LU87488A1

LU87488A1 - Compositions pharmaceutiques agissant en particulier sur le systeme cardiaque et cardiovasculaire et procede pour les preparer

Info

Publication number: LU87488A1
Application number: LU87488A
Authority: LU
Inventors: Peter Literati Nagy; Erzsebet Radvany-Nee-Hegedues; Maria Boros; Jenoe Szilbereky; Gyoergy Blasko; Bela Gachalyi; Gizella Hamar-Nee-Nemes; Gabor Nemeth
Original assignee: Biorex Kft
Priority date: 1988-03-23
Filing date: 1989-03-23
Publication date: 1990-10-02
Also published as: GB2216421A; NL8900742A; FI891438A7; HU210122B; FR2628972B1; FI891438A0; JPH0222228A; ES2014060A6; CH677732A5; SE8901041L; DE3909707A1; CA1319607C; FI891438L; HUT60436A; FR2628972A1; IT8919876A0; KR890014104A; BE1003021A3; SE8901041D0; GB8906856D0

Description

Compositions pharmaceutiques agissant en particulier sur le système cardiaque et cardiovasculaire et procédé pour les préparer.

La présente invention concerne des compositions pharmaceutiques agissant en particulier sur les états thrombo-emboliques du système cardiaque et cardiovasculaire.

Selon un autre aspect de 1*invention, on propose un procédé pour la préparation desdites compositions.

On sait que les acides gras ίο - 3 insaturés en G18-24 possèdent des propriétés biologiques avantageuses. Parmi ces composés, 1*acide eicosapentaénolque (EPA) et Racide docosahexaénoîque (DHA) sont remarquables, Dyerberg et coll, /"The Lancet 15, 117 (1978)^7 ont souligné Rimportance et les effets biologiques multiples de ces deux acides.

Les effets liés au rôle important des acides gras polyin-saturés, en particulier du EPA et du DHA, dans 1*hyperlipidémie et les affections thrombotiques ont été passées en revue par Goodnight et coll, /".Arteriosclerosis 2, 87 (1982) Review 7·

Des compositions pharmaceutiques contenant le EPA et le DHA en tant qu*ingrédients actifs, ont été décrites par exemple, dans le mémoire descriptif du Brevet Allemand N° 3,438,630 pour Rabaissement du taux de cholestérol sanguin, et en outre dans les demandes de Brevets Japonais publiées sous les Nos, 58,08037 et 60, 49097 contre la sclérose cérébrale et pour empêcher la formation du thrombus chez des malades souffrant de cardiopathies.

Plusieurs articles ont ete consacres a Reffet inhibiteur d1agrégation plaquettaire, donc à R effet inhibiteur de formation du thrombus du EPA et du DHA /"spencer et Garaega: Prostagl, Leucotrie- nés and Med, 23, 129 (l986)j Knapp et coll,s New Engl. Journ. of Med, 314, 937 (1986)^7· L*action antivirale du EPA et du DHA est décrite dans le mémoire descriptif du brevet des U,S,A, N° 4.513.008,

Les ingrédients actifs de l»huile de poissons, par exemple le EPA et le DHA, sont des précurseurs de la biosynthèse de la série PG-3 et ils inhibent la formation de métabolites nocifs tels que TXA2 et TXB2 provenant de la "cascade de l*acide arachidonique", ainsi dite, qui est une chaîne de processus biochimiques compliqués partant de 1*acide arachidonique*

En dehors de leurs divers effets favorables, les acides gras polyinsaturés ont la propriété pathologique désavantageuse d*être sujets à une décomposition spontanée par oxydation dans l*organisme humain en donnant lieu ainsi à la formation d*aldéhydes actifs, tels que le malonodialdéhyde qui est nocif pour 1»organisme. Ces aldéhydes sont capables de réagir principalement avec les tissus conjonctifs d» une manière physiologiquement nuisible qui peut conduire à la "lipofus-cinose cérolde", ainsi dite, du système nerveux central*

On a commencé des recherches sur les effets biologiques des micro-éléments et des éléments traces dans la dernière décade. Il est ainsi connu à présent que le sélénium est l*une des substances les plus importantes et indispensables pour la vie* L*action favorable du sélénium est principalement due à son effet activateur en direction de l*enzyme glutathione-peroxydase, du fait que le sélénium est un constituant indispensable du groupe prosthétique de 1*enzyme glutathione-peroxydase. Cette enzyme est l»inhibiteur endogénique le plus important des processus de peroxydation pernicieux.

Le sélénium, en lui-meme, a un effet hypotenseur, améliore les états ischémiques, hypoxiques et infarctieux du coeur et inhibe la lipofuscinose cérolde, et, en outre, il exerce aussi un effet avantageux sur la périodontite. Il a une activité anticancéreuse notable et diminue la probabilité d*évolution des maladies cancéreuses. De plus, il est considéré comme un agent inhibiteur de mutagénèse.

Le sélénium ne s*accumule pas dans 1*organisme, si bien qu*il doit être suppléé en continu· Jusqu*alors, le sélénium a été prin-cipalement Introduit dans l*organisme sous la forme de composés inorganiques, par exemple le dioxyde de sélénium et le sélénite de sodium· Un certain nombre d*altérations ou affections pathologiques, telles que la nécrose hépatique, la nécrose musculaire, la destruction de la membrane érythrocytaire, les lésions intersticielles, l*élévation de SX dans 1*ECG, le syndrome cardiaque de Mulberry, le syndrome kwashiorkor (malnutrition protéinique) et la sclérose multiple s*avèrent être respectivement déclenchées par une carence en sélénium.

Une revue d*ensemble des effets biologiques du sélénium a été publiée par Thressa et coll. / Nutrition Review 35, 7 (1977)^/, Shamberger /"j. of Env· Path, and Tox. 4, 305 (1980) 7 ainsi que Masu- a* ·» kawa et coll* / Experientia 39, 405 (1983) 7· mt ^ ·

Les composés organiques du sélénium peuvent être obtenus par des procédés de synthèse décrits, par exemple, par Klaiman et GUnther dans leur ouvrage intitulé "Organic Selenium Compounds, Their Chemistry and Biology", John Wiley and Sons, Inc. tTew-York, 1973· Par ailleurs, on peut également préparer les composés organiques du sélénium en utilisant des micro-organismes· Selon ce dernier procédé, on cultive les micro-organismes sur des milieux enrichis en composés inorganiques du sélénium. Les organismes qui conviennent à cet effet fixent le sélénium et, en 1*introduisant dans leur métabolisme, ils le lient à des substances organiques, le plus fréquemment à des amino-acides ou des graisses. Ces possibilités sont décrites par Danch et Chmielow-sky./"Pr. Nauk. Univ. Slask Katowich 1^ 57 (1985)^7 ainsi que parGenni-ty et coll, /"Biochem. Biophys, Res, Commun, 118, 176 (1984) /. m m

On connaît un certain nombre de micro-organismes qui sont aptes à collecter quelques éléments, tels que le sélénium, dans leur environnement et à les accumuler dans leur propre organisme·

La préparation de levure enrichie en sélénium est décrite dans le mémoire descriptif du Brevet des U.S.A. N° 4.530.846 et dans les demandes de Brevets Japonais publiées sous les Nos 60.224451 et 57.174098. L*enrichissement en sélénium par d'autres micro-crga- nismes, tels que des bactéries, actinomycètes et hyphomycètes, outre la levure, est décrit dans la demande de Brevet Japonais publiée sous le N° 78.148587.

Selon la demande de Brevet Japonais publiée sous le N 58.129954, on propose l'utilisation de levure contenant du sélénium, en mélange avec des huiles végétales, pour traiter des maladies séniles.

Le but de la présente invention est de procurer une nouvelle composition pharmaceutique agissant sur le système cardiaque et cardiovasculaire, qui rende possible la combinaison des propriétés avantageuses de micro-organismes contenant du sélénium organique naissant avec celles du DHA et du EPA et qui élimine simultanément les propriétés désavantageuses des acides gras polyinsaturés. L1invention est fondée sur la découverte que l'objectif précité peut être pleinement atteint grâce à une composition, utile pour éliminer la lipofuscinose céroîde, qui peut être obtenue en utilisant un micro-organisme contenant du sélénium, é.fcansfr' non toxique du point de vue de l'utilisation humaine, conjointement avec des acides gras polyinsaturés.

Selon une caractéristique de l'invention, on propose ainsi une composition pharmaceutique agissant sur le système cardiaque et cardiovasculaire, qui comprend 0,5 à 50% en masse d'un micro-organisme contenant du sélénium ainsi que 99,5 à 5C% en masse d'acides gras en c^ge24 cor-tenant au moins deux liaisons insaturées et/ou leurs dérivés, éventuellement en mélange avec des véhicules et/ou des additifs couramment utilisés dans 1 »industrie pharmaceutique et éventuellement avec des antioxydants.

En outre, l*invention vise un procédé pour préparer la composition précitée, qui consiste en ce qu»on mélange 0,5 à 50% en masse d»un micro-organisme contenant du sélénium ainsi que 99,5 à 50% en masse d*acides gras en C contenant au moins deux liaisons in- 1ο·2μ· saturées et/ou leurs dérivés, éventuellement avec des véhicules et/ou des additifs, couramment utilisés dans l*industrie pharmaceutique, et éventuellement avec des antioxydants, d*une manière couramment connue dans 1*industrie pharmaceutique,

La composition selon l*invention comprend convenablement l'acide eicosapentaénoïque (EPA) et l'acide docosahexaénolque (DHA) ainsi qu'une levure contenant du sélénium.

Comme matières premières des acides gras CO- 3 insatu-rés en C^g ^ représentant l'un des composants de la composition de l'invention, on peut utiliser des huiles susceptibles d'être obtenues à partir de divers poissons marins et d'eau douce, principalement à partir de maquereau, morue, hareng, sardine, ou mollusques tels que calmar, aussi bien qu'à partir du foie desdits poissons, par exemple de l'huile de foie de morue et de l'huile de foie de requin.

En plus du EPA et du DHA, les huiles de poissons contiennent une grande quantité d'acides gras saturés ainsi que des acides gras partiellement insaturés et d*autres constituants non hydroly- sables. L'élimination de ces constituants est très importante, sinon l'administration des compositions thérapeutiques préparées à partir des huiles de poissons auraient pour effet d'augmenter sensiblement la quantité calorique introduite ainsi que le taux sanguin de triglycé- rides. En outre, les constituants non hydrolysables peuvent contenir des stéroïdes tels que le cholestérol, de la vitamine D (et sa provitamine) et/ou delà vitamine A. Les vitamines D et A sont accumulées dans 1*organisme humain, de sorte qu*un traitement prolonge, necessaire pour l*effet désiré, serait impossible en utilisant une composition contenant ces vitamines. Par suite, on doit éliminer à partir de 1«huile de poisson, les constituants précités, tels que les acides gras saturés et partiellement insaturés ainsi que les constituants non hydrolysables, par exemple le cholestérol et les vitamines A et D. De cette manière, la quantité totale de EPA et DHA de l*huile de poisson est enrichie à plus de 50%.

Il est convenable d*utiliser des souches de micro-organismes qui ne sont pas toxiques vis-à-vis de l*organisme humain et qui sont utiles pour la consommation humaine. Les genres largement utilisés en biotechnologie, tels que Lactobacillus, Leukonostoc, Pediococcus, Acetobacter, Streptococcus, Torula, Kluyveromyces, Candida, Brettano-myces, Brevibacterium, Saccharomyces, Torulopsis, Pichia, Hansenula, Oidium, Rhodotorula, Trichospora, Pénicillium, Rhizopus, Mucor, Monas-cus, Aspergillus, entre autres, qui sont utiles pour la consommation humaine, sont très convenables à cet effet.

Pour inhiber l*oxydation de la composition de ^invention, il est convenable d*utiliser le -tocophérol (vitamine E), la glutathione ou les antioxydants courants tels que le butylhydroxy-toluène, en tant qu*agents conservateurs actifs.

On peut utiliser comme véhicule ou support, des substances couramment utilisées dans 1*industrie pharmaceutique, telles que le lactose, l*amidon ou le stéarate de magnésium.

Des recherches pharmaceutiques ont démontré que la composition de l*invention est dépourvue d*effets secondaires dommageables pour la santé, car on n'observe aucune modification du système micro· somal enzymatique du foie chez le rat en utilisant cent fois la quan· tite de la dose courante· La quantité de lipofuscine accumulée dans l'organisme est nettement abaissée par comparaison avec le témoin a-pres traitement avec la composition de l'invention· D'après des examens effectues en utilisant la composition de l'invention chez des rates Wistar pendant 6 semaines, on observe un effet inhibiteur d'agrégation plaquettaire, exempt d'ambiguité.

La dose efficace quotidienne optimale (calculée pour un poids moyen du corps de 70 kg) de la composition de l'invention est de 0,1 à 5 g. Le composant huile contient 22% de EPA et 43% de DHA en moyenne, La dose efficace quotidienne s'élève à 100-300 ^xg de sélénium.

Les principaux avantages de la composition de l'invention peuvent être résumés comme suit: 1. Les propriétés avantageuses du EPA et du DHA ainsi que celles du sélénium et de la levure sont combinées. 2. Les effets dommageables des compositions connues contenant des huiles de poissons, qui sont provoqués par des constituants tels que les stérols ainsi que les vitamines A et D, sont diminués ou éliminés. 3. Là possibilité d'apparition de la "lipofuscinose cé-roïde" comme dans la consommation d'acides gras polyinsaturés, est exclue. 4» La composition de l'invention contient du sélénium en tant que substance naissante enrichie dans un micro-organisme tel que des bactéries, fongi ou levures. Le sélénium administré conjointement avec le micro-organisme spécifique est mieux résorbé et exerce de manière préférable, son effet favorable. 5. Le sélénium lié dans des composés organiques peut être économiquement préparé en grandes quantités, spécifiquement enrichi dans des micro-organismes, principalement dans des levures. 6. La composition exerce une action thérapeutique favorable dans le cas de troubles atopiques et est utile pour le traitement préventif de l'eczéma, de l'asthme, des symptêmes allergiques, de la rhinite allergique et/ou de troubles atopiques tels que migraine, maladie de Crohn, colite ulcérative, otite moyenne, syndrome néphrotique et diabète. Elle est particulièrement utile pour le traitement de troubles du système cardiovasculaire: pour des manifestations apoplectiques, des états thrombo-emboliques tels qu'ictus, infarctus et syndrome de Keshan chez les patients jeunes, de même que pour la prévention des conditions anormales. L'invention est illustrée en détails par les Exemples suivants, donnés à titre indicatif, mais nullement limitatif.

Les acides gras 3 polyinsaturés utilisés dans la composition de l'invention peuvent être préparés conformément à l'Exemple 1, tandis que le micro-organisme enrichi en sélénium peut être préparé comme décrit dans les Exemples 2 à 6. Les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont illustrées par les Exemples 7 à 9,

Exemple 1

On verse goutte à goutte 8 kg d'une solution d'hydroxyde de sodium à 40%, à 50-60°C dans 24 kg d'huile de maquereau dissous à 60°C dans 16 litres de méthanol sous agitation. Puis on agite le mélange à 60°C pendant 45 minutes supplémentaires. Après addition de 20 kg d'acide chlorhydrique à 15% à la solution à environ 60°C, on sépare les couches et on lave la phase organique avec 10 kg d'acide chlorhydrique à 15%, puis avec 180 litres d'eau du robinet chaude, jusqu'à neutralité. On sépare de nouveau les phases, on ajoute 10C litres d' acétone à la phase huileuse que l'on chauffe ensuite à environ 45°C et on ajoute 3,8 kg d»hydroxyde de lithium dissous dans 30 litres d* eau« Après une agitation pendant 30 minutes, on laisse reposer le me» lange pendant une nuit, puis on le filtre et on évaporé le filtrat ace-tonique. On acidifie le résidu en ajoutant environ 8 kg d*acide chlorhydrique à 15%, on 1* ex trait 3 fois avec de l*hexane et on évapore la solution d*hexane. On utilise une atmosphère d*azote pendant ^opération entière de purification. On obtient ainsi 6,4 kg d*huile de poisson purifiée.

On verse goutte à goutte 1 kg de 1»huile de maquereau purifiée comme décrit ci-dessus, à 60°G dans une solution contenant 3 kg d*urée dans 9 litres de methanol. On agite le mélange à la même température pendant 2 heures, puis on le refroidit. On l'abandonne au repos à -10°G pendant une nuit, puis on le filtre et on évaporé le filtrat. On ajoute 2,5 litres d*acide chlorhydrique lîl au résidu et on agite le mélange pendant 15 minutes 0 Après extraction à 1 »hexane, on lave la phase hexane avec de l*eau jusqu*à neutralité, on la sèche sur sulfate de sodium anhydre et on l'évapore en obtenant 0,34 kg d'acides gras bî- 3 insaturés ayant un indice d'iode de 315 et contenant 247» de EPA et 42% de DHA.

Exemple 2

On verse chaque fois 2 litres d'un milieu de culture à l'extrait de malt liquide, stérilisé, dans des flacons en verre d'un volume de 5 litres et on enrichit le milieu en ajoutant 3% en masse de glucose. Après addition de 5^ug/ml de sélénite de sodium, on 1» inocule avec Saccharomyces çerevisiae, puis on le cultive sous aération à 32°C pendant 72 heures. On ajoute une quantité supplémentaire de 5yug/ml de sélénite de sodium à la culture à la 48ème heure de 1* opération de culture.

Après filtration, on lave plusieurs fois les cellules avec de l*eau et on les sèche a 68-70°C. Après micronisation, on détermine la teneur en sélénium par absorption atomique en obtenant une valeur de 2600^ug/g.

Exemple 3

On verse chaque fois 100 ml d*un milieu de culture à l*extrait de levure liquide dans des fioles Erlenmeyer d*un volume de 500 ml dans des conditions stériles. Après addition de 5yUg/r.il de sé-lénite de sodium, on inocule le milieu avec la moisissure Aspergillus sojae, puis on secoue les cultures à 28-30°C. On ajoute une quantité supplémentaire de 5yug/ml de sélénite de sodium à la culture le 3ème jour de l*opération de culture. Après 5 jours, on recueille la matière sèche par filtration, on la lave et on la sèche comme décrit dans l*Exemple 20 Après micronisation, on détermine la teneur en sélénium d*un échantillon par absorption atomique et on trouve qu*elle est de 3000yug/g.

Exemple 4

On suit le mode opératoire décrit dans l'Exemple 3, excepté que l*on utilise la levure Torulopsis utilis, au lieu de la moisissure. La masse microbienne obtenue durant la culture contient 1200 ^ug/g de sélénium.

Exemple 5

On cultive Streptococcus thermophilus à 45°C dans un milieu de culture préparé comme décrit dans 1*Exemple 3. Après la culture et le traitement consécutif, la poudre microbienne contient 4200 yug/g de sélénium.

Exemple 6

On cultive la bactérie Lactobacillus mesenteroides comme décrit dans 1*Exemple 3, excepté que l*on supplémente le milieu par addition de 1%, de glucose et 2% de carbonate de calcium en obtenant une masse bactérienne contenant 3000yug/g de sélénium.

Exemple 7

On ajoute 10g d*une poudre de levure contenant du sélénium (teneur en sélénium: 2600yug/g) à 150 g d'huile de maquereau (contenant 24% de EPA et 42% de DHA) enrichie à 65%,· Après homogénéisation, on conserve le mélange par addition de 0,15 g de vitamine E. On remplit avec l'agent actif ainsi obtenu, des capsules de gélatine molle que l'on emballe en feuilles blisters*

Exemple 8

On suit le mode opératoire décrit dans l*Exemple 7, excepté que l*on utilise les substances de départ suivantes: 400 g d*huile de foie de morue enrichie à 65%, ayant une teneur en EPA de 22% et une teneur en DHA de 43%; 100 g de poudre de levure à teneur en sélénium de 1200 jug/g; et 0,4 g de vitamine E. On remplit avec 1* homogénéisât, des capsules aptes à recevoir chacune 500 mg d'agent actif.

Exemple 9

On suit le mode opératoire décrit dans l*Exeraple 8, excepté que l'on utilise comme composant huile de poisson, 400 g d* une huile de poisson à 30% (contenant 18%, de EPA et I2%e de DHA) (produite par la firme Martens and Go·, Bergen, Norvège)·

Exemple 10 i I I tmmim

On suit le mode opératoire décrit dans l'Exemple 8, excepté que l'on' utilise comme composant huile de poisson, 400 g d' une huile de poisson contenant 9,2% de EPA et 10,4% de DHA·

Exemple 11

On prépare des comprimés ayant la composition suivante, en utilisant des dispositifs et procédés pharmaceutiques connus:

Huile de foie de morue enrichie en EPA et DHA et contenant 0,1% de vitamine E (à teneur en DHA de 43% et à teneur en EPA de 22%) 200,0 mg

Poudre de levure contenant du sélénium (teneur en seleniums 1500 ^ig/g) 86,0 mg

Lactose 140,0 mg

Amidon 60,0 mg

Polyvinyl pyrrolidone 3,5 mg

Stearate de magnésium 3,5 mg

Si on le désire, on peut enrober les comprimés avec du sucre ou avec une autre substance dans une machine a confectionner des compriméso

Il est entendu que l*on peut mettre en oeuvre 1* invention suivant de nombreuses variantes et modifications, sans pour autant s*écarter de son cadre et son esprit.

Claims

1. Compositions pharmaceutiques agissant sur le système cardiaque et cardiovasculaire, caractérisées en ce qu'elles comprennent 0,5 a 507. en masse d*un micro-organisme contenant du sélénium ainsi que 99,5 à 507. en masse d'acides gras en Cig_24 contenant au moins deux liaisons insaturées et/ou leurs dérivés, éventuellement en mélange avec des véhiculés et/ou des additifs couramment utilisés dans 1»industrie pharmaceutique et éventuellement avec des antioxydants.

2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend 5 à 35% en masse du micro-organisme contenant du selenium et 95 a 65% en masse des acides gras insaturés ou leurs dérivés. 3o Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu»elle comprend 15 à 25% en masse du micro-organisme contenant du sélénium et 85 à 757. en masse des acides gras insaturés.

4. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend des acides gras extraits de l'huile de poissons marins en tant qu'acides gras insaturés.

5. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend l'acide 5,8,11,14,17-eicosapentaénoIque et 1» acide 4,7,10,13,16,19-docosahexaénoïque en tant qu'acides gras insaturés.

6· Procédé pour la preparation d'une composition pharmaceutique agissant sur le système cardiaque et cardiovasculaire, caractérisé en ce qu'on mélange 0,5 à 507. en masse d'un micro-organisme contenant du selenium ainsi que 99,5 à 507. en masse d'acides gras en C 18-24 contenant au moins deux liaisons insaturées ou leurs dérivés avec des véhiculés et/ou des additifs couramment utilisés dans l'industrie pharmaceutique et eventuellement avec des antioxydants, d'une manière cou- ramment connue dans 1*industrie pharmaceutique* 7» Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l*on mélange 5 à 35% en masse du micro-organisme contenant du sélénium avec 95 à 657« en masse des acides gras insaturés* 8# Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l*on mélange 15 à 25% en masse du micro-organisme contenant du sélénium avec 85 à 75% en masse des acides gras insaturés, 9« Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que l*on utilise des acides gras extraits de 1»huile de poissons marins en tant qu*acides gras insaturése

10, Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce qu*il comprend l*utilisation de l*acide 5,8,11,14,17-eicosapenta-enolque et l*acide 4,7,10,13,16,19-docosahexaénoIque en tant qu*acides gras insaturés.