제, 아밀로이드 응집 억제제, 구리 또는 아연 조절제, BACE 억제제, 타우 응집 억제제, 예를 들어 메틸렌 블루, 페노티아진, 안트라퀴논, n-페닐아민 또는 로다민, 미세소관 안정화제 예를 들어 NAP, 탁솔 또는 파클리탁셀, 키나아제 또는 포스파타아제 억제제 예를 들어 GSK3β(리튬) 또는 PP2A를 표적화하는 것들 및/또는 Aβ 펩타이드 또는 타우 포스포-에피토프에 의한 면역화 또는 항-타우 또는 항-아밀로이드 항체로의 처리를 포함한다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 조성물은 포유동물 모델, 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 타우병증 및/또는 알츠하이머병의 마우스 모델을 사용하여 평가된다. 타우병증 및/또는 알츠하이머병의 표현형을 모방한 수많은 마우스 모델이 이용될 수 있다. 그러나, 기존의 마우스 모델은 사람 타우병증 및/또는 알츠하이머병의 모든 특징을 나타내지 않는다. 따라서, 일부 경우에, 하나 초과의 마우스 모델, 또는 하나 이상의 이들 모델의 마우스 모델 크로스가 본 발명의 조성물의 활성을 평가하는데 사용될 수 있다. 타우병증 및/또는 알츠하이머병의 예시적인 마우스 모델은 3XTg-AD, 5XFAD, J20, Tg-SwDI, Tg-SwDI/Nos2, Tg2576, R1.40, APPPS1, APP23, PDAPP, APP NL-G-F, TgCRND8, TASD-41, BRI-Aβ42A, PSAPP (Tg2576xPS1), APPswe/PSEN1dE9, 2xKI, TAPP (Tg2576xJNPL3), hTau, PS1M146V, rTg4510, rTg4510xCamk2a-tTA, PS19, rTg4510xNop-tTA, GFAP-apoE4, Apoe^{tm3 ( APOE *4)}, APP.PS1/TRE4 및 ApoE 녹아웃 또는 녹인(knock-in) 마우스 라인을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다(참조: 문헌 [Onos et al., Brain Res Bull. 2016;122:1-11]; [Hall and Roberson., Brain Res Bull. 2012; 88(1): 3-12]; [Elder et al., Mt Sinai J Med. 2010; 77(1): 69-81], 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

타우 트랜스제닉 마우스 모델은 야생형 또는 돌연변이 사람 타우 단백질을 과발현시킨다. 상이한 타우 돌연변이를 함유하는 20개 초과의 라인이 생성되었다(참조: 문헌 [Denk and Wade-Martins, Neurobiol Aging. 2009; 30(1): 1-13]의 표 2, 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 이는 G272V, P301L, P301S, N297K, V337M, 및 R406W를 포함하여, 타우병증 및/또는 알츠하이머병 환자에게 존재하는 돌연변이이다. P301S 트랜스제닉 마우스는 P301S 돌연변이를 함유하는 사람 타우 단백질을 발현시킨다. 앨런(Allen) 등에 의해 생성된 하나의 P301S 모델(Thy1.2 프로모터의 제어하에 있는 4R/0N 타우)은 과인산화된 타우의 필라멘트 축적, 신경원 변성, 및 신경염증을 포함하는 사람 타우병증과 유사한 특징을 나타낸다. 또한, 이들 마우스는 5 내지 6개월령까지 뚜렷한 운동 표현형을 발달시킨다(문헌 [Allen et al., J Neurosci. 2002;22(21):9340-51]; [Bellucci et al., Am J Pathol. 2004;165(5):1643-52], 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 요시야마(Yoshiyama) 등에 의해 생성된 또 다른 P301S 마우스 라인(마우스 프리온 프로모터의 제어하에 있는 4R/1N 타우)은 3 내지 6개월령까지 해마 시냅스 손실, 시냅스 기능 장애 및 수반되는 미세아교세포 활성화를 나타낸다. 상기 동물은 또한 9 내지 12월령까지 병리학적 과인산화된 타우 축적, 뉴런 소실, 뿐만 아니라 해마 및 내피 피질 위축을 나타냈다(Yoshiyama et al., Neuron. 2007;53(3):337-51, 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

APOE 녹인 마우스는 APOE의 사람 이소형을 발현시킨다. 일부 경우에, 사람 APOE 유전자는 내인성 마우스 APOE 대립유전자를 대체하도록 조작되었다(표적화된 대체). ApoE2, ApoE3 또는 ApoE4의 이러한 표적화된 대체(TR) 모델은 노부야 마에다(Nobuya Maeda)의 실험실에서 개발되었고(문헌 [Sullivan et al., J Clin Invest. 1998;102(1):130-5]; [Sullivan et al., J Biol Chem. 1997;272(29):17972-80]; [Knouff et al., J Clin Invest. 1999;103(11):1579-86], 이들의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨) 많은 연구로 특성화되었다. ApoE TR 마우스는 공간 기억 성능과 회피 행동이 다르다. ApoE4-TR 마우스는 ApoE3-TR 마우스와 비교하여 인지 및 시냅스 가소성 손상을 나타낸다. 또한, ApoE4-TR 마우스는 해마 및 편도체에서 해부학적 및 기능적 이상을 나타낸다(문헌 [Grootendorst, Behav Brain Res. 2005;159(1):1-14]; [Bour et al., Behav Brain Res. 2008;193(2):174-82], 이들의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

일 구현예에서, AAV-ApoE2 입자는 문헌(참조: Zhao et al 2016 Neurobiol Aging 159-172, 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같이 PDAPP 또는 APP.PS1/TRE4 마우스에 투여될 수 있다. AAV-ApoE2(AAV9-CAG-APOE2 또는 AAVrh.10-CAG-APOE2)의 대뇌내 또는 시상내 투여는 면역조직화학, ELISA 또는 웨스턴 블롯에 의해 결정된 바와 같이, 뇌 Aβ(올리고머성, 가용성 및 불용성), 아밀로이드 침착 및 아밀로이드 병리의 현저한 감소를 나타냈다. 더 구체적으로, AAV 제제(2μL, 1.0 x 10¹⁰ vg)를 정위 수술에 의해 0.2μL/분의 속도로 성체 마우스의 해마 또는 시상으로 양측으로 주입하고, 사후 분석을 위해 조직 수집 전 8주 동안 발현시켰다. 저용량의 AAV-ApoE2, 또는 병리의 후기 단계에서의 전달은 덜 효과적인 것으로 입증되었다.

전두측두엽 치매( FTD )

전두측두엽 변성 또는 피크병으로도 알려진 전두측두엽 치매(FTD)는 뇌의 진행성 신경 세포 손실에 의해 야기되는 장애 그룹을 나타낸다. 이러한 신경 세포 손실은 뇌의 전두엽 및/또는 측두엽에서 기능 상실을 유발할 수 있다. 미국에서 FTD가 있는 사람은 약 45,000명 정도이며 대다수는 45세에서 65세 사이이다.

행동 변형 전두측두엽 치매(bvFTD), 원발 진행성 실어증(PPA) 및 운동 기능 장애인 FTD의 3가지 아형이 있다. bvFTD가 있는 대상체는 성격, 대인 관계 및 행동에서 주요 변화가 있는 경향이 있으며, 신경 손실은 행동, 공감, 예측 및 판단을 통제하는 영역에서 가장 두드러진다. PPA는 언어 능력, 말하기, 쓰기 및 이해에 영향을 준다. bvFTD 및 PPA는 둘 다 65세 이상에서 AD보다 덜 발생하지만, 45세 내지 65세 사이에서 bvFTD 및 PPA는 거의 AD만큼 발생한다.

타우의 돌연변이는 FTD가 있는 대상체와 유전적으로 관련된다.

근위축성 측삭경화증 ( ALS )

루게릭병 또는 고전적 운동 뉴런 질환으로도 알려진 근위축성 측삭경화증(ALS)은 빠르게 진행되고 치명적인 신경계 질환이다. ALS는 상부 및 하부 운동 뉴런의 세포 변성 및 사망과 관련되어, 근육 운동의 장애, 약화, 쇠약 및 자발적인 근육 운동에 대한 제어 상실을 초래한다. 초기 증상으로는 손, 다리 및 연하 근육의 근육 약화가 포함되며, 이는 결국 횡격막 장애로 인한 호흡 불능으로 진행된다. 질병 통제 예방 센터(CDC)에 따르면, 미국에서는 추산 약 12,000명 내지 15,000명이 ALS로 고통받는다. 사례의 약5% 내지 10%는 가족성입이다.

다른 비감염성 신경퇴행성 질환으로서의 ALS는 타우, 아밀로이드-베타(A 베타), 알파-시누클레인, HTT(헌팅틴) 또는 SOD1(슈퍼옥사이드 디스뮤타아제 1 단백질), 및 미엘린 관련 억제제 및 이의 수용체를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 미스폴딩된 단백질의 존재를 특징으로 하였다(참조: 예를 들어, 문헌 [Krishnamurthy and Sigurdsson, 2011, N Biotechnol. 28(5):511-7] 및 [Musaro, 2013, FEBS J.;280(17):4315-22] 및 그 안의 참조문헌). 가족성 ALS는 TAR DNA-결합 단백질 43(TDP-43) 및 RNA-결합 단백질 FUS/TLS의 돌연변이와 관련이 있었다. 일부 단백질은, 이에 제한되지는 않지만, 성장 인자, 예를 들어 인슐린-유사 성장 인자 1(IGF-1), 아교 세포주-유래 성장 인자, 뇌-유래 성장 인자, 혈관 내피 성장 인자 및 섬모 향신경성 인자, 또는 근육 성장을 촉진하는 성장 인자, 예를 들어 마이오스타틴(myostatin)과 같이, ALS의 진행을 늦추는 것으로 확인되었다.

현재로서는 ALS를 예방하거나 치료할 수 없다. FDA 승인 약물 닐루졸(niluzole)은 기대 수명을 연장시키는 것으로 승인되었지만, 증상에는 영향을 미치지 않는다. 추가로, ALS와 관련된 통증 및 공격을 견디기 위한 약물 및 의료 장치를 사용할 수 있다. 근본적인 병리생리학에 영향을 미치는 치료법이 여전히 필요하다.

일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 ALS를 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 경우에, 본 발명의 방법은 ALS 발병이 의심되는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.

본 발명에 기재된 AAV 입자 및 AAV 입자를 사용하는 방법은 ALS를 예방, 관리 및/또는 치료하는데 사용될 수 있다. 비제한적인 예로서, ALS의 치료, 예방 또는 관리를 위해 사용될 수 있는 본 발명의 AAV 입자는 SOD1, HTT 및/또는 타우를 표적화하는 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.

헌팅턴병

헌팅턴병(HD)은 뇌의 운동 조절 영역, 및 다른 영역에서 뉴런의 변성을 유발하는 드문 유전적 장애이다. 상기 질환의 전형적 증상으로는 행동, 판단 및 인지 변화가 수반된, 통제되지 않은 움직임(무도증), 비정상적인 자세, 협응력 장애, 불분명 발음, 및 섭식 및 연하 곤란이 포함된다. HD는 헌팅틴(HTT) 단백질과 관련된 유전자의 돌연변이로 인해 발생한다. 상기 돌연변이로 인해 DNA의 (CAG) 블록이 비정상적으로 반복된다. 미국에서는 대략 3만 명이 HD로 고통받는다.

HD는 폴리글루타민 트랙의 비정상적인 확장, 예를 들어 CAG 반복부에 의해 인코딩된 글루타민 잔기의 길이 확장이 수반된 헌팅틴(HTT) 단백질의 돌연변이를 특징으로 한다. 상기 질환의 발생에 대한 확장 임계값은 대략 35개 내지 40개 잔기까지로 간주된다. HD는 또한 HTT의 N-말단 영역에 의해 형성된 선조체 뉴런의 베타 시트 풍부 응집체와 관련이 있다. 확장 및 응집은 HD가 진행됨에 따라 뉴런의 점진적인 손실을 유발한다. 추가로, HD에서의 세포 사멸은 아폽토시스를 유도하는 것으로 알려진 사멸 수용체 6(DR6)과 관련이 있다.

현재로서는 상기 질환의 진행을 막기 위한 요법이나 치료법이 없다. 이용가능한 약물 요법은 증상 관리를 목표로 한다. 예를 들어, FDA는 테트라베네진(tetrabenezine)이 무도증의 예방을 위해 처방되도록 승인하였다. 추가로, 예를 들어 항정신병 약물은 망상, 환각 및 격렬한 폭발을 통제하는 데 도움이 될 수 있다. 근본적인 병리생리학에 영향을 미치는 치료법이 여전히 필요하다.

일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 HD를 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 경우에, 본 발명의 방법은 HD 발병이 의심되는 환자를 치료하는데 사용될 수 있다.

본 발명에 기재된 AAV 입자 및 AAV 입자를 사용하는 방법은 HD를 예방, 관리 및/또는 치료하는데 사용될 수 있다. 비제한적인 예로서, HD를 치료, 예방 및/또는 관리하는데 사용된 본 발명의 AAV 입자는 HTT를 표적화하는 조절 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있으며, 여기서 상기 조절 폴리뉴클레오타이드는 siRNA 듀플렉스 또는 siRNA 듀플렉스를 인코딩하는 핵산 또는 인코딩된 dsRNA이다.

파킨슨병

파킨슨병(PD)은 특히 뇌의 흑질에 영향을 미치는 신경계의 진행성 장애이다. PD는 도파민 생산 뇌 세포의 손실 결과로 발생한다. 전형적인 PD의 조기 증상은 사지, 예를 들어, 손, 팔, 다리, 발 및 얼굴의 흔들림 또는 떨림을 포함한다. 추가 특징적인 증상으로는 사지 및 몸통의 경직, 느린 움직임 또는 이동 불가능, 균형 및 협응력 장애, 인지 변화, 및 정신의학적 상태 예를 들어 우울증과 환시가 있다. PD는 가족성 및 특발성 형태 둘 다를 가지며, 유전적 및 환경적 원인과 관련이 있다고 제안된다. PD는 전세계적으로 4백만 명이 넘는 사람들에게 영향을 미친다. 미국에서는 매년 대략 60,000건이 확인된다. 일반적으로 PD는 50세 이상에 시작된다. 상기 병태의 조기-발병 형태는 50세 미만에서 시작되고, 청소년-발병 PD는 20세 이전에 시작된다.

PD와 관련된 도파민 생산 뇌 세포의 사망은 알파-시누클레인 단백질의 응집, 침착 및 기능 장애와 관련되어 있다(참조: 예를 들어, 문헌 [Marques and Outeiro, 2012, Cell Death Dis . 3:e350, Jenner, 1989, J Neurol Neurosurg Psychiatry. Special Supplement, 22-28] 및 그 안의 참조문헌). 연구는 알파-시누클레인이 시냅스전 신호전달, 막 트래피킹 및 도파민 방출 및 수송의 조절에 역할을 한다는 것을 시사하였다. 예를 들어 올리고머의 형태의 알파-시누클레인 응집체는 뉴런 기능장애 및 사망을 담당하는 종인 것으로 시사되었다. 알파-시누클레인 유전자(SNCA)의 돌연변이는 PD의 가족성 형태에서 확인되었지만, 또한 환경적 요인, 예를 들어 신경독은 알파-시누클레인 응집에 영향을 미친다. PD에서 뇌 세포 사멸의 다른 제안된 원인은 프로테오솜 및 리소좀 시스템의 기능장애, 감소된 미토콘드리아 활성이다.

PD는 "시누클레이노패시(synucleinopathy)"라고도 언급되는 알파-시누클레인 응집과 관련된 다른 질환과 관련된다. 상기 질환은 파킨슨병 치매(PDD), 다계통 위축(MSA), 루이소체 치매, 청소년-발병 전신 신경측삭퇴행위축(할러포르덴-스파츠병), 순수자율신경계부전(pure autonomic failure; PAF), 뇌 철분 축적 1형(NBIA-1)을 동반한 신경변성 및 결합된 알츠하이머병과 파킨슨병을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

현재로서는 PD에 대한 치료 또는 예방 요법이 확인되지 않았다. 사용될 수 있는 여러 가지 약물 요법은 증상 완화를 제공한다. 대증 의학적 치료의 비제한적인 예는 경직과 느린 움직임을 감소시키는 카르비도파 및 레보도파 조합, 및 떨림과 경직을 감소시키기 위한 항콜린제를 포함한다. 다른 선택적 요법으로는 예를 들어 심부 뇌 자극 및 수술이 포함된다. 근본적인 병리생리학에 영향을 미치는 치료법이 여전히 필요하다.

일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 PD 및 다른 시누클레이노패시를 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 경우에, 본 발명의 방법은 PD 및 다른 시누클레이노패시 발병이 의심되는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.

프리드리히 실조증

프리드리히 실조증(FA)은 상염색체 열성 유전병으로, 신경계에 점진적인 손상을 유발한다(참조: Parkinson et al., Journal of Neurochemistry, 2013, 126 (Suppl. 1), 103-117, 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 발병은 대개 사춘기에 발생하며, 항상 25세까지이다(참조: Campuzano, et al., Science, 271.5254 (Mar 8, 1996): 1423, 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). FA는 팔과 다리의 근육 운동을 지시하는데(소뇌와의 연결을 통해) 필수적인 감각 뉴런에서 미토콘드리아 단백질 프라탁신(FXN)의 발현 감소로 인해 척수에서 신경 조직의 변성으로 인한 것이다(참조: Koeppen, Arnulf; J Neurol Sci ., 2011, April 15; 303(1-2): 1-12, 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 초기 증상으로는 협응력 불량 예를 들어 보행 장애, 균형 불량, 다리 약화, 보행 감소, 협응력 장애, 마비성 말장애(dysarthria), 안구진탕, 감각 장애, 척추만곡증 및 발 기형(foot deformity)이 포함된다(참조: Parkinson et al., Journal of Neurochemistry, 2013, 126 (Suppl. 1), 103-117). 상기 질환은 일반적으로 이동에 휠체어가 필요할 때까지 진행된다. 백인 인구 중 FA 발생률은 20,000명 중 약 1명에서 50,000명 중 약 1명 사이이며, 유럽 인구에서는 보균자 빈도가 120명 중 약 1명으로 추론된다(참조: Nageshwaran and Festenstein, Frontiers in Neurology, Vol. 6, Art. 262 (2015); Campuzano, et al., Science, 271.5254 (Mar 8, 1996): 1423, 이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨).

FXN 유전자에서 인트론 GAA 삼중항 반복의 확장은 FA를 초래하는 프라탁신의 발현 감소의 유전적 원인이다(참조: Parkinson et al., Journal of Neurochemistry, 2013, 126 (Suppl. 1), 103-117). 시간이 지남에 따라 결핍은 상기 언급된 증상뿐만 아니라 세포 대사에 대한 영향으로 인한 빈번한 피로를 유발한다.

현재, FA에 대한 효과적인 치료법이 존재하지 않으며, 환자는 가장 흔히 증상 관리에 대해 단순히 모니터링된다. 결과적으로, FXN 관련 장애의 치료를 위한 약제학적 조성물 및 방법을 개발하고 FA에 걸린 환자에서 단백질의 결핍을 개선시키기 위한 당업계에서 오래도록 느꼈던 필요성이 남아있다.

본 발명의 AAV 입자의 전달은 프리드리히 실조증을 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 경우에, 본 발명의 방법은 프리드리히 실조증 발병이 의심되는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 AAV 입자의 전달은 프라탁신 단백질을 증가시킬 수 있다. 또한, 이러한 프라탁신 단백질 증가는 이동성 개선과 관련될 수 있거나 관련되지 않을 수 있다.

일 구현예에서, 프라탁신 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 AAV 입자의 전달은 프리드리히 실조증을 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 프라탁신 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 AAV 입자는 소뇌, 뇌간 핵 및/또는 척수의 클라크주(Clarke's column)의 치상핵으로 전달될 수 있다. 이들 영역 중 하나 이상으로의 전달은 대상체에서 프리드리히 실조증을 치료하고/하거나 프리드리히 실조증의 영향을 감소시킬 수 있다.

일 구현예에서, 프라탁신 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 AAV 입자는 대상체에서 프리드리히 실조증의 치료를 위해 중추 신경계, 말초 신경계 및/또는 말초 기관으로 정맥내 투여에 의해 전달될 수 있다.

심혈관 질환

심장병 또는 심장 및 혈관 질환으로도 불리는 심혈관 질환은 심장 및/또는 혈관의 많은 질환 또는 장애를 기술하는 일반적인 용어이다. 심혈관 질환 내의 많은 질환 또는 장애는 동맥벽에 플라크가 축적되는 죽상동맥경화증과 관련이 있다. 이러한 축적은 동맥을 좁아지게 하여 혈액이 흐르기 어렵게 한다. 심혈관 질환의 비제한적인 예는 심부전(심장이 혈액을 펌핑하지 않을 뿐만 아니라 그래야 하는 경우), 부정맥(심장의 비정상적인 리듬, 예를 들어, 서맥(분당 60회 미만의 심박수) 또는 빈맥(분당 100회 초과의 심박수)), 심장 판막 문제(예를 들어, 협착(밸브가 그래야 하는 것처럼 혈액이 흐르도록 하기에 충분히 열리지 않음), 역류(밸브가 제대로 닫히지 않음), 및 탈출(밸브 리플릿이 튀어나오거나 상부 챔버에 뒤쪽으로 탈출함)), 뇌졸중(예를 들어, 뇌로 공급되는 혈관이 차단되는 경우 허혈성 뇌졸중), 및 심장마비(심장으로의 혈류가 차단되는 경우)를 포함한다.

본 발명의 AAV 입자는 심혈관 질환을 앓고 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.

심부전

심부전은 미국에서 사망률의 주요 원인이며, 매년 대략 580만 명의 환자가 발생하고 30만 명이 사망한다. 심부전은 식이, 흡연, 고혈압 또는 유전학을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 요인에 의해 야기되는 심장 질환의 일반적인 종점이다. 심부전은 심장 근육 수축성 손상으로 이어지는 칼슘 취급의 조절장애에 의해 유발될 수 있다. 심부전의 현재 치료법은 증상 치료(예를 들어, 이뇨제, β-아드레날린 차단제 및/또는 안지오텐신-전환 효소(ACE) 억제제), 및 장치 또는 수술 치료법(예를 들어, 좌심실 보조 장치(LVAD), 판막 대치술 및/또는 혈관성혈술)을 포함하지만, 이들에 제한되지는 않는다. 이러한 현재 치료법은 심장 수축성을 직접 교정하지는 않고 질환에 대한 단기적인 해결책만을 제공한다. 심부전을 치료하기 위한 장기 치료 옵션은 AAV 전달을 사용한 유전자 요법이다.

심장 AAV 유전자 치료 접근법의 대부분은 심장 수축성을 회복하기 위해 β-아드레날린 시스템(βARKct, 아데닐릴 사이클라아제 6) 또는 칼슘 취급 단백질(SERCA2a, PP1, S100A1)에 집중되어 있다(참조: 예를 들어, Hulot et al., 2016 and Zouein & Booz 2013, 이들 각각의 내용은 이들의 전문이 참조로 인용됨). 그러나, 본원에 기재된 AAV 캡시드의 전신적 또는 표적화된 전달에 의한 심근 세포의 증가된 형질 도입은 심부전 치료를 위한 최상의 기회를 제공한다.

뉴욕 심장 협회(NYHA)는 심부전 대상체를 분류하기 위한 기능적 분류 시스템을 만들었다. NYHA는 신체 활동 중 대상체가 얼마나 제한되는지에 따라 4가지 클래스의 환자 증상 평가 및 4가지 클래스의 객관적인 평가를 제공한다. 클래스 I 환자 증상 평가는 일반적인 신체 활동이 대상체에게 과도한 피로, 심계항진 또는 호흡 곤란을 유발하지 않으므로 대상체가 신체 활동에 제약이 없음을 의미한다. 클래스 II 환자 증상 평가는 대상체가 휴식시 편안하지만 일반적으로 신체 활동시 피로, 심계항진 또는 호흡 곤란을 초래하므로 신체 활동에 약간의 제약이 있음을 의미한다. 클래스 III 환자 증상 평가는 대상체가 휴식시 편안하지만 정상적인 활동 이외의 활동시 피로, 심계항진 또는 호흡 곤란을 초래하므로 신체 활동에 제약이 있음을 의미한다. 클래스 IV 환자 증상 평가는 대상체가 불편함 없이 어떠한 신체 활동도 수행할 수 없음을 의미한다. 객관적인 평가는 대상체가 심혈관 질환에 대한 객관적인 증거가 없으며 일반적인 신체 활동에 대한 증상이나 제약이 없음을 의미한다. 클래스 B 객관적인 평가는 경미한 증상을 보이는 최소 심혈관 질환에 대한 객관적인 증거가 있으며 일상적인 활동 중에 약간의 제약이 있지만 대상체는 휴식시 편안한 것을 의미한다. 클래스 C 객관적인 평가는 중간 중등도 심혈관 질환에 대한 객관적인 증거가 있으며, 대상체는 휴식시 편안하고 평상시보다 적은 활동 중에도 증상으로 인해 활동에 뚜렷한 제한이 있음을 의미한다. 클래스 D 객관적인 평가는 심각한 심혈관 질환에 대한 객관적인 증거가 있음을 의미하며, 대상체는 심지어 휴식시에서도 증상이 있으며, 심각한 활동 제약이 있음을 의미한다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자의 전달은 심부전이 있는 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자의 전달은 심근 손상 후 발생한다. 일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자의 전달은 대상체의 심실 성능이 저하된 후 일어난다. 일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자의 전달은 대상체에게 디곡신(digoxin)의 투여 후 발생한다. 일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자의 전달은 대상체에게 디곡신의 투여와 동시에 발생한다. 일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자의 전달은 대상체의 심실 성능이 저하된 후 그러나 대상체의 심박출량이 감소되기 전에 발생한다. 일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자의 전달은 대상체에게 베타-차단제를 투여하기 전에 발생한다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 디곡신, 베타-차단제, ACE1, aRB, 스피로노락톤, 이뇨제 및/또는 혈관확장제와 함께 투여된다.

일 구현예에서, ATP2A2(SERCA2a로도 불림) 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 AAV 입자는 심부전이 있는 대상체를 치료하기 위해 투여된다. 어떠한 이론으로 국한시키고자 하는 것은 아니지만, ATP아제 근형질/소포체 Ca2+ 수송 2(근소포체 Ca2+ ATP아제 (SERCA2a)로도 불림)는 심근 세포에서 칼슘 사이클링의 구성요소이다. 근소포체(SR)에서 칼슘 수송(Ca2+)을 담당하는 단백질의 기능 감소는 심부전 후 보이는 수축/이완 결함을 일으킬 수 있다. 심부전 후 사람 조직에서 ATP2A2의 발현 및 활성 감소가 관찰되었다(참조: Arai et al. Circulation Research 72(2) February 2013; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨). 칼슘 사이클 및 수축성은 대상체에서 ATP2A2 과발현에 의해 회복될 수 있다.

일 구현예에서, ATP2A2 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 AAV 입자의 전달은 대상체에서 ATP2A2의 발현을 증가시킨다. 상기 발현은 관심 세포, 조직 및/또는 기관에서 증가될 수 있다. 비제한적인 예로서, ATP2A2의 발현은 심장에서 증가된다. 비제한적인 예로서, ATP2A2의 발현은 심근 세포에서 증가된다.

일 구현예에서, S100A1 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 AAV 입자는 심부전이 있는 대상체를 치료하기 위해 투여된다. 어떠한 이론으로 국한시키고자 하는 것은 아니지만, S100 칼슘 결합 단백질 A1은 ATP2A2, RyR, 미토콘드리아 ATP 생산 및/또는 티틴-매개된 수축의 활성을 향상시킨다. 근소포체(SR)에서 칼슘 수송(Ca2+)을 담당하는 단백질인, ATP2A2의 활성 증가는 심부전 후 보이는 수축/이완 결함을 교정할 수 있다.

일 구현예에서, S100A1 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 AAV 입자의 전달은 대상체에서 S100A1 발현을 증가시킨다. 상기 발현은 관심 세포, 조직 및/또는 기간에서 증가될 수 있다. 비제한적인 예로서, S100A1의 발현은 심장에서 증가된다. 비제한적인 예로서, cccccS100A1의 발현은 심근 세포에서 증가된다.

일 구현예에서, S100A1 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 본 발명의 AAV 입자의 전달은 대상체에서 ATP2A2의 발현을 증가시킨다. 상기 발현은 관심 세포, 조직 및/또는 기관에서 증가될 수 있다. 비제한적인 예로서, ATP2A2의 발현은 심장에서 증가된다. 비제한적인 예로서, ATP2A2의 발현은 심근 세포에서 증가된다.

신경계 질환의 치료 방법

단백질 페이로드를 인코딩하는 AAV 입자

본 발명에는 본 발명의 AAV 입자를 세포 내로 도입하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 표적 mRNA 및 단백질의 생산 증가가 일어나기에 충분한 양으로 임의의 벡터를 상기 세포로 도입하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 세포는 근육 세포, 줄기 세포, 뉴런 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 운동, 해마, 내비, 시상 또는 피질 뉴런, 및 아교 세포 예를 들어 성상세포 또는 미세아교세포일 수 있다.

본 발명에서는 치료를 필요로 하는 대상체에서 표적 단백질(예를 들어, ApoE, FXN)의 불충분한 기능/존재와 관련된 신경계 질환을 치료하는 방법이 개시된다. 상기 방법은 임의로 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 유전자 발현을 증가시키고, 표적 단백질 생산을 증가시켜 대상체가 치료학적으로 치료되도록 대상체의 신경계 질환의 하나 이상의 증상을 감소시킬 수 있다.

일부 구현예에서, 단백질 페이로드를 인코딩하는 핵산을 포함하는 본 발명의 AAV 입자는 정맥내 투여 후 혈액 뇌 장벽을 통해 전달될 수 있도록 하는 AAV 캡시드를 포함한다. 일 예로, AAV 캡시드는 VOY101이고 또 다른 예에서, AAV 캡시드는 VOY201이다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물은 전신 투여를 통해 대상체의 중추 신경계로 투여된다. 일 구현예에서, 전신 투여는 정맥내 주사이다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물은 대상체의 중추 신경계로 투여된다. 다른 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물은 대상체의 조직(예를 들어, 대상체의 뇌)으로 투여된다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물은 뇌실질내 주사를 통해 대상체의 중추 신경계로 투여된다. 뇌실질내 주사의 비제한적인 예는 시상내, 선조체내, 해마내 또는 내비 피질을 표적으로하는 것을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물은 뇌실질내 주사 및 경막내 주사를 통해 대상체의 중추 신경계로 투여된다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 해마, 피질, 운동 또는 내비 뉴런; 희소돌기아교세포, 성상세포 및 미세아교세포를 포함하는 아교 세포; 및/또는 T 세포와 같은 뉴런을 둘러싸는 다른 세포를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 특정 유형의 표적화 세포로 전달될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 선조체 및/또는 피질 내 뉴런으로 전달될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 신경계 질환을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 타우병증을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 알츠하이머병을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 근위축성 측삭경화증을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 헌팅턴병을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 파킨슨병을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 프리드리히 실조증을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 신경계 질환을 치료하기 위해 성상세포 내 표적 단백질 발현을 증가시키는데 사용될 수 있다. 성상세포 내 표적 단백질은 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 증가될 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 미세아교세포 내 표적 단백질을 증가시키는데 사용될 수 있다. 미세아교세포 내 표적 단백질의 증가는, 독립적으로, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 증가될 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 피질 뉴런 내 표적 단백질을 증가시키는데 사용될 수 있다. 피질 뉴런 내 표적 단백질의 증가는, 독립적으로, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 증가될 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 해마 뉴런 내 표적 단백질을 증가시키는데 사용될 수 있다. 해마 뉴런 내 표적 단백질의 증가는, 독립적으로, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 증가될 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 DRG 및/또는 교감 뉴런 내 표적 단백질을 증가시키는데 사용될 수 있다. DRG 및/또는 교감 뉴런 내 표적 단백질의 증가는, 독립적으로, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 증가될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 신경계 질환을 치료하기 위해 감각 뉴런 내 표적 단백질을 증가시키는데 사용될 수 있다. 감각 뉴런 내 표적 단백질은 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 증가될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 대상체에서 표적 단백질을 증가시키고 신경계 질환의 증상을 감소시키는데 사용될 수 있다. 표적 단백질 증가 및/또는 신경계 질환의 증상 감소는, 독립적으로, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 변경(표적 단백질 생산 증가 및 신경계 질환 증상 감소)될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 이에 제한되지는 않지만 총 기능적 능력(total functional capacity; TFC) 척도와 같은 표준 평가 시스템에 의해 측정될 때 기능적 능력 및 일상생활 수행능력의 저하를 감소시키는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 신경계 질환의 증상을 판단하기 위해 사용된 임의의 평가에 대한 성능을 개선시키는데 사용될 수 있다. 상기 평가는 ADAS-cog(알츠하이머병 평가 척도 - 인지), MMSE(간이-정신 상태 검사), GDS(노인 우울 척도), FAQ(기능적 활동 설문지), ADL(일상생활 수행능력), GPCOG(인지의 일반의 평가), 미니-Cog, AMTS(지능 검사 스코어로 약칭됨), 시계그리기 검사(Clock-drawing test), 6-CIT (6-항목 인지 손상 검사), TYM(테스트 유어 메모리(Test Your Memory)), MoCa(몬트리올 인지 평가), ACE-R(아덴브룩스 인지 평가(Addenbrookes Cognitive Assessment)), MIS(기억장애 선별검사), BADLS (브리스톨 일상생활 수행능력 척도), 바텔 지수(Barthel Index), 기능적 독립 측정, 도구적 일상생활 수행능력, IQCODE(노인의 인지 감소에 대한 피험자 설문지(Informant Questionnaire on Cognitive Decline in the Elderly)), 신경정신과 검사(Neuropsychiatric Inventory), 코헨-맨스필드 불안 검사(The Cohen-Mansfield Agitation Inventory), BEHAVE-AD, EuroQol, 약식(Short Form)-36 및/또는 MBR 간병인 중압 도구(Caregiver Strain Instrument), 또는 시한 B(Sheehan B, Ther Adv Neurol Disord. 5(6):349-358 (2012), 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같은 임의의 다른 검사를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

일부 구현예에서, 본 조성물은 신경계 질환의 치료를 위한 단독 치료제 또는 병용 치료제로서 투여된다.

표적 단백질을 인코딩하는 AAV 입자는 하나 이상의 다른 치료제와 병용하여 사용될 수 있다. "병용하여"는 제제가 동시에 투여되고/되거나 전달을 위해 함께 제제화되어야 하지만, 이들 전달 방법은 본 발명의 범위 내에 있음을 의미하는 것으로 의도되지 않는다. 조성물은 하나 이상의 다른 목적하는 치료제 또는 의학적 절차와 동시에, 이전에 또는 이후에 투여될 수 있다. 일반적으로, 각각의 제제는 상기 제제에 대해 결정된 용량 및/또는 시간 스케쥴로 투여될 것이다.

본 발명의 AAV 입자와 병용하여 사용될 수 있는 치료제는 산화방지제, 항염증제, 항아폽토시스제, 칼슘 조절제, 항글루타메이트제(antiglutamatergic agent), 구조 단백질 억제제, 근육 기능과 관련된 화합물, 및 금속 이온 조절과 관련된 화합물인 소분자 화합물일 수 있다. 비제한적인 예로서, 병용 요법은 운동 뉴런 변성에 대한 신경보호 효과에 대해 시험된, 하나 이상의 신경보호제 예를 들어 소분자 화합물, 성장 인자 및 호르몬과 병용될 수 있다.

본원에 기재된 AAV 입자와 함께 사용될 수 있는 신경계 질환의 치료에 대해 시험된 화합물은 콜린에스테라아제 억제제(도네페질, 리바스티그민, 갈란타민), NMDA 수용체 길항제 예를 들어 메만틴, 항정신병약, 항우울제, 항경련제(예를 들어, 근육간대경련을 위한 나트륨 발프로에이트 및 레비티라세탐), 세크레타아제 억제제, 아밀로이드 응집 억제제, 구리 또는 아연 조절제, BACE 억제제, 타우 응집 억제제, 예를 들어 메틸렌 블루, 페노티아진, 안트라퀴논, n-페닐아민 또는 로다민, 미세소관 안정화제 예를 들어 NAP, 탁솔 또는 파클리탁셀, 키나아제 또는 포스파타아제 억제제 예를 들어 GSK3β(리튬) 또는 PP2A를 표적화하는 것들, Aβ 펩타이드 또는 타우 포스포-에피토프에 의한 면역화 또는 항-타우 또는 항-아밀로이드 항체, 도파민-고갈제(depleting agent)(예를 들어, 무도증을 위한 테트라베나진), 벤조디아제핀(예를 들어, 근육간대경련, 무도증, 근긴장이상, 경축 및/또는 경직을 위한 클로나제팜), 도파민의 아미노산 전구체(예를 들어, 경축을 위한 레보도파), 골격근 이완제(예를 들어, 경축 및/또는 경직을 위한 바클로펜, 티자니딘), 근육 마비를 유발하는 신경근 접합부에서 아세틸콜린 방출 억제제(예를 들어, 이갈이(bruxism) 및/또는 근긴장이상을 위한 보툴리눔 독소), 비정형 신경이완제(atypical neuroleptics)(예를 들어, 정신병 및/또는 과민성을 위한 올란자핀 및 쿠에티아핀, 정신병, 무도증 및/또는 과민성을 위한 리스페리돈, 설피리드 및 할로페리돌, 치료-내성 정신병(treatment-resistant psychosis)을 위한 클로자핀, 두드러진 부정적인 증상이 있는 정신병을 위한 아리피프라졸), 선택적 세로토닌 재흡수 억제제(SSRI)(예를 들어, 우울증, 불안, 강박 행동(obsessive compulsive behavior) 및/또는 과민성을 위한 시탈로프람, 플루옥세틴, 파록세틴, 설트랄린, 미르타자핀, 벤라팍신), 최면제(예를 들어, 바뀐 수면-각성 사이클을 위한 조피클론(xopiclone) 및/또는 졸피뎀), 항경련제(예를 들어, 조증 또는 경조증을 위한 나트륨 발프로에이트 및 카바마제핀) 및 기분 안정제(예를 들어, 조증 또는 경조증을 위한 리튬)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

향신경성 인자는 신경계 질환의 치료를 위한 본 발명의 AAV 입자와 함께 병용 요법에서 사용될 수 있다. 일반적으로, 향신경성 인자는 뉴런의 생존, 성장, 분화, 증식 및/또는 성숙을 촉진하거나 뉴런의 활성 증가를 자극하는 물질로 정의된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 또한 치료를 필요로 하는 대상체로의 하나 이상의 영양 인자의 전달을 포함한다. 영양 인자는 IGF-I, GDNF, BDNF, CTNF, VEGF, 콜리벨린(Colivelin), 잘리프로덴(Xaliproden), 갑상샘자극호르몬-방출 호르몬 및 ADNF, 및 이들의 변이체를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

일 측면에서, 본원에 기재된 AAV 입자는 AAV-IGF-I(참조: 예를 들어, Vincent et al., Neuromolecular medicine, 2004, 6, 79-85; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨) 및 AAV-GDNF(참조: 예를 들어, Wang et al., J Neurosci., 2002, 22, 6920-6928; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)와 같은 향신경성 인자를 발현시키는 AAV 입자와 함께 공-투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 신경계 질환 치료를 위한 본 발명의 조성물은 AAV 입자가 혈관-뇌 장벽 및 혈액 척수 장벽 중 하나 또는 둘 다를 통과할 수 있도록 필요로 하는 대상체에게 정맥내, 근육내, 피하, 복강내, 뇌실질내, 경막내 및/또는 심실내로 투여된다. 일부 측면에서, 상기 방법은 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 대상체의 중추 신경계(CNS)로(예를 들어, 주입 펌프 및/또는 전달 스캐폴드를 사용하여) 직접 투여(예를 들어, 뇌실질내 투여, 심실내 투여 및/또는 경막내 투여)하는 단계를 포함한다. 벡터는 표적 유전자 발현을 증가시키고/시키거나 대상체가 치료적으로 치료되도록 대상체의 신경계 질환의 하나 이상의 증상을 감소시키는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 대상체로의 투여는 대상체에서 표적 단백질 수준을 증가시킬 수 있다. 표적 단백질 수준은 대상체, 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 대상체의 CNS, CNS의 영역, CNS의 특정 세포에서 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 증가될 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 단백질 수준을 적어도 50% 증가시킬 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 단백질 수준을 적어도 40% 증가시킬 수 있다. 비제한적인 예로서, 대상체는 표적 단백질의 10% 증가를 나타낼 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 단백질 수준을 기준선에 비해 배수 증가로 증가시킬 수 있다. 일 구현예에서, AAV 입자는 표적 단백질의 5배 내지 6배 더 높은 수준을 유도한다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 대상체로의 투여는 대상체에서 표적 단백질의 발현을 증가시킬 수 있다. 표적 단백질의 발현은 대상체, 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 대상체의 CNS, CNS의 영역, CNS의 특정 세포에서 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 증가될 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 발현을 적어도 50% 증가시킬 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 발현을 적어도 40% 증가시킬 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 대상체로의 정맥내 투여는 대상체에서 표적 단백질의 CNS 발현을 증가시킬 수 있다. 표적 단백질의 발현은 대상체 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 대상체의 CNS, CNS의 영역, 또는 CNS의 특정 세포에서 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 증가될 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 CNS 내 표적 단백질의 발현을 적어도 50% 증가시킬 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 CNS 내 표적 단백질의 발현을 적어도 40% 증가시킬 수 있다.

일 구현예에서, 대상체에게 AAV 입자의 투여는 대상체에서 표적 단백질의 발현을 증가시킬 것이고, 표적 단백질의 발현 증가는 대상체의 신경계 질환의 영향 및/또는 증상을 감소시킬 것이다.

조절 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 AAV 입자

본 발명에는 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자를 세포 내로 도입하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 표적 mRNA의 분해가 발생하기에 충분한 양으로 임의의 벡터를 상기 세포 내로 도입함으로써 세포에서 표적 특이적-RNAi를 활성화시키는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 세포는 근육 세포, 줄기 세포, 뉴런 예를 들어 이에 제한되지는 않지만 운동, 해마, 내비, 시상 또는 피질 뉴런, 및 아교세포 예를 들어 성상세포 또는 미세아교세포일 수 있다.

본 발명에는 치료가 필요한 대상체에서 표적 단백질의 기능장애와 관련된 신경계 질환을 치료하는 방법이 개시된다. 상기 방법은 임의로 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 비제한적인 예로서, siRNA 분자는 표적 유전자 발현을 사일런싱하고, 표적 단백질 생산을 억제하고, 대상체가 치료적으로 치료되도록 대상체의 신경계 질환의 하나 이상의 증상을 감소시킬 수 있다.

일부 구현예에서, siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물은 정맥내 투여 후 혈액 뇌 장벽을 통해 전달할 수 있는 AAV 캡시드를 포함한다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자를 포함하는 조성물은 대상체의 중추 신경계로 투여된다. 다른 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자를 포함하는 조성물은 대상체의 조직(대상체의 뇌)에 투여된다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자를 포함하는 조성물은 전신 투여를 통해 대상체의 중추 신경계로 투여된다. 일 구현예에서, 전신 투여는 정맥내 주사이다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자를 포함하는 조성물은 뇌실질내 주사를 통해 대상체의 중추 신경계로 투여된다. 뇌실질내 주사의 비제한적인 예는 시상내, 선조체내, 해마내 또는 내비 피질을 표적화하는 것을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자를 포함하는 조성물은 뇌실질내 주사 및 경막내 주사를 통해 대상체의 중추 신경계로 투여된다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 해마, 피질, 운동 또는 내비 뉴런; 희소돌기아교세포, 성상세포 및 미세아교세포를 포함하는 아교 세포; 및/또는 T 세포와 같은 뉴런을 둘러싸는 다른 세포를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 특정 유형의 표적화 세포로 전달될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 선조체 및/또는 피질 내 뉴런으로 전달될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 신경계 질환을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 타우병증을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 알츠하이머병을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 근위축성 측삭경화증을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 헌팅턴병을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 파킨슨병을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 프리드리히 실조증을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 신경계 질환을 치료하기 위해 성상세포 내 표적 단백질을 억제하는데 사용될 수 있다. 성상세포 내 표적 단백질은 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 억제될 수 있다. 성상세포 내 표적 단백질은 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 감소될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 미세아교세포 내 표적 단백질을 억제하는데 사용될 수 있다. 미세아교세포 내 표적 단백질의 억제는 독립적으로 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 억제될 수 있다. 감소는 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95%일 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 피질 뉴런 내 표적 단백질을 억제하는데 사용될 수 있다. 피질 뉴런 내 표적 단백질의 억제는 독립적으로 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 억제될 수 있다. 감소는 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95%일 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 해마 뉴런 내 표적 단백질을 억제하는데 사용될 수 있다. 해마 뉴런 내 표적 단백질의 억제는 독립적으로 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 억제될 수 있다. 감소는 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95%일 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 DRG 및/또는 교감 뉴런 내 표적 단백질을 억제하는데 사용될 수 있다. DRG 및/또는 교감 뉴런 내 표적 단백질의 억제는 독립적으로 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 억제될 수 있다. 감소는 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95%일 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 신경계 질환을 치료하기 위해 감각 뉴런 내 표적 단백질을 억제하는데 사용될 수 있다. 감각 뉴런 내 표적 단백질은 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 억제될 수 있다. 감각 뉴런 내 표적 단백질은 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 감소될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는 대상체에서 표적 단백질을 억제하고 신경계 질환의 증상을 감소시키는데 사용될 수 있다. 표적 단백질 억제 및/또는 신경계 질환의 증상 감소는 독립적으로 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 감소되거나 억제될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자는, 이에 제한되지는 않지만, 총 기능적 능력(TFC) 척도와 같은 표준 평가 시스템에 의해 측정될 때 기능적 능력 및 일상생활 수행능력의 저하를 감소시키는데 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 조성물은 신경계 질환의 치료를 위한 단독 치료제 또는 병용 치료제로서 투여된다.

관심 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스를 인코딩하는 AAV 입자는 하나 이상의 다른 치료제와 함께 사용될 수 있다. "병용하여"는 이러한 전달 방법이 본 발명의 범위 내에 있지만, 제제가 동시에 투여되고/되거나 함께 전달되도록 제제화되어야 함을 의미하는 것은 아니다. 조성물은 하나 이상의 다른 목적하는 치료제 또는 의료 절차와 동시에, 이전에 또는 이후에 투여될 수 있다. 일반적으로, 각각의 제제는 상기 제제에 대해 결정된 용량 및/또는 시간 스케쥴로 투여될 것이다.

본 발명의 siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 인코딩하는 AAV 입자와 병용하여 사용될 수 있는 치료제는 산화방지제, 항염증제, 항아폽토시스제, 칼슘 조절제, 항글루타메이트제, 구조 단백질 억제제, 근육 기능과 관련된 화합물, 및 금속 이온 조절과 관련된 화합물인 소분자 화합물일 수 있다.

본 발명의 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 입자와 함께 사용될 수 있는 신경계 질환의 치료에 대해 시험된 화합물은 콜린에스테라아제 억제제(도네페질, 리바스티그민, 갈란타민), NMDA 수용체 길항제 예를 들어 메만틴, 항정신병약, 항우울제, 항경련제(예를 들어, 근육간대경련을 위한 나트륨 발프로에이트 및 레비티라세탐), 세크레타아제 억제제, 아밀로이드 응집 억제제, 구리 또는 아연 조절제, BACE 억제제, 타우 응집 억제제, 예를 들어 메틸렌 블루, 페노티아진, 안트라퀴논, n-페닐아민 또는 로다민, 미세소관 안정화제 예를 들어 NAP, 탁솔 또는 파클리탁셀, 키나아제 또는 포스파타아제 억제제 예를 들어 GSK3β(리튬) 또는 PP2A를 표적화하는 것들, Aβ 펩타이드 또는 타우 포스포-에피토프에 의한 면역화 또는 항-타우 또는 항-아밀로이드 항체, 도파민-고갈제(예를 들어, 무도증을 위한 테트라베나진), 벤조디아제핀(예를 들어, 근육간대경련, 무도증, 근긴장이상, 경축 및/또는 경직을 위한 클로나제팜), 도파민의 아미노산 전구체(예를 들어, 경축을 위한 레보도파), 골격근 이완제(예를 들어, 경축 및/또는 경직을 위한 바클로펜, 티자니딘), 근육 마비를 유발하는 신경근 접합부에서 아세틸콜린 방출 억제제(예를 들어, 이갈이 및/또는 근긴장이상을 위한 보툴리눔 독소), 비정형 신경이완제(예를 들어, 정신병 및/또는 과민성을 위한 올란자핀 및 쿠에티아핀, 정신병, 무도증 및/또는 과민성을 위한 리스페리돈, 설피리드 및 할로페리돌, 치료-내성 정신병을 위한 클로자핀, 두드러진 부정적인 증상이 있는 정신병을 위한 아리피프라졸), 선택적 세로토닌 재흡수 억제제(SSRI)(예를 들어, 우울증, 불안, 강박 행동 및/또는 과민성을 위한 시탈로프람, 플루옥세틴, 파록세틴, 설트랄린, 미르타자핀, 벤라팍신), 최면제(예를 들어, 수면-각성 사이클 변경을 위한 조피클론 및/또는 졸피뎀), 항경련제(예를 들어, 조증 또는 경조증을 위한 나트륨 발프로에이트 및 카바마제핀) 및 기분 안정제(예를 들어, 조증 또는 경조증을 위한 리튬)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

향신경성 인자는 신경계 질환의 치료를 위한 본 발명의 siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 인코딩하는 AAV 입자와 함께 병용 요법에서 사용될 수 있다. 일반적으로, 향신경성 인자는 뉴런의 생존, 성장, 분화, 증식 및/또는 성숙을 촉진하거나 뉴런의 활성 증가를 자극하는 물질로 정의된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 또한 치료를 필요로 하는 대상체로의 하나 이상의 영양 인자의 전달을 포함한다. 영양 인자는 IGF-I, GDNF, BDNF, CTNF, VEGF, 콜리벨린, 잘리프로덴, 갑상샘자극호르몬-방출 호르몬 및 ADNF, 및 이들의 변이체를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.

일 측면에서, 관심 유전자를 표적화하는 적어도 하나의 siRNA 듀플렉스에 대한 핵산 서열을 인코딩하는 AAV 입자는 AAV-IGF-I(참조: 예를 들어, Vincent et al., Neuromolecular medicine, 2004, 6, 79-85; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨) 및 AAV-GDNF(참조: 예를 들어, Wang et al., J Neurosci., 2002, 22, 6920-6928; 이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)와 같은 향신경성 인자를 발현시키는 AAV 입자와 함께 공-투여될 수 있다.

일부 구현예에서, 신경계 질환 치료를 위한 본 발명의 조성물은 siRNA 분자 또는 siRNA 분자를 포함하는 벡터가 혈관-뇌 장벽 및 혈액 척수 장벽 중 하나 또는 둘 다를 통과할 수 있도록 필요로 하는 대상체에게 정맥내, 근육내, 피하, 복강내, 뇌실질내, 경막내 및/또는 심실내로 투여된다. 일부 측면에서, 상기 방법은 본 발명의 siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 인코딩하는 AAV 입자를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 대상체의 중추 신경계(CNS)로(예를 들어, 주입 펌프 및/또는 전달 스캐폴드를 사용하여) 직접 투여(예를 들어, 뇌실질내 투여, 심실내 투여 및/또는 경막내 투여)하는 단계를 포함한다. 벡터는 표적 유전자 발현을 사일런싱하거나 억제하고/하거나 대상체가 치료적으로 치료되도록 대상체의 신경계 질환의 하나 이상의 증상을 감소시키는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA를 인코딩하는 AAV 입자의 대상체로의 투여는 대상체에서 표적 단백질 수준을 낮출 수 있다. 표적 단백질 수준은 대상체, 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 대상체의 CNS, CNS의 영역, CNS의 특정 세포에서 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 낮출 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 단백질 수준을 적어도 50% 낮출 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 단백질 수준을 적어도 40% 낮출 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA를 인코딩하는 AAV 입자의 대상체로의 투여는 대상체에서 표적 단백질의 발현을 낮출 수 있다. 표적 단백질의 발현은 대상체, 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 대상체의 CNS, CNS의 영역, CNS의 특정 세포에서 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 낮출 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 발현을 적어도 50% 낮출 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 발현을 적어도 40% 낮출 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 siRNA를 인코딩하는 AAV 입자의 대상체로의 정맥내 투여는 대상체의 CNS에서 표적 단백질의 발현을 낮출 수 있다. 표적 단백질의 발현은 대상체, 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 대상체의 CNS, CNS의 영역, CNS의 특정 세포에서 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 낮출 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 발현을 적어도 50% 낮출 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 발현을 적어도 40% 낮출 수 있다.

일 구현예에서, 대상체로의 AAV 입자의 투여는 대상체에서 표적 단백질의 발현을 감소시킬 것이고, 표적 단백질의 발현 감소는 대상체에서 신경계 질환의 영향 및/또는 증상을 감소시킬 것이다.

일 구현예에서, AAV 입자는 대상체에서 표적 단백질을 감소시키는데 사용될 수 있다. 상기 감소는 독립적으로 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95%일 수 있다. 비제한적인 예로서, 대상체는 표적 단백질의 70% 감소를 나타낼 수 있다. 비제한적인 예로서, 대상체는 표적 단백질의 50% 감소를 나타낼 수 있다. 비제한적인 예로서, 대상체는 표적 단백질의 40% 감소를 나타낼 수 있다. 비제한적인 예로서, 대상체는 표적 단백질의 10% 감소를 나타낼 수 있다.

심혈관 질환의 치료 방법

본 발명에서는 본 발명의 AAV 입자를 세포 내로 도입하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 표적 mRNA 및 단백질의 생산 증가가 일어나기에 충분한 양으로 임의의 벡터를 상기 세포로 도입하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 세포는 이에 제한되지는 않지만 심근 세포와 같은 근육 세포일 수 있다.

본 발명에서는 치료를 필요로 하는 대상체에서 표적 단백질(예를 들어, ATP2A2)의 불충분한 기능/존재와 관련된 심혈관 질환을 치료하는 방법이 본 발명에 개시된다. 상기 방법은 임의로 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 유전자 발현을 증가시키고, 표적 단백질 생산을 증가시켜 대상체가 치료학적으로 치료되도록 대상체의 신경계 질환의 하나 이상의 증상을 감소시킬 수 있다.

일부 구현예에서, 단백질 페이로드를 인코딩하는 핵산을 포함하는 본 발명의 AAV 입자는 정맥내 투여 후 심근 세포에 분포될 수 있도록 하는 AAV 캡시드를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물은 전신 투여를 통해 대상체에게 투여된다. 일 구현예에서, 전신 투여는 정맥내 주사이다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물은 대상체의 심혈관계로 직접 투여된다. 다른 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물은 대상체의 조직(예를 들어, 대상체의 심장)으로 투여된다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물은 경막내 주사를 통해 대상체의 심혈관계로 투여된다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 심근 세포를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 특정 유형의 표적화 세포로 전달될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 심근 세포로 전달될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 심혈관 질환을 위한 치료법으로 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 확장 심근병증(DCM)을 위한 치료법으로 사용될 수 있다. DCM은 심장의 심실과 심방에 영향을 미쳐 심장 근육이 확장되기 시작하여 심장 근육이 비정상적으로 수축하여 심장이 혈액을 효율적으로 펌핑하지 못하게 한다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 비대성 심근병증을 위한 치료법으로 사용될 수 있다. 비대성 심근병증은 심장 근육의 일부가 확장되어 심장이 혈액을 펌핑하는 것을 어렵게 하는 상황이다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 심장 조직 내 표적 단백질을 증가시키는데 사용될 수 있다. 심장 조직 내 표적 단백질의 증가는 독립적으로 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 증가될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 심혈관 질환을 치료하기 위해 심근 세포 내 표적 단백질 발현을 증가시키는데 사용될 수 있다. 심근 세포 내 표적 단백질은 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 증가될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 대상체에서 표적 단백질을 증가시키고 심혈관 질환의 증상을 감소시키는데 사용될 수 있다. 표적 단백질 증가 및/또는 심혈관 질환의 증상 감소는 독립적으로 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 변경(표적 단백질 생산 증가 및 심혈관 질환의 증상 감소)될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 조성물은 심혈관 질환의 치료를 위한 단독 치료제 또는 병용 치료제로서 투여된다.

표적 단백질을 인코딩하는 AAV 입자는 하나 이상의 다른 치료제와 병용하여 사용될 수 있다. "병용하여"는 제제가 동시에 투여되고/되거나 전달을 위해 함께 제제화되어야 하지만, 이들 전달 방법은 본 발명의 범위 내에 있음을 의미하는 것으로 의도되지 않는다. 조성물은 하나 이상의 다른 목적하는 치료제 또는 의학적 절차와 동시에, 이전에 또는 이후에 투여될 수 있다. 일반적으로, 각각의 제제는 상기 제제에 대해 결정된 용량 및/또는 시간 스케쥴로 투여될 것이다.

본 발명의 AAV 입자와 병용하여 사용될 수 있는 치료제는 산화방지제, 항염증제, 항아폽토시스제, 칼슘 조절제, 항글루타메이트제, 구조 단백질 억제제, 근육 기능과 관련된 화합물, 이뇨제, ACE 억제제, β-아드레날린 차단제, 및 금속 이온 조절과 관련된 화합물인 소분자 화합물일 수 있다.

일부 구현예에서, 심혈관 질환의 치료를 위한 본 발명의 조성물은 AAV 입자가 목적하는 세포, 조직 및/또는 기관으로 전달될 수 있도록 필요로 하는 대상체에게 정맥내, 근육내, 피하, 경막내, 전향성 관상 동맥 주사(anterograde coronary injection) 및/또는 심실내로 투여된다. 일부 측면에서, 상기 방법은 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 대상체의 심혈관계로(예를 들어, 주입 펌프 및/또는 전달 스캐폴드를 사용하여) 직접 투여(예를 들어, 뇌실질내 투여, 심실내 투여 및/또는 경막내 투여)하는 단계를 포함한다. 벡터는 표적 유전자 발현을 증가시키고/시키거나 대상체가 치료적으로 치료되도록 대상체의 심혈관 질환의 하나 이상의 증상을 감소시키는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 대상체로의 투여는 대상체에서 표적 단백질 수준을 증가시킬 수 있다. 표적 단백질 수준은 대상체 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 대상체의 심혈관계, 심혈관계의 영역, 또는 심혈관계의 특정 세포에서 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 증가될 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 단백질 수준을 적어도 50% 증가시킬 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 단백질 수준을 적어도 40% 증가시킬 수 있다. 비제한적인 예로서, 대상체는 표적 단백질의 10% 증가를 나타낼 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 단백질 수준을 기준선에 비해 배수 증가로 증가시킬 수 있다. 일 구현예에서, AAV 입자는 표적 단백질의 5배 내지 6배 더 높은 수준을 유도한다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 대상체로의 투여는 대상체에서 표적 단백질의 발현을 증가시킬 수 있다. 표적 단백질의 발현은 대상체 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 대상체의 심혈관계, 심혈관계의 영역, 또는 심혈관계의 특정 세포에서 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 증가될 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 발현을 적어도 50% 증가시킬 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 발현을 적어도 40% 증가시킬 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 대상체로의 정맥내 투여는 대상체에서 심혈관계 표적 단백질의 발현을 증가시킬 수 있다. 표적 단백질의 발현은 대상체 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 대상체의 심혈관계, 심혈관계의 영역, 또는 심혈관계의 특정 세포에서 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 증가될 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 심혈관계 내 표적 단백질의 발현을 적어도 50% 증가시킬 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 심혈관계 내 표적 단백질의 발현을 적어도 40% 증가시킬 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자의 대상체로의 투여는 대상체에서 표적 단백질의 발현을 증가시킬 것이고, 표적 단백질의 발현 증가는 대상체에서 심혈관 질환의 영향 및/또는 증상을 감소시킬 것이다.

심부전의 치료 방법

본 발명에서는 본 발명의 AAV 입자를 세포로 도입하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 표적 mRNA 및 단백질의 생산 증가가 일어나기에 충분한 양으로 임의의 벡터를 상기 세포로 도입하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 세포는 이에 제한되지는 않지만 심근 세포와 같은 근육 세포일 수 있다.

본 발명에서는 치료를 필요로 하는 대상체에서 표적 단백질(예를 들어, ATP2A2)의 불충분한 기능/존재와 관련된 심부전을 치료하는 방법이 본 발명에 개시된다. 상기 방법은 임의로 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 유전자 발현을 증가시키고, 표적 단백질 생산을 증가시켜 대상체가 치료학적으로 치료되도록 대상체의 심부전의 하나 이상의 증상을 감소시킬 수 있다.

일부 구현예에서, 단백질 페이로드를 인코딩하는 핵산을 포함하는 본 발명의 AAV 입자는 정맥내 투여 후 심근 세포에 분포될 수 있도록 하는 AAV 캡시드를 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물은 전신 투여를 통해 대상체에게 투여된다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물은 대상체의 심혈관계로 직접 투여된다. 다른 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물은 대상체의 조직(예를 들어, 대상체의 심장)으로 투여된다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물은 경막내 주사를 통해 대상체의 심혈관계로 투여된다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 심근 세포를 포함하지만, 이에 제한되지 않는 특정 유형의 표적화 세포로 전달될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 심근 세포로 전달될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 심부전을 위한 치료법으로서 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 대상체의 입원 횟수를 감소시키는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 대상체의 생존을 연장시키는데 사용될 수 있다.

일부 구현예에서, AAV 입자는 심장 조직 내 표적 단백질을 증가시키는데 사용될 수 있다. 심장 조직 내 표적 단백질의 증가는 독립적으로 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 증가될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 심부전을 치료하기 위해 심근 세포 내 표적 단백질 발현을 증가시키는데 사용될 수 있다. 심근 세포 내 표적 단백질은 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 증가될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 대상체에서 표적 단백질을 증가시키고 심부전의 증상을 감소시키는데 사용될 수 있다. 표적 단백질 증가 및/또는 심부전의 증상 감소는 독립적으로 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 95% 초과, 5-15%, 5-20%, 5-25%, 5-30%, 5-35%, 5-40%, 5-45%, 5-50%, 5-55%, 5-60%, 5-65%, 5-70%, 5-75%, 5-80%, 5-85%, 5-90%, 5-95%, 10-20%, 10-25%, 10-30%, 10-35%, 10-40%, 10-45%, 10-50%, 10-55%, 10-60%, 10-65%, 10-70%, 10-75%, 10-80%, 10-85%, 10-90%, 10-95%, 15-25%, 15-30%, 15-35%, 15-40%, 15-45%, 15-50%, 15-55%, 15-60%, 15-65%, 15-70%, 15-75%, 15-80%, 15-85%, 15-90%, 15-95%, 20-30%, 20-35%, 20-40%, 20-45%, 20-50%, 20-55%, 20-60%, 20-65%, 20-70%, 20-75%, 20-80%, 20-85%, 20-90%, 20-95%, 25-35%, 25-40%, 25-45%, 25-50%, 25-55%, 25-60%, 25-65%, 25-70%, 25-75%, 25-80%, 25-85%, 25-90%, 25-95%, 30-40%, 30-45%, 30-50%, 30-55%, 30-60%, 30-65%, 30-70%, 30-75%, 30-80%, 30-85%, 30-90%, 30-95%, 35-45%, 35-50%, 35-55%, 35-60%, 35-65%, 35-70%, 35-75%, 35-80%, 35-85%, 35-90%, 35-95%, 40-50%, 40-55%, 40-60%, 40-65%, 40-70%, 40-75%, 40-80%, 40-85%, 40-90%, 40-95%, 45-55%, 45-60%, 45-65%, 45-70%, 45-75%, 45-80%, 45-85%, 45-90%, 45-95%, 50-60%, 50-65%, 50-70%, 50-75%, 50-80%, 50-85%, 50-90%, 50-95%, 55-65%, 55-70%, 55-75%, 55-80%, 55-85%, 55-90%, 55-95%, 60-70%, 60-75%, 60-80%, 60-85%, 60-90%, 60-95%, 65-75%, 65-80%, 65-85%, 65-90%, 65-95%, 70-80%, 70-85%, 70-90%, 70-95%, 75-85%, 75-90%, 75-95%, 80-90%, 80-95%, 또는 90-95% 변경(표적 단백질 생산 증가 및 심부전의 증상 감소)될 수 있다.

일부 구현예에서, 본 조성물은 심부전의 치료를 위한 단독 치료제 또는 병용 치료제로서 투여된다.

표적 단백질을 인코딩하는 AAV 입자는 하나 이상의 다른 치료제와 병용하여 사용될 수 있다. "병용하여"는 제제가 동시에 투여되고/되거나 전달을 위해 함께 제제화되어야 하지만, 이들 전달 방법은 본 발명의 범위 내에 있음을 의미하는 것으로 의도되지 않는다. 조성물은 하나 이상의 다른 목적하는 치료제 또는 의학적 절차와 동시에, 이전에 또는 이후에 투여될 수 있다. 일반적으로, 각각의 제제는 상기 제제에 대해 결정된 용량 및/또는 시간 스케쥴로 투여될 것이다.

본 발명의 AAV 입자와 병용하여 사용될 수 있는 치료제는 산화방지제, 항염증제, 항아폽토시스제, 칼슘 조절제, 항글루타메이트제, 구조 단백질 억제제, 근육 기능과 관련된 화합물, 이뇨제, ACE 억제제, β-아드레날린 차단제, 및 금속 이온 조절과 관련된 화합물인 소분자 화합물일 수 있다.

일부 구현예에서, 심혈관 질환의 치료를 위한 본 발명의 조성물은 AAV 입자가 목적하는 세포, 조직 및/또는 기관으로 전달될 수 있도록 필요로 하는 대상체에게 정맥내, 근육내, 피하, 경막내, 전향성 관상 동맥 주사 및/또는 심실내로 투여된다. 일부 측면에서, 상기 방법은 본 발명의 AAV 입자를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 대상체의 심혈관계로(예를 들어, 주입 펌프 및/또는 전달 스캐폴드를 사용하여) 직접 투여(예를 들어, 뇌실질내 투여, 심실내 투여 및/또는 경막내 투여)하는 단계를 포함한다. 벡터는 표적 유전자 발현을 증가시키고/시키거나 대상체가 치료적으로 치료되도록 대상체의 심부전의 하나 이상의 증상을 감소시키는데 사용될 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 대상체로의 투여는 대상체에서 표적 단백질 수준을 증가시킬 수 있다. 표적 단백질 수준은 대상체 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 대상체의 심혈관계, 심혈관계의 영역, 또는 심혈관계의 특정 세포에서 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 증가될 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 단백질 수준을 적어도 50% 증가시킬 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 단백질 수준을 적어도 40% 증가시킬 수 있다. 비제한적인 예로서, 대상체는 표적 단백질의 10% 증가를 나타낼 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 단백질 수준을 기준선에 비해 배수 증가로 증가시킬 수 있다. 일 구현예에서, AAV 입자는 표적 단백질의 5배 내지 6배 더 높은 수준을 유도한다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 대상체로의 투여는 대상체에서 표적 단백질의 발현을 증가시킬 수 있다. 표적 단백질의 발현은 대상체 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 대상체의 심혈관계, 심혈관계의 영역, 또는 심혈관계의 특정 세포에서 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 증가될 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 발현을 적어도 50% 증가시킬 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 표적 단백질의 발현을 적어도 40% 증가시킬 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 대상체로의 정맥내 투여는 대상체에서 심혈관계 표적 단백질의 발현을 증가시킬 수 있다. 표적 단백질의 발현은 대상체 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 대상체의 심혈관계, 심혈관계의 영역, 또는 심혈관계의 특정 세포에서 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 증가될 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 심혈관계 내 표적 단백질의 발현을 적어도 50% 증가시킬 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 입자는 심혈관계 내 표적 단백질의 발현을 적어도 40% 증가시킬 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 대상체로의 투여는 대상체에서 심근 세포 내 표적 단백질의 발현을 증가시킬 수 있다. 표적 단백질의 발현은 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100% 증가될 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 대상체로의 투여는 대상체에서 심근 세포 내 ATP2A2를 발현시킬 수 있다. 심근 세포 내 ATP2A2의 발현은 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%일 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 30%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 30% 내지 40%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 30% 내지 50%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 30%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 30% 내지 60%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 30% 내지 70%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 30% 내지 80%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 30% 내지 90%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 20%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 20% 내지 40%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 20% 내지 50%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 20%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 20% 내지 60%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 20% 내지 70%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 20% 내지 80%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, ATP2A2의 발현은 심근 세포의 20% 내지 90%에서 나타날 수 있다.

일 구현예에서, 본원에 기재된 AAV 입자의 대상체로의 투여는 대상체에서 심근 세포 내 S100A1을 발현시킬 수 있다. 심근 세포 내 S100A1의 발현은 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20-30%, 20-40%, 20-50%, 20-60%, 20-70%, 20-80%, 20-90%, 20-95%, 20-100%, 30-40%, 30-50%, 30-60%, 30-70%, 30-80%, 30-90%, 30-95%, 30-100%, 40-50%, 40-60%, 40-70%, 40-80%, 40-90%, 40-95%, 40-100%, 50-60%, 50-70%, 50-80%, 50-90%, 50-95%, 50-100%, 60-70%, 60-80%, 60-90%, 60-95%, 60-100%, 70-80%, 70-90%, 70-95%, 70-100%, 80-90%, 80-95%, 80-100%, 90-95%, 90-100% 또는 95-100%일 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 30%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 30% 내지 40%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 30% 내지 50%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 30%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 30% 내지 60%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 30% 내지 70%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 30% 내지 80%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 30% 내지 90%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 20%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 20% 내지 40%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 20% 내지 50%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 20%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 20% 내지 60%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 20% 내지 70%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 20% 내지 80%에서 나타날 수 있다. 일 구현예에서, S100A1의 발현은 심근 세포의 20% 내지 90%에서 나타날 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자의 대상체로의 투여는 대상체에서 표적 단백질의 발현을 증가시킬 것이며, 표적 단백질의 발현 증가는 대상체에서 심부전의 영향 및/또는 증상을 감소시킬 것이다.

일 구현예에서, 대상체는 심부전을 치료하기 위해 본 발명의 AAV 입자의 1x10¹³ VG의 용량이 투여된다. 비제한적인 예로서, 대상체는 경피적 관상동맥내 투여에 의해 AAV 입자의 상기 용량이 투여된다.

일 구현예에서, 대상체는 심부전을 치료하기 위해 본 발명의 AAV 입자의 1x10¹³ VG의 용량이 투여된다. 비제한적인 예로서, 대상체는 정맥내 투여에 의해 AAV 입자의 상기 용량이 투여된다.

일 구현예에서, 대상체는 심부전을 치료하기 위해 본 발명의 AAV 입자의 2x10¹³ VG의 용량이 투여된다. 비제한적인 예로서, 대상체는 경피적 관상동맥내 투여에 의해 AAV 입자의 상기 용량이 투여된다.

일 구현예에서, 대상체는 심부전을 치료하기 위해 본 발명의 AAV 입자의 2x10¹³ VG의 용량이 투여된다. 비제한적인 예로서, 대상체는 정맥내 투여에 의해 AAV 입자의 상기 용량이 투여된다.

일 구현예에서, 대상체는 심부전을 치료하기 위해 본 발명의 AAV 입자의 3x10¹³ VG의 용량이 투여된다. 비제한적인 예로서, 대상체는 경피적 관상동맥내 투여에 의해 AAV 입자의 상기 용량이 투여된다.

일 구현예에서, 대상체는 심부전을 치료하기 위해 본 발명의 AAV 입자의 3x10¹³ VG의 용량이 투여된다. 비제한적인 예로서, 대상체는 정맥내 투여에 의해 AAV 입자의 상기 용량이 투여된다.

일 구현예에서, 대상체는 심부전을 치료하기 위해 본 발명의 AAV 입자의 3x10¹¹ VG의 용량이 투여된다. 비제한적인 예로서, 대상체는 경피적 관상동맥내 투여에 의해 AAV 입자의 상기 용량이 투여된다.

일 구현예에서, 대상체는 심부전을 치료하기 위해 본 발명의 AAV 입자의 3x10¹¹ VG의 용량이 투여된다. 비제한적인 예로서, 대상체는 정맥내 투여에 의해 AAV 입자의 상기 용량이 투여된다.

일 구현예에서, 대상체는 심부전을 치료하기 위해 본 발명의 AAV 입자의 3x10¹² VG의 용량이 투여된다. 비제한적인 예로서, 대상체는 경피적 관상동맥내 투여에 의해 AAV 입자의 상기 용량이 투여된다.

일 구현예에서, 대상체는 심부전을 치료하기 위해 본 발명의 AAV 입자의 3x10¹² VG의 용량이 투여된다. 비제한적인 예로서, 대상체는 정맥내 투여에 의해 AAV 입자의 상기 용량이 투여된다.

V. 키트 및 장치

키트

일 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 방법을 편리하고 및/또는 효과적으로 수행하기 위한 다양한 키트를 제공한다. 전형적으로 키트는 사용자가 대상체(들)의 다중 치료를 수행하고/하거나 다중 실험을 수행할 수 있도록 하기에 충분한 양 및/또는 수의 구성요소를 포함할 것이다.

본 발명의 임의의 AAV 입자가 키트에 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 키트는 또한 본 발명의 화합물 및/또는 조성물을 생성하고/하거나 합성하기 위한 시약 및/또는 지침서를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 키트는 하나 이상의 버퍼를 또한 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 키트는 단백질 또는 핵산 어레이 또는 라이브러리를 제조하기 위한 구성요소를 포함할 수 있으며, 따라서 예를 들어 고체 지지체를 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 키트 구성요소는 수성 매질 중에서 또는 동결건조된 형태로 패키징될 수 있다. 키트의 용기 수단은 일반적으로 적어도 하나의 바이알, 시험관, 플라스크, 병, 시린지 또는 다른 용기 수단을 포함할 것이며, 여기에는 구성요소가 배치될 수 있고, 바람직하게는 적절히 분취될 수 있다. 하나 초과의 키트 구성요소가 있는 경우, (라벨링 시약 및 라벨이 함께 패키징될 수 있음), 키트는 또한 일반적으로 추가 구성요소가 별도로 배치될 수 있는 제2, 제3 또는 다른 추가 용기를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 키트는 또한 멸균, 약제학적으로 허용되는 버퍼 및/또는 다른 희석제를 함유하기 위한 제2 용기 수단을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 다양한 구성요소의 조합이 하나 이상의 바이알에 포함될 수 있다. 본 발명의 키트는 또한 상업적 판매를 위해 전형적으로 본 발명의 화합물 및/또는 조성물을 함유하기 위한 수단, 예를 들어, 단백질, 핵산, 및 임의의 다른 시약 용기를 밀폐하여 포함할 수 있다. 상기 용기는 목적하는 바이알을 보유하는 사출 또는 취입-성형된 플라스틱 용기를 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 키트 구성요소는 하나 및/또는 하나 이상의 액체 용액으로 제공된다. 일부 구현예에서, 액체 용액은 수용액이며, 멸균 수용액이 특히 바람직하다. 일부 구현예에서, 키트 구성요소는 건조 분말(들)로 제공될 수 있다. 시약 및/또는 구성요소가 건조 분말로 제공되는 경우, 상기 분말은 적절한 용적의 용매를 첨가하여 재구성될 수 있다. 일부 구현예에서, 용매가 또한 또 다른 용기 수단으로 제공될 수 있는 것으로 생각된다. 일부 구현예에서, 라벨링 염료는 건조 분말로 제공된다. 일부 구현예에서, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 120, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 마이크로그램 또는 적어도 또는 최대 이러한 양의 건조 염료가 본 발명의 키트에 제공되는 것으로 고려된다. 이러한 구현예에서, 염료는 이후 임의의 적합한 용매 예를 들어 DMSO에서 재현탁될 수 있다.

일부 구현예에서, 키트는 키트 구성요소를 사용하기 위한 지침서 및 키트에 포함되지 않은 임의의 다른 시약의 용도를 포함할 수 있다. 지침서에는 구현될 수 있는 변형이 포함될 수 있다.

장치

일 구현예에서, AAV 입자는 AAV 입자 및 헤드 고정 어셈블리(head fixation assembly)를 전달하기 위한 장치를 사용하여 대상체에게 전달될 수 있다. 헤드 고정 어셈블리는 MRI 인터벤션즈(MRI interventions)에 의해 판매되는 임의의 헤드 고정 어셈블리일 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 비제한적인 예로서, 헤드 고정 어셈블리는 미국 특허 8,099,150호, 제8,548,569호 및 제9,031,636호 및 국제 특허 공개 공보 WO201108495호 및 WO2014014585호(이들 각각의 내용은 이들의 전문이 참조로 인용됨)에 기재된 임의의 어셈블리일 수 있다. 헤드 고정 어셈블리는 MRI 호환 드릴 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 국제 특허 공개 공보 WO2013181008호 및 미국 특허 공개 공보 US20130325012호(이들의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 MRI 호환 드릴과 함께 사용될 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 AAV 입자를 전달하기 위해 대상체의 표적 지점에 장치를 위치시키기 위한 방법, 시스템 및/또는 컴퓨터 프로그램을 사용하여 전달될 수 있다. 비제한적인 예로서, 상기 방법, 시스템 및/또는 컴퓨터 프로그램은 미국 특허 8, 340,743호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 방법, 시스템 및/또는 컴퓨터 프로그램일 수 있다. 상기 방법은 체내 표적 지점 및 기준점을 결정하는 단계로서, 상기 표적 지점 및 기준점은 각각을 통해 연장되는 계획된 궤도선(planned trajectory line; PTL)을 한정하는, 상기 단계; 시각화 평면을 결정하는 단계로서, 상기 PTL은 관찰 지점에서 시각화 평면과 교차하는, 상기 단계; 본체에 대해 가이드 장치를 장착하여 PTL에 대해 이동하는 단계로서, 상기 가이드 장치는 시각화 평면과 교차하지 않는, 상기 단계; 가이드 축과 시각화 평면 사이의 교차점(GPP)을 결정하는 단계; 및 시각화 평면에서 관찰 지점에 GPP를 정렬시키는 단계를 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자는 컨벤션-향상된 전달 장치를 사용하여 대상체에게 전달될 수 있다. 컨벤션을 사용한 약물의 표적 전달의 비제한적인 예는 미국 특허 출원 공개 공보 US20100217228호, US20130035574호 및 US20130035660호 및 국제 특허 공개 공보 WO2013019830호 및 WO2008144585호(이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재되어 있다.

일 구현예에서, 대상체는 AAV 입자의 전달 전, 동안 및/또는 후에 영상화될 수 있다. 영상화 방법은 당업계에 공지되고/되거나 본원에 기재된 방법, 예를 들어 이에 제한되지는 않지만, 자기 공명 영상법(MRI)일 수 있다. 비제한적인 예로서, 영상화는 치료 효과를 평가하는데 사용될 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 영상화는 AAV 입자의 보조 전달을 위해 사용될 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 MRI-유도 장치를 사용하여 전달될 수 있다. MRI-유도 장치의 비제한적인 예는 미국 특허 9,055,884호, 제9,042,958호, 제8,886,288호, 제8,768,433호, 제8,396,532호, 제8,369,930호, 제8,374,677호 및 제8,175,677호 및 미국 특허 출원 공개 공보 US20140024927호(이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재되어 있다. 비제한적인 예로서, MRI-유도 장치는 미국 특허 8,886,288호 및 제8,768,433호(이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 것과 같이 데이터를 실시간으로 제공할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, MRI-유도 장치 또는 시스템은 미국 특허 8,175,677호 및 제8,374,677호(이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 시스템과 같은 표적화 캐뉼라와 함께 사용될 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, MRI-유도 장치는, 예를 들어, 미국 특허 9,055,884호 및 미국 특허 출원 US20140024927호(이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같은 중재 장치를 유도하기 위한 궤도 가이드 프레임을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자는 MRI-호환 팁 어셈블리를 사용하여 전달될 수 있다. MRI-호환 팁 어셈블리의 비제한적인 예는 미국 특허 공개 공보 US20140275980호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재되어 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 MRI-호환되는 캐뉼라를 사용하여 전달될 수 있다. MRI-호환 캐뉼라의 비제한적인 예는 국제 특허 공개 공보 WO2011130107호(이의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 교시된 것들을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자는 MRI-호환되는 카테터를 사용하여 전달될 수 있다. MRI-호환 카테터의 비제한적인 예는 국제 특허 공개 공보 WO2012116265호, 미국 특허 공개 공보 8,825,133호 및 미국 특허 공개 공보 US20140024909호(이들 각각의 내용은 이의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 교시된 것들을 포함한다.

일 구현예에서, AAV 입자는 미국 특허 공개 공보 US20140276582호 및 US20140276614호(이들 각각의 내용은 이들의 내용이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같은 연장된 관형 본체 및 다이어프램을 갖는 장치를 사용하여 전달될 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는, 이에 제한되지는 않지만, 미국 특허 출원 공개 공보 US20150223905호 및 US20150230871호(이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 것들과 같은 MRI 호환 국소화 및/또는 안내 시스템을 사용하여 전달될 수 있다. 비제한적인 예로서, MRI 호환 국소화 및/또는 안내 시스템은 환자에게 고정하기에 적합한 마운트(mount), 적어도 3차원으로 조절가능하게 번역될 수 있도록 마운트에 부착되도록 구성된 루멘을 갖는 표적화 캐뉼라, 및 표적화 캐뉼라 루멘에서 슬라이드를 통해 부드럽게 전진하고 수축하도록 구성된 연장된 프로브(상기 연장된 프로브는 자극 또는 기록 전극 중 적어도 하나를 포함함)를 포함할 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 미국 특허 출원 공개 공보 US20150031982호 및 US20140066750호 및 국제 특허 공개 공보 WO2015057807호 및 WO2014039481호(이들 각각의 내용은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 바와 같은 궤도 프레임을 사용하여 대상체에게 전달될 수 있다.

일 구현예에서, AAV 입자는 유전자총(gene gun)을 사용하여 대상체에게 전달될 수 있다.

VI. 정의

본 명세서의 다양한 곳에서, 본 발명의 화합물의 치환체는 그룹별 또는 범위별로 개시된다. 본 발명은 이러한 그룹 및 범위의 구성원의 각각의 모든 개별 하위조합을 포함하는 것으로 구체적으로 의도된다.

달리 언급되지 않는 한, 다음의 용어 및 어구는 하기 기재된 의미를 갖는다. 정의는 본질적으로 제한하려는 것이 아니며 본 발명의 특정 측면에 대한 보다 명확한 이해를 제공하는 역할을 한다.

약: 본원에 사용된 용어 "약"은 언급된 값의 +/- 10%를 의미한다.

아데노 -관련 바이러스: 본원에 사용된 용어 "아데노-관련 바이러스" 또는 "AAV"는 임의의 입자, 서열, 유전자, 단백질 또는 이로부터 유래된 구성요소를 포함하는 데펜도바이러스(dependovirus) 속의 구성원을 나타낸다.

AAV 입자: 본원에 사용된 "AAV 입자"는 적어도 하나의 페이로드 영역 및 적어도 하나의 ITR 영역을 갖는 캡시드 및 바이러스 게놈을 포함하는 바이러스이다. 본 발명의 AAV 입자는 재조합적으로 생성될 수 있고, 아데노-관련 바이러스(AAV) 모 또는 참조 서열에 기초할 수 있다. AAV 입자는 혈청형(즉, "위형" AAV)의 조합을 비롯한 본원에 기재되거나 당업계에 공지된 임의의 혈청형, 또는 다양한 게놈(예를 들어, 단일 가닥 또는 자기-상보적)으로부터 유래될 수 있다. 또한, AAV 입자는 복제 결함이 있고/있거나 표적화될 수 있다.

활성: 본원에 사용된 용어 "활성"은 일이 일어나거나 행해지는 상태를 나타낸다. 본 발명의 조성물은 활성을 가질 수 있고 이 활성은 하나 이상의 생물학적 사건을 수반할 수 있다.

투여하는: 본원에 사용된 용어 "투여하는"은 약제 또는 조성물을 대상체에게 제공하는 것을 나타낸다.

조합 투여: 본원에 사용된 용어 "조합 투여" 또는 "병용 투여"는 2종 이상의 제제가 대상체에게 동시에 또는 환자에 대한 각 작용제의 효과가 중첩될 수 있도록 하는 간격 내에서 투여됨을 의미한다. 일부 구현예에서, 이들은 서로 약 60분, 30분, 15분, 10분, 5분 또는 1분 내에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 제제의 투여는 조합적(예를 들어, 상승작용) 효과가 달성되도록 서로 충분히 가깝게 이격된다.

개선: 본원에 사용되는 용어 "개선" 또는 "개선하는"은 병태 또는 질환의 적어도 하나의 지표의 중증도를 감소시키는 것을 나타낸다. 예를 들어, 신경변성 장애의 맥락에서, 개선은 뉴런 손실 감소를 포함한다.

동물: 본원에 사용된 용어 "동물"은 동물계의 임의의 구성원을 나타낸다. 일부 구현예에서, "동물"은 임의의 발달 단계에 있는 사람을 나타낸다. 일부 구현예에서, "동물"은 임의의 발달 단계에 있는 비-사람 동물을 나타낸다. 특정 구현예에서, 비-사람 동물은 포유동물(예를 들어, 설치류, 마우스, 래트, 토끼, 원숭이, 개, 고양이, 양, 소, 영장류 또는 돼지)이다. 일부 구현예에서, 동물은 포유동물, 조류, 파충류, 양서류, 어류 및 벌레를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 동물은 트랜스제닉 동물, 유전적으로-조작된 동물, 또는 클론이다.

안티센스 가닥: 본원에 사용된 용어 siRNA 분자의 "안티센스 가닥" 또는 "제1 가닥" 또는 "가이드 가닥"은 사일런싱을 위해 표적화된 유전자의 mRNA의 약 10개 내지 50개의 뉴클레오티드 섹션, 예를 들어 약 15개 내지 30개, 16개 내지 25개, 18개 내지 23개 또는 19개 내지 22개의 뉴클레오타이드에 실질적으로 상보적인 가닥을 나타낸다. 안티센스 가닥 또는 제1 가닥은 표적-특이적 사일런싱을 유도하기 위해 목적하는 표적 mRNA 서열에 충분히 상보적인 서열, 예를 들어, RNAi 기구 또는 프로세스에 의해 목적하는 표적 mRNA의 파괴를 유발하기에 충분한 상보성을 갖는다.

대략: 하나 이상의 관심 값에 적용되는 것으로서, 본원에 사용된 용어 "대략" 또는 "약"은 언급된 기준값과 유사한 값을 나타낸다. 특정 구현예에서, 용어 "대략" 또는 "약"은 달리 언급되거나 문맥상 명백하지 않은 한(이러한 값이 가능한 값의 100%를 초과할 경우는 제외함) 언급된 기준값의 양쪽 방향으로(초과 또는 미만) 25%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 이하 내에 속하는 값의 범위를 나타낸다.

관련된(Associated with): 본원에 사용된 용어 "관련된", "연결된", "부착된" 및 "테어링된(tethered)"은, 2개 이상의 모이어티에 대해 사용될 때, 모이어티가 직접적으로 또는 연결제(linking agent)로서 작용하는 하나 이상의 추가 모이어티를 통해 서로 물리적으로 연합되거나 연결되어 구조를 형성하는데, 그 구조는 구조가 사용되는 조건, 예를 들어, 물리적 조건하에 모이어티가 물리적으로 연합된 상태를 유지하도록 충분히 안정함을 의미한다. "연합"은 엄격하게 직접적인 공유 화학 결합을 통해 이루어질 필요는 없다. 이는 또한 "연합된" 개체가 물리적으로 연합된 상태를 유지하도록 충분히 안정한 이온성 또는 수소 결합 또는 혼성화 기반 연결성을 제안할 수 있다.

이작용성 : 본원에 사용된 용어 "이작용성"은 적어도 2가지 기능을 할 수 있거나 유지하는 임의의 물질, 분자 또는 모이어티를 나타낸다. 상기 기능은 동일한 결과 또는 다른 결과에 영향을 줄 수 있다. 기능을 만들어 내는 구조는 동일하거나 상이할 수 있다.

생체적합성: 본원에 사용된 용어 "생체적합성"은 면역계에 의한 손상, 독성 또는 거부의 위험이 거의 없거나 전혀 없는 살아있는 세포, 조직, 기관 또는 시스템에 적합한 것을 의미한다.

생분해성: 본원에 사용된 용어 "생분해성"은 생물의 작용에 의해 무해한 산물로 분해될 수 있음을 의미한다.

생물학적 활성: 본원에 사용된 어구 "생물학적 활성"은 생물학적 시스템 및/또는 유기체에서 활성을 갖는 임의의 물질의 특성을 나타낸다. 예를 들어, 유기체에 투여될 때, 그 유기체에 생물학적 영향을 미치는 물질은 생물학적으로 활성인 것으로 간주된다. 특정 구현예에서, 본 발명의 AAV 입자는 인코딩된 페이로드의 일부라도 생물학적으로 활성이거나 생물학적으로 관련된 것으로 간주되는 활성을 모방하면 생물학적으로 활성인 것으로 간주될 수 있다.

캡시드: 본원에 사용된 용어 "캡시드"는 바이러스 입자의 단백질 껍질을 나타낸다.

상보적인 및 실질적으로 상보적인: 본원에 사용된 용어 "상보적인"은 폴리뉴클레오타이드가 서로 염기쌍을 형성하는 능력을 나타낸다. 염기쌍은 전형적으로 역평행 폴리뉴클레오타이드 가닥에서 뉴클레오타이드 유닛 간의 수소 결합에 의해 형성된다. 상보적인 폴리뉴클레오타이드 가닥은 왓슨-크릭 방식(예를 들어, A 대 T, A 대 U, C 대 G)으로 또는 듀플렉스의 형성을 가능하게 하는 임의의 다른 방식으로 염기쌍을 형성할 수 있다. 당업자가 알고 있는 바와 같이, DNA가 아닌 RNA를 사용하는 경우, 티민보다는 우라실이 아데노신에 상보적인 것으로 간주되는 염기이다. 그러나, 본 발명의 맥락에서 U가 표시되는 경우, 달리 언급되지 않는 한 T를 치환하는 능력이 암시된다. 완전한 상보성 또는 100% 상보성은 하나의 폴리뉴클레오타이드 가닥의 각각의 뉴클레오타이드 유닛이 제2 뉴클레오타이드 가닥의 뉴클레오타이드 유닛과 수소 결합을 형성할 수 있는 상황을 나타낸다. 덜 완전한 상보성은 2개의 가닥의 전부가 아닌 일부 뉴클레오타이드 유닛이 서로 수소 결합을 형성할 수 있는 상황을 언급한다. 예를 들어, 2개의 20량체에 대해, 각각의 가닥 상에 2개의 염기쌍만이 서로 수소 결합을 형성할 수 있다면, 폴리뉴클레오타이드 가닥은 10% 상보성을 나타낸다. 동일한 예에서, 각각의 가닥 상의 18개 염기쌍이 서로 수소 결합을 형성할 수 있다면, 폴리뉴클레오타이드 가닥은 90% 상보성을 나타낸다. 본원에 사용된 용어 "실질적으로 상보적인"은 siRNA가 목적하는 표적 mRNA에 결합하고 표적 mRNA의 RNA 사일런싱을 유발하기에 충분한 서열(예를 들어, 안티센스 가닥)을 갖는다는 것을 의미한다.

화합물: 본 발명의 화합물은 중간체 또는 최종 화합물에서 발생하는 원자의 모든 동위원소를 포함한다. "동위원소"는 핵에서 상이한 수의 중성자로부터 생성된 동일한 원자 번호를 갖지만 상이한 질량수를 갖는 원자를 지칭한다. 예를 들어, 수소의 동위원소는 삼중수소 및 중수소를 포함한다.

본 발명의 화합물 및 염은 통상적인 방법에 의해 용매 또는 물 분자와 조합하여 용매화물 및 수화물을 형성함으로써 제조될 수 있다.

조건부 활성: 본원에 사용된 용어 "조건부 활성"은 야생형 폴리펩티드의 돌연변이체 또는 변이체를 나타내며, 여기서 돌연변이체 또는 변이체는 모 폴리펩타이드보다 생리학적 조건에서 다소 활성이다. 또한, 조건부 활성 폴리펩타이드는 모 폴리펩타이드와 비교하여 비정상인 조건에서 활성이 증가 또는 감소될 수 있다. 조건부 활성 폴리펩타이드는 정상적인 생리 조건 또는 비정상적인 조건에서 가역적으로 또는 비가역적으로 불활성화될 수 있다.

보존된: 본원에 사용된 용어 "보존된"은 비교되는 2개 이상의 서열의 동일한 위치에서 변동이 없는 것인, 각각 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 폴리펩타이드 서열의 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기를 나타낸다. 비교적 보존된 뉴클레오타이드 또는 아미노산은 서열의 다른 곳에 나타나는 뉴클레오타이드 또는 아미노산보다 더 많은 관련 서열 중에서 보존되는 것들이다.

일부 구현예에서, 2개 이상의 서열이 서로 100% 동일하다면 이들은 "완전히 보존된" 것이라고 한다. 일부 구현예에서, 2개 이상의 서열이 서로 적어도 70% 동일하거나, 적어도 80% 동일하거나, 적어도 90% 동일하거나, 적어도 95% 동일하다면 이들은 "고도로 보존된" 것이라고 한다. 일부 구현예에서, 2개 이상의 서열이 서로 적어도 약 70% 동일하거나, 약 80% 동일하거나, 약 90% 동일하거나, 약 95%, 약 98%, 또는 약 99% 동일하다면 이들은 "고도로 보존된" 것이라고 한다. 일부 구현예에서, 2개 이상의 서열이 서로 적어도 30% 동일하거나, 적어도 40% 동일하거나, 적어도 50% 동일하거나, 적어도 60% 동일하거나, 적어도 70% 동일하거나, 적어도 80% 동일하거나, 적어도 90% 동일하거나, 적어도 95% 동일하다면 이들은 "보존된" 것이라고 한다. 일부 구현예에서, 2개 이상의 서열이 서로 약 30% 동일하거나, 약 40% 동일하거나, 약 50% 동일하거나, 약 60% 동일하거나, 약 70% 동일하거나, 약 80% 동일하거나, 약 90% 동일하거나, 약 95% 동일하거나, 약 98% 동일하거나, 약 99% 동일하다면 이들은 "보존된" 것이라고 한다. 서열의 보존은 폴리뉴클레오타이드 및 폴리펩타이드의 전체 길이에 적용될 수 있거나 이의 일부, 영역 또는 특징에 적용될 수 있다.

제어 요소: 본원에 사용된 "제어 요소", "조절적 제어 요소" 또는 "조절 서열"은 프로모터 영역, 폴리아데닐화 신호, 전사 종결 서열, 업스트림 조절 도메인, 복제 기원, 내부 리보솜 진입 부위("IRES"), 인핸서 등을 나타내며, 이들은 수용 세포에서 코딩 서열의 복제, 전사 및 번역을 제공한다. 선택된 코딩 서열이 적절한 숙주 세포에서 복제, 전사 및/또는 번역될 수 있는 한, 이들 제어 요소 모두가 항상 존재할 필요는 없다.

제어 방출: 본원에 사용된 용어 "제어 방출"은 치료 결과에 영향을 주는 특정 방출 패턴과 일치하는 약제학적 조성물 또는 화합물 방출 프로파일을 나타낸다.

세포증식억제성 ( Cytostatic ): 본원에 사용된 "세포증식억제성"은 세포(예를 들어, 포유동물 세포(예를 들어, 사람 세포)), 박테리아, 바이러스, 진균, 원생동물, 기생충, 프리온, 또는 이들의 조합의 성장, 분열 또는 증식을 저해, 감소, 억제하는 것을 나타낸다.

세포독성: 본원에 사용된 "세포독성"은 세포(예를 들어, 포유동물 세포(예를 들어, 사람 세포)), 박테리아, 바이러스, 진균, 원생동물, 기생충, 프리온, 또는 이들의 조합을 사멸시키거나 이들에게 해로운, 독성 또는 치명적인 영향을 미치는 것을 나타낸다.

전달: 본원에 사용된 "전달"은 AAV 입자, 화합물, 물질, 개체, 모이어티, 카고 또는 페이로드를 전달하는 행위 또는 방식을 나타낸다.

전달제: 본원에 사용된 "전달제"는 표적화된 세포로의 AAV 입자의 생체내 전달을 적어도 부분적으로 가능하게 하는 임의의 물질을 나타낸다.

불안정화된: 본원에 사용된 용어 "불안정한", "불안정화되다" 또는 "불안정화 영역"은 동일한 영역 또는 분자의 개시, 야생형 또는 고유 형태보다 덜 안정한 영역 또는 분자를 의미한다.

검출가능한 표지: 본원에 사용된 "검출가능한 표지"는 방사선 촬영, 형광, 화학 발광, 효소 활성, 흡광도 등을 포함하여 당업계에 공지된 방법에 의해 용이하게 검출되는 또 다른 개체에 부착, 혼입 또는 연합되는 하나 이상의 마커, 신호 또는 모이어티를 나타낸다. 검출가능한 표지는 방사성 동위원소, 형광단, 발색단, 효소, 염료, 금속 이온, 리간드, 예를 들어 비오틴, 아비딘, 스트렙타비딘 및 합텐, 양자점 등을 포함한다. 검출가능한 표지는 본원에 개시된 펩타이드 또는 단백질의 임의의 위치에 위치할 수 있다. 상기 표지는 아미노산, 펩타이드 또는 단백질 내에 있거나 N- 또는 C-말단에 위치할 수 있다.

소화하다: 본원에 사용된 용어 "소화하다"는 더 작은 조작 또는 구성요소로 분해되는 것을 의미한다. 폴리펩타이드 또는 단백질에 적용될 때, 소화는 펩타이드의 생산을 초래한다.

원위 : 본원에 사용된 용어 "원위"는 중심으로부터 떨어져 위치하거나 관심 지점 또는 영역으로부터 떨어져 위치한 것을 의미한다.

투여 요법: 본원에 사용된 용어 "투여 요법"은 치료, 예방 또는 완화적 처치를 위한 투여 스케쥴 또는 의사 결정 처방 계획이다.

캡슐화되다: 본원에 사용된 용어 "캡슐화되다"는 봉입되거나 둘러싸이거나 매입되는 것을 의미한다.

조작된: 본원에 사용된 바와 같이, 본 발명의 구현예는 구조적이든 화학적이든 개시 지점, 야생형 또는 고유 분자와는 다른 특징 또는 특성을 갖도록 설계될 때 "조작"된다.

유효량: 본원에 사용된 용어 "유효량"은 유리한 또는 목적하는 결과, 예를 들어, 임상 결과를 달성하기에 충분한 양이고, 따라서, "유효량"은 적용되는 상황에 따라 달라진다. 예를 들어, 암을 치료하는 제제를 투여하는 맥락에서, 유효량의 제제는, 예를 들어, 제제의 투여 없이 얻어진 반응과 비교하여 본원에 정의된 바와 같은 암의 치료를 달성하기에 충분한 양이다.

발현: 본원에 사용된 바와 같이, 핵산 서열의 "발현"은 다음 사건 중 하나 이상을 나타낸다: (1) DNA 서열로부터 (예를 들어, 전사에 의한) RNA 주형의 생산; (2) RNA 전사체의 프로세싱(예를 들어, 스플라이싱, 편집(editing), 5' 캡 형성 및/또는 3' 말단 프로세싱에 의해); (3) RNA의 폴리펩타이드 또는 단백질로의 번역; 및 (4) 폴리펩타이드 또는 단백질의 번역후 변형.

특징: 본원에 사용된 바와 같이, "특징"은 특성, 성질 또는 특유의 요소를 나타낸다.

제제: 본원에 사용된 바와 같이, "제제"은 적어도 하나의 AAV 입자 및 전달제를 포함한다.

단편: 본원에 사용된 "단편"은 일부를 나타낸다. 예를 들어, 단백질 단편은 배양된 세포로부터 분리된 전장 단백질을 소화시킴으로써 얻어진 폴리펩타이드를 포함할 수 있다.

기능적: 본원에 사용된 바와 같이, "기능적" 생물학적 분자는 특성화되는 특성 및/또는 활성을 나타내는 형태의 생물학적 분자이다.

유전자 발현: 용어 "유전자 발현"은 핵산 서열이 단백질 또는 펩타이드를 생성하도록 성공적으로 전사되고 대부분의 경우 번역되는 프로세스를 나타낸다. 명료성을 위해, "유전자 발현"의 측정이 언급될 때, 이는 전사의 핵산 산물, 예를 들어 RNA 또는 mRNA, 또는 번역의 아미노산 산물, 예를 들어 폴리펩타이드 또는 펩타이드의 측정일 수 있음을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. RNA, mRNA, 폴리펩타이드 및 펩타이드의 양 또는 수준을 측정하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다.

상동성 : 본원에 사용된 용어 "상동성"은 중합성 분자들, 예를 들어 폴리뉴클레오타이드 분자들(예를 들어 DNA 분자들 및/또는 RNA 분자들) 및/또는 폴리펩타이드 분자들 사이의 전반적인 관련성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 중합성 분자는 이들의 서열이 적어도 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99% 동일하거나 유사하다면 서로 "상동"인 것으로 간주된다. 용어 "상동"은 반드시 적어도 2개의 서열(폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 서열) 사이의 비교를 나타낸다. 본 발명에 따르면, 2개의 폴리뉴클레오타이드 서열은, 이들이 인코딩하는 폴리펩타이드가 적어도 약 20개의 아미노산의 적어도 하나의 연장부에 대해 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 심지어 99%인 경우 상동인 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, 상동 폴리뉴클레오타이드 서열은 적어도 4개 내지 5개의 특이적으로 지정된 아미노산의 연장부를 인코딩하는 능력으로 특성화된다. 길이가 60개 미만의 뉴클레오타이드인 폴리뉴클레오타이드 서열의 경우, 상동성은 적어도 4개 내지 5개의 특이적으로 지정된 아미노산의 연장부를 인코딩하는 능력에 의해 결정된다. 본 발명에 따르면, 2개의 단백질 서열은 단백질이 적어도 약 20개의 아미노산의 적어도 하나의 연장부에 대해 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90% 동일하다면 상동인 것으로 간주된다.

이종 영역: 본원에 사용된 용어 "이종 영역"은 상동 영역으로 간주되지 않을 수 있는 영역을 나타낸다.

상동 영역: 본원에 사용된 용어 "상동 영역"은 위치, 구조, 진화 기원, 특징, 형태 또는 기능이 유사한 영역을 나타낸다.

동일성: 본원에 사용된 용어 "동일성"은 중합체 분자, 예를 들어 폴리뉴클레오타이드 분자들(예를 들어, DNA 분자들 및/또는 RNA 분자들) 및/또는 폴리펩티드 분자들 사이의 전반적인 관련성을 나타낸다. 2개의 폴리뉴클레오타이드 서열의 동일성 백분율의 계산은, 예를 들어, 최적의 비교 목적을 위해 2개의 서열을 정렬함으로써 수행될 수 있다(예를 들어, 최적의 정렬을 위해 제1 및 제2 핵산 서열 중 하나 또는 둘 모두에 갭이 도입될 수 있고, 동일하지 않은 서열은 비교 목적으로 무시될 수 있다). 특정 구현예에서, 비교 목적을 위해 정렬된 서열의 길이는 기준 서열 길이의 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 100%이다. 이어서 상응하는 뉴클레오타이드 위치에서의 뉴클레오타이드가 비교된다. 제1 서열에서의 위치가 제2 서열에서의 상응하는 위치와 동일한 뉴클레오타이드에 의해 점유되는 경우, 분자는 그 위치에서 동일하다. 2개의 서열 사이의 동일성 백분율은 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 도입되어야 하는 갭의 수, 각각의 갭의 길이를 고려하여 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다. 2개의 서열 사이의 서열 비교 및 동일성 백분율의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 2개의 뉴클레오타이드 서열 사이의 동일성 백분율은 문헌(참조: Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; 및 Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; 이들 각각은 본원에 참조로 인용됨)에 기재된 방법과 같은 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 2개의 뉴클레오타이드 서열 사이의 동일성 백분율은 PAM120 중량 잔기 표(weight residue table), 12의 갭 길이 패널티 및 4의 갭 패널티를 사용하여 ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합된 메이어스 및 밀러(Meyers and Miller, CABIOS, 1989, 4:11-17)의 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다. 2개의 뉴클레오타이드 서열 사이의 동일성 백분율은, 대안적으로, NWSgapdna.CMP 매트릭스를 사용하여 GCG 소프트웨어 패키지에서 GAP 프로그램을 사용하여 결정될 수 있다. 서열 사이의 동일성 백분율을 결정하는데 통상적으로 사용되는 방법은 문헌(참조: Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J Applied Math., 48:1073 (1988); 본원에 참조로 인용됨)에 개시된 방법을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 동일성을 결정하는 기술은 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 프로그램으로 체계화된다. 2개의 서열 사이의 상동성을 결정하는 예시적인 컴퓨터 소프트웨어는 GCG 프로그램 패키지 [Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research, 12(1), 387 (1984)], BLASTP, BLASTN, 및 FASTA [Altschul, S. F. et al., J. Molec . Biol ., 215, 403 (1990)]을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

유전자의 발현을 억제하다: 본원에 사용된 어구 "유전자의 발현을 억제하다"는 유전자의 발현 산물의 양을 감소시키는 것을 의미한다. 발현 산물은 유전자로부터 전사된 RNA(예를 들어, mRNA) 또는 유전자로부터 전사된 mRNA로부터 번역된 폴리펩타이드일 수 있다. 전형적으로 mRNA 수준 감소는 이로부터 번역된 폴리펩타이드의 수준 감소를 초래한다. 발현 수준은 mRNA 또는 단백질을 측정하기 위한 표준 기술을 사용하여 결정될 수 있다.

시험관내: 본원에 사용된 용어 "시험관내"는 유기체(예를 들어, 동물, 식물 또는 미생물) 내에서가 아닌 인위적인 환경, 예를 들어, 시험관 또는 반응 용기, 세포 배양물, 페트리 접시 등에서 발생하는 사건을 나타낸다.

생체내: 본원에 사용된 용어 "생체내"는 유기체(예를 들어, 동물, 식물 또는 미생물, 또는 이들의 세포 또는 조직) 내에서 발생하는 사건을 나타낸다.

분리된: 본원에 사용된 용어 "분리된"은 (본질적으로든 또는 실험적 설정에든) 관련된 구성요소 중 적어도 일부로부터 분리된 물질 또는 개체를 나타낸다. 분리된 물질은 이들이 관련되어 있는 물질과 관련하여 다양한 수준의 순도를 가질 수 있다. 분리된 물질 및/또는 개체는 이들이 처음에 관련되어 있는 다른 구성요소 중 적어도 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90% 이상에서 분리될 수 있다. 일부 구현예에서, 분리된 제제는 약 80% 초과, 약 85%, 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 약 99%, 또는 약 99% 초과의 순도를 갖는다. 본원에 사용된 바와 같이, 물질은 다른 구성요소가 실질적으로 없을 경우 "순수"하다.

실질적으로 분리된: "실질적으로 분리된"은 물질이 그것이 형성되거나 검출된 환경으로부터 실질적으로 분리된 것을 의미한다. 부분적 분리는, 예를 들어, 본 발명의 물질 또는 AAV 입자가 풍부한 조성물을 포함할 수 있다. 실질적인 분리는 적어도 약 50중량%, 적어도 약 60중량%, 적어도 약 70중량%, 적어도 약 80중량%, 적어도 약 90중량%, 적어도 약 95중량%, 적어도 약 97중량%, 또는 적어도 약 99중량%의 본 발명의 화합물 또는 이의 염을 함유하는 조성물을 포함할 수 있다. 화합물 및 이의 염을 분리하는 방법은 당업계에서 통상적이다.

링커: 본원에 사용된 바와 같이 "링커"는 2개의 분자를 연결하는 분자 또는 분자 그룹을 나타낸다. 링커는 2개의 상이한 폴리펩타이드를 인코딩하는 2개의 핵산 서열을 연결하는 핵산 서열일 수 있다. 링커는 번역되거나 번역되지 않을 수 있다. 링커는 절단가능한 링커일 수 있다.

마이크로RNA ( miRNA ) 결합 부위: 본원에 사용된 바와 같이, 마이크로RNA(miRNA) 결합 부위는 적어도 miRNA의 "씨드" 영역이 결합하는 핵산 전사체의 뉴클레오타이드 위치 또는 영역을 나타낸다.

변형된: 본원에 사용된 바와 같이 "변형된"은 본 발명의 분자의 변경된 상태 또는 구조를 나타낸다. 분자는 화학적, 구조적 및 기능적 변형을 포함하여 다양한 방식으로 변형될 수 있다.

돌연변이: 본원에 사용된 용어 "돌연변이"는 후속 세대에 전달될 수 있는 변이체("돌연변이체"라고도 함) 형태를 초래하는 유전자 구조의 임의의 변경을 나타낸다. 유전자 내 돌연변이는 DNA 내 단일 염기의 교체, 또는 유전자 또는 염색체의 보다 많은 부분의 결실, 삽입 또는 재배열에 의해 야기될 수 있다.

천연적으로 발생하는: 본원에서 사용되는 바와 같이, "천연적으로 발생하는" 또는 "야생형"은 인공적인 도움 없이 또는 사람 손에 관여되지 않고 자연적으로 존재하는 것을 의미한다.

비-사람 척추동물: 본원에 사용된 바와 같이, "비-사람 척추동물"은 야생 및 사육된 종을 포함하여, 호모 사피엔스(Homo sapiens)를 제외한 모든 척추동물을 포함한다. 비-사람 척추동물의 예는 포유동물, 예를 들어 알파카, 밴팅, 들소, 낙타, 고양이, 소, 사슴, 개, 당나귀, 가얄, 염소, 기니아피그, 말, 라마, 노새, 돼지, 토끼, 순록, 양 물소 및 야크를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

오프 -표적: 본원에 사용된 바와 같이, "오프 표적"은 임의의 하나 이상의 표적, 유전자 또는 세포 전사체에 대한 임의의 의도되지 않은 영향을 나타낸다.

개방 판독틀 : 본원에 사용된 바와 같이, "개방 판독틀" 또는 "ORF"는 주어진 판독틀에 정지 코돈을 함유하지 않는 서열을 나타낸다.

작동가능하게 연결된: 본원에 사용된 어구 "작동가능하게 연결된"은 2개 이상의 분자, 작제물, 전사체, 개체, 모이어티 등 사이의 기능적 연결을 나타낸다.

입자: 본원에 사용된 바와 같이, "입자"는 적어도 2개의 구성요소, 단백질 캡시드 및 캡시드 내에 봉입된 폴리뉴클레오타이드 서열로 구성된 바이러스이다.

환자: 본원에 사용된 바와 같이, "환자"는 치료를 구하거나 필요로 할 수 있거나, 치료를 요하거나, 치료를 받고 있거나, 치료를 받을 예정인 대상체, 또는 특정 질환 또는 상태에 대해 훈련된 전문가에 의해 치료를 받는 대상체를 나타낸다.

페이로드 : 본원에 사용된 바와 같이, "페이로드" 또는 "페이로드 영역"은 바이러스 게놈에 의해 또는 그 안에 인코딩된 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 영역 또는 이러한 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 영역의 발현 산물, 예를 들어, 전이유전자, 폴리펩타이드 또는 다중-폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 또는 조절 핵산(modulatory or regulatory nucleic acid)을 나타낸다.

펩타이드 : 본원에 사용된 바와 같이, "펩타이드"는 50개 이하의 아미노산 길이, 예를 들어, 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45개, 또는 50개 아미노산 길이이다.

약제학적으로 허용되는: 어구 "약제학적으로 허용되는"은 타당한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과의 접촉에 사용하기에 적합하고, 합리적인 이익/위험 비에 상응하는 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 나타내기 위해 본원에서 사용된다.

약제학적으로 허용되는 부형제: 본원에 사용된 어구 "약제학적으로 허용되는 부형제"는 환자에게 실질적으로 무독성이고 비-염증성인 특성을 갖는, 본원에 기재된 화합물 이외의 임의의 성분(예를 들어, 활성 화합물을 현탁시키거나 용해시킬 수 있는 비히클)을 나타낸다. 부형제는, 예를 들어, 점착방지제(antiadherent), 산화방지제, 결합제, 코팅제, 압축 조제, 붕해제, 염료(착색제), 완화제, 유화제, 완충제(희석제), 필름 형성제 또는 코팅제, 착향제, 방향제, 활택제(유량 향상제), 윤활제, 보존제, 프린팅 잉크, 흡착제, 현탁제 또는 분산제, 감미제, 및 수화의 물을 포함할 수 있다. 예시적인 부형제는 부틸화 하이드록시톨루엔(BHT), 탄산칼슘, 인산칼슘(이염기성), 칼슘 스테아레이트, 크로스카르멜로스, 가교된 폴리비닐 피롤리돈, 시트르산, 크로스포비돈, 시스테인, 에틸셀룰로스, 젤라틴, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 락토스, 마그네슘 스테아레이트, 말티톨, 만니톨, 메티오닌, 메틸셀룰로스, 메틸 파라벤, 미세결정질 셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리비닐 피롤리돈, 포비돈, 예비젤라틴화된 전분, 프로필 파라벤, 레티닐 팔미테이트, 셸락(shellac), 이산화규소, 나트륨 카복시메틸 셀룰로스, 나트륨 시트레이트, 나트륨 전분 글리콜레이트, 소르비톨, 전분(옥수수), 스테아르산, 수크로스, 탈크, 이산화티탄, 비타민 A, 비타민 E, 비타민 C, 및 자일리톨을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

약제학적으로 허용되는 염: 본 발명은 또한 본원에 기재된 화합물의 약제학적으로 허용되는 염을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, "약제학적으로 허용되는 염"은 모 화합물이 존재하는 산 또는 염기 모이어티를 이의 염 형태로 전환시킴으로써(예를 들어, 유리 염기 그룹을 적절한 유기산과 반응시킴으로써) 변형되는 개시된 화합물의 유도체를 나타낸다. 약제학적으로 허용되는 염의 예는 아민과 같이 염기성 잔기의 무기산 또는 유기산 염; 카복실산과 같이 산성 잔기의 알칼리염 또는 유기염; 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 대표적인 산 부가염은 아세테이트, 아세트산, 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트, 아스파르테이트, 벤젠설포네이트, 벤젠 설폰산, 벤조에이트, 바이설페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르설포네이트, 시트레이트, 사이클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵토네이트, 헥사노에이트, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드로요오다이드, 2-하이드록시-에탄설포네이트, 락토비오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 석시네이트, 설페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔설포네이트, 운데카노에이트, 발레레이트 염 등을 포함한다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리토금속 염은 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등, 및 무독성 암모늄, 4급 암모늄, 및 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 에틸아민 등을 포함하지만, 이에 제한되지 않는 아민 양이온을 포함한다. 본 발명의 약제학적으로 허용되는 염은, 예를 들어, 무독성 무기산 또는 유기산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 무독성 염을 포함한다. 본 발명의 약제학적으로 허용되는 염은 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 모 화합물로부터 통상적인 화학적 방법에 의해 합성될 수 있다. 일반적으로, 상기 염은 물 또는 유기 용매, 또는 이 둘의 혼합물 중에서 이들 화합물의 유리 산 또는 염기 형태를 화학양론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시켜 제조될 수 있으며; 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올, 또는 아세토니트릴과 같은 비수성 매질이 바람직하다. 적합한 염의 목록은 문헌(참조: [Remington's Pharmaceutical Sciences, 17^th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.H. Stahl and C.G. Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008] 및 [Berge et al., Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977)], 이들 각각은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용됨)에서 발견된다.

약제학적으로 허용되는 용매화물: 본원에 사용된 용어 "약제학적으로 허용되는 용매화물"은 적절한 용매 분자가 결정 격자 내로 혼입된 본 발명의 화합물을 의미한다. 적절한 용매는 투여되는 용량에서 생리학적으로 허용된다. 예를 들어, 용매화물은 유기 용매, 물 또는 이들의 혼합물을 포함하는 용액으로부터 결정화, 재결정화 또는 침전에 의해 제조될 수 있다. 적절한 용매의 예로는 에탄올, 물(예를 들어, 일수화물, 이수화물 및 삼수화물), N-메틸피롤리디논(NMP), 디메틸 설폭사이드(DMSO), N,N'-디메틸포름아미드(DMF), N'-디메틸아세트아미드(DMAC), 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논(DMEU), 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라하이드로-2-(1H)-피리미디논(DMPU), 아세토니트릴(ACN), 프로필렌 글리콜, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 2-피롤리돈, 벤질 벤조에이트 등이 있다. 물이 용매인 경우, 용매화물은 "수화물"이라고 한다.

약동학: 본원에 사용된 바와 같이, 살아있는 유기체에 투여되는 물질의 운명의 결정에 관한 분자 또는 화합물의 임의의 하나 이상의 특성을 나타낸다. 약동학은 흡수, 분포, 대사 및 배설 정도 및 속도를 포함한 여러 영역으로 나뉜다. 이는 일반적으로 ADME라고 언급되며 여기서: (A) 흡수는 혈액 순환으로 진입되는 물질의 프로세스이고; (D) 분포는 신체의 체액과 조직을 통한 물질의 분산 또는 보급이고; (M) 대사(또는 생체내변환)는 모 화합물의 딸 대사물로의 비가역적 전환이고; (E) 배설(또는 제거)은 신체로부터 물질의 제거를 나타낸다. 드물게, 일부 약물은 신체 조직에서 비가역적으로 축적된다.

물리화학적: 본원에 사용된 바와 같이, "물리화학적"은 물리적 및/또는 화학적 성질을 갖거나 이와 관련된 것을 의미한다.

예방하는(Preventing): 본원에 사용된 용어 "예방하는" 또는 "예방"은 감염, 질환, 장애 및/또는 병태의 발병을 부분적으로 또는 완전히 지연시키는 것; 특정 감염, 질환, 장애 및/또는 병태의 하나 이상의 증상, 특징 또는 임상 양상의 발병을 부분적으로 또는 완전히 지연시키는 것; 특정 감염, 질환, 장애 및/또는 병태의 하나 이상의 증상, 특징 또는 양상의 발병을 부분적으로 또는 완전히 지연시키는 것; 감염, 특정 질환, 장애 및/또는 병태의 진행을 부분적으로 또는 완전히 지연시키는 것; 및/또는 감염, 질환, 장애 및/또는 병태와 관련된 병리의 발생 위험을 감소시키는 것을 나타낸다.

증식하다: 본원에 사용된 용어 "증식하다"는 성장, 확장 또는 증가하는 것, 또는 성장, 확장 또는 증가를 빠르게 유발하는 것을 의미한다. "증식성"은 증식하는 능력을 갖는 것을 의미한다. "항-증식성"은 증식 특성에 반하거나 이에 부적절한 특성을 갖는 것을 의미한다.

예방적(Prophylactic): 본원에 사용된 바와 같이, "예방적"은 질환의 확산을 방지하기 위해 사용된 치료 또는 행동 과정을 나타낸다.

예방: 본원에 사용된 바와 같이, "예방"은 건강을 유지하고 질환의 확산을 방지하기 위해 취해진 조치를 나타낸다.

관심 단백질: 본원에 사용된 용어 "관심 단백질" 또는 "목적하는 단백질"은 본원에 제공된 것들 및 이의 단편, 돌연변이체, 변이체 및 변형을 포함한다.

근위: 본원에서 사용된 용어 "근위"는 중심 또는 관심 지점 또는 영역에 더 가깝게 위치한 것을 의미한다.

정제된: 본원에 사용된 바와 같이, "정제하다", "정제된", "정제"는 원치 않는 구성요소, 재료 오염, 혼합 또는 불완전으로부터 실질적으로 순수하거나 투명하게 만드는 것을 의미한다. "정제된"은 정제된 상태를 나타낸다. "정제"는 순수하게 하는 만드는 프로세스를 나타낸다.

영역: 본원에서 사용된 용어 "영역"은 구역 또는 일반 영역을 나타낸다. 일부 구현예에서, 단백질 또는 단백질 모듈을 언급할 때, 영역은 단백질 또는 단백질 모듈을 따라 아미노산의 선형 서열을 포함할 수 있거나 3차원 영역, 에피토프 및/또는 에피토프의 클러스터를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 영역은 말단 영역을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "말단 영역"은 주어진 제제의 끝 또는 말단에 위치한 영역을 나타낸다. 단백질을 언급할 때, 말단 영역은 N- 및/또는 C-말단을 포함할 수 있다. N-말단은 유리 아미노 그룹을 갖는 아미노산을 포함하는 단백질의 끝을 나타낸다. C-말단은 유리 카복실 그룹을 갖는 아미노산을 포함하는 단백질의 끝을 나타낸다. N- 및/또는 C-말단 영역은 N- 및/또는 C-말단뿐만 아니라 주변 아미노산을 포함하는 것일 수 있다. 일부 구현예에서, N- 및/또는 C-말단 영역은 약 3개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 100개 아미노산 및/또는 적어도 100개 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, N-말단 영역은 N-말단은 포함하지만 C-말단은 포함하지 않는 임의의 길이의 아미노산을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, C-말단 영역은 C-말단은 포함하지만, N-말단은 포함하지 않는 임의의 길이의 아미노산을 포함할 수 있다.

일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드를 언급할 때, 영역은 폴리뉴클레오타이드를 따라 핵산의 선형 서열을 포함할 수 있거나 3차원 영역, 2차 구조 또는 3차 구조를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 영역은 말단 영역을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "말단 영역"은 주어진 제제의 끝 또는 말단에 위치한 영역을 나타낸다. 폴리뉴클레오타이드를 언급할 때, 말단 영역은 5' 및 3' 말단을 포함할 수 있다. 5' 말단은 유리 포스페이트 그룹을 갖는 핵산을 포함하는 폴리뉴클레오타이드의 끝을 나타낸다. 3' 말단은 유리 하이드록실 그룹을 갖는 핵산을 포함하는 폴리뉴클레오타이드의 끝을 나타낸다. 5' 및 3' 영역은 5' 및 3' 말단뿐만 아니라 주변 핵산을 포함하는 것일 수 있다. 일부 구현예에서, 5' 및 3' 말단 영역은 약 9개 핵산 내지 약 90개 핵산, 약 15개 핵산 내지 약 120개 핵산, 약 30개 핵산 내지 약 150개 핵산, 약 60개 핵산 내지 약 300개 핵산 및/또는 적어도 300개 핵산을 포함한다. 일부 구현예에서, 5' 영역은 5' 말단은 포함하지만 3' 말단은 포함하지 않는 임의의 길이의 핵산을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 3' 영역은 3' 말단은 포함하지만 5' 말단은 포함하지 않는 임의의 길이의 핵산을 포함할 수 있다.

RNA 또는 RNA 분자: 본원에 사용된 용어 "RNA" 또는 "RNA 분자" 또는 "리보핵산 분자"는 리보뉴클레오타이드의 중합체를 나타내며; 용어 "DNA" 또는 "DNA 분자" 또는 "데옥시리보핵산 분자"는 데옥시리보뉴클레오타이드의 중합체를 나타낸다. DNA 및 RNA는 천연적으로, 예를 들어, 각각 DNA 복제 및 DNA 전사에 의해 합성될 수 있거나; 화학적으로 합성될 수 있다. DNA 및 RNA는 단일-가닥(즉, 각각 ssRNA 또는 ssDNA) 또는 다중-가닥(예를 들어, 이중 가닥, 즉, 각각 dsRNA 및 dsDNA)일 수 있다. 본원에 사용된 용어 "mRNA" 또는 "메신저 RNA"는 하나 이상의 폴리펩타이드 사슬의 아미노산 서열을 인코딩하는 단일 가닥 RNA를 나타낸다.

RNA 간섭 또는 RNAi : 본원에 사용된 용어 "RNA 간섭" 또는 "RNAi"는 상응하는 단백질-코딩 유전자의 발현의 억제 또는 간섭 또는 "사일런싱"을 초래하는 RNA 분자에 의해 매개된 서열 특이적 조절 기전을 나타낸다. RNAi는 식물, 동물 및 진균을 포함하는 많은 종류의 유기체에서 관찰되었다. RNAi는 외래 RNA(예를 들어, 바이러스 RNA)를 제거하기 위해 세포에서 자연적으로 발생한다. 천연 RNAi는 다른 유사한 RNA 서열에 분해 기전을 명령하는 유리 dsRNA로부터 절단된 단편을 통해 진행된다. RNAi는 RNA-유도된 사일런싱 복합체(RISC)에 의해 제어되며, 세포질에서 짧은/소형 dsRNA 분자에 의해 개시되며, 여기서 이들은 촉매 RISC 구성요소 아르고너트(argonaute)와 상호작용한다. dsRNA 분자는 세포 내로 외인성으로 도입될 수 있다. 외인성 dsRNA는, dsRNA와 결합하고 이를 절단하여 각각의 말단에 쌍을 이루지 못한 몇몇 돌출부 염기를 갖는 21개 내지 25개의 염기쌍의 이중 가닥 단편을 생성하는 리보뉴클레아제 단백질 다이서를 활성화시킴으로써 RNAi를 개시한다. 이러한 짧은 이중 가닥 단편을 작은 간섭 RNA(siRNA)라고 한다.

샘플: 본원에 사용된 용어 "샘플" 또는 "생물학적 샘플"은 이의 조직, 세포 또는 구성요소 부분(예를 들어, 혈액, 점액, 림프액, 활액, 뇌척수액, 타액, 양수, 양수 제대혈, 소변, 질액 및 정액를 포함하지만 이에 제한되지 않는 체액)의 서브세트를 나타낸다. 샘플은 또한, 예를 들어, 혈장, 혈청, 척수액, 림프액, 피부의 외부 섹션, 호흡기, 장 및 비뇨생식관, 누액, 타액, 모유, 혈액 세포, 종양, 기관을 포함하지만, 이에 제한되지 않는, 전체 유기체 또는 이의 조직, 세포 또는 구성요소 부분의 서브세트, 또는 이의 분획 또는 일부로부터 제조된 균질물, 용해물 또는 추출물을 포함할 수 있다. 샘플은 또한 단백질 또는 핵산 분자와 같은 세포 구성요소를 함유할 수 있는 영양 액체배지 또는 겔과 같은 배지를 나타낸다.

자기-상보적 바이러스 입자: 본원에 사용된 바와 같이, "자기-상보적 바이러스 입자"는 적어도 2가지 구성요소, 단백질 캡시드 및 캡시드 내에 봉입된 자기-상보적 게놈을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열로 구성된 입자이다.

센스 가닥: 본원에 사용된 용어 siRNA 분자의 "센스 가닥" 또는 "제2 가닥" 또는 "패신저 가닥"은 안티센스 가닥 또는 제1 가닥에 상보적인 가닥을 나타낸다. siRNA 분자의 안티센스 및 센스 가닥은 혼성화되어 듀플렉스 구조를 형성한다. 본원에 사용된 바와 같이, "siRNA 듀플렉스"는 사일런싱을 표적으로 하는 유전자의 mRNA의 약 10개 내지 50개의 뉴클레오티드 섹션에 대해 충분한 상보성을 갖는 siRNA 가닥, 및 다른 siRNA 가닥과의 듀플렉스를 형성하기에 충분한 상보성을 갖는 siRNA 가닥을 포함한다.

짧은 간섭 RNA 또는 siRNA : 본원에 사용된 용어 "짧은 간섭 RNA," "소형 간섭 RNA" 또는 "siRNA"는 RNAi를 유도하거나 매개할 수 있는 약 5개 내지 60개의 뉴클레오타이드(또는 뉴클레오티드 유사체)를 포함하는 RNA 분자(또는 RNA 유사체)를 나타낸다. 바람직하게는, siRNA 분자는 약 15개 내지 30개의 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드 유사체, 예를 들어 약 16개 내지 25개의 뉴클레오타이드(또는 뉴클레오타이드 유사체), 약 18개 내지 23개의 뉴클레오타이드(또는 뉴클레오타이드 유사체), 약 19개 내지 22개의 뉴클레오타이드(또는 뉴클레오타이드 유사체)(예를 들어, 19, 20, 21 또는 22개의 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드 유사체), 약 19개 내지 25개의 뉴클레오타이드(또는 뉴클레오타이드 유사체), 및 약 19개 내지 24개의 뉴클레오타이드(또는 뉴클레오타이드 유사체)를 포함한다. 용어 "짧은" siRNA는 5개 내지 23개의 뉴클레오타이드, 바람직하게는 21개의 뉴클레오타이드(또는 뉴클레오타이드 유사체), 예를 들어, 19개, 20개, 21개 또는 22개의 뉴클레오타이드를 포함하는 siRNA를 나타낸다. 용어 "긴" siRNA는 24개 내지 60개의 뉴클레오타이드, 바람직하게는 약 24개 내지 25개의 뉴클레오타이드, 예를 들어, 23개, 24개, 25개 또는 26개의 뉴클레오타이드를 포함하는 siRNA를 나타낸다. 짧은 siRNA는, 일부 경우에, 19개 미만의 뉴클레오타이드, 예를 들어, 16개, 17개 또는 18개의 뉴클레오타이드, 또는 겨우 5개의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있지만, 단 더 짧은 siRNA는 RNAi를 매개하는 능력을 유지한다. 마찬가지로, 긴 siRNA는, 일부 경우에, 26개 초과의 뉴클레오타이드, 예를 들어, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55개, 또는 심지어 60개의 뉴클레오타이드를 포함할 수 있지만, 단 더 긴 siRNA는 짧은 siRNA로의 추가 처리, 예를 들어 효소 처리가 부재한 RNAi 또는 번역 억제를 매개하는 능력을 보유한다. siRNA는 단일 가닥 RNA 분자(ss-siRNAs) 또는 siRNA 듀플렉스라고 불리는 듀플렉스 구조를 형성하기 위해 혼성화되는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하는 이중 가닥 RNA 분자(ds-siRNAs)일 수 있다.

신호 서열: 본원에 사용된 어구 "신호 서열"은 단백질의 수송 또는 국소화를 유도할 수 있는 서열을 나타낸다.

단일 단위 용량: 본원에 사용된 바와 같이, "단일 단위 용량"은 하나의 용량으로/한꺼번에/단일 경로로/단일 접촉점으로, 즉, 단일 투여 사건으로 투여되는 임의의 치료제의 용량이다. 일부 구현예에서, 단일 단위 용량은 개별 투여 형태(예를 들어, 정제, 캡슐, 패치, 로딩된 시린지, 바이알 등)로서 제공된다.

유사성: 본원에 사용된 용어 "유사성"은 중합체 분자 사이, 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드 분자(예를 들어 DNA 분자 및/또는 RNA 분자) 사이 및/또는 폴리펩타이드 분자 사이의 전반적인 관련성을 나타낸다. 중합체 분자의 서로에 대한 유사성 백분율의 계산은 유사성 백분율의 계산이 당해 분야에서 이해되는 바와 같이 보존적 치환을 고려하는 것을 제외하고는 동일성 백분율의 계산과 동일한 방식으로 수행될 수 있다.

분할 용량: 본원에 사용된 바와 같이, "분할 용량"은 단일 단위 용량 또는 1일 총용량을 2회 이상의 용량으로 나눈 것이다.

안정한: 본원에 사용된 바와 같이 "안정한"은 반응 혼합물로부터 유용한 순도까지의 분리를 견디기에 충분히 견고하고, 바람직하게는 효과적인 치료제로 제제화될 수 있는 화합물을 나타낸다.

안정화된: 본원에 사용된 용어 "안정화하다", "안정화된", "안정화 영역"은 안정하게 만들거나 안정화되는 것을 의미한다.

대상체 : 본원에 사용된 용어 "대상체" 또는 "환자"는, 예를 들어, 실험, 진단, 예방 및/또는 치료 목적을 위해 본 발명에 따른 조성물이 투여될 수 있는 임의의 유기체를 나타낸다. 전형적인 대상체는 동물(예를 들어, 포유동물 예를 들어 마우스, 래트, 토끼, 비-사람 영장류 및 사람) 및/또는 식물을 포함한다.

실질적으로: 본원에 사용된 용어 "실질적으로"는 관심 특성 또는 성질의 전체 또는 거의 전체 정도 또는 수준을 나타내는 정성적 조건을 나타낸다. 생물학 분야의 숙련가는 생물학적 및 화학적 현상이 거의 완료되지 않고/않거나 완전성(completeness)으로 진행되지 않거나 또는 절대적인 결과를 달성하거나 회피하지 않을 것임을 이해할 것이다. 따라서 용어 "실질적으로"는 많은 생물학적 및 화학적 현상에 내재된 잠재적 완전성의 부족을 포착하기 위해 본원에 사용된다.

실질적으로 동등한: 용량 사이의 시간차와 관련하여 본원에 사용된 바와 같이, 상기 용어는 +/- 2%를 의미한다.

실질적으로 동시에: 본원에 사용된 바와 같이 그리고 복수의 용량과 관련하여, 상기 용어는 2초 이내를 의미한다.

앓고 있는: 질환, 장애 및/또는 병태를 "앓고 있는" 개체는 질환, 장애 및/또는 병태의 하나 이상의 증상으로 진단되거나 이를 나타낸다.

감수성 있는: 질환, 장애 및/또는 병태에 "감수성 있는" 개체는 질환, 장애 및/또는 병태의 증상으로 진단되지 않고/않거나 증상을 나타내지 않을 수 있지만, 질환 또는 이의 증상이 발생할 경향이 있다. 일부 구현예에서, 질환, 장애 및/또는 병태(예를 들어, 암)에 감수성 있는 개체는 다음 중 하나 이상을 특징으로 할 수 있다: (1) 질환, 장애 및/또는 병태의 발병과 관련된 유전적 돌연변이; 질환, 장애 및/또는 병태의 발병과 관련된 유전적 다형태; (3) 질환, 장애 및/또는 병태와 관련된 단백질 및/또는 핵산의 발현 및/또는 활성 증가 및/또는 감소; (4) 질환, 장애 및/또는 병태의 발병과 관련된 습관 및/또는 생활방식; (5) 질환, 장애 및/또는 병태의 가족력; 및 (6) 질환, 장애 및/또는 병태의 발병과 관련된 미생물로의 노출 및/또는 감염. 일부 구현예에서, 질환, 장애 및/또는 병태에 감수성이 있는 개체는 질환, 장애 및/또는 병태가 발병할 것이다. 일부 구현예에서, 질환, 장애 및/또는 병태에 감수성이 있는 개체는 질환, 장애 및/또는 병태가 발병하지 않을 것이다.

서방형: 본원에 사용된 용어 "서방형"은 특정 기간에 걸친 방출 속도에 부합하는 약제학적 조성물 또는 화합물 방출 프로파일을 나타낸다.

합성: 용어 "합성"은 사람의 손에 의해 생산, 제조 및/또는 제작된 것을 의미한다. 본 발명의 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드 또는 다른 분자의 합성은 화학적이거나 효소적일 수 있다.

표적화 : 본원에 사용된 바와 같이, "표적화"는 표적 핵산에 혼성화되어 목적하는 효과를 유도할 수 있는 핵산 서열의 설계 및 선택 프로세스를 의미한다.

표적화된 세포: 본원에 사용된 바와 같이, "표적화된 세포"는 임의의 하나 이상의 관심 세포를 나타낸다. 상기 세포는 시험관내, 생체내, 동일계 또는 유기체의 조직 또는 기관에서 발견될 수 있다. 유기체는 동물, 바람직하게는 포유동물, 더 바람직하게는 사람, 가장 바람직하게는 환자일 수 있다.

치료제: 용어 "치료제"는, 대상체에게 투여될 때, 치료, 진단 및/또는 예방 효과를 갖고/갖거나 목적하는 생물학적 및/또는 약리학적 효과를 유발하는 임의의 제제를 나타낸다.

치료적 유효량: 본원에 사용된 용어 "치료적 유효량"은, 감염, 질환, 장애 및/또는 병태를 앓고 있거나 이에 감수성 있는 대상체에게 투여될 때, 감염, 질환, 장애 및/또는 병태를 치료하고/하거나 이의 증상을 개선시키고/시키거나 이를 진단하고/하거나 예방하고/하거나 이의 발병을 지연시키는데 충분한 전달될 제제(예를 들어, 핵산, 약물, 치료제, 진단제, 예방제 등)의 양을 의미한다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 단일 용량으로 제공된다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 복수의 용량을 포함하는 투여 요법으로 투여된다. 당업자는 일부 구현예에서, 단위 투여 형태가 이러한 투여 요법의 일부로서 투여될 때 효과적인 양을 포함하는 경우 치료적 유효량의 특정 제제 또는 개체를 포함하는 것으로 간주될 수 있음을 이해할 것이다.

치료적으로 효과적인 결과: 본원에 사용된 용어 "치료적으로 효과적인 결과"는 감염, 질환, 장애 및/또는 병태를 앓고 있거나 이에 감수성 있는 대상체에서 감염, 질환, 장애 및/또는 병태를 치료하고/하거나 이의 증상을 개선시키고/시키거나 이를 진단하고/하거나 예방하고/하거나 이의 발병을 지연시키는데 충분한 결과를 의미한다.

1일 총용량: 본원에 사용된 바와 같이, "1일 총용량"은 24시간 동안 제공되거나 처방되는 양이다. 이는 단일 단위 용량으로 투여될 수 있다.

형질감염: 본원에 사용된 용어 "형질감염"은 외인성 핵산을 세포로 도입하는 방법을 나타낸다. 형질감염 방법은 화학적 방법, 물리적 치료 및 양이온성 지질 또는 혼합물을 포함하지만, 이들에 제한되지 않는다.

치료하는: 본원에 사용된 용어 "치료하는"은 특정 감염, 질환, 장애 및/또는 병태의 하나 이상의 증상 또는 특징을 부분적으로 또는 완전히 완화하고/하거나, 개선하고/하거나, 향상시키고/시키거나, 경감시키고/시키거나, 이의 발병을 지연시키고/시키거나, 이의 진행을 억제하고/하거나, 이의 중증도를 감소시키고/시키거나 이의 발생률을 감소시키는 것을 나타낸다. 예를 들어, 암의 "치료"는 종양의 생존, 성장 및/또는 확산을 억제하는 것을 지칭할 수 있다. 치료제는 질환, 장애 및/또는 병태의 징후를 나타내지 않는 대상체 및/또는 질환, 장애 및/또는 병태와 관련된 병리의 발생 위험을 감소시킬 목적으로 질환, 장애 및/또는 병태의 초기 징후만을 나타내는 대상체에게 투여될 수 있다.

변형되지 않은: 본원에 사용된 바와 같이, "변형되지 않은"은 임의의 방식으로 변화되기 전의 임의의 물질, 화합물 또는 분자를 나타낸다. 변형되지 않은은 생체분자의 야생형 또는 고유 형태를 나타낼 수 있지만, 항상 그렇지는 않다. 분자는 일련의 변형을 겪을 수 있으며, 이에 의해 각각의 변형된 분자는 후속적 변형을 위한 "변형되지 않은" 출발 분자로서 작용할 수 있다.

벡터: 본원에 사용된 바와 같이, "벡터"는 이종 분자를 수송하거나, 형질도입시키거나 또는 달리 이의 운반체로서 작용하는 임의의 분자 또는 모이어티이다. 본 발명의 벡터는 재조합적으로 생성될 수 있고 아데노-관련 바이러스(AAV) 모 또는 기준 서열에 기반할 수 있고/있거나 이를 포함할 수 있다. 상기 모 또는 기준 AAV 서열은 벡터의 조작을 위한 최초, 제2, 제3 또는 후속 서열로서 작용할 수 있다. 비제한적인 예에서, 상기 모 또는 기준 AAV 서열은 다음 서열 중 임의의 하나 이상을 포함할 수 있다: 폴리펩타이드 또는 다중-폴리펩타이드를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열(상기 서열은 야생형이거나 야생형으로부터 변형될 수 있고, 상기 서열은 단백질, 단백질 도메인 또는 단백질의 하나 이상의 서브유닛의 전장 또는 부분 서열을 인코딩할 수 있음); 조절(modulatory) 또는 조절(regulatory) 핵산을 포함하는 폴리뉴클레오타이드(상기 서열은 야생형이거나 야생형으로부터 변형될 수 있음); 및 야생형 서열로부터 변형될 수 있거나 변형되지 않을 수 있는 전이 유전자. 이러한 AAV 서열은 하나 이상의 코돈(핵산 수준에서) 또는 아미노산(폴리펩타이드 수준에서)의 "공여체" 서열 또는 하나 이상의 코돈(핵산 수준에서) 또는 아미노산(폴리펩타이드 수준에서)의 "수용체" 서열로서 작용할 수 있다.

바이러스 게놈: 본원에 사용된 바와 같이, "바이러스 게놈" 또는 "벡터 게놈"은 적어도 하나의 역위 말단 반복부(ITR) 및 적어도 하나의 인코딩된 페이로드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드이다. 바이러스 게놈은 적어도 하나의 페이로드 사본을 인코딩한다.

VII. 실시예

실시예 1. AAV 입자의 제조 및 정제

본원에 기재된 AAV 입자는 당업계에 공지된 방법, 예를 들어 삼중 형질감염 또는 바큘로바이러스 매개된 바이러스 생산을 사용하여 제조될 수 있다. 당업계에 공지된 임의의 적합한 허용 또는 패키징 세포가 벡터를 생성하는데 사용될 수 있다. 포유동물 세포가 종종 바람직하다. 복제-결함 헬퍼 바이러스, 예를 들어, 293 세포 또는 다른 E1a 트랜스-보완 세포로부터 결실된 기능을 제공하는 트랜스-보체 패키징 세포주가 또한 바람직하다.

유전자 카세트는 파르보바이러스(예를 들어, AAV) cap 및 rep 유전자의 일부 또는 전부를 함유할 수 있다. 그러나, 바람직하게는 cap 및 rep 기능의 일부 또는 전부는 캡시드 및/또는 Rep 단백질을 인코딩하는 패키징 벡터(들)를 세포로 도입함으로써 트랜스로 제공된다. 가장 바람직하게는, 유전자 카세트는 캡시드 or Rep 단백질을 인코딩하지 않는다. 대안적으로, cap 및/또는 rep 유전자를 발현시키도록 안정적으로 형질전환된 패키징 세포주가 사용된다.

재조합 AAV 바이러스 입자는, 일부 경우에, US20160032254(이의 내용은 참조로 인용됨)에 기재된 절차에 따라 배양물 상청액으로부터 생성되고 정제된다. 생산은 또한, 293T 세포, sf9 곤충 세포, 삼중 형질감염 또는 임의의 적합한 생산 방법을 사용하는 것을 포함하여 당업계에 공지된 방법을 수반할 수 있다.

일부 경우에, 293개 세포는 AAV, 즉 AAV2 rep, 아데노바이러스 헬퍼 작제물 및 ITR 플랭킹된 전이유전자 카세트의 생산에 필요한 플라스미드를 갖는 CaPO4로 형질감염된다. AAV2 rep 플라스미드는 또한 연구중인 특정 바이러스의 cap 서열을 함유한다. DMEM 함유 혈청에서 발생하는 형질감염 후 24시간에 배지를 혈청이 있거나 없는 새로운 배지로 교체한다. 형질감염 후 삼(3)일째에, 293개 부착 세포의 배양 배지로부터 샘플을 채취한다. 이어서 세포를 긁어내어 용기로 옮긴다. 세포 펠렛을 제거하기 위해 원심분리한 후, 스크래핑 후 상청액으로부터 제2 샘플을 채취한다. 다음으로, 세포 용해는 3회 연속 동결-해동 사이클(-80℃ 내지 37℃)에 의해 달성된다. 세포 파편이 제거되고 시료 3이 배지에서 채취된다. Taqman^TM PCR에 의한 DNase 내성 게놈 적정에 의해 샘플을 AAV 입자에 대해 정량화한다. 이러한 형질감염으로부터의 총 생산 수율은 샘플 3의 입자 농도와 같다.

AAV 입자 역가는 게놈 사본 수(밀리리터당 게놈 입자)에 따라 측정된다. 게놈 입자 농도는 이전에 보고된 벡터 DNA의 Taqman^TM PCR을 기준으로 한다(문헌 [Clark et al. (1999) Hum. Gene Ther., 10:1031-1039]; [Veldwijk et al. (2002) Mol. Ther., 6:272-278]).

실시예 2. 조직 특이적 발현

조직에서 다양한 인코딩된 페이로드의 발현을 평가하기 위해, 편재하고 조직-특이적인 프로모터의 패널에 의해 구동되는 인코딩된 서열을 보유하는 일련의 AAV 입자가 제조된다. 이들 입자는 적절한 경로, 예를 들어, 단일 정맥내 주사를 통해 특정 조직에, 예를 들어 전신으로 투여되고, 이 표적 조직에서 각각의 프로모터뿐만 아니라 페이로드의 상대적인 발현 가능성을 결정하기 위해 발현이 모니터링된다. 페이로드 생산의 측정은 표준 기술, 예를 들어 ELISA를 사용하여 수행된다.

일부 경우에, 사이토메갈로바이러스 전초기 프로모터(CMV), 키메라 치킨-베타-액틴(CAG) 및 유비퀴틴 C(UBC), CBA, H1, αMHC, cTnT 및 CMV-MLC2k 프로모터가 강력한 발현을 제공한다.

실시예 3. VOY101 - GFP 벡터를 이용한 정맥내 치료 후 생체내 마우스 생체분포 및 발현 수준

아데노-관련 캡시드 변이체(VOY101)는 뇌 및 심장으로의 광범위한 유전자 전달을 위해 조작되었다. AAV2 야생형 역위 말단 반복부(ITR), CMV 인핸서 및 치킨 베타-액틴 프로모터(CBA)로 구성된 합성 프로모터, 향상된 녹색 형광 단백질 변이체(eGFP) 및 토끼 글로빈 폴리아데닐화 서열을 포함하는 바이러스 게놈을 사용하여 HEK293T 세포로의 삼중 형질감염에 의해 VOY101 또는 AAV9의 캡시드 혈청형을 갖는 AAV 입자를 생성하였다. 바이러스 게놈의 ITR 내지 ITR 서열은 서열번호 1799로 제공된다.

단일-가닥 AAV 입자는 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS) 중에서 정제되고 제제화된 후 5.0×10¹² vg/mL의 벡터 농도로 ~4 ml/kg에서 측면 꼬리 정맥 주사를 통해 6주 내지 7주령된 성인 C57Bl/6J 마우스에게 투여되었다. 총 용량은 2.0×10¹³ VG/kg이었다. 대조 그룹은 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS)로 처리되었다.

투여 후 대략 28일째에, 몇 개의 조직 샘플을 수집하였다. GFP 단백질 정량화 또는 벡터 게놈 정량화를 위해 할당된 조직 샘플을 액체 질소에서 급속 냉동시켰다. 항-GFP 면역조직화학을 위해 할당된 조직 샘플을 밤새 4% 파라포름알데히드에 후-고정시켰다. 항-GFP 항체에 의한 면역조직화학 염색 및 후속적인 DAB 기질 현상에 의한 조직 샘플의 분석은 VOY101-GFP 입자를 포함한 전신 주사가 투여된 AAV9-GFP 입자와 비교하여 뇌 및 척수 전체에 걸쳐 GFP 수준을 증가시켰음을 보여주었다.

GFP 단백질 수준을 ELISA로 측정하고 총 단백질 중 GFP/mg로 보고하였고, 결과는 표 13에 나타나 있다. CBA 프로모터의 CMV 인핸서 영역에 대한 프로브 세트를 사용하여 벡터 게놈 디지털 PCR 정량화를 수행하고, 숙주 TFRC(트랜스페린 수용체 단백질 1)로 정규화하고, 이배체 세포당 벡터 게놈(VG/DC)으로 표현하였고, 결과는 표 14 및 15에 나타나 있다. 표 13, 14 및 15에서, "BLLQ"는 정량화 하한 미만을 의미한다.

2.0 x 10¹³ VG/kg의 정맥내 주사 후 28일째에 마우스 선조체에서, VOY101-GFP는 AAV9-GFP보다 GFP 수준이 58배 더 높았고 벡터 게놈 분포가 101배 더 높았다. 2.0 x 10¹³ VG/kg의 정맥내 주사 후 28일째에 마우스 척수에서, VOY101-GFP는 AAV9-GFP보다 GFP 수준이 74배 더 높았고 벡터 게놈 분포가 104배 더 높았다. 2.0 x 10¹³ VG/kg의 정맥내 주사 후 28일째에 마우스 간에서, VOY101-GFP는 AAV9-GFP보다 GFP 수준이 4.9배 더 낮았고 벡터 게놈 분포가 5.4배 더 낮았다.

실시예 4. VOY101 - FXN AAV 입자의 정맥내 전달

A. VOY101 - FXN AAV 입자로의 정맥내 치료 후 생체내 마우스 생체분포 및 발현 수준

마카카 파시쿨라리스(macaca fascicularis)(사이노몰구스 원숭이(Cynomolgus monkey)) 프라탁신(cFXN) 전이유전자를 갖는 바이러스 게놈을 사용할 때 뇌 및 심장으로의 광범위한 유전자 전달이 또한 관찰되었다. AAV2 야생형 ITR, CMV 인핸서 및 치킨 베타-액틴 프로모터(CBA)로 구성된 합성 프로모터, 마카카 파시쿨라리스 프라탁신(cFXN) 및 사람 성장 호르몬 폴리아데닐화 서열을 포함하는 바이러스 게놈을 사용하여 HEK293T 세포로의 삼중 형질감염에 의해 VOY101 또는 AAV9의 캡시드 혈청형을 갖는 AAV 입자를 생성하였다. 바이러스 게놈의 ITR 내지 ITR 서열은 서열번호 1801로 제공된다.

단일-가닥 AAV 입자는 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS) 중에서 정제되고 제제화된 후 1.0×10¹² vg/mL의 벡터 농도로 ~4 ml/kg에서 측면 꼬리 정맥 주사를 통해 9주령된 성인 C57Bl/6J 마우스에게 투여되었다. 총 용량은 4.2×10¹² VG/kg이었다. 대조 그룹은 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS)로 처리되었다.

AAV 입자 또는 비히클 투여 후 7일째에, 7개의 조직 샘플을 수집하였다. 조직 샘플을 액체 질소에서 급속 냉동시켰다. CBA 프로모터의 CMV 인핸서 영역에 대한 프로브 세트를 사용하여 벡터 게놈 디지털 PCR 정량화를 수행하고, 숙주 TFRC로 정규화하고, 이배체 세포당 벡터 게놈(VG/DC)으로 표현하였다. cFXN 단백질 수준은 ELISA에 의해 측정되고, 총 단백질 중의 ng cFXN/mg으로 보고되었다. cFXN 단백질 수준 및 벡터 게놈 분포는 표 16 및 17에 나타나 있다. 표 16 및 17에서, "BLLQ"는 정량화 하한 미만을 의미한다.

4.2 x 10¹² vg/kg의 정맥내 주사 후 7일째에 마우스 피질에서, VOY101-cFXN은 AAV9-cFXN보다 벡터 게놈이 165배 더 높았고 AAV9-cFXN보다 cFXN 단백질 발현이 적어도 234배 더 높았다. 4.2 x 10¹² vg/kg의 정맥내 주사 후 7일째에 마우스 요추 척수에서, VOY101-cFXN은 AAV9-cFXN보다 벡터 게놈이 336배 더 높았고 cFXN 단백질 발현이 적어도 640배 더 높았다.

4.2 x 10¹² vg/kg의 정맥내 주사 후 7일째에 후근 신경절에서, VOY101-cFXN은 AAV9-cFXN보다 벡터 게놈이 11.8배 더 높았고 cFXN 단백질 발현이 112배 더 높았다. 4.2 x 10¹² vg/kg의 정맥내 주사 후 7일째에 삼차 신경절에서, VOY101-cFXN은 AAV9-cFXN보다 벡터 게놈이 61배 더 높았고 cFXN 단백질 발현이 적어도 16배 더 높았다.

4.2 x 10¹² VG/Kg의 정맥내 주사 후 7일째에 심장에서, VOY101-cFXN은 AAV9-cFXN보다 벡터 게놈이 2.7배 더 높았고 cFXN 단백질 발현이 9.4배 더 높았으며, 이는 AAV9에 비해 상당히 더 높은 발현을 나타낸다.

B. VOY101 - FXN -HA AAV 입자로의 치료 후 cFXN 발현의 비-사람 영장류에서의 생체내 연구

VOY101-cFXN-HA의 IV 투여 후 CNS 내에서 cFXN 발현을 평가하기 위해 사이노몰구스 원숭이(마카카 파시쿨라리스)에서의 연구를 수행하였다.

HA-태깅된 사이노몰구스 프라탁신(cFXN-HA)을 포함하는 바이러스 게놈을 단일 가닥 발현 벡터로 조작하였다. AAV2 야생형 ITR, CMV 인핸서 및 치킨 베타-액틴 프로모터(CBA)로 구성된 합성 프로모터, HA-태그에 대한 3' 서열을 갖는 마카카 파시쿨라리스 프라탁신(cFXN) 및 사람 성장 호르몬 폴리아데닐화 서열을 포함하는 바이러스 게놈을 사용하여 HEK293T 세포로의 삼중 형질감염에 의해 VOY101의 캡시드 혈청형을 갖는 AAV 입자를 생성하였다. 바이러스 게놈의 ITR 내지 ITR 서열은 서열번호 1801로 제공된다.

단일-가닥 AAV 입자(VOY101-cFXN-HA)는 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS) 중에서 정제되고 제제화된 후 1.34×10¹² vg/mL의 벡터 농도, 및 6.7×10¹² VG/kg의 총 용량으로 5 ml/kg에서 복재 정맥 주사를 통해 비-사람 영장류(마카카 파시쿨라리스)에게 투여되었다. 또한, CBA 프로모터, 및 cFXN-HA를 포함하는 바이러스 게놈을 갖는 단일-가닥 AAV9(AAV9-cFXN-HA)를 2×10¹³ VG/kg의 용량으로 정맥내 주사로 시험하였다.

AAV 입자 투여 후 대략 28일째에, 몇 개의 조직 샘플을 수집하였다. cFXN-HA 단백질 정량화 또는 벡터 게놈 정량화를 위해 할당된 조직 샘플을 액체 질소에서 스냅-동결(snap-frozen)시켰다. 항-HA 면역조직화학을 위해 할당된 조직 샘플을 2℃ 내지 8℃에서 12시간 내지 72시간 동안 4% 파라포름알데히드에 후-고정시켰다. 조직 섹션(20μm 두께)을 HA 태그에 대한 토끼 단클론 항체(1:1000 또는 1:2000)로 염색하고, 이어서 염소-항-토끼 IgG 비오티닐화된 2차 항체(1:1000)로 염색한 후 DAB와 니켈로 현상하였다. VOY101-cFXN의 IV 투여 후 다수의 CNS 영역에서 cFXN-HA 염색이 관찰되었다. 이러한 영역은 척수(경추, 흉추 및 요추 구역), 뇌간 핵, 소뇌(소뇌 치상핵 포함), 시상, 미상핵, 및 대뇌 피질을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 6.7×10¹² VG/kg의 VOY101-cFXN-HA를 IV 투여한 후, 특히 전각(ventral horn) 운동 뉴런에서 척수의 전체 문측-미추 범위를 따라 균일한 HA 염색이 관찰되었다. VOY101-cFXN-HA의 3배 더 낮은 용량에도 불구하고 척수 및 특히 전각 운동 뉴런은 AAV9-cFXN-HA보다 VOY101-cFXN-HA로 훨씬 더 크게 표지되었다. 비히클-처리된 대조군 비-사람 영장류는 본질적으로 검출가능한 배경 염색을 나타내지 않았다.

운동 뉴런을 포함하여, 요추 전각에서의 HA 염색은 IV VOY101-cFXN-HA(6.7×10¹² VG/kg) 후 유사한 용량의 단일-가닥 rh10 벡터 및 cFXN-HAmf 포함하는 바이러스 게놈(AAVrh10-FXN-HA)의 IT 투여와 비교하여 유사하였다.

CBA 프로모터의 CMV 인핸서 영역에 대한 프로브 세트를 사용하여 벡터 게놈 디지털 PCR 정량화를 수행하고, 숙주 RnaseP로 정규화하고, 이배체 세포당 벡터 게놈(VG/DC)으로 표현하였다. cFXN-HA 단백질 수준을 ELISA로 측정하였다. cFXN-HA 단백질 수준(총 단백질 중의 ng cFXN-HA/mg) 및 벡터 게놈 분포(VG/DC)는 표 18에 나타나 있다. 표 18에서, "BLLQ"는 정량화 하한 미만을 의미하며, "NA"는 분석되지 않음을 의미한다.

이러한 결과는, 6.7 x 10¹² VG/kg의 정맥내 주사 후 28일째에 비-사람 영장류(NHP)에서, VOY101-cFXN-HA가 뇌 형질도입을 초래했음을 보여준다. 척수(경추, 흉추 및 요추 구역) 및 뇌간을 포함하는 다수의 CNS 영역에서 상당한 수준의 cFXN-HA 단백질이 검출되었다. IV 투여 후 척수(경추 및 흉추 구역), 뇌간, 및 피질을 포함하는 다수의 CNS 영역에서 상당한 수준의 벡터 게놈이 검출되었다.

C. PHP.B- FXN -HA AAV 입자로의 치료 후 비-사람 영장류에서 cFXN 발현의 생체내 생체분포 및 발현 수준

PHP.B-cFXN-HA의 IV 투여 후 CNS 내에서 cFXN 발현을 평가하기 위해 사이노몰구스 원숭이(마카카 파시쿨라리스)에서의 용량-반응 연구를 수행하였다.

HA-태깅된 사이노몰구스 프라탁신(cFXN-HA)을 포함하는 바이러스 게놈을 단일 가닥 발현 벡터로 조작하였다. AAV2 야생형 ITR, CMV 인핸서 및 치킨 베타-액틴 프로모터(CBA)로 구성된 합성 프로모터, HA-태그에 대한 3' 서열을 갖는 마카카 파시쿨라리스 프라탁신(cFXN), miR-122 표적 서열의 삼중 반복부(전이유전자 간 발현을 감소시키기 위해) 및 사람 성장 호르몬 폴리아데닐화 서열을 포함하는 바이러스 게놈을 사용하여 HEK293T 세포로의 삼중 형질감염에 의해 PHP.B의 캡시드 혈청형을 갖는 AAV 입자를 생성하였다. 바이러스 게놈의 ITR 내지 ITR 서열은 서열번호 1802로 제공된다.

단일-가닥 AAV 입자는 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS) 중에서 정제되고 제제화된 후 1.54×10¹¹ 내지 4.75×10¹² vg/mL의 벡터 농도로 5 ml/kg에서 복재 정맥 주사를 통해 비-사람 영장류(마카카 파시쿨라리스)에게 투여되었다. 동물에게 6.32×10¹¹, 2.0×10¹², 또는 2.0×10¹³, VG/kg을 투여하였다.

AAV 입자 투여 후 대략 28일째에, 몇 개의 조직 샘플을 수집하였다. cFXN-HA 단백질 정량화 또는 벡터 게놈 정량화를 위해 할당된 조직 샘플을 스냅 동결시켰다. 항-HA 면역조직화학을 위해 할당된 조직 샘플을 2℃ 내지 8℃에서 12시간 내지 72시간 동안 4% 파라포름알데히드에 후-고정시켰다. 단일 표지를 위해, 조직 섹션(20μm 두께)을 HA 태그에 대한 토끼 단클론 항체(1:1000 또는 1:2000)로 염색하고, 이어서 염소-항-토끼 IgG 비오티닐화된 2차 항체(1:1000)로 염색한 후 DAB와 니켈로 현상하였다. 2×10¹³ vg/kg에서 PHP.B-cFXN-HA의 IV 투여 후 다수의 CNS 영역에서 HA 염색이 관찰되었다. 이러한 영역은 척수(경추, 흉추 및 요추 구역), 소뇌(치상핵 포함), 시상, 선조체, 흑질, 및 감각 및 운동 피질을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 또한, HA 염색은 흑질, 치상핵 및 시상에서의 뉴런 형태의 것들을 포함하여, 다수의 CNS 영역 내 다수의 뉴런의 형질도입을 보여주었다. 또한, 척수, 운동 및 감각 피질, 및 선조체에서의 뉴런 형태의 세포는 HA-면역반응성이었다.

HA 태그 및 뉴런 마커 NeuN에 대한 이중 표지는 발색 방법을 사용하여 수행되었다. 조직 섹션(20μm 두께)을 HA 태그에 대한 토끼 단클론 항체(1:1000)로 염색하고, 이어서 염소-항-토끼 IgG 비오티닐화된 2차 항체(1:1000)로 염색한 후 DAB(니켈 없이)로 현상하였다. 이어서 상기 섹션을 NeuN에 대한 마우스 단클론 제2 1차 항체로 염색한 후 염소-항-마우스 IgG 비오티닐화된 2차 항체로 염색하였다. 이어서 NeuN 신호는 녹색 발색체로 검출되었다. 다수의 HA+ 세포는 뉴런 마커 NeuN으로 이중-표지되었다. 이러한 결과는 2×10¹³ VG/kg에서 PHP.B-cFXN-HA를 정맥내 주사한 후 소뇌 치상핵의 뉴런이 HA 태그에 대해 표지되었다는 것을 입증한다. 따라서, 사이노몰구스 원숭이에서 2×10¹³ vg/kg의 정맥내 투여 후, 소뇌 치상핵의 뉴런이 형질도입되고 전이유전자를 발현시킨다.

요추 후근 신경절에서 HA 태그의 발현은 큰 감각 뉴런(40 ㎛ 초과) 및 작은 감각 뉴런 둘 다에 존재하였으며, 표지는 6.32×10¹¹, 2.0×10¹², 또는 2.0×10¹³, VG/kg의 PHP.B-cFXN-HA의 IV 주사로 용량-의존적 방식으로 증가하였다.

CBA 프로모터의 CMV 인핸서 영역에 대한 프로브 세트를 사용하여 벡터 게놈 디지털 PCR 정량화를 수행하고, 숙주 RnaseP로 정규화하고, 이배체 세포당 벡터 게놈(VG/DC)으로 표현하였다. cFXN-HA 단백질 수준을 ELISA로 측정하였다. PHP.B 캡시드 혈청형에 대한 cFXN-HA 단백질 수준(총 단백질 중의 ng cFXN-HA/mg) 및 벡터 게놈 분포(VG/DC)는 표 19에 나타나 있다. 표 19에서, "BLLQ"는 정량화 하한 미만을 의미하며, "NA"는 분석되지 않음을 의미한다.

요약하면, PHP.B-cFXN-HA의 정맥내 주사 후 28일째에 비-사람 영장류(NHP)에서, 3개의 모든 용량 수준은 뇌 형질도입을 초래하였다. 척수(경추, 흉추 및 요추 구역), 뇌간, 및 소뇌를 포함하는 다수의 CNS 영역에서 상당한 수준의 cFXN-HA 단백질이 검출되었다. IV 투여 후 척수 (경추, 흉추 및 요추 구역), 선조체, 뇌간, 소뇌 및 전두엽 피질을 포함하는 다수의 CNS 영역에서 상당한 수준의 벡터 게놈이 검출되었다. 척수, 뇌간, 감각 피질, 운동 피질, 소뇌, 시상, 및 흑질과 같은 영역을 포함하여, NHP CNS로의 상당한 유전자 전달이 관찰되었고, 이러한 영역에서 뉴런 형태의 세포는 전이유전자 발현을 나타냈다. 또한, 후근 신경절 및 심장은 용량-의존적 전이유전자 발현을 나타냈고, 후근 신경절의 감각 뉴런은 형질도입을 나타냈다.

D. VOY101 - FXN -HA AAV 입자로의 치료 후 cFXN 발현의 비-사람 영장류에서의 생 체내 용량 의존적 연구

단일 가닥 VOY101-cFXN-HA의 2가지 상이한 IV 용량 수준 후 CNS 내에서 cFXN 발현을 평가하기 위해 사이노몰구스 원숭이(마카카 파시쿨라리스)에서의 연구를 수행하였다.

HA-태깅된 사이노몰구스 프라탁신(cFXN-HA)을 포함하는 바이러스 게놈을 단일 가닥 발현 벡터로 조작하였다. AAV2 야생형 ITR, CMV 인핸서 및 치킨 베타-액틴 프로모터(CBA)로 구성된 합성 프로모터, HA-태그에 대한 3' 서열을 갖는 마카카 파시쿨라리스 프라탁신(cFXN) 및 사람 성장 호르몬 폴리아데닐화 서열을 포함하는 바이러스 게놈을 사용하여 VOY101의 캡시드 혈청형을 갖는 AAV 입자를 생성하였다. 바이러스 게놈의 ITR 내지 ITR 서열은 서열번호 1801로 제공된다.

단일-가닥 AAV 입자는 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS) 중에서 정제되고 제제화된 후 6.7×10¹² VG/kg 또는 4.9×10¹³ VG/kg VOY101-cFXN-HA의 총 용량으로 5 ml/kg에서 복재 정맥 주사를 통해 비-사람 영장류(마카카 파시쿨라리스)에게 투여되었다. 비히클 음성 대조 그룹을 또한 평가하였다.

AAV 입자 투여 후 대략 28일째에, 몇 개의 조직 샘플을 수집하였다. cFXN-HA 단백질 정량화 또는 벡터 게놈 정량화를 위해 할당된 조직 샘플을 스냅-동결시켰다. 항-HA 면역조직화학을 위해 할당된 조직 샘플을 2℃ 내지 8℃에서 12시간 내지 72시간 동안 4% 파라포름알데히드에 후-고정시켰다. 조직 섹션(20μm 두께)을 HA 태그에 대한 토끼 단클론 항체(1:1000 또는 1:2000)로 염색하고, 이어서 염소-항-토끼 IgG 비오티닐화된 2차 항체(1:1000)로 염색한 후 DAB와 니켈로 현상하였다.

CBA 프로모터의 CMV 인핸서 영역에 대한 프로브 세트를 사용하여 벡터 게놈 디지털 PCR 정량화를 수행하고, 숙주 TFRC로 정규화하고, 세포당 벡터 게놈(VG/세포)으로 표현하였다. VOY101-cFXN-HA에 대한 벡터 게놈 분포(평균 ± 표준 편차)는 표 20에 나타나 있다. 표 20에서, SC-C는 경추 척수이고 SC-L은 요추 척수이다.

VOY101-cFXN-HA의 IV 투여 후, 특히 전각 운동 뉴런에서 척수의 전체 문측-미추 범위를 따라 균일한 HA 염색이 관찰되었다. VOY101-cFXN-HA 4.9×10¹³ VG/kg의 용량을 투여받은 동물의 경추(C5), 흉추(T12) 및 요추(L4) 척수에서의 HA 염색은 특히 전각 운동 뉴런에서 척수의 모든 문측-미추 수준에서 강력한 HA 염색을 나타냈다(도 5). 운동 피질, 올리브핵을 포함하는 뇌간, 해마, 흑질 및 외측 슬상핵, 및 치상핵을 포함하는 심부 소뇌 핵에서 뉴런 형태의 것들을 포함하여 수많은 HA+ 세포가 VOY101-cFXN-HA 4.9×10¹³ VG/kg의 용량으로 투여받은 동물에서 관찰되었다. 비히클-처리된 대조군은 본질적으로 검출되지 않거나 매우 낮은 배경 염색을 나타냈다.

실시예 5. 프리드리히 실조증의 치료를 위한 VOY101-FXN

A. 프리드리히 실조증의 마우스 모델에서 VOY101-FXN의 정맥내 투여를 통한 생체내 분포, 발현 및 효능 연구

사람 프라탁신을 인코딩하는 핵산을 포함하는 선택된 바이러스 게놈은 단일 가닥 VOY101 캡시드로 설계되고 패키징된다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터(CMVie 인핸서, CBA, 또는 CMV, 프라탁신 프로모터, 또는 절단된 CBA 또는 절단된 CMV 프로모터, 및 사람 베타 글로빈 인트론 포함), hFXN cDNA 서열, 사람 성장 호르몬 polyA 서열, 스터퍼(stuffer) 서열로서 사람 알부민 단편, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈은 VOY101 캡시드로 패키징되고, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 정제되고 제제화된다.

7주령이고, 성별 및 리터(Litter)에 대해 균형을 맞춘 대략 10마리 마우스/그룹의 6개의 그룹에 정맥내 주사를 통해 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS; 2개의 그룹), 또는 저용량(2개의 그룹) 또는 고용량(2개의 그룹) 수준(체중 1kg당 대략 6.3 x 10¹² vg/kg 내지 2 x 10¹³ vg)의 VOY101-FXN 벡터를 투여한다.

마우스에서 VOY101-FXN의 효능, 분포 및 발현을 시험하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 사지 근전도검사(limb electromyography), 노치 시편 보행 시험(notched bar walking test), 끈 매달기 시험(string hanging test), 로타로드 시험(rotarod test), 체중 및/또는 생존이 포함된다. 다른 판독값은 ELISA, PCR, 면역조직화학 및 동일계 혼성화에 의한 조직(예를 들어 후근 신경절, 심장, 소뇌, 척수)에서의 FXN 단백질 및 mRNA 발현, 및 조직(후근 신경절) 섹션에서 미토콘드리아 효소 기능의 동일계 평가를 포함한다. 상이한 조직에서의 벡터 게놈 수준은 PCR 및 ISH에 의해 결정된다.

3개의 동물 그룹(비히클, 저용량, 고용량)을 18주에 안락사시킨다. 생존에 대한 영향을 평가하기 위해 남아있는 3개의 동물 그룹(비히클, 저용량, 고용량)을 6개월 이상 유지한다. 대조 그룹(n=10/그룹)은 야생형 마우스 및 기준 벡터가 투여된 질환 모델 마우스를 포함한다.

hFXN 벡터를 투여받은 동물의 표적 조직 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, DRG, 소뇌, 척수 및 심장에서 사람 프라탁신(hFXN)의 분포 및 발현, 및 벡터 게놈 분포는 hFXN 발현에 대해 ELISA, PCR, ISH, IHC로 측정되고 벡터 게놈 분석에 대해 PCR 및 ISH로 측정된다. 사람 프라탁신 분석(ELISA, PCR, ISH, IHC에 의한) 결과, hFXN 벡터의 전달시, 표적 조직 예를 들어, DRG, 소뇌, 척수 및 심장에서의 발현이 표적 조직으로의 분포와 함께 일어난다는 것이 입증된다. 미토콘드리아 효소 활성의 동일계 평가 결과, hFXN 벡터 전달시, DRG 슬라이스에서 활성이 증가된다는 것을 보여준다. 근전도검사, 노치 시편, 끈 매달기 및 로타로드 시험은 비히클 대조군 동물보다 개선된 성능을 입증한다.

B. 비-사람 영장류에서 VOY101-FXN의 정맥내 투여를 통한 생체내 분포 및 발현 연구

사람 프라탁신을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 선택된 바이러스 게놈은 단일 가닥(ss) VOY101 캡시드로 설계되고 패키징된다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 단일 가닥 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터(CMVie 인핸서, CBA, 또는 CMV, 프라탁신 프로모터, 또는 절단된 CBA 또는 절단된 CMV 프로모터, 및 사람 베타 글로빈 인트론 포함), hFXN cDNA 서열, 사람 성장 호르몬 polyA 서열, 스터퍼 서열로서 사람 알부민 단편, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈은 VOY101 캡시드로 패키징되고, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 정제되고 제제화된다.

그룹당 각 성별의 적어도 하나의 동물이 있는, 대략 3살 이상의, 대략 3마리 사이노몰구스 원숭이/그룹의 8개의 그룹에 정맥내 주사를 통해 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS; 2개의 그룹), 또는 저용량(2개의 그룹) 또는 고용량(2개의 그룹) 수준(체중 1kg당 대략 6.7 x 10¹² vg/kg 내지 6 x10¹³ vg)의 VOY101-FXN 벡터를 투여한다.

NHP에서 VOY101-FXN의 효능, 분포 및 발현을 시험하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 시간 경과에 따른 체중 측정, 임상적 모니터링, 조직병리학 및 혈중 안전성 패널 시험(blood safety panel testing)이 포함된다. 다른 판독값은 ELISA, PCR, 면역조직화학 및 동일계 혼성화에 의해 평가된 바와 같은 조직(예를 들어 후근 신경절, 심장, 소뇌, 척수)에서의 FXN 단백질 및 mRNA 발현을 포함한다. 상이한 조직에서의 벡터 게놈 수준은 PCR 및 ISH로 측정된다.

3개의 동물 그룹(비히클, 저용량, 고용량)을 4주에 안락사시킨다. 장기 유전자 발현을 평가하기 위해 남아있는 3개의 동물 그룹(비히클, 저용량, 고용량)을 12주 동안 유지한다.

hFXN 벡터를 투여받은 동물의 표적 조직 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, DRG, 소뇌, 척수 및 심장에서 사람 프라탁신(hFXN)의 분포 및 발현, 및 벡터 게놈 분포는 hFXN 발현에 대해 ELISA, PCR, ISH, IHC로 측정되고 벡터 게놈 분석에 대해 PCR 및 ISH로 측정된다. 영장류 프라탁신 발현 데이터를 프라탁신 발현 수준과 비교하여 프리드리히 실조증의 유전자 마우스 모델에서 FA 질환 표현형을 구제하였다. 이러한 결과에 기초하여, 사람 시험에 대한 유효 용량이 계산된다.

실시예 6. 알츠하이머병의 치료를 위한 VOY101-APOE miRNA

A. 알츠하이머병의 마우스 모델에서 scVOY101-APOE miRNA의 정맥내 투여의 생체내 분포, 발현 및 효능 연구

APOE를 표적화하는 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 함유하는 프리(pri)-miRNA 카세트를 포함하는 선택된 바이러스 게놈을 자기-상보적(sc) VOY101-miRNA 발현 벡터로 조작한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 scAAV-miRNA 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, ApoE를 표적화하는 가이드 서열 및 패신저 서열을 함유하는 프리-miRNA 카세트, polyA 서열, 스터퍼 서열, 및 야생형 ITR을 포함한다.

바이러스 게놈은 VOY101 캡시드로 패키징되고, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 정제되고 제제화된다.

2월령의 P301S 돌연변이 타우 마우스 3개의 그룹(대략 20마리 마우스/그룹)에 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통해 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS), 또는 고용량 또는 저용량 수준(대략 4 x 10¹² vg/kg 내지 4 x 10¹³ vg/kg)의 VOY101-APOE miRNA를 투여한다.

마우스에서 VOY101-APOE miRNA의 효능, 분포 및 발현을 시험하기 위해 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 체중 측정, qRT-PCR에 의해 측정된 APOE mRNA의 발현, 면역조직화학 및 효소-결합 면역흡착 검정에 의해 평가된 APOE 단백질의 발현, 면역조직화학 및 효소-결합 면역흡착 검정에 의해 평가된 아밀로이드-베타 병리의 수준, 면역조직화학에 의해 평가된 신경변성의 수준, 및 디지털 드롭릿 PCR(digital droplet PCR)에 의해 측정된 벡터 게놈 수준이 포함된다.

모든 동물은 체중 및 생존에 대해 평가된다. APOE mRNA 발현, 타우 및/또는 아밀로이드 병리 및 신경변성에 대한 뇌, 척수 및 간 샘플의 평가를 위해 대략 11월령의 동물을 안락사시킨다.

PCR 데이터는 정맥내 VOY101-APOE miRNA 벡터를 투여받은 동물의 뇌를 통한 벡터 게놈의 전달을 입증할 것이다. 발현 데이터는 벡터를 투여받은 동물의 뇌 전체에 걸쳐 APOE 단백질 및 mRNA의 광범위한 감소를 나타내야 한다. 상당한 APOE 감소를 나타내는 뇌 영역은 내비 피질, 해마 및 피질을 포함하여, 타우병증 관련 질환에 중요한 것들이어야 한다. 벡터를 투여받은 그룹은 병리학적 아밀로이드-베타 및 신경변성의 강한 감소를 보여줄 것이다.

B. scVOY101-APOE miRNA의 정맥내 투여 후 비-사람 영장류에서 APOE의 생체내 분포 및 발현 연구

APOE를 표적화하는 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 함유하는 프리-miRNA 카세트를 포함하는 선택된 바이러스 게놈을 자기-상보적(sc) VOY101-miRNA 발현 벡터로 조작한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 scAAV-miRNA 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, ApoE를 표적화하는 가이드 서열 및 패신저 서열을 함유하는 프리-miRNA 카세트, polyA 서열, 스터퍼 서열, 및 야생형 ITR을 포함한다.

바이러스 게놈은 VOY101 캡시드로 패키징되고, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 정제되고 제제화된다.

3개 그룹의 비-사람 영장류(NHP)(사이노몰구스 마카크(Cynomolgus macaque), 성인 수컷, AAV 중화 항체에 대해 사전스크리닝됨)에 scVOY101-ApoE miRNA 벡터를 투여하고, 하나의 그룹은 비히클 단독 대조군이다. NHP는 정맥내 전달을 사용하여 고용량 또는 저용량 수준(대략 4 x 10¹² vg/kg 내지 4 x10¹³ vg/kg)으로 투여된다. 투여 4주 후, 염수 관류를 수행하고 뇌를 3mm 관상 블록으로 박편화하고 스냅-동결시킨다.

NHP에서 VOY101-APOE miRNA의 효능, 분포 및 발현을 시험하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 qRT-PCR에 의한 APOE mRNA의 발현, 면역조직화학 및 효소-결합 면역흡착 검정에 의해 평가된 타우 단백질의 발현, 및 디지털 드롭릿 PCR에 의해 평가된 벡터 게놈 수준의 측정이 포함된다.

상당한 APOE 감소를 나타내는 뇌 영역은 내비 피질, 해마 및 피질을 포함하여, 타우병증 관련 질환에 중요한 영역을 커버하는 것으로 예측될 것이다. 발현 데이터와 일관되게, PCR은 뇌를 통한 벡터 게놈의 광범위한 분포를 입증할 것이다.

실시예 7. 알츠하이머병 및 다른 타우병증의 치료를 위한 VOY101-APOE2

A. 알츠하이머병 및 다른 타우병증의 마우스 모델에서 VOY101-APOE2의 정맥내 투여의 생체내 분포, 발현 및 효능 연구

사람 APOE2(아포지질단백질 E2 대립유전자)를 인코딩하는 핵산을 AAV 바이러스 게놈으로 조작하고 VOY101 캡시드에 패키징한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 AAV-APOE2 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, 사람 APOE2를 인코딩하는 핵산, polyA 서열, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 정제하고 제제화한다. VOY101-APOE2 입자를, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 제제화한다.

9월령의 APP.PS1-21/TRE4 마우스의 3개의 그룹(대략 20마리의 마우스/그룹)에 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통해 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS), 또는 고용량 또는 저용량 수준(대략 4 x 10¹² vg/kg 내지 4 x 10¹³ vg/kg)의 VOY101-APOE2를 투여한다.

마우스에서 VOY101-APOE2의 효능, 분포 및 발현을 시험하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 체중 측정, 면역조직화학 및 효소-결합 면역흡착 검정에 의해 평가된 APOE2의 발현, 면역조직화학 및 효소-결합 면역흡착 검정에 의해 평가된 아밀로이드-베타 병리의 수준, 면역조직화학에 의해 평가된 신경변성 수준, 및 디지털 드롭릿 PCR에 의해 측정된 벡터 게놈 수준이 포함된다.

모든 동물은 체중 및 생존에 대해 평가된다. APOE2 발현, 아밀로이드 및/또는 타우 병리 및 신경변성에 대한 뇌, 척수 및 간 샘플의 평가를 위해 대략 11월령의 동물을 안락사시킨다.

정맥내 VOY101-APOE2를 투여받은 동물의 뇌를 통한 벡터 게놈의 분포는 PCR로 분석된다. 발현 데이터는 VOY101-APOE2 벡터를 투여받은 동물의 뇌 전체에 걸쳐 APOE2의 광범위한 발현을 보여줄 것이다. 상당한 APOE2 발현을 나타내는 뇌 영역은 내비 피질, 해마 및 피질을 포함하여, 타우병증 관련 질환에 중요한 영역을 커버할 것이다. VOY101-APOE2 벡터를 투여받은 그룹은 병리학적 아밀로이드-베타 및/또는 타우 및 신경변성의 강한 감소를 보여주어야 한다.

B. 비-사람 영장류에서 VOY101-APOE2의 정맥내 투여의 생체내 분포 및 발현 연구

사람 APOE2(아포지질단백질 E 2 대립유전자)를 인코딩하는 핵산 서열을 AAV 바이러스 게놈으로 조작하고 VOY101 캡시드에 패키징한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 AAV-APOE2 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, 사람 APOE2를 인코딩하는 핵산, polyA 서열, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 정제하고 제제화한다. VOY101-APOE2 입자를, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 제제화한다.

3개 그룹의 비-사람 영장류(NHP)(사이노몰구스 마카크, 성인 수컷, AAV 중화 항체에 대해 사전스크리닝됨)에 정맥내 주사에 의해 VOY101-APOE2 벡터를 투여하고, 하나의 그룹은 비히클 단독 대조군(0.001% F-68을 포함한 PBS)이다. NHP는 정맥내 전달을 사용하여 고용량 또는 저용량 수준(대략 4 x 10¹² vg/kg 내지 4 x 10¹³ vg/kg)으로 투여된다. 투여 4주 후, 염수 관류를 수행하고 뇌를 3mm 관상 블록으로 박편화하고 스냅-동결시킨다.

NHP에서 VOY101-APOE2의 효능, 분포 및 발현을 시험하기 위해 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 면역조직화학 및 효소-결합 면역흡착 검정에 의해 평가된 APOE2의 발현 및 디지털 드롭릿 PCR에 의해 평가된 벡터 게놈 수준의 측정이 포함된다.

발현 데이터는 VOY101-APOE2 벡터를 투여받은 동물의 뇌 전체에 걸쳐 APOE2의 광범위한 발현을 보여줄 것이다. 상당한 APOE2 수준을 나타내는 뇌 영역은 내비 피질, 해마 및 피질을 포함하여, 타우병증 관련 질환에 중요한 영역을 커버할 것이다. 발현 데이터와 일관되게, PCR은 뇌를 통한 벡터 게놈의 광범위한 분포를 입증할 것이다.

실시예 8. 헌팅턴병의 치료를 위한 VOY101-HTT miRNA

A. 헌팅턴병의 마우스 모델에서 VOY101-miRNA의 생체내 효능 연구

HTT를 표적화하는 가이드 가닥을 함유하는 선택된 프리-miRNA 카세트를 scAAV-miRNA 바이러스 게놈으로 조작하고 VOY101 캡시드에 패키징한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 바이러스 게놈은 야생형 ITR, CBA 프로모터(CMVie 인핸서, CBA 프로모터 및 SV40 인트론 포함), HTT를 표적화하는 가이드 서열 및 패신저 서열을 함유하는 프리-miRNA 카세트, 토끼 글로빈 polyA 서열, 스터퍼 서열로서 사람 알파-1 항트립신 단편, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 정제하고 제제화한다. VOY101-HTT miRNA 입자를, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 제제화한다.

양측성 선조체내 투여가 사용될 것이다. 대략 2월령이고, 성별에 대해 균형을 맞춘 대략 12마리 마우스/그룹의 3개 그룹은 비히클(PBS 및 0.001% F-68), 또는 고용량 또는 저용량 수준(선조체당 대략 3 x 10⁹ vg 내지 5 x 10¹⁰ vg)의 VOY101-HTT miRNA 벡터를 투여받을 것이다.

마우스에서 VOY101-HTT miRNA의 효능을 시험하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 체중 측정, 로타로드, 포솔트 수영 시험(Porsolt swim test), 뿐만 아니라 면역조직화학에 의해 평가된 HTT 단백질 응집체의 측정이 포함된다.

모든 동물은 체중, 로타로드, 포솔트 수영 시험 및 생존에 대해 평가될 것이다. 일부 동물은 HTT mRNA 억제(RT-qPCR에 의한) 및 웨스턴 블롯 또는 MSD 검정에 의한 HTT 단백질 수준에 대한 선조체 조직 샘플의 평가를 위해 5월령(투여 후 3개월째)에 안락사될 것이며, 한편 다른 동물은 응집체의 평가(면역조직화학에 의한)를 위해 대략 8월령(투여 후 6개월째)에 안락사될 것이다.

HTT 측정 데이터는 일차 표적 영역(선조체 및 피질)을 포함하여 HTT miRNA 벡터를 투여받은 동물의 뇌 전체에 걸쳐 사람 HTT 단백질 및 mRNA의 광범위한 감소를 보여주어야 한다. HTT miRNA 벡터를 투여받은 그룹은 또한 병리학적 HTT 응집체의 감소를 보여주며, 수명 및 운동 활동에서 상당한 개선을 나타낼 것이다.

B. scVOY101-HTT miRNA의 정맥내 투여 후 비-사람 영장류에서의 생체내 약리학 및 분포 연구

HTT를 표적화하는 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 함유하는 선택된 프리-miRNA 카세트를 scAAV-miRNA 바이러스 게놈으로 조작하고 VOY101 캡시드에 패키징한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 scAAV-miRNA 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, HTT를 표적화하는 가이드 서열 및 패신저 서열을 함유하는 프리-miRNA 카세트, polyA 서열, 스터퍼 서열, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 정제하고 제제화한다. VOY101-HTT miRNA 입자를, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 제제화한다.

3개 그룹의 비-사람 영장류(NHP)(사이노몰구스 마카크, 성인 수컷, AAV 중화 항체에 대해 사전스크리닝됨)에 정맥내 주사에 의해 VOY101-APOE2 벡터를 투여하고, 하나의 그룹은 비히클 단독 대조군(0.001% F-68을 포함한 PBS)이다. NHP는 정맥내 전달을 사용하여 고용량 또는 저용량 수준(대략 4 x 10¹² vg/kg 내지 4 x 10¹³ vg/kg)으로 투여된다. 투여 4주 후, 염수 관류를 수행하고 뇌를 3mm 관상 블록으로 박편화하고 스냅-동결시킨다.

3개 그룹의 비-사람 영장류(NHP)(레서스 마카크(rhesus macaque), 성인 수컷, AAV 중화 항체에 대해 사전스크리닝됨)에 scVOY101-HTT miRNA 입자를 투여한다. NHP는 정맥내 또는 경동맥내 동맥 전달을 사용하여 고용량, 중간 용량 또는 저용량 수준(대략 5 x 10¹² vg/kg, 1.5 x 10¹³vg/kg 및 4.5 x 10¹³ vg/kg)으로 투여된다. 투여 4주 후, 염수 관류를 수행하고 척수의 일부, 뇌 섹션 및 선택된 말초 조직을 수거할 것이다. 조직의 서브세트를 액체 질소에서 스냅-동결시킬 것이고 서브세트를 4% PFA에서 후-고정시킬 것이다.

NHP에서 VOY101-HTT miRNA의 효능을 시험하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 bDNA 검정 및/또는 qRT-PCR에 의해 측정된 HTT mRNA의 발현, 웨스턴 블롯 및 면역조직화학에 의해 평가된 HTT 단백질의 발현, 및 디지털 드롭릿 PCR에 의해 평가된 벡터 게놈 수준의 측정을 포함한다. 또한, 임상 관찰, 혈청 및 CSF 임상 병리, CSF 바이오마커, 및 CNS 및 말초 조직의 조직병리학이 분석될 것이다.

실시예 9. 근위축성 측삭경화증의 치료를 위한 VOY101-SOD1 miRNA

A. ALS의 마우스 모델에서 VOY101-SOD1 miRNA의 생체내 약리학 연구

SOD1을 표적화하는 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 함유하는 선택된 프리-miRNA 카세트를 scAAV-miRNA 바이러스 게놈으로 조작하고 VOY101 캡시드에 패키징한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 바이러스 게놈은 야생형 ITR, H1 프로모터, SOD1을 표적화하는 가이드 서열 및 패신저 서열을 함유하는 프리-miRNA 카세트, 토끼 글로빈 polyA 서열, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 정제하고 제제화한다. VOY101-SOD1 miRNA 입자를, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 제제화한다.

대략 40일령 내지 50일령이고 성별, 연령 및 한배 새끼(Littermate)에 대해 균형을 맞춘 대략 10마리 마우스/그룹의 3개 그룹은 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS), 또는 고용량 또는 저용량 수준(대략 5 x 10¹¹vg/마우스 또는 2 x 10¹²vg/마우스)의 VOY101-SOD1 miRNA 벡터를 투여받을 것이다. 모든 동물은 정맥내 투여될 것이다. 모든 동물은 정맥내 투여 후 대략 4주째에 안락사될 것이다.

약리학적 프로파일을 평가하기 위해 당업계에 공지된 분석 방법이 사용될 수 있으며, 일차 판독값은 다수의 CNS 영역 및 선택된 말초 조직에서의 hSOD1 mRNA 및 단백질 발현 및 벡터 게놈 생체분포를 포함할 것이다. 이차 판독값은 체중, 면역조직화학 및 케이지 사이드 관찰(cage side observation)을 포함할 것이다.

B. ALS의 마우스 모델에서 VOY101-SOD1 miRNA의 생체내 효능 연구

SOD1을 표적화하는 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 함유하는 선택된 프리-miRNA 카세트를 scAAV-miRNA 바이러스 게놈으로 조작하고 VOY101 캡시드에 패키징한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 scAAV-miRNA 바이러스 게놈은 야생형 ITR, H1 프로모터, SOD1을 표적화하는 가이드 서열 및 패신저 서열을 함유하는 프리-miRNA 카세트, 토끼 글로빈 polyA, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 정제하고 제제화한다. VOY101-SOD1 miRNA 입자를, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 제제화한다.

대략 40일령 내지 50일령이고 성별, 연령 및 한배 새끼에 대해 균형을 맞춘 대략 36마리 마우스/그룹의 3개 그룹은 비히클, 또는 고용량 또는 저용량 수준(대략 5x10¹¹ vg/마우스 또는 2x10¹² vg/마우스)의 벡터를 투여받을 것이다. 모든 동물은 정맥내 투여될 것이다.

마우스에서 VOY101-SOD1 miRNA의 효능을 평가하기 위해, 당업계에 공지된 분석 방법을 사용하여 일차 판독값을 얻을 수 있으며, 체중, 행동 뉴로스코어(behavioral NeuroScore), 생존 및 질환 개시 및 지속기간을 포함할 수 있다. 신경학적 점수는 매일 측정될 것이다. 동물은, 이 동물의 뉴로스코어가 4에 도달할 때 안락사될 것이다. 2차 판독값은 hSOD1 mRNA/단백질 발현, 벡터 게놈 생체분포 및 IHC(골격근 및 NMJ 영상화, 척수)를 포함한다.

상기 데이터는, 정맥내 VOY101-SOD1 miRNA 벡터를 운동 뉴런, 뇌간 및 운동 피질로 전달할 때, SOD1 단백질 및 mRNA의 광범위한 감소가 발생함을 입증한다.

C. ALS에 대한 질환 모델로서 개 퇴행성 척수병증에서의 VOY101-SOD1 miRNA의 생체내 효능 연구

SOD1을 표적화하는 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 함유하는 선택된 프리-miRNA 카세트를 scAAV-miRNA 바이러스 게놈으로 조작하고, VOY101 캡시드로 설계하고 패키징한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 scAAV-miRNA 바이러스 게놈은 야생형 ITR, H1 프로모터, SOD1을 표적화하는 가이드 서열 및 패신저 서열을 함유하는 프리-miRNA 카세트, 토끼 글로빈 polyA 서열, 스터퍼 서열, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 정제하고 제제화한다. VOY101-SOD1 miRNA 입자를, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 제제화한다.

시험관내 중화 항체 검정에서 혈청 샘플을 평가함으로써 컴패니언 DM 개(companion DM dog)를 VOY101 캡시드에 대한 기존 면역에 대해 스크리닝할 것이다. nAb가 음성인 개가 본 연구의 후보가 될 것이다. 개는 2개의 치료 그룹으로 나뉘고 정맥내 투여를 사용하여 VOY101-SOD1 miRNA 또는 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS)로 투여될 것이다.

개에서 VOY101-SOD1 miRNA의 효능을 평가하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 보행 및 신경학적 결과의 종단적 모니터링, DTI 및 MRS, 전기진단 시험, MUNE 및 지정된 시점에서의 전기 임피던스 미오그래피(electrical Impedance Myography; EIM)가 포함된다.

혈청 및 CSF 샘플은 개에서 pNF-H 및 NFL 수준을 평가하기 위해 안락사시 및 지정된 시간에 수집될 것이다. 안락사시, SOD1 mRNA 정량화 및 벡터 게놈 생체분포 분석을 위해 CNS 및 말초 조직이 수집될 것이다.

상기 데이터는, 정맥내 VOY101-SOD1 miRNA 벡터를 운동 뉴런, 뇌간 및 운동 피질로 전달할 때, SOD1 단백질 및 mRNA의 감소가 발생함을 입증한다.

D. scVOY101-SOD1 miRNA의 정맥내 투여 후 비-사람 영장류에서의 생체내 약리학 및 분포 연구

SOD1을 표적화하는 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 함유하는 선택된 프리-miRNA 카세트를 scAAV-miRNA 바이러스 게놈으로 조작하고 VOY101 캡시드에 패키징한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 scAAV-miRNA 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, SOD1을 표적화하는 가이드 서열 및 패신저 서열을 함유하는 프리-miRNA 카세트, polyA 서열, 스터퍼 서열, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 정제하고 제제화한다. VOY101-SOD1 miRNA 입자를, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 제제화한다.

3개 그룹의 비-사람 영장류(NHP)(사이노몰구스 마카크, 성인 수컷, AAV 중화 항체에 대해 사전스크리닝됨)에 sc VOY101-SOD1 miRNA 벡터를 투여한다. NHP는 정맥내 전달을 사용하여 고용량, 중간 용량 또는 저용량 수준(대략 5 x 10¹² vg/kg, 1.5 x 10¹³vg/kg 및 4.5 x 10¹³ vg/kg)으로 투여된다. 투여 4주 후, 염수 관류를 수행하고 척수의 일부, 뇌 섹션 및 선택된 말초 조직을 수거할 것이다. 수집된 조직의 서브세트를 액체 질소에서 스냅-동결시킬 것이고 또 다른 서브세트를 4% PFA에서 후-고정시킬 것이다.

NHP에서 효능 및 분포를 결정하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 qRT-PCR에 의한 SOD1 mRNA의 발현, WB 및 면역조직화학에 의해 평가된 SOD1 단백질의 발현 및 디지털 드롭릿 PCR에 의해 평가된 벡터 게놈 수준의 측정이 포함된다. 또한, 임상 관찰, 혈청 및 CSF 임상 병리, CSF 바이오마커, 및 CNS 및 말초 조직의 조직병리학을 분석할 것이다.

상기 데이터는, VOY101-SOD1 miRNA 벡터를 척수 운동 뉴런, 뇌간 및 운동 피질에 정맥내 전달할 때, SOD1 단백질 및 mRNA의 감소가 발생함을 입증한다.

실시예 10. 알츠하이머병 및 다른 타우병증의 치료를 위한 항-타우 항체 전달

A. 알츠하이머병 및 다른 타우병증의 마우스 모델에서 VOY101-항-타우 항체의 정맥내 투여의 생체내 분포, 발현 및 효능 연구

타우를 표적화하는 단클론 항체를 인코딩하는 핵산은 AAV 바이러스 게놈으로 조작되고 VOY101 캡시드에서 생산된다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, 타우를 표적화하는 단클론 항체를 인코딩하는 핵산, polyA 서열, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 정제하고 제제화한다. VOY101-항 타우 항체 입자를, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 제제화한다.

2월령의 P301S 마우스의 3개의 그룹(대략 20마리의 마우스/그룹)에 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통해 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS), 또는 고용량 또는 저용량 수준(대략 4 x 10¹² vg/kg 내지 4 x10¹³ vg/kg)의 VOY101-항 타우 항체 벡터를 투여한다.

마우스에서 VOY101-항 타우 항체의 효능, 분포 및 발현을 시험하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 체중 측정, 로타로드, 면역조직화학 및 효소-결합 면역흡착 검정에 의해 평가된 항-타우 항체의 발현, 면역조직화학 및 효소-결합 면역흡착 검정에 의해 평가된 병원성 타우의 수준, 면역조직화학에 의해 평가된 신경변성 수준, 및 디지털 드롭릿 PCR에 의해 측정된 벡터 게놈 수준이 포함된다. 모든 동물은 체중 및 생존에 대해 평가된다. 항체 발현, 타우 병리, 및 신경변성에 대한 뇌, 척수, 및 간 샘플의 평가를 위해 동물을 대략 5월령에 안락사시킨다.

알츠하이머병 및 타우병증의 치료를 위한 VOY101-항 타우 항체 전달이 성공적인 경우, 정맥내 VOY101-항-타우 항체 벡터를 투여받은 동물의 뇌를 통한 벡터 게놈의 전달을 입증하는 PCR 데이터를 예상할 수 있다. 발현 데이터는 또한 수동 면역화 후의 수준와 동일하거나 이를 초과하는 수준으로 벡터를 투여받은 동물의 뇌 전체에 걸쳐 항-타우 항체의 광범위한 발현을 보여줄 것이다. 상당한 항체 수준을 나타내는 것으로 예측되는 뇌 영역은 내비 피질, 해마 및 피질을 포함하여, 타우병증 관련 질환에 중요한 영역을 포함한다. VOY101-항 타우 항체 벡터를 투여받은 그룹은 병리학적 타우 및 신경변성에서의 강한 감소를 보이고 수명 및 로타로드 성능의 상당한 개선을 나타내는 것으로 예측된다.

B. 비-사람 영장류에서 VOY101-항-타우 항체의 정맥내 투여의 생체내 분포 및 발현 연구

타우를 표적화하는 단클론 항체를 인코딩하는 핵산은 AAV 바이러스 게놈으로 조작되고 VOY101 캡시드에서 생성된다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, 타우를 표적화하는 단클론 항체를 인코딩하는 핵산, polyA 서열, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 정제하고 제제화한다. VOY101-항 타우 항체 입자를, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 제제화한다.

3개 그룹의 비-사람 영장류(NHP)(사이노몰구스 마카크, 성인 수컷, AAV 중화 항체에 대해 사전스크리닝됨)에 VOY101-항-타우 벡터를 투여하고, 하나의 그룹은 비히클 단독 대조군(0.001% F-68을 포함한 PBS)이다. NHP는 정맥내 전달을 사용하여 고용량 또는 저용량 수준(대략 4 x 10¹² vg/kg 내지 4 x 10¹³ vg/kg)으로 투여된다. 투여 4주 후, 염수 관류를 수행하고 뇌를 3mm 관상 블록으로 박편화하고 스냅-동결시킨다.

NHP에서 VOY101-항 타우 항체의 효능, 분포 및 발현을 시험하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 면역조직화학 및 효소-결합 면역흡착 검정에 의해 평가된 항-타우 항체의 발현 및 디지털 드롭릿 PCR에 의해 평가된 벡터 게놈 수준의 측정이 포함된다.

항-타우 항체가 수동 면역화 후의 수준을 초과하는 수준으로 NHP 뇌에서 광범위하게 발현됨을 나타내는 발현 데이터를 예상할 수 있다. 상당한 항체 수준을 나타내는 것으로 예측되는 뇌 영역은 내비 피질, 해마 및 피질을 포함하여, 타우병증 관련 질환에 중요한 영역을 포함한다. 발현 데이터와 일관되게, PCR은 뇌를 통한 벡터 게놈의 광범위한 분포를 입증할 것이다.

실시예 11. 타우병증의 치료를 위한 VOY101-타우 miRNA

A. 타우병증의 마우스 모델에서 scVOY101-타우 miRNA의 정맥내 투여의 생체내 분포, 발현 및 효능 연구

타우를 표적화하는 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 함유하는 선택된 프리-miRNA 카세트를 scAAV-miRNA 바이러스 게놈으로 조작하고 VOY101 캡시드에 패키징한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 scAAV-miRNA 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, 타우를 표적화하는 가이드 서열 및 패신저 서열을 함유하는 프리-miRNA 카세트, polyA 서열, 스터퍼 서열, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 정제하고 제제화한다. VOY101-타우 miRNA 입자를, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 제제화한다.

2월령의 P301S 마우스의 3개 그룹(대략 20마리의 마우스/그룹)에 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통해 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS), 또는 고용량 또는 저용량 수준(대략 4 x 10¹² vg/kg 내지 4 x10¹³ vg/kg)의 VOY101-타우 miRNA 벡터를 투여한다.

마우스에서 VOY101-타우 miRNA의 효능, 분포 및 발현을 시험하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 체중 측정, 로타로드, qRT-PCR에 의해 측정된 타우 mRNA의 발현, 면역조직화학 및 효소-결합 면역흡착 검정에 의해 평가된 총 사람 타우의 발현, 면역조직화학 및 효소-결합 면역흡착 검정에 의해 평가된 병원성 타우 수준, 면역조직화학에 의해 평가된 신경변성 수준, 및 디지털 드롭릿 PCR에 의해 측정된 벡터 게놈 수준을 포함한다.

모든 동물은 체중 및 생존에 대해 평가된다. 타우 mRNA 발현, 타우 병리, 및 신경변성에 대한 뇌, 척수, 및 간 샘플의 평가를 위해 동물을 대략 5월령에 안락사시킨다.

타우병증의 치료를 위한 VOY101-타우 miRNA 전달이 성공적인 경우, 정맥내 VOY101-타우 miRNA 벡터를 투여받은 동물의 뇌를 통한 벡터 게놈의 전달을 입증하는 PCR 데이터를 예상할 수 있다. 발현 데이터는 또한 VOY101-타우 miRNA 벡터를 투여받은 동물의 뇌 전체에 걸쳐 사람 타우 단백질 및 mRNA의 광범위한 감소를 나타내는 것으로 예측될 것이다. 상당한 타우 감소를 나타낼 가능성이 있는 뇌 영역은 내비 피질, 해마 및 피질을 포함하여, 타우병증 관련 질환에 중요한 영역을 포함한다. VOY101-타우 miRNA 벡터를 투여받은 그룹은 병리학적 타우 및 신경변성에서의 강한 감소를 보이고 수명 및 로타로드 성능의 상당한 개선을 나타낼 수 있을 것이다.

B. scVOY101-타우 miRNA의 정맥내 투여 후 비-사람 영장류에서의 타우의 생체내 분포 및 발현 연구

타우를 표적화하는 가이드 가닥 및 패신저 가닥을 함유하는 선택된 프리-miRNA 카세트를 scAAV-miRNA 바이러스 게놈으로 조작하고 VOY101 캡시드에 패키징한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, 타우를 표적화하는 가이드 서열 및 패신저 서열을 함유하는 프리-miRNA 카세트, polyA 서열, 스터퍼 서열, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 정제하고 제제화한다. VOY101-타우 miRNA 입자를, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 제제화한다.

3개 그룹의 비-사람 영장류(NHP)(사이노몰구스 마카크, 성인 수컷, AAV 중화 항체에 대해 사전스크리닝됨)에 scVOY101-타우 miRNA를 투여하고, 하나의 그룹은 비히클 단독 대조군(0.001% F-68을 포함한 PBS)이다. NHP는 정맥내 전달을 사용하여 고용량 또는 저용량 수준의 VOY101-타우 miRNA(대략 4 x 10¹² vg/kg 내지 4 x 10¹³ vg/kg)로 투여된다. 투여 4주 후, 염수 관류를 수행하고 뇌를 3mm 관상 블록으로 박편화하고 스냅-동결시킨다.

NHP에서 VOY101-타우 miRNA의 분포 및 발현을 시험하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 qRT-PCR에 의한 타우 mRNA의 발현, 면역조직화학 및 효소-결합 면역흡착 검정에 의해 평가된 타우 단백질의 발현, 및 디지털 드롭릿 PCR에 의해 평가된 벡터 게놈 수준의 측정이 포함된다.

타우 단백질 및 mRNA가 뇌에서 광범위하게 감소됨을 나타내는 발현 데이터를 예상할 수 있다. 상당한 타우 감소를 나타낼 가능성이 있는 뇌 영역은 내비 피질, 해마 및 피질을 포함하여, 타우병증 관련 질환에 중요한 영역을 포함한다. 발현 데이터와 일관되게, PCR은 뇌를 통한 벡터 게놈의 광범위한 분포를 입증할 수 있을 것이다.

실시예 12. 심혈관 질환(예를 들어, 심부전)의 치료를 위한 VOY101-ATP2A2

A. 심혈관 질환의 마우스 모델에서 VOY101-ATP2A2의 정맥내 투여를 통한 생체내 분포, 발현 및 효능 연구

사람 ATP2A2를 인코딩하는 핵산을 포함하는 선택된 바이러스 게놈을 단일 가닥 VOY101 캡시드로 설계하고 패키징한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, hATP2A2 cDNA 서열, 사람 성장 호르몬 polyA 서열, 스터퍼 서열로서 사람 알부민 단편, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 정제하고 제제화한다.

7주령이고 성별 및 리터에 대해 균형을 맞춘, 대략 10마리의 마우스/그룹의 6개 그룹은 정맥내 주사를 통해 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS; 2개의 그룹), 또는 저용량(2개의 그룹) 또는 고용량(2개의 그룹) 수준(대략 6.3 x 10¹² vg/kg 내지 2 x 10¹³ vg/kg 체중)의 VOY101-ATP2A2 벡터를 투여받는다.

마우스에서 VOY101-ATP2A2의 효능, 분포 및 발현을 시험하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 사지 근전도검사, 노치 시편 보행 시험, 끈 매달기 시험, 로타로드 시험, 체중 및/또는 생존이 포함된다. 다른 판독값은 ELISA, PCR, 면역조직화학 및 동일계 혼성화에 의한 조직(예를 들어 후근 신경절, 심장(예를 들어, 심근 세포), 소뇌, 척수)에서의 ATP2A2 단백질 및 mRNA 발현, 및 조직(후근 신경절) 섹션에서 미토콘드리아 효소 기능의 동일계 평가를 포함한다. 상이한 조직에서의 벡터 게놈 수준은 PCR 및 ISH에 의해 결정된다.

3개의 동물 그룹(비히클, 저용량, 고용량)을 18주에 안락사시킨다. 생존에 대한 영향을 평가하기 위해 남아있는 3개의 동물 그룹(비히클, 저용량, 고용량)을 6개월 이상 유지한다. 대조 그룹(n=10/그룹)은 야생형 마우스 및 기준 벡터가 투여된 질환 모델 마우스를 포함한다.

hATP2A2 벡터를 투여받은 동물의 표적 조직 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, DRG, 소뇌, 척수 및 심장에서 사람 ATP2A2의 분포 및 발현, 및 벡터 게놈 분포는 hATP2A2 발현에 대해 ELISA, PCR, ISH, IHC로 측정되고 벡터 게놈 분석에 대해 PCR 및 ISH로 측정된다. 사람 ATP2A2 분석(ELISA, PCR, ISH, IHC에 의한) 결과, hATP2A2 벡터의 전달시, 표적 조직 예를 들어, 심장에서의 발현이 표적 조직으로의 바이러스 게놈 분포와 함께 일어난다는 것이 입증된다. 미토콘드리아 효소 활성의 동일계 평가 결과, hATP2A2 벡터 전달시, 심장 슬라이스에서 활성이 증가된다는 것을 보여준다. 근전도검사, 노치 시편, 끈 매달기 및 로타로드 시험은 비히클 대조군 동물보다 개선된 성능을 입증한다.

B. 비-사람 영장류에서 VOY101-ATP2A2의 정맥내 투여를 통한 생체내 분포 및 발현 연구

사람 ATP2A2를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 선택된 바이러스 게놈을 단일 가닥(ss) VOY101 캡시드로 설계하고 패키징한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 단일 가닥 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, hATP2A2 cDNA 서열, 사람 성장 호르몬 polyA 서열, 스터퍼 서열로서 사람 알부민 단편, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 정제하고 제제화한다.

그룹당 각 성별의 적어도 하나의 동물이 있는, 대략 3살 이상인, 대략 3마리의 사이노몰구스 원숭이/그룹의 8개 그룹은 정맥내 주사를 통해 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS; 2개의 그룹), 또는 저용량(2개의 그룹) 또는 고용량(2개의 그룹) 수준(대략 6.7 x 10¹² vg/kg 내지 6 x10¹³ vg/kg 체중)의 VOY101-ATP2A2 벡터를 투여받는다.

NHP에서 VOY101-ATP2A2의 효능, 분포 및 발현을 시험하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 시간 경과에 따른 체중 측정, 임상적 모니터링, 조직병리학 및 혈중 안전성 패널 시험이 포함된다. 다른 판독값은 ELISA, PCR, 면역조직화학 및 동일계 혼성화에 의해 평가된 바와 같은 조직(예를 들어 심장)에서의 ATP2A2 단백질 및 mRNA 발현을 포함한다. 상이한 조직에서의 벡터 게놈 수준은 PCR 및 ISH로 측정된다.

3개의 동물 그룹(비히클, 저용량, 고용량)을 4주에 안락사시킨다. 장기 유전자 발현을 평가하기 위해 남아있는 3개의 동물 그룹(비히클, 저용량, 고용량)을 12주 동안 유지한다.

hATP2A2 벡터를 투여받은 동물의 표적 조직 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 심장에서 사람 ATP2A2(hATP2A2)의 분포 및 발현, 및 벡터 게놈 분포는 hATP2A2 발현에 대해 ELISA, PCR, ISH, IHC로 측정되고 벡터 게놈 분석에 대해 PCR 및 ISH로 측정된다. 영장류 ATP2A2 발현 데이터를 ATP2A2 발현 수준과 비교하여 심혈관 질환의 유전자 마우스 모델에서 심혈관 질환 표현형을 구제하였다. 이러한 결과에 기초하여, 사람 시험에 대한 유효 용량이 계산된다.

실시예 13. 심혈관 질환(예를 들어, 심부전)의 치료를 위한 VOY101-S100A1

A. 심혈관 질환의 마우스 모델에서 VOY101-S100A1의 정맥내 투여를 통한 생체내 분포, 발현 및 효능 연구

사람 S100A1을 인코딩하는 핵산을 포함하는 선택된 바이러스 게놈을 단일 가닥 VOY101 캡시드로 설계하고 패키징한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, hS100A1 cDNA 서열, 사람 성장 호르몬 polyA 서열, 스터퍼 서열로서 사람 알부민 단편, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 정제하고 제제화한다.

7주령이고 성별 및 리터에 대해 균형을 맞춘, 대략 10마리의 마우스/그룹의 6개 그룹은 정맥내 주사를 통해 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS; 2개의 그룹), 또는 저용량(2개의 그룹) 또는 고용량(2개의 그룹) 수준(대략 6.3 x 10¹² vg/kg 내지 2 x 10¹³ vg/kg 체중)의 VOY101-S100A1 벡터를 투여받는다.

마우스에서 VOY101-S100A1의 효능, 분포 및 발현을 시험하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 사지 근전도검사, 노치 시편 보행 시험, 끈 매달기 시험, 로타로드 시험, 체중 및/또는 생존이 포함된다. 다른 판독값은 ELISA, PCR, 면역조직화학 및 동일계 혼성화에 의한 조직(예를 들어 후근 신경절, 심장(예를 들어, 심근 세포), 소뇌, 척수)에서의 S100A1 단백질 및 mRNA 발현, 및 조직(후근 신경절) 섹션에서 미토콘드리아 효소 기능의 동일계 평가를 포함한다. 상이한 조직에서의 벡터 게놈 수준은 PCR 및 ISH로 측정된다.

3개의 동물 그룹(비히클, 저용량, 고용량)을 18주에 안락사시킨다. 생존에 대한 영향을 평가하기 위해 남아있는 3개의 동물 그룹(비히클, 저용량, 고용량)을 12개월 이상 유지한다. 대조 그룹(n=10/그룹)은 야생형 마우스 및 기준 벡터가 투여된 질환 모델 마우스를 포함한다.

hS100A1 벡터를 투여받은 동물의 표적 조직 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, DRG, 소뇌, 척수 및 심장에서 사람 S100A1의 분포 및 발현, 및 벡터 게놈 분포는 hS100A1 발현에 대해 ELISA, PCR, ISH, IHC로 측정되고 벡터 게놈 분석에 대해 PCR 및 ISH로 측정된다. 사람 S100A1 분석(ELISA, PCR, ISH, IHC에 의한) 결과, hS100A1 벡터의 전달시, 표적 조직 예를 들어, 심장에서의 발현이 표적 조직으로의 바이러스 게놈 분포와 함께 일어난다는 것이 입증된다. 미토콘드리아 효소 활성의 동일계 평가 결과, hS100A1 벡터 전달시, 심장 슬라이스에서 활성이 증가된다는 것을 보여준다. 근전도검사, 노치 시편, 끈 매달기 및 로타로드 시험은 비히클 대조군 동물보다 개선된 성능을 입증한다.

B. 비-사람 영장류에서 VOY101- S100A1의 정맥내 투여를 통한 생체내 분포 및 발현 연구

사람 S100A1을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 선택된 바이러스 게놈을 단일 가닥(ss) VOY101 캡시드로 설계하고 패키징한다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 단일 가닥 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, hS100A1 cDNA 서열, 사람 성장 호르몬 polyA 서열, 스터퍼 서열로서 사람 알부민 단편, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 캡시드에 패키징하고, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 정제하고 제제화한다.

그룹당 각 성별의 적어도 하나의 동물이 있는, 대략 3살 이상인, 대략 3마리의 사이노몰구스 원숭이/그룹의 8개 그룹은 정맥내 주사를 통해 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS; 2개의 그룹), 또는 저용량(2개의 그룹) 또는 고용량(2개의 그룹) 수준(대략 6.7 x 10¹² vg/kg 내지 6 x10¹³ vg/kg 체중)의 VOY101-S100A1 벡터를 투여받는다.

NHP에서 VOY101-S100A1의 효능, 분포 및 발현을 시험하기 위해, 당업계에 공지된 임의의 시험을 사용할 수 있다. 비제한적인 예로는 시간 경과에 따른 체중 측정, 임상적 모니터링, 조직병리학 및 혈중 안전성 패널 시험이 포함된다. 다른 판독값은 ELISA, PCR, 면역조직화학 및 동일계 혼성화에 의해 평가된 바와 같은 조직(예를 들어 심장)에서의 S100A1 단백질 및 mRNA 발현을 포함한다. 상이한 조직에서의 벡터 게놈 수준은 PCR 및 ISH로 측정된다.

3개의 동물 그룹(비히클, 저용량, 고용량)을 4주에 안락사시킨다. 장기 유전자 발현을 평가하기 위해 남아있는 3개의 동물 그룹(비히클, 저용량, 고용량)을 12주 동안 유지한다.

hS100A1 벡터를 투여받은 동물의 표적 조직 예를 들어, 이에 제한되지는 않지만, 심장에서 사람 S100A1(hS100A1)의 분포 및 발현, 및 벡터 게놈 분포는 hS100A1 발현에 대해 ELISA, PCR, ISH, IHC로 측정되고 벡터 게놈 분석에 대해 PCR 및 ISH로 측정된다. 영장류 S100A1 발현 데이터를 S100A1 발현 수준과 비교하여 심혈관 질환의 유전자 마우스 모델에서 심혈관 질환 표현형을 구제하였다. 이러한 결과에 기초하여, 사람 시험에 대한 유효 용량이 계산된다.

실시예 14. 알츠하이머병 및 다른 타우병증의 치료를 위한 항-타우 항체 전달

A. VOY101 또는 VOY201-항-타우 항체의 정맥내 투여의 생체내 분포, 발현 및 효능 연구

타우를 표적화하는 단클론 항체 PHF-1을 인코딩하는 핵산은 AAV 바이러스 게놈으로 조작되고 VOY101 캡시드(서열번호 1809로 제공된 캡시드 서열) 또는 VOY201 캡시드(서열번호 1810으로 제공된 캡시드 서열)에서 생성되었다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, 타우를 표적화하는 단클론 항체 PHF-1을 인코딩하는 핵산(서열번호 1816으로 제공된 코작, 중쇄, 링커 영역, 경쇄 및 정지 코돈), polyA 서열, 및 야생형 ITR을 포함했다. 바이러스 게놈을 VOY101 또는 VOY201 캡시드에 패키징하고, 정제하고 제제화한다. VOY101 또는 VOY201-항 타우 항체 입자를, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 제제화하였다.

2월령의 야생형(WT) 마우스의 3개의 그룹(대략 5마리의 마우스/그룹)에 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통해 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS), 1.4 x 10¹³ vg/kg의 VOY101-항 타우 항체 벡터, 또는 1.4 x 10¹³ vg/kg의 VOY201-항 타우 항체 벡터를 투여하였다.

AAV 입자 투여 후 대략 28일째에, 몇 개의 조직 샘플을 수집하였다. CBA 프로모터의 CMV 인핸서 영역에 대한 프로브 세트를 사용하여 벡터 게놈 디지털 PCR 정량화를 수행하고, 숙주 TFRC로 정규화하고, 세포당 벡터 게놈(VG/세포)으로 표현하였다. VOY101.PHF-1 및 VOY201.PHF-1에 대한 벡터 게놈 분포는 표 21에 나타나 있다. 표 21에서, Hp는 해마이고, SC-C는 경추 척수이고, SC-T는 흉추 척수이고, SC-L은 요추 척수이다.

조직 용해물의 가용성 분획에 존재하는 PHF-1의 발현 수준은 또한 ELISA 플레이트 상에 코팅된 PHF 타우와의 상호작용을 검출함으로써 수집된 조직에서 측정되었다. 항체-항원 복합체를 HRP 표지된 항-마우스 IgG 및 이의 기질 TMB를 사용하여 시각화 및 정량화하고, 이어서 플레이트 판독기 상에서 OD450에서 판독하고 입력 조직 단백질 양으로 정규화하였다. VOY101.PHF-1 및 VOY201.PHF-1에 대한 AAV 형질도입된 세포로부터의 PHF1 발현은 표 22에 나타나 있다. 표 22에서, Hp는 해마이고 SC는 척수이다.

VOY201에서의 PHF-1의 IV 투여는 수동 면역화와 비교하여 마우스 CNS에서 항-타우 항체 수준이 최대 15배까지 더 높았다. 뇌에서 항체의 수동 면역화 수준은 20-40 ng/mg의 단백질이고, VOY201은 해마에서 수동보다 2배 내지 5배 높았고, 뇌간에서 수동보다 5배 내지 10배 높았고, 척수에서 수동보다 8배 내지 16배 높았다. VOY101 및 VOY201의 IV 투여는 벡터화된 항체의 광범위한 CNS 생체분포 및 형질도입을 초래하였다.

마우스 뇌를 반측 절단하고 항체 면역조직화학을 위해 조직 샘플을 할당한 다음, 4% 파라포름알데히드에 밤새 후-고정시켰다. PHF-1 항체를 항-마우스 IgG1 항체를 사용한 면역조직화학에 의해 검출하였다(PHF-1은 마우스 IgG1 항체이다). VOY101.PHF-1 또는 VOY201.PHF-1의 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통해 1.4 x 10¹³ vg/kg으로 투여된 동물에서, 염색은 해마, 피질, 선조체, 및 시상을 포함하는 뇌 전체에 걸쳐 관찰되었다. 뉴런 및 성상세포 형태를 갖는 세포를 포함하여, 수많은 PHF1+ 세포가 관찰되었다. 비히클-처리된 대조군은 본질적으로 검출가능한 배경 염색을 나타내지 않았다.

VOY101.PHF-1 또는 VOY201.PHF-1의 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통한 1.4 x 10¹³ vg/kg의 투여 후 CNS 내의 PHF-1 발현은 마우스 항-IgG1 및 항-NeuN 이중 표지 면역형광 염색에 의해 평가되었다. PHF-1은 마우스 IgG1 항체이며, 따라서 항-IgG1 항체 염색에 의해 검출된다. 공동 국소화(colocalization) 연구는 뉴런 마커(NeuN)로 이중-표지된 세포를 포함하여 다수의 PHF1+ 세포를 보여주었다.

VOY101.PHF-1의 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통한 1.4 x 10¹³ vg/kg의 투여 후 CNS 내의 PHF-1 발현은 마우스 항-IgG1 및 항-GFAP(아교 섬유질 산성 단백질) 이중 표지 면역형광 염색에 의해 평가되었다. PHF-1은 마우스 IgG1 항체이고, 따라서 항-IgG1 항체 염색에 의해 검출된다. 공동 국소화 연구는 성상세포 마커(GFAP)로 이중-표지된 세포를 포함하여 다수의 PHF1+ 세포를 보여주었다.

B. 마우스 모델에서 VOY101 또는 VOY201-항-타우 항체의 정맥내 투여의 생체내 분포, 발현 및 효능 연구

2월령의 P301S 마우스의 3개의 그룹(대략 20마리의 마우스/그룹)에 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통해 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS), 1.4 x 10¹³ vg/kg의 VOY101-항 타우 항체 벡터(VOY101.PHF-1), 또는 5.0 x 10¹³ vg/kg의 VOY201-항 타우 항체 벡터(VOY201.PHF-1)를 투여하였다.

AAV 입자 투여 후 대략 3개월째에, 몇 개의 조직 샘플을 수집하였다. CBA 프로모터의 CMV 인핸서 영역에 대한 프로브 세트를 사용하여 벡터 게놈 디지털 PCR 정량화를 수행하고, 숙주 TFRC로 정규화하고, 세포당 벡터 게놈(VG/세포)으로 표현하였다. VOY101.PHF-1 및 VOY201.PHF-1에 대한 벡터 게놈 분포는 표 23에 나타나 있다. 표 23에서, Hp는 해마이고, SC는 척수이다.

조직 용해물의 가용성 분획에 존재하는 PHF1의 발현 수준은 또한 ELISA 플레이트 상에 코팅된 PHF 타우와의 상호작용을 검출함으로써 수집된 조직에서 측정되었다. 항체-항원 복합체를 HRP 표지된 항-마우스 IgG 및 이의 기질 TMB를 사용하여 시각화 및 정량화하고, 이어서 플레이트 판독기 상에서 OD450에서 판독하고 입력 조직 단백질 양으로 정규화하였다. VOY101.PHF-1 및 VOY201.PHF-1에 대한 AAV 형질도입된 세포로부터의 PHF1 발현은 표 24에 나타나 있다. 표 24에서, Hp는 해마이고 SC는 척수이다.

VOY101 및 VOY201의 IV 투여는 P301 타우병증 마우스의 CNS에 대한 높은 수준의 항체를 초래하였다. AT8 면역반응성(IR)은 PHF1-처리된 마우스에서 상당히 감소된다. VOY101 및 VOY201을 사용한 IV 투여는 P301S 타우병증 마우스에서 벡터화된 항체의 광범위한 CNS 생체분포 및 형질도입을 초래하였다.

실시예 15. 알츠하이머병을 포함하는 타우병증의 치료를 위한 항-타우 항체 전달

A. VOY101 또는 VOY201-항-타우 항체의 정맥내 투여의 생체내 분포, 발현 및 효능 연구

타우를 표적화하는 단클론 항체 PHF-1을 인코딩하는 핵산은 AAV 바이러스 게놈으로 조작되고 VOY101 캡시드(서열번호 1809로 제공된 캡시드 서열) 또는 VOY201 캡시드(서열번호 1810로 제공된 캡시드 서열)에서 생성된다.

5'에서 3'로 언급된 ITR에서 ITR로의 바이러스 게놈은 야생형 ITR, 프로모터, 타우를 표적화하는 단클론 항체 PHF-1을 인코딩하는 핵산(경쇄(서열번호 1819), 링커 영역, 중쇄(서열번호 1814) 및 정지 코돈), polyA 서열, 및 야생형 ITR을 포함한다. 바이러스 게놈을 VOY101 또는 VOY201 캡시드에 패키징하고, 정제하고 제제화한다. VOY101 또는 VOY201-항 타우 항체 입자를, 0.001% F-68을 포함한 포스페이트 완충된 염수(PBS)에서 제제화한다.

2월령의 야생형(WT) 마우스의 3개의 그룹(대략 5마리의 마우스/그룹)에 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통해 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS), 1.4 x 10¹³ vg/kg의 VOY101-항 타우 항체 벡터, 또는 1.4 x 10¹³ vg/kg의 VOY201-항 타우 항체 벡터를 투여한다.

AAV 입자 투여 후 대략 28일째에, 몇 개의 조직 샘플을 수집한다. CBA 프로모터의 CMV 인핸서 영역에 대한 프로브 세트를 사용하여 벡터 게놈 디지털 PCR 정량화를 수행하고, 숙주 TFRC로 정규화하고, 세포당 벡터 게놈(VG/세포)으로 표현한다.

조직 용해물의 가용성 분획에 존재하는 PHF1의 발현 수준은 또한 ELISA 플레이트 상에 코팅된 PHF 타우와의 상호작용을 검출함으로써 수집된 조직에서 측정된다. 항체-항원 복합체를 HRP 표지된 항-마우스 IgG 및 이의 기질 TMB를 사용하여 시각화 및 정량화하고, 이어서 플레이트 판독기 상에서 OD450에서 판독하고 입력 조직 단백질 양으로 정규화한다.

마우스 뇌를 반측 절단하고 항체 면역조직화학을 위해 조직 샘플을 할당한다. 상기 샘플을 4% 파라포름알데히드에 밤새 후-고정시킨다. PHF-1 항체를 항-마우스 IgG1 항체를 사용한 면역조직화학에 의해 검출한다(PHF-1은 마우스 IgG1 항체이다).

VOY101.PHF1 또는 VOY201.PHF-1의 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통한 1.4 x 10¹³ vg/kg의 투여 후 CNS 내의 PHF-1 발현은 마우스 항-IgG1 및 항-NeuN 또는 GFAP(아교 섬유질 산성 단백질) 이중 표지 면역형광 염색에 의해 평가된다. PHF-1은 마우스 IgG1 항체이고, 따라서 항-IgG1 항체 염색에 의해 검출된다.

B. 마우스 모델에서 VOY101 또는 VOY201-항-타우 항체의 정맥내 투여의 생체내 분포, 발현 및 효능 연구

2월령의 P301S 마우스의 3개의 그룹(대략 20마리의 마우스/그룹)에 정맥내 꼬리 정맥 주사를 통해 비히클(0.001% F-68을 포함한 PBS), 1.4 x 10¹³ vg/kg의 VOY101-항 타우 항체 벡터(VOY101.PHF-1), 또는 5.0 x 10¹³ vg/kg의 VOY201-항 타우 항체 벡터(VOY201.PHF-1)를 투여한다.

AAV 입자 투여 후 대략 3개월째에, 몇 개의 조직 샘플을 수집한다. 상기 프로모터에 대한 프로브 세트를 사용하여 벡터 게놈 디지털 PCR 정량화를 수행하고, 숙주 TFRC로 정규화하고, 세포당 벡터 게놈(VG/세포)으로 표현한다.

조직 용해물의 가용성 분획에 존재하는 PHF1의 발현 수준은 또한 ELISA 플레이트 상에 코팅된 쌍나선 필라멘트 타우와의 상호작용을 검출함으로써 수집된 조직에서 측정된다. 항체-항원 복합체를 HRP 표지된 항-마우스 IgG 및 이의 기질 TMB를 사용하여 시각화 및 정량화하고, 이어서 플레이트 판독기 상에서 OD450에서 판독하고 입력 조직 단백질 양으로 정규화한다.

VIII. 등가물 및 범위

당업자는 본원에 기재된 본 발명에 따른 특정 구현예에 대한 많은 등가물을 일상적인 실험만을 사용하여 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 본 발명의 범위는 상기 설명으로 제한되는 것이 아니라 첨부된 청구범위에 기재된 바와 같다.

청구범위에서, "a", "an" 및 "the"와 같은 관사는 달리 지시되거나 달리 문맥상 명백하지 않는 한, 하나 이상을 의미할 수 있다. 하나 이상의 그룹 구성원 사이에 "또는"을 포함하는 청구범위 또는 설명은 달리 지시되거나 달리 문맥상 명백하지 않는 한 그룹 구성원 중 하나, 하나 이상, 또는 전부가 주어진 생성물 또는 프로세스에 존재하거나, 사용되거나, 또는 이와 관련이 있는 경우 충족되는 것으로 간주된다. 본 발명은 그룹의 정확히 하나의 구성원이 주어진 생성물 또는 프로세스에 존재하거나, 사용되거나, 또는 이와 관련이 있는 구현예를 포함한다. 본 발명은 하나 이상의 또는 전체 그룹 구성원이 주어진 생성물 또는 프로세스에 존재하거나, 사용되거나, 또는 이와 관련이 있는 구현예를 포함한다.

용어 "포함하는"은 개방적인 것으로 의도되고 추가 요소 또는 단계의 포함을 허용하지만 요구하지는 않는다는 것이 또한 주목된다. "포함하는"이라는 용어가 본원에 사용될 때, "이루어지는"이라는 용어도 포함되고 개시된다.

범위가 제공되는 경우, 종점이 포함된다. 또한, 달리 지시되거나 달리 문맥상 및 당업자의 이해로부터 명백하지 않는 한, 범위로 표현된 값은 본 발명의 다른 구현예에서 언급된 범위 내의 임의의 특정 값 또는 하위범위를, 문맥상 달리 명백하게 지시되지 않는 한, 범위의 하한 단위의 10분의 1까지 추정할 수 있음을 이해해야 한다.

또한, 선행 기술 내에 속하는 본 발명의 임의의 특정 구현예는 임의의 하나 이상의 청구범위로부터 명시적으로 배제될 수 있음을 이해해야 한다. 이러한 구현예는 당업자에게 공지되어 있는 것으로 간주되므로, 이들은 배제가 본원에 명시적으로 제시되지 않은 경우에도 배제될 수 있다. 본 발명의 조성물의 임의의 특정 구현예(예를 들어, 임의의 항생제, 치료제 또는 활성 성분; 임의의 제조 방법; 임의의 사용 방법; 등)는, 임의의 이유로, 선행 기술의 존재와 관련이 있든 없든, 임의의 하나 이상의 청구범위로부터 배제될 수 있다.

사용된 단어는 제한이 아니라 설명의 단어이며, 더 넓은 측면에서 본 발명의 진정한 범위 및 사상을 벗어나지 않고 첨부된 청구범위의 범위 내에서 변경이 이루어질 수 있음을 이해해야 한다.

본 발명은 몇몇 기재된 구현예와 관련하여 어느 정도의 길이 및 어느 정도의 특이성으로 기재되었지만, 이것이 임의의 이러한 특정 사항 또는 구현예 또는 임의의 특정 구현예로 제한되어야 하는 것으로 의도되지 않지만, 첨부된 청구범위를 참조하여 선행 기술의 관점에서 이러한 청구범위의 가능한 가장 광범위한 해석을 제공하고, 따라서 본 발명의 의도된 범위를 효과적으로 포괄하도록 해석되어야 한다.

본원에 언급된 모든 공개 공보, 특허 출원, 특허 및 다른 참조문헌은 이들의 전문이 본원에 참조로 인용된다. 모순이 있는 경우, 정의를 포함하는 본 명세서가 우선할 것이다. 또한, 섹션 제목, 재료, 방법 및 예시는 단지 설명을 위한 것이고 제한하는 것으로 의도되지 않는다.

<110> VOYAGER THERAPEUTICS, INC. <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR DELIVERY OF AAV <130> 2057.1050PCT <140> PCT/US2018/xxxxxx <141> 2018-08-03 <150> 62/540,776 <151> 2017-08-03 <150> 62/565,264 <151> 2017-09-29 <150> 62/572,706 <151> 2017-10-16 <160> 1821 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 743 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 1 Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 1 5 10 15 Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Gln Pro 20 25 30 Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45 Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60 Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80 Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 85 90 95 Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110 Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu 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ccacggctgg acctgcggac agcaagttca gcaacagcca gctcatcttt 1620 gcggggccta aacagaacgg caacacggcc accgtacccg ggactctgat cttcacctct 1680 gaggaggagc tggcagccac caacgccacc gatacggaca tgtggggcaa cctacctggc 1740 ggtgaccaga gcaacagcaa cctgccgacc gtggacagac tgacagcctt gggagccgtg 1800 cctggaatgg tctggcaaaa cagagacatt tactaccagg gtcccatttg ggccaagatt 1860 cctcataccg atggacactt tcacccctca ccgctgattg gtgggtttgg gctgaaacac 1920 ccgcctcctc aaatttttat caagaacacc ccggtacctg cgaatcctgc aacgaccttc 1980 agctctactc cggtaaactc cttcattact cagtacagca ctggccaggt gtcggtgcag 2040 attgactggg agatccagaa ggagcggtcc aaacgctgga accccgaggt ccagtttacc 2100 tccaactacg gacagcaaaa ctctctgttg tgggctcccg atgcggctgg gaaatacact 2160 gagcctaggg ctatcggtac ccgctacctc acccaccacc tgtaataa 2208 <210> 53 <211> 1872 <212> DNA <213> Adeno-associated virus 4 <400> 53 atgccggggt tctacgagat cgtgctgaag gtgcccagcg acctggacga gcacctgccc 60 ggcatttctg actcttttgt gagctgggtg gccgagaagg aatgggagct gccgccggat 120 tctgacatgg acttgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga aaagctgcaa 180 cgcgagttcc tggtcgagtg gcgccgcgtg agtaaggccc cggaggccct cttctttgtc 240 cagttcgaga agggggacag ctacttccac ctgcacatcc tggtggagac cgtgggcgtc 300 aaatccatgg tggtgggccg ctacgtgagc cagattaaag agaagctggt gacccgcatc 360 taccgcgggg tcgagccgca gcttccgaac tggttcgcgg tgaccaagac gcgtaatggc 420 gccggaggcg ggaacaaggt ggtggacgac tgctacatcc ccaactacct gctccccaag 480 acccagcccg agctccagtg ggcgtggact aacatggacc agtatataag cgcctgtttg 540 aatctcgcgg agcgtaaacg gctggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600 gagcagaaca aggaaaacca gaaccccaat tctgacgcgc cggtcatcag gtcaaaaacc 660 tccgccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctggtggacc gcgggatcac gtcagaaaag 720 caatggatcc aggaggacca ggcgtcctac atctccttca acgccgcctc caactcgcgg 780 tcacaaatca aggccgcgct ggacaatgcc tccaaaatca tgagcctgac aaagacggct 840 ccggactacc tggtgggcca gaacccgccg gaggacattt ccagcaaccg catctaccga 900 atcctcgaga tgaacgggta cgatccgcag tacgcggcct ccgtcttcct gggctgggcg 960 caaaagaagt tcgggaagag gaacaccatc tggctctttg ggccggccac gacgggtaaa 1020 accaacatcg cggaagccat cgcccacgcc gtgcccttct acggctgcgt gaactggacc 1080 aatgagaact ttccgttcaa cgattgcgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggc 1140 aagatgacgg ccaaggtcgt agagagcgcc aaggccatcc tgggcggaag caaggtgcgc 1200 gtggaccaaa agtgcaagtc atcggcccag atcgacccaa ctcccgtgat cgtcacctcc 1260 aacaccaaca tgtgcgcggt catcgacgga aactcgacca ccttcgagca ccaacaacca 1320 ctccaggacc ggatgttcaa gttcgagctc accaagcgcc tggagcacga ctttggcaag 1380 gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcgt cagatcacgt gaccgaggtg 1440 actcacgagt tttacgtcag aaagggtgga gctagaaaga ggcccgcccc caatgacgca 1500 gatataagtg agcccaagcg ggcctgtccg tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560 gaagctccgg tggactacgc ggacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggtatg 1620 aatctgatgc tttttccctg ccggcaatgc gagagaatga atcagaatgt ggacatttgc 1680 ttcacgcacg gggtcatgga ctgtgccgag tgcttccccg tgtcagaatc tcaacccgtg 1740 tctgtcgtca gaaagcggac gtatcagaaa ctgtgtccga ttcatcacat catggggagg 1800 gcgcccgagg tggcctgctc ggcctgcgaa ctggccaatg tggacttgga tgactgtgac 1860 atggaacaat aa 1872 <210> 54 <211> 1611 <212> DNA <213> Adeno-associated virus 4 <400> 54 atgccggggt tctacgagat cgtgctgaag gtgcccagcg acctggacga gcacctgccc 60 ggcatttctg actcttttgt gagctgggtg gccgagaagg aatgggagct gccgccggat 120 tctgacatgg acttgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga aaagctgcaa 180 cgcgagttcc tggtcgagtg gcgccgcgtg agtaaggccc cggaggccct cttctttgtc 240 cagttcgaga agggggacag ctacttccac ctgcacatcc tggtggagac cgtgggcgtc 300 aaatccatgg tggtgggccg ctacgtgagc cagattaaag agaagctggt gacccgcatc 360 taccgcgggg tcgagccgca gcttccgaac tggttcgcgg tgaccaagac gcgtaatggc 420 gccggaggcg ggaacaaggt ggtggacgac tgctacatcc ccaactacct gctccccaag 480 acccagcccg agctccagtg ggcgtggact aacatggacc agtatataag cgcctgtttg 540 aatctcgcgg agcgtaaacg gctggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600 gagcagaaca aggaaaacca gaaccccaat tctgacgcgc cggtcatcag gtcaaaaacc 660 tccgccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctggtggacc gcgggatcac gtcagaaaag 720 caatggatcc aggaggacca ggcgtcctac atctccttca acgccgcctc caactcgcgg 780 tcacaaatca aggccgcgct ggacaatgcc tccaaaatca tgagcctgac aaagacggct 840 ccggactacc tggtgggcca gaacccgccg gaggacattt ccagcaaccg catctaccga 900 atcctcgaga tgaacgggta cgatccgcag tacgcggcct ccgtcttcct gggctgggcg 960 caaaagaagt tcgggaagag gaacaccatc tggctctttg ggccggccac gacgggtaaa 1020 accaacatcg cggaagccat cgcccacgcc gtgcccttct acggctgcgt gaactggacc 1080 aatgagaact ttccgttcaa cgattgcgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggc 1140 aagatgacgg ccaaggtcgt agagagcgcc aaggccatcc tgggcggaag caaggtgcgc 1200 gtggaccaaa agtgcaagtc atcggcccag atcgacccaa ctcccgtgat cgtcacctcc 1260 aacaccaaca tgtgcgcggt catcgacgga aactcgacca ccttcgagca ccaacaacca 1320 ctccaggacc ggatgttcaa gttcgagctc accaagcgcc tggagcacga ctttggcaag 1380 gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcgt cagatcacgt gaccgaggtg 1440 actcacgagt tttacgtcag aaagggtgga gctagaaaga ggcccgcccc caatgacgca 1500 gatataagtg agcccaagcg ggcctgtccg tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560 gaagctccgg tggactacgc ggacagattg gctagaggac aacctctctg a 1611 <210> 55 <211> 1872 <212> DNA <213> Adeno-associated virus 4 <400> 55 atgccggggt tctacgagat cgtgctgaag gtgcccagcg acctggacga gcacctgccc 60 ggcatttctg actcttttgt gagctgggtg gccgagaagg aatgggagct gccgccggat 120 tctgacatgg acttgaatct gattgagcag gcacccctga ccgtggccga aaagctgcaa 180 cgcgagttcc tggtcgagtg gcgccgcgtg agtaaggccc cggaggccct cttctttgtc 240 cagttcgaga agggggacag ctacttccac ctgcacatcc tggtggagac cgtgggcgtc 300 aaatccatgg tggtgggccg ctacgtgagc cagattaaag agaagctggt gacccgcatc 360 taccgcgggg tcgagccgca gcttccgaac tggttcgcgg tgaccaagac gcgtaatggc 420 gccggaggcg ggaacaaggt ggtggacgac tgctacatcc ccaactacct gctccccaag 480 acccagcccg agctccagtg ggcgtggact aacatggacc agtatataag cgcctgtttg 540 aatctcgcgg agcgtaaacg gctggtggcg cagcatctga cgcacgtgtc gcagacgcag 600 gagcagaaca aggaaaacca gaaccccaat tctgacgcgc cggtcatcag gtcaaaaacc 660 tccgccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctggtggacc gcgggatcac gtcagaaaag 720 caatggatcc aggaggacca ggcgtcctac atctccttca acgccgcctc caactcgcgg 780 tcacaaatca aggccgcgct ggacaatgcc tccaaaatca tgagcctgac aaagacggct 840 ccggactacc tggtgggcca gaacccgccg gaggacattt ccagcaaccg catctaccga 900 atcctcgaga tgaacgggta cgatccgcag tacgcggcct ccgtcttcct gggctgggcg 960 caaaagaagt tcgggaagag gaacaccatc tggctctttg ggccggccac gacgggtaaa 1020 accaacatcg cggaagccat cgcccacgcc gtgcccttct acggctgcgt gaactggacc 1080 aatgagaact ttccgttcaa cgattgcgtc gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggc 1140 aagatgacgg ccaaggtcgt agagagcgcc aaggccatcc tgggcggaag caaggtgcgc 1200 gtggaccaaa agtgcaagtc atcggcccag atcgacccaa ctcccgtgat cgtcacctcc 1260 aacaccaaca tgtgcgcggt catcgacgga aactcgacca ccttcgagca ccaacaacca 1320 ctccaggacc ggatgttcaa gttcgagctc accaagcgcc tggagcacga ctttggcaag 1380 gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcgt cagatcacgt gaccgaggtg 1440 actcacgagt tttacgtcag aaagggtgga gctagaaaga ggcccgcccc caatgacgca 1500 gatataagtg agcccaagcg ggcctgtccg tcagttgcgc agccatcgac gtcagacgcg 1560 gaagctccgg tggactacgc ggacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgtgggtatg 1620 aatctgatgc tttttccctg ccggcaatgc gagagaatga atcagaatgt ggacatttgc 1680 ttcacgcacg gggtcatgga ctgtgccgag tgcttccccg tgtcagaatc tcaacccgtg 1740 tctgtcgtca gaaagcggac gtatcagaaa ctgtgtccga ttcatcacat catggggagg 1800 gcgcccgagg tggcctgctc ggcctgcgaa ctggccaatg tggacttgga tgactgtgac 1860 atggaacaat aa 1872 <210> 56 <211> 1617 <212> DNA <213> Adeno-associated virus 4 <220> <221> modified_base <222> (162)..(162) <223> a, c, g, or t <400> 56 atgcgtgcag cagctggcgg agctgcagtc gagggsggac aaggtgccga tggagtgggt 60 aatgcctcgg gtgattggca ttgcgattcc acctggtctg agggccacgt cacgaccacc 120 agcaccagaa cctgggtctt gcccacctac aacaaccacc tntacaagcg actcggagag 180 agcctgcagt ccaacaccta caacggattc tccaccccct ggggatactt tgacttcaac 240 cgcttccact gccacttctc accacgtgac tggcagcgac tcatcaacaa caactggggc 300 atgcgaccca aagccatgcg ggtcaaaatc ttcaacatcc aggtcaagga ggtcacgacg 360 tcgaacggcg agacaacggt ggctaataac cttaccagca cggttcagat ctttgcggac 420 tcgtcgtacg aactgccgta cgtgatggat gcgggtcaag agggcagcct gcctcctttt 480 cccaacgacg tctttatggt gccccagtac ggctactgtg gactggtgac cggcaacact 540 tcgcagcaac agactgacag aaatgccttc tactgcctgg agtactttcc ttcgcagatg 600 ctgcggactg gcaacaactt tgaaattacg tacagttttg agaaggtgcc tttccactcg 660 atgtacgcgc acagccagag cctggaccgg ctgatgaacc ctctcatcga ccagtacctg 720 tggggactgc aatcgaccac caccggaacc accctgaatg ccgggactgc caccaccaac 780 tttaccaagc tgcggcctac caacttttcc aactttaaaa agaactggct gcccgggcct 840 tcaatcaagc agcagggctt ctcaaagact gccaatcaaa actacaagat ccctgccacc 900 gggtcagaca gtctcatcaa atacgagacg cacagcactc tggacggaag atggagtgcc 960 ctgacccccg gacctccaat ggccacggct ggacctgcgg acagcaagtt cagcaacagc 1020 cagctcatct ttgcggggcc taaacagaac ggcaacacgg ccaccgtacc cgggactctg 1080 atcttcacct ctgaggagga gctggcagcc accaacgcca ccgatacgga catgtggggc 1140 aacctacctg gcggtgacca gagcaacagc aacctgccga ccgtggacag actgacagcc 1200 ttgggagccg tgcctggaat ggtctggcaa aacagagaca tttactacca gggtcccatt 1260 tgggccaaga ttcctcatac cgatggacac tttcacccct caccgctgat tggtgggttt 1320 gggctgaaac acccgcctcc tcaaattttt atcaagaaca ccccggtacc tgcgaatcct 1380 gcaacgacct tcagctctac tccggtaaac tccttcatta ctcagtacag cactggccag 1440 gtgtcggtgc agattgactg ggagatccag aaggagcggt ccaaacgctg gaaccccgag 1500 gtccagttta cctccaacta cggacagcaa aactctctgt tgtgggctcc cgatgcggct 1560 gggaaataca ctgagcctag ggctatcggt acccgctacc tcacccacca cctgtaa 1617 <210> 57 <211> 939 <212> DNA <213> Adeno-associated virus 4 <400> 57 atggagctgg tcgggtggct ggtggaccgc gggatcacgt cagaaaagca atggatccag 60 gaggaccagg cgtcctacat ctccttcaac gccgcctcca actcgcggtc acaaatcaag 120 gccgcgctgg acaatgcctc caaaatcatg agcctgacaa agacggctcc ggactacctg 180 gtgggccaga acccgccgga ggacatttcc agcaaccgca tctaccgaat cctcgagatg 240 aacgggtacg atccgcagta cgcggcctcc gtcttcctgg gctgggcgca aaagaagttc 300 gggaagagga acaccatctg gctctttggg ccggccacga cgggtaaaac caacatcgcg 360 gaagccatcg cccacgccgt gcccttctac ggctgcgtga actggaccaa tgagaacttt 420 ccgttcaacg attgcgtcga caagatggtg atctggtggg aggagggcaa gatgacggcc 480 aaggtcgtag agagcgccaa ggccatcctg ggcggaagca aggtgcgcgt ggaccaaaag 540 tgcaagtcat cggcccagat cgacccaact cccgtgatcg tcacctccaa caccaacatg 600 tgcgcggtca tcgacggaaa ctcgaccacc ttcgagcacc aacaaccact ccaggaccgg 660 atgttcaagt tcgagctcac caagcgcctg gagcacgact ttggcaaggt caccaagcag 720 gaagtcaaag actttttccg gtgggcgtca gatcacgtga ccgaggtgac tcacgagttt 780 tacgtcagaa agggtggagc tagaaagagg cccgccccca atgacgcaga tataagtgag 840 cccaagcggg cctgtccgtc agttgcgcag ccatcgacgt cagacgcgga agctccggtg 900 gactacgcgg acagattggc tagaggacaa cctctctga 939 <210> 58 <211> 1197 <212> DNA <213> Adeno-associated virus 4 <400> 58 atggagctgg tcgggtggct ggtggaccgc gggatcacgt cagaaaagca atggatccag 60 gaggaccagg cgtcctacat ctccttcaac gccgcctcca actcgcggtc acaaatcaag 120 gccgcgctgg acaatgcctc caaaatcatg agcctgacaa agacggctcc ggactacctg 180 gtgggccaga acccgccgga ggacatttcc agcaaccgca tctaccgaat cctcgagatg 240 aacgggtacg atccgcagta cgcggcctcc gtcttcctgg gctgggcgca aaagaagttc 300 gggaagagga acaccatctg gctctttggg ccggccacga cgggtaaaac caacatcgcg 360 gaagccatcg cccacgccgt gcccttctac ggctgcgtga actggaccaa tgagaacttt 420 ccgttcaacg attgcgtcga caagatggtg atctggtggg aggagggcaa gatgacggcc 480 aaggtcgtag agagcgccaa ggccatcctg ggcggaagca aggtgcgcgt ggaccaaaag 540 tgcaagtcat cggcccagat cgacccaact cccgtgatcg tcacctccaa caccaacatg 600 tgcgcggtca tcgacggaaa ctcgaccacc ttcgagcacc aacaaccact ccaggaccgg 660 atgttcaagt tcgagctcac caagcgcctg gagcacgact ttggcaaggt caccaagcag 720 gaagtcaaag actttttccg gtgggcgtca gatcacgtga ccgaggtgac tcacgagttt 780 tacgtcagaa agggtggagc tagaaagagg cccgccccca atgacgcaga tataagtgag 840 cccaagcggg cctgtccgtc agttgcgcag ccatcgacgt cagacgcgga agctccggtg 900 gactacgcgg acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg tgggtatgaa tctgatgctt 960 tttccctgcc ggcaatgcga gagaatgaat cagaatgtgg acatttgctt cacgcacggg 1020 gtcatggact gtgccgagtg cttccccgtg tcagaatctc aacccgtgtc tgtcgtcaga 1080 aagcggacgt atcagaaact gtgtccgatt catcacatca tggggagggc gcccgaggtg 1140 gcctgctcgg cctgcgaact ggccaatgtg gacttggatg actgtgacat ggaacaa 1197 <210> 59 <211> 245 <212> DNA <213> Adeno-associated virus 4 <400> 59 ctccatcatc taggtttgcc cactgacgtc aatgtgacgt cctagggtta gggaggtccc 60 tgtattagca gtcacgtgag tgtcgtattt cgcggagcgt agcggagcgc ataccaagct 120 gccacgtcac agccacgtgg tccgtttgcg acagtttgcg acaccatgtg gtcaggaggg 180 tatataaccg cgagtgagcc agcgaggagc tccattttgc ccgcgaattt tgaacgagca 240 gcagc 245 <210> 60 <211> 313 <212> PRT <213> Adeno-associated virus 4 <220> <221> MOD_RES <222> (313)..(313) <223> Any naturally occurring amino acid <400> 60 Met Glu Leu Val Gly Trp Leu Val Asp Arg Gly Ile Thr Ser Glu Lys 1 5 10 15 Gln Trp Ile Gln Glu Asp Gln Ala Ser Tyr Ile Ser Phe Asn Ala Ala 20 25 30 Ser Asn Ser Arg Ser Gln Ile Lys Ala Ala Leu Asp Asn Ala Ser Lys 35 40 45 Ile Met Ser Leu Thr Lys Thr Ala Pro Asp Tyr Leu Val Gly Gln Asn 50 55 60 Pro Pro Glu Asp Ile Ser Ser Asn Arg Ile Tyr Arg Ile Leu Glu Met 65 70 75 80 Asn Gly Tyr Asp Pro Gln Tyr Ala Ala Ser Val Phe Leu Gly Trp Ala 85 90 95 Gln Lys Lys Phe Gly Lys Arg Asn Thr Ile Trp Leu Phe Gly Pro Ala 100 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<213> Adeno-associated virus 4 <400> 61 Met Glu Leu Val Gly Trp Leu Val Asp Arg Gly Ile Thr Ser Glu Lys 1 5 10 15 Gln Trp Ile Gln Glu Asp Gln Ala Ser Tyr Ile Ser Phe Asn Ala Ala 20 25 30 Ser Asn Ser Arg Ser Gln Ile Lys Ala Ala Leu Asp Asn Ala Ser Lys 35 40 45 Ile Met Ser Leu Thr Lys Thr Ala Pro Asp Tyr Leu Val Gly Gln Asn 50 55 60 Pro Pro Glu Asp Ile Ser Ser Asn Arg Ile Tyr Arg Ile Leu Glu Met 65 70 75 80 Asn Gly Tyr Asp Pro Gln Tyr Ala Ala Ser Val Phe Leu Gly Trp Ala 85 90 95 Gln Lys Lys Phe Gly Lys Arg Asn Thr Ile Trp Leu Phe Gly Pro Ala 100 105 110 Thr Thr Gly Lys Thr Asn Ile Ala Glu Ala Ile Ala His Ala Val Pro 115 120 125 Phe Tyr Gly Cys Val Asn Trp Thr Asn Glu Asn Phe Pro Phe Asn Asp 130 135 140 Cys Val Asp Lys Met Val Ile Trp Trp Glu Glu Gly Lys Met Thr Ala 145 150 155 160 Lys Val Val Glu Ser Ala Lys Ala Ile Leu Gly Gly Ser Lys Val Arg 165 170 175 Val Asp Gln Lys Cys Lys Ser Ser Ala Gln Ile Asp Pro Thr Pro Val 180 185 190 Ile Val Thr Ser Asn Thr Asn Met Cys Ala Val Ile Asp Gly 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<400> 62 Met Pro Gly Phe Tyr Glu Ile Val Leu Lys Val Pro Ser Asp Leu Asp 1 5 10 15 Glu His Leu Pro Gly Ile Ser Asp Ser Phe Val Ser Trp Val Ala Glu 20 25 30 Lys Glu Trp Glu Leu Pro Pro Asp Ser Asp Met Asp Leu Asn Leu Ile 35 40 45 Glu Gln Ala Pro Leu Thr Val Ala Glu Lys Leu Gln Arg Glu Phe Leu 50 55 60 Val Glu Trp Arg Arg Val Ser Lys Ala Pro Glu Ala Leu Phe Phe Val 65 70 75 80 Gln Phe Glu Lys Gly Asp Ser Tyr Phe His Leu His Ile Leu Val Glu 85 90 95 Thr Val Gly Val Lys Ser Met Val Val Gly Arg Tyr Val Ser Gln Ile 100 105 110 Lys Glu Lys Leu Val Thr Arg Ile Tyr Arg Gly Val Glu Pro Gln Leu 115 120 125 Pro Asn Trp Phe Ala Val Thr Lys Thr Arg Asn Gly Ala Gly Gly Gly 130 135 140 Asn Lys Val Val Asp Asp Cys Tyr Ile Pro Asn Tyr Leu Leu Pro Lys 145 150 155 160 Thr Gln Pro Glu Leu Gln Trp Ala Trp Thr Asn Met Asp Gln Tyr Ile 165 170 175 Ser Ala Cys Leu Asn Leu Ala Glu Arg Lys Arg Leu Val Ala Gln His 180 185 190 Leu Thr His Val Ser Gln Thr Gln Glu Gln Asn Lys Glu Asn Gln Asn 195 200 205 Pro Asn Ser 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<212> PRT <213> Adeno-associated virus 4 <220> <221> MOD_RES <222> (537)..(537) <223> Any naturally occurring amino acid <400> 63 Met Pro Gly Phe Tyr Glu Ile Val Leu Lys Val Pro Ser Asp Leu Asp 1 5 10 15 Glu His Leu Pro Gly Ile Ser Asp Ser Phe Val Ser Trp Val Ala Glu 20 25 30 Lys Glu Trp Glu Leu Pro Pro Asp Ser Asp Met Asp Leu Asn Leu Ile 35 40 45 Glu Gln Ala Pro Leu Thr Val Ala Glu Lys Leu Gln Arg Glu Phe Leu 50 55 60 Val Glu Trp Arg Arg Val Ser Lys Ala Pro Glu Ala Leu Phe Phe Val 65 70 75 80 Gln Phe Glu Lys Gly Asp Ser Tyr Phe His Leu His Ile Leu Val Glu 85 90 95 Thr Val Gly Val Lys Ser Met Val Val Gly Arg Tyr Val Ser Gln Ile 100 105 110 Lys Glu Lys Leu Val Thr Arg Ile Tyr Arg Gly Val Glu Pro Gln Leu 115 120 125 Pro Asn Trp Phe Ala Val Thr Lys Thr Arg Asn Gly Ala Gly Gly Gly 130 135 140 Asn Lys Val Val Asp Asp Cys Tyr Ile Pro Asn Tyr Leu Leu Pro Lys 145 150 155 160 Thr Gln Pro Glu Leu Gln Trp Ala Trp Thr Asn Met Asp Gln Tyr Ile 165 170 175 Ser Ala Cys Leu Asn Leu Ala Glu Arg Lys Arg 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Adeno-associated virus 4 <400> 67 Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg Pro Leu Ile Glu Ser Pro Gln Gln Pro 1 5 10 15 Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Lys Gln Pro Ala Lys Lys 20 25 30 Lys Leu Val Phe Glu Asp Glu Thr Gly Ala Gly Asp Gly Pro Pro Glu 35 40 45 Gly Ser Thr Ser Gly Ala Met Ser Asp Asp Ser Glu Met Arg Ala Ala 50 55 60 Ala Gly Gly Ala Ala Val Glu Gly Gly Gln Gly Ala Asp Gly Val Gly 65 70 75 80 Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Ser Glu Gly His 85 90 95 Val Thr Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Val Leu Pro Thr Tyr Asn Asn 100 105 110 His Leu Tyr Lys Arg Leu Gly Glu Ser Leu Gln Ser Asn Thr Tyr Asn 115 120 125 Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys 130 135 140 His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly 145 150 155 160 Met Arg Pro Lys Ala Met Arg Val Lys Ile Phe Asn Ile Gln Val Lys 165 170 175 Glu Val Thr Thr Ser Asn Gly Glu Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr 180 185 190 Ser Thr Val Gln Ile Phe Ala Asp Ser Ser Tyr Glu Leu Pro Tyr Val 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Synthetic polynucleotide" <400> 798 atgtcttttg ttgatcaccc tccagattgg ttggaagaag ttggtgaagg tcttcgcgag 60 tttttgggcc ttgaagcggg cccaccgaaa ccaaaaccca atcagcagca tcaagatcaa 120 gcccgtggtc ttgtgctgcc tggttataac tatctcggac ccggaaacgg tctcgatcga 180 ggagagcctg tcaacagggc agacgaggtc gcgcgagagc acgacatctc gtacaacgag 240 cagcttgagg cgggagacaa cccctacctc aagtacaacc acgcggacgc cgagtttcag 300 gagaagctcg ccgacgacac atccttcggg ggaaacctcg gaaaggcagt ctttcaggcc 360 aagaaaaggg ttctcgaacc ttttggcctg gttgaagagg gtgctaagac ggcccctacc 420 ggaaagcgga tagacgacca ctttccaaaa agaaagaagg cccggaccga agaggactcc 480 aagccttcca cctcgtcaga cgccgaagct ggacccagcg gatcccagca gctgcaaatc 540 ccagcccaac cagcctcaag tttgggagct gatacaatgt ctgcgggagg tggcggccca 600 ttgggcgaca ataaccaagg tgccgatgga gtgggcaatg cctcgggaga ttggcattgc 660 gattccacgt ggatggggga cagagtcgtc accaagtcca cccgaacctg ggtgctgccc 720 agctacaaca accaccagta ccgagagatc aaaagcggct ccgtcgacgg aagcaacgcc 780 aacgcctact ttggatacag caccccctgg gggtactttg actttaaccg 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acccattacc ctggtagata agtagcatgg cgggttaatc attaactaca aggaacccct 300 agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc 360 aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag 420 ccttaattaa cctaattcac tggccgtcgt tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg 480 cgttacccaa cttaatcgcc ttgcagcaca tccccctttc gccagctggc gtaatagcga 540 agaggcccgc accgatcgcc cttcccaaca gttgcgcagc ctgaatggcg aatgggacgc 600 gccctgtagc ggcgcattaa gcgcggcggg tgtggtggtt acgcgcagcg tgaccgctac 660 acttgccagc gccctagcgc ccgctccttt cgctttcttc ccttcctttc tcgccacgtt 720 cgccggcttt ccccgtcaag ctctaaatcg ggggctccct ttagggttcc gatttagtgc 780 tttacggcac ctcgacccca aaaaacttga ttagggtgat ggttcacgta gtgggccatc 840 gccctgatag acggtttttc gccctttgac gttggagtcc acgttcttta atagtggact 900 cttgttccaa actggaacaa cactcaaccc tatctcggtc tattcttttg atttataagg 960 gattttgccg atttcggcct attggttaaa aaatgagctg atttaacaaa aatttaacgc 1020 gaattttaac aaaatattaa cgcttacaat ttaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc 1080 ggaaccccta 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cgccagtggg ccgggctggt ggagaaggtg caggctgccg 960 tgggcaccag cgccgcccct gtgcccagcg acaatcactg aacgccgaag cctgcagcca 1020 tgcgacccca cgccaccccg tgcctcctgc ctccgcgcag cctgcagcgg gagaccctgt 1080 ccccgcccca gccgtcctcc tggggtggac cctagtttaa taaagattca ccaagtttca 1140 cgcatcaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 1165 <210> 1742 <211> 1265 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1742 ggatggggag ataagagaag accaggaggg agttaaatag ggaatgggtt gggggcggct 60 tggtaaatgt gctgggatta ggctgttgca gataatgcaa caaggcttgg aaggctaacc 120 tgggactggc caatcacagg caggaagatg aaggttctgt gggctgcgtt gctggtcaca 180 ttcctggcag gatgccaggc caaggtggag caagcggtgg agacagagcc ggagcccgag 240 ctgcgccagc agaccgagtg gcagagcggc cagcgctggg aactggcact gggtcgcttt 300 tgggattacc tgcgctgggt gcagacactg tctgagcagg tgcaggagga gctgctcagc 360 tcccaggtca cccaggaact gagggcgctg atggacgaga ccatgaagga gttgaaggcc 420 tacaaatcgg aactggagga acaactgacc ccggtggcgg aggagacgcg ggcacggctg 480 tccaaggagc tgcaggcggc gcaggcccgg ctgggcgcgg acatggagga cgtgtgcggc 540 cgcctggtgc 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ccgaggcagg ggctgggcag aggggagagg aagcacaaga 3180 agtgggagtg ggagaggaag ccacgtgctg gagagtagac atccccctcc ttgccgctgg 3240 gagagccaag gcctatgcca cctgcagcgt ctgagcggcc gcctgtcctt ggtggccggg 3300 ggtgggggcc tgctgtgggt cagtgtgcca ccctctgcag ggcagcctgt gggagaaggg 3360 acagcgggta aaaagagaag gcaagctggc aggagggtgg cacttcgtgg atgacctcct 3420 tagaaaagac tgaccttgat gtcttgagag cgctggcctc ttcctccctc cctgcagggt 3480 agggggcctg agttgagggg cttccctctg ctccacagaa accctgtttt attgagttct 3540 gaaggttgga actgctgcca tgattttggc cactttgcag acctgggact ttagggctaa 3600 ccagttctct ttgtaaggac ttgtgcctct tgggagacgt ccacccgttt ccaagcctgg 3660 gccactggca tctctggagt gtgtgggggt ctgggaggca ggtcccgagc cccctgtcct 3720 tcccacggcc actgcagtca ccccgtctgc gccgctgtgc tgttgtctgc cgtgagagcc 3780 caatcactgc ctatacccct catcacacgt cacaatgtcc cgaattccca gcctcaccac 3840 cccttctcag taatgaccct ggttggttgc aggaggtacc tactccatac tgagggtgaa 3900 attaagggaa ggcaaagtcc aggcacaaga gtgggacccc agcctctcac tctcagttcc 3960 actcatccaa ctgggaccct caccacgaat ctcatgatct gattcggttc cctgtctcct 4020 cctcccgtca cagatgtgag ccagggcact gctcagctgt gaccctaggt gtttctgcct 4080 tgttgacatg gagagagccc tttcccctga gaaggcctgg ccccttcctg tgctgagccc 4140 acagcagcag gctgggtgtc ttggttgtca gtggtggcac caggatggaa gggcaaggca 4200 cccagggcag gcccacagtc ccgctgtccc ccacttgcac cctagcttgt agctgccaac 4260 ctcccagaca gcccagcccg ctgctcagct ccacatgcat agtatcagcc ctccacaccc 4320 gacaaagggg aacacacccc cttggaaatg gttcttttcc cccagtccca gctggaagcc 4380 atgctgtctg ttctgctgga gcagctgaac atatacatag atgttgccct gccctcccca 4440 tctgcaccct gttgagttgt agttggattt gtctgtttat gcttggattc accagagtga 4500 ctatgatagt gaaaagaaaa aaaaaaaaaa aaaaggacgc atgtatcttg aaatgcttgt 4560 aaagaggttt ctaacccacc ctcacgaggt gtctctcacc cccacactgg gactcgtgtg 4620 gcctgtgtgg tgccaccctg ctggggcctc ccaagttttg aaaggctttc ctcagcacct 4680 gggacccaac agagaccagc ttctagcagc taaggaggcc gttcagctgt gacgaaggcc 4740 tgaagcacag gattaggact gaagcgatga tgtccccttc cctacttccc cttggggctc 4800 cctgtgtcag ggcacagact 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gtttgtagat gatgtggagg 900 tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc cgctcagtca 960 gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa tgcagggtca 1020 acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa ggcagaccga 1080 aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag gataaagtca 1140 gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag tggcagtgga 1200 atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca gatggctctt 1260 acttcgtcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga aatactttca 1320 cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc ctctcccact 1380 ctcctggtag aaagaggcga gagggcagag gaagtcttct aacatgcggt gacgtggagg 1440 agaatcccgg ccctatgagt cctgcccagt tcctgtttct gttagtgctc tggattcggg 1500 aaaccaacgg tgatgttgtg atgacccaga ctccactcac tttgtcggtt accattggac 1560 aaccagcctc catctcttgc aagtcaagtc agagcctctt agatagtgat ggaaagacat 1620 atttgaattg gttgttacag aggccaggcc agtctccaaa gcgcctaatc tatctggtgt 1680 ctaaactgga ctctggagtc cctgacagat tcactggcag tggatcaggg acagatttca 1740 cactgaaaat tagcagagtg gaggctgagg atttgggagt ttattattgc tggcaaggta 1800 cacattttcc tcggacgttc ggtggaggca ccaagctgga aatcaaacgg gctgatgctg 1860 caccaactgt atccatcttc ccaccatcca gtgagcagtt aacatctgga ggtgcctcag 1920 tcgtgtgctt cttgaacaac ttctacccca aagacatcaa tgtcaagtgg aagattgatg 1980 gcagtgaacg acaaaatggc gtcctgaaca gttggactga tcaggacagc aaagacagca 2040 cctacagcat gagcagcacc ctcacgttga ccaaggacga gtatgaacga cataacagct 2100 atacctgtga ggccactcac aagacatcaa cttcacccat tgtcaagagc ttcaacagga 2160 atgagtgtta g 2171 <210> 1821 <211> 2171 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 1821 gaggagccac catgagtcct gcccagttcc tgtttctgtt agtgctctgg attcgggaaa 60 ccaacggtga tgttgtgatg acccagactc cactcacttt gtcggttacc attggacaac 120 cagcctccat ctcttgcaag tcaagtcaga gcctcttaga tagtgatgga aagacatatt 180 tgaattggtt gttacagagg ccaggccagt ctccaaagcg cctaatctat ctggtgtcta 240 aactggactc tggagtccct gacagattca ctggcagtgg atcagggaca gatttcacac 300 tgaaaattag cagagtggag gctgaggatt tgggagttta ttattgctgg caaggtacac 360 attttcctcg gacgttcggt ggaggcacca agctggaaat caaacgggct gatgctgcac 420 caactgtatc catcttccca ccatccagtg agcagttaac atctggaggt gcctcagtcg 480 tgtgcttctt gaacaacttc taccccaaag acatcaatgt caagtggaag attgatggca 540 gtgaacgaca aaatggcgtc ctgaacagtt ggactgatca ggacagcaaa gacagcacct 600 acagcatgag cagcaccctc acgttgacca aggacgagta tgaacgacat aacagctata 660 cctgtgaggc cactcacaag acatcaactt cacccattgt caagagcttc aacaggaatg 720 agtgtagaaa gaggcgagag ggcagaggaa gtcttctaac atgcggtgac gtggaggaga 780 atcccggccc tatgggatgg agctggatct ttctctttct cctgtcagga actacaggtg 840 tcctctctga ggtccagctg caacagtctg gacctgagct ggtgaagcct ggggcttcag 900 tgaagatatc ctgcaagact tctggataca cattcactga atacaccata cactgggtga 960 agcagagcca tggagagagc cttgagtgga ttggaggtat taatccaaac gatggtggta 1020 ctatttacaa ccagaagttc aagggcaagg ccacattgac tgtagacaag tcctccaaaa 1080 cagcctacat ggagctccgc agcctgacat ctgaggattc tgcagtcttt tactgtgcaa 1140 gagggccctc cgccaggttt ccttactggg gccaagggac tctggtcact gtctctgcag 1200 ccaaaacgac acccccatct gtctatccac tggcccctgg atctgctgcc caaactaact 1260 ccatggtgac cctgggatgc ctggtcaagg gctatttccc tgagccagtg acagtgacct 1320 ggaactctgg atccctgtcc agcggtgtgc acaccttccc agctgtcctg cagtctgacc 1380 tctacactct gagcagctca gtgactgtcc cctccagcac ctggcccagc gagaccgtca 1440 cctgcaacgt tgcccacccg gccagcagca ccaaggtgga caagaaaatt gtgcccaggg 1500 attgtggttg taagccttgc atatgtacag tcccagaagt atcatctgtc ttcatcttcc 1560 ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg tgtgttgtgg 1620 tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat gatgtggagg 1680 tgcacacagc tcagacgcaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc cgctcagtca 1740 gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa tgcagggtca 1800 acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa ggcagaccga 1860 aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag gataaagtca 1920 gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag tggcagtgga 1980 atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca gatggctctt 2040 acttcgtcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga aatactttca 2100 cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc ctctcccact 2160 ctcctggtta g 2171

Claims (77)

1. 캡시드 및 바이러스 게놈을 포함하는 아데노-관련 바이러스(AAV) 입자로서, 상기 캡시드가 AAV 입자의 전달 후 혈액 뇌 장벽을 투과하는, 아데노-관련 바이러스(AAV) 입자.
2. 제1항에 있어서, 상기 AAV 입자가 VOY101, VOY201, AAVPHP.B (PHP.B), AAVPHP.A (PHP.A), AAVG2B-26, AAVG2B-13, AAVTH1.1-32, AAVTH1.1-35, AAVPHP.B2 (PHP.B2), AAVPHP.B3 (PHP.B3), AAVPHP.N/PHP.B-DGT, AAVPHP.B-EST, AAVPHP.B-GGT, AAVPHP.B-ATP, AAVPHP.B-ATT-T, AAVPHP.B-DGT-T, AAVPHP.B-GGT-T, AAVPHP.B-SGS, AAVPHP.B-AQP, AAVPHP.B-QQP, AAVPHP.B-SNP(3), AAVPHP.B-SNP, AAVPHP.B-QGT, AAVPHP.B-NQT, AAVPHP.B-EGS, AAVPHP.B-SGN, AAVPHP.B-EGT, AAVPHP.B-DST, AAVPHP.B-DST, AAVPHP.B-STP, AAVPHP.B-PQP, AAVPHP.B-SQP, AAVPHP.B-QLP, AAVPHP.B-TMP, AAVPHP.B-TTP, AAVPHP.S/G2A12, AAVG2A15/G2A3 (G2A3), AAVG2B4 (G2B4), AAVG2B5 (G2B5), PHP.S, AAV1, AAV2, AAV2G9, AAV3, AAV3a, AAV3b, AAV3-3, AAV4, AAV4-4, AAV5, AAV6, AAV6.1, AAV6.2, AAV6.1.2, AAV7, AAV7.2, AAV8, AAV9, AAV9.11, AAV9.13, AAV9.16, AAV9.24, AAV9.45, AAV9.47, AAV9.61, AAV9.68, AAV9.84, AAV9.9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV16.3, AAV24.1, AAV27.3, AAV42.12, AAV42-1b, AAV42-2, AAV42-3a, AAV42-3b, AAV42-4, AAV42-5a, AAV42-5b, AAV42-6b, AAV42-8, AAV42-10, AAV42-11, AAV42-12, AAV42-13, AAV42-15, AAV42-aa, AAV43-1, AAV43-12, AAV43-20, AAV43-21, AAV43-23, AAV43-25, AAV43-5, AAV44.1, AAV44.2, AAV44.5, AAV223.1, AAV223.2, AAV223.4, AAV223.5, AAV223.6, AAV223.7, AAV1-7/rh.48, AAV1-8/rh.49, AAV2-15/rh.62, AAV2-3/rh.61, AAV2-4/rh.50, AAV2-5/rh.51, AAV3.1/hu.6, AAV3.1/hu.9, AAV3-9/rh.52, AAV3-11/rh.53, AAV4-8/r11.64, AAV4-9/rh.54, AAV4-19/rh.55, AAV5-3/rh.57, AAV5-22/rh.58, AAV7.3/hu.7, AAV16.8/hu.10, AAV16.12/hu.11, AAV29.3/bb.1, AAV29.5/bb.2, AAV106.1/hu.37, AAV114.3/hu.40, AAV127.2/hu.41, AAV127.5/hu.42, AAV128.3/hu.44, AAV130.4/hu.48, AAV145.1/hu.53, AAV145.5/hu.54, AAV145.6/hu.55, AAV161.10/hu.60, AAV161.6/hu.61, AAV33.12/hu.17, AAV33.4/hu.15, AAV33.8/hu.16, AAV52/hu.19, AAV52.1/hu.20, AAV58.2/hu.25, AAVA3.3, AAVA3.4, AAVA3.5, AAVA3.7, AAVC1, AAVC2, AAVC5, AAV-DJ, AAV-DJ8, AAVF3, AAVF5, AAVH2, AAVrh.72, AAVhu.8, AAVrh.68, AAVrh.70, AAVpi.1, AAVpi.3, AAVpi.2, AAVrh.60, AAVrh.44, AAVrh.65, AAVrh.55, AAVrh.47, AAVrh.69, AAVrh.45, AAVrh.59, AAVhu.12, AAVH6, AAVLK03, AAVH-1/hu.1, AAVH-5/hu.3, AAVLG-10/rh.40, AAVLG-4/rh.38, AAVLG-9/hu.39, AAVN721-8/rh.43, AAVCh.5, AAVCh.5R1, AAVcy.2, AAVcy.3, AAVcy.4, AAVcy.5, AAVCy.5R1, AAVCy.5R2, AAVCy.5R3, AAVCy.5R4, AAVcy.6, AAVhu.1, AAVhu.2, AAVhu.3, AAVhu.4, AAVhu.5, AAVhu.6, AAVhu.7, AAVhu.9, AAVhu.10, AAVhu.11, AAVhu.13, AAVhu.15, AAVhu.16, AAVhu.17, AAVhu.18, AAVhu.20, AAVhu.21, AAVhu.22, AAVhu.23.2, AAVhu.24, AAVhu.25, AAVhu.27, AAVhu.28, AAVhu.29, AAVhu.29R, AAVhu.31, AAVhu.32, AAVhu.34, AAVhu.35, AAVhu.37, AAVhu.39, AAVhu.40, AAVhu.41, AAVhu.42, AAVhu.43, AAVhu.44, AAVhu.44R1, AAVhu.44R2, AAVhu.44R3, AAVhu.45, AAVhu.46, AAVhu.47, AAVhu.48, AAVhu.48R1, AAVhu.48R2, AAVhu.48R3, AAVhu.49, AAVhu.51, AAVhu.52, AAVhu.54, AAVhu.55, AAVhu.56, AAVhu.57, AAVhu.58, AAVhu.60, AAVhu.61, AAVhu.63, AAVhu.64, AAVhu.66, AAVhu.67, AAVhu.14/9, AAVhu.t 19, AAVrh.2, AAVrh.2R, AAVrh.8, AAVrh.8R, AAVrh.10, AAVrh.12, AAVrh.13, AAVrh.13R, AAVrh.14, AAVrh.17, AAVrh.18, AAVrh.19, AAVrh.20, AAVrh.21, AAVrh.22, AAVrh.23, AAVrh.24, AAVrh.25, AAVrh.31, AAVrh.32, AAVrh.33, AAVrh.34, AAVrh.35, AAVrh.36, AAVrh.37, AAVrh.37R2, AAVrh.38, AAVrh.39, AAVrh.40, AAVrh.46, AAVrh.48, AAVrh.48.1, AAVrh.48.1.2, AAVrh.48.2, AAVrh.49, AAVrh.51, AAVrh.52, AAVrh.53, AAVrh.54, AAVrh.56, AAVrh.57, AAVrh.58, AAVrh.61, AAVrh.64, AAVrh.64R1, AAVrh.64R2, AAVrh.67, AAVrh.73, AAVrh.74, AAVrh8R, AAVrh8R A586R 돌연변이체, AAVrh8R R533A 돌연변이체, AAAV, BAAV, 염소 AAV, 소 AAV, AAVhE1.1, AAVhEr1.5, AAVhER1.14, AAVhEr1.8, AAVhEr1.16, AAVhEr1.18, AAVhEr1.35, AAVhEr1.7, AAVhEr1.36, AAVhEr2.29, AAVhEr2.4, AAVhEr2.16, AAVhEr2.30, AAVhEr2.31, AAVhEr2.36, AAVhER1.23, AAVhEr3.1, AAV2.5T, AAV-PAEC, AAV-LK01, AAV-LK02, AAV-LK03, AAV-LK04, AAV-LK05, AAV-LK06, AAV-LK07, AAV-LK08, AAV-LK09, AAV-LK10, AAV-LK11, AAV-LK12, AAV-LK13, AAV-LK14, AAV-LK15, AAV-LK16, AAV-LK17, AAV-LK18, AAV-LK19, AAV-PAEC2, AAV-PAEC4, AAV-PAEC6, AAV-PAEC7, AAV-PAEC8, AAV-PAEC11, AAV-PAEC12, AAV-2-프리-miRNA-101, AAV-8h, AAV-8b, AAV-h, AAV-b, AAV SM 10-2, AAV 셔플 100-1, AAV 셔플 100-3, AAV 셔플 100-7, AAV 셔플 10-2, AAV 셔플 10-6, AAV 셔플 10-8, AAV 셔플 100-2, AAV SM 10-1, AAV SM 10-8, AAV SM 100-3, AAV SM 100-10, BNP61 AAV, BNP62 AAV, BNP63 AAV, AAVrh.50, AAVrh.43, AAVrh.62, AAVrh.48, AAVhu.19, AAVhu.11, AAVhu.53, AAV4-8/rh.64, AAVLG-9/hu.39, AAV54.5/hu.23, AAV54.2/hu.22, AAV54.7/hu.24, AAV54.1/hu.21, AAV54.4R/hu.27, AAV46.2/hu.28, AAV46.6/hu.29, AAV128.1/hu.43, 진성 유형(true type) AAV (ttAAV), UPENN AAV 10, 일본 AAV 10 혈청형, AAV CBr-7.1, AAV CBr-7.10, AAV CBr-7.2, AAV CBr-7.3, AAV CBr-7.4, AAV CBr-7.5, AAV CBr-7.7, AAV CBr-7.8, AAV CBr-B7.3, AAV CBr-B7.4, AAV CBr-E1, AAV CBr-E2, AAV CBr-E3, AAV CBr-E4, AAV CBr-E5, AAV CBr-e5, AAV CBr-E6, AAV CBr-E7, AAV CBr-E8, AAV CHt-1, AAV CHt-2, AAV CHt-3, AAV CHt-6.1, AAV CHt-6.10, AAV CHt-6.5, AAV CHt-6.6, AAV CHt-6.7, AAV CHt-6.8, AAV CHt-P1, AAV CHt-P2, AAV CHt-P5, AAV CHt-P6, AAV CHt-P8, AAV CHt-P9, AAV CKd-1, AAV CKd-10, AAV CKd-2, AAV CKd-3, AAV CKd-4, AAV CKd-6, AAV CKd-7, AAV CKd-8, AAV CKd-B1, AAV CKd-B2, AAV CKd-B3, AAV CKd-B4, AAV CKd-B5, AAV CKd-B6, AAV CKd-B7, AAV CKd-B8, AAV CKd-H1, AAV CKd-H2, AAV CKd-H3, AAV CKd-H4, AAV CKd-H5, AAV CKd-H6, AAV CKd-N3, AAV CKd-N4, AAV CKd-N9, AAV CLg-F1, AAV CLg-F2, AAV CLg-F3, AAV CLg-F4, AAV CLg-F5, AAV CLg-F6, AAV CLg-F7, AAV CLg-F8, AAV CLv-1, AAV CLv1-1, AAV Clv1-10, AAV CLv1-2, AAV CLv-12, AAV CLv1-3, AAV CLv-13, AAV CLv1-4, AAV Clv1-7, AAV Clv1-8, AAV Clv1-9, AAV CLv-2, AAV CLv-3, AAV CLv-4, AAV CLv-6, AAV CLv-8, AAV CLv-D1, AAV CLv-D2, AAV CLv-D3, AAV CLv-D4, AAV CLv-D5, AAV CLv-D6, AAV CLv-D7, AAV CLv-D8, AAV CLv-E1, AAV CLv-K1, AAV CLv-K3, AAV CLv-K6, AAV CLv-L4, AAV CLv-L5, AAV CLv-L6, AAV CLv-M1, AAV CLv-M11, AAV CLv-M2, AAV CLv-M5, AAV CLv-M6, AAV CLv-M7, AAV CLv-M8, AAV CLv-M9, AAV CLv-R1, AAV CLv-R2, AAV CLv-R3, AAV CLv-R4, AAV CLv-R5, AAV CLv-R6, AAV CLv-R7, AAV CLv-R8, AAV CLv-R9, AAV CSp-1, AAV CSp-10, AAV CSp-11, AAV CSp-2, AAV CSp-3, AAV CSp-4, AAV CSp-6, AAV CSp-7, AAV CSp-8, AAV CSp-8.10, AAV CSp-8.2, AAV CSp-8.4, AAV CSp-8.5, AAV CSp-8.6, AAV CSp-8.7, AAV CSp-8.8, AAV CSp-8.9, AAV CSp-9, AAV.hu.48R3, AAV.VR-355, AAV3B, AAV4, AAV5, AAVF1/HSC1, AAVF11/HSC11, AAVF12/HSC12, AAVF13/HSC13, AAVF14/HSC14, AAVF15/HSC15, AAVF16/HSC16, AAVF17/HSC17, AAVF2/HSC2, AAVF3/HSC3, AAVF4/HSC4, AAVF5/HSC5, AAVF6/HSC6, AAVF7/HSC7, AAVF8/HSC8 및/또는 AAVF9/HSC9 및 이들의 변이체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 캡시드 또는 펩타이드 삽입물을 포함하는, AAV 입자.
3. 제2항에 있어서, 상기 캡시드가 VOY101인, AAV 입자.
4. 제3항에 있어서, 상기 캡시드의 아미노산 서열이 서열번호 1과 적어도 95% 동일한, AAV 입자.
5. 제4항에 있어서, 상기 캡시드의 아미노산 서열이 서열번호 1과 적어도 99% 동일한, AAV 입자.
6. 제5항에 있어서, 상기 캡시드의 아미노산 서열이 서열번호 1인, AAV 입자.
7. 제3항에 있어서, 상기 캡시드의 핵산 서열이 서열번호 1809와 적어도 95% 동일한, AAV 입자.
8. 제7항에 있어서, 상기 캡시드의 핵산 서열이 서열번호 1809와 적어도 99% 동일한, AAV 입자.
9. 제8항에 있어서, 상기 캡시드의 핵산 서열이 서열번호 1809인, AAV 입자.
10. 제2항에 있어서, 상기 캡시드가 VOY201인, AAV 입자.
11. 제10항에 있어서, 상기 캡시드의 핵산 서열이 서열번호 1810과 적어도 95% 동일한, AAV 입자.
12. 제11항에 있어서, 상기 캡시드의 핵산 서열이 서열번호 1810과 적어도 99% 동일한, AAV 입자.
13. 제12항에 있어서, 상기 캡시드의 핵산 서열이 서열번호 1810인, AAV 입자.
14. 제2항에 있어서, 상기 펩타이드 삽입물이 AAVPHP.N인, AAV 입자.
15. 제2항에 있어서, 상기 펩타이드 삽입물이 AAVPHP.B인, AAV 입자.
16. 제2항에 있어서, 상기 펩타이드 삽입물이 AAVPHP.A인, AAV 입자.
17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 전달이 정맥내 투여에 의한 것인, AAV 입자.
18. 제17항에 있어서, 정맥내 투여 후 CNS 구조물을 형질도입시키는, AAV 입자.
19. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 전달이 경동맥내 동맥 투여에 의한 것인, AAV 입자.
20. 제19항에 있어서, 경동맥내 동맥 투여 후 CNS 구조물을 형질도입시키는, AAV 입자.
21. 제18항 또는 제20항에 있어서, 상기 CNS 구조물이 뇌, 척수, 뇌간 핵, 소뇌, 대뇌, 운동 피질, 미상핵, 시상, 시상하부, 경추 척수, 흉추 척수, 요추 척수, 선조체, 흑질, 해마, 편도체 및/또는 대뇌 피질로 이루어진 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 영역인, AAV 입자.
22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이러스 게놈이 2개의 역위 말단 반복부(ITR) 사이에 위치된 핵산 서열을 포함하고, 상기 핵산은 발현될 때 세포 내 관심 유전자의 발현을 저해하거나 억제하고, 상기 핵산 서열은 센스 가닥 서열 및 안티센스 가닥 서열을 포함하고, 상기 센스 서열 및 안티센스 가닥 서열은 적어도 4개의 뉴클레오타이드 길이의 상보성 영역을 공유하는, AAV 입자.
23. 제22항에 있어서, 상기 핵산 서열이 siRNA 듀플렉스의 센스 가닥 서열 및 안티센스 가닥 서열을 포함하는, AAV 입자.
24. 제22항에 있어서, 상기 관심 유전자가 SOD1, HTT, APOE 및 MAPT로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, AAV 입자.
25. 제22항에 있어서, 상기 상보성 영역이 적어도 17개의 뉴클레오타이드 길이인, AAV 입자.
26. 제25항에 있어서, 상기 상보성 영역이 19개 내지 21개의 뉴클레오타이드 길이인, AAV 입자.
27. 제26항에 있어서, 상기 상보성 영역이 19개의 뉴클레오타이드 길이인, AAV 입자.
28. 제22항에 있어서, 상기 센스 가닥 서열 및 상기 안티센스 가닥 서열이 독립적으로 30개 이하의 뉴클레오타이드인, AAV 입자.
29. 제22항에 있어서, 상기 센스 가닥 서열 및 상기 안티센스 가닥 서열 중 적어도 하나가 적어도 1개의 뉴클레오타이드의 3' 돌출부를 포함하는, AAV 입자.
30. 제29항에 있어서, 상기 센스 가닥 서열 및 상기 안티센스 가닥 서열 중 적어도 하나가 적어도 2개의 뉴클레오타이드의 3' 돌출부를 포함하는, AAV 입자.
31. 제22항에 있어서, 상기 안티센스 가닥이 적어도 80%의 비율로 AAV 입자로부터 절제되는, AAV 입자.
32. 제22항에 있어서, 상기 안티센스 가닥이 적어도 90%의 비율로 AAV 입자로부터 절제되는, AAV 입자.
33. 제22항에 있어서, 상기 안티센스 가닥이 적어도 95%의 비율로 AAV 입자로부터 절제되는, AAV 입자.
34. 제22항에 있어서, 상기 안티센스 가닥이 센스 가닥의 절제율보다 더 큰 비율로 AAV 입자로부터 절제되는, AAV 입자.
35. 제34항에 있어서, 상기 안티센스 가닥의 절제율이 상기 센스 가닥의 절제율보다 적어도 2배 더 큰, AAV 입자.
36. 제34항에 있어서, 상기 안티센스 가닥의 절제율이 상기 센스 가닥의 절제율보다 적어도 5배 더 큰, AAV 입자.
37. 제34항에 있어서, 상기 안티센스 가닥의 절제율이 상기 센스 가닥의 절제율보다 적어도 10배 더 큰, AAV 입자.
38. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이러스 게놈이 2개의 역위 말단 반복부(ITR) 사이에 위치된 핵산 서열을 포함하고, 상기 핵산은 표적 단백질을 인코딩하고, 상기 핵산이 발현될 때 표적 단백질의 수준은 세포에서 증가되는, AAV 입자.
39. 제38항에 있어서, 상기 표적 단백질이 항체, AADC, APOE2, 또는 프라탁신인, AAV 입자.
40. AAV 캡시드 및 바이러스 게놈을 포함하는 AAV 입자를 포함하는 약제학적 조성물로서, 상기 AAV 캡시드가 상기 AAV 입자의 전달 후 혈액 뇌 장벽을 투과하는, 약제학적 조성물.
41. 제40항에 있어서, 상기 AAV 캡시드가 VOY101 또는 VOY201인, 약제학적 조성물.
42. 제41항에 있어서, 상기 바이러스 게놈이 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는, 약제학적 조성물.
43. 제42항에 있어서, 상기 siRNA 분자가 관심 유전자를 표적화하고, 상기 관심 유전자는 SOD1, HTT, APOE, 및 MAPT로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
44. 제41항에 있어서, 상기 바이러스 게놈이 표적 단백질을 인코딩하는 핵산을 포함하는, 약제학적 조성물.
45. 제44항에 있어서, 상기 표적 단백질이 항체, AADC, ApoE2, 및 프라탁신으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
46. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항의 AAV 입자를 포함하는 조성물 또는 제40항 내지 제43항 중 어느 한 항의 조성물을 세포에 투여하는 단계를 포함하는, 세포 내 관심 표적 유전자의 발현을 감소시키거나 억제하는 방법.
47. 제46항에 있어서, 상기 세포가 포유동물 세포인, 방법.
48. 제47항에 있어서, 상기 포유동물 세포가 CNS의 세포인, 방법.
49. 제38항 또는 제39항의 AAV 입자를 포함하는 조성물 또는 제44항 또는 제45항의 약제학적 조성물을 세포에 투여하는 단계를 포함하는, 세포 내 관심 유전자의 발현을 증가시키는 방법.
50. 제49항에 있어서, 상기 세포가 포유동물 세포인, 방법.
51. 제50항에 있어서, 상기 포유동물 세포가 CNS의 세포인, 방법.
52. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항의 AAV 입자를 포함하는 조성물 또는 제40항 내지 제43항 중 어느 한 항의 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 대상체의 CNS 내 관심 단백질의 수준을 감소시키는 방법.
53. 제52항에 있어서, 상기 투여 경로가 정맥내 투여인, 방법.
54. 제52항에 있어서, 상기 투여 경로가 경동맥내 동맥 투여인, 방법.
55. 제38항 또는 제39항의 AAV 입자를 포함하는 조성물 또는 제44항 또는 제45항의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 대상체의 CNS 내 관심 단백질의 수준을 증가시키는 방법.
56. 제55항에 있어서, 상기 투여 경로가 정맥내 투여인, 방법.
57. 제55항에 있어서, 상기 투여 경로가 경동맥내 동맥 투여인, 방법.
58. 신경계 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 신경계 질환을 치료 및/또는 개선하는 방법으로서, 상기 방법이 제1항 내지 제39항 중 어느 한 항의 AAV 입자를 포함하는 조성물 또는 제40항 내지 제45항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
59. 제58항에 있어서, 상기 AAV 입자를 포함하는 조성물을 정맥내 전달에 의해 상기 대상체에 투여하는, 방법.
60. 제58항에 있어서, 상기 AAV 입자를 포함하는 조성물을 경동맥내 동맥 전달에 의해 상기 대상체에 투여하는, 방법.
61. 제58항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 AAV 입자가 관심 단백질을 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는, 방법.
62. 제61항에 있어서, 상기 관심 단백질이 항체, AADC, ApoE2 및 프라탁신으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
63. 제58항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 AAV 입자가 siRNA 분자를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는, 방법.
64. 제63항에 있어서, 상기 siRNA 분자가 관심 유전자를 표적화하고, 상기 관심 유전자는 SOD1, HTT, APOE 및 MAPT로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
65. 캡시드 및 바이러스 게놈을 포함하는 아데노-관련 바이러스(AAV) 입자로서, 상기 바이러스 게놈이 상기 AAV 입자의 전달시 심근 세포를 형질도입시키는, 아데노-관련 바이러스(AAV) 입자.
66. 제65항에 있어서, 상기 AAV 입자가 VOY101, VOY201, AAVPHP.B (PHP.B), AAVPHP.A (PHP.A), AAVG2B-26, AAVG2B-13, AAVTH1.1-32, AAVTH1.1-35, AAVPHP.B2 (PHP.B2), AAVPHP.B3 (PHP.B3), AAVPHP.N/PHP.B-DGT, AAVPHP.B-EST, AAVPHP.B-GGT, AAVPHP.B-ATP, AAVPHP.B-ATT-T, AAVPHP.B-DGT-T, AAVPHP.B-GGT-T, AAVPHP.B-SGS, AAVPHP.B-AQP, AAVPHP.B-QQP, AAVPHP.B-SNP(3), AAVPHP.B-SNP, AAVPHP.B-QGT, AAVPHP.B-NQT, AAVPHP.B-EGS, AAVPHP.B-SGN, AAVPHP.B-EGT, AAVPHP.B-DST, AAVPHP.B-DST, AAVPHP.B-STP, AAVPHP.B-PQP, AAVPHP.B-SQP, AAVPHP.B-QLP, AAVPHP.B-TMP, AAVPHP.B-TTP, AAVPHP.S/G2A12, AAVG2A15/G2A3 (G2A3), AAVG2B4 (G2B4), AAVG2B5 (G2B5), PHP.S, AAV1, AAV2, AAV2G9, AAV3, AAV3a, AAV3b, AAV3-3, AAV4, AAV4-4, AAV5, AAV6, AAV6.1, AAV6.2, AAV6.1.2, AAV7, AAV7.2, AAV8, AAV9, AAV9.11, AAV9.13, AAV9.16, AAV9.24, AAV9.45, AAV9.47, AAV9.61, AAV9.68, AAV9.84, AAV9.9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV16.3, AAV24.1, AAV27.3, AAV42.12, AAV42-1b, AAV42-2, AAV42-3a, AAV42-3b, AAV42-4, AAV42-5a, AAV42-5b, AAV42-6b, AAV42-8, AAV42-10, AAV42-11, AAV42-12, AAV42-13, AAV42-15, AAV42-aa, AAV43-1, AAV43-12, AAV43-20, AAV43-21, AAV43-23, AAV43-25, AAV43-5, AAV44.1, AAV44.2, AAV44.5, AAV223.1, AAV223.2, AAV223.4, AAV223.5, AAV223.6, AAV223.7, AAV1-7/rh.48, AAV1-8/rh.49, AAV2-15/rh.62, AAV2-3/rh.61, AAV2-4/rh.50, AAV2-5/rh.51, AAV3.1/hu.6, AAV3.1/hu.9, AAV3-9/rh.52, AAV3-11/rh.53, AAV4-8/r11.64, AAV4-9/rh.54, AAV4-19/rh.55, AAV5-3/rh.57, AAV5-22/rh.58, AAV7.3/hu.7, AAV16.8/hu.10, AAV16.12/hu.11, AAV29.3/bb.1, AAV29.5/bb.2, AAV106.1/hu.37, AAV114.3/hu.40, AAV127.2/hu.41, AAV127.5/hu.42, AAV128.3/hu.44, AAV130.4/hu.48, AAV145.1/hu.53, AAV145.5/hu.54, AAV145.6/hu.55, AAV161.10/hu.60, AAV161.6/hu.61, AAV33.12/hu.17, AAV33.4/hu.15, AAV33.8/hu.16, AAV52/hu.19, AAV52.1/hu.20, AAV58.2/hu.25, AAVA3.3, AAVA3.4, AAVA3.5, AAVA3.7, AAVC1, AAVC2, AAVC5, AAV-DJ, AAV-DJ8, AAVF3, AAVF5, AAVH2, AAVrh.72, AAVhu.8, AAVrh.68, AAVrh.70, AAVpi.1, AAVpi.3, AAVpi.2, AAVrh.60, AAVrh.44, AAVrh.65, AAVrh.55, AAVrh.47, AAVrh.69, AAVrh.45, AAVrh.59, AAVhu.12, AAVH6, AAVLK03, AAVH-1/hu.1, AAVH-5/hu.3, AAVLG-10/rh.40, AAVLG-4/rh.38, AAVLG-9/hu.39, AAVN721-8/rh.43, AAVCh.5, AAVCh.5R1, AAVcy.2, AAVcy.3, AAVcy.4, AAVcy.5, AAVCy.5R1, AAVCy.5R2, AAVCy.5R3, AAVCy.5R4, AAVcy.6, AAVhu.1, AAVhu.2, AAVhu.3, AAVhu.4, AAVhu.5, AAVhu.6, AAVhu.7, AAVhu.9, AAVhu.10, AAVhu.11, AAVhu.13, AAVhu.15, AAVhu.16, AAVhu.17, AAVhu.18, AAVhu.20, AAVhu.21, AAVhu.22, AAVhu.23.2, AAVhu.24, AAVhu.25, AAVhu.27, AAVhu.28, AAVhu.29, AAVhu.29R, AAVhu.31, AAVhu.32, AAVhu.34, AAVhu.35, AAVhu.37, AAVhu.39, AAVhu.40, AAVhu.41, AAVhu.42, AAVhu.43, AAVhu.44, AAVhu.44R1, AAVhu.44R2, AAVhu.44R3, AAVhu.45, AAVhu.46, AAVhu.47, AAVhu.48, AAVhu.48R1, AAVhu.48R2, AAVhu.48R3, AAVhu.49, AAVhu.51, AAVhu.52, AAVhu.54, AAVhu.55, AAVhu.56, AAVhu.57, AAVhu.58, AAVhu.60, AAVhu.61, AAVhu.63, AAVhu.64, AAVhu.66, AAVhu.67, AAVhu.14/9, AAVhu.t 19, AAVrh.2, AAVrh.2R, AAVrh.8, AAVrh.8R, AAVrh.10, AAVrh.12, AAVrh.13, AAVrh.13R, AAVrh.14, AAVrh.17, AAVrh.18, AAVrh.19, AAVrh.20, AAVrh.21, AAVrh.22, AAVrh.23, AAVrh.24, AAVrh.25, AAVrh.31, AAVrh.32, AAVrh.33, AAVrh.34, AAVrh.35, AAVrh.36, AAVrh.37, AAVrh.37R2, AAVrh.38, AAVrh.39, AAVrh.40, AAVrh.46, AAVrh.48, AAVrh.48.1, AAVrh.48.1.2, AAVrh.48.2, AAVrh.49, AAVrh.51, AAVrh.52, AAVrh.53, AAVrh.54, AAVrh.56, AAVrh.57, AAVrh.58, AAVrh.61, AAVrh.64, AAVrh.64R1, AAVrh.64R2, AAVrh.67, AAVrh.73, AAVrh.74, AAVrh8R, AAVrh8R A586R 돌연변이체, AAVrh8R R533A 돌연변이체, AAAV, BAAV, 염소 AAV, 소 AAV, AAVhE1.1, AAVhEr1.5, AAVhER1.14, AAVhEr1.8, AAVhEr1.16, AAVhEr1.18, AAVhEr1.35, AAVhEr1.7, AAVhEr1.36, AAVhEr2.29, AAVhEr2.4, AAVhEr2.16, AAVhEr2.30, AAVhEr2.31, AAVhEr2.36, AAVhER1.23, AAVhEr3.1, AAV2.5T, AAV-PAEC, AAV-LK01, AAV-LK02, AAV-LK03, AAV-LK04, AAV-LK05, AAV-LK06, AAV-LK07, AAV-LK08, AAV-LK09, AAV-LK10, AAV-LK11, AAV-LK12, AAV-LK13, AAV-LK14, AAV-LK15, AAV-LK16, AAV-LK17, AAV-LK18, AAV-LK19, AAV-PAEC2, AAV-PAEC4, AAV-PAEC6, AAV-PAEC7, AAV-PAEC8, AAV-PAEC11, AAV-PAEC12, AAV-2-프리-miRNA-101, AAV-8h, AAV-8b, AAV-h, AAV-b, AAV SM 10-2, AAV 셔플 100-1, AAV 셔플 100-3, AAV 셔플 100-7, AAV 셔플 10-2, AAV 셔플 10-6, AAV 셔플 10-8, AAV 셔플 100-2, AAV SM 10-1, AAV SM 10-8, AAV SM 100-3, AAV SM 100-10, BNP61 AAV, BNP62 AAV, BNP63 AAV, AAVrh.50, AAVrh.43, AAVrh.62, AAVrh.48, AAVhu.19, AAVhu.11, AAVhu.53, AAV4-8/rh.64, AAVLG-9/hu.39, AAV54.5/hu.23, AAV54.2/hu.22, AAV54.7/hu.24, AAV54.1/hu.21, AAV54.4R/hu.27, AAV46.2/hu.28, AAV46.6/hu.29, AAV128.1/hu.43, 진성 유형 AAV (ttAAV), UPENN AAV 10, 일본 AAV 10 혈청형, AAV CBr-7.1, AAV CBr-7.10, AAV CBr-7.2, AAV CBr-7.3, AAV CBr-7.4, AAV CBr-7.5, AAV CBr-7.7, AAV CBr-7.8, AAV CBr-B7.3, AAV CBr-B7.4, AAV CBr-E1, AAV CBr-E2, AAV CBr-E3, AAV CBr-E4, AAV CBr-E5, AAV CBr-e5, AAV CBr-E6, AAV CBr-E7, AAV CBr-E8, AAV CHt-1, AAV CHt-2, AAV CHt-3, AAV CHt-6.1, AAV CHt-6.10, AAV CHt-6.5, AAV CHt-6.6, AAV CHt-6.7, AAV CHt-6.8, AAV CHt-P1, AAV CHt-P2, AAV CHt-P5, AAV CHt-P6, AAV CHt-P8, AAV CHt-P9, AAV CKd-1, AAV CKd-10, AAV CKd-2, AAV CKd-3, AAV CKd-4, AAV CKd-6, AAV CKd-7, AAV CKd-8, AAV CKd-B1, AAV CKd-B2, AAV CKd-B3, AAV CKd-B4, AAV CKd-B5, AAV CKd-B6, AAV CKd-B7, AAV CKd-B8, AAV CKd-H1, AAV CKd-H2, AAV CKd-H3, AAV CKd-H4, AAV CKd-H5, AAV CKd-H6, AAV CKd-N3, AAV CKd-N4, AAV CKd-N9, AAV CLg-F1, AAV CLg-F2, AAV CLg-F3, AAV CLg-F4, AAV CLg-F5, AAV CLg-F6, AAV CLg-F7, AAV CLg-F8, AAV CLv-1, AAV CLv1-1, AAV Clv1-10, AAV CLv1-2, AAV CLv-12, AAV CLv1-3, AAV CLv-13, AAV CLv1-4, AAV Clv1-7, AAV Clv1-8, AAV Clv1-9, AAV CLv-2, AAV CLv-3, AAV CLv-4, AAV CLv-6, AAV CLv-8, AAV CLv-D1, AAV CLv-D2, AAV CLv-D3, AAV CLv-D4, AAV CLv-D5, AAV CLv-D6, AAV CLv-D7, AAV CLv-D8, AAV CLv-E1, AAV CLv-K1, AAV CLv-K3, AAV CLv-K6, AAV CLv-L4, AAV CLv-L5, AAV CLv-L6, AAV CLv-M1, AAV CLv-M11, AAV CLv-M2, AAV CLv-M5, AAV CLv-M6, AAV CLv-M7, AAV CLv-M8, AAV CLv-M9, AAV CLv-R1, AAV CLv-R2, AAV CLv-R3, AAV CLv-R4, AAV CLv-R5, AAV CLv-R6, AAV CLv-R7, AAV CLv-R8, AAV CLv-R9, AAV CSp-1, AAV CSp-10, AAV CSp-11, AAV CSp-2, AAV CSp-3, AAV CSp-4, AAV CSp-6, AAV CSp-7, AAV CSp-8, AAV CSp-8.10, AAV CSp-8.2, AAV CSp-8.4, AAV CSp-8.5, AAV CSp-8.6, AAV CSp-8.7, AAV CSp-8.8, AAV CSp-8.9, AAV CSp-9, AAV.hu.48R3, AAV.VR-355, AAV3B, AAV4, AAV5, AAVF1/HSC1, AAVF11/HSC11, AAVF12/HSC12, AAVF13/HSC13, AAVF14/HSC14, AAVF15/HSC15, AAVF16/HSC16, AAVF17/HSC17, AAVF2/HSC2, AAVF3/HSC3, AAVF4/HSC4, AAVF5/HSC5, AAVF6/HSC6, AAVF7/HSC7, AAVF8/HSC8 및/또는 AAVF9/HSC9 및 이들의 변이체로 이루어진 그룹으로부터 선택된 캡시드 또는 펩타이드 삽입물을 포함하는, AAV 입자.
67. 제66항에 있어서, 상기 캡시드가 VOY101인, AAV 입자.
68. 제67항에 있어서, 상기 캡시드의 아미노산 서열이 서열번호 1인, AAV 입자.
69. 제67항에 있어서, 상기 캡시드의 핵산 서열이 서열번호 1809인, AAV 입자.
70. 제66항에 있어서, 상기 캡시드가 VOY201인, AAV 입자.
71. 제70항에 있어서, 상기 캡시드의 핵산 서열이 서열번호 1810인, AAV 입자.
72. 제66항에 있어서, 상기 펩타이드 삽입물이 AAVPHP.N, AAVPHP.B 및 AAVPHP.A로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, AAV 입자.
73. AAV 캡시드 및 바이러스 게놈을 포함하는 AAV 입자를 포함하는 약제학적 조성물로서, 상기 바이러스 게놈이 관심 단백질을 인코딩하고, 상기 관심 단백질이 ATP2A2 및 S100A1로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
74. 제73항의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 대상체의 심혈관 조직에서 관심 단백질의 수준을 증가시키는 방법.
75. 심혈관 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 심혈관 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 방법이 제73항의 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
76. 심부전 치료를 필요로 하는 대상체에서 상기 심부전을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 제73항의 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
77. 제74항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여 경로는 정맥내 투여인, 방법.

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