KR20250029015A

KR20250029015A - 다발성 골수종의 치료를 위한, 다른 제제와 조합된 이사툭시맙의 용도

Info

Publication number: KR20250029015A
Application number: KR1020247032860A
Authority: KR
Inventors: 마리엘 카이론 블론델; 알렉산더 데숀퀴레; 잔드라 카리나 클리펠; 마르코 멜로니; 안젤라 비론-오도스
Original assignee: 사노피-아벤티스 유.에스. 엘엘씨
Priority date: 2022-03-07
Filing date: 2023-03-07
Publication date: 2025-03-04
Also published as: CA3245572A1; MX2024010925A; JP2025509343A; CN119486744A; WO2023172917A1; EP4489766A1; IL315471A; AU2023231217A1; US20250177519A1

Abstract

본 개시내용은 항-CD38 항체 및 인터류킨-2 유사체를 다발성 골수종의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계, 및 선택적으로, CD38의 발현이 감소되거나 녹-아웃된(knocked-out) 자연 살해(NK) 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 다발성 골수종을 치료하는 방법을 제공한다.

Description

다발성 골수종의 치료를 위한, 다른 제제와 조합된 이사툭시맙의 용도

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2022년 3월 7일자로 출원된 미국 가출원 제63/317,253호에 대한 우선권 이익을 주장하며, 이의 내용은, 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.

전자 서열 목록에 대한 참조

전자 서열 목록의 내용(183952034340SEQLIST.xml; 크기: 11,571 바이트; 및 생성 날짜: 2023년 3월 6일)은 본원에 그 전체가 참조로 포함된다.

분야

본 개시내용은 항-CD38 항체, 예를 들어, 이사툭시맙을 투여함으로써 다발성 골수종을 치료하는 방법에 관한 것이다.

다발성 골수종(MM)은 골수(BM)에서 형질 세포의 클론성 증식 및 과량의 모노클로날 면역글로불린(보통 IgG 또는 IgA 유형 또는 자유 소변 경쇄, 즉 파라단백질, M-단백질 또는 M-구성성분임)의 생성을 특징으로 하는 악성 형질 세포 질환이다. MM 환자는 뼈 통증, 뼈 골절, 피로, 빈혈, 감염, 고칼슘혈증 및 신장 문제를 경험할 수 있다(Rollig et al. (2015) Lancet. 385(9983):2197-208). MM에서는 CD38의 발현이 특히 두드러지는데, 이는 환자의 98% 초과가 이러한 단백질에 대해 양성이기 때문이다(문헌[Goldmacher et al. (1994) Blood. 84(9):3017-25; Lin et al. (2004) Am J Clin Pathol. 121(4):482-8]). 악성 클론성 MM 세포에 대한 CD38의 강력하고 균일한 발현은 정상 세포 상에서의 제한된 발현 패턴과 대조되어 이 항원이 종양 세포의 특이적 표적화에 유용할 수 있음을 시사한다.

일반적으로, MM 환자는 단독으로 또는 조합으로 이러한 제제, 예컨대 프로테아좀 억제제(예를 들어, 보르테조밉, 익사조밉 및 카르필조밉) 및 면역 조절제 또는 "IMiD®"(예를 들어, 레날리도마이드, 포말리도마이드 및 탈미도마이드), 모노클로날 항체(예를 들어, 엘로투주맙), 히스톤 탈아세틸라제(HDAC) 억제제(예를 들어, 파노비노스타트)를 포함하는 치료 요법을 이들의 일생 동안 제공받을 것이다.

전체 생존(OS)의 유의한 개선(advance) 및 연장에도 불구하고, 다발성 골수종(MM)은 여전히 불치인 것으로 남아있으며, 대부분의 환자가 재발하여 추가 치료를 필요로 한다(문헌[Kumar SK, Rajkumar V, Kyle RA, et al. Multiple myeloma. Nat Rev Dis Primer. 2017;3: 17046]).

특허 출원, 특허 공보, 및 UniProtKB/Swiss-Prot 등록 번호를 포함하는 본원에 인용된 모든 참조문헌(reference)은 각각의 개별 참조문헌이 참조로 포함되는 것으로 구체적으로 그리고 개별적으로 표시된 것과 같이 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.

다발성 골수종의 치료에서 사용하기 위한 항-CD38 항체 및 인터류킨-2 유사체(IL-2 유사체)가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-CD38 항체 및 IL-2 유사체는 CD38의 발현이 감소되거나 녹-아웃된(knocked-out) NK 세포(NK-CD38KO 세포)와 조합된다.

항-CD38 항체 및 인터류킨-2 유사체(IL-2 유사체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 다발성 골수종을 치료하는 방법이 본원에 제공되고, 항-CD38 항체는 제1 28일 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 투여된 다음에, 적어도 하나의 추가 주기 동안 28일 주기의 제1일 및 제15일에 투여되고, IL-2 유사체를 개체에게 투여할 때, IL-2 유사체는 2주마다 1회 또는 3주마다 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 방법은 NK-CD38KO 세포를 항-CD38 항체 및/또는 IL-2 유사체와 조합으로 투여하는 단계를 포함한다.

다발성 골수종의 치료를 위한 항-CD38 항체의 용도가 본원에 제공되고, 항-CD38 항체는 개체에게 인터류킨-2 유사체(IL-2 유사체)와 조합으로 투여되고, 항-CD38 항체는 제1 28일 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 투여된 다음에, 적어도 하나의 추가 주기 동안 28일 주기의 제1일 및 제15일에 투여되고, IL-2 유사체는 2주마다 1회 또는 3주마다 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 항-CD38 항체 및 IL-2 유사체는 세포 NK-CD38KO 세포와 조합으로 투여된다.

도 1은 이사툭시맙(밝은 회색) 또는 이소형 대조군(짙은 회색)의 존재 하에 야생형 KNK 세포에 비해 BC50 샘플로부터의 CD38 KO K-NK 세포를 사용하여 동족 살해 효과가 회피된다는 것을 보여주는 막대 그래프이다.
도 2는 이사툭시맙(밝은 회색) 또는 이소형 대조군(짙은 회색)의 존재 하에 야생형 KNK 세포에 비해 BC45 샘플로부터의 CD38 KO K-NK 세포를 사용하여 동족 살해 효과가 회피된다는 것을 보여주는 막대 그래프이다.

개요

본 개시내용은 다발성 골수종의 치료에서 사용하기 위한 항-CD38 항체 및 인터류킨-2 유사체(IL-2 유사체)를 제공한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-CD38 항체 및 IL-2 유사체는 CD38의 발현이 감소되거나 녹-아웃된 NK 세포(NK-CD38KO 세포)와 조합된다. 개체에서 다발성 골수종(MM)을 치료하거나 이의 진행을 지연시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 환자는 MM(예를 들어, 새로 진단된 MM)에 대한 치료를 이전에 받지 않았다. 일부 구현예에서, 개체는 MM에 대한 1, 2, 3, 또는 3개 초과의 선행 치료법을 제공받았다. 일부 구현예에서, 개체는 항-CD38 의약 및 항-BCMA 의약을 포함하는 1차 이상의 선행 치료법을 제공받았다.

항-CD38 항체 및 인터류킨-2 유사체(IL-2 유사체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 다발성 골수종을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 다발성 골수종의 치료를 위한 항-CD38 항체의 용도가 본원에 제공되고, 여기서 항-CD38 항체는 개체에게 IL-2 유사체와 조합으로 투여된다. 본원에 제공된 방법 및 용도의 일부 구현예에서, 항-CD38 항체 및 IL-2 유사체는 세포인 NK-CD38KO 세포와 조합으로 투여된다.

방법은 개체에게, CD38 발현이 "녹-아웃된" 자연 살해(NK) 세포(예를 들어, 세포가, CD38 유전자의 전부 또는 일부를 제거하도록 유전자 변형되고, 그에 따라 CD38이 세포에 의해 발현되지 않음)와 조합된 유효량의 항-CD38 항체(예를 들어, 이사툭시맙), 또는 IL-15 또는 이의 유사체, 또는 이들의 조합을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 덱사메타손이 또한 투여된다. 일부 구현예에서, 치료는 개체의 무진행 생존(PFS) 및/또는 전체 생존(OS)을 연장한다. 일부 구현예에서, 치료는, 치료를 받지 않은 개체와 비교하여, 개체의 무진행 생존(PFS) 및/또는 전체 생존(OS)을 연장한다. 일부 구현예에서, 개체는 치료 후 최소 잔여 질환(MRD)에 대해(예를 들어, 10^-4 이하, 10^-5 이하, 또는 10^-6 이하의 역치에서) 음성이다("MRD 음성"으로도 지칭됨).

항-CD38 항체

일부 구현예에서, 항-CD38 항체는 인간 CD38에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-CD38 항체는 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체이다. 일부 구현예에서, 항-CD38 항체는 (a) 아미노산 서열 DYWMQ(SEQ ID NO: 1)를 포함하는 CDR-H1, 아미노산 서열 TIYPGDGDTGYAQKFQG(SEQ ID NO: 2)를 포함하는 CDR-H2, 및 아미노산 서열 GDYYGSNSLDY(SEQ ID NO: 3)를 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(V_H), 및 (b) 아미노산 서열 KASQDVSTVVA(SEQ ID NO: 4)를 포함하는 CDR-L1, 아미노산 서열 SASYRYI(SEQ ID NO: 5)를 포함하는 CDR-L2, 및 아미노산 서열 QQHYSPPYT(SEQ ID NO: 6)를 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 도메인 (V_L)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD38 항체는 SEQ ID NO: 7과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%(이들 값 사이의 임의의 범위 포함) 중 임의의 하나) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인(V_H)을 포함한다. 추가로 또는 대안적으로, 항-CD38 항체는 SEQ ID NO: 8 또는 SEQ ID NO: 9와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 91%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%(이들 값 사이의 임의의 범위 포함) 중 임의의 하나) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인(V_L)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD38 항체는 SEQ ID NO: 7을 포함하는 V_H 및 SEQ ID NO: 8 또는 SEQ ID NO: 9를 포함하는 V_L을 포함한다.

일부 구현예에서, 항-CD38 항체는 이사툭시맙(CAS 등록 번호: 1461640-62-9)이다. hu38SB19 및 SAR650984로도 알려진 이사툭시맙은, WO 2008/047242 및 미국 특허 제8,153,765호에 기재된 항-CD38 항체이며, 둘 모두의 내용은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.

이사툭시맙의 중쇄는 하기 아미노산 서열을 포함하고:

이사툭시맙의 경쇄는 하기 아미노산 서열을 포함한다:

항-CD38 항체는 재조합 방법을 사용하여 생산될 수 있다. 항-항원 항체의 재조합 생산을 위해, 항체를 인코딩하는 핵산이 단리되고 추가 클로닝(DNA의 증폭)을 위해 또는 발현을 위해 복제 가능한 벡터로 삽입된다. 항체를 인코딩하는 DNA는 통상적 절차를 사용하여(예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 탐침을 사용함으로써) 쉽게 단리되고 서열분석될 수 있다. 여러 벡터가 이용 가능하다. 벡터 구성성분은 일반적으로 다음 중 하나 이상을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다: 신호 서열, 복제 기점, 하나 이상의 마커 유전자, 향상제 요소, 프로모터 및 전사 종결 서열. 벡터는 전형적으로 핵산의 발현에 적합한 숙주 세포 내로 형질전환된다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 진핵 세포 또는 원핵 세포이다. 일부 구현예에서, 진핵 숙주 세포는 포유동물 세포이다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주(COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 세포주(현탁 배양에서의 성장용으로 서브클로닝된 293 또는 293 세포, 문헌[Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)]); 아기 햄스터 신장 세포(BHK, ATCC CCL 10); 마우스 세르톨리(sertoli) 세포(TM4, 문헌[Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)]); 원숭이 신장 세포(CV1 ATCC CCL 70); 아프리카 사바나 원숭이 신장 세포(VERO-76, ATCC CRL-1587); 인간 자궁경부 암종 세포(HELA, ATCC CCL 2); 개 신장 세포(MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 래트 간 세포(BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포(W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포(Hep G2, HB 8065); 마우스 유선 종양(MMT 060562, ATCC CCL51); TRI 세포(문헌[Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68(1982)]); MRC 5 세포; FS4 세포; 및 인간 간암 세포주(Hep G2)이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR- CHO 세포를 포함하는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포(문헌[Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)]); 및 골수종 세포주, 예컨대 NS0 및 Sp2/0을 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정한 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위해, 예를 들어, 문헌[Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J., 2003), pp. 255-268]을 참조한다. 세포로부터 제조된 항-CD38 항체는, 예를 들어, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 및 친화도 크로마토그래피를 사용하여 정제될 수 있고, 친화도 크로마토그래가 전형적으로 바람직한 정제 단계 중 하나이다. 일반적으로, 연구, 시험 및 임상 적용에서 사용하기 위한 항체를 제조하기 위한 다양한 방법론이 당분야에 잘 확립되어 있고, 상술된 방법론과 일치하고/하거나 당업자에 의해 적절한 것으로 간주된다.

일부 구현예에서, IL-2 유사체는 페길화된 IL-2이다. 일부 구현예에서, IL-2 유사체는 비-천연 아미노산, 예컨대 N6-((2-아지도에톡시)-카보닐)-L-리신(AzK)을 갖는다(예컨대 포함(include)하거나 포함(comprise)함). 일부 구현예에서, 비-천연 아미노산은 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 선형 PEG 기로 단일 페길화된다. 적합한 IL-2 유사체는, 예를 들어, 그 전체가 본원에 참고로 포함된 WO2020/163532에 기재되어 있다.

일부 구현예에서, CD38의 발현이 감소되거나 녹-아웃되도록 변형된 자연 살해(NK) 세포(NK-CD38KO 세포)는 다발성 골수종의 치료를 위해 이사툭시맙 및/또는 IL-2 유사체와 함께 사용된다. 이러한 NK-CD38KO 세포는, 예를 들어, 그 전체가 포함된 교시가 WO 2021087466에 기재된 방법에 의해 생산될 수 있다.

일부 구현예에서, 개체는 항-CD38 항체, IL-2 유사체 및 선택적으로 NK-CD38KO 세포를 사용하는 제1 주기의 치료를 받기 전에 다발성 골수종의 치료를 위한 1차 이상의 치료법을 제공받았다. 항-CD38 의약은, 예를 들어, 인간 CD38에 특이적으로 결합할 수 있는 단일특이적 또는 다중특이적 결합제를 포함한다. 항-BCMA 의약은, 예를 들어, 인간 BCMA에 특이적으로 결합할 수 있는 단일특이적 또는 다중특이적 결합제를 포함한다. 결합제는, 예를 들어, 모노클로날 항체, 이중특이적 또는 삼중특이적 항체, 또는 각각 CD38 또는 BCMA에 특이적으로 결합할 수 있는 종래의 항체의 항원 특이적 영역을 함유하는 항체 유사체일 수 있다. 결합제는 또한 항체-약물 접합체일 수 있다.

약학적 조성물 및 제형

또한, 항-CD38 항체(예컨대 이사툭시맙), IL-2 유사체, NK-CD38KO 세포 및/또는 덱사메타손을 포함하는, 예를 들어, 다발성 골수종의 치료를 위한 약학적 조성물 및 제형이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항-CD38 항체, IL-2 유사체, NK-CD38KO 세포 및 선택적 덱사메타손 각각은 별도 약학적 조성물로서 제공된다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물 및 제형은 약학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함한다.

일부 구현예에서, 항-CD38 항체는, 예를 들어, pH 6.0에서 약 20 mg/mL(500 mg/25 mL) 항체, 약 20 mM 히스티딘, 약 10%(w/v) 수크로스, 약 0.02%(w/v) 폴리소르페이트 80을 포함하는 정맥내 투여에 적합한 제형 중에 있다. 일부 구현예에서, 항-CD38 항체는 약 20 mg/mL 항체, 약 100 mg/mL 수크로스, 2.22 mg/mL 히스티딘 하이드로클로라이드 1수화물, 약 1.46 mg/ml 히스티딘 및 약 0.2 mg/ml 폴리소르페이트 80을 포함하는 제형 중에 있다. 일부 구현예에서, 제형은 주사용수(WFI), 예컨대 멸균 주사용수(SWFI)를 포함한다. 일부 구현예에서, 제형은 멸균 상태이다. 일부 구현예에서, 단회 사용 제형은 5 ml의 제형(즉 100 mg 항-CD38 항체)을 포함한다. 일부 구현예에서, 단회 사용 5 ml 제형은, 예를 들어, 탄성중합체성 마개가 피팅된 유형 16 mL 무색 투명 유리 바이알에 제공된다. 일부 구현예에서, 바이알의 충전 부피는 5 mL의 제거를 보장하도록 확립되었다. 일부 구현예에서, 충전 부피는 5.4 mL이다. 일부 구현예에서, 단회 사용 제형은 25 ml의 제형(즉 500 mg 항-CD38 항체)을 포함한다. 일부 구현예에서, 단회 사용 25 ml 제형은, 예를 들어, 탄성중합체성 마개가 피팅된 30 mL 무색 투명 유리 바이알에 제공된다. 일부 구현예에서, 바이알의 충전 부피는 25 mL의 제거를 보장하도록 확립되었다. 일부 구현예에서, 제형은 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 적어도 약 6개월, 12개월, 18개월, 24개월, 30개월 또는 36개월(이들 값 사이의 임의의 범위 포함) 동안 안정하고, 광으로부터 보호된다. 일부 구현예에서, 제형은 0.9% 나트륨 클로라이드 또는 5% 덱스트로스 중에 주입을 위해 희석된다. 일부 구현예에서, 희석된 주입 용액은 약 2℃ 내지 약 8℃에서, 최대 약 6시간, 12시간, 18시간, 24시간, 30시간, 36시간, 42시간 또는 48시간(이들 값 사이의 임의의 범위 포함) 동안 안정하다. 일부 구현예에서, 주입용의 희석된 용액은 추가 8시간(주입 시간 포함) 동안 약 2℃ 내지 약 8℃에서 보관 후 실온에서 안정하다. 일부 구현예에서, 주입용의 희석된 용액은 빛의 존재 하에 안정하다. 일부 구현예에서 주입용의 희석된 용액이 보관되는 백은 폴리올레핀(PO), 폴리에틸렌(PE), 폴리프로필렌(PP), 폴리비닐 클로라이드(PVC)와 디(에틸헥실)프탈레이트(DEHP) 또는 에틸 비닐 아세테이트(EVA)로부터 제작된다. 일부 구현예에서, 주입에 사용된 튜빙은 인-라인 필터(폴리에테르설폰(PES), 폴리설폰 또는 나일론)가 구비된 PE, PVC(DEHP 존재 또는 부재), 폴리부틸디엔(PBD) 또는 폴리우레탄(PU)으로부터 제작된다.

일부 구현예에서, 항-CD38 항체는 피하 투여용 제형으로서 제공된다. 일부 구현예에서, 항-C38 항체는 140 mg/mL의 농도의 이사툭시맙, 9 mM 히스티딘, 110 mM Arg-Cl, 2%(w/v) 수크로스 및 0.4%(w/v) 폴록사머(Poloxamer) 188을 포함한다.

다발성 골수종의 치료를 위한, 다른 제제와 조합된 항-CD38 항체의 용도

개체(예를 들어, 인간 개체)에서 다발성 골수종의 치료를 위해, IL-2 유사체, CD38의 발현이 감소되거나 녹-아웃되도록 변형된 자연 살해(NK) 세포(NK-CD38KO 세포), 및 덱사메타손 중 하나 이상과 조합으로 사용하기 위한 항-CD38 항체가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 사용은 개체에게 유효량의 항-CD38 항체(예를 들어, (a) 아미노산 서열 DYWMQ(SEQ ID NO: 1)를 포함하는 CDR-H1, 아미노산 서열 TIYPGDGDTGYAQKFQG(SEQ ID NO: 2)를 포함하는 CDR-H2, 및 아미노산 서열 GDYYGSNSLDY(SEQ ID NO: 3)를 포함하는 CDR-H3을 포함하는 중쇄 가변 도메인(V_H), 및 (b) 아미노산 서열 KASQDVSTVVA(SEQ ID NO: 4)를 포함하는 CDR-L1, 아미노산 서열 SASYRYI(SEQ ID NO: 5)를 포함하는 CDR-L2, 및 아미노산 서열 QQHYSPPYT(SEQ ID NO: 6)를 포함하는 CDR-L3을 포함하는 경쇄 가변 도메인(V_L)을 포함하는 항-CD38 항체를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CD38 항체는 이사툭시맙이다.

일부 구현예에서, 방법은 항-CD38 항체(예를 들어, 이사툭시맙)를 개체에게 10 mg/kg의 용량으로 제1 28일 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 투여하고, 항-CD38 항체를 10 mg/kg의 용량으로 적어도 하나의 추가 주기 동안 28일 주기의 제1일 및 제15일에 투여하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 방법은 항-CD38 항체를 10 mg/kg의 용량으로 적어도 11회 주기의, 28일 주기의 제1일 및 제15일에 투여한 후에, 항-CD38 항체(예를 들어, 이사툭시맙)를 10 mg/kg의 용량으로 1회 이상의 추가 28일 주기 동안 28일마다 1회 투여하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 방법은, 개체가 항-CD38 항체로 치료 받는 동안에 적어도 매우 양호한 부분 반응(VGPR)을 달성한 후에, 항-CD38 항체(예를 들어, 이사툭시맙)를 10 mg/kg의 용량으로 1회 이상의 추가 28일 주기의 28일마다 1회 투여하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 방법은, 개체가 항-CD38 항체로 치료 받는 동안에 MRD 음성을 달성한 후에, 항-CD38 항체(예를 들어, 이사툭시맙)를 10 mg/kg의 용량으로 1회 이상의 추가 28일 주기의 28일마다 1회 투여하는 것을 포함한다.

본원에 기재된 일부 구현예에서, IL-2 유사체는 비-천연 아미노산인 N6-((2-아지도에톡시)-카보닐)-L-리신(AzK)을 포함하도록 변형된 IL-2이고, AzK는 페길화된다. 일부 구현예에서, IL-2 유사체는 2주마다 1회, 3주마다 1회, 또는 이들의 조합으로 투여된다. 일부 구현예에서, IL-2 유사체는 24 ug/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, IL-2 유사체는 32 ug/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, IL-2 유사체는 16 ug/kg의 용량으로 투여된다.

일부 구현예에서, 본원에 기재된 치료 요법은 개체의 무진행 생존(PFS)을 연장한다.

일부 구현예에서, 다발성 골수종은 무증상 다발성 골수종(SMM)이다. 일부 구현예에서, 다발성 골수종은 새로 진단된 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, 다발성 골수종은 재발성 및/또는 불응성 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, 개체는 다발성 골수종에 대해 1, 2 또는 3개의 선행 치료법을 제공받았다. 일부 구현예에서, 개체는 다발성 골수종에 대해 3개 초과의 선행 치료법을 제공받았다. 일부 구현예에서, 개체는 프로테아좀 억제제를 사용한 선행 치료법을 제공받았다. 일부 구현예에서, 개체는 면역조절제를 사용한 선행 치료법을 제공받았다. 일부 구현예에서, 개체는 항-CD38 항체를 사용한 선행 치료를 받지 않았다.

일부 구현예에서, 개체는 항-CD38 항체를 사용한 선행 치료를 받았다. 일부 구현예에서, 선행 항-CD38 항체는 다라투무맙이다. 일부 구현예에서, 선행 항-CD38 항체는 이사툭시맙이다.

제조 물품 또는 키트

본 발명의 또 다른 구현예에서, 항-CD38 항체(예컨대 이사툭시맙)를 포함하는 제조 물품 또는 키트가 제공된다. 일부 구현예에서, 제조 물품 또는 키트는 적어도 하나의 추가 제제(예를 들어, IL-2 유사체, NK-CD38KO 세포 또는 덱사메타손 중 하나 이상)를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 제조 물품 또는 키트는 다발성 골수종(예를 들어, 무증상 다발성 골수종, 새로 진단된 다발성 골수종, 불응성 다발성 골수종, 또는 재발성이고 불응성인 다발성 골수종)을 치료하거나 이의 진행을 지연시키기 위해 본원에 기재된 용도에 따라 항-CD38 항체(예를 들어, 이사툭시맙) 및 다른 제제를 사용하기 위한 설명서를 포함하는 패키지 삽입물을 추가로 포함한다.

정의

본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용되는 바와 같이, 단수형은 내용이 명백히 달리 명시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "분자"에 대한 지칭은 선택적으로 2개 이상의 이러한 분자의 조합 등을 포함한다.

"지속된 반응"은 치료 종료 후 질환(예를 들어, 다발성 골수종)의 진행 예방 또는 지연 및/또는 하나 이상의 반응 기준의 개선에 대해 지속된 효과를 지칭한다. 예를 들어, 다발성 골수종에 대한 치료에 대한 반응은 문헌[Kumar et al. (2016) "International Myeloma Working Group consensus criteria for response and minimal residual disease assessment in multiple myeloma." Lancet Oncol. 17(8): e328-e346)] 및 문헌[Durie et al. (2006) "International uniform response criteria for multiple myeloma. Leukemia. 20: 1467-1473]에서의 기준에 따라 측정될 수 있다. (또한, 아래 표 A 를 참조함.) 일부 구현예에서, 지속된 반응은 치료 지속기간과 적어도 동일하거나 치료 지속기간의 적어도 1.5X, 2.0X, 2.5X, 또는 3.0X 길이의 지속기간을 갖는다.

[표 A] 표준 국제 골수종 워킹 그룹(IMWG) 반응 기준

‡SPD, 측정된 병변의 최대 수직 직경의 곱의 합

혈청 및 소변 M-단백질 수준을 측정하는 방법은 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌[Jenkins (2009) Clin Biochem Rev. 30(3): 119-122]; [Leung, Nelson "Chapter 8: Clinical Tests for Monoclonal Proteins." Onco-Nephrology Curriculum, American Society of Nephrology 2016, pages 1-5)]에 기재되어 있다.

일부 구현예에서, VGPR은, 문헌[Kumar et al. (2016) "International Myeloma Working Group consensus criteria for response and minimal residual disease assessment in multiple myeloma." Lancet Oncol. 17(8): e328-e346)] 및 문헌[Durie et al. (2006) "International uniform response criteria for multiple myeloma. Leukemia. 20: 1467-1473]에서의 기준에 따라 평가되고, 이의 내용은 이들 전체가 본원에 참조로 포함된다. (또한, 표 A 를 참조함.)

용어 "약제학적 제형"은 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 허용하는 그러한 형태이고, 제형이 투여될 대상체에게 허용 불가능할 정도로 독성인 어떠한 부가적인 구성성분도 함유하지 않는 조제물을 지칭한다. 이러한 제형은 멸균 상태이다. "약제학적으로 허용 가능한" 부형제(비히클, 첨가제)는 유효 용량의 이용되는 활성 성분을 제공하기 위해 대상체 포유류에게 타당하게 투여될 수 있는 것이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료"는 임상 병리 동안 치료될 질환 또는 세포(예를 들어, 암 세포)의 자연적 과정을 변경시키도록 설계된 임상적 개입을 지칭한다. 치료의 바람직한 효과는 질환 진행 속도의 감소, 질환 상태의 호전 또는 완화, 및 차도 또는 개선된 예후를 포함한다. 예를 들어, 개체는 비제한적으로 암성 세포의 증식 감소(또는 파괴), 질환으로부터 초래되는 증상 감소, 질환을 앓는 사람들의 삶의 질 증가, 질환을 치료하기 위해 요구되는 다른 의약의 용량 감소 및/또는 개체의 생존 연장을 포함하여, 암과 연관된 하나 이상의 증상이 경감(mitigate)되거나 제거되는 경우 성공적으로 "치료된다".

본원에서 사용되는 바와 같이, "질환의 진행 지연"은 질환(예컨대, 암)의 발달의 지연, 방해, 둔화, 저지, 안정화, 및/또는 연기를 의미한다. 이러한 지연은 질환의 병력 및/또는 치료를 받는 개체에 따라 다양한 시간 길이일 수 있다. 당업자에게 자명한 바와 같이, 충분하거나 유의한 지연은, 사실상, 개체에서 질환이 발생하지 않는다는 것에서 예방을 포괄할 수 있다. 예를 들어, 후기 단계 암, 예컨대 전이의 발생이 지연될 수 있다.

"유효량"은 적어도, 특정 장애의 측정 가능한 개선 또는 예방을 야기하는 데 요구되는 최소량이다. 본원에서 유효량은 요인들, 예컨대 개체/환자의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 유발하는 항체의 능력에 따라 변할 수 있다. 유효량은 또한 치료적으로 유익한 효과가 치료의 임의의 독성 또는 유해 효과보다 큰 양이다. 예방 용도를 위해, 유익하거나 원하는 결과는, 질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 거동적 증상, 그 합병증, 및 질환의 발생 동안 나타나는 중간의 병리적 표현형을 포함하는, 질환의 위험 제거 또는 감소, 중증도 경감, 또는 발병 지연과 같은 결과를 포함한다. 치료 용도를 위해, 유익하거나 원하는 결과는 임상 결과, 예컨대 질환으로부터 초래되는 하나 이상의 증상 감소, 질환을 앓는 사람들의 삶의 질 증가, 질환을 치료하기 위해 요구되는 다른 의약의 용량 감소, 예컨대 표적화를 통한, 또 다른 의약의 효과 향상, 질환의 진행 지연, 및/또는 생존 연장을 포함한다. 암 또는 종양의 경우, 약물의 유효량은 암 세포수 감소; 종양 크기 감소; 말초 기관 내로의 암 세포 침윤 억제(즉, 어느 정도까지의 둔화 또는 바람직하게는 정지); 종양 전이 억제(즉, 어느 정도까지의 둔화 또는 바람직하게는 정지); 어느 정도까지의 종양 성장 억제; 및/또는 장애와 연관된 하나 이상의 증상의 어느 정도까지의 경감에 효과를 가질 수 있다. 유효량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 약물, 화합물 또는 약학적 조성물의 유효량은 직접적으로 또는 간접적으로 예방적 또는 치료적 치료를 달성하기에 충분한 양이다. 임상적 맥락에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물 또는 약학적 조성물의 유효량은 또 다른 약물, 화합물 또는 약학적 조성물과 함께 달성될 수도 있고 달성되지 않을 수도 있다. 따라서, "유효량"은 하나 이상의 치료제 투여의 맥락에서 고려될 수 있으며, 단일 제제는 하나 이상의 다른 제제와 함께, 원하는 결과가 달성될 수 있거나 달성되는 경우, 유효량으로 주어진 것으로 고려될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같은, "~와 함께"는 또 다른 치료 양식에 외의 하나의 치료 양식의 투여를 지칭한다. 이와 같이, "~와 함께"는 개체에 대한 다른 치료 양식의 투여 전, 동안 또는 후 하나의 치료 양식의 투여를 지칭한다.

치료 목적을 위한 "대상체" 또는"개체"는 인간, 가축 및 농장 동물, 및 동물원, 스포츠 또는 애완용 동물, 예컨대 개, 말, 고양이, 소 등을 포함하는 포유류로 분류되는 임의의 동물을 지칭한다. 바람직하게는, 포유류는 인간이다.

본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며 이들이 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 모노클로날 항체(전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체) 및 항체 단편을 특이적으로 포함한다.

인간 경쇄는 전형적으로 카파 및 람다 경쇄로 분류되며, 인간 중쇄는 전형적으로 뮤, 델타, 감마, 알파 또는 엡실론으로 분류되며, 항체의 이소형을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE로 정의한다. IgG는 비제한적으로 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함하는 몇몇 서브클래스를 갖는다. IgM은 비제한적으로 IgM1 및 IgM2를 포함하는 서브클래스를 갖는다. IgA는 비제한적으로 IgA1 및 IgA2를 포함하는 서브클래스로 유사하게 세분된다. 전장 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 도메인은 전형적으로 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되며, 이때 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. 예를 들어, 그 전문이 모든 목적을 위해 참조로 포함되는 문헌[Fundamental Immunology(Paul, W., ed., Raven Press, 2nd ed., 1989)]을 참고한다. 각각의 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 전형적으로 항원 결합 부위를 형성한다. 항체의 가변 도메인은 전형적으로 상보성 결정 영역 또는 CDR로도 불리는 3개의 초가변 영역에 의해 연결된 상대적으로 보존된 프레임워크 영역(FR)의 동일한 일반 구조를 나타낸다. 각 쌍의 2개의 쇄로부터의 CDR은 전형적으로 프레임워크 영역에 의해 정렬되며, 이는 특이적 에피토프에 대한 결합을 가능하게 할 수 있다. 아미노-말단으로부터 카복실-말단으로, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 모두는 전형적으로 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 순서대로 포함한다.

용어 "CDR 세트"는 항원에 결합할 수 있는 단일 가변 영역에서 생기는 3개의 CDR의 군을 나타낸다. 이러한 CDR의 정확한 경계는 상이한 시스템에 따라 상이하게 정의되었다. Kabat에 의해 기재된 시스템(문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest(National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) and (1991)])은 항체의 임의의 가변 영역에 적용 가능한 명백한 잔기 넘버링(numbering) 시스템을 제공할 뿐만 아니라 3개의 CDR을 정의하는 정확한 잔기 경계도 제공한다. 이러한 CDR은 Kabat CDR로 지칭될 수 있다.

본원에서 사용된 바와 같은 용어 "Fc"는, 단량체 형태 또는 다량체 형태로, 항체의 소화로부터 초래되거나 다른 수단에 의해 생산될 것이고 힌지 영역을 포함할 수 있는, 항원-비결합 단편의 서열을 지칭한다. 천연 Fc의 본래의 면역글로불린 공급원은 바람직하게는 인간 기원이며, 임의의 면역글로불린일 수 있다. Fc 분자는 공유(즉, 이황화 결합) 및 비공유 결합에 의해 이량체 또는 다량체 형태로 연결될 수 있는 단량체 폴리펩티드로 이루어진다. 천연 Fc 분자의 단량체 서브유닛 간의 분자간 이황화 결합의 수는 클래스(예를 들어, IgG, IgA, 및 IgE) 또는 서브클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgA1, IgGA2, 및 IgG4)에 따라 1개 내지 4개의 범위이다. Fc의 하나의 예는 IgG의 파파인 소화로부터 초래되는 이황화-결합된 이량체이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "천연 Fc"라는 용어는 단량체, 이량체 및 다량체 형태의 총칭이다.

본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "전체 반응률" 또는 "ORR"은, 문헌[Kumar et al. (2016) "International Myeloma Working Group consensus criteria for response and minimal residual disease assessment in multiple myeloma." Lancet Oncol. 17(8): e328-e346] 및 문헌[Durie et al. (2006) "International uniform response criteria for multiple myeloma. Leukemia. 20: 1467-1473]에 기재된 IMWG 반응 기준을 사용하여 IRC에 의해 평가된 바와 같은, 엄격한 완전 반응(sCR), 완전 반응(CR), 매우 양호한 부분 반응(VGPR) 및 부분 반응(PR)을 보인 개체/환자의 비율을 지칭한다. 또한, 본원 내 표 A 를 참고한다.

본 명세서는 당업자가 본 발명을 실시할 수 있도록 하기 충분한 것으로 고려된다. 본원에 나타내고 기재된 것들에 더하여 본 발명의 다양한 변형이 상기 기재로부터 당업자에게 자명해질 것이며 첨부된 청구범위의 범위(scope) 내에 속할 것이다. 본원에서 인용된 모든 공보, 특허, 및 특허 출원은 그 전체가 모든 목적을 위해 참조로 본원에 포함된다.

실시예

본 개시내용은 하기 실시예를 참조하여 보다 충분히 이해될 것이다. 그러나, 이들은 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본원에 기재된 실시예 및 구현예는 단지 예시의 목적을 위한 것이고, 이에 비추어 다양한 변형 또는 변경이 당업자에게 제안될 것이며, 이러한 변형 또는 변경은 본 출원의 사상과 범주 및 첨부된 청구범위의 범위 내에 포함되는 것으로 이해된다.

실시예 1:

시험관내 세포독성 활성 측정

항체 의존성 세포성 세포독성(ADCC):

WT 또는 CD38KO K-NK 세포(효과기 세포)를 이사툭시맙 및 SAR444245(페길화된 IL-2 유사체)와 조합으로 사용하여 LP-1 RFP 다발성 골수종 세포(표적 세포)에 대한 항체 의존성 세포성 세포독성(ADCC)을, Incucyte® 살아있는 세포 이미징 및 분석 시스템(Essen Bioscience)에 의해 시간 경과에 따라 측정하였다.

LP-1 세포(DSMZ)를 Incucyte® Nuclight Red Lentivirus(Sartorius)로 감염시켜 적색 형광 단백질(RFP)을 발현시켜 LP-1 RFP 세포를 생성하였다. LP-1 RFP 세포를, 20% 소 태아 혈청(FBS 열 불활성화됨, Biowest, #S181H-100), 1% L-글루타민(Gibco, #25030-024)으로 보충된 IMDM 배지(Gibco, #12440053)에서 유지하였고, 5% CO2와 함께 37℃에서 인큐베이션하였다. LP-1 RFP 세포를 300 g에서 5분 동안 원심분리하고, RPMI1640 완전 배지(10% 소 태아 혈청(FBS, Biowest, #S181H-100), 1% L-글루타민(Gibco, #25030-024)로 보충된 RPMI1640)에 재현탁한 후에, Incucyte® 플레이트에 첨가하였다(아래 세부사항).

CD38의 발현이 감소되거나 녹-아웃된 자연 살해(NK) 세포(CD38KO K-NK 세포)를, 2명의 건강한 공여자로부터 단리한 말초혈 NK 세포(BC45 및 BC50)를 사용하여 생성하고 PM21 입자 기술을 사용하여 확장하여 고도로 활성화된 K-NK 세포를 생산하였다. BC45 세포는 CD16에 대해 V/V 표현형을 갖는 반면에, BC50 세포는 F/V 표현형을 갖는다.

CD38KO K-NK 세포를 생산하기 위해, CD38을 표적화하는 Cas9/RNP 복합체를 사용하여 전기천공시킴으로써 NK 세포 확장 동안에 CRISPR 유전자 편집을 적용하였다. 확장 후에, WT 및 CD38KO K-NK 세포를 동결시키고 -150℃에서 보관하였다. WT 및 CD38KO K-NK 세포를 해동하고, 50 U/mL의 IL-2(Peprotech, #200-02)로 보충된 RPMI1640 완전 배지에 시딩하고, 37℃에서 5% CO2와 함께 16 내지 20시간 동안 인큐베이션하였다. 그런 다음에, 세포를 300 g에서 5분 동안 원심분리한 후에, Incucyte® 플레이트에 첨가하였다.

화합물 및 세포를 Incucyte® 플레이트(폴리-D 리신 처리된 96-웰 평저 마이크로플레이트 CellCoat™, Greiner Bio-One; #655946)의 적절한 웰에 다음 순서로 첨가하였다(각각의 웰의 최종 부피: 200 μl):

이사툭시맙(또는 이소형 대조군)(RPMI1640 완전 배지에 이전에 희석됨)을, 0.1, 1 또는 10 ng/ml의 최종 농도를 갖도록 적절한 웰에 첨가하였다(50 μl/웰).

그런 다음에, SAR444245(RPMI1640 완전 배지에 이전에 희석됨)를 333,33 ng/ml의 최종 농도를 갖도록 적절한 웰에 첨가하였다(50 μl/웰).

그런 다음에, LP-1 RFP 세포(표적 세포, T)를 각각의 웰에 (20000개 LP1-RFP 세포/웰을 갖도록) 첨가하였다(50 μl/웰).

그런 다음에, WT 또는 CD38KO K-NK 세포(효과기 세포, E)를 적절한 웰에 첨가하였다. 20000, 60000 또는 100000개의 세포를 첨가하여 상이한 E:T 비율(각각 1:1, 3:1 및 5:1)을 평가하였다(50 μl/웰).

그런 다음에, Incucyte® 플레이트를 100 g에서 1분 동안 원심분리한 후에, 37℃에서 5% CO2를 갖는 전용 인큐베이터 내에 하우징된 Incucyte®(IncucyteS3, EssenBio)에 두었다. 이미지(4개 이미지/웰)를 위상 및 적색 채널을 사용하여 10X 대물렌즈 및 표준 스캔 유형으로 2시간마다 촬영하였다. LP-1 RFP 표적 세포의 성장을 최대 90시간의 형광 이미징에 의해 모니터링하고, IncucyteS3 소프트웨어를 사용하여 살아있는 표적 세포의 수를 정량화하고 0시간에서의 살아있는 표적 세포의 수에 대해 정규화하였다.

실험을 2명의 공여자로부터의 WT 및 CD38KO K-NK 세포(BC45 및 BC50)를 사용하여 적어도 2회 수행하였으며, 각 조건은 중복되었다.

동족 살해 효과

WT 및 CD38KO K-NK 세포를 해동하고, RPMI1640 완전 배지(10% 소 태아 혈청(FBS, Biowest, #S181H-100), 1% L-글루타민(Gibco, #25030-024)로 보충된 RPMI1640)에 시딩하고, 추가로 50 U/mL의 IL-2(Peprotech, #200-02)로 보충하고, 37℃에서 5% CO2와 함께 16 내지 20시간 동안 인큐베이션하였다. 그런 다음에, 세포를 300 g에서 5분 동안 원심분리하고, 계수하고, 50000개 K-NK 세포/50 μl를 갖도록 RPMI1640 완전 배지에 재현탁하였다.

화합물 및 세포를 Corning™ 96-웰 투명 초저 부착 마이크로플레이트(Corning, #7007)의 적절한 웰에 다음 순서로 첨가하였다(각각의 웰의 최종 부피: 200 μl):

RPMI1640 완전 배지를 각각의 웰에 첨가하였다(100 μl/웰).

이사툭시맙(또는 이소형 대조군)(RPMI1640 완전 배지에 이전에 희석됨)을 10 ng/ml의 최종 농도를 갖도록 적절한 웰에 첨가하였다(50 μl/웰).

그런 다음에, WT 또는 CD38KO K-NK 세포를 적절한 웰에 (50000개 K-NK 세포/웰을 갖도록) 첨가하였다(50 μl/웰).

그런 다음에, 플레이트를 100 g에서 1분 동안 원심분리한 후에, 37℃에서 5% CO2를 갖는 인큐베이터 내에 4시간 동안 두었다.

동족 살해를 정량화하기 위해, WT 및 CD38KO K-NK 세포를 Annexin V-FITC 키트 또는 DiOC6/DRAQ7로 염색하였다.

Annexin V-FITC 키트(Miltenyi Biotec; #130-092-052)로 표지하는 경우:

4시간의 인큐베이션 후에, 플레이트를 300 g에서 5분 동안 원심분리하고, 배지를 제거하고, 펠릿을 200 μL의 Annexin V-FITC 키트 완충제 용액에 재현탁하였다. 플레이트를 300 g에서 5분 동안 다시 원심분리하였다.

완충제를 제거한 다음에, 펠릿을 100 μL의 Annexin V-FITC 키트 완충제 용액에 재현탁하고, 5 μL의 Annexin V-FITC를 적절한 웰에 첨가하였다.

플레이트를 실온에서, 그리고 어둠 속에서 15분 동안 인큐베이션하였다.

100 μL의 Annexin V-FITC 키트 완충제 용액을 첨가하고, 플레이트를 300 g에서 5분동안 원심분리하고, 완충제를 제거하였다.

펠릿을 200 μL의 Annexin V-FITC 키트 완충제 용액에 재현탁하고, 플레이트를 300 g에서 5분 동안 다시 원심분리하였다.

완충제를 제거하고, 펠릿을 100 μL의 Annexin V-FITC 키트 완충제 용액에 재현탁하였다.

1 μL의 프로피디움 요오다이드(PI)를 분석 직전에 적절한 웰에 첨가하였다.

그런 다음에, 샘플을 MACSQuant 16 유세포 분석기(Miltenyi Biotec)로 분석하였다.

데이터를 다음 전략을 사용하여 VenturiOne 소프트웨어로 분석하였다:

데브리를 제외한 K-NK 세포 집단을 게이팅한 후, 단일 세포에 대해 게이팅하였다. 단일 세포로부터, 생존 가능한 PIneg 및 Annexin V-FITCneg 세포를 정량화하였다.

그래프 표현에 대하여, 생존 가능한 K-NK 세포(Annexin Vneg/PIneg)를, 이소형 대조군의 존재 하에 생존 가능한 세포의 백분율(100%)에 대해 정규화된, 이사툭시맙의 존재 하에 생존 가능한 세포의 백분율로서 정량화하였다(도 1 참조).

DiOC6/DRAQ7로 표지하는 경우:

4시간의 인큐베이션 후에, 20 μL의 100 nM DiOC6(3,3'-디헥실옥사카보시아닌 요오다이드, ThermoFisher, #D273)을 적절한 웰에 첨가하였다.

플레이트를 37℃에서 5% CO2와 함께 20분 동안 인큐베이션하였다.

그런 다음에, 플레이트를 300 g에서 5분 동안 원심분리하고, 배지를 제거하고, 펠릿을 100 μL의 3 μM DRAQ7(BD Biosciences, #564904)에 재현탁하였다.

데브리를 제외한 K-NK 세포 집단을 게이팅한 후, 단일 세포에 대해 게이팅하였다. 단일 세포로부터, 생존 가능한 DiOC6pos 및 DRAQ7neg 세포를 정량화하였다.

그래프 표현에 대하여, 생존 가능한 K-NK 세포(DiOC6pos/DRAQ7neg)를, 이소형 대조군의 존재 하에 생존 가능한 세포의 백분율(100%)에 대해 정규화된, 이사툭시맙의 존재 하에 생존 가능한 세포의 백분율로서 정량화하였다(도 2 참조).

실험을, 2명의 공여자로부터의 WT 및 CD38KO K-NK 세포(BC45 및 BC50)를 사용하여 수행하였다. 도 1에 도시된 바와 같이, 이사툭시맙의 존재 하에 CD38 KO K-NK 세포(F/V CD16 표현형을 갖는 BC50)를 사용한 경우 동족 살해 효과가 회피된다. 도 2에 도시된 바와 같이, 이사툭시맙의 존재 하에 CD38 KO K-NK 세포(V/V CD16 표현형을 갖는 BC45)를 사용한 경우 동족 살해 효과가 회피된다. 또한, SAR444245의 존재는 야생형 NK 세포의 존재 하에 LP-1 세포에 대한 이사툭시맙의 세포독성 활성을 향상시켰고, 이사툭시맙의 향상된 세포독성 활성은 CD38 KO K-NK 세포의 존재 하에 훨씬 더 향상되었다. CD38 KO K-NK 세포의 세포독성 활성은 시간이 지남에 따라 최대 90시간 지속되었다.

본원에서 기재된 각각의 구현예는, 명백하게 반대로 지시되지 않는 한 임의의 다른 구현예 또는 구현예들과 조합될 수 있다. 특히, 바람직하거나 유리한 것으로 나타낸 임의의 특징 또는 구현예는, 명백하게 반대로 지시되지 않는 한, 바람직하거나 유리한 것으로 나타낸 임의의 다른 특징 또는 특징들 또는 구현예 또는 구현예들과 조합될 수 있다.

본 출원에서 인용된 모든 참조문헌은 명시적으로 본원에 참조로 포함된다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims

다발성 골수종의 치료를 위한 항-CD38 항체의 용도로서,
항-CD38 항체는 개체에게 인터류킨-2 유사체(IL-2 유사체)와 조합으로 투여되고, 항-CD38 항체는 제1 28일 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 투여된 다음에, 적어도 하나의 추가 주기 동안 28일 주기의 제1일 및 제15일에 투여되고,
IL-2 유사체를 개체에게 투여할 때, IL-2 유사체는 2주마다 1회 또는 3주마다 1회 투여되는, 용도.
제1항에 있어서, 항-CD38 항체는 이사툭시맙이고, 정맥내로 10 mg/kg의 용량으로 투여되는, 용도.
제1항에 있어서, CD-38 항체는 이사툭시맙이고, 피하로 1400 mg의 용량으로 투여되는, 용도.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, IL-2 유사체는 비-천연 아미노산인 N6-((2-아지도에톡시)-카보닐)-L-리신(AzK)을 포함하고, AzK는 페길화되는, 용도.
제1항에 있어서, IL-2 유사체는 16 ug/kg, 24 ug/kg 또는 32 ug/kg의 용량으로 투여되는, 용도.
제1항 내지 제3항 또는 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항-CD38 항체는 적어도 11회의 주기 동안 28일 주기의 제1일 및 제15일에 투여된 다음에, 1회 이상의 추가 주기 동안 28일 주기의 제1일에 투여되는, 용도.
제1항 내지 제3항 또는 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 개체는 제1 주기의 치료를 받기 전에 다발성 골수종의 치료를 위한 1차 이상의 치료법을 제공받았고, 1차 이상의 선행 치료법은 항-CD38 의약 및 항-BCMA 의약을 포함하는, 용도.
다발성 골수종의 치료를 위한 항-CD38 항체의 용도로서,
항-CD38 항체는 개체에게 인터류킨-2 유사체(IL-2 유사체)와 조합으로 투여되고,
항-CD38 항체는 이사툭시맙이고, IL-2 유사체는 비-천연 아미노산인 N6-((2-아지도에톡시)-카보닐)-L-리신(AzK)을 포함하고, AzK는 페길화되고,
이사툭시맙은 제1 28일 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 투여된 다음에, 적어도 하나의 추가 주기 동안 28일 주기의 제1일 및 제15일에 투여되고,
이사툭시맙은 정맥내로 10 mg/kg의 용량으로 투여되거나 피하로 1400 mg의 용량으로 투여되고,
IL-2 유사체는 개체에게 2주마다 1회 또는 3주마다 1회, 16 ug/kg, 24 ug/kg 또는 32 ug/kg의 용량으로 투여되고,
개체는 제1 주기의 치료를 받기 전에 다발성 골수종의 치료를 위한 1차 이상의 치료법을 제공받았고, 1차 이상의 선행 치료법은 항-CD38 의약 및 항-BCMA 의약을 포함하는, 용도.
제1항 내지 제3항, 제5항 또는 제8항 중 어느 한 항에 있어서, CD38의 발현이 감소되거나 녹-아웃된(knocked-out) 자연 살해(NK) 세포(NK-CD38KO 세포)가 또한 개체에게 투여되는, 용도.
제9항에 있어서, NK 세포는 인간 샘플로부터 단리되는, 용도.
다발성 골수종을 갖는 인간 개체를 치료하는 방법으로서,
항-CD38 항체 및 인터류킨-2 유사체(IL-2 유사체)를 개체에게 투여하는 단계로서, 항-CD38 항체는 제1 28일 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 투여된 다음에, 적어도 하나의 추가 주기 동안 28일 주기의 제1일 및 제15일에 투여되는, 단계; 및
IL-2 유사체를 개체에게 투여하는 단계로서, IL-2 유사체는 2주마다 1회 또는 3주마다 1회 투여되는, 단계를 포함하는, 방법.
제11항에 있어서, 항-CD38 항체는 이사툭시맙이고, 정맥내로 10 mg/kg의 용량으로 투여되는, 방법.
제11항에 있어서, CD-38 항체는 이사툭시맙이고, 피하로 1400 mg의 용량으로 투여되는, 방법.
제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, IL-2 유사체는 비-천연 아미노산인 N6-((2-아지도에톡시)-카보닐)-L-리신(AzK)을 포함하고, AzK는 페길화되는, 방법.
제14항에 있어서, IL-2 유사체는 16 ug/kg, 24 ug/kg 또는 32 ug/kg의 용량으로 투여되는, 방법.
제11항 내지 제13항 또는 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 항-CD38 항체는 적어도 11회의 주기 동안 28일 주기의 제1일 및 제15일에 투여된 후에, 항-CD38 항체를 1회 이상의 추가 주기 동안 28일 주기의 제1일에 투여하는, 방법.
다발성 골수종을 갖는 인간 개체를 치료하는 방법으로서,
항-CD38 항체 및 인터류킨-2 유사체(IL-2 유사체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하고,
항-CD38 항체는 이사툭시맙이고, IL-2 유사체는 비-천연 아미노산인 N6-((2-아지도에톡시)-카보닐)-L-리신(AzK)을 포함하고, AzK는 페길화되고,
이사툭시맙은 제1 28일 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 투여된 다음에, 적어도 하나의 추가 주기 동안 28일 주기의 제1일 및 제15일에 투여되고,
이사툭시맙은 정맥내로 10 mg/kg의 용량으로 투여되거나 피하로 1400 mg의 용량으로 투여되고,
IL-2 유사체는 개체에게 2주마다 1회 또는 3주마다 1회, 16 ug/kg, 24 ug/kg 또는 32 ug/kg의 용량으로 투여되고,
개체는 제1 주기의 치료를 받기 전에 다발성 골수종의 치료를 위한 1차 이상의 치료법을 제공받았고, 1차 이상의 선행 치료법은 항-CD38 의약 및 항-BCMA 의약을 포함하는, 방법.
제11항 내지 제13항, 제15항 또는 제17항 중 어느 한 항에 있어서, CD38의 발현이 감소되거나 녹-아웃된 자연 살해(NK) 세포(NK-CD38KO 세포)가 또한 개체에게 투여되는, 방법.
제18항에 있어서, NK 세포는 인간 샘플로부터 단리되는, 방법.