LT3114B - Microbiological method for hydroxilation of carbonic acids of nitrogen containing heterocycles - Google Patents
Microbiological method for hydroxilation of carbonic acids of nitrogen containing heterocycles Download PDFInfo
- Publication number
- LT3114B LT3114B LTIP377A LTIP377A LT3114B LT 3114 B LT3114 B LT 3114B LT IP377 A LTIP377 A LT IP377A LT IP377 A LTIP377 A LT IP377A LT 3114 B LT3114 B LT 3114B
- Authority
- LT
- Lithuania
- Prior art keywords
- nitrogen
- acid
- atom
- microorganisms
- hydroxy
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
- C12P17/12—Nitrogen as only ring hetero atom containing a six-membered hetero ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
- C07D213/79—Acids; Esters
- C07D213/80—Acids; Esters in position 3
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
- C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
- C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D241/24—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
Azoto turinčiomis heterociklinėmis karboninėmis rūgštimis, kurios gali būti hidroksilintos ar nehįdroksilintoš, taip pat laikomos ir jų tirpios, druskos,.pavyzdžiui, šarminės arba amonio druskos.
Azoto turinčios 2-hidroksi-heterociklinės karboninės rūgštys yra svarbūs biologiškai aktyvių medžiagų, sintezės tarpiniai produktai. Pavyzdžiui, 2hidroksinikotino rūgštis yra pradinė medžiaga 2chlornikotino rūgšties (US-PS 4 081 451) gamybai, kuri yra svarbus tarpinis produktas, skirtas gaminti vaistus. (Ann. Pharm. Fr., 1980, 38(3),243-252).
Ligšiol azotą turinčių hidroksi-heterociklinių karbo30 ninių rūgščių mikrobiologiniai gamybos būdai nežinomi.
Šio išradimo tikslas buvo sukurti paprastą ir ekologiškai švaių mikrobiologinį būdą cheminiu požiūriu sunkiai prieinamos azotą turinčios 2-hidrokslhete35 rociklinės karboninės rūgšties gamybai.
£;
' 2 ;
Šis tikslas buvo pasiektas išradime aprašytu būdu pagal išradimo apibrėžties 1 punktą, naudojantis naujais r
mikroorganizmais pagal išradimo apibrėžties 6 punktą.
Pagal šį išradimą šio būdo esmė yra tai, kad azotą turinti heterociklinė karboninė rūgštis, formulės
kurioje Ri ir R2 yra tokie patys arba skirtingi ir 15 reiškia vandenilio atomą, halogeno atomą arba Ci-G^alkilinę grupę, o X ~ azoto' atomą arba ?CR3 funkciją, kur R3 reiškia vandenilio arba halogeno atomą, yra6metilnikotino rūgštį naudojančių mikroorganizmų, turinčių specifinę hidr oksidazę, substratas, kuris paverčiamas į azotą turinčią hidrcksi-heterociklinę karboninę rūgštį, kurios bendra formulė yra , - i ·
kurioje Rt, R2 ir X turi minėtas reikšmes.
. Sąvoka 6-metilnikotino rūgštį naudojantys mikroorganizmai, turintys specifinę hidroksilazę” reiškia:.
jei pavyzdžiui, išvalytų nutekamųjų vandenų inokuliate 35 su 6-metilnikotino rūgštimi auginti biomasę, tai gaunami 6-metilnikotinp rūgštį naudojantys mikroorganizmai, kurie auga naudodami β-metilnikotino rūgštį kaip vienintelį anglies, azoto bei energijos šaltinį.
Jei pagal įprastinius, specialistų taikomus metodus selekcionuoti mikroorganizmus, kurie 6-metilnikotinO rūgštį per 2-hidroksi-6-metilnikotino visiškai suskaldo kaip tarpinį produktą, tai' gaunami mikroorganizmai, turintys specifinę hidroksilazę, t.y., mikroorganizmai, kurie hidroksilina specifinį tarp rūgštinės funkcijos ir azoto atomo esantį vienintelį anglies atomą.
Iš esmės metodui tinka visi mikroorganizmai, kurie selekcionuojami pagal šį principą, pavyzdžiui, iš valytų nutekamųjų vandenų arba iš dirvožemi© mėginių.
Šie mikroorganizmai neaprašyti literatūroje ir yra šio į išradimo sudėtinė dalis. ' / ·.
'.1' 1 '
Šiam būdui tikslinga naudoti mikroorganizmus, žymimus Ki 101 (DSM 6920), taip pat jų palikuonis bei mutantus.
Jie yra 1992. 03. 25 deponuoti firmoje Deutsche
Sammlung fuer Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, /'2Ū1 :':Mascher.gde;rwėg’· 1b, D-3300 Braunschweig.
' Mokslini s Ki .101 (DSM 6920) aprašymas; ‘ ·
| Ląstelių forma Plotis milimikronais Ilgis milimikronais Judrumas | mažytės lazdelės 0.4-0.5 1.0-1.5 |
| Ūseliai Gram-reakcija · | |
| Lizaviraas 3.% KOH | |
| Aminopeptidazė (Cerny) | + ' |
| Sporos | ' - |
| Oksidazė | + |
| Katalazė | |
| Atliekant 16S rRNA sekos | analizę, rūšis nebuvo |
| nustatyta. |
'Vi· 4
Šių mikroorganizmų selekcija ir auginimas, naudojant 6metilnikotino rūgštį» atliekama pagal .įprastus, specialistų taikomus metodus.
- Selekcijos ••-meto '//tikslingai vyksta mikroorganizmų //:skriningas- .aerabin^nisYsąly^mįs,. < ’.
/ Pirmenybė (telkįai^:/(mikroorganizmų. auginimuiskriningo >/-.// metodu/· ramybės būsenų je /Cnepurtantj., ^-/-///7--- ''/.//- -i', -///(-. /7r'//' v- ' > ' t '/''··.' .'.·*
'../ Selekcijos:/'įr//auginįim3../;fflėtu'/-naudojaus' S-metilnikotiso - 7 rūgšties .-kiekis://yra· iki 1 svorio %, labiau -tinka kiekis : .' /iki -0+.5-svorio/T··^. :(''//.
1-5- ../Selekcįja/-.,įi-/''augįnįmas/:;.'.vyksta-//esant(:pe..'7nuo'7.'5.'?iki. 9,'
-/- '-/7- „ypač/tinka/reikšmės- nuo S/.ifci 8.
Selekci jos Ir auginimo metu temperatūra- turi būti tarp
-'.- 15 ir 50°C, 7ypa£/'tlnka.-'--teH^eratura';/tarpv/25/ir·: 40 °C.
/ // ---//¾ 77. '/'.'-// ' ',P^jrastai/,'./;selekcija.v.'įr\ /auginimas vyksta /.(mineralinių,. - : druskų 'Ιοηρβ5ο+/··/ΐ3&Ιοη..-7/Ιχηΐ£3/;'Ισ;&ΐθ7.ιηχηεΓθ1χη^<;.<Ιτη3ΐη.(..-.
/ - terpė, :/kuriQS<sudėtį.s.iaprašyta./lentelėje I. -.7'(//-;7 .-, Jei'.· pasiektas /-/tikslinis aptinis/Tankls/'/esant /650 nm ' tQD65o) nuo- 0,5 iki///100, tai; mikroorganizmai gali būti '.surinkti-.- arba -/-įprast-inlais,-.: ,/;specialistų·/ /naudojamais metodais, arba substratas, azoto turinti heterociklinė karboninė rūgštis,, / tiesiogiai /... pridedama prie mikroorganizmų, kad vyktų norima reakcija (biotransformacija).
Norima biotransformacija tada vyksta pagal įprastus, specialistų taikomus metodus su neaugančiomis ląstelėmis.
Substratai, kurių bendroji formulė II, gali, pavyzdžiui, būti nikotino rūgštis, pirazinkarboninė rūgštis arba jų halogeniniai arba alkilinti C1-Č4 dariniai.
5, '
Halogenintų nikotino rūgšties arba pirazino karboninės rūgšties dariniu tarpe ypač tinka hidroksilinimuį 6chlor-nikotino rūgštis, 5,6-dichlor-nikotino rūgštis ir
5-chlor-pirazinkarboninė rūgštis.
10
C^-Cį Pirazinkarboninės rūgšties darinių ta.rpe ypač hidroksilinimui tinka 5-metilpirazinkarboninė rūgštis.
Substratas į biotransformacijos mišinį gali būti 15 dedamas nuolatos arba vienu kartu. Tikslinga substratą dėti taip, kad jo koncentracija maitinamoje terpėje neviršytų 10 svorio %, o ypač 7 svorio %. /.
* r . Biotransformacijai naudotinos įprastinės, specialistų 20 naudojamos terpės. Ypač tinkamas biotransformacijai žemo molingumo fosfatinis buferis.
Paprastai biotransformacija atliekama naudojant mikroorganizmų suspensiją, kurios optinis tankis esant
650 nm (OD650) yra nuo 0,5 iki 100, ypač tinka optinis tankis nuo 5 iki 50. ‘
Biotransformacija vyksta esant temperatūrai nuo 15 iki 50°C, ypač tinka temperatūra nuo 25 iki 35°C, esant pH nuo 5 iki 9, ypač tinka pH nuo 6,5 iki 7,5.
Po įprastinės transformacijos trukmės nuo 5 valandų iki 3 dienų,' hidroksiįintas produktas, turintis formulę I, gali būti išskirtas taikarit įprastinius specialistų naudojamus metodus, pavyzdžiui, parūgštinant sterilų supernatantą.
Pagal šį metodą pagamintos literatūroje neaprašytos azoto turinčios hidroksi-heterociklinės karboninėj rūgštys, kurių bendra formulė yra
kurioje, tuo a tve j u, kai X yra azoto atomas, Rr ir R2 yra vienodi arba skirtingi ir gali būti vandenilis, halogenas arba C1-C4-alkilii)ė . grupė, tačiau išimtį y sudaro tai, kad Rx ir R2 Vienu metu negali būti vandenilis, taip pat jei X reiškia CH funkciją, Rx ir R2 reiškia halogeno atomą.
15'/././/.../.7.77/(///// '/Y/I Y<( Y.)(Y/( /( //γ y, /7.
Y Ypač tinkami šių naujų junginių atstovai yra 5,6dichlor-2-hidroksi-nikotino rūgštis, 3-hidroksi-5metil-pirazinkarboninė rūgštis ir 3-hidroksi-5-chlorpirazinkarboninė rūgštis.
(y/ky.y / Pavyzdys 1
Mikroorganizmų/ naudojančių 6-metil-nikotino rūgštį, išskyrimas -·-··.··· .··.
./(/./''/ y '''\/X\.';7)'''':':;'.(')'7k':7v'/; y· '/k y 'k..
300 ml talpos Erlenmejerio kolba buvo pripildyta 100 ml mineralinių druskų terpės su 1 mmol 6-metilnikotino rūgšties (1 lentelė) ir sumaišyta su 10 ml valytų nutekamųjų vandenų, paimtų iš firmos LONZA AG Vispe,
Šveicarijoje, arba LONZA gamyklos grunto mėginiais, Vispe ir statiškai inkubuota esant 30°C temperatūrai. Po10 dienų kai kuriuose mėginiuose spektrofotometriniu būdu buvo aptikta 2-hidroksi-6-metilnikotino rūgštis. Šios kultūros vėliau buvo keletą kartų persėtos į
Λ šviežią mineralinių druskų terpę. Po to 2-hidroksi-6metilnikotino rūgštį gaminančių ląstelių suspensijos buvo persėtos į tą pačią terpę, turinčią 1,6 % (s/t) agaro. Po to agaro lėkštelės esant 30°C buvo inkubuotos atmosferoje, turinčioje 4 % 02 ir 96 % N2. Tada pavienės kolonijos perkeltos i, skystą terpę ir inkubuotos statiškoje būklėje. Bakterijų štamas, žymimas KilOl (DSM 6920), augimo metu 6-metil-nikotino rūgšti, pavertė 2-hidroksi-6-metil-nikotino rūgštimi.
Pavyzdys 2 ' 10 Nikotino rūgšties mikrobinė oksidacija i, 2-hidroksinikotino rūgšti, ’
Mikroorganizmai, žymimi KilOl (DSM 6920), buvo ./4/4'·-'.: inkubuoti 800 ml mineralinių druskų terpėje (lentelė 15 I), pridedant 8 .mmol 6-metil-nikotino rūgšties 1 1 talpos .. Fernbacho kolboje, esant 30°C temperatūrai, purtyklėje, esant 100 rpm.’ Inokuliatas sudarę 5% (t/t) .
Po 5 dienų OD650 siekė apie 0,5. Po to ląstelės . surinktos ir vieną kartą praplautos 50molių fosfatinio buferio (pH 7.0).
o Tada ląstelės buvo resuspenduotos 20 ml 50 mM fosfatinio buferio, esant pH 7.0, kuriame yra 200 mg (1.38 mmol) nikotino rūgšties natrio druskos. OD6S0 buvo lygu 20. Po 6 vai. trukusios inkubacijos purtyklėje prie 30°C, atlikus plonasluoksnę chromatografiją, nikotino rūgšties nerasta. Po to biomasė nucentrifuguota ir superriatantas parūgštintas iki pH 2.5, siekiant išsodinti 2-hidroksi-nikotino rūgštį.
'30.' ·' '/ >
Atlikus įfl-NMR (DMSO) analizę, išskirtame produkte nerasta priemaišų. Iš viso buvo išskirta 140 mg (1 mmol) 2-hidroksinikotino rūgšties, tai atitinka 72% išeigą, skaičiuojant pagal nikotino rūgštį.
'35 is
Lentelė 1 ' - .
' 8 o
Mineralinių druskų terpės tirpalai
Koncentruotas tirpalasI:
| NaH2PO4.2H2O | 156.0 g | |
| MSįd//'/ | 10.0 g | |
| K2SO4 | .'7 \ 1.·.'. | 1.2 g |
| pH (koreguojan | la KOH iki) | 7.0 |
| Dist. vanduo | 500.0 ml | |
| p-amino benzoj | ;w>.JL .vI.inZ -.L- -L »- .nė rūgštis | 8.0 mg |
| D-biotinas | 2.0 mg | |
| Nikotino rūgst | sis/;/////// | 20-0 mg |
| Ca-D-pantote,ne | itas | 10.0 mg |
| Pirido ksa1hid i | rochloridas / | 30.0 mg |
| T i amindich1or j | .das | 20.0 mg |
| Ciankobalamine | iš-//.//.' / /-’ / | 10.0 mg |
| Dist.vanduo | 7 100.0 ml, £ | steriliai filtruoti |
| Koncentruotas | tirpalas III: | |
| HCl (37%) | 7.0 ml | |
| FeCl2.4H2O 7 | 7 -1.5 g | |
| ZnCl2 | ' 0.07g | |
| MnCl2.4H2O 7 | //-. 0.1 g | |
| H3BO3 | 0.006 g | |
| CoC12.6H2O | 0.19 g | |
| CuC12;?H2O | 0.002 g | |
| NiCl2.6H2O | 0.024 g | |
| Na2Mo04.2H20 | 0.036 g | |
| Dist. vanduo | 1000.0 ml, | . autoklavuoti prie |
| 121°C, 20 min. |
Koncentruotas tirpalas IV:
NaOH - . 0.5 g
Na2SeO3.5H2O 0.003 g
Na2WO4.2H2O 0.004 g
Dist. vanduo 1000.0 ml, autoklavuoti prie 'r. A ’ \ ’ 121°C, 20 min.
Koncentruotas tirpalas V:
, 5 , · ' -,.'/.
MgCl2.6H2O 40.0 g
CaCl2.2H2O · 7' ' 7' '; 5.0 g - ' /
Dist. vanduo 200.0ml, autoklavuoti prie 121°C, min.
6-metil-nikotino rūgštis (500 mM)
6-metil-nikotino rūgšties Na druska 80.0 g
Dist. vanduo 1000.0 ml, autoklavuoti prie 121°G 20 min.
o Augimo terpė 10 mM 6-metil-nikotino rūgšties *
. Tirpalas I : 25.0 ml
6-metil-nikotino rūgštis 20.0 ml
Dist. vanduo 100010 ml, 'autoklavuoti , prie 121°C 20 min.
' Po sterilizacijos pridedama
| Tirpalas | I | • 0.5 ml |
| Tirpalas | III ' | 1.0 ml |
| Tirpalas | IV | 1.0 ml |
| Tirpalas | v | 0.5 ml |
ίο '
Lentelė 2:
· Pavyzdžiai 3-7 atitinka aprašytąjį 2 pavyzdį. Apibendrinti rezultatai pateikti lentelėje 2.
| Pvz. A',,. ' | Pradinė Eone. medžiaga | OD650 Laikas nm (h) | Produktas | /Išeiga | |
| 3 | .6-chlor- 1%(s/t) / nikotino '\.A-+/A./.-. ?/ rūgšties +'-/./ natrio .··/·. .·.+ druska | 20 | 16 | 6-chlor-2- hidroksinikot ino rūgštis | 70% (gauta) |
| /4'+-'. | 5,6-di- l%(s/t) chlor- -+/(./7/( nikotino rūgšties -'natrio/·-' druska (-:''('(/' | 20 | 16 | 5,6-dichlor- 2-hidroksi- nikotino rūgštis | 20% (a- nalit.) |
| 5 + | Pirazinkar- 0,3% boninės (s/t) rūgšties natrio druska | ','/'·5./'; | 24 ? | 3-hidroksi- pirazinkarbon inė rūgštis | 70% (analit.) |
| /6>' | 5-metil- 0,3% pirazinkar- (s/t) boninės rūgšties natrio druska | 5 - | 24 | 3-hidroksi-5- metil- pirazinkarbon inė rūgštis | 80% (analit.) |
| .''..7'-.' | 5-chlor- 0,3% pirazinkar- (s/t) boninės rūgšties | '- '/. 5 | -' 24 | 3-hidroksi-5- chlor-pira- zinkarboninė rūgštis | 50% (a- nalit.) |
natrio druska
Analitiniai duomenys pavyzdžiui 6:
(3-tidroksi-5-metil-pirazinkarboninė rūgštis) 1H-NMR: (DMSO, 400 MHz) cheminiai poslinkiai (m.d.)
2.4, s; 2.6, s; 3.8, s; 7.8, s.
13C-NMR: (DMSO, 100,5 MHz) cheminiai poslinkiai (m.d.) · .
20, t; 40, m; 130, s; 134, s; 155, s; 164, s; 170, s.
Analitiniai duomenys 7 pavyzdžiui:
(3-hidroksi-5-chlor-pirazinkarboninė rūgštis) ^H-NMR: (D2O ir dioksanas, '400 MHz) cheminiai poslinkiai (m.d.) ,7 7
3.8, s; 4.7, s; 8.0, s.
c 13C-NMR: (D2O ir dioksanas, 100.5 MHz) cheminiai poslinkiai (m.d.) >
132, s; 133, s; 149, s; 164, s; 172, s.
Claims (7)
- IŠRADIMO APIBRĖŽTIS1. Mikrobiologinis būdas, skirtas gaminti azotą turinčias hidroksi-keterociklines karbonines rūgštis ar5 - jų tirpias druskas, kurių bendroji formulė kurioje Rx ir R2 yra vienodi arba skirtingi ir reiškia vandenilio atomą, halogeno atomą arba C1-C4-alkilo15 . grupę; o X - azoto atomą arba CR3 funkciją, kur R3 •R reiškia vandenilį arba halogeno atomą, b e s i s k ir i ant i s tuo, kad azotą turinti heterociklinė karboninė rūgštis ar jos tirpios druskos, kurių bendroji formulė yra . kurioje Rlf R2 ir X turi minėtas reikšmes, yra 6-metilnikotino rūgštį naudojančių mikroorganizmų, turinčių specifinę hidroksilazę, substratas, kurį30 paverčia į produktą, turintį formulę I.
- 2. Būdas pagal 1 punktą, b e s i s k i r i a n t i s tuo, kad substratu naudoja azotą turinčias heterociklines karbonines rūgštis, kurių bendroji35 formulė yra kurioje ir R2 yra vienodi arba skirtingi ir reiškia vandenilio atomą, chloro atomą arba metilo grupę, o X10 reiškia azoto atomą arba CH. .
- 3. Būdas pagal bent vieną iš 1 arba 2 punkto, b e s i sk i r I-a n t i s tuo, kad transformacijai naudoja mikroorganizmus Ki 101 T DSM 6920) arba jų įpėdinius ar15 mutantus.
- 4. Būdas pagal bent vieną rš 1-3 punktų, b e sis k ir i a n t i s tuo, kad transformaciją vykdo pridedant, •substrato vieną kartą ar nuolatos taip, kad substrato20 koncentracija kultūrinėje terpėje neviršytų 10 svorio
- 5. Būdas pagal bent vieną' iš 1-4 punktų, b e ši s k ΙΑ r. i a n t i. s . tuo , kad transformaciją vykdo esant25 temperatūrai nuo 15 iki 50 C, o pH - nuo 5 iki 9.
- 6. Aiikroorganizmai, kurie yra taip atrinkti, kad jie kaip vieningą anglies, azoto ir energijos šaltinį naudoja 6-metilnikotino rūgštį, paversdami ją 230 hidroksi-6-metiĮnikotIno rūgštimi.
- 7. Mikroorganizmai pagal 6 punktą, žymimi KilOl (DSM 6920), taip pat jų įpėdiniai bei,mutantai.35 8. Azoto turinčios hidroksi-heterociklinės karboninės rūgštys, kurių bendroj i formulė i* atomas, -Rį ir Rz yra '' vienodi ; arba skirtingi \/ir/.. gali ' -..būti. . vandenilis, ybaiogenad'-ūehdą;.'.Ci'-7C4taIItLIO;;.;grnpė,:.· tači au' išimti sudaro tai, / /kad+->L\</ir+'-Eg^/vienu /metu / negali būti vandenilis, .· taip pat' j ei X'- ^reiškia CH -ftaįkęi ją,;;. Rr ir i R2 ' reiškia' • 15;.;; ;^9.:/5,'6-Dięhiort2tfaidrdkėiyE5ikofcinp;; rūgštis.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH67292 | 1992-03-04 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| LTIP377A LTIP377A (en) | 1994-06-15 |
| LT3114B true LT3114B (en) | 1994-12-27 |
Family
ID=4192473
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| LTIP377A LT3114B (en) | 1992-03-04 | 1993-03-03 | Microbiological method for hydroxilation of carbonic acids of nitrogen containing heterocycles |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5306630A (lt) |
| EP (1) | EP0559116B1 (lt) |
| JP (1) | JPH06199797A (lt) |
| KR (1) | KR100274205B1 (lt) |
| CN (1) | CN1077748A (lt) |
| AT (1) | ATE153698T1 (lt) |
| CA (1) | CA2091005C (lt) |
| CZ (1) | CZ282939B6 (lt) |
| DE (1) | DE59306547D1 (lt) |
| DK (1) | DK0559116T3 (lt) |
| ES (1) | ES2101887T3 (lt) |
| GE (1) | GEP19991710B (lt) |
| GR (1) | GR3024286T3 (lt) |
| LT (1) | LT3114B (lt) |
| LV (1) | LV10504B (lt) |
| RU (1) | RU2122029C1 (lt) |
| SK (1) | SK279322B6 (lt) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9426293D0 (en) * | 1994-12-28 | 1995-02-22 | Zeneca Ltd | Composition,compound and use |
| US5763232A (en) * | 1996-02-15 | 1998-06-09 | Mitsubishi Chemical Corporation | Method for producing 3-hydroxy nitrogen-containing six-membered cylic compound |
| DE60037819T2 (de) * | 1999-08-27 | 2009-01-08 | Invitrogen Corp., Carlsbad | Metallbindende verbindungen und deren verwendung in zusammensetzungen für zellkulturmedien |
| US6767741B1 (en) * | 1999-08-27 | 2004-07-27 | Invitrogen Corporation | Metal binding compounds and their use in cell culture medium compositions |
| WO2002029021A2 (de) * | 2000-10-06 | 2002-04-11 | Lonza Ag | Biotechnologisches verfahren zur herstellung von hydroxy-stickstoff-heterocyclus-carbonsäuren |
| KR101574567B1 (ko) * | 2007-09-27 | 2015-12-07 | 토야마 케미칼 컴퍼니 리미티드 | 6-플루오로-3-히드록시-2-피라진카보니트릴의 유기아민염 및 그 제조법 |
| SG190772A1 (en) * | 2010-11-12 | 2013-08-30 | Fujifilm Corp | Pyrazino[2,3-d]isooxazole derivative |
| KR102848894B1 (ko) * | 2022-10-26 | 2025-08-21 | 한국원자력연구원 | 합성 니코틴의 감별 방법 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4081451A (en) | 1975-03-20 | 1978-03-28 | Schering Corporation | Process for preparing 2-halogeno nicotinic acids |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6061567A (ja) * | 1983-09-14 | 1985-04-09 | ロンザ リミテツド | ２−ピリジンカルボン酸−ν−オキサイドから２−ヒドロキシピリジンを製造する方法 |
| CH658866A5 (de) * | 1984-02-21 | 1986-12-15 | Lonza Ag | Verfahren zur herstellung von 6-hydroxynikotinsaeure. |
| CH658867A5 (de) * | 1984-02-22 | 1986-12-15 | Lonza Ag | Verfahren zur herstellung von 6-hydroxynikotinsaeure. |
| IN170700B (lt) * | 1989-12-20 | 1992-05-02 | Lonza Ag | |
| US5236832A (en) * | 1990-02-13 | 1993-08-17 | Lonza, Ltd. | Microbiological oxidation of methyl groups in heterocycles |
| US5242816A (en) * | 1990-07-10 | 1993-09-07 | Lonza Ltd. | Microbiological oxidation of alkyl groups in heterocycles |
| CZ279464B6 (cs) * | 1990-09-24 | 1995-05-17 | Lonza A.G. | Způsob hydroxylace methylových skupin v aromatických heterocyklech, hybridní plasmidy pL05 a p L04 uložené v mikroorganismech Pseudomonas putida a Escherichia coli |
| CZ279488B6 (cs) * | 1990-09-25 | 1995-05-17 | Lonza A.G. | Způsob mikrobiologické výroby hydroxylovaných heterocyklů |
| KR100233330B1 (ko) * | 1991-02-04 | 1999-12-01 | 하인즈 모제르 | 6-히드록시피콜린산을 제조하기 위한 미생물학적 방법 |
| US5238830A (en) * | 1991-02-04 | 1993-08-24 | Lonza Ltd. | Microbiological process for the production of 6-hydroxypicolinic acid |
| JPH0728750B2 (ja) * | 1991-03-30 | 1995-04-05 | 池田食研株式会社 | 微生物によるピラジン酸の水酸化物の製造方法 |
| JPH0740951B2 (ja) * | 1991-03-30 | 1995-05-10 | 池田食研株式会社 | 微生物による含窒素複素環化合物の水酸化物の製造方法 |
| FI922125L (fi) * | 1991-06-21 | 1992-12-22 | Lonza Ag | Mikrobidogiskt foerfarande foer framstaellning av 5-hydroxipyrazinkarboxylsyra |
| MX9204902A (es) * | 1991-08-30 | 1993-05-01 | Lonza Ag | Procedimiento microbiologico para la preparacion de acido 6-hidroxipirazincarboxilico. |
-
1993
- 1993-02-24 CZ CZ93272A patent/CZ282939B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1993-02-25 SK SK137-93A patent/SK279322B6/sk unknown
- 1993-02-26 GE GEAP1993559A patent/GEP19991710B/en unknown
- 1993-03-01 ES ES93103221T patent/ES2101887T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-01 DE DE59306547T patent/DE59306547D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1993-03-01 EP EP93103221A patent/EP0559116B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-03-01 DK DK93103221.3T patent/DK0559116T3/da not_active Application Discontinuation
- 1993-03-01 AT AT93103221T patent/ATE153698T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-03-01 RU RU93004665/13A patent/RU2122029C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1993-03-02 LV LVP-93-162A patent/LV10504B/xx unknown
- 1993-03-02 US US08/024,768 patent/US5306630A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-03-03 CN CN93102666A patent/CN1077748A/zh active Pending
- 1993-03-03 LT LTIP377A patent/LT3114B/lt not_active IP Right Cessation
- 1993-03-04 JP JP5043126A patent/JPH06199797A/ja active Pending
- 1993-03-04 CA CA002091005A patent/CA2091005C/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-03-04 KR KR1019930003372A patent/KR100274205B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1993-07-13 US US08/090,951 patent/US5364940A/en not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-07-30 GR GR970401935T patent/GR3024286T3/el unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4081451A (en) | 1975-03-20 | 1978-03-28 | Schering Corporation | Process for preparing 2-halogeno nicotinic acids |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06199797A (ja) | 1994-07-19 |
| CZ27293A3 (en) | 1994-01-19 |
| EP0559116A2 (de) | 1993-09-08 |
| US5364940A (en) | 1994-11-15 |
| CN1077748A (zh) | 1993-10-27 |
| GEP19991710B (en) | 1999-08-05 |
| GR3024286T3 (en) | 1997-10-31 |
| KR100274205B1 (ko) | 2000-12-15 |
| EP0559116B1 (de) | 1997-05-28 |
| CA2091005C (en) | 2001-09-25 |
| US5306630A (en) | 1994-04-26 |
| CZ282939B6 (cs) | 1997-11-12 |
| LTIP377A (en) | 1994-06-15 |
| CA2091005A1 (en) | 1993-09-05 |
| LV10504B (en) | 1996-02-20 |
| KR930019834A (ko) | 1993-10-19 |
| EP0559116A3 (en) | 1994-07-06 |
| SK13793A3 (en) | 1993-10-06 |
| DK0559116T3 (da) | 1997-06-16 |
| SK279322B6 (sk) | 1998-10-07 |
| ATE153698T1 (de) | 1997-06-15 |
| LV10504A (lv) | 1995-02-20 |
| RU2122029C1 (ru) | 1998-11-20 |
| DE59306547D1 (de) | 1997-07-03 |
| ES2101887T3 (es) | 1997-07-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5173412A (en) | Microbiological process for the production of hydroxylated pyrazine derivatives | |
| US4758518A (en) | D-2-haloalkanoic acid halidohydrolase | |
| US5306630A (en) | Microbiological process for hydroxylation of nitrogen-heterocyclic-carboxylic acids | |
| JPH0569514B2 (lt) | ||
| SK278496B6 (en) | Microbiological producing method of 6-hydroxypicolinic acid | |
| US5516661A (en) | Microbiological process for the production of aromatic hydroxy-heterocyclic carboxylic acids | |
| US5270203A (en) | Biologically pure culture of Alcaligenes faecalis DSM 6335 | |
| US4673646A (en) | Production of 2-hydroxymuconic semialdehyde | |
| JP4857114B2 (ja) | ２−ヒドロキシ−４置換ピリジンの製造方法 | |
| KR100471703B1 (ko) | 알칼리게네스속미생물을사용하여헤테로방향족카르복실산을제조하는미생물학적방법 | |
| US5264361A (en) | Microbiological process for the production of 6-hydroxypicolinic acid | |
| US5364939A (en) | Process for the production of carboxylic acid chlorides of aromatic nitrogen heterocycles | |
| KR100216996B1 (ko) | 6-히드록시니코틴산의 미생물학적 제조방법 | |
| US4617156A (en) | 2-hydroxymuconic semialdehyde bisulfite adduct | |
| US5266482A (en) | Agrobacterium useful for the microbiological process for the production of hydroxylated pyrazine derivatives | |
| US4666841A (en) | Production of picolinic acid and pyridine products | |
| CA2163602A1 (en) | Di-and trisubstituted pyridines and their preparation | |
| LT3122B (en) | Microbiological process for preparing malonyl-7-aminocephalosporanic acid derivatives | |
| Clark et al. | Genetic Deregulation of Ethanol-Related Genes | |
| PL184111B1 (pl) | Mikrobiologiczny sposób wytwarzania heteroaromatycznych kwasów karboksylowych |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM9A | Lapsed patents |
Effective date: 20030303 |