KR800000076B1 - 폴리펩티드의 제조법 - Google Patents

Abstract

내용 없음.

Description

[발명의 명칭]

폴리펩티드의 제조법

[발명의 상세한 설명]

본 발명은 의약품으로서 유용한 신규 폴리펩티드의 제조법에 관한 것이다.

본 발명의 목적물은 다음식으로 표시된다.

상기 식에서,

R₁은 수소 또는 염기성 또는 중성 아미노산잔기,

R₂는 중성 아미 노산잔기,

R₃은 NH₂, Tyr-NH₂또는 1∼5개의 아미노산 잔기로 된 티로실펩티드 잔기 또는 티로실펩티드의 아미드 잔기를 나타낸다. 다만, 전술한 R₁이 수소인 경우는, R₂는 Pro를 나타낸다.

본 명세서 및 청구범위에 있어서, 아미노산, 펩티드 및 이들의 활성기와 보호기 및 활성화제, 보호기 도입화제는 생물학적 명명법으로 IUPAC-IUB 위원회에 의한 약호 또는 당해 분야에서 관용적으로 사용되고 있는 약호로 표시된다.

이와 같은 약호를 이하에 예시한다.

α-Abu : α-아미노부티르산

γ-Abu : γ-아미노부티르산

ε-Acap : ε-아미노카프론산

Ala : 알라닌

β-Ala : β-알라닌

Arg : 아르기닌

δ-Aval : δ-아미노발레르산

α,γ-Dab : a.r-디아미노부티르산

Gly : 글리신

His : 히스티딘

Leu : 로이신

Lys : 리신

Nle : 노르로이신

Phe : 페닐알라닌

Pro : 프롤린

Sar : 사르코신

Ser : 세린

Thr : 트레오닌

Tyr : 티로신

Val : 발린

Aoc : t-아밀옥시카르보닐

Bzl : 벤질에테르

D.CC : N,N'-디사이클로헥실카르보디이미드

HONB : N-하이드록시-5-노르보르넨-2, 3-디카르복시이미드

OBzl : 벤질에스태르

ODNP : 2, 4-디니트로페닐에스테르

OEt : 에틸에스테르

ONB : HONB 에스테르

Opcp : 클로로페닐에스테르

Osu : N-하이드록시숙신이미드에스테르

OtBu : t-부틸에스테르

Tos : 토실

Z : 벤질옥시카르보닐

본 명세서 및 특허청구의 범위의 기재에 있어서, 아미노산에 대해서 광학 활성체가 있는 경우에는, 특별히 명기하지 않는한 그의 아미노산은 모두 광학 활성체 및 라세미체 각각을 의미하는 것으로 한다.

구조식(Ⅰ)에 관해서, R₁이수소인 경우, 기 R₁-Arg는 다음과 같은 아르기닐기를 의미한다.

본 명세서 및 특허청구의 범위의 기재에 있어서, "아미노산 잔기"라는 용어는 펩티드 결합을 형성할 수 있는 기, 즉 아미노산의 아미노기 또는 이미노기의 수소 및 카르복실기의 수산기 중의 어느 하나 또는 양자가 없어진 기를 의미한다.

R₁로 표시되는 염기성 또는 중성 아미노산은 탄소수 2∼10개의 것이 바람직하다. 이와 같은 염기성 아미노산으로서는, 예를 들면 α-아미노산(예, α,-디아미노프로피온산, α,γ-디아미노부티르산, 아르기닌, 리신 또는 히스티딘)을 예시할 수 있다. R₁로 표시되는 중성 아미노산으로서는 예를 들면 α-중성 아미노산(예, 글리신, 알라닌, 세린, 트레오닌, α-아미노부티르산, 프롤릴, 로이신, 이소로이신, 노르로이신, 페닐알라닌 또는 티로신) 및 그외의 중성 아미노산(예, β-알라닌, γ-아미노부티르산, δ-아미노발레르산 또는 ε-아미노카프론산)을 예시할 수 있다. R₁로 표시되는 아미노산에 관하여, 광학 활성체가 있는 경우에는, 그의 아미노산은 모두 광학 활성체 및 라세미체 각각을 나타낸다. R₁에 상당하는 아미노산 중에서, β-알라닌이 소정의 용도에 바람직하다.

R₂로 표시되는 중성 아미노산은, 탄소수 2∼10개의 것이 바람직 한데, 예를 들면 글리신, 알라닌, β-알라닌, 사르코신, 세린, 프롤린, 발린, 로이신, 이소로이신, 페닐알라닌 또는 티로신을 예시할 수 있다. R₂에 상당하는 아미노산 중에서, 글리신 및 프롤린이 소정의 용도에 바람직하다.

R₂가 프롤린 잔기의 경우, 소정의 용도는 R₁이 수소일 때에도 달성된다.

R₃로 표시되는 티로실펩티드 또는 그의 아미드를 구성할 수 있는 각각의 아미노산은 탄소수 2-10개인 것이 바람직하며, 예를 면들 글리신, 알라닌, 세린, 트레오닌, 발린, 프롤린, 로이신, 이소로이신, 리신, 페닐알라닌 또는 티로신을 예시할 수 있다. 이들의 아미노산은 임의의 순서로 결합하여 1-5개의 아미노산 잔기로 된 티로실펩티드 또는 그의 아미드를 구성한다. 이하에 티로실펩티드를 예시한다. 이들의 아미드는 티로실펩티드 아미드로서 예시된다.

폴리펩티드(Ⅰ)을 구성할 수 있는 R₁이외의 잔기의 모든 아미노산에 관하여 광학활성체가 얻어지는 경우에는, 이들의 아미노산은 모두 광학 활성체 및 라세미체 각각을 의미하지만, L체가 저독성이기 때문에 바람직하다.

본 발명의 폴리펩티드(Ⅰ)은, R₁에 해당하는 아미노산 또는 R₁이 수소인 아르기닌, 또는 N-말단 아미노산으로서 아미노산잔기 R₁또는 R₁이 수소인 아르기 닐기를 갖는 폴리펩티드(Ⅰ)을 형성하는 펩티드 구성 성분의 일부를, 폴리펩티드(Ⅰ)의 잔여부분과 펩티드 축합시킴으로써 제조된다. 펩티드 축합시키는 2종의 원료는, 그의 아미노기, 카르복실기 중 소정의 축합반응에 관여하지 않는 기는 적당히 보호해도 좋고, 또 소정의 축합반응에 관여하는 기는 적당히 활성화시켜도 좋다. 따라서, 축합 생성물이 보호기를 갖는 경우에는 그 보호기를 적절히 제거시킨다.

본 발명의 축합반응은 펩티드 결합을 형성할 수 있는 통상법에 따라서 실시할 수 있다.

본 발명의 축합반응은 폴리펩티드(Ⅰ)의 임의의 위치에서 행할 수가 있다. R₂에 상당하는 3번째의 아미노산과 4번째의 페닐알라닌과의 사이에서 본 발명의 축합반응을 행하면 공업적으로 유리하게 폴리펩티드(Ⅰ)을 제조할 수 있다.

공지의 폴리펩티드와 동일하게 본 발명의 폴리펩티드(Ⅰ)은 이것을 구성할 수 있는 각각의 아미노산을 그의 아미노산 배열에 따라서 순차적으로 축합시킴으로써 제조된다. 통상, 그의 최종 축합 공정은, 2종의 구성 성분, 즉 펩티드와 말단 아미노산 또는 2종의 펩티드의 사이에서 행해진다. 이들 2종의 구성 성분은 본 발명의 폴리펩티드(Ⅰ)를 제조하는 원료이다. 이들의 원료 또는 최종 중간체는 그 자체공지의 펩티드 합성 수단에 의해 제조된다.

본 발명에 사용할 수 있는 원료중의 일예, 예를 들면 폴리펩티드(Ⅰ)의 N-말단 아미노산, 또는 그의 N-말단아미노산에 폴리펩티드(Ⅰ)을 구성하는 아미 노산의 각각이 그의 아미노산 배열에 따라서 순차적으로 결합한 것을 예시할 수 있다. 여기에 대응하는 다른 원료는 상기 원료를 제외한 폴리펩티드(Ⅰ)의 잔여 부분이다. 이와 같은 원료의 기본적 조합에는 다음표에 계재한다.

[표 1]

본 발명에 있어서 축합반응은 펩티드 결합형성을 위하여 사용할 수 있는 공지의 축합방법에 의해 실시될 수 있다. 이와 같은 축합방법으로서는, DCC/HONB법(벨기에 특히 제763.399호), 아지드법, 클로라이드법, 산무수물법, 혼합산 무수물법, DCC법 활성 에스테르법, 우드위어드(Woodward)시약 K를 사용하는 방법, 카르보디이미다졸법, 산화환원법 ["The peptides". Vol.1(1966), Sch

rder and Lubke, Academic press, New 4York, U.S.A.]을 들 수가 있다.

축합반응 전에, 공지 방법에 의해, 소정의 축합반응에 관여하지 않을 카르복실기 또는 아미노기를 보호해도 좋으며, 또는 소정의 축합반응에 관여할 카르복실기 또는(및) 아미노기를 활성화시켜도 좋다. 소정의 축합반응에 관여하지 않는 카르복실기는 금속염(예, 나트륨, 칼륨염) 또는 에스테르(예, 메틸, 에틸, 벤질, p-니트로벤질, t-부틸 또는 t-아밀 등의 에스테르)의 형으로 보호해도 좋다.

원료의 아미노기의 보호기로서는 공지의 펩티드 합성에 있어서, 아미노 보호기가 사용되는데, 예를들면 벤질옥시 카르보닐, t-부톡시카르보닐, t-아밀옥시카르보닐, 이소보르닐옥시카르보닐 등을 들 수가 있다. 이들의 보호기는 프롤린의 이미노기의 보호에도 사용할 수 있다. 히스티딘의 이미다졸 관능기는 공지의 보호기, 예를 들면 벤질, 토실, 2,4-디니트로페놀, t-부톡시카르보닐, 또는 카르보벤족시 등으로 보호해도 좋다. 세린, 티로신 또는 트레오닌의 수산기는 공지의보호기, 예를 들면 벤질, t-부틸 등의 에테르 형으로 보호해도 좋다. 아르기닌의 구아니디노기는 예를 들면 니트로, 토신, 카르보벤족시, 이소보르닐옥시카르보닐 또는 아다만틸옥시카르보닐기로 보호해도 좋다. 원료의 활성화된 카르복실기의 예로서, 대응하는 산무수물, 아지드, 활성 에스테르(예를들면, 펜타클로로페닐, 2,4,5-트리클로로페닐, 2,4-디니트로페닐, 시아노메틸알코올, p-니트로페놀, N-하이드록시-5-노르보넨 -2,3-디카르복시이미드, N-하이드록시숙신이미드 N-하이드록시프탈이미드 또는 N-하이드록시벤즈트리아졸 등의 알코올과의 에스테르)등을 들 수 있다. 원료의 활성화된 아미노기로서, 예를 들면 대응하는 인산아미드를 들수 있다.

2종의 원료 A 및 원료 B의 카르복실 및 아미노기의 상기와 같은 상태의 조합예를 다음 표에 게재한다

[표 2]

주 :^*의 경우, 반응계에 탈수제(예, 디사이클로헥실-카르보디이미드와 같은 카르보디이미드 시약)를 존재시키는 것이 바람직하다.

본 반응은 용메의 존재하에 행할 수 있다. 용메로서는, 펩티드 축합반응에 사용할 수 있는 것으로 알려진 것들로 부터 적당하게 선택될 수 있다. 예를 들면, 무수 또는 함수디메틸포름아미드, 디메틸술폭사이드, 피리딘, 클로로포름, 디옥산, 디클로로메탄, 테트라하이드로푸란 또는 이들의 적당한 혼합물 등을 들수 있다.

반응 온도는, 펩티드 결합 형성반응에 사용될 수 있는 것으로 알려져 있는 범위로부터 적당하게 선택되며, 통상 약 -20℃∼약 30℃의 범위에서 적당하게 선택된다. 또, 본 발명 화합물의 전구물질 : 보호 펩티드)은 고상 합성법에 의해서도 용이하게 제조할 수 있다.

본 축합반응 종료 후, 생성물이 보호기를 갖고 있는 경우, 이것은 통상법에 의해 이탈시킬 수 있다. 이러한 상법으로서는 예를 들면 팔라듐블랙, 팔라듐-탄소, 백금 등을 촉매로서 사용하는 접촉환원, 불화수소, 트리플루오로초산 등에 의한 가수분해, 액체암모니아 중에서의 금속 나트륨에 의한 환원 등을 사용할 수 있다.

이와 같이하여 제조된 폴리펩티드(Ⅰ)은 반응 종료 후 혼합물로부터 펩티드의 분리수단, 예를 들면, 추출, 분배컬럼크로마토그라피 등에 의해 회수할 수 있다.

폴리펩티드(Ⅰ)는 염 또는 금속 착화합물로서도 회수할 수 있다.

폴리펩티드(Ⅰ)의 염을 형성할 수 있는 산으로서는, 예를들면 염산, 취화수소산, 과염소산, 초산, 티오시안산, 황산, 인산 등의 무기산, 또는 예를 들면 의산, 초산, 프로피온산, 글리콜산, 젖산, 피루빈산, 옥살산, 말론산, 구연산, 호박산, 말레인산, 푸마르산, 안트라닐산, 신남산, 나프탈렌술폰산, 술파닐산등의 유기산 등을 들 수 있다.

폴리펩티드(Ⅰ)의 금속 착화합물을 형성할 수 있는 금속으로서는, 예를 들면 아연, 니켈, 코발트, 구리철 등을 들 수 있다. 이와 같은 금속 착화합물은 공지의 수단, 예를 들면 폴리펩티드(Ⅰ)을 상기 금속의 수산화물 또는 산화물과 pH 약 6∼8로 반응시킴으로써 제조될 수 있다.

본 발명의 폴리펩티드(Ⅰ)은 비구경 뿐만 아니라 경구 투여에 의해서도 혈중 및 뇨증의 고농도의 당(글루코오스)을 정상치까지 저하시키는 작용을 갖는다. 폴리펩티드(Ⅰ)은 혈중 또는 뇨중의 당량(糖量)이 정상치의 경우에는, 그 이하로 저하시키지 않는 예상 외의 특유한 작용을 가지며, 이 작용은 저혈당을 야기하는 인슐린에 비하여 현저히 우수한 성상이다. 폴리펩티드(Ⅰ)은 저독성으로 안전하게 투여 된다. 폴리펩티드(Ⅰ)은 지방대사를 촉진하는 작용도 갖는다. 전술한 바와 같은 특유의 작용을 가지므로, 폴리펩티드(Ⅰ)은 사람 혹은 그 외의 동물(예, 쥐 또는 새앙쥐)의 당대사부전증 혹은 지방대사부전증의 치료, 특히 당뇨병 또는 하이퍼 콜레스테린 혈증(hypercholestemia)의 치료에 부작용을 일으키지 않고 유효하게 투여된다. 폴리펩티드(Ⅰ)은 그 자체만으로 투여해도 좋으며, 또는 통상법으로 제조되는 제형(예, 정제, 펠릿트, 과립, 산제, 액제, 주사제)으로서 투여해도 좋다.

각 제형의 처방예는 다음에 열거한다.

주사제

산제

폴리펩티드(Ⅰ)의 1일 투여량은 병의 종류. 증상, 대상동물의 연령 등에 의해 변화되지만, 통상 약 체중 1kg당 50㎍∼약 100㎎의 범위로부터 적당히 선택된다.

폴리펩티드(Ⅰ)에 의한 당뇨병 치료 효과의 약리실험 인공당뇨병 새앙쥐(KKA^y즉 황색 KK 새앙쥐. 8주령, 스컷)를 1마리 씩 금속제 케이지에 넣고 뇨(urine)를 채취한다.

3 그룹의 새앙쥐에 식(β-Ala-L-Arg-Gly-L-Phe-L-Phe-L-Tyr-NH₂(화합물A)의 폴리펩티드 (Ⅰ)을 3종류의 양(1.10 및 100㎎/㎏/일)으로 경구 투여한다. 처리법은 표 3에 기재한 것과 같다. 대조군에는 생리식염수를 투여한다. 4일마다 혈당 및 뇨당을 글루코오스산화법[Huggett, A.St.G. and Nixon, D.A.,"Lamcet" Volume Ⅱ. 368∼370페이지(1957)]에 의해 측정했다.

그 결과를 표 3에 나타낸다. 대조군에 있어서는, 혈당 및 뇨당은 24시간 후에 대단히 높아진다. 이것과 대조적으로 폴리펩티드 투여군으로는 혈당 및 뇨당은 점차로 저하한다. 그리하여, 항당뇨병 효과에 있어서 약품 의존성이 관찰된다. 투여 후의 단계로, 혈당 및 뇨당치가 함께 3군의 처지군으로 증대하고 있지만 투여후에 있어서도 항당뇨병 효과의 지속성에 있어서 약품 의존성이 인지된다.

상기 발견으로부터, 폴리펩티드는 새앙쥐의 당뇨병을 치료할 수 있는 결론을 내릴 수 있다.

[표 3]

[실시예 1]

Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

a) Z-Arg(NO₂)-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

DMF (디메틸포름아미드) 50㎖에 Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂10.0g을 용해시키고 Pd 블랙을 촉매로 여하 10시간 동안접촉환원을 행하였다. 촉매를 여거하여 여액을 빙냉하고 Z-Arg(NO₂)-Pro-OH 7.37g과 HONB 3.53g을 첨가했다.

또한, DCC4.60g을 첨가한 다음에 이 혼합물을 16시간 동안 교반했다. 형성된 DC(디사이클로헥실)우레아를 여거하고 DMF를 감압하에서 유거했다. 잔사물에 초산에틸 200㎖를 가하여 생성되는 분말을 여과하여 수집하였다. 이 분말을 DMF-메타놀-물로부터 재침전시켜 정제했다. 수량 14.5g(95.6)

초산 30㎖에 Z-Arg(NO₂)-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂500㎎을 용해시키고 Pd-블랙을 촉매로 하여 20시간동안 촉매환원을 행한다.

촉매를 여거하여 여액을 감압하에서 건고시키고 잔사를 물 50㎖에 용해시켜서, 소량의 불용물을 여거한후 여액을 동결건조한다. 생성물을 물 5㎖에 용해시키고, 이 용액을 카르복시메틸-세파덱스의 컬럼(1.8×9㎝)에 사용하여 0.1M 초산암모늄 수용액(400㎖)과 1M 초산암모늄 수용액(400㎖)으로 경사용리법(gradient elution)을 행하였다. 250∼370㎖의 용출분류물을 모아 동결건조하여 백색우모상 물질 (whitef luffy product) 250㎎(52.3%)을 얻었다.

[실시예 2]

Gly-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

a) Z-Gly-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

초산 30㎖에 Z-Arg(NO₂)-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂800㎎을 용해시키고 Pd 블랙을 촉매로 하여 8시간 동안 접촉환원을 행한다. 촉매를 여거하고, 이 여액을 감압하에서 건고한다. 잔사를 물 ㎖에 용해시키고 동결 건조한다.

생성되는 분말을 DMF 10㎖에 용해시키고 여기에 p-톨루엔술폰산모노하이드레이트 147㎎을 가했다. 이 혼합물에 A-Gly-ONB 349㎎을 첨가한 뒤 10시간 동안 교반했다. DMF를 감압하에서 유거하고 초산에틸 50㎖를 첨가하였다. 생성되는 분말을 여과하여 수집했다. 수량 858㎎ (89.5%)

b) Gly-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

초산 30㎖에 Z-Gly-Argo-Phe-Tyr-NH₂의 p-톨루엔술포네이트 500㎎을 용해시키고 Pd 블랙을 촉매로 하여 5시간 동안 촉매환원을 행하였다. 이 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거하였다. 잔사를 물 20㎖에 용해시키고 이 용액을 암벌라이트(Amberlite) IRA 410 (초산형) (미국 톰 앤드하아즈회사의 강염기성 음이온 교환수지)의 컬럼으로 이온 교환크로마토그라피를 행했다. 용출물을 동결건조하여 생성되는 분말을 물 5㎖에 용해시켰다. 이 용액을 카르복시메틸셀룰로오즈의 컬럼(2.6×23㎝)에 통과시키고 0.005M∼0.2M 초산암모늄 수용액(각 700㎖)을 사용하여 경사법에 의해 용출을 행했다. 840∼970㎖의 획분을 모아서 동결건조했다. 수량 270㎎(63.6%),

[실시예 3]

γ-Abu-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

Z-Gly-ONB 대신에 Z-γ-Abu-ONB를 사용하여 실시예 2의 방법을 행하여 상기의 목적물 324㎎을 얻었다.

[실시예 4]

ε-Acap-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

a) Z-ε-Acap-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

DMF 10㎖에 빙냉하에 Z-ε-Acap-OH 250㎎을 용해시키고, 여기에 HONB186㎎ 및 DCC214㎎을 첨가했다. 이 혼합물을 16시간 동안 교반하고 형성된 DC-우레아를 여거했다. 이 여액을 실시예 2一a)에 기재한 것과 동일한 방법으로 제조된 H-Arg- Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 p-톨루엔술포네이트의 DMF 용액에 첨가했다. 이 혼합물을 12시간 동안 교반하고 DMF를 감압하에서 유거했다. 잔사에 초산에 틸 30㎖를 첨가하여 생성되는 분말을 여과수집하였다. 수량 810㎎(79.1%). 융점 (90∼92℃).

b) ε-Acap-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

a) 에서 제조한 Z-유도체 500㎎을 실시예 2-b)와 동일한 방법으로 처리하여 상기의 목적물 316㎎을 수득했다.

아미노산분석 : Arg,1.02; Pro,1.03Tyr,0.9;h.13; ε-Acap(측정불능) (펩티드함량 : 81.5%)

[실시예 5]

Lys-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

a) di-Z-Lys-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

Z-ε-Acap-OH 대신에 di-Z-Lys-OH 390㎎을 사용하고 실시예 4-a) 방법을 행하여 상기 목적물 932㎎을 수득했다. 융점 103~105℃

b) Lys-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

a)에서 제조한 di-Z-유도체 500㎎을 실시예 2-b)와 동일한 방법으로 처리하여 상기 목적물 336㎎을 수득했다.

아미노산 분석 : Lys, 1.02; Arg, 0.98; Pro, 1.00; Tyr, 0.94; Phe, 2.04 (펩티드 함량 : 91%)

[실시예 6]

α,γ-Cab-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

실시예 4 및 5의 방법과 정확히 동일하게 하여, 상기 목적물을 di-Z-α,γ-Dab-디사이클로헥실아민염 535㎎을 합성했다. 수량 325㎎.

아미노산 분석; α,γ-Dab, 1.00; Arg, 0.98; Pro,1.00; Tyr, 0.87; Phe, 1.96 (펩티드 함량 : 84.2%)

[실시예 7]

β-Ala-Arg-Pro-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

a) Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Pro-OMe의 제조.

Z-Arg(NO₂)-Pro-OMe 3.50g에 25% HBr-초산 35㎖를 첨가하고 이 혼합물을 실온에서 35분간진탕 시켰다. 이 혼합물에 에틸에테르 300㎖를 첨가하여 생성되는 침전물을 여과수집하여 에테르로 세척하여 건조시켰다.

이 분말을 DMF 20㎖에 용해시키고, 빙냉하에 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시켰다. 다음에 Z-Ala-ONB 2.9g을 첨가하여 이 혼합물을 16시간 동안 교반했다.

DMF를 감압하에서 유거하고 잔사를 초산에틸 300㎖에 용해시켰다. 이 용액을 4%탄산수소나트륨 수용액을 1회 100㎖씩 사용하여 3회 세척했다. 물로 세척한 후에 이 용액을 무수황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압하에서 유거하고 그 잔사에에 틸에테르를 첨가했다. 생성되는 분말을 여과수집했다. 수량 3.05g(74.3%(. 융점 62∼65℃

b) Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Pro-OH의 제조

아세톤 30㎖에 Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Pro-OMe 2.82g을 용해시키고, 빙냉하에, 1N 수산화나트륨 수용액 10.7㎖를 첨가했다. 이 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다. 이 혼합물을 1N 염산 11㎖로 중화시키고, 아세톤을 감합하에서 유거했다. 유상 잔사에 냉수 30㎖를 첨가하고 이 물을 경사법으로 제거했다. 잔사를 냉수로 1회 세척한 뒤 건조시켰다. 그 다음에 초산에틸-피리딘-초산-물(60 : 20 : 6 : 11)을 전개용매로 사용하여 실리카 겔(90g)의 컬럼으로 크로마토그라피했다. 목적물 중에 다량 함유된 획분을 모아 감압하에서 건조시켰다. 잔사를 에테르로 세척한 뒤 여과 수집했다. 수량 2.62g, 융점 65∼67℃

c) Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조 DMF 15㎖에 Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂1.50g을 용해시키고 Pd 블랙을 촉매로 하여 4시간 동안 접촉 환원을 행하였다. 촉매를 여거하여 여액을 빙냉시키고, Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Pro-OH 1.21g, HONB 0.53g 및 DCC 0.61g을 첨가했다. 이 혼합물을 18시간 동안 교반했다. 형성된 DC-우레아를 여거하고 DMF를 감압하에서 증류 증발시켰다. 잔사에 물 50㎖를 첨가하여 생성되는 분말을 여과 수집한 다음 건조시켰다. 이 분말을 DMF-초산에틸로 재침전시켰다. 수량 1.99g(80.9%), 융점 135∼138℃,

d) β-Ala-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

빙초산 40㎖에 Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂1.50g을 용해시키고 Pd 블랙을 촉매로 하여 8시간 동안 접촉환원을 행하였다. 촉매를 여과하여 제거하고 용매를 감압유거하였다. 잔사를 물 50㎖에 용해시키고 소량의 불용물을 여거한 뒤 이 여액을 동결건조시켰다. 생성물을 물 20㎖에 더 용해시키고 카르복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(3.0×28㎝)에 통과시킨 뒤 이것을 경사법에 의하여 0.005M 및 0.2M 초산암모늄 수용액(각 1.5ℓ)으로 용출시켰다. 1,490∼1,840㎖의 용출 분획을 모아서 동결건조시켰다.

상기 c) 및 d)와 동일한 방법에 의하여, 다음과 같은 반응식에 따라 동일한 목적물을 제조할 수 있다.

[실시예 8]

β-Ala-Arg-Pro-Phe-Phe-NH₂의 제조

실시예 7-c)의 방법에 있이서, Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂대신에 Z-Phe-Phe-NH₂를 사용하고, 실시예 7-c)내지 d)에서 설명한 바와 동일한 방법을 행하여 백색 우모상 물질로서 상기 목적물 1.24g을 얻었다.

[실시예 9]

β-Ala-Arg-β-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

a) Z-β-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

DMF 40㎖에 Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂2.00g을 용해시키고 Pd 블랙을 촉매로 하여 5시간 동안 접촉환원을 행하였다. 이 촉매를 여거하고 여액에 Z-β-Ala-ONB 1.39g을 첨가했다. 이 혼합물을 9시간 동안 교반하고 DMF를 감압유거했다. 잔사에 물 50㎖를 첨가하고 생성되는 분말을 여과하여 수집한 다음 건조시켰다. 이 생성물을 DMF-초산에틸로 재침전시켰다. 수량 2.02g(88.0%), 융점 232℃,

b) Z-Arg(NO₂)-β-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

DMF 30㎖에 Z-β-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂1.0g을 용해시키고 Pd 블랙을 촉매로 사용하여 접촉 환원을 6시간 동안 행했다. 촉매를 여거하고 여액에 테트라하이드라이드로푸란 중에 용해시킨 Z-Arg(NO₂)-ODNP의 용액(DCC방법에 의해 테트라히드로푸란 10㎖중의 Z-Arg(NO₂)-OH 0.52g및 2,4-디니트로페놀 0.30g으로부터 제조한 디니트로페닐에스테르). 이 혼합물을 13시간 동안 교반하고 용매를 유거했다. 잔사에 물 50㎖를 첨가하여 생성되는 분말을 여과수집하여 건조했다. 수량 1.01g(74.9%), 융점 192∼194℃,

c) Z-β-Ala-Arg(NO₂)-β-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

Z-Arg(NO₂)-β-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂700㎎에 아니졸 0.2㎖를 부가한 다음에 25% HBr-초산 7㎖를 첨가했다. 이 혼합물을 실온에서 40분간 진탕시켰다. 이 반응 혼합물에 에틸에테르 100㎖를 첨가하여 생성되는 침전물을 여과 수집하고 에틸에테르로 세척했다. 양호하게 건조시킨 후 이 침전물을 DMF 100㎖에 용해시키고, 빙냉하에 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시켰다. Z-β-Ala-ONB 336㎎을 첨가한 다음에, 이 용액을 18시간 동안 교반했다. DMF를 감압하에서 유거하고 잔사에 물 50㎖를 첨가했다. 생성되는 침전을 여과 수집하여, 건조시킨 다음 DMF와 초산에틸로 재침전시켰다. 수량 560㎎(77%), 융점 200∼202℃(분해),

d) β-Ala-Arg-β-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

빙초산 30㎖에 Z-β-Ala-Arg(NO₂)-β-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂400㎎을 용해시키고 Pb 블랙을 촉매로 하여 8시간 동안 촉매환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에 유거했다. 잔사를 물 5㎖에 용해시키고 이 용액을 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(2.6×22㎝)에 통과시켰다. 0.005M 및 0.2M 초산암모늄 수용액(각 700㎖)을 사용하여 경사용출시켰다. 720∼870㎖의 분획을 모아서 동결건조하여 백색우모상 물질로서 목적물 270㎎(69.1%)을 얻었다.

[실시예 10]

Ala-Arg-β-Ala-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

실시예 9-c)의 방법에 있어서, Z-β-Ala-ONB를 Z-Ala-ONB 340㎎으로 대체하고, 실시예 9-c) 내지 d)에 기재한 것과 동일한 방법을 행하여 백색우모상 물질로서 상기의 목적물 297㎎을 얻었다.

[실시예 11]

β-Ala-Arg-Sar-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

a) Z-Sar-Phe-Phe-Pyr-NH₂의 제조

DMF 30㎖에 Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂2.02g을 용해시키고 Pd 블랙을 촉매로 하여 5시간 동안 접촉 환원을 행했다. 촉매를 여거하고 여액을 냉각시켰다. 한편, Z-Sar-OH 810㎎을 테트라하이드로푸란 10㎖에 용해시키고, 그 다음에 HONB 0.71g을 첨가했다. 이 혼합물을 0℃로 냉각하고, DCC 0.82g을 첨가했다. 이 혼합물을 3시간 동안 교반했다. 형성된 DC-우레아를 여거하고 이 여액을 상기 DMF 용액에 첨가했다. 이 혼합물을 20분간 교반한 다음에 용매를 감압하에서 유거하고, 그 잔사에 물 50㎖를 첨가했다. 생성되는 분말을 여과수집하고 DMF-초산에틸로 재침전시켰다. 수량 1.90g(83.8%), 융점 246∼248℃(분해 ),

b) Z-Arg(NO₂)-Sar-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조.

DMF 10㎖에 Z-Sar-Phe-Phe-Tyr-NH₂1.0g을 용해시키고, Pd 블랙을 촉매로 하여 7시간 동안 접촉 환원을 행했다. 촉매를 여거하고 여액을 냉각했다.

한편, Z-Arg(NO₂)-OH0.52g을 테트라하이드로푸란 10㎖에 용해시키고, 빙냉하에 2,4-디니트로페놀 0.3g 및 DCC-0.33g을 첨가했다. 이 혼합물을 3시간동안 교반하여 형성된 DC-우레아를 여거하고, 이 여액을 상기의 DMF용액에 첨가했다. 이 혼합물을 20시간 교반하고 용매를 감압하에서 유거했다. 잔사에 물 50㎖를 첨가하고 생성되는 분말을 여과 수집했다. 건조 후에, 분말을 DMF-초산에틸-에틸에테르로 재침전시켰다. 수량 1.04g(77.2%), 융점 96-98℃.

c) Z-β-Ala-Arg-(NO₂)-Sar-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

25% HBr-초산 7㎖에 Z-Arg(NO₂)-Sar-Phe-Phe-Tyr-NH₂700㎎과 아니졸 0.2㎖를 용해시키고 이 용액을 실온에서 40분간 교반했다. 이 반응혼합물에 에틸에테르 100㎖를 첨가하여 생성되는 침전물을 여과수집한 다음, 에테르로 세척하고 수산화나트륨 펠릿트로 2시간 동안 건조시켰다.

건조된 침전물을 DMF 10㎖에 용해시키고, 빙냉하에 이 용액을, 트리에틸아민으로 중화시켰다. Z-β-Ala-ONB 335㎎을 첨가한 다음에, 이 용액을 20분간 교반했다. DMF를 감압하에서 유거하고 물 50㎖를 첨가했다. 생성되는 분말을 여과수집하여 건조시킨 다음, DMF-초산에틸로 재침전시켰다. 수량 500㎎(76.5%), 융점 135∼138℃.

d) β-Ala-Arg-Sar-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

초산 30㎖에 Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Sar-Phe-Pre-Tyr-NH₂450㎎을 용해시키고 Pd블랙을 촉매로 사용하여 8시간동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고, 여액을 감압하에서 견고시켰다. 잔사를 물 5㎖에 용해시키고 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(2.6×22㎝)으로 크로마토그라피했다. 0.005M 및 0.2M 초산암모늄수용액(각 700㎖)으로 경사 용출시킨 다음 770-880㎖의 용출분획을 모아서 동결 건조시켜 백색 우모상 물질인 목적물 309㎎(70.4%)을 얻었다.

[실시예 12]

Leu-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

a) Z-Leu-Arg(NO₂)-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

DMF20㎖이 Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂700㎎을 용해시키고 Pd블랙을 촉매로 하여 6시간동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 여액을 냉각했다. 이 여액에 Z-Leu- Arg(NO₂)-Pro-OH 648㎎을 첨가한 다음, HONB247㎎과 DCC285㎎을 첨가했다. 이 혼합물을 20시간동안 교반하여 형성된 DC-우레아를 여거하고, DMF를 감압하에서 유거했다. 잔사에 물 50㎖를 첨가하고 생성되는 분말을 여과수집하여 건조한 다음, DMF-초산에틸-에테르로 재침전시켰다. 수량 1.05g(86.5%), 융점 101∼111℃.

b) Leu-Arg-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

초산 20㎖에 Z-Leu-Arg(NO₂)-Pro-Phe-Phe-Tyr-NH₂500㎎을 용해시키고, Pd블랙을 촉매로하여 10시간동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하여 이 여액을 감압하에서 건고했다. 잔사를 물 5㎖에 용해시키고 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(2.6×20㎝)으로 크로마토그라피했다. 0.005M 및 0.2M 초산암모늄수용액(각 700㎖)으로 경사용출을 행한 다음 700-790㎖의 용출분획을 모아 동결건조하여 백색 우모상 물질인 목적물 300㎎(63.6%)을 얻었다.

[실시예 13]

β-Ala-Arg-Phe-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

a) Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Phe-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-수지의 제조

고상펩티드합성장치(시마주 APS-800, 일본 시마주세이사꾸쇼제)의 반응조에 BOC-Tyr(Bzl)-수지(Tyr함량, 2.18mM) 4.33g을 넣고, 디클로로메탄으로 팽윤시킨 후 메리피일드(Merrifield)법[J.A.C.S.86,304(1964)참조]에 따른 DCC법에 의하여 BOC-Phe-OH, BOC-Phe, OH, BOC-Phe-OH, BOC-Arg(NO₂) 및 Z-β-Ala-OH,를 순서에 따라 도입했다. 모든 반응의 종료 후, 수지를 디클로로메탄, DMF 에탄올, 빙초산 및 메타놀로 세척하여 건조시켰다. 상기의 방법으로 펩티드수지 6.55g을 얻었다.

b) Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Phe-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-NH₂의 제조

17% 암모니아-메타놀 50㎖에 상기의 a)에서 얻은 수지 6.04g을 현탁시키고, 이 현탁액을 실온에서 48시간동안 교반했다. 수지를 여거하고 여액을 감압하에서 건고시켰다. 잔사에 에테르를 첨가하여 생성되는 분말을 여과 수집한 뒤 건조시켰다. 수량 2.43g.

c) β-Ala-Arg-Phe-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

빙초산 30㎖에 상기 b)에서 얻은 보호 펩티드-아미드조품 509㎎을 용해시키고 Pd블랙을 촉매로 사용하여 10시간동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 여액을 감압하에서 건고시켰다. 잔사를 물 5㎖에 용해시키고, 이 용액을 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(2.6×24.5㎝)에 통과시켰다. 0.005M 및 0.2M초산암모늄 수용액(각 800㎖)으로 경사용출을 행하고, 1,180∼1,545㎖의 용출분획을 모아 동결 건조시켰다. 수량 237㎎(64%).

[실시예 14]

β-Ala-Arg-Leu-Phe-Phe-Tyr-Gly-NH₂의 제조

a) Z-β-Ala-Arg(Tos)-Leu-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-Gly-수지의 제조

고상 펩티드 합성장치(시마주 APS-800)의 반응조에 BOC-Gly-수지(1.7mM상당의 Gly함유) 4.0g을 넣은 다음에 이것을 디클로로메탄으로 20시간동안 팽윤시켰다. 이 반응조에 BOC-Phe-OH, BOC-Phe-OH, BOC-Leu-OH, Aoc-Arg(Tos)-OH 및 Z-β-Ala-OH를 순서에 따라 도입하고, 축합제로서 DCC와 BOC탈리제로서 트리플루오로초산-디클로로메탄(1 : 1)을 도입했다. 모든 반응의 종료 후, 이 수지를 디클로로메탄, DMF, 메타놀, 빙초산 및 메타놀로 세척한 다음 건조시켰다. 수량 5.09g.

b) Z-β-Ala-Arg(Tos)-Leu-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-Gly-NH₂의 제조

17% 암모니아-메타놀 50㎖에 상기 a)에서 제조한 수지 4.4g을 현탁시키고, 용기를 견고하게 밀폐한후에, 이 현탁액을 실온에서 48시간동안 교반했다.

수지를 여거하고 DMF로 세척했다. 이 여액을 혼화시켜 감압하에서 건고했다. 잔류오일에 에테르를 첨가하고 생성되는 분말을 여과 수집했다. 수량 950㎎.

c) β-Ala-Arg-Leu-Phe-Phe-Tyr-Gly-NH₂의 제조

상기 b(에서 제조한 보호 펩티드-아미드 조품 500㎎에 아니졸 0.5㎖를 첨가한 다음에, 이 혼합물을 불화수소 10㎖에 첨가했다. 이 혼합물을 0℃에서 60분가 교반하고 불화수소를 감압하에서 유거했다. 잔사를 물 50㎖에 용해시키고 이 용액을 에테르 20㎖로 2회 세척하고, 암벌라이트 IRA-410(초산형)의 컬럼(1×10cm)에 유입시킨 다음 동결 건조했다. 생성물을 물 20㎖에 용해시키고 이 용액을 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(2.6×25㎝)에 통과시켰다. 0.005M 및 0.2M 초산 암모늄 수용액(각 800㎖)을 사용하여 경사용출을 행하여 1,200∼1,530㎖의 용출분획을 모아서 동결 건조했다. 이 방법으로 백색 우모상 물질 167㎎을 얻었다.

[실시예 15]

β-Ala-Arg-Ser-Phe-Phe-Tyr-Gly-NH₂의 제조

a) Z-β-Ala-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-Gly-수지

고상 펩티드 합성장치(모델 APS-800, 일본 시마주 세이사꾸쇼제) 의반응조에 BOC-Gly-수지(2.17mM의 Gly함유) 4.02g을 유입하고, 메리피일드법에 의하여 BOC-Tyr(Bzl)-OH, BOC-Phe-OH, BOC-Phe-OH, BOC-Ser(Bzl)-OH, Aoc-Arg(Tos)-OH 및 Z-β-Ala-OH를 순서에 따라 도입했다. 모든 반응의 종료 후, 이 수지를 디클로로메탄, 메타놀, DMF, 빙초산 및 메타놀로 세척한 다음에 건조시켰다. 수량 6.4g.

b) Z-β-Ala-Arg(Tos)-Ser(Bzl)-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-Gly-NH₂의 제조

17% 암모니아-메타놀 50ml에 상기 a)에서 제조한 수지 5.9g을 현탁시키고, 이 현탁액을 실온에서 48시간동안 교반했다. 수지를 여거하고 DMF로 세척했다. 세척물을 여액과 혼화하고, 이 혼화시킨 용액을 감압 건고시켰다. 잔사에 에테르를 첨가하여 생성되는 분말을 여과 수집했다. 수량 2.02g.

c) β-Ala-Arg-Ser-Phe-Phe-Tyr-Gly-NH₂의 제조

무수 불화수소 10㎖에 상기 b)에서 제조한 보호펩티드-아미드 조품 1.0g과 아니졸 1㎖를 용해시키고, 이 용액을 0℃에서 60분간 교반했다. 불화수소를 감압하에서 유거하여 잔사를 물 20㎖에 용해시켰다. 이 용액을 에테르 10㎖로 2회 세척하고 암벌라이트 IRA-410의 컬럼(1.0×15㎝)에 유입시킨 다음 동결 건조시켰다. 생성물을 물 10㎖에 용해시킨 용액을 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(2.5×25㎝)에 통과시켰다, 0.005M 및 0.2M 초산암모늄 수용액(각 800㎖)으로 경사용출을 행하고 800~950㎖의 용출분류물을 모아 동결 건조했다. 이 생성물을 암벌라이트 XAD-2(미국, 톰 앤드 하아즈회사제, 폴리스티렌수지)의 컬럼(2×10㎝)을 통과시켜 동결 건조했다. 이 방법으로 백색 우모상 물질인 상기 표제화합물 55㎎을 얻었다.

[실시예 16]

β-Ala-Arg-Pro-Phe-Phe-Thr-Thr-Pro-Lys-Ala-OH의 제조

메타놀 30㎖에 Z-Phe-Phe-Tyr-Tyr-Pro-Lys(BOC)-Ala-O^tBU1.16g을 용해시키고 Pd 블랙을 촉매로 하여 4시간동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 여액을 감압하에서 건고했다. 잔사를 DMF15㎖에 용해시키고, 이 용액에 Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Pro-OH492㎎과 HONB200㎎을 가하고, 냉각하에 DCC250㎎을 첨가한 다음 이 혼합물을 18시간동안 교반했다.

불용물을 여거하고 DMF를 감압하에서 유거했다. 잔사에 초산에틸을 첨가하고 생성되는 분말을 건조시키고 트리플루오로초산 10㎖에 용해시켰다. 이 용액을 40분간 방치하고, 트리플루오로초산을 감압하에서 유거하고, 잔사를 빙초산 30㎖ 용해시켰다. Pd블랙을 촉매로 사용하여 16시간동안 접촉환원을 행했다.

촉매를 여거하고 여액을 감압하에서 건고시킨 다음 물 10㎖에 용해시켰다. 암벌라이트 IRA-410으로 이온 교환을 행한 후에, 소량의 불용물을 여거하고, 이 여액을 카아복시메틸-셀룰로오즈(2.2×30㎝)컬럼에 통과시켰다. 0.005M 및 0.2M 초산암모늄 수용액(각 800㎖)으로 경사용출을 행하여, 820∼1,180㎖의 용출분획을 모아서 동결 건조했다. 이 방법으로 백색 우모상 물질 670㎎을 얻었다.

아미노산분석 : Lys, 1.02; Arg, 0.98; Thr, 0.96; Pro, 2.04; Ala, 1.00; Tyr, 0.87; Phe, 2.02; β-Ala, 1.05(펩티드 함량 : 74%)

[실시예 17]

β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Leu-OH의 제조

a) Z-Phe-Phe-Tyr-OEt의 제조

에타놀 30㎖에 Z-Phe-Tyr-OEt 3.42g을 용해시키고 Pd블랙을 촉매로 사용하여 2시간동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거시켰다. 그 잔사를 DMF15㎖에 용해시키고, Z-Phe-OSus2.77g을 첨가했다. 이 혼합물을 10시간동안 교반했다. 이 반응혼합물에 물 80㎖를 첨가하여 생성되는 결정을 여과수집하고 에타놀-초산에틸-에틸에테르로 재침전시켰다. 이 방법으로 융점 185∼186℃의 침상물질 3.72g(83.4%)을 얻었다.

b) Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-OEt의 제조

에타놀 50㎖에 Z-Phe-Phe-Tyr-OEt 2.0g을 현탁시키고, Pd블랙을 촉매로 사용하여 1.5시간동안 촉매환원을 행했다. 촉매를 여거하고, 용매를 감압하에서 유거했다. 그 잔사를 DMF20㎖에 용해시켰다. 이 용액에 빙냉하에 Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-OH 1.56g, HONB 0.7g 및 DCC 0.8g을 첨가하고 그 혼합물을 12시간동안 교반했다.

형성된 우레아 유도체를 여거하고 DMF를 감압하에서 유거했다. 그 잔사에 물 60㎖를 첨가하여 생성되는 분말을 여과로 수집한 다음 건조시키고, DMF-초산에틸로 재침전시켰다. 수량 2.58g(82%), 융점 83∼85℃

b) Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-OH의 제조

아세톤 30㎖에 Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-OEt 2.00g을 현탁시키고, 빙냉하에, 1N수산화나트륨 수용액 6.3㎖을 첨가했다. 그 다음에 실온에서, 이 혼합물을 1시간동안 교반했다. 1N염산 3㎖를 첨가한 다음에, 아세톤을 감압하에서 유거했다. 소량의 불용물을 여거한 다음 1N염산 3.8㎖를 첨가했다. 생성되는 침전물을 여과하여 수집하고 냉수로 양호하게 세척한 다음 건조시켰다. 수량 1.96g(98%), 융점70∼73℃,

d) Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-Leu-OBzl의 제조

DMF 5㎖에 H-Leu-OBzl-P-톨루엔술포네이트 275㎎을 용해시키고 이 용액을 10% N-에틸모르폴린-DMF 0.9㎖로 중화시켰다. -10℃로 냉각하여 Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-OH 670㎎, HONB 251㎎ 및 DCC 289㎎을 첨가했다. 이 혼합물을 12시간동안 교반하여 형성된 DC우레아를 여거했다. DMF를 감압하에서 유거하고 그 잔사에 물 30㎖를 첨가했다. 생성되는 침전물을 여과 수집하고 뜨거운 메타놀로 세척한 다음 건조시켰다. 수량 703㎎(87.9%), 융점 178∼181℃,

e) β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Leu-OH의 제조

초산 30㎖에 Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-Leu-OBzl 500㎎을 용해시키고 Pd블랙을 촉매로 사용하여 8시간동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거시켰다. 그잔사를 물 5㎖에 용해시키고 이 용액을 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(2.6×18㎝)에 통과시켰다. 0.005M 초산암모늄 수용액(700㎖)과 0.2M 초산암모늄 수용액(700㎖)을 사용하여 선형구배 경사법(linear gradient method)으로 용출을 행하여 상기의 화합물을 370∼720㎖의 분획으로 용출시켰다. 이 분획을 모아서 동결 건조했다. 수량 277㎎(64.2%).

[실시예 18]

β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Ala-NH₂의 제조

H-Leu-OBzl-P-톨루엔술포네이트 대신에 H-Ala-NH₂염산염을 사용하여 실시예 17-d) 및-e)에 기재한 방법을 반복하여, β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Ala-NH₂·2 초산염 (수량 216㎎)을 얻었다.

아미노산 분석 : Arg, 1.01; Gly, 1.00; Ala, 1.02; Phe, 2.00; Tyr, 0.89, β-Ala, 1.12(펩티드 함량 : 82.4%).

[실시예 19]

β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-OH의 제조

a) Z-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-O^tBu의 제조

메타놀 30㎖에 Z-Thr-Pro-O^tBu 1.80g을 용해시키고 Pd블랙을 촉매로 하여 5시간동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거했다. 잔사를 DMF 20㎖에 용해시키고, 이 용액을 -10℃로 냉각한 후에, Z-Phe-Phe-Tyr-OH 2.70g, HONB 1.59g 및 DCC 1.37g을 첨가했다. 이 혼합물을 18시간동안 교반하여 형성된 우레아 유도체를 여거하고 물100㎖를 첨가했다. 생성되는 침전물을 여과수집하여 건조시키고 초산에틸 100㎖에 용해시켰다. 이 용액을 물 50㎖로 2회 세척하고 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 유거한 다음에 초산에틸을 상기 간사에 첨가했다. 생성되는 분말을 여과 수집한 다음 건조시켰다. 수량 2.51g(89.8%), 융점 137∼139℃

b) Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-O^tBu의 제조

메타놀 20㎖에 Z-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-O^tBu 1.50g을 용해시키고 Pd블랙을 촉매로 사용하여 수소기류하에서 4시간동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거시켰다.

잔사를 DMF 10㎖에 용해시키는 한편, 이 용액에 빙냉하에 Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-OH 0.87g, HONB, 0.47g 및 DCC 0.54g을 첨가했다. 이 혼합물을 16시간동안 교반했다. 형성된 DC-우레아를 여거하고 여액에 물 50㎖를 첨가한 다음 겔을 분리시켰다. 침전물을 여과 수집하여 건조시키고, DMF-초산에틸로 재침전시켰다. 이 침전물을 여과 수집한 다음 에타놀로 재침전시켰다. 수량1.04g(67.4%), 융점153∼156℃

c) β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-OH의 제조

Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-O^tBu 900㎎에 아니졸 0.9㎖를 첨가한 다음, 무수 불화수소 10㎖를 첨가했다. 이 혼합물을 -4℃에서 30분간 교반했다. 불화수소를 감압하에서 유거하고, 그 잔사에 물 30㎖를 첨가했다.

이 용액을 에틸에테르 30㎖로 추출하고 수용액층을 암벌라이트 IRA-410(초산형)의 컬럼(1.0×10.0㎝)에 통과시킨 다음 이것을 물로 세척하고 세척액을 유출액과 합하여 이것을 동결건조했다. 이 제품을 물10㎖에 용해시키고, 이 용액을 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(2.2×21㎝)의 컬럼에 통과시켰다. 0.005M 초산암모늄 수용액 (700㎖)과 0.3M 초산암모늄 수용액 (700㎖)으로 경사용출을 행하여 235∼385㎖의 용출분획을 모아 동결건조했다. 수량 476㎎(57.0%)

[실시예 20]

ε-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-OH의 제조

a) Z-ε-Acap-Arg(NO₂)-Gly-OEt의 제조

Z-Arg(NO₂)-Gly-OEt 24.1g에 25% HBr-초산 12㎖를 첨가하고, 이 혼합물을 실온에서 40분간 진탕시켰다. 이 용액에 에틸에테르를 첨가하여 생성되는 침전물을 여과 수집한 다음 수산화나트륨으로 건조시켰다.

한편, Z-ε-Acap-OH 1.33g 및 HONB 0.99g을 테트라하이드로푸란 5㎖에 용해시키고, 빙냉하에 DCC 1.14g을 첨가했다. 이 혼합물을 4시간동안 교반하여 형성된 디사이클로헥실우레아를 여거했다. 상기의 아민성분을 DMF 10㎖에 용해시키고, 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시킨 후에, 상기 활성 에스테르용액을 첨가했다. 이 혼합물을 철야 교반했다. 용매를 감압하에서 유거하고 잔사를 초산에틸 50㎖에 용해시켰다. 이 용액을 물로 세척한 다음에 탄산수소나트륨의 포화수용액(50㎖×2)으로 세척했다. 물로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압하에서 유거하고 잔사에 석유 벤진을 첨가했다. 생성되는 결정을 물-에타놀-초산에틸로부터 재결정시켰다. 수량 2.1g(76%), 융점 85∼87℃,

b) Z-ε-Acap-Arg(NO₂)-Gly-OH의 제조

아세톤 10㎖에 Z-ε-Acap-Arg(NO₂)-Gly-OEt 1.8g을 용해시키고, 빙냉한 후에, 2N산화나트륨 2.9㎖을 가했다. 실온에서, 이 혼합물을 2시간동안 교반하고, 이 혼합물에 1N염산 2.5㎖를 가한 다음 아세톤을 유거했다. 잔사에 물 10㎖를 가하고, 불용물을 여거한 후, 이 용액을 1N염산을 사용하여 산성으로 변화시켰다. 생성되는 결정을 여과하여 수집했다. 수량 1.59g(93%), 융점 97.5∼99℃.

c) ε-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-OH의 제조

실시예 19-b)의 방법에 있어서, Z-ε-Ala-Arg(NO₂)-Gly-OH를 Z-ε-Acap-Arg(NO₂)-Gly-OH로 대체하여, 실시예 19-b) 및 c)에 기재한 것과 동일한 방법으로 반복하여 표제의 목적물 428㎎을 얻었다.

[실시예 21]

Lys-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Phr-Pro-OH의 제조

a) di-Z-Lys-Arg(NO₂)-Gly-OEt의 제조

di-Z-Lys-OH 2.07g을 사용하여, 실시예 20-a)와 동일한 방법으로 하여 상기의 목적물을 겔로서 수득했다. 이 겔 물질을 물-에타놀-초산에틸로 재침전시켰다. 수량 2.57g(73%), 융점 161∼162℃.

b) di-Z-Lys-Arg(NO₂)-Gly-OH의 제조

아세톤 10㎖에 di-Z-Lys-Arg(NO₂)-Gly-OEt 2.0g을 용해시키고, 빙냉하에 2N수산화나트륨 2.1㎖를 첨가했다. 그 다음에, 실온에서 이 혼합물을 2시간동안 교반했다. 1N염산 1.4㎖를 첨가한 후에 아세톤을 감압하에서 유거하고 잔사에 물 10㎖를 첨가했다.

불용물을 여거하고, 이 여액을 1N염산으로 산성으로

했다. 생성되는 겔을 여과하여 수집했다. 수량 1.78g (93%), 융점 131∼132.5℃,

c) Lys-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-OH의 제조

Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-OH 대신에 di-Z-Lys-Arg(NO₂)-Gly-OH를 사용하여 실시예 19-b)의 방법을 반복하여 상기의 목적물 452㎎을 얻었다.

[실시예 22]

β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys-Ala-OH의 제조

a) Z-Lys(BOC)-Ala-O^tBu의 제조

메타놀 300㎖에 Z-Ala-O^tBu 14g을 용해시키고, Pd 블랙을 촉매로 사용하여 2시간 동안 접촉 환원을 행한다. 촉매를 여거하고, 메타놀을 유거했다.

잔사를 테트라하이드로푸탄 50㎖에 용해시켰다. 한편. Z-Lys(BOC)-OH, 디사이클로헥실아민염 28.1g을 초산에틸 300㎖에 현탁시키고, 0.5N 황산 200㎖로 3회 세척했다. 물로 세척한 후에 이것을 무수 황산나트륨으로 건조시켰다.

초산에틸을 약 150㎖에 용적으로 부분적으로 유거하였다. 잔사를 상기 테트라하이드로푸탄 용액에 첨가한 다음에 HONB 10g을 첨가했다. 빙냉하에 DCC 11.3g을 첨가하고, 이 혼합물을 16시간 동안 교반했다. 형성된 DC-우레아를 여거하고, 여액을 건고시켰다. 잔사를 초산에틸 500㎖에 용해시키고, 0.5N 황산과 4% 탄산수소나트륨 수용액으로 세척했다. 물로 양호하게 세척한 후, 초산에틸층을 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압하에서 유거하고 석유 엔진을 첨가하여 결정을 분리했다. 이들 결정을 여과수집하고, 초산에틸-석유 벤진으로 재침전시켰다. 수량 21.9g (87%). 융점 55∼57℃.

b) Z-Pro-Lys(BOC)-Ala-O^tBu의 제조

메타놀 40mI에 Z-Lys(BOC)-Ala-O^tBu 2.5g을 용해시키고 Pd 블랙을 촉매로 사용하여 2시간 동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고, 여액을 감압하에서 건고했다. 잔사를 초산에틸 20㎖에 용해시키고, 이 용액에 Z-Pro-ONB 2.45g을 첨가한 다음에, 이 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반했다. 이 용액에 초산에틸 200㎖를 첨가하고, 이 혼합물을 0.5N 황산과 4% 탄산수소나트륨 수용액으로 세척한 다음에, 물로 3회 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음 감압하에서 건고했다. 그 잔사를 석유 벤진을 첨가하여 생성되는 결정을 여과 수집하고 초산에틸-석유 벤진의 혼합물로 재침전시켰다. 수량 2.53g (85%).

c) Z-Thr-Pro-Lys(BOC)-Ala-O^tBu의 제조

메타놀 40㎖에 Z-Pro-Lys(BOC)-Ala-O^tBu 2.12g을 용해시키고, Pd블랙을 촉매로 사용하여 3시간 동안 접촉환원을 행했다. 이 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거했다.

잔사를 디옥산 20㎖에 용해시켰다. 한편. Z-Thr-OH 977㎎과 HONB 806㎎을 초산에틸-디옥산(1 : 1)10㎖에 용해시키고, 빙냉하에 DCC800㎎을 첨가했다. 이 혼합물을 6시간 동안 교반하여 형성된 DC-우레아를 여거하고, 이 여액을 상기 디옥산 용액에 첨가했다. 이 혼합물을 16시간 동안 교반했다. 용매를 감압하에서 유거하고, 잔류물을 초산에틸 150㎖에 용해시켰다. 이 용액을 0.5N 황산과 4% 탄산수소나트륨 수용액으로 세척했다. 물로 세척한 후에, 무수 황산나트륨으로 건조시키고 용매를 감압하에서 유거했다. 잔사에 석유 벤진을 첨가하여 생성되는 분말을 수집했다. 수량 2.3g.(93%). 융점 64∼67℃.

d) Z-Phe-Phe-Tyrr-Thr-Pro-Lys(BOC)-Ala-O^tBu의 제조

메타놀 70㎖에 Z-Thr-Pro-Lys(BOC)-Ala-O^tBu 1.41g을 용해시키고, Pd블랙을 촉매로 사용하여 2시간 동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거했다. 이 잔사를 DMF10㎖에 용해시키고. 그 다음에 Z-Phe-Phe-OH 1.1g과 HONB 720㎎을 첨가했다. 빙냉하에, DCC 618㎎을 첨가하고, 이 혼합물을 20시간 교반했다. 용매를 감압하에서 유거하고 이 잔사를 초산에틸-에테르(1 : 1)로 처리했다. 생성되는 분말을 여과수집하고 에타놀로부터 결정시켰다. 수량 2.1g (100%). 융점 160∼163.5℃,

e) Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys(BOC)-Ala-O^tBu의 제조

메타놀 30㎖에 Z-Phe-Phe-Thr-Pro-Lys(BOC)-Ala-O^tBu 2.32g을 용해시키고 Pd블랙을 촉매로 사용하여 3시간 동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고, 메타놀을 유거했다. 잔사를 DMF 5㎖에 용해시키고. 이 용액에 Z-Aly(NO₂)-Gly-ONB 1.26g을 첨가한 다음. 이 혼합물을 실온에서 20시간 교반했다. DMF를 감압하에서 유거하고, 그 잔사에 물 50㎖를 첨가했다. 생성되는 분말을 여과 수집하고. DMF-물로 2회 재침전시켰다. 수량 2.5g (88%). 융점 138∼141℃ (분해).

f) β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Pro-Lys-Ala-OH의 제조

메타놀 및 빙초산(2 : 1)과의 혼합물 30㎖에 Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tur-Thr-Pro-Lys(BOC)-Ala-O^tBu 710㎎을 용해시키고, Pd 블랙을 촉매로 사용하여 8시간 동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여가하고 여액을 감압하에서 건고했다. 그 잔사를 물 10㎖에 용해시키고, 이 용액을 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(130㎖)에 통과시켰다. 0.005M 초산암모늄 수용액(800㎖)과 0.2M 초산암모늄 수용액(800㎖)으로 경사용출을 행했다. 913㎖ 내지 1,190㎖의 분획을 모아서 동결 건조하여 백색 우모상 물질 350㎎을 얻었다.

이 분말을 DMF 8㎖에 용해시키고, 여기에 p-톨루엔술폰산모노하이드레이트 41㎎을 첨가했다. 그 다음에 BOC-β-Ala-ONB 82㎎을 첨가하고 이 혼합물을 16시간 동안 교반했다. DMF를 감압하에서 유거하고 그 잔사에 트리플루오로초산 3㎖를 첨가했다. 이 혼합물을 30분간 진탕시키고 트리플루오로초산을 유거했다. 잔사를 물 10㎖에 용해시키고 암벌라이트 IRA-410 (초산형)의 컬럼(1.0×10㎝)에 통과시켜 이 화합물을 초산염으로 전환시켰다. 용출물을 동결 건조하고 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(2.2×17㎝)에 통과시켰다. 0.005M 초산암모늄 수용액(500㎖)과 0.2M 초산암모늄 수용액(500㎖)으로 경사용출을 행했다. 430∼500㎖의 분휙을 모아 동결 건조하여 백색우모상 물질 250㎖을 얻었다.

[실시예 23]

Gly-rg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys-Ala-OH의 제조 BCC-β-Ala-ONB를 BOC-Gly-ONB로 대체하고 실시예 22-f)의 방법을 반복하여 백색 우모상 물질로서 상기의 목적물 214㎎을 얻었다.

[실시예 24]

Leu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Gly-NH₂의 제조

a) Z-Leu-Arg(Tos)Gly-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-Gly-수지의 제조

고상 펩티드 합성장치(시마즈 APS 800)의 반응조에 BOC-Gly-수지(1.75m㏖의 Gly함유)4.04g을 넣고 디클로로메탄으로 20시간동안 팽윤시켰다. 그 후에 메리피일드법에 의하여, BOC-Tyr(Bzl)-OH, BOC-Phe-OH, BOC-Phe-OH, BOC-Gly-OH, Aoc-Arg(Tos)-OH 및 Z-Leu-OH를 소정의 순서에 따라 도입했다. 축합제로서 DCC를 사용하고, 각 아미노산을 4당량으로 사용하고 트리플루오로초산-디클로로메탄(1 : 1)으로 BOC기를 제거했다. 수지를 반응용기로부터 취하여, 디클로로메탄, DMF, 메타놀 및 초산으로 세척한 다음 건조시켰다. 이 방법으로 상기 수지 5.07g을 얻었다.

b) Z-Leu-Arg(Tos)-Gly-Phe-Tyr(Bzl)-Gly-NH₂의 제조

17% 암모니아-메타놀 50㎖에 상기 a)에서 제조한 수지 4.41g을 현탁시키고 밀폐시킨 다음, 이 현탁액을 실온에서 48시간 교반했다. 이 수지를 여거하고, DMF로 충분히 세척했다. 이 세척액과 여액을 모아서 용매를 감압하에서 유거했다. 유상 잔사에 에틸에테르를 가하여 생성되는 분말을 여과수집하고 에테르로 충분히 세척했다. 수량 950㎎.

c) Leu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Gly-NH₂의 제조

무수 불화수소 10ml에 상기 b)에서 제조한 보호펩티드-아미드 조품 500㎎과 아니졸 0.5㎖를 용해시킨 용액을 0℃에서 60분간 교반했다. 불화수소를 유거하고 잔사를 물 50㎖에 용해시켰다. 이 용액을 에틸에테르 20㎖로 2회 추출하여 수용액층을 암벌라이드 IRA-410(초산형)의 컬럼(2×10㎝)에 통과시켜 동결 건조했다. 이 제품을 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(2.3×17㎝)에 통과시키고 0.005M 초산암모늄 수용액(400㎖)과 0.2M 초산암모늄 수용액(400㎖)으로 경사용출을 행했다. 490∼550㎖의 분획을 모아 동결 건조했다. 이 방법으로 백색 우모상 물질로서 상기의 목적물 167㎎을 얻었다.

아미노산분석 : Arg, 1.02; Gly, 2.00 : Leu, 1.03; Tyr, 0.89; Phe, 2.08 (펩티드 함량 : 84%)

[실시예 25]

β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Ala-Gly-NH₂의 제조

a) Z-β-Ala-Arg(Tos)-Gly-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-Ala-Gly-수지의 제조

시마즈 APS-800합성 장치의 반응조에 BOC-Gly-수지 (Gly함유량 1.32mM) 3.03g을 넣고, 그 다음에 디클로로메탄으로 팽윤시켰다. 그 다음에, 대칭 무수물법 (symmetric anhydride process) [Hoppe-Seyle-r's, Z. Physiol. Chem. 353. 1973(1972)참조]에 의하여 BOC-Ala-OH, BOC-Tyr(Bzl)-OH, BOC-Phe-OH, AOC-Arg(Tos)-OH 및 Z-β-Ala-OH를 순서에 따라 도입했다. 각 단계에서 BOC의 제거는 50% 트리플루오로초산-디클로로메탄으로 행했다.

또한 각 단계에 있어서, 미반응 아미노기를 초산 무수물로 아세틸화했다. 모든 아미노산을 도입한 후, 이 수지를 에타놀, DMF, 디클로로메탄, 초산 및 메타놀로 세척한 다음에 감압하에서 건조시켰다. 이 방법으로 펩티드 수지 3.70g을 얻었다.

b) Z-β-Ala-Arg(Tos)-Gly-Phe-Phe-Tyr(Bzl)-Ala-Gly-N₂의 제조

17% 암모니아-메타놀 50㎖에 상기 a)에서 제조한 펩티드 수지 3.28g을 현탁시키고 밀폐한 다음. 이 현탁액을 실온에서 40시간 교반했다. 수지를 여거하고 DMF 50㎖로 세척했다. 여액과 세척물을 모아서 감압하에 건고했다. 잔사에 에테르를 첨가하여 생성되는 분말을 여과 수집하고 건조시켰다. 이 방법으로 보호 펩티드-아미드 조품 433㎎을 얻었다.

c) β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Ala-Gly-NH₂의 제조

불화수소 무수물 8㎖와 아니졸 0.3㎖와의 혼합물에 상기의 b)에서 제조한 보호 펩티드-아미드 310㎎을 용해시키고. 이 용액을 0℃에서 60분간 교반했다.

불화수소를 감압하에서 유거하고, 그 잔사를 물 50㎖에 용해시켰다. 이 용액을 에테르 10㎖로 2희 추출했다. 수용액층을 암벌라이트 IRA-410 (초산형)의 컬럼 (1×10㎝)에 통과시키고, 이것을 물로 세척했다. 용출물과 세척액을 화합하여 이것을 동결 건조했다. 생성물을 물 10㎖에 용해시키고 이 용액을 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(2.3×17㎝)에 통과시켰다. 0.005M 및 0.2M 초산 암모늄의 수용액(각 400㎖)으로 경사용출을 행했다. 495∼540㎖의 분류물을 모아 동결 건조하여 상기의 목적물 134㎎을 얻었다.

[실시예 26]

α,γ-Dab-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Ala-Gly-NH₂의 제조

최종적으로 도입하고자 하는 아미노산으로서, Z,β-Ala-OH 대신에 di-Z-α,γ-Abu-OH를 사용하여 실시예 25의 방법을 반복하였다. 이 방법으로 백색 우모상 물질로서 상기의 목적물을 얻었다.

[실시예 27]

Gly-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

a) Z-Gly-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂0.80g에 25% HBr 초산 8㎖를 첨가하고 이 혼합물을 실온에서 45분간 충분히 진탕시켰다. 이 반응 혼합물에 에테르 100㎖를 가하여 생성되는 분말을 여과수집하고 감압하에서 2일간 건조기 중에서 수산화나트륨 과립으로 건조시켰다. 건조물은 DMF 10㎖에 용해시키고 용액을 트리에틸아민으로 중화시켰다. 이용액에 Z-Gly-ONB 0.43g을 가하고 이 혼합물을 10시간 동안 교반했다.

이 용액에 물 7㎖를 가하여 오일을 분리했다. 경사하여 상층액을 제거한 후에, 물 50㎖를 첨가했다. 생성되는 분말을 여과 수집한 다음 건조시켰다. 이 생정물을 DMF-초산에틸로 재침전시켜 정제했다. 수량 0.66g (77%).

b) Gly-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

초산 30㎖에 Z-Gly-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂500㎎을 용해시키고, 수소기류 중에서 Pd 블랙을 촉매로 사용하여 7시간 동안 촉매환원을 행했다. 촉매를 여거하고, 초산을 감압하에서 유거했다. 잔사를 물10㎖에 용해시키고 이 용액을 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(1.8×10㎝)에 통과시켰다.

0.1M 초산암모늄 수용액(700㎖)과 1M초산암모늄 수용액(700㎖)을 사용하여 선형 구배 경사법으로 용출을 행했다. 410∼515㎖의 분획을 모아 동결 건조하여 백색 우모상 물질 307㎎ (65%)을 얻었다.

[실시예 28]

D-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

a) Z-D-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

25% HBr 초산 8㎖에 Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂0.80g을 용해시키고, 이 용액을 실온에서 40분간 진탕시켰다. 이 혼합물에 에틸에테르 100㎖를 가하여 침전물을 형성했다. 이 침전물을 여과 수집하고, 에테르로 세척한 다음 건조했다. 건조된 생성물을 DMF 10㎖에 용해시키고, 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시킨 다음에, Z-D-Ala-ONB 0.51g을 가했다. 이 혼합물을 8시간 동안 교반했다. DMF를 감압하에서 유거하고 그 잔사에 물 50㎖를 가했다.

생성되는 분말을 여과 수집하여 건조시킨 후에, 이 분말을 뜨거운 초산에틸로 세척하고, 이어서 DMF-초산에틸로 재침전시켰다. 수량 0.799g (92%). 융점 223∼225℃,

b) D-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

초산 30㎖에 Z-D-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂600㎎을 용해시키고 P^d블랙을 촉매로 사용하기 7시간 동안 접촉 환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거했다. 그 잔사를 물 10㎖에 용해시키고, 이 용액을 카아복시메틸-세파덱스의 컬럼(1.8×11㎝)에 통과시켰다.

0.1M 초산암모늄 수용액(700㎖)과 1M 초산암모늄 수용액(700㎖)으로 선형 구배 용출을 행하여 350∼450㎖의 용출 분획을 모아서 동결건조했다 이 방법으로 백색 우모상 물질 400㎖ (73%)을 생성했다.

[실시예 29]

Phe-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

a) Z-Phe-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

25% HBr-초산 10㎖에 Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂800㎎을 용해시키고, 이 용액을 50분간 진탕시켰다. 이 용액에 에테르 80㎖를 첨가하고 생성되는 침전물을 여과 수집하고, 건조시킨 다음 DMF 10㎖에 용해시켰다. 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시킨 다음에, Z-Phe-OPCP(펜타클로로페닐에스테르) 700㎎을 첨가했다. 이 혼합물을 10시간 동안 교반하고, 여기에 1N 암모니아 수용액 50m1를 첨가했다. 유충을 경사에 의하여 취해서 이 유상물질에 물을 가했다. 생성되는 분말을 여과수집한 다음 건조시켰다. 이 분말에 초산에틸 50㎖를 가하여, 이 혼합물을 가열한 다음 분말을 뜨거운 조건하에서 여과수집했다. 분말을 DMF-초산에틸로 재침전시켜 정제했다. 수량 805㎎ (92%).

b) Phe-Ag-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

무수 불화수소 6ml에, Z-Phe-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂500㎎을 용해시켜 이 용액을 -10℃에서 40분간 교반했다. 불화수소를 유거하고 잔사를 물 10㎖에 용해시켰다. 이 용액을 암벌라이트-lRA-410(초산형)의 컬럼(0.9×15㎝)을 통과시켜 이것을 물로 세척했다. 이 방법으로 상기의 목적물 402㎎을 수득했다.

아미노산 분석 : Arg, 1.01; Gly, 0.98; Phe, 2.94 (펩티드 함량 : 86.2%)

[실시예 30]

Leu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

a) Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

DMF100㎖에 Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂12.2g을 용해시키고 Pd 블랙을 촉매로 사용하여 5시간 동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 여기에 Z-Arg(NO₂)-Gly-OH 8.6g과 HONB 4.3g을 가했다.

빙냉하에. DCC4.95g을 가하여, 이 혼합물을 12시간동안 교반했다. 형성된 DC-우레아를 여거하고, 물 1ℓ를 여액에 첨가하여 생성되는 겔을 여과수집한 다음 메타놀과 물로재침전시켰다. 수량 16.25g(91.8%),

b) Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

초산 30㎖에 Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂600㎎을 용해시키고, Pd 블랙을 촉매로 사용하여 9시간 동안 접촉 환원을 행했다. 촉매를 여거하고, 용매를 감압하에서 유거했다. 이 잔사를 물 15㎖에 용해시키고 그 다음에 카아복시메틸세파덱스의 컬럼(1.3×11㎝)에 의하여 정제시켰다. 0.1M 초산암모늄 수용액(500㎖)과 1M 초산암모늄 수용액(500㎖)으로 선형 구배 경사용출을 행했다. 250∼420㎖의 분획을 모아서 동결 건조했다. 수량 416㎎ (72.5%).

c) Z-Leu-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂700㎎에 아니졸 0.2㎖를 가한 다음에 25% HBr-초산 7㎖를 가했다. 이 혼합물을 실온에서 40분간 진탕시킨 다음에 에틸에테르 100㎖를 가했다. 생성되는 침전물을 여과수집하고, DMF 100㎖에 용해시켰다. 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시킨 다음에 Z-Leu-Sou (N-하이드록시숙신아미드에스테르) 344㎎을 가했다. 이 혼합물을 12시간 동안 교반했다. DMF를 감압하에서 유거하고 그 잔사에 물 50㎖를 가했다. 생성되는 분말을 여과하여 수집하고 메타놀 및 물로 재침 전시켜 정제했다. 수량 560㎎(70.9%). 융점 193∼195℃

d) Leu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

초산30㎖에 Z-Leu-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂400㎎을 용해시키고, Pd블랙을 촉매로 사용하여 10시간 동안 접촉 환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거했다. 잔사를 물 50㎖에 용해시킨 다음. 그 용액을 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(2.6×22㎝)에 통과시켰다.

0.005M 초산암모늄 수용액 (700㎖)과 0.2M 초산암모늄 수용액 (700㎖)으로 경사용출을 행하고, 830∼910㎖의 분획을 모아 동결 건조했다. 수량 217㎎ (55.5%).

[실시예 31]

α-Abu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

Z-Leu 대신에 Z-α-Abu를 사용하여 실시예 30의 방법을 반복하여 상기의 목적물을 얻었다.

[실시예 32]

Nle-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

Z-Leu 대신에 Z-Nle을 사용하여 실시예 30의 방법을 반복하여 상기의 목적물을 얻었다.

[실시예 33]

Val-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

DMF 10㎖에 실시예 30-b)에서 제조한 Arg-Gly-Phe-Tyr-NH₂·2 초산염 400㎎을 용해시킨 다음에 Z-Val-ONB 300㎎을 가했다. 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시켜 10시간 동안 교반했다. 이 용액에 에테르 50㎖를 가하여 생성되는 침전물을 여과수집하고 초산에틸로 세척한 다음 건조시켰다. 이 생성물을 초산-물(1 : 1)30㎖에 용해시키고, Pd 블랙을 촉매로 사용하여 4시간 동안 촉매환원을 행했다. 촉매를 여거하고 이 여액을 견고시켰다. 잔사를 물 10㎖에 용해시키고 실시예 30-c)에 기술한 것과 동일한 방법으로 크로마토그라피하여 정제했다. 수량 360㎎,

-13.7°(c=0.5, 물)

아미노산분석 : Arg, 1.02; Gly, 1.00 Val, 0.97; Phe, 2.04; Tyr, 0.97(펩티드 함량 : 86.2%)

[실시예 34]

β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

a) Z-Arg(NO₂)Gly-OEt의 제조

테트라하이드로푸란 200㎖에 Z-Arg(NO₂)-OH 70.7g을 용해시키고 빙냉하에 2.4-디니트로페놀 40.5g 및 DCC45.4g을 가하여 이 혼합물을 4시간 동안 교반했다. 한편, Gly-OEt HC1 30.7g을 테트라하이드로푸란 200㎖에 현탁시키고, 빙냉하에 이 현탁액을 트리에틸아민 30.8㎖로 중화시켰다. 형성된 디사이클로헥실우레아를 여거하고, 상기와 같이 제조한 활성 에스테르 용액을 이 여액에 가한 다음에 철야 교반했다. 용액을 농축하여 잔사를 초산에틸 500㎖에 용해시켰다. 이 용액을 탄산수소나트륨의 포화수용액(200㎖×3), 1N 염산(200㎖×3), 염화나트륨의 포화수용액(200㎖×3)의 순서로 세척한 다음, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 이 용액을 농축하고 초산에틸-석유벤진으로 결정시켰다. 결정을 여과하여 다시 회수한 뒤 초산에틸-석유벤진으로 재결정했다. 수량 70.0g(79.8%), 융점 109∼110℃.

b) Z-Arg(NO₂)-Gly-OH의 제조

아세톤 100㎖에 Z-Arg(NO₂)-Gly-OEt 20.0g을 현탁시키고, 빙냉하에 1N 수산화나트륨 수용액 64㎖를 가했다. 이 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다.

과잉의 알칼리를 염산으로 중화시킨 후에, 이 용액을 감압하에서 농축하고 그 잔사에 물 100㎖를 가했다. 불용물을 여거하고, 이 여액을 염산으로 산성으로 하고 생성되는 결정을 여과하여 회수했다. 수량18.3g(93.7%), 융점 103∼105℃,

c) Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

DMF 60㎖와 메타놀 40㎖와의 혼합물에 Z-Phe-Phe-NH₂8.91g을 용해시키고 Pd 블랙 존재하에 14시간동안 접촉 수첨반응은 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거했다. 잔사를 DMF30㎖에 용해시켰다. 한편, Z-Arg(NO₂)-Gly-OH 6.80g을 테트라하이드로푸란 50㎖에 가하고, 빙냉하에 HONB3.23g과 DCC3.71g을 가한 다음에 5시간 동안 교반시켰다. 형성된 디사이클로헥실우레아를 여거하고 상기의 아민성분(H-Phe- Phe-NH₂)을 이 여액에 가했다. 혼합물을 철야 교반하고 용매를 감압하에서 유거한 후에 잔사에 물 100㎖를 가하여 생성되는 분말을 여과수집했다.

건조시킨 후에, 생성물을 초산에틸로 세척하고 에타놀-초산에틸로 재결정시켰다. 수량 8.34g(72.7%), 융점 112∼113℃,

d) Z-β-Ala-ONB의 제조

테트라하이드로푸란 40㎖에 Z-β-Ala-OH 3.35g과 HONB 3.23g을 용해하여, 빙냉시킨 후에 DCC3.71g을 가했다. 이 혼합물을 철야 교반하여 형성된 디사이클로헥실우레아를 여거했다. 용매를 감압하에서 유거하고 여기에 석유 엔진을 가했다. 생성되는 결정을 여과하여 회수하고 아세토니트릴로부터 재결정시켰다. 수량 3.83g (66.4%), 융점 125∼126℃.

e) Z-β-Ala-Arg)NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂1.06g에 25% HBr-초산 10㎖를 가하고, 실온에서 40분간 진탕시킨 후에, 여기에 에틸에테르를 첨가했다. 생성되는 침전물을 여과 회수하고, 데시케이터 중의 감압하에서 수산화나트륨으로 건조시킨 다음, DMF 10㎖에 용해시켰다. 냉각 후에, 이 용액을 트리에틸아민 0.84㎖로 중화시킨 다음에 여기에 Z-β-Ala-ONB 0.69g을 가했다. 이 혼합물을 철야 교반하고 용매를 감압하에서 유거한 다음 물 50㎖를 가했다. 생성되는 분말을 건조시키고, 초산에틸로 세척하고, 물-디옥산-초산에틸로 재침전시켰다. 수량 0.98g(83.3%)융점 161∼163℃,

f) β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

초산 40㎖에 Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂를 촉매로서 팔라듐과 함께 용해시키고 14시간동안 접촉환원을 시켰다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거했다. 잔류물을 카아복시메틸-세파덱스의 컬럼(2.5㎝×9㎝)에 통과시키고 선형 구배 경사법에 의하여 0.01N 초산암모늄 수용액(700㎖)으로부터 1N 초산암모늄 수용액(700㎖)을 통하여 용출을 행했다. 780∼990㎖에 분획을 모아 동결 건조했다. 수량 500㎎(66%),

[괄호 안의 숫자는 이론치를 나타내는데, 이하 동일하게 적용한다]. (펩티드 함량 : 76%)

[실시예 35]

γ-Abu-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

a) Z-7-Abu-ONB의 제조

테트라하이드로푸란 40㎖에 Z-γ-Abu-OH4.75g과 HONB 3.94g을 용해시키고, 빙냉한 후에, 여기에 DCC3.94g을 용해시키고, 빙냉한 후에. 여기에 DCC 4.54g을 가했다. 혼합물을 6시간 동안 교반하여 형성된 디사이클로헥실우레아를 여거했다. 용매를 감압하에서 유거한 다음에 에틸에테르 30㎖를 잔사에 가하고, 이어서 소량의 물을 가했다. 생성되는 결정을 여과하여 수집했다. 수량 6.0g(75.3%), 융점 66∼69℃

b) Z-γ-Abu-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

실시예 34-e)에서 기재한 것과 동일한 방법에 따라 Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe- NH₂0.53g을 HBr-초산으로 처리하여 DMF 15㎖에 용해시켰다. 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시킨후에, Z-γ-Abu-ONB 0.44g을 가했다. 이 혼합물을 철야 교반하고 용매를 강압하에서 유거한 다음 물을 가했다. 생성되는 분말을 여과 회수하고 충분히 건조시켰다.

초산에틸로 세척하고 에타놀-물로부터 재침전시켰다. 수량 0.38g(65%), 융점 167∼170℃,

c) γ-Abu-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

초산 30㎖에 Z-γ-Abu-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-300mg을 용해시키고, Pd를 촉매 로 하여 6시간 동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거한 후에 용매를 감압하에서 유거하고 그 잔사를 카아복시메틸-세파덱스의 컬럼(1.8㎝×10㎝)에 통과시켰다. 그 다음에 선형 구배경사법에 의하여 0.005N 초산암모늄 수용액(350㎖)으로부터 1N 초산암모늄 수용액(350㎖)을 통과시켜 용출을 행하고, 290∼340㎖의 분획을 모아 동결시켰다. 수량 180㎎(63%),

[실시예 36]

δ-AvaI-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

a) Z-δ-Aval-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

실시예 34-e)와 동일한 방법으로, Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂0.80g을 HBr-초산으로 처리하여 DMF 10㎖에 용해시켰다. 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시켰다. 한편, Z-δ-AvaI-OH0.30g과 HONB 0.24g을 테트라하이드로푸란 5㎖에 용해시켰다. 빙냉시키면서, 여기에 DCC 0.27g을 가하고, 그 혼합물을 30분간 교반했다. 디사이클로헥실우레 아를 여거하고 이 여액을 상기의 아민성분[H-δ-Aval-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂]에 가한 다음에 철야 교반했다. 용매를 감압하에서 유거하고 물을 가했다. 생성되는 분말을 여과하여 회수하고 충분히 건조시켰다. 초산에틸로 세척하고 DMF-초산에틸로 재침전시켰다. 수량 0.62g(70%), 융점 154∼157℃.

b) δ-Aval-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

초산 30㎖에 Z-Aval-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂500㎎을 용해시키고 촉매로서 Pd를 사용하여 5시간동안 접촉 환원을 행했다. 촉매를 여거한 후에, 용매를 감압하에서 유거했다. 잔사를 카아복시메틸-세파덱스(1.8㎝×9㎝)의 컬럼에 통과시키고 선형 구배 경사법이 의하여 0.1N 초산암모늄수용액(500㎖)으로부터 1N 초산암모늄 수용액(500㎖)을 통과시켜 용출을 행했다. 290∼370㎖의 분획을 모아 동경건조했다. 수량 290㎎(61%,

(2), 펩티드 함량 : 81.4%

[실시예 37]

ε-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

a) Z-ε-Acap-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

실시예 34-e)와 동일한 방법으, Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂0.80g을 HBr-초산으로 처리하여 DMF10㎖에 용해시켰다. 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시켰다. 한편, Z-ε-Acap-OH0.32g과 HONB 0.24g을 테트라하이드로푸란 5㎖에 용해시키고, 빙냉하에 DCC 0.27g을 가했다. 혼합물을 3시간 동안 교반하여 형성된 디사이클로 헥실우레아를 여거하고 이 여액을 상기 아민 성분[H-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂]에 가했다. 이 혼합물을 철야 교반했다. 용매를 감압하에서 유거하고 물을 가했다. 생성되는 분말을 여과희수하고 충분히 건조시켰다. 그 다음에 초산에틸로 세척하고, DMF-초산에틸로 재결정시켰다. 수량 0.49g(55%), 융점 102∼104℃

b) ε-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

초산 30㎖에 Z-ε-Acap-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂400㎎을 용해시키고, 촉매 로서 Pd를 사용하여 7시간 동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거했다. 이 잔사를 카아복시메틸-세파덱스의 컬럼(1.8㎝×10㎝)에 통과시킨 다음 선형 구배 경사법에 의하여 0.1N 초산암모늄 수용액(500㎖)으로부터 1N 초산암모늄 수용액(500㎖)을 통과시켜 용출을 행했다. 250∼330㎖의 분획을 모아 동결건조시켰다. 수량 200㎎(51%),

[실시예 38]

Lys-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

a) Di-Z-Lys-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

실시예 34-e)와 동일한 방법으로, Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂0.80g을 HBr-초산으로 처리하여 DMF10㎖에 용해시켰다. 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시켰다.

한편, di-Z-Lys-OH 0.54g과 HONB 0.26g을 테트라하이드로푸란 5㎖에 용해시키고, 빙냉하면서 DCC0.30g을 가했다. 이 혼합물을 4시간 동안 교반하고 생성되는 디사이클로헥실우레아를 여거했다. 여액을 상기 아민성분[H-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂]에 첨가한 다음 철야 교반했다. 용매를 감압하에서 유거하고, 그 잔사에 물을 가했다. 생성되는 분말을 여과회수하고 충분히 건조시켰다. 그 다음에 초산에틸로 세척하고, 이어서 DMF-초산에틸로 재침전시켰다. 수량 0.82g(77%), 융점 200∼204℃(분해),

b) Lys-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

초산 30㎖에 di-Z-Lys-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂600㎎을 용해시키고, 촉매 로서 Pd를 사용하여, 6시간 동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거했다. 잔사를 카아복시메틸 세파덱스의 컬럼(1.5㎝×11㎝)에 통과시키고 선형 구배 경사법에 의해 0.1N 초산 암모늄 수용액(700㎖)으로부터 1N 초산암모늄 수용액(700㎖)을 통과시켜 용출을 행했다. 650∼760㎖의 분획을 모아 동결건조했다. 수량 280㎎(52%),

[실시예 39]

α,γ-Dab-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

a) di-A-Dab-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

실시예 34-e)와 동일한 방법으로, Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂0.80g을 HBr-초꺼으로 처리하여 DMF10㎎에 용해시켰다. 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시겼다. 한편 di-Z-α,γ-Dab-OH0.50g 및 HONB0.26g을 테트라하이드로푸탄 5㎎에 용해시키고, 빙냉시키면서, DCC0.30g을 가했다. 이 혼합물을 4시간동안 교반하고 형성된 디사이클로헥실우레아를 여거했다.

여액을 상기 아민성분 H-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂에 가하여 이 혼합물을 철야 교반했다. 용매를 감압하에서 유거하고 잔사에 물을 가했다. 생성되는 분말을 여과 회수하고 충분히 건조시켰다. 이 분말을 초산에틸로 세척하고 DMF-초산에틸로 재침전시켰다. 수량 0.82g(78%), 융점 184∼188℃.

b) α,γ-Dab-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

초산 30㎖에 Di-Z-α,γ-Dab-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂600㎎을 용해시키고, 촉매로서 Pd를 사용하여 6시간 동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거했다. 이 잔사를 카아복시메틸-세파덱스의 컬럼(1.5㎝×13㎝)에 통과시키고, 선형 구배 경사법에 의하여 0.1N 초산암모늄 수용액(700㎖)으로부터 1N 초산암모늄 수용액(700㎖)을 통과시켜 용출을 행했다. 610∼680㎖의 분획을 모아 동결건조했다. 수량 255㎎(46%),

[실시예 40]

Arg-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

a) Z-Arg(NO₂)-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

실시예 34-e)와 동일한 방법으로, Z-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂0.80g을 HBr-초산으로 처리하여 DMF10㎖에 용해시켰다. 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시켰다. 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시켰다. 한편 Z-Arg(NO₂)-OH 0.39g과 2,4-디니트로페놀 0.22g을 테트라하이드로푸란 5㎖에 용해시키고 빙냉시키면서, DCC 0.25g을 가했다. 이 혼합물을 2시간 동안 교반하고 형성된 디사이클로헥실우레아를 여거했다. 이 여액을 상기의 아민성분[H-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂]에 가한 다음에 철야 교반했다. 용매를 감압하에 유거 하고 잔사에 물을 가했다. 유상 생성물로 충분히 세척하고, DMF-초산에틸로 재침전시켰다. 수량 0.90g(89%), 융점 89∼92℃,

b) Arg-Arg-Gly-Phe-Phe-NH₂의 제조

초산 40㎖에 Z-Arg(NO₂)-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-NH₂700㎎을 용해시키고, 촉매로서 Pd를 사용하여 9시간 동안 촉매환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거했다. 잔사를 카아복시메틸-셀룰로오즈의 컬럼(3㎝×18㎝)에 통과시키고 0.005N 초산암모늄 수용액(1ℓ)으로부터 0.3N 초산암모늄수용액(1ℓ)을 통과시켜 용출을 행했다. 890∼1,410㎖의 용출 분획을 모아 동결건조시켰다. 수량 380㎎(45%),

[실시예 41]

β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

a) Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-OEt의 제조

Z-Arg(NO₂)-Gly-OEt 26.3g에 25% HBr-초산 130㎖를 가하고 실온에서 60분간 교반한후에, 에틸에테르를 가했다. 이 침전물을 여과 회수하고 수산화나트륨으로 건조시켰다. 그 다음에 건조된 침전물을 DMF150㎖에 용해시켜서 빙냉시킨 후에 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시켰다. 그 후에 Z-β-Ala-ONB 23.1g을 가하고, 이 혼합물을 철야 교반했다. 용매를 감압하에서 유거하고 이 잔사를 소량의 n-부타놀을 함유하는 초산에틸 300㎖에 용해시켰다. 이 용액을 물, 탄산수소나트륨의 포화수용액(100㎖×3) 및 염화나트륨의 포화 수용액(100㎖×3)으로 세척한 다음에 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압하에서 유거하고 에틸에테르를 가했다. 생성되는 분말을 여과회수하고 에타놀-초산에틸로부터 재결정시켰다. 수량22.9g(75%), 융점 97∼99℃,

b) Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-OH의 제조

아세톤 50㎖와 물 25㎖와의 혼합물에 Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-OEt 12.1g을 용해시키고, 빙냉하에 염화나트륨 1N 수산화나트륨 수용액 27.8㎖를 30분에 걸쳐 적가했다. 이 혼합물을 동일한 조건하에서 1시간 동안 교반하고 실온에서 2시간 더 교반한 후, 1N 염산 3.8㎖를 가하고, 아세톤을 감압하에 유거했다. 잔사에 물 50㎖를 가하고 이 혼합물을 6N 염산으로 산성화하여 즉시 고화되는 유상 물질을 얻었다.

이와같이하여 얻은 고체물질을 여과 수집했다. 수랑 10.3g(86.0%), 융점 101∼103℃,

c) Z-Ph-Tyr-OMe의 제조

테트라하이드로푸란 100㎖에 Tyr-OMe HCl 5.10g을 현탁시켜 빙냉시킨 후에, 이 현탁액을 트리에틸아민 3.08㎖로 중화시켰다. 여기에 Z-Phe-OH 5.99g, HONB 3.94g 및DCC 4.54g을 가하고 이 혼합물을 철야 교반했다. 형성된 디사이클로헥실우레아를 여거하고, 용매를 감압하에서 증발시켜 유거했다. 잔사를 초산에틸 200㎖에 용해시키고, 이 용액을 탄산수소나트륨의 포화 수용액(100㎖×3), 1N 염산(100㎖×3) 및 물로 세척한 다음, 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 초산에틸을 감압하에서 유거하고, 석유벤진을 가하여 젤라틴성 잔사를 얻고, 이것을 여과회수하고 초산에틸-석유벤젠으로부터 재침전시켰다. 수량 6.00g(63%), 융점 132∼133℃,

d) Z-Phe-Tyr-NH₂의 제조

암모니아로 포화시킨 메타놀 40㎖에 Z-Phe-Tyr-OMe 3.0g을 용해시켜, 이 용액을 1주일간 밀폐용기 내에 저장하여 침상형 물질을 분리했다. 용매를 감압하에서 증발시킨 후, 에틸에테르를 가하고 생성되는 결정을 여과하여 회수하고 에타놀-물로부터 재결정시켰다. 수량 2.61g(90%), 융점 217∼218℃,

e) Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

Z-Phe-Tyr-NH₂1.15g에 소량의 아니졸을 가한 다음에 25% HBr-초산 11㎖를 가했다. 실온에서 40분간 교반한 후에, 에틸에테르를 가했다. 생성되는 침전물을 여과회수하고 수산화나트륨으로 건조시켰다. 한편, Z-Phe-OH 0.67g과 HONB 0.45g을 테트라하이드로푸란 5㎖에 용해시키면서 DCC 0.52g을 가했다. 혼합물을 4시간 동안 교반하고 생성되는 디사이클로헥실우레아를 여거했다.

상기 아민 성분[H-Phe-Tyr-NH₂]을 DMF 10㎖에 용해시키고 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시켰다.

이 용액에 상기 에스테르 용액을 가하고 이 혼합물을 철야 교반했다. 용매를 감압하에서 유거한 다음 여기에 물을 가했다. 생성되는 결정을 여과하여 회수하여 초산에틸로 추출하고 DMF-초산에틸로 재결정했다. 수량 1.01g(74%), 융점 218∼221℃(분해),

f) Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

메타놀 30㎖와 DMF 20㎖와의 혼합물에 Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂0.91g을 현탁시키고 7시간 동안 촉매환원을 행했다. 메타놀을 감압하에서 유거했다. 한편, Z-β-Ala-Arg-(NO₂)-Gly-OH 0.72g과 HONB 0.32g을 DMF 5㎖에 용해시키고, 빙냉하면서 DCC 0.37g을 가했다. 이 혼합물을 6시간 동안 교반하여 생생된 디사이클로헥실우레아를 여거했다. 이 여액을 상기 아민 성분 [H-Phe-Phe-Tyr-NH₂]에 가한 다음 철야 교반했다. 용매를 감압하에서 유거하여 고체물질을 얻고 이것을 물로 적정했다. 생성되는 분말을 여과 회수하고 DMF-초산에틸로부터 재침전시켰다.

수량 0.88g(62%), 융점 174∼177℃,

g) β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

초산 30㎖에 Z-β-Ala-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂740㎎을 용해시키고 촉매로서 Pd를 사용하여 7시간 동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고, 용매를 감압하에서 유거했다. 잔사를 카아복시메틸-세파덱스의 컬럼(1.6㎝×15㎝)에 통과시키고 선형 구배 경사법에 의하여 0.005N 초산 암모늄의 수용액(700㎖)으로부터 1N 초산암모늄의 수용액(700㎖)을 통과시켜 용출을 행했다. 580∼790㎖의 용출 분획을 모아서 동결건조했다. 수량 540㎎(75%),

h) β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

β-Ala-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂·2 초산염 트리하이드레이트(9.33g)를 물 20㎖에 용해시키고, 이 용액에 구연산 모노하이드레이트 2.2g을 교반하면서 가했다. 생성된 결정질 침전물을 여과 수집하고 소량의 냉수로 세척하여 대응하는 2구연산염 10.4g을 얻었다.

[실시예 42]

γ-Abu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

a) Z-γ-Abu-Arg(NO₂)-Gly-OEt의 제조

Z-Arg(NO₂)-Gly-OEt 4.38g에 25% HBr-초산 40㎖를 가하고, 실온에서 30분간 교반한 후에, 에틸 에테르를 가했다. 생성되는 침전을 여과회수한 다음 수산화나트륨으로 건조시켰다.

그 다음에, DMF 30㎖를 가하여 빙냉시킨 후에, 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시켰다.

이 용액에 Z-γ-Abu-ONB 4.16g을 가하고 이 혼합물을 철야 교반했다. 용매를 감압하에서 유가하고, 물을 이 잔사에 가했다. 물을 경사법에 의하여 제거하고, 에틸에테르를 잔사에 가하여 잔사를 고화시켰다.

그 다음에, 이것을 여과회수하고 아세토니트릴로부터 재침전시켰다.

수량 2.5g(48%), 융점 60∼62℃,

b) Z-γ-Abu-Arg(NO₂)-Gly-OH의 제조

아세톤 20㎖에 Z-γ-Abu-Arg(NO₂)-Gly-OEt 2.0g을 용해시키고, 빙냉하면서, 1N 수산화나트륨의 수용액 5.7㎖를 가했다. 이 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음에 1N 염산 6㎖를 가하고, 이어서 아세톤을 감압하에서 유거했다. 생성되는 결정을 여과회수하고 에타놀-물로 부터 재결정시켰다.

수량 1.86g(98%), 융점 113∼115℃,

c) Z-γ-Abu-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂1.34g에 소량의 아니졸을 가한 다음에 25% HBr-초산 13㎖를 가했다.

실온에서 45분간 진탕시킨 후에, 에틸에테르를 가하고 생성되는 침전을 여과희수하고 수산화나트륨으로 건조시켰다. 한편, Z-γ-Abu-Arg(NO₂)-Gly-OH 0.99g과 HONB 0.43g을 DMF 5㎖에 용해시키고, 빙냉하에 DCC 0.50g을 가했다. 이 혼합물을 6시간 동안 교반하고 디사이클로헥실 우레아를 여거했다. 상기 아민 성분 [H-Phe-Phe-Tyr-NH₂]을 DMF 10㎖에 용해시키고 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시켰다.

이 용액에 상기의 활성에스테르 용액을 가하고 이 혼합물을 제거했다. 생성되는 분말을 여과회수하여 초산에틸로 세척하고, DMF-초산에틸로 재침전시켰다.

수량 1.12g(58%), 융점 139.5∼141℃,

d) γ-Abu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

초산 30㎖에 Z-γ-Abu-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂800㎎을 용해시키고, 촉매로서 Pd를 사용하여 14시간 동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거했다. 자사를 카아복시메틸-세파덱스의 컬럼(1.5㎝×10㎝)에 통과시키고 경사 용출법에 의하여 0.1N 초산암모늄의 수용액(700㎖)으로부터 1N 초산암모늄의 수용액(700㎖)을 통과시켜 용출을 행했다. 410∼600㎖의 용출분획을 모아서 동결 건조시켰다. 수량 412㎖ (52%),

[실시예 43]

ε-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

a) Z-ε-Acap-Arg(NO₂)-Gly-OEt

2-Arg(NO₂)-GIX-OEt 2.41g에 25% HBr-초산 12㎖를 가하고 실온에서 40분간 진탕시킨후에, 에틸에테르를 가했다. 생성되는 침전물을 여과회수하고 수산화나트륨으로 건조시켰다.

한편, Z-ε-Acap-OH 1.33g과 HONB 0.99g을 테트라하이드로푸란 5㎖에 용해시킨 다음 빙냉하면서 DCC1.14g을 가했다.

이 혼합물을 4시간 동안 교반하고 형성된 디사이클로 헥실우레아를 여거했다.

상기 아민성분을 DMF 10㎖에 용해시키고, 용액을 트리에틸아민으로 중화시킨후에 상기의 활성 에스테르 용액을 가했다. 이 혼합물을 철야교반하고, 용매를 감압하에서 유거했다. 잔사를 초산에틸 50㎖에 용해시키고 이 용액을 물, 탄산수소나트륨의 포화수용액(50㎖×2) 및 물로 세척한 다음, 무수탄산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 감압하에서 유거하고 여기에 석유벤진을 가했다. 생성되는 결정을 물-에타놀-초산에틸로 재결정시켰다.

b) Z-ε-Acap-Arg(NO₂)-Gly-OH의 제조

아세톤 10㎖에 Z-ε-Acap-Arg(NO₂)-Gly-OEt 1.8g을 용해시키고, 빙냉하면서 2N 수산화나트륨의 수용액 2.9㎖를 가했다. 이 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반했다.

1N 염산 2.5㎖를 부가한 다음에 아세톤을 감압하에서 유거했다. 잔사에 물 10㎖를 가하고 불용물을 여거했다. 이 여액을 1N 염산으로 산성으로 하여 생성되는 결정을 제거했다. 이들 결정을 여과회수했다.

c) Z-ε-Acap-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

Z-Phe-Phe-Tyr-NH₂1.22g에 소량의 아니졸을 가하고 이어서 25% HBr-초산 10㎖를 가했다. 이 혼합물을 실온에서 40분간 진탕시키고, 여기에 에틸에테르를 가했다. 침전물을 여과 회수하고 수산화나트륨으로 건조시켰다. 한편, Z-ε-Acap-Arg(NO₂)-Gly-OH 1.05g과 HONB 0.36g을 DMF 10㎖에 용해시키고, 물로 냉각하면서, 여기에 DCC 0.42g을 가했다. 이 혼합물을 6시간 동안 교반하여 부산물인 디사이클로헥실우레아를 여거했다.

상기 아민성분을 DMF 10㎖에 용해시켜 이 용액을 트리에틸아민으로 중화시켰다.

이 용액에 상기 활성 에스테르 용액을 가하고 이 혼합물을 철야 교반했다. 용매를 감압하에서 유거하고 물을 가했다. 생성되는 분말을 여과회수하여 초산에틸로 세척하고, DMF-초산에틸로 재침전시켰다.

d) ε-Acap-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

초산 40㎖에 Z-ε-Acap-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂700㎖을 용해시키고 촉매로서 Pd를 사용하여 14시간 동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거했다. 잔사를 카아복시메틸-세파덱스(1.8㎝×12㎝)의 컬럼에 통과시키고 선형 구배 경사법에 의하여 0.1N 초산암모늄의 수용액(700㎖)으로부터 1N초산 암모늄의 수용액(700㎖)을 통과시켜 용출을 행하여 430∼550㎖을 용출분획을 모아서 동결건조시켰다. 수량 430㎎ (62%),

[실시예 44]

Lys-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

a) di-Z-Lys-Arg(NO₂)-Gly-OEt의 제조

di-Z-Lys-OH 2.07g을 사용하여, 실시예 43-a)와 정확히 동일한 방법을 행하여 겔상의 목적물을 얻었다. 물-에타놀-초산에틸로 재침전시켜 목적물 2.57g(73%)을 얻었다.

b) di-Z-Lys-Arg(NO₂)-Gly-OH의 제조

아세톤 10㎖에 di-Z-Lys-Arg(NO₂)-Gly-OEt 2.0g을 용해시키고, 빙냉시키면서, 2N 수산화나트륨의 수용액 2.1㎖를 가했다. 이 혼합물을 실온에서 2시간동안 교반했다. 1N 염산 1.4㎖를 가한 다음에, 아세톤을 감압하에서 유거했다. 잔류물을 물 10㎖로 희석하고 불용물을 유거했다. 그 다음에, 이 용액을 1N 염산으로 산성으로 하고 생성되는 젤라틴성 침전물을 여과회수했다.

c) di-Z-Lys-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

di-Z-Lys-Arg(NO₂)-Gly-OH 1.21g을 사용하여, 실시예 43-c)와 정확히 동일한 방법을 사용하여 겔상의 목적물을 얻었다. 수량.1.21g (58%), 융점 199∼203℃,

d) Lys-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

초산 30㎖에 di-Z-Lys-Arg(NO)₂-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂1.00g을 용해시키고, 촉매로서 Pd를 사용하여 20시간 동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여거하고 용매를 감압하에서 유거했다. 잔사를 카아복시메틸 세파덱스 컬럼(1.8㎝×10㎝)에 통과시켰다. 선형 구배 경사법에 의하여 0.1N 초산암모늄의 수용액(500㎖)으로부터 1N 초산암모늄의 수용액(500㎖)을 통과시켜 용출을 행하고 650∼890㎖의 용출분획을 모아 동결 건조시켰다. 수량 468㎎ (50%),

[실시예 45]

α,γ-Dab-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

a) di-Z-α,γ-Dab-Arg(NO₂)-Gly-OEt 의 제조

에틸에테르 40㎖에 di-Z-α,γ-Dab-OH·("DCHA"는 디사이클로헥실아민의 약칭임)를 현탁시키고, 이 현탁액을 그 따음에 0.5N 황산으로 흔들어 주었다. 에테르층을 물로 세척하고 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 유거하고, 실시예 43-a)와 정확히 동일한 방법을 사용하여 겔상의 목적물을 얻었다. 이것을 물-에타놀-초산에틸로부터 재침전시켰다.

수량 2.36g (70%), 융점 153∼156℃,

b) di-Z-α,γ-Dab-Arg(NO₂)-Gly-OH의 제조

아세톤 30㎖에 di-Z-α,γ-Dab-Arg(NO₂)-Gly-OEt 2.0g을 용해시키고 빙냉하에 여기에 2N 수산화나트륨의 수용액 2.97㎖를 적가했다. 이 혼합물을 동일한 조건하에서 1시간 동안 교반하고 1N염산 3㎖를 가했다. 아세톤을 강압하에서 유거하고, 물 10㎖를 가했다. 불용물을 여거하고 여액을 1N 염산으로 산성으로했다. 생성되는 젤라틴성 침전물을 여과회수했다.

c) di-Z-α,γ-Dab-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

di-Z-α,γ-Dab-Arg(NO₂)-Gly-OH 1.12g을 사용하여, 실시예 43-c)와 정확히 동일한 방법을 사용하여 겔상의 목적물을 얻었다. 수량 1.02g (51%), 융점 191∼195℃,

d) α,γ-Dab-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂의 제조

초산 30㎖에 di-Z-α,γ-Dab-Arg(NO₂)-Gly-Phe-Phe-Tyr-NH₂600㎎을 용해시키고, 촉매로서 Pd를 사용하여 12시간 동안 접촉환원을 행했다. 촉매를 여가하고 용매를 감압하에서 증발시켜 제거했다. 잔사를 카아복시메틸-세파덱스의 컬럼(1.8㎝×10㎝)에 통과시키고, 선형 구배경사법에 의하여 0.1N초산암모늄의 수용액(500㎖)으로부터 1N 초산암모늄의 수용액(500㎖)을 통과시켜 용출을 행했다. 490∼620㎖의 분획을 모아서 동결건조시켰다.

아미노산 분석 : Arg, 1.00(1), Dab, 1.04(1), Gly, 1.09(1), Tyr, 1.02(1), Phe, 2.13(2) : 펩티드 함량 : 79%.

이하에 본 발명의 실시예에서 본 발명의 폴리펩티드의 치환기 및 아미노산 또는 펩티드 구조식을 기재한다.

[실시예의 목록]

R₁-Arg-R₂-Phe-Phe-R₃

Claims (1)

1. 하기 일반식(Ⅰ)의 폴리펩티드를 제조함에 있어서, R₁에 해당하는 아미노산 자체 또는 R₁이 수소인 아르기닌, 또는 N-말단 아미노산으로서 아미노산 잔기 R₁자체이거나 또는 N-말단 아미노산으로서, R₁이 수소인 아르기닐기를 갖는 폴리펩티드(Ⅰ)의 어느 단편을 폴리펩티드(Ⅰ)의 잔여 단편과 펩티드 축합시키고, 그 축합생성물이 보호기를 갖는 경우에는 그것을 탈리시킴을 특징으로하는 하기 일반식(Ⅰ)로 나타내는 폴리펩티드의 제조법.

   

   상기 식에 있어서,

   R₁은 수소 또는 염기성 또는 중성인 아미노산 잔기,

   R₂는 중성 아미노산 잔기,

   R₃은 NH₂·Tyr-NH₂또는 1∼5개의 아미노산 잔기로 구성된 티로실 펩티드 잔기 또는 그의 티로실 펩티드의 아미드 잔기를 나타내는데, 상기 R₁이 수소인 경우에, R₂는 Pro이다.