KR20230077228A

KR20230077228A - 식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물과 복합생약 추출물의 발효물을 함유하는 탈모 개선 또는 발모 촉진용 조성물

Info

Publication number: KR20230077228A
Application number: KR1020210164267A
Authority: KR
Inventors: 정명수; 김종래; 이종철; 김성태; 김철민; 정원영; 정주영; 김안나; 최영기
Original assignee: 주식회사 한미양행
Priority date: 2021-11-25
Filing date: 2021-11-25
Publication date: 2023-06-01
Anticipated expiration: 2041-11-25
Also published as: KR102749366B1

Abstract

본 발명은 식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물; 및, 다시마, 검정콩, 약모밀, 녹차, 지황, 자소엽, 라벤더, 참마 및 강황의 복합생약 추출물의 발효물;을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 항산화 효능이 우수하고, 피부 염증 억제 효능이 높으며 모발 관련 각종 세포를 증식하는 효과가 우수하여 탈모 예방 또는 발모 촉진용 의약품과 건강기능식품 관련 조성물로서 용이하게 이용할 수 있다.

Description

식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물과 복합생약 추출물의 발효물을 함유하는 탈모 개선 또는 발모 촉진용 조성물 {Composition for improving hair loss or promoting hair growth containing a enzyme hydrolysate derived from edible insects and a fermentative product derived from herbal extracts complex}

본 발명은 식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물; 및, 다시마, 검정콩, 약모밀, 녹차, 지황, 자소엽, 라벤더, 참마 및 강황의 복합생약 추출물의 발효물;을 함유하는 탈모 예방 또는 발모촉진용 조성물에 관한 것이다.

고령화 사회가 발달하면서 탈모로 고민하는 사람들의 수가 증가하고 있으며, 기존에는 50대 이후 연령층의 고민으로 여겨왔으나 최근 들어 20~30대 젊은 층에서의 탈모 인구 증가가 보고되고 있다. 대한탈모치료학회에 따르면 인구는 1,000만 명에 이르는데, 이는 대한민국 국민 5명 중 1명이 탈모로 고민하고 있다는 의미이며, 탈모로 병원 진료까지 받은 사람은 2016년부터 2020년까지 약 112만 명으로, 탈모 환자 수는 5년 사이 10%나 증가했다. 탈모는 대부분 남성에게서 발생할 것 같지만, 국민건강보험공단 자료에서 2020년 탈모 환자 중 43%(약 10만 명)는 여성이었다.

과거 탈모는 유전적인 영향이 크다고 알려져 와서, 대를 이어서 대머리가 되는 것으로 인식되어 왔다. 그러나 최근에는 유전적 요인과 함께 스트레스, 서구화된 식습관, 영양 불균형, 사회활동의 변화 등의 다양한 원인으로 탈모가 진행됨이 밝혀지고 있으며, 이 중에서 두피의 영양불균형이 가장 큰 원인으로 꼽고 있다.

이러한 탈모현상의 치료방법으로는 국소도포제, 경구복용제, 건강보조식품, 유전자이식 수술, 모발 이식수술과 대체의학 등 다양한 방법이 시행되고 있으나, 아직까지 만족할만한 결과를 나타내는 치료방법이나 물질은 없는 것으로 알려져 있다.

비록 탈모가 삶에 치명적인 질병은 아니지만 최근 웰빙 열풍과 외모에 대한 관심 증가로 인하여, 탈모방지 또는 발모촉진 관련시장은 가파른 성장세를 보이고 있다. 일례로 탈모방지 관련 전문의약품 시장은 2009년 국내 390억 원, 2020년 탈모방지 관련 전체 시장은 약 4조원으로 보도되고 있다.

현재 발모효과를 나타내는 약물로서 미국 FDA에서 공인받은 것으로는 경피도포용인 미녹시딜(6-Amino-1,2-dihydro-1-hydroxy-2-imino-4-phenoxypyrimidine)과 경구복용제로서 피나스테라이드(finasteride), 판시딜 등이 있다. 미녹시딜의 경우, 1970년대 초에 고혈압 치료를 위한 혈관확장제로서 개발되었으나, 부작용으로 다모증이 보고되면서 발모촉진제로 사용되고 있으며, 모공이 굵어지고 모발의 지름이 커져 모발의 굵기가 굵어지는 효과를 나타낸다. 또한, 피나스테라이드의 경우 전립선 비대증 치료제로 개발되었다가 현재 탈모 치료제로 사용되고 있으며 탈모의 진행을 늦추고 발모 효과를 나타낸다. 또한 맥주효모와 비오틴을 베이스로 하여 조성된 탈모보조 치료제이다.

그러나 미녹시딜의 경우 체중 증가, 부종, 피부염, 심장박동 증가 등의 부작용이 보고된 바 있으며, 피나스테라이드의 경우 지속적인 복용이 요구되고, 남성의 경우 성기능 장애, 임신한 여성의 경우 기형아 출산 등의 부작용이 있고, 판시딜의 경우 위통, 구토 등 위장관 불쾌감, 빈맥, 가려움증과 두드러기 등이 유발될 수 있으며, 두통과 어지럼증이 동반될 수 있는 등의 부작용이 있어 부작용이 없는 탈모 치료제의 개발은 여전히 요구되고 있는 실정이다.

이에 화학성분이 함유되지 않은 천연재료를 탐색하여 두피건강에 이로운 유효성분을 함유하는 제품개발 연구가 다양하게 이루어지고 있는데, 그 중 특히 탈모 및 발모에 도움을 주는 단백질 보충제 개발연구에서 단백질의 소화흡수를 증진시키기 위한 초고압 처리 또는 효소 가수분해 위한 연구들이 많이 이루어지고 있다.

예로 대한민국 등록특허 제10-1779480에는 약콩 발효물을 포함하는 탈모개선 및 발모촉진 조성물, 대한민국 등록특허 제10-1770420호에는 흑삼 추출 발효물을 활성 성분으로 함유하여 탈모방지, 비듬 방지 및 두피 가려움을 해소하는 세정제 조성물, 대한민국 등록특허 제10-1762796호에는 복합생약 추출물의 발효물을 포함하는 탈모방지용 조성물이 각각 개시되어 있다. 또한 대한민국 등록특허 제10-1653140호에는 어성초를 포함하는 탈모 방지 및 발모 촉진용 조성물, 대한민국 등록특허 제10-1704645호에는 검은콩, 현미 및 미강 혼합 증숙물에 백하수오, 당귀를 혼합한 혼합물을 함유하는 탈모예방 및 발모촉진 효능을 갖는 발효 효소 식품이 각각 개시되어 있으며, 대한민국 등록특허 제10-1414150호에는 초고압 시스템에 의해 가수분해된 태반 추출물을 포함하는 항주름용 화장료 조성물이 각각 개시되어 있으나 곤충 유래 탈모 예방 또는 발모촉진 효과에 대한 연구는 미미한 실정이다.

쌍별귀뚜라미, 갈색거저리 유충 및 흰점박이꽃무지 유충 등 식용곤충은 단백질 함량이 높고, 불포화지방산과 필수지방산이 많아 미래 먹거리로 적당하다는 평을 받고 있으며, UN과 국제식량농업기구는 미래의 식량자원으로 식용곤충이 해당된다고 발표한 바 있다. 우리나라에서는 현재 쌍별귀뚜라미 등 10종의 곤충이 식품원료로 인정되고 있어 이들 곤충을 소재로 하는 식품화연구가 활발히 이루어지고 있다.

다시마는 다시마과의 큰 바닷말이며 2∼4년생인 엽체는 포자세대로서 겉보기에는 줄기, 잎, 뿌리의 구분이 뚜렷하다. 다시마에는 후코이단, 식이섬유의 일종인 알긴산, 단백질과 아미노산, 칼슘, 요오드, 글루타민 등이 함유되어 있다.

검정콩은 낟알 껍질의 빛깔이 검은빛을 띠는 콩으로 일반 콩에 비해 노화방지 성분이 많고 성인병 예방과 다이어트에 효과가 있다. 검정콩에는 단백질 40%, 탄수화물 35%(25%는 식이성 섬유, 10%는 올리고당), 지질 20%, 비타민 5%, 칼슘, 레시틴, 이소플라본 등이 들어 있다.

약모밀은 쌍떡잎식물로 삼백초과의 여러해살이풀이다. 약모밀의 주요 활성성분은 정유와 플라보노이드 화합물이며 그 밖에 알칼로이드, 리그난, 유기산 등이 있으며, 항균, 소염, 항과민, 면역기능 증강 등의 작용이 있는 것으로 알려져 있다.

녹차에는 항산화 작용을 하는 폴리페놀이 다량 함유되어 있으며, 녹차에 들어있는 카테킨 성분은 항암 효과, 혈관 건강, 위암, 폐암 등을 예방하는 효과가 있고, 혈압을 낮추어주고, 소화기관 내에서의 콜레스테롤의 흡수를 저해하고 지질의 체내 침착을 억제하는 것으로 알려져 있다.

지황은 현삼과 및 그 근연 식물의 뿌리를 그대로 또는 삶아 건조한 것인데 약용으로 사용한다. 카탈폴(catalpol) 및 만니트(mannit)를 함유하고, 혈액응고를 촉진시키고 쇠약한 심장에 대하여 심장근육의 수축력을 증대시켜 주고, 이뇨작용과 해열의 효과도 나타난다. 실험적으로 유발시킨 고혈당을 억제하고 정상적인 토끼의 혈당도 강하시켜 준다.

자소엽은 꿀풀과의 차즈기 또는 주름소엽의 잎 및 끝가지이다. 약 0.5%의 정유가 함유되어 있다. 항산화, 항염, 면역조절, 진정, 항균에 효과적이며, 피부에 대해 강한 항염(염증에 저항함) 효과와 면역증강 효과를 나타낸다.

라벤더는 꿀풀과에 속하는 여러해살이 식물이다. 꽃과 식물체에서 향유(香油)를 채취하기 위하여 재배한다. 항우울, 원기촉진, 신경강화, 회복촉진, 진정, 세포생육촉진에 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

참마는 마과의 덩굴성 여러해살이풀의 뿌리를 생약으로 한다. 점액 단백질을 함유하며, 각종 효소가 풍부한데, 특히 아밀라아제가 많이 함유되어 있다. 산약이라 하여 강장제로 쓰이며, 몸이 세약해지고 지치는 증상에 신장을 보호하고, 오장을 튼튼하게 하며, 근육과 뼈를 강하게 하는 효능이 있는 것으로 알려져 있다.

강황은 생강과의 한해살이풀이며, 줄기와 뿌리를 식용, 약용 등으로 사용된다. 커큐민 성분이 담즙의 분비와, 소화작용을 돕는다. 혈액순환, 코피 등에도 효능이 있고, 치매예방에도 도움을 주는 것으로 알려져 있다.

이에 본 발명자들은 식용곤충 및 천연물을 소재로 하는 식품화 연구를 수행하던 중 식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물과 복합생약 추출물의 발효물이 함유된 조성물이 탈모 개선 또는 발모 촉진 효과가 있는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성할 수 있게 되었다.

대한민국 등록특허 제10-1779480호 (발명의 명칭 : 약콩 발효물을 포함하는 탈모 개선 및 발모 촉진용 조성물, 출원자 : 서울대학교산학협력단, 등록일 : 2017년 09일 12일) 대한민국 등록특허 제10-1779480호 (발명의 명칭 : 흑삼 추출 발효물을 활성 성분으로 함유하여 발모 촉진, 탈모 예방, 비듬 방지 및 두피 가려움을 해소하는 세정제 조성물, 출원인 : 주식회사 진생바이팜, 등록일 : 2017년 08월 16일) 대한민국 등록특허 제10-1779480호 (발명의 명칭 : 복합생약추출물의 발효물을 포함하는 탈모방지용 조성물, 출원인 : 한국 한의학 연구원, 등록일 : 2017년 07월 24일) 대한민국 등록특허 제10-1779480호 (발명의 명칭 : 약재의 발효 추출물을 포함하는 탈모 방지 및 발모 촉진용 조성물, 출원인 : (주)새롬바이오, 등록일 : 2016년 04월 19일) 대한민국 등록특허 제10-1779480호 (발명의 명칭 : 탈모예방 및 발모촉진 효능을 갖는 발효 효소 식품, 출원인 : 유한책임회사 하이모, 등록일 : 2017년 02월 20일) 대한민국 등록특허 제10-1414150호 (발명의 명칭 : 초고압 시스템에 의해 가수분해된 태반 추출물을 포함하는 항주름용 화장료 조성물, 출원인 : 견국대학교 산학협력단, 등록일 : 2014년 06월 25일)

본 발명의 목적은 식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물; 및, 다시마, 검정콩, 약모밀, 녹차, 지황, 자소엽, 라벤더, 참마 및 강황의 복합생약 추출물의 발효물;을 함유하는 탈모 예방 또는 발모촉진용 조성물을 제공하는 데에 있다.

상기 식용곤충은 쌍별귀뚜라미, 갈색거저리 유충 및 흰점박이꽃무지 유충으로 이루어진 군 중에서 1종 이상 선택될 수 있다.

상기 식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물은 원료시료인 식용곤충을 100~1,000 MPa의 압력 및 40~90℃의 온도에서 5~60분간 초고압 처리 후 효소를 처리한 것을 특징으로 한다. 상기 효소는 프로타맥스(protamax), 플라보자임(Flavozyme), 알칼라아제(Alcalase), 프로테아제(Protease), BAN(Bacterial Amylase Novo) 또는 α-아밀라아제(α-Amylase)에서 선택되는 효소일 수 있다.

본 발명은 상기 조성물을 함유하는 상기 탈모 예방 또는 발모 촉진용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명은 또한 상기 조성물을 함유하는 탈모 치료용 약학 조성물을 제공한다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 조성물을 함유하는 탈모 예방 또는 발모 촉진용 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

상기 조성물은 '식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물' 100 중량부 기준, '다시마, 검정콩, 약모밀, 녹차, 지황, 자소엽, 라벤더, 참마 및 강황의 복합생약 추출물의 발효물' 30~300 중량부가 포함될 수 있다. 바람직하게는 식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물; 및, 복합생약 추출물의 발효물;이 동일 중량으로 포함될 수 있다.

상기 식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물은, 바람직하게는,

(제1단계) 식용곤충을 절식시키고 세척 및 탈수하는 단계; (제2단계) 세척 및 탈수된 식용곤충에 중적외선을 조사하여 가열 전처리하는 단계; (제3단계) 가열 전처리한 식용곤충을 열풍건조하는 단계; (제4단계) 열풍건조한 식용곤충을 압착하여 착유하여 식용곤충의 탈지분말을 얻는 단계; (제5단계) 식용곤충의 탈지 분말에 초고압처리하는 단계; (제6단계) 초고압처리된 분말을 가압증숙 및 효소처리하는 단계; 및 (제7단계) 효소처리된 시료를 원심분리 후 상등액을 동결건조하여 효소처리물을 얻는 단계;를 포함하여 얻을 수 있다.

상기 식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물의 제조방법에서,

상기 제2단계에서 중적외선은 5~10분간 조사하며, 중적외선 조사를 통해 내부온도가 120~150℃를 유지하는 것이 바람직하다. 이 때 중적외선 조사 시간이 5분 미만이면 최종 제조된 식용곤충의 유충 또는 성충 탈지 분말의 맛과 향미가 나쁠 수 있으며, 중적외선 조사시간이 10분을 초과하게 되면 벤조피렌이 발생할 수 있어 바람직하지 않다. 이 때 중적외선 조사기는 식품 건조용으로 제조된 것을 사용할 수 있다.

상기 식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물의 제조방법에서, 제2단계와 제3단계가 뒤바뀌어 수행될 경우에도 최종 제조된 식용곤충 유충 또는 성충 분말에서 벤조피렌이 검출될 수 있다.

상기 제3단계에서 열풍건조는 60~80℃에서 6~10시간 동안 수행할 수 있는데, 60℃ 미만으로 열풍건조를 수행하거나 6시간 미만으로 수행할 경우에는 열풍건조가 잘 되지 않아 유충 내에 수분이 포함될 수 있다. 반면 열풍건조가 80℃를 초과하거나 10 시간을 초과하여 수행될 경우에는 벤조피렌이 발생할 수 있어 바람직하지 않다.

제4단계의 착유 과정은 500~700kgf/cm²압력에서 20~50분간 50~90℃에서 수행할 수 있다. 이 때 착유 시의 압력이 500kgf/cm² 미만이 되면 식용곤충의 유충 또는 성충 분말 내의 기름이 잘 제거되지 않을 수 있으며, 압력이 700kgf/cm²를 초과하게 될 경우는 필요 이상의 압력을 가하게 되기에 바람직하지 않다.

식용곤충의 유충 또는 성충의 착유 후 분쇄는 분말 입자의 크기가 50~70 mesh가 되도록 분쇄할 수 있다.

제5단계의 초고압처리 과정은 100~1,000 MPa의 압력으로 실시할 수 있다. 보다 구체적으로는 100~1,000 MPa의 압력과 40~90℃의 온도에서 5~60분간 처리할 수 있다. 이 때 압력이 100 MPa 미만이면 초고압 처리에 따른 효과(유효성분 함유량 증대 등)가 미미하고, 1,000 MPa를 초과하면 압력이 너무 높아 작업이 어려울 수 있다. 또한, 온도가 40℃미만이면 처리 효율이 감소하고, 90℃를 초과하면 높은 열전달로 인하여 성분 감소로 인하여 부정적인 영향을 끼칠 수 있다. 아울러 처리시간이 5분 미만이면 초고압 처리에 따른 효과가 미미하고, 60분간을 초과하면 그에 따른 상승적인 효과가 크지 않아 바람직하지 않다.

제6단계의 가압증숙은 탈지된 식용곤충의 유충 또는 성충 100 중량부 기준 200~400 중량부의 정제수를 첨가한 후 압력 1.1~1.5kgf/cm² 및 110~150℃에서 0.5~8시간 동안 가열하여 연화함으로써 수행한다. 정제수 첨가시, 식용곤충의 유충 또는 성충 100 중량부 기준으로 정제수가 200 중량부 미만이면 이후의 효소처리 과정에서 효소가 과활성화 되어 단백분해 된 조성물의 품질이 저하될 수 있으며, 정제수가 400 중량부를 초과하게 되면 역시 이후의 효소처리 시 효소활성이 약해 단백분해가 잘되지 않을 수 있다.

상기 가열 조건은 연화과정에서 가열 온도가 110℃ 미만이면 연화 작용이 잘 일어나지 않을 수 있고, 가열 온도가 150℃를 초과하게 되면 단백질의 성상에 변화가 나타나 단백분해된 조성물의 품질이 저하될 수 있다. 마찬가지로 가열 시간이 0.5시간 미만이면 연화가 잘 안 될 수 있으며, 가열 시간이 8시간을 초과하게 되면 단백질의 성상에 변화가 일어날 수 있다.

상기 효소 처리물 제조 단계는 가압증숙된 식용곤충(액상 상태)을 pH 7.0로 조정한 후, 식용곤충 100 중량부 기준 0.5~5 중량부의 효소를 첨가하고 0.5~48시간 동안 30~37℃에서 효소 반응하여 수행할 수 있다. 이 때, 효소 반응 후 가열반응하여, 효소의 활성을 정지할 수 있는데, 90~110℃에서 5~20분 동안 열처리하는 것이 바람직하다. 효소 처리는 1종의 효소만 처리할 수도 있고 2종 이상의 효소를 혼합하여 동시에 또는 순차적으로 처리 가능하다.

상기 제7단계의 효소처리물은 가수분해 후 상등액을 감압농축한 후 건조하여 얻을 수 있다.

상기 복합생약 추출물의 발효물은 다시마, 검정콩, 약모밀, 녹차, 지황, 자소엽, 라벤더, 참마 및 강황을 혼합하여 추출한 추출물을 효모 균주 및 유산균 균주로 발효한 것일 수 있는데, 바람직하게는, 상기 발효물의 원료가 되는 복합생약 추출물은 다시마 10~20 중량%, 검정콩 10~20 중량%, 약모밀 10~20 중량%, 녹차 10~20 중량%, 지황 5~15 중량%, 자소엽 5~15 중량%, 라벤더 3~7 중량%, 참마 3~7 중량% 및 강황 5~15 중량%가 포함된 것의 추출물일 수 있다. 상기 복합생약 추출물은 일반적인 추출방법, 분리 및 정제방법을 이용하여 제조할 수 있다. 상기 추출방법으로는, 이에 제한되지는 않으나, 구체적으로 열탕추출, 열수추출, 냉침추출, 환류냉각추출 또는 초음파추출 등의 방법을 사용할 수 있다.

복합생약 추출물의 발효물 제조는, 바람직하게는 (A단계) 각 생약재를 혼합하여 복합물을 얻는 단계; (B단계) 상기 복합물을 추출하여 복합생약 추출물을 얻는 단계; (C단계) 상기 복합생약 추출물을 효모 및 유산균으로 발효하는 단계; 및 (D단계) 상기 발효물을 여과하여 농축하는 단계;를 포함하여 수행될 수 있다.

보다 자세히 설명하자면, 본 발명에 있어서, 발효물의 제조에 이용되는 복합생약 추출물은 추출원료에 2~20배 중량의 추출용매(바람직하게는, 물)를 첨가하여 80~98℃에서 8~48시간 동안 추출하여 얻은 추출물일 수 있으며, 보다 바람직하게는 상기 추출물에서 건더기를 제거하고 여과하여 얻은 여과액을 40~60℃에서 감압농축하여 15~20 브릭스의 농축물로 제조한 것일 수 있다.

상기 복합생약 추출물의 발효물은, 이렇게 감압농축하여 얻은 복합생약 추출물(추출 농축물)에 효모를 가하여 1차 발효한 후, 유산균을 추가로 가하여 2차 발효한 것일 수 있다.

상기 효모와 유산균의 각 처리 조건은 20~80℃에서 2~90시간인 것이 바람직하다. 80℃를 초과하면 이들 균주 내의 효소 활성이 실활된다. 효모와 유산균은 각각 복합생약 추출물 100 중량부 기준 0.1~5 중량부를 첨가할 수 있다. 유산균 발효를 마친 후에는 90~100℃에서 20~40분간 가열하여 발효를 중지하고, 감압농축 및 건조하여 발효물을 분말화할 수 있다.

상기 효모는 사카로마이세스 세리비지애(Saccharomyces serevisiae) 및 사카로마이세스 보울라디(Saccharomyces boulardii) 중 1종 이상 선택될 수 있고, 바람직하게는 사카로마이세스 세리비지애(Saccharomyces serevisiae)가 선택될 수 있다.

상기 유산균은 락토바실러스 플랜타럼(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 썰모필러스(Lactobacillus thermophilus) 및 루코노스톡 멘센테로이데스(Leuconostoc mesenteroises)로 이루어진 군 중에서 1종 이상 선택될 수 있고, 바람직하게는 락토바실러스 플랜타럼(Lactobacillus plantarum)이 선택될 수 있다.

본 발명의 복합생약 추출물의 발효물 제조에 있어서, A단계에서는, 다시마, 검정콩, 약모밀, 녹차, 지황, 자소엽, 라벤더, 참마 및 강황 각 원료를30~50 mesh 크기의 입자로 분쇄한 다음 다시마 10~20 중량%, 검정콩 10~20 중량%, 약모밀 10~20 중량%, 녹차 10~20 중량%, 지황 5~15 중량%, 자소엽 5~15 중량%, 라벤더 3~7 중량%, 참마 3~7 중량% 및 강황 5~15 중량%로 혼합하여 복합 생약물로 제조할 수 있다. 이 때 각 원료 생약재 입자가 50 mesh를 초과하면 추출효율이 저하될 수 있고, 30 mesh 이하이면 작업상 어려움이 있는 단점이 있다.

B단계에서는, 복합 생약물 100 중량부 기준으로 200~2000 중량부의 물을 첨가하여 80~98℃에서 8~48시간 추출한 후 여과하여 15~20 brix로 농축물을 얻은 다음에 발효한 것일 수 있다.

이 때, 상기 복합 생약물의 분쇄물 100 중량부 기준으로 정제수가 200 중량부 미만이면 추출효율이 감소하고, 2000 중량부 이상이면 농축과정에서 비경제적인 단점이 있다. 또한 추출온도가 80℃ 미만일 때는 추출시간이 길어지는 단점이 있는 반면 98℃ 이상일 경우는 성분 변화가 일어날 수 있다.

C단계에서 복합생약 추출물의 발효물 제조는 상기 15~20 brix인 다시마, 검정콩, 약모밀, 녹차, 지황, 자소엽, 라벤더, 참마 및 강황의 복합생약 추출물(농축물) 100 중량부 기준 사카로마이세스 속 균주를 0.1~5 중량부 첨가하여 pH 6~7, 온도 20~50℃, 배양 시간 2~90 hr의 조건으로 1차 발효할 수 있다. 또한 1차 발효물에 락토바실러스 속 균주를 복합생약 추출물(농축물) 100 중량부 기준 0.1~5 중량부 중량부를 첨가하여 온도 20~50℃, 배양시간 2~90 hr의 조건으로 2차 발효를 완료한다. 이 후, 상기 발효물을 80~100℃ 수욕조에서 20~40분간 가열하여 발효를 중지 시킬 수 있다. 그 후 40~50℃에서 농축 및 건조하여 복합생약 추출물의 발효물을 제조할 수 있다.

각 균주 사용량은 하한 기준치 미만으로 첨가일 경우는 균주의 활성이 거의 나타나지 않을 수 있고, 또한 상한치를 초과하여 첨가하게 되는 것은 균주 사용에 대한 비용 면에서 바람직하지 않고 균주의 작용이 과하게 되어 최종 분해된 산물의 물성이 더 나빠질 수 있다.

복합생약 추출물의 발효물은 가열하여 발효를 완료한 후, 종이, 부직포, 천 등으로 여과하여 잔사를 걸러낸 다음 건조할 수 있다. 이는 열풍건조법, 스프레이 건조법, 동결건조법 또는 실온(20~30℃) 건조법을 통해 수행할 수 있다.

본 발명에서 발효 전 추출물의 제조시, 추출은 1~4번까지 반복할 수 있다. 상기 추출물 제조용 용매로서, 물, C1~C4 알코올 또는 이들의 혼합용액을 용매로 하여 추출할 수 있다. 상기 C1~C4 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 이소부탄올로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 추출용매로서 가장 바람직하게는 물을 사용하는 것이 좋다.

상기 추출물의 추출용 기기로는 통상의 추출기기, 초음파분쇄추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다. 이렇게 제조된 추출물은 열풍건조, 감압건조 또는 동결건조하여 용매를 제거할 수 있다. 또한, 상기 추출물은 컬럼크로마토그래피를 이용하여 정제하여 사용할 수 있다.

본 발명은 식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물; 및, 다시마, 검정콩, 약모밀, 녹차, 지황, 자소엽, 라벤더, 참마 및 강황 복합 생약 추출물의 발효물;을 함유하는 탈모 개선 또는 발모 촉진 효능을 갖는 건강기능식품의 조성물을 제공한다. 상기 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액체 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 캔디류, 스넥류, 면류, 아이스크림, 유제품, 스프, 이온음료, 음료수, 알코올음료, 껌, 차 및 비타민 복합제 등이 있다.

또한, 본 발명은 식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물; 및, 다시마, 검정콩, 약모밀, 녹차, 지황, 자소엽, 라벤더, 참마 및 강황 복합 생약 추출물의 발효물;을 함유하는 탈모 치료용 약학 조성물을 제공한다. 상기 약학 조성물은, 각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현택액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로즈, 수쿠로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀루로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마스네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 약학 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 칼트 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 매용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 들이 포함 될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수용성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에텔렌글리콜, 올리브오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 약학 조성물의 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중과 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여정도 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.01mg/kg/일 내지 대략 2,000mg/kg/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 1mg/kg/ 일 내지 500mg/kg/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수 있고, 수회 나누어 투여 할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 약학 조성물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.

본 발명에서 식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물; 및, 다시마, 검정콩, 약모밀, 녹차, 지황, 자소엽, 라벤더, 참마 및 강황 복합 생약 추출물의 발효물;을 함유하는 탈모 예방 또는 발모 촉진 효능을 갖는 화장료의 조성물을 제공할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 용액, 유탁액, 현탁액, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 파우더, 스프레이, 계면활성제-함유 클린징, 오일, 비누, 액체 세정료, 입욕제, 파운데이션, 메이크업베이스, 에센스, 화장수, 폼, 팩, 유연수, 선 스크린 크림, 선오일, 샴푸, 린스, 헤어 트리트먼트, 헤어겔, 헤어무스, 헤어 스프레이, 헤어로션, 헤어팩, 헤어에센스 등으로 제형화 될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

상기 담체는 비자연적 담체 (non-naturally occuring carrier)일 수 있다.

본 발명에서 뜻하는 탈모는 안드로겐성 탈모(대머리), 원형 탈모, 곰팡이 감염에 의한 두부 백선, 휴지기 탈모, 발모벽, 모발생성 장애 질환 등이 있고 흉터가 형성되는 반흔성 탈모로는 루푸스에 의한 탈모, 독발성 모낭염, 모공성 편평 태선, 화상 및 외상에 의한 탈모증으로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다.

이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명을 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화 될 수 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지도록, 당 업계자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.

<제조예 1. 갈색거저리 유충의 효소처리물 제조>

제조예 1-1. 갈색거저리 유충의 Protamx 및 BAN 효소 처리물 제조

전문 사육농가에서 크기 9령의 갈색거저리 유충을 구입하여 갈색거저리 유충은 3일간 각각 금식시켜 배설물을 완전히 배출시킨 것을 생것 상태에서 흐르는 물로 3회 수세하였다. 이후 건조단계, 탈지단계, 분쇄단계, 고온/가압 단계, 효소가수분해단계 및 건조단계를 걸쳐 고온/가압, 효소처리물 제조를 완성한다. 이 중에서 건조단계, 탈지단계, 분쇄단계는 다음의 과정을 거쳐 수행하였다.

① 건조단계 : MIR 램3㎛대의 피크 에너지를 방사하는 램프가 장착된 산업용 중적외선 건조기(MS3-6, Lichtzen, Korea)를 이용하여 140℃ 온도 상태로 6분 동안 처리한 다음 갈색거저리 유충의 수분 함량이 5% 이하가 되도록 건조온도 70℃ 온도에서 12시간 열풍건조기를 이용하여 건조하였다.

② 탈지단계 : 산업용 착유기(명진종합기계)를 이용하여 600 kgf/cm²의 압력을 가하면서 20분간 착유하여 탈지 상태의 곤충을 얻었다. 피착유물(시료량)은 2 kg, 피착유물(착유기내) 온도는 60℃이었다.

③ 분쇄단계 : 산업용 핀크라샤(핀밀, 성창기계)로 갈색거저리 유충 분말 입도가 50~70 mesh 가 되도록 분쇄하여 효소처리용 원료로 사용하였다.

④ 초고압처리 : 분쇄된 갈색거지 유충 분말 200g에 약2배의 증류수를 함께 넣어 공기가 들어가지 않도록 잘 밀봉한 후, 초고압 처리기(High pressure processing 기기; 055-60, Uhde, Germany)를 이용하여 50℃에서 500 MPa의 압력으로 5분간 처리하였다.

⑤갈색거저리 유충의 처리 가압증숙 : 이 후, 상기의 초고압처리된 갈색거저리 유충 분쇄물을 증숙기에 넣은 다음 분쇄물 대비 3배 중량의 정제수를 첨가하여 온도 121℃ 및 압력 1.3kgf/cm²의 조건에서 3시간 동안 가압증숙 처리하였다.

⑥ 갈색거저리 유충의 효소 처리물 제조 : 초고압 및 가압증숙 처리된 갈색거저리 유충 분쇄물 100g당 1중량부의 Protamax (Subtilisin Carlsberg, Novozymees)를 첨가하여 pH 7.0, 50℃에서 5시간 동안 1차 가수분해시킨 다음 98℃에서 30분간 실활시킨 다음, 1차 가수분해물에 BAN(알파 Amylase Novo)을 1g 첨가하여 pH 7.0, 75℃에서 10시간 동안 2차 가수분해하였다. 이 후 98℃에서 30분간 열처리하여 실활시킨 다음 여과, 건조 후 분말 상태인 갈색거저리 유충 가수분해물을 얻었다.

제조예 1-2. 갈색거저리 유충의 Protamx 효소 처리물 제조

상기 제조예 1에서 2차 효소처리 반응을 수행하지 않은 대신 1차 효소처리 시간을 15시간 수행하였다.

제조예 1-3. 갈색거저리 유충의 BAN 효소 처리물 제조

상기 제조예 2에서 프로타맥스 대신 BAN(알파 Amylase Novo)을 사용하여 갈색거저리 유충 BAN 가수분해물을 얻었다.

<비교제조예 1. 갈색거저리 유충의 비교 조성물 제조>

비교제조예 1-1. 초고압 처리가 생략된 갈색거저리 유충의 Protamx 효소 처리물 제조

제조예 1의 단계 중, 갈색거저리 유충을 ①②③ 및 ⑤ 단계를 수행하여 가압증숙물로 제조한 후(초고압 처리 단계 생략), ⑥의 효소처리 단계를 수행하여 갈색거저리 유충 가수분해물을 얻었다.

비교제조예 1-2. 갈색거저리 유충의 초고압 처리물 제조

제조예 1의 단계 중, 갈색거저리 유충의 초고압처리 단계 및 가압증숙 단계를 수행하고(①②③④ 및 ⑤), 효소처리는 생략하되, 바로 갈색거저리 유충의 5배 중량의 정제수를 가한 후 95℃에서 8시간 동안 추출한 다음, 여과후 건조하여 갈색거저리 유충의 추출 분말을 제조하였다.

비교제조예 1-3. 갈색거저리 유충의 가압처리물 제조

제조예 1의 단계 중, 갈색거저리 유충을 ①②③ 및 ⑤ 단계를 하여 가압증숙물을 제조후 바로 95℃에서 8시간 동안 추출한 다음 여과후 건조하여 갈색거저리 유충의 추출분말을 제조하였다(초고압 처리 단계 및 효소처리 단계 생략).

<실험예 1. 갈색거저리 유충 유래 조성물의 총 폴리페놀 함량>

인삼 등 원료물질에 초고압 처리를 할 경우 총 플라보노이드 및 폴리페놀 함량이 증가될 뿐만 아니라 항산화 활성이 증가되는 것으로 알려져 있는데 식용곤충에서의 초고압 처리 효과를 알아보기 위하여 상기 제조예 1-1 및 비교제조예 1-1 내지 비교제조예 1-3의 총 플라보노이드 함량을 측정하였다.

측정방법은 각 시료 1g에 70% 에탄올 10 ml를 혼합한 후 균질기(IKA T25 Digital Ultra-Tumax, Staufen, Germany)를 이용하여 30초씩 3번 균질화 한 후 24시간 추출하였다. 추출물을 4℃에서 3000xg으로 15분간 원심분리하여 상등액을 시료로 사용하였다. 총 폴리페놀의 함량은 Folin-Denise 법(Folin과 Denis, 1912)에 따라 측정한 후 gallic acid (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA)를 표준물질로 한 표준곡선에 의해 그 함량을 측정하였다. 측정 결과를 표 1에 나타내었다.

분석결과, 제조예 1-1에서 특히 총 폴리페놀함량이 8.62 mg/g GAE로 비교제조예 1-1에 비해 3 mg/g GAE 이상 증가되어, 초고압처리물에서 항산화 효능이 증강됨을 확인할 수 있다. (*GAE : gallic acid equivalent).

시료	총 폴리페놀 함량 (mg/g GAE)^*
제조예 1-1	8.62±0.29
비교제조예 1-1	5.51±0.29
비교제조예 1-2	7.09±0.38
비교제조예 1-3	5.49±0.29

실험예 2. 갈색거저리 유충의 효소처리물의 아미노산 함량

상기 제조예 1-1 내지 제조예 1-3과, 비교제조예 1-1 내지 비교제조예 1-3의 아미노산 함량을 조사하였다.

분석방법은 각각의 시료분말 0.2 g에 아미노산 분석용 dilution buffer (pH 2.2) 20 mL를 가하고 20분씩 2회 초음파 처리한 다음 원심분리하였다. 상등액은 취하여 membrane filter (0.45 ㎛)로 여과한 다음 적정한 농도로 희석하여 유리 아미노산 분석용 시료로 사용하였다. 단백질 분해시료는 0.1 g을 취하여 아미노산 분석용 dilution buffer (pH 2.2) 20 mL를 가한 다음 위에서와 같은 방법으로 추출하여 분석용 시료로 하였다. 아미노산 분석기는 Sykam (Germany)사의 S7130 amino acid reagent organizer, S5200 sample injector와 S2100 solvent delivery system을 사용하였으며, column은 cation separation column LCA K06/NA (4.6 × 250 ㎜)를 사용하여 분석하였다. 이동상의 유속은 0.45 mL/min, ninhydrin은 0.4 mL/min으로 하여 분석하였으며, 분석결과는 시료 1g당 ㎎ (㎎/g)으로 표시하였다.

구분	제조예 1-1	제조예 1-2	제조예 1-3	비교 제조예 1-1	비교 제조예 1-2	비교 제조예 1-3
Leucine, Isoleucine 및 valine (㎎/g) (BCCA : 근육형성에 관여)	9.76	8.02	8.34	7.65	5.02	0.57
Methionine, Leucine 및 Lysine (㎎/g) (MLL : 콜라겐 합성에 관여)	10.35	9.43	9.52	8.21	4.89	0.52
필수유리아미노산 (㎎/g)	20.47	18.20	18.48	12.75	7.43	0.73
비필수유리아미노산 (㎎/g)	39.72	37.21	38.12	24.44	22.28	4.21
총 유리아미노산 (㎎/g)	60.19	55.412	56.60	37.19	29.71	4.94

분석결과, 표 2에서와 같이 제조예 1-1의 갈색거저리 유충의 초고압/효소 처리물이 탈모방지 및 발모 관련 아미노산이 풍부하여 탈모예방 및 발모에 긍정적인 영향을 줄 것으로 기대된다. 이 외 제조예 1-2와 제조예 1-3의 값도 좋은 것으로 확인된다.

이외 반복적으로 실험한 결과, 제조예 1-1 내지 제조예 1-3의 조건에서는 상기 분말에서 대략 Leucine, Isoleucine 및 valine이 8.0~11.0 ㎎/g, Methionine, Leucine 및 Lysine이 9.0~12.0㎎/g, 필수유리아미노산 17.0~23.0㎎/g, 비필수유리아미노산 35.0~42.0㎎/g, 총 유리아미노산 53.0~62.0㎎/g이 포함되는 것으로 확인된다. 또한, 제조예 1-1 분말만으로는 Leucine, Isoleucine 및 valine이 9.0~11.0 ㎎/g, Methionine, Leucine 및 Lysine이 10.0~12.0㎎/g, 필수유리아미노산 20.0~23.0㎎/g, 비필수유리아미노산 39.0~42.0㎎/g, 총 유리아미노산 59.0~62.0㎎/g이 포함되는 것으로 확인된다.

<제조예 2 및 비교제조예 2. 복합생약 추출물 또는 이의 발효물 제조>

다시마, 검정콩, 약모밀, 녹차, 지황, 자소엽, 라벤더, 참마 및 강황(경동시장, 서울, 제기동)을 구입하여 추출원료로 사용하였다. 각 생약재를 다음의 표 1과 같이 혼합하고, 추출원료 총 중량의 10배 중량의 정제수를 넣고 90℃에서 12시간 추출 후 여과하여 얻은 액상을 15~20 brix로 농축하여 복합생약 추출물을 얻었다.

이 후, 상기 농축된 복합생약 추출물 100 중량부 기준 사카로마이세스 세리비지애(Saccharomyces serevisiae)를 2 중량부 첨가하여 pH 6~7, 온도 50℃, 배양시간 24 시간의 조건으로 1차 발효시킨 후 100℃ 수욕조에서 10분 동안 가열하여 발효를 중지시켜 1차 발효물을 얻었다. 이 후 1차 발효물에 농축된 복합생약 추출물 100 중량부 기준 락토바실러스 플랜타럼 (Lactobacillus plantarum) 2 중량부를 첨가하여 온도 37℃, 배양시간 24시간의 조건으로 2차 발효를 완료하였다. 마찬가지로 상기 발효물을 100℃ 수욕조에서 10분 동안 가열하여 발효를 중지하고 50℃에서 감압농축하여 발효물을 제조하였다.

이 외, 하기 표 3에서 제시한 것과 같이, 각 단계는 동일하게 수행하되, 비교 제조예에서, 생약의 혼합비를 다르게 제시하여 각 조성물을 제조하거나, 발효 조건을 단지 효모 발효만 하거나, 유산균 발효만 하거나, 발효를 전혀 수행하지 않거나, 또는 발효 단계를 바꾸어 수행하는 방법으로 비교하였다.

	다시마 (g)	검정콩 (g)	약모밀 (g)	녹차 (g)	지황 (g)	자소엽 (g)	라벤더 (g)	참마 (g)	강황 (g)	총합 (g)	발효 순서
	다시마 (g)	검정콩 (g)	약모밀 (g)	녹차 (g)	지황 (g)	자소엽 (g)	라벤더 (g)	참마 (g)	강황 (g)	총합 (g)	제1 발효	제2 발효
제조예 2-1	15	15	15	15	10	10	5	5	10	100	효모	유산균
제조예 2-2	20	10	10	20	5	15	7	7	6	100	효모	유산균
제조예 2-3	10	20	20	11	15	5	7	7	5	100	효모	유산균
제조예 2-4	12	14	12	14	12	15	7	3	11	100	효모	유산균
제조예 2-5	13	17	18	10	7	10	3	7	15	100	효모	유산균

비교 제조예 2-1	11	12	11	11	11	11	11	11	11	100	유산균 발효만 수행
비교 제조예 2-2	11	12	11	11	11	11	11	11	11	100	효모 발효만 수행
비교 제조예 2-3	15	15	15	15	10	10	5	5	10	100	유산균	효모
비교 제조예 2-4	15	15	15	15	10	10	5	5	10	100	발효 미수행
비교 제조예 2-5	0	20	0	20	0	30	0	30	0	100	효모	유산균
비교 제조예 2-6	30	0	30	0	20	0	20	0	0	100	효모	유산균
비교 제조예 2-7	50	20	5	5	5	5	5	5	0	100	효모	유산균
비교 제조예 2-8	5	40	25	5	5	5	5	5	5	100	효모	유산균

< 실시예 1 내지 7, 비교예 1 내지 17. 갈색거저리 유충의 효소처리물과 생약 발효물의 혼합 조성물 제조>

갈색거저리 유충 유래 조성물과 생약 유래 조성물을 다음의 표 4와 같이 동일 중량으로 혼합하여 혼합 제제로 제조하였고, 표 5와 같이 단일 조성물 또는 혼합비를 다르게 하여 혼합 제제를 제조하였다.

	[갈색거저리 유충의 가공물 + 생약 조성물] 동일 중량 혼합 제제
실시예 1	'제조예 1-1' 효소처리물 + '제조예 2-1' 생약 발효물
실시예 2	'제조예 1-1' 효소처리물 + '제조예 2-2' 생약 발효물
실시예 3	'제조예 1-1' 효소처리물 + '제조예 2-3' 생약 발효물
실시예 4	'제조예 1-1' 효소처리물 + '제조예 2-4' 생약 발효물
실시예 5	'제조예 1-1' 효소처리물 + '제조예 2-5' 생약 발효물

실시예 6	'제조예 1-2' 효소처리물 + '제조예 2-1' 생약 발효물
실시예 7	'제조예 1-3' 효소처리물 + '제조예 2-1' 생약 발효물

비교예 1	'비교제조예 1-1' 효소처리물 + '제조예 2-1' 생약 발효물
비교예 2	'비교제조예 1-2' 초고압처리물 + '제조예 2-1' 생약 발효물
비교예 3	'비교제조예 1-3' 가압처리물 + '제조예 2-1' 생약 발효물

비교예 4	'제조예 1-1' 유충 효소처리물 + '비교제조예 2-1' 생약 발효물
비교예 5	'제조예 1-1' 유충 효소처리물 + '비교제조예 2-2' 생약 발효물
비교예 6	'제조예 1-1' 유충 효소처리물 + '비교제조예 2-3' 생약 발효물
비교예 7	'제조예 1-1' 유충 효소처리물 + '비교제조예 2-4' 생약 추출물
비교예 8	'제조예 1-1' 유충 효소처리물 + '비교제조예 2-5' 생약 발효물
비교예 9	'제조예 1-1' 유충 효소처리물 + '비교제조예 2-6' 생약 발효물
비교예 10	'제조예 1-1' 유충 효소처리물 + '비교제조예 2-7' 생약 발효물
비교예 11	'제조예 1-1' 유충 효소처리물 + '비교제조예 2-8' 생약 발효물

비교예 12	'비교제조예 1-1' 효소처리물 + '비교제조예 2-1' 생약 발효물
비교예 13	'비교제조예 1-1' 유충 효소처리물 + '비교제조예 2-4' 생약 추출물

	[갈색거저리 유충의 가공물], [생약 조성물] 또는 이의 혼합 제제
비교예 14	'제조예 1-1' 효소처리물
비교예 15	'제조예 2-1' 생약 발효물
비교예 16	'제조예 1-1' 효소처리물 + '제조예 2-1' 생약 발효물의 1:10 혼합물
비교예 17	'제조예 1-1' 효소처리물 + '제조예 2-1' 생약 발효물의 10:1 혼합물

< 실험예 3. 혼합 조성물의 항산화 활성 평가>

실험예 3-1. ABTS 라디칼 소거능(radical scavenging ability)

활성산소는 모근의 파괴 및 모발성장 억제물질로 알려져 있어 실시예 1~7 및 비교예 1~17 조성물에 대한 ABTS 라디칼 소거활성을 비교 조사하였다. 조사방법은 Re(Re R. 1999 Free Radic Biol Med 26, 1231-1237)의 방법에 따라 7.4mM ABTS〔2,2'-azino-bis(3-ethybenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt〕및 2.6mM 포타슘 퍼셀페이트(potassium persulfate)를 합하여 실온 및 암소에 24시간 동안 방치하여 라디칼을 형성시켰다. 그 후 실험 직전에 ABTS 용액을 732㎚에 흡광도가 0.700±0.030이 되도록 PBS 버퍼(pH 7.4)로 희석하여 사용하였다. 희석된 용액 950㎕에 시료 50㎕ 가하여 암소에서 10분간 반응시킨 후 732㎚에서 흡광도를 측정하였다. 계산식 ABTS 라디칼 소거능(%) = 100-〔(시료 O.D. / 대조군 O.D.) x 100〕에 의하여 활성을 산출하여 그 결과를 표 6에 나타내었다.

시료	ABTS(%)
실시예 1	95.2±4.0
실시예 2	80.9±5.3
실시예 3	82.1±4.2
실시예 4	85.4±3.9
실시예 5	84.4±2.5
실시예 6	90.1±1.4
실시예 7	82.2±2.4

비교예 1	68.2±3.2
비교예 2	49.3±0.2
비교예 3	42.5±4.7
비교예 4	38.2±2.4
비교예 5	30.4±5.0
비교예 6	22.5±4.7
비교예 7	21.2±1.5
비교예 8	24.0±2.2
비교예 9	41.1±0.3
비교예 10	33.0±2.4
비교예 11	42.1±1.5
비교예 12	24.1±2.2
비교예 13	41.2±0.4
비교예 14	22.5±2.5
비교예 15	24.2±2.2
비교예 16	21.1±3.3
비교예 17	22.0±4.8

α-tocopherol	98.5±7.7

평가 결과, 표 6에서와 같이 실시예 1에서 95.2%로 항산화활성이 강한 α-tocopherol 98.5%와 대등한 ABTS 소거활성이 있는 것으로 나타났고, 나머지 실시예 2 내지 7의 조성물도 적정한 항산화능이 있음으로 확인된다.

실험예 2-2. 전자공여활성(ellectron donating ability)

실시예 1~7 및 비교예 1~17 조성물에 대한 전자공여활성을 비교조사 하였다. 조사방법은 Biois(Biois MS. 1958 Nature 26. 1199-1200)의 방법에 따라 시료 0.2㎖에 0.4mM DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl)용액 0.8㎖을 첨가하여 블랜칭하고 10분간 방치하였다. 그 후 517㎚에서 흡광도를 측정하였으며, 계산식 '전자공여활성(%) = 100 - 〔(시료 O.D. / 대조군 O.D.) x 100〕'에 따라 활성을 산출하여 표 7에 나타내었다.

시료	EDA(%)
실시예 1	53.8±2.5
실시예 2	48.2±3.4
실시예 3	46.2±1.2
실시예 4	43.5±1.2
실시예 5	42.2±1.4
실시예 6	45.5±2.6
실시예 7	42.0±1.3

비교예 1	35.4±1.8
비교예 2	32.4±1.8
비교예 3	33.5±4.7
비교예 4	29.8±1.7
비교예 5	27.4±1.8
비교예 6	20.4±1.3
비교예 7	22.3±1.2
비교예 8	24.4±0.4
비교예 9	33.0±1.1
비교예 10	32.2±2.0
비교예 11	20.3±0.1
비교예 12	32.4±0.2
비교예 13	30.1±1.4
비교예 14	21.0±2.1
비교예 15	25.1±0.8
비교예 16	22.2±0.7
비교예 17	25.2±1.1

α-tocopherol	55.0±1.8

상기 표 7에서 처리별 전자공여활성(ellectron donating ability)은 실시예 1에서 53.8%로 항산화 활성이 강한 α-tocopherol 55.0%와 대등한 전자공여활성이 있는 것으로 나타났다. 이외 다른 실시예들의 조성물도 전자공여 활성이 높음을 알 수 있었다.

실험예 2-3. 환원력(reducing power)

환원력을 발휘하는 물질은 전자공여체로 작용하며, 지질과산화 과정에서 중간 생성물을 감소시켜 2차적인 항산화제 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 이에 실시예 1~7 및 비교예 1~17 조성물에 대한 환원력을 비교 조사하였다. 조사방법은 환원력 측정을 위하여 시료 1㎖에 0.2M 인산완충액(phosphate buffer, pH 6.6) 2.5㎖ 및 1% 포타슘 페리시아이드(potassium ferricyanide) 용액 2.5㎖을 첨가한 후 50℃ 30분간 반응시켰다. 다음에 10% TCA(trichloroacetc acid)용액 2.5㎖을 첨가한 후 1,650 x g에서 10분간 원심분리 하였으며, 상층액 2.5㎖에 증류수 2.5㎖ 및 0.1% FeCl₂ 용액 0.5㎖을 첨가하여 700㎚에서 흡광도를 측정하여 그 결과를 표 8에 나타내었다.

시료	O.D. (700㎚)
실시예 1	0.87±0.07
실시예 2	0.70±0.07
실시예 3	0.74±0.04
실시예 4	0.70±0.03
실시예 5	0.69±0.03
실시예 6	0.71±0.02
실시예 7	0.72±0.05

비교예 1	0.58±0.04
비교예 2	0.54±0.02
비교예 3	0.52±0.57
비교예 4	0.44±0.57
비교예 5	0.40±0.48
비교예 6	0.32±0.53
비교예 7	0.32±0.05
비교예 8	0.31±0.22
비교예 9	0.43±0.01
비교예 10	0.55±0.34
비교예 11	0.50±0.02
비교예 12	0.41±0.13
비교예 13	0.42±0.01
비교예 14	0.33±0.22
비교예 15	0.32±0.03
비교예 16	0.34±0.32
비교예 17	0.31±0.03

실험결과, 표 8과 같이, 실시예 1 내지 실시예 7 및 비교예 1 내지 비교예 17에 대한 환원력을 비교 평가한 결과, 실시예 1에서 환원력이 월등히 높고, 실시예 2 내지 7도 항산화 활성이 좋음을 알 수 있다.

< 실험예 4 혼합 조성물의 항염 활성 평가>

두피에 염증이 생기면 모근이 약해지고 모발이 가늘어지며 탈모로 연결되기 쉽다.

이에 Lipopolysaccharide(LPS)로 자극을 유도한 쥐 대식세포주 RAW 264.7 cell에서 EAME의 NO 생성 억제능을 분석하여 실시예 1~7 및 비교예 1~17 조성물의 항염 활성을 평가하였다.

실험방법은 실험을 위해 Murine macrophage cell line 인 Raw 264.7 세포를 한국 세포주 은행으로부터 분양 받아 100units/mL penicillin-streptomycin과 10% fetal bovine serum(FBS)이 함유된 DMEM 배지를 사용하여 37℃ 5%CO2 incubator에서 배양하였으며, 2 내지 3일에 한 번씩 계대 배양을 실시하였다. Raw 264.7 세포(3 X 10⁵ cells/mL)를 18시간 전 배양 후, 실시예의 추출물 시료(농도 10%)와 LPS(1μg/mL)를 동시 처리하여 24시간동안 배양하였고, 생성된 NO는 Griess reagent을 이용하여 세포 배양액 중 존재하는 NO2-의 형태로 측정하였다. 음성 대조군은 LPS를 처리하지 않았으며, 양성 대조군은 LPS만을 처리하여 생성된 NO량을 측정하였다.

세포 배양 상층액 100μL 및 Griess 시약(1%(w/v) sulfanilamide, 0.1%(w/v) naphtylehtylenediamine in2.5%(v/v) phosphoric acid)을 동량 혼합하여 10분간 실온 암실에서 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 흡광도(540nm)를 측정하였다. 표준농도 곡선은 sodium nitrite(NaNO2)를 serial dilution하여 얻었다(10~100μM).

시료	NO 생성량 (μM)
무처리군	7.08
LPS	38.74

LPS + 실시예 1	11.42
LPS + 실시예 2	12.75
LPS + 실시예 3	14.35
LPS + 실시예 4	14.34
LPS + 실시예 5	12.24
LPS + 실시예 6	13.14
LPS + 실시예 7	14.50

LPS + 비교예 1	17.27
LPS + 비교예 2	18.97
LPS + 비교예 3	21.24
LPS + 비교예 4	24.78
LPS + 비교예 5	26.61
LPS + 비교예 6	28.34
LPS + 비교예 7	29.03
LPS + 비교예 8	18.05
LPS + 비교예 9	21.12
LPS + 비교예 10	23.26
LPS + 비교예 11	22.34
LPS + 비교예 12	21.23
LPS + 비교예 13	22.40
LPS + 비교예 14	29.32
LPS + 비교예 15	31.95
LPS + 비교예 16	28.38
LPS + 비교예 17	27.31

측정결과, 표 9에서와 같이 실시예 1을 비롯한 각 실시예들의 조성물에서 NO(Nitric oxide) 생성 억제 활성을 나타냈으며, 이를 통해 항산화 및 항염증 활성이 현저히 우수하다는 것을 알 수 있다.

<실험예 5. 혼합 조성물의 발모 효능 - in-vitro 실험>

실험예 5-1. 모모세포 증식효과

실시예 1~7 및 비교예 1~17 조성물에 대한 모모세포 증식효과를 비교 평가하였다. 평가를 위해 모모세포(human keratatnocyte, HACAT)를 10% FBS, 1% 항생제, 1% growth supplement가 함유된 MSC배지(Mesenchymal stem cell medium-Innoprot)를 사용하여 배양하였다. 상기 배양된 모모세포 4×10⁴ cells/㎖을 200㎕씩 24 well plate에 분주하여 안정화를 위해 37℃, 5% CO₂ 조건하에서 24시간 배양하였다. 24시간 후 시료를 5㎎/㎖ 처리한 다음 37℃, 5% CO₂ 조건하에서 72시간 동안 배양 후 MTS 시료(CellTiter 96^® AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay kit Cat. no. G5421, Promega사) 20㎕를 넣어 주고 37℃, 5% CO₂ Incubator에서 1시간 동안 반응시킨 후 492㎚에서 OD값을 측정하였다. OD값은 다시 standard curve에 대입하여 실제 세포수로 환산한 후, 대조군을 기준으로 백분율로 표시하여 대조군 대비 모모세포 증식촉진효과로 나타내었다. 대조물질로는 시료 대비 동일한 양의 PBS를 처리하였다. 측정결과를 표 10에 나타내었다.

시료	백분율(%)
대조구	100.0±3.8
실시예 1	139.3±3.6
실시예 2	126.7±5.2
실시예 3	123.6±3.3
실시예 4	124.7±5.8
실시예 5	124.1±2.3
실시예 6	123.2±1.5
실시예 7	124.0±3.6

비교예 1	118.0±0.3
비교예 2	115.3±2.9
비교예 3	111.1±5.3
비교예 4	111.4±5.7
비교예 5	109.3±2.9
비교예 6	104.3±2.3
비교예 7	105.4±2.0
비교예 8	108.2±0.3
비교예 9	112.3±1.5
비교예 10	108.0±2.3
비교예 11	109.3±1.6
비교예 12	106.3±2.4
비교예 13	112.3±3.2
비교예 14	103.0±4.2
비교예 15	105.3±4.0
비교예 16	102.6±0.9
비교예 17	107.2±0.2

모모세포의 증식량은 표 10에서와 같이 실시예들에서 대조군 대비 모모세포를 증식시키는 것이 확인되었다. 그 중 실시예 1에서는 대조군에 비해 39% 이상의 모모세포증식 효과가 있었다.

실험예 5-2. 모유두세포 증식효과

실시예 1~7 및 비교예 1~17 조성물에 대한 모모세포 증식효과를 비교 평가하였다. 평가를 위해 모유두세포(human dermal papilla cell)는 10% FBS, 1% 항생제, 1% growth supplement가 함유된 MSC배지(Mesenchymal stem cell medium-Innoprot)를 사용하여 배양하였다. 상기 배양된 모모세포 4×10⁴ cells/㎖을 200㎕씩 24 well plate에 분주하여 안정화를 위해 37℃, 5% CO₂ 조건하에서 24시간 배양하였다. 24시간 후 시료를 5㎎/㎖ 처리한 다음 37℃, 5% CO₂ 조건하에서 72시간 동안 배양 후 MTS 시료(CellTiter 96^® AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay kit Cat. no. G5421, Promega사) 20㎕를 넣어 주고 37℃, 5% CO₂ Incubator에서 1시간 동안 반응시킨 후 492㎚에서 OD값을 측정하였다. OD값은 다시 standard curve에 대입하여 실제 세포수로 환산한 후, 대조군을 기준으로 백분율로 표시하여 대조군 대비 모두유세포 증식촉진효과로 나타내었다. 대조물질로는 시료 대비 동일한 양의 PBS를 처리하였다. 조사 결과를 표 11에 나타내었다.

시료	백분율(%)
대조구	100.0±3.8
실시예 1	139.8±5.8
실시예 2	127.6±5.5
실시예 3	125.6±3.7
실시예 4	129.9±4.8
실시예 5	125.2±2.4
실시예 6	125.9±3.2
실시예 7	128.3±1.6

비교예 1	115.0±0.2
비교예 2	119.3±2.6
비교예 3	118.1±5.4
비교예 4	110.4±4.7
비교예 5	109.3±2.9
비교예 6	104.3±2.4
비교예 7	105.4±0.6
비교예 8	106.3±1.2
비교예 9	112.2±2.3
비교예 10	112.4±0.5
비교예 11	109.2±0.2
비교예 12	108.5±1.3
비교예 13	110.3±4.6
비교예 14	105.2±2.2
비교예 15	104.6±3.3
비교예 16	107.0±4.4
비교예 17	104.5±1.2

조사결과, 표 11에서와 같이 대조군 대비 실시예 각 조성물에서 모유두세포를 증식시키는 것이 확인되었다. 그 중 실시예 1에서는 대조군에 비해 39.8%의 모두유세포증식 효과가 있었다.

<실험예 6. 혼합 조성물의 발모 촉진 효과 평가( in-vivo 실험)>

다음으로는 동물실험을 통해 발모촉진 효과를 조사하였다. 본 실험에 사용한 실험동물은 6주령의 마우스 C57BL/6 수컷으로 오리엔트로부터 분양 받아, 25℃, 습도 50% 사육조건에서 1주일간의 적응기를 갖고, 7주령이 되는 주에 실험을 실시하였다. 마우스를 에테르가 들어 있는 데시케이터에 넣고 1분간 마취시킨 후, 마우스의 등 부위를 동물용 전기 제모기(electric clipper)를 이용하여 2cm X 4cm로 제모하여 털을 제거하였다. 1일 후 등 부위에 상처가 없는 마우스를 대상으로 하여, 털 주기가 휴지기에 맞춰진 마우스들만 재 선별하였다.

본 실험에서 몸무게, 크기 등 특성이 유사한 생쥐를 10마리씩 5군으로 나눈 후 개별적으로 사육하여 모발의 성장 정도를 측정하였다.

실시예 1~4 및 비교예 7과 양성대조군(미녹시딜용액)의 추출물을 5.0 중량% 포함하는 시리얼 사료를 섭취하도록 한 후 30일간 사육하고 제모 부위에서 성장한 모발을 분리하여 중량을 측정하였다. 추출물을 포함하지 않는 시리얼 사료를 섭취한 생쥐를 음성대조군으로 설정하여 추출물에 의한 모발 성장 촉진 효과를 더욱 명확하게 평가하였다. 측정 결과는 표 12와 같다.

시료	털 무게 (g/rat)
음성 대조군	0.0151±0.0021
양성 대조군	0.1285±0.0044
실시예 1	0.1273±0.0014
실시예 2	0.0993±0.0012
실시예 3	0.0893±0.0011
실시예 4	0.0913±0.0012
비교예 7	0.0502±0.0025

평가결과, 특히 실시예 1에서 0.1273g으로 양성대조군과 동등한 량의 털무게를 보여 발모효과가 우수함이 있는 것으로 평가되었고, 실시예 2 내지 4 역시 좋은 발모 기능이 있는 것을 알 수 있다.

Claims

식용곤충 유래 초고압 및 효소 처리물; 및, 다시마, 검정콩, 약모밀, 녹차, 지황, 자소엽, 라벤더, 참마 및 강황의 복합생약 추출물의 발효물;을 함유하는 것을 특징으로 하는 탈모 예방 또는 발모촉진용 조성물.
제1항에 있어서,
상기 식용곤충은 쌍별귀뚜라미, 갈색거저리 유충 및 흰점박이꽃무지 유충으로 이루어진 군 중에서 1종 이상 선택되는 것을 특징으로 하는 탈모 예방 또는 발모촉진용 조성물.
제1항의 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 탈모 예방 또는 발모촉진용 건강기능성식품.
제1항의 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 탈모 예방 또는 치료용 약학조성물.
제1항의 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 탈모 예방 또는 발모촉진용 화장료 조성물.