LT3208B - Enzyme products for use in the improvement of feed value and conservation of fibrous crops - Google Patents
Enzyme products for use in the improvement of feed value and conservation of fibrous crops Download PDFInfo
- Publication number
- LT3208B LT3208B LTIP482A LTIP482A LT3208B LT 3208 B LT3208 B LT 3208B LT IP482 A LTIP482 A LT IP482A LT IP482 A LTIP482 A LT IP482A LT 3208 B LT3208 B LT 3208B
- Authority
- LT
- Lithuania
- Prior art keywords
- conductivity
- tris
- approximately equivalent
- anionite
- nacl
- Prior art date
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 81
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 81
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 32
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 83
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 41
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 39
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 27
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 22
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 19
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 13
- 239000012614 Q-Sepharose Substances 0.000 claims description 6
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 6
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 50
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 39
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 37
- 239000004460 silage Substances 0.000 description 35
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- 210000003918 fraction a Anatomy 0.000 description 18
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 18
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 16
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 15
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 14
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 11
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 9
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 9
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 8
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 8
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 7
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010008885 Cellulose 1,4-beta-Cellobiosidase Proteins 0.000 description 6
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 6
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 5
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 5
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 5
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 5
- PCTMTFRHKVHKIS-BMFZQQSSSA-N (1s,3r,4e,6e,8e,10e,12e,14e,16e,18s,19r,20r,21s,25r,27r,30r,31r,33s,35r,37s,38r)-3-[(2r,3s,4s,5s,6r)-4-amino-3,5-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy-19,25,27,30,31,33,35,37-octahydroxy-18,20,21-trimethyl-23-oxo-22,39-dioxabicyclo[33.3.1]nonatriaconta-4,6,8,10 Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OS(O)(=O)=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2.O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 PCTMTFRHKVHKIS-BMFZQQSSSA-N 0.000 description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101100321992 Drosophila melanogaster ABCD gene Proteins 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 3
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000035199 Tetraploidy Diseases 0.000 description 3
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 3
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 3
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 3
- 108010084650 alpha-N-arabinofuranosidase Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 3
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 210000002196 fr. b Anatomy 0.000 description 3
- 210000000540 fraction c Anatomy 0.000 description 3
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 2
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 2
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N Gluconic acid Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 2
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 2
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 241000209082 Lolium Species 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 150000004652 butanoic acids Chemical class 0.000 description 2
- 229920005549 butyl rubber Polymers 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 2
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 108010091371 endoglucanase 1 Proteins 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 2
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 2
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N phenolphthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2C(=O)O1 KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004672 propanoic acids Chemical class 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 description 2
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 description 2
- ZNQVEEAIQZEUHB-UHFFFAOYSA-N 2-ethoxyethanol Chemical compound CCOCCO ZNQVEEAIQZEUHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-3,4-dinitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C([N+]([O-])=O)=C1O WDMUXYQIMRDWRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710098247 Exoglucanase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710098246 Exoglucanase 2 Proteins 0.000 description 1
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical class C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 239000007980 Sørensen’s phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 241000223262 Trichoderma longibrachiatum Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000001243 acetic acids Chemical class 0.000 description 1
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N acetic anhydride Substances CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 238000009924 canning Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 108010005400 cutinase Proteins 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 235000013325 dietary fiber Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000009229 glucose formation Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 description 1
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000010813 internal standard method Methods 0.000 description 1
- 230000003871 intestinal function Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 208000006443 lactic acidosis Diseases 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000021309 simple sugar Nutrition 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 239000011345 viscous material Substances 0.000 description 1
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/14—Pretreatment of feeding-stuffs with enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K30/00—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs
- A23K30/10—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder
- A23K30/15—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging
- A23K30/18—Processes specially adapted for preservation of materials in order to produce animal feeding-stuffs of green fodder using chemicals or microorganisms for ensilaging using microorganisms or enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01004—Cellulase (3.2.1.4), i.e. endo-1,4-beta-glucanase
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Physiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Fertilizers (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Chemical Or Physical Treatment Of Fibers (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Description
Šis išradimas yra susietas su skaidulinių kultūrų, kurias vartoja atrajojantys ir vienskrandžiai gyvuliai, maistingosios vertės pagerinimu, apdorojant naujais fermentiniais preparatais. Tiksliau sakant, išradimas susietas su celiulazės fermentų, gautų iš Trichoderma rūšies (kaip pavyzdys, bet nebūdingas), išskirstymu siekiant padidinti jų efektyvumą mikrobams paimant energiją iš celiuliozės ir hemiceliuliozės atrajotojų didžiajame skrandyje ir/arba pagerinant vienskrandžių ir atrajojančių vienskrandžių gyvulių, neturinčių fermentinės sistemos, galinčios susidoroti su skaidulomis, pašaro įsisavinimo procesą. Dar daugiau, šie nauji fermentiniai produktai gali būti panaudoti apdorojant skaidulines kultūras konservavimo metu ir pagerinant silosą, o taip pat apdorojant konservuotą derlių prieš pat šėrimą. Išradimas taip pat susietas su minėtų fermentinių gaminių paruošimo būdais.
sumedėja dėka gyvuliai žymiai Todėl, nežiūrint
Kai skaidulinės kultūros subręsta, energijos, gaunamos iš žemės ploto vieneto, kiekis padidėja, bet metabolinė energija, t. y. celiuliozės ir hemiceliuliozės kiekis sumažėja dėl augalų sumedėjimo, kurio metu celiuliozė, esanti augalų ląstelių sienelėse, sudėtingų skersinių ryšių. Dėl to prasčiau įsisavina sausus komponentus, į tai, kad ekonominiu požiūriu derlius turi būti nuimtas subrendęs, kai yra didžiausia sausų medžiagų išeiga, energijos įsisavinimo apribojimas priverčia nuimti derlių dar nepakankamai subrendusį su mažesne sausų medžiagų išeiga. Dėl mažo sausų medžiagų kiekio iškyla problemos konservuojant. Suardant fermentais tuos skersinius ryšius tarp celiuliozės elementų, galima nuimti ir labiau subrendusį derlių, padidinant išeigą ir nepamažinant, kaip paprastai būna, įsisavinimo galimybės. To paties proceso metų gali atsirasti cukrus, kurį gali naudoti siloso mikrobai, tuo pagerinant tokio derliaus konservavimą nepalankiomis oro sąlygomis, kai sausų medžiagų kiekis yra mažas.
Konservavimas
Skaidulinių kultūrų (žolės, ankštinių augalų, visų javų kukurūzų, sorgo ir t. t.) išsaugojimas vėlesniam panaudojimui šeriant iš esmės priklauso nuo vandens pašalinimo džiovinant (šienas ir panašūs dalykai) arba nuo sudarymo kliūčių orui patekti ir apsaugojimo masės rūgimo toje vietoje, kur epifitinių ardančių mikroorganizmų (mielių, pelėsių ir bakterijų) veikla yra kontroliuojama, augalų medžiagos fermentų veikla apribota. Praktiškai reikalingas pH mažesnis kaip 4,2 yra gaunamas pridedant rūgšties į derlių arba dėka rūgšties, kurią pagamina epifitiniai mikroorganizmai fermentavimo metu.
Pastarosios nuostatos dėl aplinkos apsaugos riboja rūgščių panaudojimą. Šias aplinkosaugos nuostatas stiprina tokios plačiai naudojamos rūgštys kaip skruzdžių rūgštis. Šios rūgštys padidina rūgšties išsiskyrimą iš drėgno derliaus.
Alternatyva yra susieta su natūralia fermentacija. Tačiau natūrali fermentacija būna įvairi ir kartais nepatenkinama. Pavyzdžiui, derliuje, kuriame yra cukraus substratų, gali vyrauti nereikalingi epifitai ir gali trūkti reikalingų pieno rūgšties bakterijų. Būtinos pieno rūgšties bakterijos, t. y. homopieno bakterijos, iš esmės gamina pieno rūgštį. Ši pieno rūgšties gamyba sumažina pH, nesumažinant bent kiek žymiau maistingosios vertės, ypač proteino kokybės. Priešingu atveju, kai vyrauja epifidai, pH sumažinamas labai nežymiai ir gali nepasiekti pakankamai žemos vertės. Tai daro įtaką maistingosioms savybėms ir tuo pačiu gyvulių sugebėjimui įsisavinti medžiagas.
Šią situaciją galima pagerinti pridedant tiek būtinų pieno rūgšties bakterijų į derlių, kad jos vyrautų prieš epifitus. Bet šis metodas nepadeda, kai derliuje yra mažai cukraus. Galima pridėti vandenyje tirpstančių angliavandenių, kurių reikia pieno rūgšties bakterijoms. Pavyzdžiui, galima pridėti melasos, krakmolo ar cukraus, tokio kaip gliukozė, laktozė ar sacharaozė. Tačiau dėl to iškyla kitos problemos. Bendru atveju reikia dėti daug cukraus, t. y. 10-20 kilogramų cukraus tonai derliaus arba tarp 35 ir 45 kilogramų melasos tonai derliaus. Labai sunku tokį didelį kiekį klampios medžiagos įterpti į derlių. Taip pat sunku tolygiai įterpti sausas medžiagas. Kai kurie priedai, tokie kaip gliukozė, laktozė ir sacharozė yra per brangios vartoti tokiu būdu. Be to, pieno rūgšties bakterijos efektyviai nenaudoja krakmolo, nebent yra tam tikras kiekis amilazės, kuri verčia krakmolą į cukrų.
Sudėtingiems angliavandeniams derliuje skaidyti į paprastą cukrų kaip alternatyvą galima naudoti fermentus. Pieno rūgšties bakterijos gali naudoti tokiu būdu gautą cukrų ir gali vyrauti fermentacija. JAV patente Nr. 4 751 089 (autoriai Heikonen ir kiti) yra siūlomas metodas, kaip silosuoti pašarus ir grūdus, pridedant gliukozės oksidazės. Gliukozės oksidazė gamina gliukoninę rūgštį iš gliukozės tirpiuose angliavandeniuose. Gliukoninės rūgšties kaupimas mažina pH. Pagal minėtą JAV patentą kiti fermentai, tokie kaip celiulazė, hemiceliulazė ir B-gliukozidazė gali būti pridėti tikslu padidinti gliukozės gamybą.
Ląstelieną ardančių fermentų panaudojimas tikslu apsaugoti ir padidinti silosuoto pašaro maistingąsias vertybes ir pagerinti apdoroto pašaro skonį, įsisavinimą bei virškinimo spartą taip pat buvo aprašytas JAV paraiškoje Nr. 510 506, pateiktoje 1990 m.
balandžio 18 d. Fermentinė sudėtis, aprašyta šioje paraiškoje, apima bent vieną fermentą iš grupės, susidedančios iš pektinazės, celiulazės, ksilazės amilazės, arabinozidazės, kutinazės, lipazės ir esterazės ir gali būti naudojama kartu su homopieno bakterij omis.
Tačiau ląstelieną ardantys fermentai gali sukelti nepageidautinus šalutinius reiškinius, kai jie yra įdedami į skaidulines kultūras, kuriose yra mažai (t. y. mažiau kaip 25%) sausų medžiagų, būtent nesubrendusiame derliuje. Pavyzdžiui, ląstelieną ardantys fermentai gali padidinti ištekančių medžiagų tėkmę. Ištekančiose medžiagose yra tirpios ląstelinės ,medžiagos. Dėl šių medžiagų ištekančioms medžiagoms būdingas didelis BOD (biocheminis deguonies poreikis), o tai gali sukelti gamtosaugos problemas. Be to, ištekančių medžiagų praradimas sumažina derliaus maistingąsias vertybes. Šie fermentai taip pat gali padidinti pieno rūgšties vertę ir taip pakeisti skaidulinę struktūrą, kad net sumažina gyvulių galimybę įsisavinti. Be to, dėl padidėjusio cukraus kiekio, kurį pagamina fermentai, gali geriau augti mielės ir pelėsiai. Padidėjęs mielių ir pelėsių augimas gali sumažinti aerobinį stabilumą ir pagaminti pavojingus mikotoksinus .
Efektyvumas, su kuriuo gyvuliai įsisavina skaidulas, priklauso nuo mikrobų populiacijos mišinio didžiajame skrandyje. Mikrobų populiacijos sudėtis priklauso nuo pašaro. Galutinių mikrobų poveikio energijos šaltiniams rezultatu yra lakių riebiųjų rūgščių gamyba, kurios veikia kaip pirmtakas gyvulio audiniuose tiekiant procesams ir sintezuojant y. pieną, mėsą ir vilną. Šių energiją metaboliniams gyvulinius produktus, t.
produktų gamybos efektyvumas priklauso nuo lakių riebiųjų rūgščių proporcijų, ypatingai acto, propano ir butano rūgščių.
Pašarai, kuriuose yra daug krakmolo ir/arba cukraus skatina butano ir propano rūgščių sintezę, o skaidulos skatina acto rūgšties sintezę. Reikalingas didžiojo skrandžio fermentacijos tipas priklauso nuo gyvulio gaminamo produkto. Todėl galimybė keisti maitinančiąją terpę ekonomine prasme yra pirmo svarbumo dalykas, ypač galimybė keisti šiuo aspektu skaidulų reaktyvumą, kadangi tai yra pati pigiausia energijos forma.
Vienskrandžiams gyvuliams skaidulos nėra gatavas energijos šaltinis, bet jos yra daugelyje krakmolo šaltinių, t. y. grūdų. Skaidulos taip pat yra labai svarbios, palaikant normalią žarnyno veiklą. Tai susiję su skaidulų reaktyvumu, t. y. katijonų apykaitos geba. Galimybė išlaisvinti energiją iš maisto skaidulinių frakcijų ir pagerinti jo reaktyvumą yra labai svarbus dalykas, susijęs su vienskrandžių gyvulių šėrimu ir jų sveikata.
Fermentiniai produktai, skirti pašarui su mažu kiekiu sausų medžiagų išsaugoti ir pašaro įsisavinimui pagerinti iškelia dvi pagrindines problemas. Visų pirma, efektyviame silosavimo procese fermentai turi užtikrinti reikalingą pH, pieno rūgšties ir angliavandenių koncentracijas ir tuo pačiu mažinti ištekėj imą.
Pašaro apdorojimas pilnu ląstelieną ardančių fermentų mišiniu sumažina skaidulų kiekį silose tirpdant polimerinius angliavandenius. Dėl ypač efektyvaus įsisavinimo visos ląstelių sienelės suyra ir dėl to išteka visos medžiagos su dideliu cukraus kiekiu. Silosavimo metu stimuliuojamas fermentavimas, kaupiasi pieno rūgštis ir pH. Tokiomis sąlygomis bakterijos nuslopintos, bet fermentai toliau gamina monomerinius angliavandenius, kurių dalis gali būti prarasta su ištekančiomis medžiagomis. Silosas, kuriame yra didelė pieno rūgšties koncentracija ir lengvai fermentuojamas cukrus, gali būti pavojingas atrajojantiems gyvuliams, kadangi gali sukelti pieno rūgšties acidozę ir medžiagų įsisavinimo sutrikimus.
Antra, norint užtikrinti efektyvų atrajojančių gyvulių didžiojo skrandžio darbą ir pašaro vartojimą, cukraus kiekis, prieinamas didžiojo skrandžio mikrobams ir skaidulų reaktyvumas turi būti optimizuoti.
Šio išradimo tikslas - užtikrinti toki fermentų paruošimą Įvairioms kultūroms, subrendimo laipsniams ir sausų medžiagų kiekiams, kuris neturėtų trūkumų, būdingų žinomiems paruošimo būdams. Jeigu kalbėti tiksliau, tai šio išradimo tikslas - užtikrinti tokias fermentų kombinacijas, kurios naudingai pakeistų augalų ląstelių struktūrą, užtikrintų tiktai silosavimui reikalingą kiekį; nepadidintų ištekėjimo; neskatintų miltelių arba pelėsių augimo; bet galėtų taip pakeisti augalų polimerų struktūrą, kad jie pasidarytų labiau pasiduodantys tolimesnei hidrolizei didžiajame skrandyje ir juos būtų galima lengviau įsisavinti vienskrandžiame virškinimo trakte.
Kitas šio išradimo tikslas - sukurti minėtų fermentinių produktų paruošimo būdus.
Su nuostaba aptikta, kad komercinių produktų žalingą efektą lemia tam tikros fermentų kombinacijos, esančios komercinės rūšies celiulazėse, naudojamose minėtuose produktuose. Išskiriant minėtus komercinius fermentus, pagal šį išradimą gaunami nauji fermentiniai produktai, kurių kiekviename yra keletas skirtingų fermentų ir turi skirtingas savybes, pagal kurias galima atskirti kiekvienam atskiram tikslui tinkančias frakcijas.
Atskyrimo metodai, taikomi pagal šį išradimą, apima tuos metodus, kurie atskiria komercinės celiulazės dalis pagal proteinų jonu mainų savybes. Pavyzdžiui, yra naudingi chromatografiniai metodai, tokie kaip jonų mainų chromatografija. Naudingose dervose yra QSefarozės ir Mono-Q (abi iš Pharmacia) .
Celiulazės frakcijos įvairiomis kombinacijomis yra naudingos apsaugant skaidulinius pašarus ir pagerinant jų įsisavinimą, kai jais šeriami atrajojantys ir vienskrandžiai gyvuliai. Kiekviena celiulazinė frakcija turi būdingą jai fermentų rinkinį ir todėl skirtingai veikia skaidulinį derlių silosavimo metu ir taip pat skirtingai veikia didžiajame skrandyje ir plonosiose žarnose, kai suėdamas pašaras. Frakcijos gali būti naudojamos po vieną arba kelios iš karto ir/arba su atitinkamais naudingais mikroorganizmais, tokiais kaip mielių bakterijos. Jų parinkimas priklauso nuo reikalingo rezultato kiekvienu konkrečiu atveju. Šie produktai taip pat gali būti naudojami konservuotam pašarui prieš pat šėrimą.
Trumpas figūrų aprašymas
Fig.l. Eliuato, gauto iš komercinės celiulazės anijonitinėje kolonėlėje, sugertis ties 280 nm.
Fig.2. Proteinų komercinėje celiulazėje ir visose keturiose pagrindinėse frakcijose, gautose anijonitiniu chromatografiniu būdu, izoelektriniai taškai.
Fig.3. Eliuato, gauto iš komercinės celiulazės, ir pastarosios keturių pagrindinių anijonitiniu frakcijų, gautų Mono-Q analitinėje anijonitinėje kolonėlėje, sugertis ties 280 nm.
Fig.4. Eliuato, gauto iš komercinės celiulazės frakcijos A CM-Sefarozės (Pharmacia) katijonitinėje kolonėlėje, sugertis ties 280 nm.
Komercinės rūšies ląstelieną ardančių fermentų mišiniuose (tokiuose, kaip pardavinėjami su prekiniu pavadinimu Cytolase-123 iš Genencor) paprastai yra daug įvairių fermentų. Ląstelieną ardančių fermentų, turinčių komercinę vertę, mišiniai gaminami iš Trichoderma rūšies, pavyzdžiui Trichoderma longibrachiatum. Kiti ląstelieną ardančių fermentų mišiniai, gaunami iš bakterinių ar kitų grybinių šaltinių, turi panašias savybes.
Fermentų frakcijų poveikis (naudojant jas po vieną ar kelias iš karto) pašarui, silosui bei gyvuliams buvo nustatytas matuojant didelį kiekį parametrų. Svarbiausi parametrai, susieti su gyvuliais, yra išlaisvinto cukraus kiekis ir jo rūšys bei skaidulų struktūros pakitimai. Tai reguliuoja didžiojo skrandžio fermentacijos procesą ir pašaro įsisavinimą vienskrandžiame trakte. Matuojant skaidulų sugebėjimą išlaisvinti cukrų prieš ir po silosavimo, galima nustatyti pašaro vertės praradimą saugojimo metu. Jeigu struktūrizuotų angliavandenių didžioji dalis paverčiama i rūgštį silosavimo metu, tai konservavimas geras. Iš kitos pusės, tai sumažina energiją, prieinamą didžiojo skrandžio mikrobams, ir todėl sumažina maistingąją vertę. Optimali kombinacija turėtų būti tokia, kuri išlaisvina pakankamai cukraus, kad būtų užtikrintas geras silosavimas, ir tik pagerina didžiojo skrandžio veiklą. Svarbia charakteristika taip pat yra medžiagų ištekėjimo skatinimas, kuris susijęs su cukraus išlaisvinimo aktyvumu.
Kiekvienoje gautoje fermentų frakcijoje yra būdingas atskirų fermentų rinkinys, ir tos frakcijos skirtingai skaidulinę struktūrą, skirtingai išlaisvina veikia cukrų, skirtingai konservuoja silosą ir sukelia skirtingą ištekėjimą.
Remiantis minėtomis savybėmis, galima pasirinkti tinkamiausią frakciją kiekvienam konkrečiam tikslui. Derliui konservuoti turėtų būti pasirinktos frakcijos, kurios per 48 valandas padaro pH apie 4,0 ir sudaro tokį likusio cukraus kiekį, kuris palaiko lactobacilae komponentą. Pasirinktos frakcijos taip pat gali būti panaudotos tikslu pagerinti šviežio ar konservuoto skaidulinio derliaus maistingąją vertę prieš šėrimą. Medžiagų ištekėjimo problemą galima išspręsti pašalinant tas frakcijas, kurios skatina per didelį cukraus išsiskyrimą.
vienskrandžiame trakte C arba su B ir su
Silosuojant skaidulines kultūras, kurios turi mažai sausų medžiagų, tikslinga naudoti fermentų frakcijas B arba C, po vieną arba kartu, kadangi jos užtikrina reikiamą cukraus kiekį, kad gerai vyktų siloso fermentacija, nepadidinant medžiagų ištekėjimo. Frakcija A, nors ir truputį padidina medžiagų ištekėjimą, tačiau padidina ir cukraus grandinėlių laisvų galų skaičių ir padaro skaidulas palankias tolimesnei fermentinei hidrolizei, kurią atlieka didžiojo skrandžio mikroorganizmai, o taip pat lengvesniam įsisavinimui Frakcija A, viena arba su B, su C pagerina didžiojo skrandžio priėjimą prie cukraus. Frakcija A taip pat pagerina skaidulų reaktyvumą, kai naudojama viena arba su B, su C arba su B ir C. Tokiu būdu, nors frakcijoms B, C arba BC taikoma pirmenybė konservuojant derlių su mažu sausų medžiagų kiekiu, kadangi nesukelia medžiagų ištekėjimo, tačiau, pridėjus frakcijos A, pagerėja skaidulų reaktyvumas ir maistingosios vertybės.
Tais atvejais, kai medžiagų ištekėjimas nesudaro problemos, t. y. silosuojamos skaidulinės kultūros turi sausų medžiagų virš 25%, galima naudoti vien tik frakciją A arba kartu su B, su C arba su B ir C, kai norima pagerinti derliaus išsaugojimą ir gyvulių sugebėjimą įsisavinti pašarus. Šios frakcijos kombinacijos taip pat gali būti naudojamos šviežių ar konservuotų skaidulinių kultūrų, apdorotų prieš šėrimą, maištingajai vertei ir stabilumui pagerinti.
Jeigu derlius turi mažai sausų medžiagų, tai medžiagų ištekėjimo problemą galima išspręsti pašalinant frakcijas A ir D. Dėl frakcijos D iš esmės žalingai išteka medžiagos. Frakcija D taip pat neigiamai veikia cukraus išlaisvinimą. Jos dėka per daug angliavandenių paverčiama cukrumi. Be to, frakcija D žymiai sumažina skaidulų aktyvumą.
Kai reikalinga staigiai padidinti cukraus išlaisvinimą, pavyzdžiui prieš gyvulių šėrimą, pirmenybė teikiama frakcijai D ir kombinacijoms su ja. Tai reikalinga atrajojantiems ir ypatingai vienskrandžiams gyvuliams.
Fermentiniai produktai pagal šį išradimą turi keletą pranašumų. Naudojant tinkamas fermentų frakcijas, pavieniui arba tinkamomis kombinacijomis (kartu su egzogeniniais mikroorganizmais ar be jų), žymiai geriau išsaugomos skaidulinės kultūros ir gyvuliai geriau įsisavina pašarus. Ypatingai verta pabrėžti keturis dalykus: pagerinamas derliaus konservavimas, galima išspręsti medžiagų ištekėjimo problemą, gali būti pagerintas cukraus išlaisvinimas ir gali būti pagerinta skaidulų reaktyvumo vertė. Tai pasiekiama, naudojant fermentinius produktus pagal šį išradimą.
n pavyzdys. Citolazės - 123 frakcija
Frakcionavimas atliktas 2 litrų Pharmacia Q-Sefarozės anijonito kolonėlėje. Kiekvienam ciklui 1 litras citolazės-123 (Genencor), kurioje yra apie 200 g proteino (pagal sugertį ties 280 nm) su pH 5,2, buvo pakeistas iki pH 8 ir iki laidumo 20 nM tris-buferio. Tai padaryta ultrafiltarcijos būdu, o po to atskiedžiant vandeniu. Toks fermentų tirpalas supiltas į kolonėlę. Nesugerta medžiaga (frakcija A) buvo išplauta su maždaug 10 litrų 20 mM tris-buferiu. Sugertieji fermentai buvo išskirti, naudojant NaCl su tiesiniu gradientu 0-0,5 M, kurio bendras tūris apie 10 litrų. Kolonėlės eliuentas buvo surinktas. Surištos frakcijos buvo išskirtos, naudojant 20 mM tris-buferį, esant natrio chlorido koncentracijoms 80 mM (frakcija B), 150 mM (frakcija C) ir 500 mM (frakcija D). (Čia ir žemiau frakcijos vadinamos A, B, C ir D jų išskyrimo tvarka.) Frakcionavimo rezultatai parodyti grafiškai fig.1.
Frakcijose A, B, C ir D yra tokie proteino kiekiai (nustatyta pagal sugerti ties 280 nm):
A 27 g
B 18,3 g
C 47,6 g
D 73 g
Manoma, kad frakcijos D uodegoje M NaCl ir aukštesniame lygyje) pėdsakai, o uodegoje stebimą molekulinio svorio W sugeriančioji (t. y. išskyrimas 0,3 proteino yra tiktai sugėrimą lėmė mažo medžiaga.
Frakcijos buvo ištirtos, naudojant izoelektrinį fokusavimą geliuose siekiant atskirti proteinus turinčius izoelektrinį tašką tarp 3 ir 9. Šie rezultatai buvo panaudoti kaip pirštų atspaudai, siekiant palyginti frakcijas, gaunamas iš skirtingų atskyrimo stadijų. Gauti rezultatai parodyti grafiškai fig.l. Svarbiausios frakcijos taip pat buvo tiriamos analitine skystinę chromatografija, naudojant Mono-Q, ir tai leido puikią skiriamąją gebą. Rezultatas grafiškai pavaizduotas fig.3.
Medžiaga, kuri buvo neabsorbuota Q-sefarozėje (frakcija A), buvo frakcionuota, naudojant katijonitinę CMSefarozės kolonėlę. Rezultatai parodyti fig.4. Citolazė buvo padalinta į 4 frakcijas, naudojant Q-Sefarozę. Kiekvienoje iš šių frakcijų yra keletas skirtingų proteinų ir fermentų. Citolazės ir keturių frakcijų Įvairaus aktyvumo pasiskirstymas parodytas 1 lentelėje. Matyti, kad citolazė-123 yra labai sudėtingas fermentų mišinys ir kad net aptiktos frakcijos yra daugiafermentės. Vėliau, jeigu reikia, frakcijos gali būti išvalytos, pavyzdžiui chromatografiniu būdu ar nusodinant.
Kitu būdu fermentai gali būti išskirti, naudojant besiskiriančias pH kombinacijas, druskos koncentracijas ir buferių koncentracijas bei tipus. Pavyzdžiui naudojant 20 mM tris-buferį, kai pH yra 7,6, daugiau yra išskiriama į kolonėlę surištų frakcijų B, C ir D, negu naudojant 20 mm druskos tirpalą frakcijai B, 115 mM - frakcijai C ir 500 mM - frakcijai D. Tačiau šių parametrų pakitimas nepakeičia tvarkos, kuria frakcijos išsiskiria iš kolonėlės po to, kai frakcija A buvo išplauta. Alternatyvios procedūros metu fermentai gali būti išskirti, palaipsniui keičiant pH, buferio ir druskos koncentracijas.
Nefrakcionuota citolazė ir frakcijos A, B, C ir D buvo ištirtos anlitine skystinę chromatografija, naudojant Mono-Q kolonėlę (Pharmacia). Iš rezultatų matyti, kad frakcijos B, C ir D sudarytos iš daugiau kaip vieno komponento. Žiūrėkite fig.3.
Celobiohidrolazė I, celobiohidrolazė II ir endogliukonazė I buvo identifikuotos, naudojant anticelobiohidrolazėsl, anti-celobiohidrolazės II ir antiendogliukonazės I atiserumą (žr. 1 lentelę).
Medžiaga, kuri nebuvo sugerta Q-Sefarozėje (frakcija A), buvo frakcionuota katijonitinėj e CM-Sefarozės kolonėlėje. Q-Sefarozės frakcijos A frakcionavimas CMSefaroze parodė, remiantis fermentų aktyvumo analize, kad medžiaga, kuri išsisikiria ties taškais 4,1 ir 4,2, turi eksterazės aktyvumą; medžiaga, kuri išsiskiria ties taškais 4,3, 4,4 ir 4,5, turi CMC; medžiaga, kuri išsiskiria ties taškais 4,4 ir 4,5, taip pat turi ksilosidazės aktyvumą; medžiaga, kuri išsiskiria maždaug ties tašku 4,4 turi arabinozidazės aktyvumą; madžiaga, kuri išsiskiria ties tašku 4,6, turi gliukozidazės (celobiozė) aktyvumą; medžiaga, kuri išsiskiria ties tašku 4,7, turi ksilanazes aktyvumą.
lentelė.
Citolazės ir frakcijų fermentinis aktyvumas*
| Frakcija, ml | FPU** | CMC** | Celo- binazė | Ksilan- azė | Arabi- nozidazė | Ksilo- zidazė | Ester- azė |
| CITOLAZĖ | 81,2 | 5231 | 71 | 1559 | 8.6 | 2.4 | 0.26 |
| 9,6 | 285 | 64 | 780 | 7.5 | 0.4 | 0.03 | |
| B*** | 1,7 CBH II* | 15 | 0.1 | 2 | 0 | 0 | 0.06 |
| Q* * * | 4,4 EG I* | 633 | 0.7 | 181 | 0 | 0.9 | 0.03 |
| p*** | 9,3 CBH I* | 121 | 0.1 | 28 | 0 | 0.2 | 0.05 |
*FPU=Filtruojančioj o Popieriaus Vienetai išlaisvina 1 mikromolį redukuojančiojo cukraus iš mg vatmano Nr. 1 per 1 mimutę, esant 50°C, pH 4,8 ir reakcijos tūriui 2 ml.
CMC=Karboksimetilceliuliozės vienetai - išlaisvina 1 mikromolį redukuojančiojo cukraus iš 10 mg karboksimetilceliuliozės per 1 minutę, esant 50°C, pH 4,8 ir reakcijos tūriui 2 ml.
Celobiozės vienetas - išlaisvina 1 nanomolį gliukozės per sekundę iš 1,8 mikromolio 4nitrofenil-p-gliukopiranozido, esant 50°C, pH 4,8 ir reakcijos tūriui 2 ml.
Ksilanazės vienetas - išlaisvina 1 mokromolį redukuojančiojo cukraus iš 10 mg ksilano per 1 minutę, esant 50°C, pH 4,2 ir reakcijos tūriui 2 ml.
Arabinozidazės vienetas - išlaisvina 1 nanomolį pnitrofenolio per sekundę iš 3, 6 mikromolio pnitrofenil-a-L-arabinofuranozido, esant 50°C, pH 4,0 ir reakcijos tūriui 2 ml. Ksilozidazės vienetas - išlaisvina 1 nanomolį p-nitrofenolio per sekundę iš 3, 6 mikromolio p-nitrofenil-p-Dksilopiranozido, esant 40°C, pH 5,0 ir reakcijos tūriui 2 ml.
Esterazės vienetas - išlaisvina 1 nanomolį pnitrofenolio per sekundę iš 1,8 mikromolio pnitrofenilo acetato, esant 50°C, pH 4,8 ir reakcijos tūriui 2 ml.
** CBHI yra celobiohidrolazė I, CBHII yra celobiohidrolazė II, EGI yra endogliukanazė I, kaip nustatyta su antiserumu.
*** Frakcijos A, B, C ir D buvo tiriamos, esant jų koncentracijoms proporcingoms pradinėje citolazėje.
pavyzdys. Fermentinių frakcijų, pagamintų iš citolazės-123, įtaka siloso skaidulinei struktūrai ir cheminei sudėčiai
Tetraploidinė svidrė (tręšimas 120 kilogramų azoto į hektarą) buvo rankomis nupjauta, naudojant sterilius būdus, transportuojama atšaldyta ir eksperimentas pradėtas praėjus 5 valandoms po nupjovimo. Sausų medžiagų buvo 13% svorio. Žolė buvo sukarpyta žirklėmis į 1 cm gabaliukus ir sudėta į plastmasinius maišelius po 80 g šviežios žolės i kiekvieną. Vienodi bandiniai buvo apdoroti visomis Citolazės-123 frakcijų A, B, C ir D kombinacijomis. Po apdorojimo fermentais žolė po 25 g buvo sudėta i 160 ml serumo butelius, i kuriuos 5 minutes leistos anaerobinės dujos. Po to buteliai buvo užkimšti butilo guminiais kamščiais. Buteliai buvo laikomi 30°C temperatūroje 6 savaites, ir po to išskirtos neutralaus detergento skaidulos (NDF):
Į butelius su apdorota žole pripilta 75 ml vandens, buteliai 1 valandą kambario temperatūroje purtomi, o po to jų turinys nufiltruojamas per stiklo filtrą. Filtratas buvo naudojamas įvairiems tyrimams, o nuosėdos toliau išskiriamos. Nuosėdų ekstrahavimas neutraliu detergentu vykdomas tokiu būdu: i) nuosėdos buvo kiekybiškai suspenduotos 100 ml tirpale (pH 7), kurio 1 litre buvo 19,6 g Titriplekso III, 3,6 g Na2B4O7, 4,6 g Na2HPO4, 30 g natrio dodecilsulfato ir 10 ml etilenglikolmonoetileterio, ir 40 minučių plakamas, esant 60°C temperatūrai; ii) ekstrakto temperatūra buvo staigiai pakelta iki 75°C ir jis karštas filtruojamas per stiklo filtrą; iii) tada nuosėdos išplautos 10 ml vandens purtant 15 minučių 60°C temperatūroje, o po to temperatūra staigiai pakelta iki 75°C ir suspensija nufiltruota; ši vandens procedūra pakartota; iv) po to nuosėdos buvo išskiriamos, naudojant 100 ml druskos tirpalą, kurio litre buvo 3,64 g KNO3, 1,76 g KC1, 0,17 g NaNO3, 1,92 g Ca (NO3) 2 · 4H2O ir 1,96 g Mg(NO3)2, 6H2O; v) kai temperatūra nukrito nuo 60 iki 40°C, suspensija buvo nufiltruota; vi) vandens procedūra (punktas iii) pakartota 2 kartus; vii) nuosėdos buvo ekstrahuojamos 75 mililitrais acetono 15 min ir nufiltruotos; tai pakartota 4 kartus; viii) gauta NDF buvo per naktį džiovinama ant stiklo filtro, sujungta su vakuumu.
Fermentinių frakcijų poveikis tirpioms siloso dalims
D- ir L- pieno rūgštys buvo išanalizuotos, Boehringer ir Mannheim GmbH fermentinio tyrimo įrenginiu ir tai atlikta pagal gamintojo siūlomą metodiką. Amonis buvo tiriamas iš pašarmintų bandinių, naudojant specifinį elektrodą amoniui.
Tirpus proteinas buvo tirtas Lowry metodu. Tirpūs cukrus buvo tiriami kaip trimetilsililo dariniai GLC DSCh metodu, naudojant kapiliarinę kolonėlę ir temperatūros programą. Buvo panaudotas vidinio etalono būdas su dviem vidiniais etalonais (eritritolio ir fenil-B-D-glikopiranozido).
Rezultatai apibendrinti ir pateikti 2 lentelėje.
lentelė.
Fermentinių frakcijų (pavienių ir įvairių jų kombinacijų) įtaka tirpaus siloso sandarai
| Fermentas | Likęs cukrus silose mg/g | Amonis μηοΐ/g (34)* | Tirpus proteinas ng/g (34) | Pieno rudštis D kaip % DHL |
| - | 0 | 140 | 50 | 46 |
| ABCD | 20 | 119 | 49 | 48 |
| ABC | 5 | 110 | 58 | 51 |
| ABD | 21 | 119 | 60 | 54 |
| ACD | 15 | 156 | 58 | 51 |
| BCD | 44 | 151 | 57 | 45 |
| AB | -7 | 154 | 54 | 48 |
| AC | 2 | 172 | 53 | 48 |
| AD | 22 | 186 | 57 | 50 |
| BC | 22 | 174 | 58 | 46 |
| BD | 45 | 147 | 54 | 55 |
| CD | 13 | 151 | 57 | 47 |
| A | 2 | 149 | 64 | 46 |
| B | -2 | 172 | 52 | 49 |
| C | 0 | 177 | 51 | 48 |
| D | 52 | 179 | 51 | 46 |
SM* - sausa medžiaga
Likusio cukraus kiekis nustatytas neapdoroto kontrolinio pavyzdžio atžvilgiu; teigiamos reikšmės reiškia koncentracijos padidėjimą, neigiamos sumažėjimą. Buvo ištirti monosacharidai ir disacharidai ir jų kiekis pateiktas kaip likusio cukraus. Likusio cukraus kiekis gali atspindėti viso išlaisvinto cukraus silose dėl galimo skirtumo jį suvartojant ir/arba siloso mikroorganizmų augimo.
Silosas buvo gerai apsaugotas ir turėjo pH apie 4 ar dar mažiau ir didelę pieno rūgšties koncentraciją. Dėl pieno rūgšties formos galima pasakyti, kad fermentinis apdorojimas neturėjo kiek nors žymesnės įtakos dviejų formų santykiui. Visais atvejais apie 50% laktato buvo D formos.
BCD, negu
Fermentų frakcijų
Likusio cukraus kiekis, apdorojus frakcijų ABD,
AD, BC, BD ir D kombinacijomis, yra didesnis, tada, kai yra visos frakcijos.
pasirinkimas turėjo aiškią įtaką gliukozės, ksilozės, fruktozės ir arabinozės liekamajai koncentracijai. Kiekvienos iš jų koncentracija buvo susieta su jeigu kurio nors apdorojimo gliukozės koncentracija, tai kitų cukraus rūšių koncentracija, kad frakcija D yra didžiausia cukraus silose. Jeigu veikia frakcija B ir kitų metu bus koncentracijomis; gauta didžiausia didžiausia ir Pasirodė, gamintoj a kombinacija AB, tai gaunama neigiama cukraus gamyba.
Tirpaus proteino koncentracija visuose bandymuose buvo tarp 50 ir 60 mg/g sausos žolės; siloso kokybė, apdorojus fermentais, nepablogėjo. Amonio kiekis nekoreliuoja su jokiomis fermentų frakcijomis.
2. Fermentų frakcijų įtaka skaidulinei struktūrai NDF struktūros analizė
Gauta NDF buvo pasverta ir išreikšta procentais nuo pradinės medžiagos sausų madžiagų kiekio.
Pasidavimas fermentinei hidrolizei buvo nustatytas, atliekant NDF hidrolizę pilnu ląsteles ardančių fermentų mišiniu Citolazė-123 (50 000 HEC/g). Prieš naudojimą fermentų preparatai buvo praleisti pro Sephadex G-25 GPC kolonėlę siekiant pašalinti visus mažo molekulinio svorio junginius, kurie gali turėti įtakos nustatant redukuojantį cukrų. 20 mg NDF buvo įdėta į mėgintuvėlį ir įpilta 9, 6 ml Sorensen fosfato buferio, pH 7. Po 15 valandų inkubacinio laikotarpio kambario temperatūroje buvo pridėta 0,4 ml fermento ir nustatyta pradinis cukraus išlaisvinimo greitis. Po vieną mililitrą bandinio buvo paimama, praėjus 0,1, 2,5 ir 5 valandoms. Kievienas bandinys nedelsiant buvo sumaišytas su 4 ml dinitrosalicilo rūgšties (DNS) tirpalo, kuris naudojamas redukuojančiam cukrui tirti. Šis reagentas nedelsiant nutraukia fermentinę reakciją.
Tada bandiniai 5 minutes pakaitinami verdančio vandens vonelėje, staigiai atšaldomi ledo vonelėje ir išmatuojama sugertis ties 540 nm. Rezultatai išreikšti redukuojančio cukraus, išlaisvinto per valandą iš gramo NDF, moliais.
NDF redukukcinių galų kiekis buvo analizuojamas modifikuotu DNS metodu. 20 mg NDF buvo įdėta į mėgintuvėlį ir įpiltas 1 ml vandens, mišinys laikomas 1 valandą kambario temperatūroje, įpilta 4 ml DNS, mišinys 5 minutes pakaitinamas verdančio vandens vonelėje, staigiai atšaldomas ledo vonelėje, nufiltruojamas ir išmatuojama filtrato sugertis ties 540 nm. Rezultatai išreikšti moliais gramui NDF.
Reaktyvių hidroksilo grupių skaičius nustatytas, analizuojant acetilo grupių, įtrauktų į vėliau vykstantį acetilinimo procesą, skaičių. Trigubi 20 mg NDF bandiniai buvo sumaišyti su 2 ml piridino. Įpilta 200 μΐ 14C - acto rūgšties anhidrido (specifinis aktyvumas 1,04-10 sk.per min moliui) ir mišinys laikomas 30 min užlydytuose mėgintuvėliuose, esant 70°C temperatūrai. Filtratas pašalinamas, o nuosėdos du kartus išplaunamos 2 ml šviežiai perdistiliuoto piridino, o po to 4 kartus vandeniu, naudojant ultragarsinę vonią siekiant suintensyvinti nekovalentiškai surišto acetato išplovimą iš skaidulų. Paskutinio plovimo tirpalas tirtas radioktyvumo požiūriu ir nustatyta, kad neviršija foninio lygio. Skaidulos, į kurių molekules buvo įterpta acetilinė grupė, buvo 5 valandas hidrolizuotos, naudojant 2 ml 4N HCl, esant 90°C, o po to išmatuotas neutralizuoto filtrato radioktyvumas. Acetilo įterpimas išreikštas mikromoliais gramui NDF.
Gauti rezultatai apibendrinti 3 lentelėje.
lentelė.
Fermentinių frakcijų (pavienių ir įvairių jų kombinacijų) poveikis skaidulų struktūrai
| Fermentas | NDF % SM | Redukuojantys galai* μτηοΐ/g (NEF) | Cukraus išlaisvinimo sparta* Įjmol/g (NDF) h | Acetiližavimas * JJmol/g (NDF) |
| - | 35 | 0 | 0 | 0 |
| ABCD | 18 | -3 | -144 | 17 |
| ABC | 24 | 2 | 45 | -13 |
| ABD | 20 | -3 | -143 | 55 |
| ACD | 20 | -3 | -139 | 17 |
| BCD | 23 | -6 | -140 | 29 |
| AB | 27 | 2 | 58 | -62 |
| AC | 27 | 2 | 92 | -13 |
| AD | 21 | -3 | -121 | 55 |
| BC | 28 | 0 | -49 | -2 |
| BD | 25 | -6 | -138 | 116 |
| CD | 23 | -6 | -141 | 29 |
| A | 30 | 2 | 173 | -62 |
| B | 32 | 0 | -40 | 0 |
| C | 31 | 0 | -53 | -2 |
| D | 26 | -6 | -125 | 116 |
Kiekiai yra pateikiamo nulinio kontrolinio kiekio 15 atžvigiu.
SM yra sausos medžiagos.
Jeigu gaminant silosą yra naudojami fermentai, tai NDF vertės sumažėja. Apdorojimas, naudojant fermentų mišinį ABCD, sumažina NDF iki 18%, palyginus su 35%, kai silosas neapdorotas fermentais. Gautas NDF sumažėjimas mažesnis, kai nebuvo frakcijos D. Fermentų frakcija D turi didžiausią įtaką NDF tirpumui. Tada, kai frakcija D kombinuojama su kitomis frakcijomis, labai efektyviai tirpdomos skaidulos. Tuo galima paaiškinti tokį dalyką, kad, esant frakcijai D, redukuojančių galų skaičius mažėja. Manoma, kad frakcija D sistemingai ardo skaidulas ir tokiu būdu masę daro tirpia. Laisvų galų skaičius pasidaro mažesnis, negu kontrolinio fermentais neapdoroto bandinio atveju. NDF tirpumui taip pat turėjo įtakos ir frakcija A kombinacijose su frakcijomis B ir C. Frakcija A taip pat pagerina reaktyvumą, galbūt dėl redukuojančių galų skaičiaus padidinimo.
Silosavimo metu reikia taip pakeisti skaidulas, kad didžiojo skrandžio mikrobams būtų lengviau jas ardyti ir kad jos būtų reaktyvesnės vienaskrandžiame trakte. Didžiajame skrandyje skaidulų pirmiausiai imasi ląsteles ardantys mikrobai ir jų fermentai. Fermentinio cukraus išlaisvinimo pradinis greitis buvo nustatytas kaip NDF pasidavimas minėtam ardymui. Vertės lyginamos su bandiniais, kurie neapdoroti fermentais; teigiamos vertės rodo, kad cukraus prieinamumas didžiojo skrandžio mikrobams pagerėja; neigiamos vertės rodo, kad silosavimo metu per daug cukraus paversta į rūgštis. Matyti, kad fermentų frakcija D, viena ar kombinacijose su kitomis frakcijomis, yra mažiau tinkama silosavimui dėl didelio cukraus išlaisvinimo efektyvumo. Frakcija A turi stiprią teigiamą įtaką pradinei cukraus gamybai. Gliukozė ir celobiozė sudaro 95% išlaisvinto cukraus. Kai naudojamos frakcijos A ir D, frakcija D buvo vyraujanti. Viena frakcija A arba kartu su B, C ar BC palengvina didžiojo skrandžio mikrobams priėjmą prie cukraus ir ta prasme naudinga.
NDF frakcijų acetilinimas iš fermentais apdoroto siloso parodė, kad angliavandenių pašalinimas iš ląstelės sienelių nesumažina reaktyvių hidroksilo grupių skaičiaus. Priešingai, efektyviai anglianvandenius skaidantys fermentai padidino 14C-acetilo įterpimą į apdorotas skaidulas. Labiausiai tirpumą skatinančios fermentų kombinacijos ir pati citolazė padidina paveiktų hidroksilo grupių skaičių. Frakcija D turėjo didžiausios Įtakos hidroksilo grupių skaičiui. Galimas dalykas, kad paveiktos hidroksilo grupės buvo fenoliniai lignino pakaitai. Pasirodė, kad frakcija C yra priešinga frakcijai D. Frakcija A veikė priešinga kryptimi, negu frakcija D.
Remiantis šiuo išradimu, galima keliais būdais pakeisti netirpias siloso dalis, parenkant atitinkamas fermentų kombinacijas. Didžiausias poveikis gautas panaudojant arba pašalinant, kur įmanoma, frakcijas A ir D, po vieną arba kombinacijose. Kai silosuojamas pašaras ir yra fermentų frakcija D kokioje nors kombinacijoje, susidaro netirpi frakcija, kuri vėliau negali būti fermentiškai hidrolizuojama naudotu fermentų mišiniu. Frakcijos A poveikis preišingas; silosas, pagamintas naudojant frakciją A, bet nenaudojant frakcijos D, labiau pasiduoda tolimesnei fermentinei hidrolizei, negu kontrolinis fermentais neapdorotas bandinys. Nors ne visos frakcijos ir frakcijų kombinacijos buvo smulkiai aptartos, akivaizdu, kad visos galimos frakcijų kombinacijos patenka į šio išradimo rėmus.
pavyzdys. Fermentų frakcijų, pagamintų iš citolazės123, įtaka nedžiagų ištekėjimui ir siloso, pagaminto iš tetraploidinės svidrės, cheminei sudėčiai
Tetraploidinė svidrė (tręšimas 120 kilogramų azoto į hektatrą) buvo rankomis nupjauta, naudojant sterilius būdus, transportuojama atšaldyta ir eksperimentas pradėtas praėjus 5 valandoms po nupjovimo. Sausų medžiagų buvo 13% svorio, pH 6,35. Žolė buvo sukarpyta žirklėmis į 1 cm gabaliukus ir sudėta į plastmasinius maišelius po 80 g šviežios žolės į kiekvieną. Vienodi bandiniai buvo apdoroti kai kuriomis citolazės-123 frakcijų A, B, C ir D kombinacijomis. Po apdorojimo fermentais žolė po 5 g buvo sudėta į 20 ml anaerobinių kultūrų mėgintuvėlius, į kuriuos 5 minutes leistos anaerobinės dujos. Po to mėgintuvėliai buvo užkimšti butilo guminiais kamščiais. Kiekvienam tyrimui paruošta po devynis vienodus bandinius. Mėgintuvėliai buvo laikomi 30°C temperatūroje ir po vieną iš kiekvienų devynių bandinių atidaroma praėjus 1, 2 ir 4 savaitėms. Visas mėgintuvėlio turinys (5 g) buvo sunaudotas kaip bandinys tyrimui.
Medžiagų ištekėjimo nustatymas. Vieno mėgintuvėlio turinys (5 g) buvo patalpintas į išbalansuotą perforuotą plastmasinį mėgintuvėlį, kuris įdėtas į 50 ml centrifuginį vamzdelį su 2 cm tarpine dugne. Mėgintuvėliai 20 minučių buvo centrifuguojami Sorvall centrifūgoje SS- 34, esant 1000 apsisukimų per minutę. Perforuotas vidinis mėgintuvėlis buvo vėl subalansuotas ir apskaičiuotas ištekėjusios medžiagos kiekis (medžiagos ištekėjimas = 5 - nuosėdų svoris).
Rūgščių gamyba buvo ištirta keliais skirtingais būdais. Ištekėjusių medžiagų silose pH išmatuotas, praėjus 1, 2 ir 4 savaičių inkubaciniam laikotarpiui. Tuo pačiu metu nustatytos titruojamos rūgštys. Šiame tyrime nebuvo įtrauktos rūgštys druskų pavidalu, kai ištekėjusių medžiagų pH vertė 4. Pieno rūgštis yra viena iš rūgščių, kurių pH vertė mažesnė negu pradinis titravimo pH. Pieno rūgštis ir acto rūgštis buvo atskirai tiriamos, naudojant HLPC su H* pavidalo kolonėle ir UV detektavimą ties 210 nm.
Rūgšties titravimas. Į mėgintuvėlį, kuriame yra 5 g 5 siloso, įpilama 15 ml distiliuoto vandens. Mėgintuvėlis purtomas kambario temperatūroje vieną valandą; jo turinys nufiltruojamas per 0,2 pm filtrą ir padalijamas į tris lygias dalis. Du bandiniai naudojami organinių rūgščių analizei, o trečiasis - rūgšties titravimui.
Bandinys atskiestas distiliuotu vandeniu ir titruotas, naudojant 0,05 M NaOH, iki neutralumo. Indikatoriumi naudotas fenolftaleinas.
Rezultatai apibendrinti 4 lentelėje.
lentelė.
Citolazės ir fermentų frakcijų įtaka medžiagų ištekėjimui ir siloso cheminei sudėčiai
| Fermen- tas | Pfedžiagų ištekėjimas 28 diena | pH 7 diena | pH 28 diena | Pieno rūgštis 7 diena | Pieno rūgštis 28 diena | Titras 7 diena | Titras 28 diena |
| - | 0.45 | 4.04 | 4.02 | 145 | 171 | 107 | 135 |
| ABCD | 0.65 | 3.96 | 3.95 | 164 | 196 | 138 | 173 |
| ABC | 0.53 | 4.15 | 4.06 | 148 | 175 | 117 | 147 |
| ABD | 0.63 | 3.99 | 3.91 | 184 | 223 | 138 | 173 |
| ACD | 0.61 | 4.05 | 3.96 | 171 | 206 | 123 | 154 |
| BCD | 0.56 | 4.12 | 4.04 | 155 | 184 | 116 | 146 |
| AB | 0.52 | 4.11 | 4.03 | 156 | 186 | 117 | 147 |
| AC | 0.49 | 4.17 | 4.08 | 154 | 183 | 104 | 131 |
| AD | 0.59 | 4.08 | 4 | 176 | 206 | 123 | 154 |
| BC | 0.46 | 4.11 | 4.03 | 155 | 184 | 113 | 141 |
| BD | 0.55 | 4.09 | 4 | 159 | 190 | 116 | 146 |
| CD | 0.56 | 4.09 | 4 | 139 | 193 | 111 | 139 |
| A | 0.48 | 4.2 | 4.12 | 150 | 177 | 104 | 131 |
| B | 0.45 | 4.08 | 3.99 | 151 | 179 | 113 | 141 |
| C | 0.46 | 4.07 | 3.99 | 161 | 193 | 107 | 135 |
| D | 0.54 | 4.12 | 4.04 | 153 | 181 | 111 | 139 |
Vertės yra pateiktos šviežio svorio pagrindu.
Iš aukščiau pateiktų rezultatų matyti, kad silosas buvo gerai išsaugotas, turi pH apie 4 ar net mažiau ir didelę pieno rūgšties koncentraciją.
Medžiagų ištekėjimas iš drėgno derliaus priklauso nuo fermentų frakcijų A ir D, o pastaroji frakcija ypatingai aktyvi. Fermentų frakcija D lemia žalingų medžiagų ištekėjimą. Naudojant frakciją A, medžiagų ištekėjimas sustoja po 14-tos dienos, o naudojant frakciją D, ištekėjimas nesustoja per visą silosavimo periodą.
pavyzdys
Manoma, kad dariniai, tokie kaip kombinacijos ABC, ACD, AC ir ABD, o taip pat ir kitos kombinacijos, gali būti pagaminti genetiniu būdu iš celiulazės šaltinio. Pavyzdžiui, celobiohidrolazės I, celobiohidrolazės II, endogliukanazės I ir jų kombinacijų fermentų genų kodavimas gali būti ištrintas iš Trichoderma rūšies. Laukiama, kad celiulazė, išskirta iš rūšių su trūkstamais genais, turėtų panašią įtaką derliui, kaip atitinkamų celiuliozės frakcijų, gautų iš anijonitinės kolonėlės, kombinacijos.
Taip pat manoma, kad išvalyta ar praturtinta fermentais celiulazė turės panašią įtaką derliui, kaip ir celiulazės atitinkamos kombinacijos, frakcionuotos jonitinėje kolonėlėje.
Claims (16)
- IŠRADIMO APIBRĖŽTIS1. Fermentų kompozicija, apimanti daugiafermentinę celiuliazinę medžiagą, besiskirianti tuo, kad bent apie 99% minėtos celiulazinės medžiagos susijungia su Q~sefarozės anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui, maždaug ekvivalentiškam 20mM tris-buferio laidumui.
- 2. Fermentų kompozicija pagal 1 punktą, besiskirianti tuo, kad bent apie 99% šios celiulazinės medžiagos susijungia su anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui, maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio, kuriame yra 0,08 M NaCl, laidumui.
- 3. Fermentų kompozicija pagal 1 punktą, besiskirianti tuo, kad bent apie 99% šios celiuliazinės medžiagos susijungia su anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui, maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio, kuriame yra 0,15 M NaCl, laidumui.
- 4. Fermentų kompozicija pagal 1 punktą, besiskiri a t i tuo, kad bent apie 99% šios celiuliazinės medžiagos (i) susijungia su anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio, kuriame yra 0,08 M NaCl, laidumui ir (ii) išsiplauna iš minėto anijonito, esant laidumui maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio, kuriame yra 0,15 M NaCl, laidumui.
- 5. Fermentų kompozicija pagal 1 punktą, besiskirianti tuo, kad bent apie 99% šios celiuliazinės medžiagos (i) susijungia su anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui maždaug apie 20 mM tris-buferio laidumui ir (ii) išsiplauna iš šio anijonito, esant laidumui maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio, kuriame yra 0,15 M NaCl, laidumui.
- 6. Fermentų kompozicija pagal 1 punktą, besiskirianti tuo, kad bent apie 99% šios celiuliazinės medžiagos (i) susijungia su anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui maždaug apie 20 mM tris-buferio laidumui ir (ii) išsiplauna iš šio anijonito, esant laidumui maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio, kuriame yra 0,08 M NaCl, laidumui.
- 7. Fermentų kompozicija pagal 1 punktą, besiskirianti tuo, kad bent apie 99% šios celiuliazinės medžiagos (i) susijungia su anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui maždaug 20 mM tris-buferio laidumui ir (ii) išsiplauna iš minėto anijonito, esant laidumui maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio, kuriame yra maždaug 0,01-0,08 M NaCl, laidumui ir laidumui maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio, kuriame yra daugiau kaip maždaug 0,15 M NaCl, laidumui.
- 8. Fermentų kompozicija, apimanti daugiafermentinę celiuliazinę medžiagą, besiskirianti tuo, kad bent apie 95% šios celiulazinės medžiagos yra celiuliazinė medžiaga, kuri (i) nesusijungia su Qsefarozės anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio laidumui, (ii) susijungia su minėtu anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio, kuriame yra 0,08 M NaCl, laidumui, arba (iii) yra (i) ir (ii) punktų kombinacija.
- 9. Fermentų kompozicija pagal 8 punktą, besiskirianti tuo, kad bent apie 95% šios celiuliazinės medžiagos yra celiuliazinė medžiaga, kuri (i) nesusijungia su anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio laidumui, (ii) susijungia su minėtu anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio, kuriame yra 0,15 M NaCl, laidumui arba (iii) yra (i) ir (ii) punktų kombinacija.
- 10. Fermentų kompozicija pagal 8 punktą, besiskirianti tuo, kad bent apie 95% minėtos celiuliazinės medžiagos nesusijungia su anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio laidumui.
- 11. Fermentų kompozicija pagal 8 punktą, besiskirianti tuo, kad bent apie 95% minėtos celiulazinės medžiagos yra celiuliazinė medžiaga kuri (i) nesusijungia su anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui maždaug ekvivalentiškam laidumui 20 mM trisbuferio, (ii) susijungia su minėtu anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui maždaug ekvivalentiškam 20 mM trisbuferio, kuriame yra tarp maždaug 0,08 ir 0,15 M NaCl, laidumui arba (iii) yra (i) ir (ii) punktų kombinacija.
- 12. Fermentų kompozicija, apimanti daugiafermentinę celiulazinę medžiagą, besiskirianti tuo, kad bent apie 95% minėtos celiulazinės medžiagos yra celiuliazinė medžiaga, kuri (i) nesusijungia su anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui maždaug ekvivalentiškam laidumui 20 mM tris-buferio, kuriame yra maždaug 0,08 M NaCl, (ii) susijungia su minėtu anijonitu, esant pH maždaug 8 ir laidumui maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio, kuriame yra 0,15 M NaCl, laidumui, arba (iii) yra (i) ir (ii) punktų kombinacij a.
- 13. Fermentų kompozicija pagal 12 punktą, besiskirianti tuo, kad joje bent apie 95% minėtos celiuliazinės medžiagos nesusijungia su anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio, kuriame yra maždaug 0,08 M NaCl, laidumui.
- 14. Fermentų kompozicija, apimanti daugiafermentinę celiulazinę medžiagą, besiskirianti tuo, kad joje bent apie 95% minėtos celiuliazinės medžiagos nesusijungia su anijonitu, esant pH apie 8 ir laidumui5 maždaug ekvivalentiškam 20 mM tris-buferio, kuriame yra maždaug 0,15 M NaCl, laidumui.
- 15. Pašarinių kultūrų apdorojimo būdas, besiskiriantis tuo, kad į šias kultūras prideda10 celiuliazinės medžiagos tirpalą apibūdintos pagal bet kurį iš 1-14 punktų.
- 16. Pašarinių kultūrų apdorojimo būdas pagal 15 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėtą15 celiuliazės tirpalą prideda į augančias kultūras, nuimtas kultūras arba nuimtas kultūras 48-ių valandų laikotarpyje prieš šeriant gyvulius šiomis kultūromis.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US86703992A | 1992-04-10 | 1992-04-10 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| LTIP482A LTIP482A (en) | 1994-09-25 |
| LT3208B true LT3208B (en) | 1995-03-27 |
Family
ID=25348946
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| LTIP482A LT3208B (en) | 1992-04-10 | 1993-04-03 | Enzyme products for use in the improvement of feed value and conservation of fibrous crops |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5948454A (lt) |
| EP (1) | EP0634899B1 (lt) |
| AT (1) | ATE163506T1 (lt) |
| AU (1) | AU3954093A (lt) |
| CA (1) | CA2133748C (lt) |
| DE (1) | DE69317278T2 (lt) |
| LT (1) | LT3208B (lt) |
| WO (1) | WO1993020714A1 (lt) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4239677A1 (de) * | 1992-11-26 | 1994-06-01 | Henkel Kgaa | Viskose wäßrige Tensidzubereitungen |
| US6268196B1 (en) | 1993-12-17 | 2001-07-31 | Genencor International, Inc. | Method and compositions for treating cellulose containing fabrics using truncated cellulase enzyme compositions |
| US5861271A (en) * | 1993-12-17 | 1999-01-19 | Fowler; Timothy | Cellulase enzymes and systems for their expressions |
| US7005128B1 (en) | 1993-12-17 | 2006-02-28 | Genencor International, Inc. | Enzyme feed additive and animal feed including it |
| GB9424661D0 (en) * | 1994-12-07 | 1995-02-01 | Biotal Ltd | Enzymes, microorganisms and their use |
| US5981835A (en) * | 1996-10-17 | 1999-11-09 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Transgenic plants as an alternative source of lignocellulosic-degrading enzymes |
| US6818803B1 (en) | 1997-06-26 | 2004-11-16 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Transgenic plants as an alternative source of lignocellulosic-degrading enzymes |
| EP1297004A2 (en) | 2000-06-15 | 2003-04-02 | Prokaria ehf. | Thermostable cellulase |
| US6506423B2 (en) | 2000-12-21 | 2003-01-14 | Kansas State University Research Foundation | Method of manufacturing a ruminant feedstuff with reduced ruminal protein degradability |
| US6750051B2 (en) | 2001-04-10 | 2004-06-15 | University Of Kentucky Research Foundation | Compositions and methods for enhancing fiber digestion |
| NO319624B1 (no) | 2003-09-15 | 2005-09-05 | Trouw Internat Bv | Fiskefôr for laksefisk i ferskvann og anvendelse av slikt fôr. |
| US7718415B1 (en) | 2003-09-23 | 2010-05-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Acetyl esterase producing strains and methods of using same |
| US20070110780A1 (en) * | 2005-11-14 | 2007-05-17 | Nzymsys, Ip Inc. | Building material surface treatment biocide, and method for treatment of building material surfaces |
| US20070280919A1 (en) * | 2006-05-30 | 2007-12-06 | Gorton Stephen J | Produce-treatment composition and method for treatment of fresh produce |
| DE102010020640A1 (de) * | 2010-05-15 | 2011-11-17 | Pfeifer & Langen Kommanditgesellschaft | Futtermittel und Futtermittelzusatzstoff |
| EP3636078B1 (en) * | 2013-07-03 | 2022-03-02 | The Coca-Cola Company | Systems and methods for automatically coring, or isolating fiber or whole juice sacs from citrus fruit |
| WO2018085450A2 (en) | 2016-11-02 | 2018-05-11 | Biofilm Ip, Llc | Systems and methods for processing cereal grasses |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US510506A (en) | 1893-12-12 | Combination-valve connection for water-gas apparatus | ||
| US4751089A (en) | 1982-11-02 | 1988-06-14 | Suomen Sokeri Oy | Composition and method for ensilaging fodder and grain |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5234546B1 (lt) * | 1976-01-27 | 1977-09-03 | ||
| GR74002B (lt) * | 1979-02-12 | 1984-06-06 | Sanofi Sante Animale S A | |
| FR2537991A1 (fr) * | 1982-12-20 | 1984-06-22 | Sanders | Procede pour stabiliser des enzymes liquides, enzymes liquides ainsi stabilisees et aliment renfermant de telles enzymes notamment pour des animaux monogastriques |
| US5298405A (en) * | 1986-04-30 | 1994-03-29 | Alko Limited | Enzyme preparations with recombinantly-altered cellulose profiles and methods for their production |
| FI82354C (fi) * | 1988-11-14 | 1991-03-11 | Valio Meijerien | Konservering av faerskfoder. |
| US5110735A (en) * | 1989-09-26 | 1992-05-05 | Midwest Research Institute | Thermostable purified endoglucanase from thermophilic bacterium acidothermus cellulolyticus |
| WO1991015966A1 (en) * | 1990-04-18 | 1991-10-31 | Ssv-Development Oy | Enzyme treated forage for silage |
| DD296406A5 (de) * | 1990-07-10 | 1991-12-05 | Industrieforschungszentrum Bio | Verfahren zur verbesserung der futterverwertung |
| JP2531595B2 (ja) * | 1990-09-05 | 1996-09-04 | 工業技術院長 | サイレ―ジ用酵素剤 |
| GB9027303D0 (en) * | 1990-12-17 | 1991-02-06 | Enzymatix Ltd | Enzyme formulation |
-
1993
- 1993-04-03 LT LTIP482A patent/LT3208B/lt not_active IP Right Cessation
- 1993-04-13 AU AU39540/93A patent/AU3954093A/en not_active Abandoned
- 1993-04-13 WO PCT/FI1993/000155 patent/WO1993020714A1/en not_active Ceased
- 1993-04-13 AT AT93908962T patent/ATE163506T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-04-13 CA CA002133748A patent/CA2133748C/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-04-13 DE DE69317278T patent/DE69317278T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-04-13 EP EP93908962A patent/EP0634899B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-07-22 US US08/279,451 patent/US5948454A/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US510506A (en) | 1893-12-12 | Combination-valve connection for water-gas apparatus | ||
| US4751089A (en) | 1982-11-02 | 1988-06-14 | Suomen Sokeri Oy | Composition and method for ensilaging fodder and grain |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1993020714A1 (en) | 1993-10-28 |
| CA2133748C (en) | 2008-06-17 |
| EP0634899B1 (en) | 1998-03-04 |
| LTIP482A (en) | 1994-09-25 |
| US5948454A (en) | 1999-09-07 |
| DE69317278T2 (de) | 1998-07-16 |
| DE69317278D1 (de) | 1998-04-09 |
| CA2133748A1 (en) | 1993-10-28 |
| AU3954093A (en) | 1993-11-18 |
| ATE163506T1 (de) | 1998-03-15 |
| EP0634899A1 (en) | 1995-01-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| LT3208B (en) | Enzyme products for use in the improvement of feed value and conservation of fibrous crops | |
| Coleman | The cellulase content of 15 species of entodiniomorphid protozoa, mixed bacteria and plant debris isolated from the ovine rumen | |
| KR100307654B1 (ko) | 반추동물사료용효소보충재,이를함유한사료혼합체및이사료혼합체의생산방법 | |
| US10954276B2 (en) | Enzyme-based protein separation and enrichment from soy meal, wheat meal, and other protein-rich materials derived from plant seeds, fruits and other biomass | |
| JPH05501657A (ja) | 牧草の酵素処理 | |
| IE861329L (en) | Treating lignocellulosic materials with ammonia | |
| CN1184312C (zh) | 酶复合物 | |
| CN111549020B (zh) | 富含酸性果胶酶的复合酶的制备及其菌株和应用 | |
| CA2233234C (en) | Crystalline cellulase and method for producing same | |
| Kolankaya et al. | The effect of ammonia treatment on the solubilization of straw and the growth of cellulolytic rumen bacteria | |
| JP4689807B2 (ja) | 新規なβ−グルコシダーゼ | |
| Barr et al. | Feed Processing. VIII. Estimating Microbial Protein in Rumen Fluid with Presipitating Agents or in Incubated Mixtures of Uncooked Grain Plus Urea or Starea with Differential Centrifugation | |
| Carvalheiro et al. | Biological conversion of tomato pomace by pure and mixed fungal cultures | |
| Gill et al. | Rumen microbiology, characteristics of free rumen cellulases | |
| JPH0787970A (ja) | キシラナーゼの製造方法 | |
| Dijkerman et al. | Cultivation of anaerobic fungi in a 10-l fermenter system for the production of (hemi-) cellulolytic enzymes | |
| CN110004191A (zh) | 一种氨基酸浓缩液的制备方法和一种含氨基酸饲料 | |
| US20220211075A1 (en) | Digestion of forage containing lignocellulose with fibrolytic enzymes and recombinant bacterial expansins | |
| FI112161B (fi) | Kuitukasvien rehuarvon ja kestävöinnin parantamisessa käytettäviksi soveltuvia entsyymituotteita | |
| RU2706068C2 (ru) | Композиция для получения высококачественных кормов из многолетних высокобелковых бобовых трав | |
| Tampubolon et al. | Fermentation of Cassava Leaves Using Microbial-Nutrient Additives: Impact on HCN and Fiber Content | |
| Jones | Fungal cellulases and hemicellulases and their application to the analysis of forage | |
| MXPA98003002A (en) | Crystalline cellulose and method to produce my | |
| Abedo et al. | MICROBIAL PROTEIN ENRICHMENT OF SUGAR BEET PULP BY AEROBIC FERMENTATION: 1-FERMENTATION CONDITIONS AND ITS EFFECT ON CHEMICAL COMPOSITION, AMINO ACIDS AND ENZYMATIC CONTENT. | |
| Han | STUDIES ON THE BACTERIA AND BACTERIAL ENZYMES INVOLVED IN THE DEGRADATIONOF CELLULOSE |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TK9A | Rectifications: patents |
Free format text: 19930409, 19951207 |
|
| MM9A | Lapsed patents |
Effective date: 20040409 |