KR900000091A - 과글리코실화 되지 않은 b형 간염 바이러스 단백질의 생성방법 - Google Patents

과글리코실화 되지 않은 b형 간염 바이러스 단백질의 생성방법 Download PDF

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Abstract

내용 없음

Description

과글리코실화 되지 않은 B형 간염 바이러스 단백질의 생성방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 pYGperS2+S-1의 제조방법을 도식적으로 나타낸 것이며, preS2+S는발현벡터는 preS2도메인에 "천연" N-연결된 글리코실화 인식부위를 갖음.
제2도는 preS2서열 도메인의 4위치에서 원래의 Asn이 Gln으로 바뀌엇거나(Gln4돌연변이)도메인의 6위치에서 원래의 Thr이 Ala로 바뀜(Ala6돌연변이)에 의해 N-연결된 글리코실화 인식부위가 제거된 돌연변이체 preS2+S ORF를 비교한 개요도.

Claims (52)

  1. S단백질 도메인 한부분이상과 인접하여 연결된 preS도메인 한부분이상을 함유하며, 글리코실화가 최소화되거나 배제되고, preS 및 S외피 단백질의 주항원부위를 나타내는, B형 간염 바이러스(HBV)단백질.
  2. 제1항에 있어서, preS도메인이 preS1영역 한부분이상을 함유하는 단백질.
  3. 제1항에 있어서, preS도메인이 preS2영역 한부분이상을 함유하는 단백질.
  4. 제3항에 있어서, preS1도메인 한부분이상이 추가로 함유하는 단백질.
  5. 제1항에 있어서, 단백질이 이의 DNA 암호화 단편을 재조합 숙주세포내에서 발현시켜 수득되는 단백질.
  6. 제1항에 있어서, HBV단백질의 혈철형(Serotype specificity)이 adw, adr, ayw, ayr 또는 adyw인 단백질.
  7. 제1항에 있어서, 혈청 반응성이 HBV항원활성을 반영하는 단백질.
  8. 제1항에 있어서, HBV폴리펩타이드의 글리코실화가, 폴리펩타이드를 글리코실화 경로중의 유전자를 결여한 숙주세포내에서 발현시킴으로써 제한된 단백질.
  9. 제8항에 있어서, HBV폴리펩타이드의 글리코실화가, 15개 이하의 당잔기로 한정된 단백질.
  10. 제8에 있어서, 숙주세포가 효모 종류인 단백질.
  11. 제10항에 있어서, 효모가 사카로마이세타제(Saccharomyceracea)또는 크립토코카세(Crytococcaceae)과로부터 선택된 단백질.
  12. 제8항에 있어서, 숙주세포의 글리코실화 결핍이 mnn9유전자에 존재하는 단백질.
  13. 제1항에 있어서, 폴리펩타이드의 글리코실화가, 정상적인 글리코실화를 저해하는 외래성 제제의 존재하에서 재조합 세포를 성장시킴으로써, 생체내에서 억제된 단백질.
  14. 제13항에 있어서, 제제가 튜니카마이신인 단백질.
  15. 제1항에 있어서, N-결합된 글리코실화에 대한 아미노산 인식 서열중의 아미노산 1개 이상을 암호화하는 DNA코돈이, 글리코실화될 수 없거나 N-결합된 글리코실화에 대한 아미노산 인식 서열의 일부가 아닌 아미노산으로 변화됨으로써 폴리펩타이드의 글리코실화가 배제된 단백질.
  16. 제15항에 있어서, preS2도메인의 4내지 6번 잔기에 존재한는 인식서열의 아미노산 하나 이상이, 글리코실화될수 없거나 N-결합된 글리코실화에 대한 아미노산 인식 서열의 일부가 아닌 아미노산으로 변화됨으로써 rpe2도메인의 N-결합된 글리코실화가 배제된 단백질.
  17. 제16항에 있어서, preS2도메인의 4위치에 있는 아미노산이 Asn이외의 아미노산인 단백질.
  18. 제16항에 있어서, 4위치에 있는 아미노산이 Gln인 단백질.
  19. 제16항에 있어서, 6위치에 있는 아미노산이 Thr 또는 Ser이외의 아미노산인 단백질.
  20. 제16항에 있어서, 6위치에 있는 아미노산이 Ala인 단백질.
  21. 제15항에 있어서, preS2도메인에 존재하는 4내지 6번 잔기의 N-결합된 글리코실화의 인식서열의 아미노산이 변화됨으로써 preS1+preS2+S펩타이드의 pre1도메인의 N-결합된 글리코실화가 배제된 단백질.
  22. 제1항에 있어서, N-결합된 글리칸 전체 또는 일부가 화학적 또는 효소학적으로 제거됨으로써, 글리코실화가 해독후에 최소화되고나 배제된 단백질.
  23. 제22항에 있어서, N-글리카네이즈, 엔도 D, 엔도 F, 엔드 H 또는 글리코펩티다제 A인 단백질.
  24. 제22항에 있어서, 화학제가 무수 트리플루오로메탄 설폰산 또는 무수 불화수소인 단백질.
  25. 프로모터서열, S도메인 전체 또는 일부에 연결된 HBV preS도메인 한부분 이상을 암호화하는 ORF, 및 적합한 전사종료 서열을 함유하고, ORF중의 뉴클레오타이드가 HBV단백질 산물중의 N-결합된 글리코실화를 배제하기 위해 변화된 발현 카셋트.
  26. 제25항에 있어서, DNA가 HBV preS1+preS2+S폴리펩타이드를 암호화하는 발현 카셋트.
  27. 제25항에 있어서, DNA가 HBV preS2+S폴리펩타이드를 암호화하는 발현 카셋트.
  28. 제25항에 있어서, DNA가 HBV 항원활성을 나타내는 폴리펩타이드를 암호화하는 발현 카셋트.
  29. 제25항에 있어서, DNA에 의해 암호화 되는 혈청형이 adw, ayw, adr, ayr 또는 adyw인 발현 카셋트.
  30. 제25항에 있어서, preS2도메인의 4번 아미노산을 암호화하는 DNA서열이 AAT또는 AAC가 아닌 발현 카셋트.
  31. 제25항에 있어서, preS2도메인의 4번 아미노산을 암호화하는 DNA서열이 CAA또는 CAG인 발현 카셋트.
  32. 제25항에 있어서, preS2도메인의 6번 아미노산을 암호화하는 DNA서열이 AGT, AGC,ACT,ACC, ACA 또는 ACG가 아닌 발현 카셋트.
  33. 제25항에 있어서, preS2도메인의 6번 아미노산을 암호화하는 DNA서열이 GCT 또는 GCC또는 GCA또는 GCG인 발현 카셋트.
  34. 제25항에 있어서, 프로모터 및 터미네이터 서열이 효모내에서 활성적인 발현 카셋트.
  35. 제25항에 따른 발현 카셋트를 함유하는, 사카로마이세타세 또는 크립토코카세 과로부터 선택되는 효모류의 숙주세포.
  36. 제35항에 있어서, 사카로마세스 속으로부터 종이 선택되는 효모류의 숙주세포.
  37. 제36항에 있어서, 종이 사카로마이세스 세레비지에(Saccharcmyces cerevisiae)인 효모류의 숙주세포.
  38. 제37항에 있어서, 숙주세포 종류가 글리코실화 및 만노단백질 생합성에 필요한 모든 효소를 생물학적 활성형태로 함유하는 에스 세레비지에 균주인 효모류의 숙주세포.
  39. 제37항에 있어서, 균주가 CF 42인 효모류의 숙주세포.
  40. 사카로마이세타세 또는 크립토코카세 과로부터 선택되고, 숙주세포가 결손유전자, 또는 글리코실화 경로중의 효소를 암호화하며 발현 카셋트(이것은 프로모터서열 하나이상, S도메인 전체 또는 일부에 결합된 HBV preS도메인 전체 또는 일부를 함유하는 ORF및 적합한 전사종료서열을 함유한다)를 함유하는 유전자를 함유하는 효모류의 숙주세포.
  41. 제40항에 있어서, 결손이 mnn9 유전자에 존재하는 효모류의 숙주세포.
  42. 제41항에 있어서, 균주가 KHY-107인 효모류의 숙주세포.
  43. a.제25항의 발현 카셋트를 함유하는 DNA를 함유하는 사카로마이세타세 또는 크립토코카세 과로부터 선택된 균주중의 숙주세포를 형질전환시키고, b.형질전환된 세포를 배양시킨후, c.생성된 배양세포 또는 성장 배지로부터 폴리펩타이드를 회수함을 특징으로 하여, preS2+S폴리펩타이드를 수득하는 방법.
  44. 제43항에 있어서, 숙주세포가 사카로마이세스(Saccharcmyces)속에서 선택된 종인 방법.
  45. 제44항에 있어서, 숙주세포가 에스 세레비지에인 방법.
  46. 제45항에 있어서, 숙주세포가 에스 세레비지에 균주 CF42인 방법.
  47. a.결손 유전자 또는 글리코실화 경로내의 효소를 암호화하는 유전자를 함유하는 사카로마이세타세 또는 크립토코카세 과로부터 선택된 숙주세포를 발현 카셋트(이것은 프로모터 서열 하나 이상, S도메인 전체또는 일부와 결합된 preS도메인의 전체 또는 일부를 암호화하는 ORF, 및 적합한 전사종료 서열을 함유한다) 를 함유하는 DNA로 형질전환시키고, b.형질전환된 세포를 배양시킨후, c.생성된 배양세포 또는 성장 배지로부터 폴리펩타이드를 회수함을 특징으로 하는, preS2+S폴리펩타이드를 수득하는 방법.
  48. 제47항에 있어서, 숙주세포가 mnn9유전자에서 결손이 유발되는 방법.
  49. 제48항에 있어서, 숙주세포가 에스 세레비지에 균주 KHY-107인 방법.
  50. 생리학적으로 허용되는 희석제중의 제1항의 폴리펩타이드를 함유하는 백신.
  51. 제1항의 폴리펩타이드를 함유하는 진단 시약.
  52. B형 간염에 민감한 생체에 제1항의 폴리펩타이드에 대한 항체를 투여함을 특징으로 하여, B형 간염을 예방하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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