LU84814A1 - METHOD FOR EVALUATING FOOD ADDITIVES - Google Patents
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Description
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ί :! 1 Procédé en vue dévaluer des additifs alimentaires,ί:! 1 Process for evaluating food additives,
La présente invention concerne un procédé j en vue d'évaluer des additifs dans une nourriture j·1 pour animaux, de même qu'une trousse d'essai utilisée 5 dans ce procédé.The present invention relates to a method for the evaluation of additives in animal feed, as well as to a test kit used in this method.
Il est de pratique courante d'incorporer, dans des nourritures pour animaux, des additifs alimentaires contribuant à assurer les qualités nutri-* tives de l'aliment ou favorisant la croissance. Un 10 additif alimentaire de ce type est la monensine qui ' est un produit largement employé à la fois dans les aliments pour le bétail et la volaille, ce produit étant décrit dans le brevet des Etats-Unis d'Améri-! que n° 3.501.568, D'autres additifs d'une nature t 15 semblable que l'on désigne d'une manière générique par l'appellation "ionophores", englobent, par exemple, la narasine et la salinomycine,It is common practice to incorporate, in animal feeds, food additives helping to ensure the nutritional qualities of the food or promoting growth. One such food additive is monensin which is a product widely used in both livestock and poultry feeds, this product being described in the United States patent! that No. 3.501.568, Other additives of a similar nature which are generically designated by the name "ionophores", include, for example, narasin and salinomycin,
La Demanderesse a découvert une méthode commode permettant d'évaluer la teneur de ces addï— 20 tifs alimentaires dans le procédé de fabrication ou dans des conditions pratiques d'utilisation.We have discovered a convenient method for evaluating the content of these food additives in the manufacturing process or under practical conditions of use.
L'invention fournit un procédé en vue .. d'évaluer la quantité d'un ionophore dans une nour riture pour animaux, ce procédé comprenant les étapes y. 2 5 consistant à mélanger la nourriture avec un solvant alcoolique, ajouter, à la solution obtenue, un acide ayant une valeur pKa inférieure à 4 et an aldéhyde arylique chromogène, tous deux sous forme solide et à une température suffisante pour engendrer une réac-30 tion chromogène, puis comparer la couleur ainsi obtenue avec un étalon.The invention provides a method for evaluating the amount of an ionophore in an animal feed, this method comprising the steps y. 2 5 consisting of mixing the food with an alcoholic solvent, adding, to the solution obtained, an acid having a pKa value of less than 4 and an chromogenic aryl aldehyde, both in solid form and at a temperature sufficient to generate a reaction-30 chromogenic, then compare the color thus obtained with a standard.
* On a trouvé que l'utilisation d'ingrédients i “ d'essai solides et, en particulier, d'un acide sous forme solide dans le procédé d'essai apportait des } ! 35 améliorations pratiques. Parmi les aldéhydes aryli- ! .i* It has been found that the use of solid test ingredients and, in particular, an acid in solid form in the test process provides}! 35 practical improvements. Among the aryli- aldehydes! .i
i Ai have
/ » 2 ques chromogènes, il y a, par exemple, la vanilline, 1’éthyl—vanilline, le 2,4-diméthoxybenzaldéhyde, le 3,4-diméthoxybenzaldéhyde, le 2,4,5-triinéthox3rbenzal-déhyde, le 4-diméthylaniinobenzaldéhyde, le cinnamaldé-5 hyde et d'autres aldéhydes arj-liques comportant des substituants donneurs d'électrons, la vanilline étant l'aldéhyde de loin préféré. Comme tel, l'aldéhyde ne doit pas nécessairement être un solide, pour autant qu’il soit utilisé sous forme solide, par exem-10 pie, lorsqu'il est absorbé sur un support solide./ "2 chromogenic, there are, for example, vanillin, ethyl-vanillin, 2,4-dimethoxybenzaldehyde, 3,4-dimethoxybenzaldehyde, 2,4,5-triinethox3rbenzal-dehyde, 4- dimethylaniinobenzaldehyde, cinnamalde-5 hyde and other aromatic aldehydes having electron donating substituents, vanillin being the most preferred aldehyde. As such, the aldehyde does not necessarily have to be a solid, as long as it is used in solid form, e.g. 10 pie, when absorbed on a solid support.
Lorsqu'on utilise des ingrédients liquides dans des essais d'évaluation d’un ionophore, par exemple, des solutions de vanilline et d’un acide liquide, qui sont nécessaires pour catalyser la réac-15 tion de la vanilline avec 1’ionophore, on se heurte à des inconvénients considérables lorsqu'une évaluation rapide doit être effectuée dans des conditions pratiques et l'on a constaté que les résultats obtenus n’étaient pas fiables. De façon étonnante, le 20 procédé de la présente invention est non seulement plus commode, mais il offre également une plus grande fiabilité. Le procédé de l'invention peut également être adopté pour confirmer l'absence d'un ionophore dans une nourriture lorsque, par exemple, celle-ci " 25 est destinée à des animaux tels que des chevaux, les quels réagissent défavorablement aux ionophores.When liquid ingredients are used in assays for evaluation of an ionophore, for example, solutions of vanillin and a liquid acid, which are necessary to catalyze the reaction of vanillin with the ionophore, considerable disadvantages are encountered when a rapid assessment has to be carried out under practical conditions and it has been found that the results obtained are not reliable. Surprisingly, the method of the present invention is not only more convenient, but also offers greater reliability. The method of the invention can also be adopted to confirm the absence of an ionophore in a food when, for example, this food is intended for animals such as horses, which react unfavorably to ionophores.
Le procédé de l'invention est applicable ; à l'évaluation d'ionophores tels que, par exemple, la narasine, la salinomycine et, en particulier, la 30 monensine. Parmi les acides solides que l’on peut I utiliser, il y a, par exemple, l'acide 5-sulfosali- J » ! cylique, l'acide suifamique, l'acide 0-sulfonique | d'hydroxylamine et l'acide p-toluène-sulfonique, } l'acide 5—sulfosalicylique étant la matière préférée.The method of the invention is applicable; to the evaluation of ionophores such as, for example, narasin, salinomycin and, in particular, monensin. Among the solid acids which can be used, there is, for example, 5-sulfosali-J "acid! cylic, sulfamic acid, 0-sulfonic acid | hydroxylamine and p-toluene sulfonic acid, 5-sulfosalicylic acid being the preferred material.
35 , Le solvant préféré qui est destiné à être mélangé I i35, The preferred solvent which is intended to be mixed I i
! A! AT
’ / « 3 avec la nourriture, est le méthane1, mais on peut utiliser d’autres solvants alcooliques tels que, par exemple, l’éthanol, seuls ou sous forme d’un mélange alcoolique aqueux contenant l’alcool en une 5 quantité suffisante pour extraire efficacement le composant ionophore./ / 3 with food is methane1, but other alcoholic solvents such as, for example, ethanol can be used, alone or as an aqueous alcoholic mixture containing the alcohol in sufficient quantity to effectively extract the ionophore component.
La couleur produite par l’interaction de 1’ionophore contenu dans la nourriture avec l’aldéhyde arylique et l’acide est évaluée par comparaison 10 avec un étalon qui peut être, par exemple, une solution colorée préparée en mélangeant une quantité connue d'un ionophore avec un aldéhyde et un acide ou en utilisant une échelle calibrée de teintes. Afin de produire une couleur, il est nécessaire de veiller 15 à ce que la réaction ait lieu à une température ap- propriée se situant, de préférence, dans l'intervalle de 50 a 70°C, en particulier, à une température de 60°C, cette température étant obtenue, par exemple, en plongeant un récipient contenant la solution dans 20 un bain-marie chauffé.The color produced by the interaction of the ionophore contained in food with the aryl aldehyde and the acid is evaluated by comparison with a standard which can be, for example, a colored solution prepared by mixing a known amount of an ionophore with an aldehyde and an acid or using a calibrated shade scale. In order to produce a color, it is necessary to ensure that the reaction takes place at an appropriate temperature, preferably in the range of 50 to 70 ° C, in particular at a temperature of 60 ° C, this temperature being obtained, for example, by immersing a container containing the solution in a heated water bath.
Dans la pratique, il est souvent préférable de décanter la solution formée à la suite du mélange de la nourriture avec le solvant alcoolique, puis de mélanger le produit surnageant avec un aldé-25 hyde et un acide sur un milieu support tel que, par exemple, un disque d'une matière filtrante ou, mieux encore, avec des comprimés d'un aldéhyde arylique et d'un acide. Etant donné que l'on peut se heurter à des difficultés pour formuler le composant acide et 30 l'aldéhyde arylique ensemble sous une forme stable, il est préférable d'utiliser deux comprimés séparés , comprenant chacun un des composants. L’acide et l'aldéhyde arylique solides peuvent être aisément préparés tous deux sous forme de comprimés. Dans le 35 î cas d'aldéhydes liquides, la matière peut être adsor-In practice, it is often preferable to decant the solution formed as a result of mixing the food with the alcoholic solvent, then to mix the supernatant with an aldehyde and an acid on a support medium such as, for example , a disc of filter material or, better still, with tablets of an aryl aldehyde and an acid. Since difficulties can be encountered in formulating the acid component and the aryl aldehyde together in a stable form, it is preferable to use two separate tablets, each comprising one of the components. Both solid aryl acid and aldehyde can be readily prepared in tablet form. In the case of liquid aldehydes, the material can be adsorbed.
AAT
i « 4 • % t| bée sur des supports appropriés dans la formulation i de comprimés. En conséquence, un procédé préféré de I 1*invention est celui comprenant les étapes consis- 'i 1 tant à : I 5 (a) mélanger une nourriture contenant un | ionophox^e positif vis-à-vis de la vanilliixe avec un ! solvant alcoolique, (b) décanter une portion du produit surna- i * : * géant, .1 j 10 (c) ajouter, à cette portion du produit j sui'nageant, un ou plusieurs comprimés comprenant un j acide solide ayant une valeur pKa inférieure à 4; | ainsi qu'un ou plusieux^s comprimés comprenant de la vanilline, à une température suffisante pour engen-15 di^er une réaction chromogène, et """ (d) comparer la couleur ainsi formée aveci "4 •% t | on appropriate supports in formulation i of tablets. Accordingly, a preferred method of the invention is that comprising the steps of: (5) (a) mixing a food containing a | ionophox ^ e positive vis-à-vis the vanillix with a! alcoholic solvent, (b) decant a portion of the supernatant product *: * giant, .1 to 10 (c) add, to this portion of the supernatant, one or more tablets comprising a solid acid j having a value pKa less than 4; | as well as one or more tablets comprising vanillin, at a temperature sufficient to cause a chromogenic reaction, and "" "(d) compare the color thus formed with
Iun étalon choisi suivant les quantités et les volumes spécifiques des matières d'essai utilisées.A standard chosen according to the specific quantities and volumes of the test materials used.
» Il est entendu que la quantité de nourri- 1 20 ture, le volume de solvant et d'autres quantités I utilisées doivent être choisis minutieusement pour concorder avec les conditions requises de l'étalon.It is understood that the amount of food, the volume of solvent and other amounts used should be chosen carefully to match the requirements of the standard.
| . Pour des conditions pratiques, la quantité de nour riture sera, de préférence, réglée à une valeur de 3* , 25 4 ou 5 g, valeur que l'on peut mesurer, par exemple, en remplissant un récipient tel qu'une bouteille ou : un tube jusqu'à un repère spécifié. Le volume spé- | cifié de solvant, par exemple, S à 12 ml, peut alors ! être ajouté et le mélange peut être chauffé pendant | 30 une période de 1 à 2 minutes. On décante ensuite \ , l ! une portion spécifiée du produit surnageant (par ; exemple, 1,5 à 2,5 ml) dans un deuxième récipient | dans lequel on ajoute les compi-imés de l'acide et de l'aldéhyde arylique (généralement, un de chacun de 35 ( ces deux composants). Les comprimés contiennent le ß Λ- / / / 4 5 • « ' catalyseur acide ou la vanilline en une quantité appropriée pour produire une réaction chromogène 1 quantifiable en concordance avec la solution colorée étalon ou l’échelle calibrée de teintes. De préfé-5 rence, on utilise un excès de l’acide et de la vanil line et, par exemple, par comprimé, la quantité d’aci-1 de peut être de 40 à 60 mg, tandis que la quantité de vanilline peut être de 40 mg à 60 mg. On peut préparer la solution colorée étalon en mélangeant un ; 10 comprimé comprenant, par exemple, une quantité spé— I cifiée d’ionophore (100, 200 ou 300 mcg) avec une i quantité appropriée du solvant, 1 Comme on l’a indiqué ci-dessus, l’essai ! . doit être effectué à une température suffisante pour 15 produire une réaction chromogène entre les composants. La Demanderesse a trouvé que la température optimale était de 60°C et qu’il était de loin plus commode d’appliquer la chaleur après avoir ajouté l’aldéhyde arylique et l’acide à la solution alcoolique. Toute-20 fois, en variante, on peut tout d’abord chauffer le solvant à 6o°C avant de le mélanger avec la nourriture ou on peut ensuite le chauffer immédiatement avant l’addition de l’acide et de l’aldéhyde.| . For practical conditions, the amount of food will preferably be adjusted to a value of 3 *, 25 4 or 5 g, a value which can be measured, for example, by filling a container such as a bottle or : a tube to a specified mark. The special volume | solvent, for example, S to 12 ml, can then! be added and the mixture can be heated for | 30 a period of 1 to 2 minutes. Then decant \, l! a specified portion of the supernatant (eg 1.5-2.5 ml) in a second container | to which are added the aryl acid and aldehyde compounds (generally one of each of 35 (these two components). The tablets contain the acid catalyst or vanillin in an amount suitable to produce a quantifiable chromogenic reaction 1 in accordance with the standard color solution or the calibrated shade scale. Preferably, an excess of acid and vanil line is used and, by example, per tablet, the amount of aci-1 can be 40 to 60 mg, while the amount of vanillin can be from 40 mg to 60 mg. The standard color solution can be prepared by mixing one; 10 tablet comprising , for example, a specified amount of ionophore (100, 200 or 300 mcg) with an appropriate amount of the solvent, 1 As noted above, the test must be carried out at a sufficient temperature to produce a chromogenic reaction between the components. We have found that the optimum temperature e was 60 ° C and it was far more convenient to apply heat after adding the aryl aldehyde and acid to the alcoholic solution. Alternatively, alternatively, the solvent can first be heated to 60 ° C before mixing with the food, or it can be heated immediately before the addition of the acid and aldehyde.
Les comprimés utilisés peuvent être préparés 25 par des moyens classiques selon lesquels on mélange k.The tablets used can be prepared by conventional means by which k is mixed.
l’acide ou l’aldéhyde solide avec une quantité appropriée d’une charge et d’un agent tensio-actif.solid acid or aldehyde with an appropriate amount of filler and surfactant.
On donnera ci-après des formulations spécifiques | pour ces comprimés : , 30 Comprimé 1Specific formulations are given below | for these tablets:, 30 Tablet 1
Acide 5-sulfosalicylique 50 mg5-sulfosalicylic acid 50 mg
Stéarate de magnésium 0,25 mg i “ * / Aerosil 0,25 mgMagnesium stearate 0.25 mg i “* / Aerosil 0.25 mg
fe Jfe J
« t 6 I 1 Comprimé 2 I r I | Vanilline 50 mg | Stéarate de magnésium 0,25 mg ! i | I Aerosil 0,25 mg iS L*invention englobe également une trousse d’essai conçue pour être utilisée dans le procédé de l’invention, cette trousse comprenant un récipient d'extraction, de préférence, gradué suivant la quantité de la nourriture à extraire, le volume de sol-10 vant à ajouter et le volume de produit surnageant à décanter, un récipient d’essai en vue d’observer la couleur du produit surnageant, un récipient contenant un solvant, des comprimés contenant des quantités étalons d’un acide solide et d’un aldéhyde arylique 15 chromogène, ainsi qu’une échelle de teintes ou un ou plusieurs comprimés contenant une quantité étalon d’un ionophore.«T 6 I 1 Tablet 2 I r I | Vanillin 50 mg | 0.25 mg magnesium stearate! i | I Aerosil 0.25 mg iS The invention also includes a test kit designed for use in the method of the invention, this kit comprising an extraction container, preferably, graduated according to the quantity of the food to be extracted , the volume of sol-10 before adding and the volume of supernatant to decant, a test container for observing the color of the supernatant, a container containing a solvent, tablets containing standard quantities of a solid acid and a chromogenic aryl aldehyde, as well as a shade scale or one or more tablets containing a standard amount of an ionophore.
L’invention sera illustrée plus en détail par l’exemple suivant.The invention will be illustrated in more detail by the following example.
20 EXEMPLE20 EXAMPLE
On a tout d’abord préparé une solution colorée étalon en mélangeant un comprimé contenant lOOmcg de monensine avec 2 ml de méthanol dans un tube d’essai, en ajoutant 50 mg d’acide 5-sulfo-25 salicylique et 50 mg de vanilline sous forme de comprimés séparés, ainsi qu’en maintenant le mélange à 60°C par immersion dans un bain-marie. Lorsque les composants se sont dissous, il s’est formé une coloration rouge.A standard color solution was first prepared by mixing a tablet containing 100 mcg of monensin with 2 ml of methanol in a test tube, adding 50 mg of 5-sulfo-salicylic acid and 50 mg of vanillin under form of separate tablets, as well as maintaining the mixture at 60 ° C by immersion in a water bath. When the components dissolved, a red color formed.
30 Pour effectuer la comparaison avec cette30 To compare with this
Solution étalon, on a déposé 5 g de nourriture pour bétail contenant une quantité connue, soit 50 parties par million, de monensine dans une bouteille d’extraction, on y a ajouté 10 ml de méthanol, on a agité 35^ le mélange et on a soumis le produit surnageant à un * « 7 « l essai de réaction chromogène. On a versé une certaine quantité (2 ml) du produit surnageant dans un tube d'essai, puis on a ajouté 50 mg d'acide 5-sulfo-salicylique et 50 mg de vanilline sous forme de com-5 primés séparés. On a plongé le tube d'essai dans un bain-marie à 60°C et on l'a maintenu à cette température jusqu'à ce que les deux comprimés se soient dissous.Standard solution, 5 g of cattle feed containing a known amount, or 50 parts per million, of monensin was placed in an extraction bottle, 10 ml of methanol was added thereto, the mixture was stirred 35 and subjected the supernatant to a * 7 * chromogenic reaction test. A certain amount (2 ml) of the supernatant was poured into a test tube, then 50 mg of 5-sulfosalicylic acid and 50 mg of vanillin were added as separate award-winning tablets. The test tube was immersed in a water bath at 60 ° C and kept at this temperature until the two tablets had dissolved.
Il s'est formé une coloration rouge et, lorsqu'on l'a * comparée avec la solution colorée étalon, on a observé 10 que la couleur était moins intense. D'après ces deux conclusions, on a pu déduire que : (a) l'ionophore était présent dans lçi nourriture et (b) l'ionophore I étant présent à raison de moins de 100 parties par j · Λ million,A red coloration was formed and, when compared with the standard color solution, it was observed that the color was less intense. From these two conclusions, it was possible to deduce that: (a) the ionophore was present in food and (b) the ionophore I being present at a rate of less than 100 parts per j · Λ million,
..... I..... I
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