LU81797A1

LU81797A1 - Combinations antivirales

Info

Publication number: LU81797A1
Application number: LU81797A
Authority: LU
Inventors: D Delong
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1979-06-18
Filing date: 1979-10-18
Publication date: 1980-01-25
Also published as: EP0020836A1; ZA795493B; JPS565416A; CA1121268A; PH15454A; BE879473A; AU5197679A; FR2459045A1; IT1193508B; IT7926663A0; GB2050826A; US4210647A

Description

f.

T 1

COMBINAISONS ANTIVIRALES

On utilise une combinaison dans laquelle l'ingrédient actif est une combinaison d’une quinoxaline et d'une amine stériquement encombrée, pour lutter contre les infections dues 5 aux virus de la grippe chez les mammifères.

Des 3,4-dihydro-3-oxoquinoxalines portant en position 2 un substituant ester sont décrites en tant qu'agents antiviraux dans la demande de brevet N° déposée le même jour que la présente demande. Les composés sont 10 particulièrement utiles en ce qu’ils présentent une activité antivirale vis-à-vis des souches A et B du virus de la grippe. L'activité antivirale du 1-aminoadamantane (amantidine, adamantylamine) a d’abord été décrite par Davies et al. Science, 144, 862 (1964). Il est dit que le 1-aminoadamantane est actif 2 15 vis-à-vis de la souche A du virus de la grippe de façon prophylactique. Le composé peut également avoir une certaine utilisation dans la prophylaxie des souches grippales 2 asiatiques apparentées de façon antigènique à la souche A .

On a également montré que le 3-méthyl-l-aminoadamantane, la 20 cyclooctylamine, la 2-norbornylamine et le 1-adamantyl-l- aminoéthane (rimantadine) sont tous des agents antiviraux, dans les laboratoires de la demanderesse et dans d'autres laboratoires.

Cette invention fournit une composition 25 pharmaceutique permettant de lutter contre les infections dues aux virus de la grippe chez les mammifères, caractérisée en ce qu'elle contient comme ingrédient actif une combinaison de médicaments antiviraux, dont l’un est une quinoxaline de formule : 30

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35 H

dans laquelle chaque groupement X est indépendamment Cl ou Br, et R est un groupement méthyle ou éthyle,, et l'autre est une i

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2 amine stériquement encombrée du groupe comprenant la cyclo-octylamine, le 2-aminobicyclo[2.2.llheptane, le 2-amino-norbornane ou un adamantane substitué de formule : 5 , R1 π/% 10 · NH~ I 2 1 * 2 dans laquelle R est NH2 ou CH-CH3 et R est H ou CH^ ; et des excipients.

15 Le 2-aminobicyclo[2.2.1]heptane a la formule ΗεΝ—f 2^ ψ " 20

La combinaison précédente de médicaments antiviraux peut être administrée tant de façon prophylactique que de façon thérapeutique, c'est-à-dire avant ou après infection.

La combinaison peut ainsi être administrée à des mammifères 25 exposés au virus de la grippe pour faire avorter l'infection virale ainsi qu'à des mammifères qui ont contracté une infection grippale et nécessitent un traitement par un agent de suppression de la croissance virale. Qu'on l'administre avant ou après l'apparition de 1'infection virale, la 30 combinaison précédente supprimera la croissance des souches A et B du virus de la grippe. C'est un avantage particulier de cette nouvelle combinaison qu’il n'est pas nécessaire de faire une détermination de la souche du virus de la grippe provoquant l'infection particulière, car la combinaison est efficace tant 35 sur les souches A que sur les souches B.

Les doses habituelles utilisées pour la nouvelle combinaison antivirale varient largement selon le poids, la taille, la surface corporelle, etc., de l'espèce mammifère 1» , 3 particulière que l’on traite. Avec les souris par exemple, une seule dose contiendra de 20 à 160 mg/kg d’une quinoxaline de formule I ci-dessus plus de 10 à 80 mg/kg de 1-aminoadamantane ou de 5 à 50 mg/kg de 3-méthyl-l-amino-5 adamantane ou de 10 à 80 mg/kg de cyclooctylamine, de 2-aminonorbornane ou de 1-(1-adamantyl)-1-aminoéthane. Chez l'homme, la dose sera de 1/10 à 1/50 de la dose pour les souris, c'est-à-dire de 0,5 à 5 mg/kg d'une quinoxaline de formule I plus 0,3 à 3 mg/kg de 1-aminoadamantane ou environ 10 0,2 à 2 mg/kg de 3-méthyl-aminoadamantane ou 0,3 à 3 mg/kg de cyclooctylamine, de 2-aminonorbornane ou de 1-(1-adamantyl)-1-aminoéthane. Une posologie quotidienne moyenne pour l'homme serait de 30 à 300 mg de quinoxaline plus 15 à 200 mg de 1-aminoadamantane deux fois par jour. Les posologies pour 15 d'autres combinaisons peuvent être obtenues à partir des résultats précédents, associées à la connaissance des variations des doses d'autres médicaments selon l'espèce mammifère. La forme posologique contenant la quinoxaline de formule I plus une amine stériquement encombrée, contenant 20 des poids de médicaments appartenant aux intervalles précédents, est généralement administrée pendant quatre jours consécutifs, bien que des traitements d'une durée de 1, 2 ou 3 jours donnent également de bons résultats en ce qui concerne l'infection virale.

25 On prépare les quinoxalines de formule I ci-dessus en faisant réagir une 4,5-dihalophénylènediamine avec un mésoxalate de dialkyle selon le schéma de réaction suivant

Schéma de réaction 1 30 « 0 / \ » X T ?f-NH2 _/c_or \ X.I LNH2 - °<C.0R —

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dans lequel R et X sont tels que définis précédemment. Les 10 exemples suivants illustrent le mode opératoire du schéma de réaction I permettant de préparer les composés de formule I ci-dessus.

EXEMPLE 1

Préparation du 6,7-dichloro-3,4-dihydro-3-oxo-2-quinoxaline-15 carboxylate d'éthyle

On prépare une solution de 17,7 g de 4,5-dichloro-o-phênylènediamine dans 200 ml d'éthanol anhydre. On ajoute ä cette solution 17,4 g de 2-cétomalonate de diéthyle et on chauffe le mélange à la température de reflux pendant environ 20 17 heures. On chasse les constituants volatils en évaporant sous vide. La recristallisation du résidu dans l'éthanol donne 20 g de 6,7-dichloro-3,4-dihydro-3-oxo-2-quinoxalinecarboxylate d'éthyle formé dans la réaction précédente, fondant à 226-227 °C.

25 EXEMPLE 2

Préparation du 6,7-dibrorao-3,4-dihydro-3-oxo-2-quinoxaline-carboxylate d'éthyle.

On mélange 10 g de 3,4-dibroinoaniline avec 40 ml d'anhydride acétique. On chauffe le mélange réactionnel 30 résultant à une température de 100 à 105°C pendant une heure, après quoi on le verse sur un mélange de glace et d'eau. Après une nuit d'agitation, le mélange aqueux donne un précipité blanc sale pesant 11,5 g et fondant à 90-95°C, consistant en 3,4-dibromoacêtanilide.

35 On mélange 2,5 g de 3,4-dibromoacétanilide avec 8 ml d’acide sulfurique aqueux 18N ä 0°C. On ajoute 1,5 g de nitrate de propyle tout en maintenant la température de réaction entre 0 et 2°C. On agite pendant une heure à la même température le c * 5 mélange réactionnel refroidi puis on le verse sur un mélange de glace et d'eau. Un solide jaune comprenant le 3,4-dibromo- 6-nitroacêtanilide formé dans la réaction précédente précipite et on le recueille par filtration. Une recristallisation dans 5 l'éthanol donne 1,2 g de 3,4-dibromo-6-nitroacétanilide fondant à 140-141°C après recristallisation dans l'éthanol.

On chauffe 1 g de 3,4-dibromo-6-nitroacétanilide à la température de reflux pendant 30 minutes avec 30 ml d'acide chlorhydrique aqueux 6N. Puis on verse le mélange réactionnel 10 sur un mélange de glace et d'eau en agitant. On ajuste le pH de la solution a 12 avec une base. On sépare par filtration le , précipité jaune vif résultant, on le lave et on le sèche ; on obtient 0,85 g de 3,4-dibromo-6-nitroaniline fondant à 204-205°C.

15 On met 5 g de 3,4-dibromo-6-nitroaniline en suspension dans 200 ml d'éthanol anhydre auxquels on a ajouté environ 10 g de nickel de Raney. On place le mélange d'hydrogénation dans un appareil d’hydrogénation basse pression sous une pression d'hydrogène de 3,85 kg/cm^. Il se produit une absorption rapide 20 d'hydrogêne qui s'arrête après environ 25 minutes, moment auquel la couleur jaune foncée initialement présente a disparu, ce qui indique une réduction complète du groupement nitro en groupement amino. On poursuit l’hydrogénation pendant une demi-heure supplémentaire puis on traite le mélange 25 d'hydrogénation en filtrant le catalyseur, en lavant le catalyseur filtré et en évaporant les constituants volatils du filtrat. On obtient 4,1 g de 4,5-dibromo-o-phénylènediamine.

On cyclise la 4,5-dibromo-o-phénylènediamine en ester d'acide quinoxalinecarboxylique correspondant par le 30 mode opératoire de l’Exemple 1, en utilisant 4,1 g de la diamine et 2,7 g de cêtoroalonate de diéthyle dans 75 ml d'éthanol anhydre. Le 6,7-dibromo-3,4-dihydro-3-oxo-2-quinoxalinecarboxylate d’éthyle ainsi préparé fond à 235-236°C (3,9 g).

35 EXEMPLE 3

Préparation du 6(7)-chloro-7(6)-bromo-3,4-dihydro-3-oxo-2-quinoxalinecarboxvlate d’éthyle

On nitre le 3-chloro-4-bromoacétanilide préparé par c 6 le mode opératoire de l'Exemple 2 dans 1'acide sulfurique aqueux 18 M avec du nitrate de propyle à 0°C selon le mode opératoire de l'Exemple 2. On traite le produit de réaction en l'ajoutant à un mélange de glace et d'eau en agitant» Une 5 poudre jaune consistant en 3-chloro-4-bromo-6-nitroacétanilide précipite et on la recueille par filtration. La recristallisation dans l'éthanol donne des cristaux fondant à 128-130°C ; 38 g.

On hydrolyse le 3-chloro-4-bromo-6-nitroacétanilide 10 en amine libre par le mode opératoire de l'Exemple 2. La réduction de 5 g de la 3-chloro-4-bromo-6-nitroaniline ainsi formée, avec du nickel de Raney selon le mode opératoire de l'Exemple 2, donne 3,35 g de 4(5)-chloro-5(4)-bromo-o-phénylènediamine. On fait réagir 1,66 g de la diamine avec 15 0,85 g de cêtomalonate de diêthyle au reflux dans un solvant mutuel pendant deux heures et demie.Il précipite des cristaux jaunes ressemblant à des aiguilles consistant en 6(7)-chloro-7(6)-bromo-3,4-dihydro-3-oxo-2-quinoxalinecarboxylate d'éthyle et on les recueille par filtration ; pf. 185-195°C ; 20 111 g.

Dans le schéma de réaction précédent, quand chaque groupement X représente un groupement différent, le produit de la réaction de 1'o-phénylènediamine substitué et du mësoxalate de diêthyle donne un mélange de composés comme décrit dans 25 l'Exemple 3. Un mode opératoire de synthèse univoque d'un composé appartenant au domaine de l'invention dans lequel les groupements X sont différents, est donné dans le schéma réactionnel 2 ci-dessous : ( 7

Schéma de réaction 2 X T il N°" EtO-CO-CHg-CO-CI \ X“T rN02 X~V χ·”ΝΗ2 ΤοI uène; chaleur / Χ”·χ ,·-ΝΗ

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dans lequel l’un des groupements X est Br et l’autre est Cl.

Selon le schéma de réaction 2, on fait réagir une 6-nitro-3,4-dihaloaniline (IV) avec le chlorure d'êthyl-20 malonyle (ou un autre halogénure d’alkylmalonyle) pour obtenir le dérivé éthylmalonylamide correspondant sur l’azote de l’aniline (V). Une cyclisation par catalyse basique/ utilisant l’êthylate de sodium à 0°C/ donne le quinoxaline- l N -oxyde de formule (VI), dont le traitement par le 25 trichlorure de phosphore dans le tétrahydrofuranne (THF) à la température ambiante donne de façon non ambiguë un 3,4-dihydro-3-oxo^2-quinoxalinecarboxylate d’éthyle 6,7-substitué de formule (VII). Ce mode opératoire est illustré dans l’Exemple 4 ci-dessous.

30 EXEMPLE 4

Préparation du 6-chloro-7-bromo-3,4-dihydro-3-oxo-2-quinoxalinecarboxylate d’éthyle

On dissout 5 g de 3-chloro-4-bromo-6-nitroaniline dans 150 ml de benzène. On ajoute en agitant sous atmosphère 35 d’azote 5 g du chlorure d’acide du malonate monoéthylique. On chauffe le mélange réactionnel ä la température de reflux pendant une nuit. Une chromatographie sur couche mince indique que la réaction est pratiquement terminée à ce moment. On t 8 refroidit le mélange réactionnel et on chasse le benzène par évaporation sous vide. On recristallise dans l’éthanol anhydre le résidu contenant la N-éthoxycarbonylacétyl-3-chloro- 4-bromo-6-nitroaniline formée dans la réaction précédente, 5 et l'on obtient des cristaux jaunes duveteux fondant à 119-121°C.

On prépare de l'êthylate de sodium dans des conditions anhydres à partir de 25 ml d’éthanol anhydre et de 1 g de sodium sous atmosphère d’azote. On agite le mélange jusqu’à 10 dissolution totale du sodium, après quoi on refroidit le mélange à environ 0°C. On ajoute la N-éthoxycarbonylacétyl-3-chloro-4-bromo-6-nitroaniline et on agite le mélange résultant à 0°C pendant environ 3 heures. Puis on arrête la réaction en ajoutant le mélange réactionnel à 300 ml d'acide 15 chlorhydrique aqueux IN à 0°C. On agite ce mélange aqueux jusqu'à ce qu'il se forme un précipité solide. On sépare le précipité par filtration, on le sèche et on recristallise le gâteau de filtration dans l'éthanol anhydre. Le 6-chloro-7-bromo-3-oxo-2-quinoxalinecarboxylate-N-oxyde d’éthyle ainsi 20 préparé fond à 2l9-22l°C ; 2 g.

Analyse calculée : C, 38,01 ; H, 2,32 ; N, 8,06

Trouvée : C, 37,79 ; H, 2,35 ; N, 8,24

On dissout 1 g de 6-chloro-7-bromo-3-oxo-2-quinoxalinecarboxylate-N-oxyde d’éthyle dans 50 ml de THF.

25 On ajoute 6 ml de trichlorure de phosphore et on chauffe doucement le mélange résultant à la température de reflux pendant une nuit. On verse le mélange réactionnel dans 500 ml d'un mélange de glace et d'eau. On sépare par filtration un solide, comprenant le 6-chloro-7-bromo-3,4-dihydro-3-oxo-2-30 quinoxalinecarboxylate d'éthyle formé dans la réaction précédente ; point de fusion 203-205°C ; 0,6 g.

Bien qu'il soit plus facile d'avoir un ester éthylique ou mêthylique dans le produit final (I) en partant du mésoxalate de diëthyle ou de diméthyle désiré, il est 35 possible d'hydrolyser l’ester obtenu et de réestérifier l'acide résultant par un autre alcool, comme décrit ci-dessous.

EXEMPLE 5

Hydrolyse du 6,7-dichloro-3,4-dihydro-2-oxo-3-quinoxaline-

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9 carboxylate d'éthyle

On dissout 1 g de 6,7-dichloro-3,4-dihydro-2-oxo- 3-quinoxalinecarboxylate d'éthyle dans un mélange de 25 ml d'isopropanol et de 75 ml d'eau. On ajoute 5 g d'hydroxyde de 5 potassium et on chauffe le mélange résultant à la température de reflux pendant 5 minutes. On décolore le mélange réactionnel chaud avec du charbon activé et on le filtre. On acidifie le filtrat avec de l’acide chlorhydrique aqueux 12N. Des cristaux jaunes en forme d'aiguilles précipitent, consistant en acide 10 6,7-dichloro-2-oxo-3-quinoxalinecarboxylique formé dans l'hydrolyse précédente. On recueille l'acide par filtration.

EXEMPLE 6

Préparation des esters

On estërifie l'acide 6,7-dichloro-3,4-dihydro-3-oxo-15 2-quinoxalinecarboxylique préparé à partir de l'ester éthylique correspondant, en utilisant le méthanol selon le mode opératoire suivant : on mélange 2 g de l'acide libre et 20 ml de méthanol anhydre avec une quantité catalytique de complexe trifluorure de bore/éther éthylique dissous dans du 20 méthanol. On chauffe le mélange à la température de reflux pendant 60 heures, après quoi on le refroidit et on le filtre. Le 6,7-dichloro-3,4-dihydro-3-oxo-2-quinoxalinecarboxylate de méthyle se sépare et on l'isole par filtration ; 153 g ; couleur jaune-verdâtre ; pf. 258-260°C.

25 Le composant amine stériquement encombré de la nouvelle composition antivirale de l'invention peut être préparé par des procédés connus dans le domaine.

Les effets antiviraux synergiques de la combinaison d'une quinoxaline et d'une amine stériquement encombrée sont 30 illustrés par les expériences suivantes. Chaque composant, la quinoxaline et l’amine stériquement encombrée, sont testées séparément à diverses doses vis-à-vis des souches Ann Arbor ou Maryland B du virus de la grippe. Des combinaisons des deux médicaments utilisant une dose correspondant à une dose déjà 35 utilisée pour la détermination de l'efficacité des composants séparés, sont également utilisées. Le mode opératoire général est celui décrit dans Redman et al., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 497 (1966). On note le jour moyen de mort pour 10 les souris traitées et non traitées et l'on note également le nombre de survivants par rapport au nombre total de souris pour chaque dose. En outre, on calcule un indice de survie. L'indice de survie est une mesure complexe de l'efficacité 5 introduisant la date de la mort et le nombre de survivants dans une seule variable selon l'article précédent de Redman et al. Dans les Tableaux 1 et 2 suivants, les médicaments sont administrés par voie intrapéritonéale. La dose est administrée 24 heures et 4 heures avant l'inoculation par le virus et 24 10 et 48 heures après l’inoculation. On utilise des groupes de 18 souris pour chaque dose et il y a un groupe témoin auquel , on administre seulement le milieu pharmaceutique pour chaque détermination. On utilise des souris femelles blanches Swiss (souche McAlïister) pesant 11 à 13 g. Les résultats 15 statistiquement significatifs sont indiqués dans les tableaux dans chaque cas par un astérisque. Pour faciliter la compréhension des résultats des tableaux, chaque composé utilisé dans l'expérience a reçu une lettre selon le tableau suivant.

20 A. 6,7-dibromo-3,4-dihyd.ro-3-oxoquinoxaline-2- carboxylate d'éthyle B. 6,7-dichloro-3,4-dihydro-3-oxoquinoxaline-2- carboxylate d'éthyle M. chlorhydrate de 1-aminoadamantane 25 N. chlorhydrate de 3-méthy1-1-adamantane 0. ' cyclooctylamine . P. 1(1-adamantyl)-1-amino-éthane, et R. 2-arainonorbornane.

Dans les tableaux suivants, la souche des virus est 30 indiquée en tête du tableau. La colonne 1 indique la lettre attribuée à un composé donné, la colonne 2 la dose en mg/kg ; la colonne 3 l'indice de survie pour cette dose ; la colonne 4 le jour moyen de mort ; la colonne 5 le nombre de survivants et la colonne 6 le nombre d’animaux. Le Tableau 3 donne des 35 informations similaires pour l'administration de combinaisons de chlorhydrate d'adamantylamine et de 6,7-dibromo-3,4-dihydro-3-oxoquinoxalinecarboxylate d’éthyle, administrées aux souris par voie orale à une série de plusieurs doses aux mêmes 11 intervalles de temps avant et après inoculation des souris par la souche Ann Arbor du virus de la grippe, que pour les Tableaux 1 et 2.

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Les résultats expérimentaux indiqués dans les Tableaux 1 à 3 précédents, indiquant un effet synergique entre une quinoxaline de formule I et une amine stériquement encombrée, utilisent des protocoles d'essai dans lesquels on 5 administre la combinaison des médicaments par voie intrapéritonéale ou orale. On préfère que les médicaments soient administrés par voie orale. Pour l'administration par voie orale, un mode d'administration avantageux est l'utilisation de capsules de gélatine. Dans ce but, on mélange une certaine 10 quantité d'un ester de quinoxaline de formule I ci-dessus et une certaine quantité d'une amine stériquement encombrée, de préférence sous forme d'un sel d'addition formé avec un acide fort, comme l'acide chlorhydrique, et on dilue le mélange avec un milieu pharmaceutiquement acceptable comme l'amidon.

15 Après un brassage soigneux, on introduit le mélange dans des capsules de gélatine vides de sorte que chaque capsule contienne de 50 à 100 mg du sel d'addition d'acide de l'amine tertiaire encombrée et de 50 ä 100 mg de la quinoxaline. Comme on sait que les esters sont lentement hydrolysés en présence de 20 chlorhydrate d'amine et d'humidité atmosphérique, l'un des deux ingrédients, la quinoxaline ou le chlorhydrate d'amine, doit être coacervé, par exemple avec de l'éthylcellulose, du shellac ou un revêtement entérique composé, par exemple, d'acétate/phtalate de polyvinyle ou de phtalate d'hydroxy-25 propylméthylcellulose. On peut suivre le procédé du brevet des E.U.A. N° 4.044.125 pour inhiber l'hydrolyse de l'ester, l'acide acétylsalicylique en présence d'un chlorhydrate, le <e chlorhydrate de d-propoxyphène, où la composition est stabilisée par addition d'un chlorhydrate d'un amino-acide.

30 Les nouvelles combinaisons de l'invention ont les propriétés recherchées suivantes : la combinaison est très active pour combattre les infections virales et pour supprimer la croissance des virus chez les mammifères in vivo que ne l'est l'un ou l'autre ingrédient en lui-même, comme le 35 montrent les essais indiqués dans les tableaux ci-dessus. Il y a non seulement un degré supérieur de protection mais également un rapport thérapeutique supérieur à des doses de médicament inférieures que pour chacun des médicaments lui- 'à é· 19 « même. Il y a également moins d'effets secondaires avec la combinaison, car les médicaments agissent de façon synergique seulement dans leur effet contre le virus de la grippe et non dans la production d'effets secondaires. La combinaison 5 synergique est active tant vis-à-vis des souches A que vis-à-vis des souches B du virus de la grippe, illustrées à titre d'exemple par les souches Ann Arbor et Maryland B utilisées dans les expériences précédentes. Troisièmement, la combinaison a une faible toxicité. Enfin et ce qui est le plus 10 important, la combinaison est active par administration par voie orale.

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Claims

1. Composition pharmaceutique permettant de supprimer les infections dues aux virus de la grippe chez les mammifères, caractérisée en ce qu’elle contient, comme 5 ingrédient actif, une combinaison de médicaments antiviraux dont l'un est une quinoxaline de formule /*\ /V X-.< y η-COOR 10 x\/V/Lo x r H dans laquelle chaque groupement X est indépendamment Cl ou 15 Br, et R est un groupement méthyle ou éthyle, et l'autre est une amine stêriquement encombrée du groupe comprenant la cyclooctylamine, le 2-aminobicyclo[2.2.l]heptane, le 2-aminonorbornane ou un adâmantane substitué de formule 2Ό * PTS 25 1 ' 2 dans laquelle R est NH3 ou CH-CH3 et R est H ou CH3 ; et des excipients. v

2. Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que la combinaison antivirale contient 30 du 6,7-dibromo-3,4-dihydro-3-oxoquinoxalinecarboxylate d'éthyle et du 1-aminoadamantane.

3* Composition pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisée en ce que la combinaison antivirale contient du 6,7-dichloro-3,4-dihydro-3-oxo-35 quinoxalinecarboxylate d'éthyle et du 1-aminoadamantane.

. 4. Composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que la combinaison est sous forme posologique contenant de 0,5 à a r * 21 5 mg/kg de quinoxaline et de 0,3 à 3 mg/kg de 1-amino-adamantane par dose. r i