MC1079A1

MC1079A1 - Derives alkyles de l'antibiotique bm-123 et leur procede de preparation

Info

Publication number: MC1079A1
Application number: MC751173A
Authority: MC
Inventors: M Hlavka
Original assignee: American Cyanamid Co
Priority date: 1975-11-20
Filing date: 1975-11-20
Publication date: 1976-08-06

Description

La présente invention concerne un nouveau groupe d'antibiotiques et plus particulièrement une nouvelle série d'agents antibactériens puissants dérivés par alkylation réductrice de l'antibiotique BM-123 7 au moyen d'un aldéhyde de formule générale :

Ï^-CHO

dans laquelle R^ est un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur, halogéno alkyle inférieur, alcényle inférieur, phényle, phényle monosubs-titué, phénylalkyle inférieur, furyle-2, méthylfuryle-2, thiényle-2, méthylthiényle-2, pyrryle-2, méthylpyrryle-2, pyridyle-2 ou quinoléyle-2 ; ou d'une cétone de formule générale :

0

R2-C-r3

dans laquelle est un groupe alkyle inférieur, halogéno alkyle inférieur, ou phénylalkyle inférieur et R^ est un groupe alkyle inférieur, halogéno alkyle inférieur, alcényle inférieur, cycloalkyle inférieur, phényle,

phényle monosubstitué, phénylalkyle inférieur, ou (phényl monosubstitué)-alkyle inférieur ; ou bien R^ et R^ pris ensemble représentent un groupe tétraméthylène, pentaméthylène ou hexaméthylène. Les groupes alkyle inférieurs et halogéno alkyle inférieurs appropriés selon l'invention sont ceux ayant jusqu'à 6 atomes de carbone dans lesquels l'halogène est illustré par le chlore, le brome et l'iode,tels que méthyle, éthyle, isopropyle, sec-butyle, n-amyle, dichlorométhyle, bromo-2 éthyle,

diiodo-2,3 propyle, 7-chloropropyle, etc. Les groupes alcényle inférieurs appropriés sont ceux ayant jusqu'à 4 atomes de carbone tels que vinyle, allyle, propényle, isopropényle, butène-1 yle, butène-2 yle, butène-3 yle, isobutényle, etc. Les groupes cycloalkyle inférieurs appropriés sont les groupes cyclopentyle, cyclohexyle et cycloheptyle. Les groupes phényle monosubstitués appropriés selon l'invention sont par exemple les groupes p-acétamidophényle, m-nitrophényle, m-mercaptophényle, o-anisyle, p-anisyle, o-tolyle, p-tolyle, etc., tandis que les groupes phénylalkyle inférieur sont illustrés par les groupes benzyle, a-phényléthyle et |3-phényléthyle. Les groupes (phényl monosubstitué)-alkyle inférieurs peuvent être les groupes Oj m ou p-chlorobenzyle, a-(p-aminophényl)éthyle, P-(m-nitrophényl)~ éthyle, etc. Les groupes furyle-2, thiényle-2 et pyrryle-2 méthyl-.substitués "sont par exemple les groupes méthyl-5 furyle-2, diméthyl-3,4 furyle -2, méthyl-4 thiényle-2, diméthyl-3,5 thiényle-2, méthyl-5 pyrryle-2, trimé-thyl-1,3,4 pyrryle-2, etc. .

Le procédé d'alkylation réductrice permettant de préparer l.es nouveaux agents antibactériens selon l'invention est mis en oeuvre de la manière suivante. On dissout l'antibiotique BM-123 7 , BM-123 7.^ ou BM-123 7£ dans un solvant approprié tel que l'eau, le méthanol, le méthyl-cellosolve ou leurs mélanges, on ajoute ensuite un excès de l'aldéhyde ou de la cétone désiré par rapport à la quantité équimoléculaire puis on ajoute du cyanoborohydrure de sodium en quantité suffisante pour effectuer la réduction. On maintient le pH du mélange de réaction à 6,0-8,0 au moyen d'un acide inorganique dilué au cours de la réaction. Après 1 à 24 heures à la température ambiante (10-35°C), on évapore le mélange de réaction à siccité sous vide, on triture le résidu avec du méthanol et on filtre. On dilue le filtrat par l'acétone et on sépare par filtra-tion le produit solide précipité et on le sèche sous vide»

Les aldéhydes que l'on peut ainsi utiliser dans le procédé de l'invention sont par exemples les composés suivants : acétaldéhyde, propionaldéhyde, butyraldéhyde, isobutyraldéhyde, crotonaldéhyde, valéral-déhyde, benzaldéhyde, p-cyanobenzaldéhyde, salicylaldéhyde, cinnamaldéhyde, trichloroacétaldéhyde, etc. Les cétones que l'on peut ainsi utiliser dans le procédé de l'invention sont par exemples les composés suivants : acétone, butanone-2, dibromo-1,3 acétone, chloroacétone, acétophénone, m-chloroacéto-phénone, p-bromoacétophénone, p-trifluorométhylacétophénone, m-nitroacéto-phénone, p-diméthylaminoacétophénone, etc.

On obtient les produits à partir des mélanges de réaction d'alkylation réductrice par des techniques classiques telles que précipitation, concentration, extraction par solvant ou des combinaisons de ces techniques. Après isolation, on peut purifier les produits par l'une quelconque des techniques généralement connues de purification. Celles-ci comprennent la recristallisation dans divers solvants et mélanges solvants, les techniques chromatographiques et la répartition à contre-courant, qui sont toutes ordinairement utilisées à cet effet.

Les nouveaux agents antibactériens selon l'invention sont des bases organiques et sont donc capables de former des sels d'addition d'acide avec divers réactifs salifiables organiques et inorganiques. Ainsi, on obtient des sels d'addition d'acides formés par mélange de l'antibactérien base libre avec jusqu'à trois équivalents d'un acide, avantageusement dans un solvant neutre, avec des acides tels que les acides sulfurique, phosphorique, chlorhydrique, bromhydrique, sulfamique, citrique, maléique, fumarique, tartrique, acétique, benzoîque, gluconique, ascorbique et les analogues. Les sels d'addition d'acides des antibactériens selon l'invention

3

sont en général des solides cristallisés relativement solubles dans l'eau, le méthanol et l'éthanol et relativement insolubles dans les solvants organiques non polaires tels qu'éther diéthylique, benzène, toluène, et les analogues. Pour les buts de l'invention, les bases-libres des antibac-5 rériens sont équivalentes à leurs sels d'addition d'acides non toxiques.

Les antibiotiques dénommés BM-123 BM-123P , BM-123 et BM-123 sont formés pendant la culture en conditions contrôlées d'une nouvelle souche d'une espèce non déterminée de Nocardia. Cette nouvelle souche productrice d'antibiotiques a été isolée d'un échantillon de terre 10 de jardin recueillie à Oceola, dans l'Iowa^et elle est conservée dans la collection de la Lederle Laboratories Division de la-Société demanderesse à Pearl River, New York, sous la désignation Culture n° BM-123. Une culture viable du nouveau micro-organisme a été déposée au Culture Collection Laboratory, Northern Utilization Researche and Development Division, 15 United States Department of Agriculture, à Peoria dans 1'Illinois et a été ajoutée à sa collection permanente. Elle est librement accessible au public sous le n° NRRL 5646. Dans la présente description, on désigne par BM-123P un mélange en toutesproportions des substances BM-123 P^ et BM-123P^ et on désigne par BM-123T un mélange en toutes proportions de 20 BM-123 71 et BM-123 T .

On donne ci-après une description générale du micro-organisme Nocardia sp., NRRL 5646, d'après les caractéristiques diagnostiques observées. On a observé les caractéristiques de culture, physiologiques et morphologiques • de l'organisme selon les techniques décrites en détail par Shirling et 25 Gottlieb dans Internat. Journ. of Syst. Bacteriol. 16, pages 213-240 (1966). La composition chimique de la culture a été déterminée par les techniques indiquées par Lechevalier et al., dans Advan. Appl. Microbiol. 14, pages 47-72 (1971). Les couleurs descriptives soulignées et les désignations de couleurs ont été empruntées à Jacobson et al., Color Harmony Manual, 3è Edition 30 (1948), Container Corp. 0f America, Chicago, Illinois. Les détails descriptifs sont rassemblés dans les tableaux I à V ci-après.

Croissance

Modérée sur géloses à l'extrait de levure, à 1'asparagine-dextrose, de Benedict, de Bennett, de pomme de terre-dextrose 35 et de Weinstein ; légère sur gélose de Hickey et Transner,

à la pâte de tomate, à la farine d'avoine, et alimentaire ; et traces de croissance sur géloses aux sels inorganiques-amidon, aux flocons d'avoine de Kuster, à la solution de Czapek et au riz.

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Mycélium aérien

Mycélium aérien blanchâtre s'il y en a ; produit seulement sur géloses à l'extrait de levure, à 1'asparagine dextrose, de Benedict, de Bennett et de pomme de terre-dextrose.

5 Pigments solubles

Pas de production de pigments solubles.

Couleur de l'envers

Nuances incolore à jaunâtre.

Réactions physiologiques diverses 10 Pas de liquéfaction de la gélatine ; réduction des nitrates en nitrites en 7 jours ; pas de formation de pigments méla-noîdes sur géloses de peptone-fer ; pas de peptonisation ou de caillebotte dans le lait au pourpre de bromocrésol ; tolérance à NaCl dans la gélose à l'extrait de levure :^ 4%, mais -^7 % ; 15 température optimale de croissance 32°C. Utilisation des sources de carb. ne, selon la méthode de Pridham et Gottlieb dans J. Bacteriol. 56_, pages 107-114 (1948) : bonne utilisation du glycérol,de la salicine, du d-tréhalose et du dextrose ; assez bonne utilisation du 1-inositol ; et 20 utilisation mauvaise ou nulle du d-fructose, du maltose, de l'adonitol, du 1-arabinose, du lactose, du d-mannitol, du d-mélibiose, du d-raffinose, du l-rhamfiose, du saccharose et du d-xylose.

Composition chimique 25 L'organisme appartient au type IV de parois cellulaires,

c'est-à-dire qu'il contient de l'acide méso-diamino-2,6 pimé-lique et il a une constitution globale des sucres de la cellule du type A, c'est-à-dire il contient de l'arabinose et du galactose. Les extraits de cellule complète méthylés, 30 soumis à la chromatographie gazeuse, présentent des schémas d'acides gras semblables à ceux produits par Nocardia asteroides ATCC 3308.

Micromorphologie

Le mycélium aérien s'élève du mycélium de substrat en 35 éléments flexibles moyennement longs, rarement ramifiés,

se terminant couramment en spirales primitives allongées. Les éléments flexibles sont irrégulièrement segmentés en sections elliptiques ou cylindriques courtes (spores ?) qui se désarticulent facilement. Les portions terminales en

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spirales sont moins nettement segmentées. Les segments ont en général des dimensions de 0,8 à 1,7 p x 0,3 à 0,5 |i,

en moyenne de 0,4 x 1,2 p.

Diagnostic

5 Les caractéristiques morphologiques de la culture n° BM-123

sont difficiles à observer et à interprêter à cause du mauvais développement du mycélium aérien sur la plupart des milieux. En conséquence, on attache une importance considérable, par nécessité, à l'analyse chimique dans la 10 détermination de la relation générique de l'organisme.

Sur la base du système composé par Lechevalier et al., la culture n° BM-123 contient de l'acide méso-diamino-2,6 pimélique dans ses cellules complètes et l'analyse des sucres montre la présence d'arabinose et de galactose. 15 La culture appartient donc au type IV de parois cellulaires.

Une comparaison du diagramme de chromatographie gazeuse de la culture n° BM-123 avec celui de Nocardia asteroides ATCC 3308 montre que les deux sont remarquablement semblables* D'autres caractéristiques de la culture n° BM-123 dans 20 le cadre des Nocardia sont sa croissance aérienne fragmentaire sur certains milieux et l'absence totale de croissance aérienne sur la plupart des milieux. Au vu de l'absence de critères adéquats pour la caractérisa-tion de Nocardia au niveau de l'espèce, on n'a pas tenté 25 d'effectuer cette détermination. On considère donc que la culture n° BM-123 est une espèce indéterminée de Nocardia, jusqu'à ce qu'un diagnostic soit réalisable.

La production de BM-123P et de BM-1237 n'est pas limitée à cet organisme particulier ou à des organismes répondant complètement aux 30 caractéristiques ci-dessus de croissance et d'examen microscopique, qui ne sont données qu'à titre d'illustration. En réalité, on peut également utiliser des mutants produits à partir de cet organisme par divers moyens tels que l'exposition aux rayons X, aux radiations ultraviolettes, à la moutarde azotée aux actinophages, etc. Une culture viable d'une telle souche 35 mutante caractéristique a été déposée au Culture Collection Laboratory,

Nojrthern Utilization Researche and Development Division, United States . Department of Agriculture, à Peoria dans l'Illinois,et ajoutée à sa collection permanente sous le n° NRRL 8050. Bien que les caractéristiques .

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de culture, physiologiques et morphologiquesde NRRL 8050 soient sensiblement les mêmes que celles de NRRL 5646, il produit pendant la fermentation aérobie des quantités accrues de BM-123 . De même, NRRL 8050 diffère de la souche mère NRRL 5646 par les points suivants : 5 a) réduction plus lente des nitrates en nitrites ; et b) production d'un pigment de mycélium brun-bois de rose sur gélose de Bennett et sur gélose à l'extrait delevure.

Les nouveaux antibactériens selon l'invention sont en général des solides cristallisés ayant une solubilité relativement limitée 10 dans les solvants non polaires tels qu'éther éthylique et hexane, mais considérablement plus solubles dans les solvants tels que l'eau et les alcanols inférieurs. Les antibiotiques BM-123et BM-123 "Y ^ sont des isomères de structure et peuvent être représentés par les formules générales suivantes :

A 0

tiTcirxs 11

\N CH^CH-C-NH- (CH2) 3_nh_ (C^ 4~NH2

BM12 3T2

0

trans ||

-CH=CH-C-NH- (CH2) 3-NH- (CH2)4-NH2

00

81412 3^

9

L'alkylation réductrice du BM-123 7 et du BM-123 7^ ou BM-123 72 avec les cétones a lieu sur la chaîne latérale spermadine pour former des dérivés de formule générale :

trans

CH=CH-C-NH-(CH2)3-NH-(CH2)4-NH-CH

dans laquelle R est un reste de formule

10

et et R^ sont tels que définis ci-dessus. L'alkylation réductrice du BM-123y , du BM-123^ ^ ou du BM-123y ^ par les aldéhydes a lieu sur la chaîne latérale sperraadine pour former des dérivés mono-, di- ou tri-substitués de formules générales suivantes :

10

15

20

:h_

"«x ch=ch-c-nh-(ch2)3-nh-(ch2)4-n

:h2-ri ch=ch-c-nh- (ch2 ) 3-n- (ch2 ) ^nh-ch^rj^

ch2-Ri ch=ch-c-nh-(ch„)„-n-(ch„).-n

2 3

2 4

CH2"R1

'cYri ch2-Ri dans lesquelles R et R^ sont tels que définis ci-dessus0

L'utilité des dérivés alkylés du BM-123 est démontrée par leur aptitude à combattre les infections générales mortelles chez les souris. Ces nouvelles substances présentent une activité anti-

25- bactérienne in vivo élevée chez les souris contre Escherichia coli US 311,

lorsqu'on les administre en une seule dose sous-cutanée à des groupes de souris Carworth Farms CF-1 pesant environ 20 g, infectées par voie intrapéritonéale avec une dose létale de cette bactérie dans une dilution -3

10 dans le bouillon trypticase-soja-TSP d'une culture de sang-TSP de 30 5 heures. Le tableau VI ci-après indique l'activité in vivo des produits caractéristiques de l'invention préparés à partir des réactifs carbonylés indiqués, contre Escherichia coli US 311 chez la souris. L'activité est

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exprimée par la DE,.^ c'est-à-dire la dose en mg par kg de poids du corps nécessaire pour protéger 50% des souris contre E. coli.

Procédé par fermentation choisi pour produire principalement le BM-123P et le BM-123T .

5 On peut effectuer la culture de Nocardia sp. NRRL 8050

dans une grande variété de milieux de culture liquides. Les milieux qui sont utiles pour la production des antibiotiques comprennent une source assimilable de carbone telle qu'amidon, sucre, mélasse,glycérol, etc. et une source assimilable d'azote telle que protéines, hydrolysat de protéines, 10 polypeptides, aminoacides, liqueur de trempage de maïs, etc. ; et des anions inorganiques tels que potassium, magnésium, calcium, ammonium,

sulfate, carbonate, phosphate, chlorure, etc. Des éléments à l'état de traces tels que bore, molybdène, cuivre, etc. sont fournis sous forme d'impuretés des autres constituants du milieu. On réalise l'aération 15 dans les cuves et bouteilles par circulation forcée d'air stérile à travers le milieu de fermentation ou au-dessus de sa surface. On réalise encore l'agitation dans les cuves au moyen d'un agitateur mécanique à hélice.

On peut ajouter si nécessaire un agent anti-mousse tel que le produit vendu sous le nom de Hodag FD82.

20 Préparation d'inoculum pour le BM-123P et le BM-1237

On prépare un inoculum primaire de Nocardia sp. NRRL 8050 en flacons agités en inoculant 100 ml de milieu liquide stérile dans des fioles de 500 ml avec des produits de raclage ou de lavage d'une •culture sur gélose inclinée. On utilise ordinairement le milieu de 25 composition suivante :

Bacto-tryptone 5 g

Extrait de levure 5 g

Extrait de viande de boeuf 3 g

Glucose 10 g

30 Eau q.s.p. 1000 ml

On fait incuber les fioles à une température de 25-29°C, de préférence: 28°C et on cgite vigoureusement sur une secoueuse rotative pendant 30 à 48 heures. On transfère ensuite les inoculums dans des tubes de culture stériles à bouchon vissant et on les conserve au-dessous de -18°C. On utilise cette réserve d'inoculums végétatifs au lieu des produits de raclage de milieux inclinés pour l'inoculation d'autres fioles agitées dans

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la préparation de ce premier stade d'inoculum.

On utilise ces inoculums des fioles de premier stade pour ensemencer des échantillons de 12 litres du même milieu dans des fermen-teurs en verre de 20 litres. On aère la bouillie d'inoculums avec de l'air 5 stérile,tandis que l'on poursuit la culture pendant 30 à 48 heures.

On utilise les échantillons de 12 litres d'inoculums de deuxième stade pour ensemencer des fermenteurs contenant 300 litres du milieu liquide stérile suivant pour produire l'inoculum de troisième et dernier stade :

10 Matières solubles de viande 15 g

Sulfate d'ammonium 3 g

Phosphate de potassium dibasique 3 g

Carbonate de calcium 1 g Sulfate de magnésium heptahydraté 1,5 g

15 Glucose 10 g

Eau q.s.p. 1000 ml

On stérilise le glucose séparément.

On aère l'inoculum de troisième stade à raison de 0,4 à 0,8 litre d'air stérile par litre de bouillon par minute et on agite le 20 mélange en fermentation avec un agitateur à hélice tournant à 150-300 tr/mn. On maintient la température à 25-29°C ordinairement 28°C. On continue la culture pendant 48 à 72 heures, après quoi on utilise l'inoculum pour ensemencer une cuve de fermentation de 3000 litres.

Fermentation en cuve pour l'obtention du BM-123P et du BM-123y 5 Pour la production du BM-123P et du BM-123y dans des cuves de fermentation, on utilise de préférence le milieu de fermentation suivant :

Matières solubles de viande 30 g

Sulfate d'ammonium 6 g

Phosphate de potassium dibasique 6 g

Carbonate de calcium 2 g

Sulfate de magnésium heptahydraté 3 g

Glucose 20 g Eau ' q.s.p.1000 ml

On stérilise séparément le glucose.

On inocule chaque cuve avec 5 à 10% de l'inoculum de troisième stade préparé comme décrit dans la préparatin de l'inoculum. On maintient la bouillie en fermentation à une température de 25-28°C, ordinairement 26°C. On aère la bouillie avec de l'air stérile à raison

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de 0,3-0,5 litre d'air stérile par litre et par minute et on agite avec un agitateur à hélice tournant à 70-100 tr/mn. On laisse se poursuivre la fermentation entre 65 et 90 heures et on récolte la bouillie.

Les exemples suivants illustrent l'invention sans toutefois 5 en limiter la portée.

EXEMPLE 1

Préparation de l'inoculum pour le BM-123P et le BM-123

On prépare un milieu caractéristique de composition suivante utilisé pour faire pousser les inoculums de premier et second 10 stades.

Bacto-tryptone 5 g

Extrait de levure 5 g

Extrait de viande de boeuf 3 g

Glucose 10 g

15 ' Eau q.s.p.1000 ml

On inocule deux ballons de 500 ml contenant chacun 100 ml du milieu stérile ci-dessus avec 5 ml chacun d'un inoculum végétatif congelé de Nocardia _s£. NRRL 8050. On place les ballons sur une secoueuse rotative et on agite vigoureusement pendant 48 heures à 28°C. On transfère l'inoculum du ballon résultant dans un fermenteur en verre de 18,9 litres contenant 12 litres du milieu stérile ci-dessus. On aère la bouillie avec de l'air stérile tandis que l'on poursuit la culture pendant environ 48 heures,

après quoi on utilise le contenu pour ensemencer un fermenteur de 378 litres contenant 300 litres du milieu liquide stérile de composition suivante :

Matières solubles de viande 15 g

Sulfate d'ammonium 3 g

Phosphate de potassium dibasique 3 g Carbonate de calcium 1 g

Sulfate de magnésium heptahydraté 1,5 g Glucose 10 g

Eau q.s.p. 1000 ml

20

25

30

35

On stérilise séparément le glucose.

On aère la bouillie d'inoculum de troisième stade en faisant barboter de l'air stérile dans le fermenteur à raison de 0,4 litre d'air par litre de bouillie et par minute. L'agitation est obtenue au moyen d'un agitateur à hélice tournant à 240 tr/mn. On maintient la bouillie à 28°C

14

et on utilise comme agent anti-mousse le produit vendu sous le nom de Hodag FD82. Après une période de croissanœ de 48 heures, on utilise la bouillie d'inoculum pour ensemencer une fermentation de 3000 litres.

EXEMPLE 2

Fermentation utilisant Nocardia sp. NRRL 8050 et un milieu favorisant la production de BM-123et de BM-123y

On prépare une milieu de fermentation de composition suivante :

Matières solubles de viande 30 g

Sulfate d'ammonium 6 g

Phosphate de potassium dibasique 6 g Carbonate de calcium 2 g

Sulfate de magnésium heptahydraté 3 g Glucose 20 g

Eau q.s.p. 1000 ml

On stérilise séparément le glucose.

On stérilise le milieu de fermentation à 120°C par la vapeur sous 9 kg pendant 60 minutes. Le pH du milieu après stérilisation est de 6,9. On inocule 3000 litres de milieu stérile dans un fermenteur de 4000 litres avec 300 litres d'inoculum,comme décrit à l'exemple l,et on effectue la fermentation à 26°C en utilisant comme agent anti-mousse le produit vendu sous le nom de Hodag FD82. On aère la bouillie à raison de 0,35 litre d'air stérile par litre et par minute. On agite au moyen d'un agitateur à hélice tournant à 70-72 tr/mn. On récolte la bouillie après une durée de fermentation de 67 heures.

EXEMPLE 3

Isolement du BM-123[3 et du BM-123y

On ajuste à pH 4,0 par l'hydroxyde de sodium une portion de 3000 litres de bouillie de fermentation à pH 4,3 préparée comme décrit à l'exemple 2 et on filtre en utilisant 5% de terre d'infusoires comme auxiliaire de filtration. On lave le gâteau de filtration avec environ 100 litres d'eau et on le jette. On combine le filtrat et l'eau de lavage et on les envoie par pompage de bas en haut à travers trois colonnes d'acier inoxydable parallèles de 21 cm x 122 cm, contenant chacune 15 litres de gel de résine échangeuse de cations dextra-épichlorhydrine réticulée vendue s.ous le nom de CM Sephadex C-25 (Na+ ) par la Société Pharmacia Fine Chemicals, Inc. On lave les colonnes chargées avec un total d'environ 390 litres d'eau et ensuite on développe avec 200 litres de solution aqueuse

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à 1% de chlorure de sodium puis 560 litres de solution aqueuse à 5% de chlorure de sodium. On clarifie l'éluat aqueux à 5% de chlorure de sodium par filtration sur terre de diatomées et on fait passer le filtrat clarifié à travers une colonne de verre, 22,8 cm x 152,4 cm contenant 5 25 litres d'un charbon activé granulaire de 0,42-0,84 mm vendu sous le nom de Darco G-60 par la Société Atlas Chemical Industries, Inc. On lave la colonne chargée avec 120 litres d'eau et ensuite on développe avec 120 litres de méthanol aqueux à 15% , puis 340 litres de méthanol aqueux à 50% et ensuite 120 litres d'acétone aqueuse à 50%. On concentre sous 10 vide entre l'éluat de méthanol aqueux à 15% jusqu'à environ 7 litres d'une phase aqueuse et on ajuste le pH 4,5 6,0 au moyen d'une résine échangeuse d'anions faiblement basique du type polystyrène-polyamine vendue sous le nom d'Amberlite IR-45 (OH ). On sépare la résine par filtration et on concentre le filtrat sous vide jusqu'à environ 1 litre et ensuite on 15 lyophilise pour obtenir 38 g d'une substance consistant principalement en BM-123P avec une faible quantité de BM-123y (principalement du BM-123 7 • On ajuste l'éluat de méthanol aqueux à 50% à pH 4,65-6,0 par la résine Amberlite IR-45 (OH ). On sépare la résine par filtration et on concentre le filtrat sous vide jusqu'à environ 6,3 litres et ensuite on lyophilise 20 pour obtenir 213 g d'une substance consistant principalement en BM 123 y . On ajuste l'éluat d'acétone aqueuse à 50% à pH 4>0-6,0 par la résine Amberlite IR-45 (OH ). On sépare la résine par filtration et on concentre le filtrat sous vide jusqu'à environ 1,5 litre et on lyophilise ensuite pour obtenir 56 g de BM 123y impur. 25 EXEMPLE 4

Purification ultérieure du BM-123y

On verse une bouillie de CM Sephadex C-25 (NH^"1" ) dans . le chlorure d'ammonium aqueux à 2%, dans une colonne en verre de 2,6 cm de diamètre jusqu'à une hauteur de résine d'environ 62 cm. On fait couler 30 l'excès de chlorure d'ammonium aqueux à 2% et on dissout dans un échantillon de 5,0 g de BM-123y préparé comme décrit à l'exemple 3 dans environ 10 ml de chlorure d'ammonium aqueux à 2% et on l'applique sur la colonne. On élue ensuite la colonne avec 6 litres de chlorure d'ammonium aqueux ayant un gradient de 2% à 4%. On recueille automatiquement toutes les 15 mn 35 des fractions d'environ 75 ml chacune. On localise l'antibiotique BM-123y par examen de l'effluent de la colonne en lumière ultraviolette et par 'bioautographie de disques de papier plongés dans 1'effluent sur de grandes plaques de gélose ensemencées avec Klebsiella pneumoniae souche AD.

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La majeure partie du BM-123 est localisée entre les fractions 71 et 107 incluses.

On met en suspension dans l'eau 130 ml de Darco G-60 (0,42 0,84 mm), on transfère dans une colonne de verre, on laisse déposer et on fait couler l'excès d'eau. On combine les fractions 84 à 96 incluses de la chromatographie sur CM Sephadex ci-dessus et on fait passer sur une colonne de carbone granulaire. On lave la colonne chargée avec 600 ml dreau et ensuite on développe avec 1 litre d'acétone aqueuse à 50%>. Les deux éluats contiennent le BM-123 y ; on les concentre sous vide jusqu'à obtenir des phases aqueuses et on lyophilise pour obtenir un total de 886 mg de BM-123y sous la forme du chlorhydrate. On obtient un échantillon microanalytique en soumettant la matière ci-dessus à la répétition du procédé ci-dessus.

L'antibiotique BM-123y ne possède pas un point de fusion défini, mais la décomposition progressive commence au voisinage de 200°C.

La micro-analyse d'un échantillon équilibré pendant 24 heures dans une atmosphère à 22°C et 23% d'humidité relative donne les résultats suivants :

C = 39,44% ; H - 6,10% ; N = 16,19% ; Cl (ionique) : 11,54% ; perte au séchage : 8,19%. Le BM-123y dans l'eau donne un maximum d'absorption

1%

dans l'ultraviolet à 286 nm. E.. ° = 250. La position de ce maximum ne lcm r _ __25c varie pas avec le pH. Le BM 123y a une rotation spécifique CaJ-q = + (c = 0 97 dans l'eau).

L'antibiotique BM-123y présente des absorptions caractéristiques dans le spectre infrarouge aux nombres d'ondes suivants : 770, 830, 870 930, 980 1035, 1105, 1175, 1225, 1300, 1340 1370, 1460, 1510, 1555, 1605, 1660, 1740, 2950 et 3350 cm La figure 1 du dessin annexé représente le spectre d'absorption infrarouge standard du BM-123y dans une pastille de KBr.

EXEMPLE 5

Isolement du BM-123y .

- +-

On verse une bouillie de CM Sephadex C 25 /NaJ dans le chlorure de sodium aqueux à 2%, dans une colonne de verre de 2,6 cm de diamètre jusqu'à une hauteur de résine d'environ 70 cm. On fait couler l'excès de chlorure de sodium aqueux à 2% et on dissout un échantillon de 4,11 g contenant principalement du BM 123y^ avec un peu de BM-123 y^ et d'autres impuretés, préparé comme décrit à l'exemple 3, dans environ 10 ml de chlorure de sodium aqueux à 2% et on applique la solution sur cette colonne. On élue ensuite la colonne avec 4 litres de chlorure de

17

sodium aqueux ayant un gradient de 2%-4%. On recueille automatiquement toutes les 15 mn des fractions d'environ 75 ml chacune. On localise l'antibiotique BM-1237 par examen de l'effluent de la colonne en lumière ultraviolette et par bioautographie de disques de papier plongés dans l'effluent sur 5 de grandes plaques de gélose ensemencées avec Klebsiella pneumoniae souche AD. La majeure partie du BM-123y est localisée entre les fractions 64-90 incluses; les fractions initiales (64-80) contiennent un mélange de BM-1237^ et de BM-12372 tandis que les dernières fractions (81-90) contiennent du BM-123 7^ sensiblement pur.

10 On met en suspension dans l'eau 100 ml de Darco G-60

granulaire (0,42-0,84 mm), on transfère dans une colonne de verre, on laisse déposer et on laisse couler l'excès d'eau. On combine les fractions 81 à 90 incluses de la chromatographie sur CM Sephadex ci-dessus et on fait passer sur la colonne de carbone granulaire. On lave la colonne chargée 15 avec 500 ml d'eau puis on développe avec 500 ml de méthanol aqueux à 10%

suivis de 1 litre de méthanol aqueux à 50%. L éluat de méthanol aqueux à 50% contient la majeure partie du BM-123 7^ ; on l'ajuste à pH 5,9-6,0 par la résine Amberlite IR-45(0H ). On sépare la résine par filtration et on concentre le filtrat sous vide jusqu'à obtenir une phase aqueuse et on 20 lyophilise pour obtenir 294 mg de BM-1237 ^ amorphe blanc sous forme du chlorhydrate.

L'antibiotique BM-123 7^ ne possède pas un point de fusion défini,mais la décomposition progressive commence au voisinage de 200°C.

La microanalyse d'un échantillon équilibré pendant 24 heures dans une

25 atmosphère à 21°C à 60%. d'humidité relative donne les résultats suivants :

C = 37, 84% ; H = 5,73% ; N = 15,58% ; Cl (ionique), 10,01% ; perte au séchage : 10,45%. Dans le méthanol, le BM-123 71 donne un maximum d'absorption

1%

dans l'ultraviolet à 286 nm, E, ° = 225. La position de ce maximum ne varie lcm pas avec le pH. Le BM-123 7^ a une rotation spécifique de + 55° (c = 0,803 30 dans l'eau).

L'antibiotique BM-123 7^ présente les absorptions caractéristiques suivantes dans l'infrarouge : 770 830, 870, 930, 980, 1045, 1080, 1110, 1125, 1175, 1225, 1305, 1345 1380, 1465, 1615, 1560, 1605, 1660, 1730, 2950 et 3350 cm La figure 2 du dessin annexé représente un spectre 35 d'absorption infrarouge standard du BM-123 7^ dans une pastille de KBr.

La figure 4 du dessin annexé représente un spectre de résonance magnétique protonique standard du BM-123 7^ déterminé sur une solution dans l'eau • lourde au moyen d'un spectromètre fonctionnant à 100 mégacycles.

18

EXEMPLE 6

Isolement du BM-123Y

i_2

On dissout dans environ 120 ml de chlorure de sodium aqueux à 2%, un échantillon de 25 g contenant principalement du BM-l23y2 5 et du BM-123P, préparé comme décrit à l'exemple 3, et on l'applique sur une colonne contenant 1800 ml de CM Sephadex C-25 [Na ] dans le chlorure de sodium aqueux à 2%. On élue ensuite lacdLome avec 20 litres d'une solution aqueuse de chlorure de sodium ayant un gradient de 2% à 4%.Les 12 premiers litres d'éluat sont recueillis dans une grande bouteille et jetés. Ensuite, on 10 recueille automatiquement des fractions d'environ 800 ml toutes les

40 minutes. On localise l'antibiotique BM-1237 en examinant les fractions de la colonne en lumière ultraviolette. La majeure partie du BM-123y est comprise entre les fractions 7 et 18 incluses ; les fractions initiales (7 à 15) contiennent du BM-l23y2 sensiblement pur et les dernières frac-15 tions (16-18) contiennent un mélange de BM-1237^ et de BM-12372.

On met en suspension dans l'eau 600 ml de Darco G-60 granulaire (0,42-0,84 mm), on transfère dans une colonne de verre, on laisse déposer et on laisse couler l'excès d'eau. On combine les fractions 7 à 15 incluses de la chromatographie sur CM Sephadex ci-dessus et on 20 les fait passer à travers la colonne de carbone granulaire. On lave la colonne chargée avec 3 litres d'eau et ensuite on développe avec 3 litres de méthanol aqueux à I0%}puis 6 litres de méthanol aqueux à 50%. On ajuste l'éluat de méthanol aqueux à 10% à pH 5,8-6,0 par la résine Amberlite IR-45 (0H~). On sépare la résine par filtration et on concentre 25 le filtrat sous vide jusqu'à une phase aqueuse et on lyophilise pour obtenir 595 mg de BM-l23y2 amorphe blanc sous forme du chlorhydrate. On ajuste l'éluat de méthanol aqueux à 50% à pH 4,6-6,1 par la résine Amberlite IR-45 (OH-). On sépare la résine par filtration et on concentre le filtrat sous vide jusqu'à une phase aqueuse et on lyophilise pour 30 obtenir 3,645 g de BM-l23y2 sous forme de chlorhydrate amorphe blanc légèrement moins pur.

L'antibiotique BM-l23y2 ne possède pas un point de fusion défini mais la décomposition progressive commence au voisinage de 200°C. La microanalyse d'un échantillon équilibré pendant 24 heures dans une 35 atmosphère à 21°C à 60% d'humidité relative donne les résultats suivants: .C = 36,14% ; H = 5,67% ; N = 15,1% ; Cl (ionique) : 11,11% ; perte au séchage 10,87%, Dans le méthanol, le BM-12372 donne un maximum d'absorption

19

17

dans l'ultraviolet à 286 nm, E. = 220, La position de ce maximum ne varie icm pas avec le pH, Le BM-l23y2 a une rotation spécifique de +60° (c = 0,851 dans l'eau).

L'antibiotique BM-l23y2 présente les absorptions caractéristiques suivantes dans l'infrarouge : 770, 830, 870, 950, 980, 1035, 1110, 1175, 1225, 1285, 1345, 1380, 1470, 1515, 1560, 1605, 1660, 1755,

2950 et 3350 cm . La figure 3 du dessin annexé représente un spectre d'absorption infrarouge standard du BM-l23y2 dans une pastille de KBr, La figure 5 des dessins annexés représente un spectre de résonance magnétique protonique standard du BM-l23y2, déterminé en solution D20 au moyen d'un spectromètre fonctionnant à 100 mégacycles.

EXEMPLE 7

Distribution sur papier et chromatographie sur couche mince du BM-123P et du BM-l23y

On peut distinguer les antibiotiques BM-123 par chromato-graphie sur papier. A cet effet, on asperge des bandes de papier Whatman n° 1 avec une solution aqueuse méthanolique des substances et on les équilibre pendant 1 à 2 heures en présence des phases inférieure et supérieure. On développe les bandes pendant une nuit avec la phase inférieure (organique) d'un mélange phénol à 907o-m-crésol-acide acétique-pyridin e-eau (100:25:4:4:75 en volume). On sépare les bandes développées de la chambre chromatographique, on les sèche à l'air pendant 1 à 2 heures, on les lave à l'éther pour séparer le phénol résiduel et on les soumet à la bioautographie sur de grandes plaques de gélose ensemencées avec Klebsiella pneumoniae souche AD. Les valeurs de Rf représentatives sont indiquées dans le tableau VII ci-après.

Le constituant P est un mélange de deux antibiotiques lorsqu'on utilise ce système. Le BM-123P est constitué d'un antibiotique prépondérant (Rf = 0,50) dénommé BM-123P^. et d'un antibiotique en moindre quantité (Rf = 0,70) dénommé BM-123P2-

On peut également distinguer les antibiotiques BM-123 par chro-matographie sur couche mince. A cet effet, on dépose des gouttes d'une solution aqueuse de la substance à chromatographier (environ 20 à 40 y par tache) sur des plaques de Cellulose en couche épaisse vendues par la Société EM Laboratories, Inc., Elmsford, New York, sous le nom de Cellulose pré-enduite F (0,10 mm d'épaisseur). On développe les plaques pendant une nuit avec le mélange solvant n-butanol-eau-pyridine-acide acétique 15:2:10:1 en volume. On sépare les plaques développées de la chambre chromatographique et on les

20

sèche à l'air pendant environ 1 heure. On décèle les antibiotiques en utilisant la ninhydrine ou le réactif de Sakaguchi en pulvérisation. Les valeurs caractéristiques de Rf sont indiquées dans le tableau VIII ci-après.

Le BM-123P et le BM-l23y sont tous deux des mélanges de deux constituants lorsqu'on utilise ce système. Le BM-123P est constitué d'un composant prépondérant Rf 0,08 qui est le BM-123P^ et un composant de moindre importance Rf 0,14 qui est le BM-123P2. Le composant moins polaire du BM-123y (Rf = 0,23) est le BM-I23y^ et le composant le plus polaire (Rf = 0,17) est le BM-l23y2.

EXEMPLE 8

Procédé général pour l'alkylation réductrice de l'antibiotique BM-l23y

A une solution agitée de 100 mg d.'antibiotique BM-l23y dans 20 ml de méthanol, on ajoute 5 ml (ou 5 g) de l'aldéhyde approprié ou de la cétone appropriée et 100 mg de cyanoborohydrure de sodium. On maintient le pH de la solution résultante à environ 7,0 par le chlorure d'hydrogène méthanolique 0,IN pendant une durée de 3 à 24 heures. On suit la réaction par chromatographie sur couche mince, jusqu'à la disparition du BM-I23y. On filtre ensuite le mélange de réaction et on évapore le filtrat à siccité. On triture le résidu avec 3 ml de méthanol et on filtre. On dilue le filtrat avec 50 ml d'acétone et on sépare par filtration le précipité formé et on le sèche. On peut remplacer le méthanol utilisé comme solvant par 20 ml d'eau chaque fois que l'aldéhyde ou la cétone de départ est soluble dans l'eau,

EXEMPLE 9

Préparation du méthyl-BM-123y

A une solution de 1,0 g de BM-I23y et 2,5 ml d'une solution aqueuse à 37% de formaldéhyde dans 50 ml d'eau, on ajoute, par portions, 400 mg de cyanoborohydrure de sodium. On maintient le mélange de réaction à pH 7,0 par l'acide chlorhydrique IN pendant cette addition.

On agite le mélange de réaction pendant encore 10 minutes, à la température ambiante, puis on l'évaporé à siccité sous vide. On triture le résidu avec 20 ml de méthanol, on filtre et on dilue le filtrat avec 250 ml d'acétone. On sépare le filtration le produit précipité et on le sèche. Rendement : 667 mg.

EXEMPLE 10

Préparation de 1'isopropyl-BM-123y

A une solution de 200 mg de BM-123y dans 30 ml de méthanol, on ajoute 5 ml d'acétone. On ajoute à cette solution 139 mg de

21

cyanoborohydrure de sodium et on agite le mélange de réaction à la température ambiante pendant 30 minutes. Pendant cette durée on maintient le mélange de réaction à pH 7,4-7,8 par addition de chlorure d'hydrogène méthanolique 0,1N. On sépare par filtration la faible quantité de précipité qui s'est formée et on évapore le filtrat à siccité sous vide. On triture le résidu avec 2 ml de méthanol et on filtre. On dilue le filtrat avec 100 ml d'acétone, on sépare par filtration le produit solide qui se sépare et on sèche ; rendement : 184 mg.

EXEMPLE 11 Préparation du(ft-phényléthyl)-BM-l23y

A une solution de 200 mg de BM-l23y dans 15 ml d'eau et 25 ml d'acétonitrile, on ajoute une solution de 2 ml de phénylacétaldéhyde dans 4 ml d'éthanol. On ajoute 103 mg de cyanoborohydrure de sodium. On agite le mélange de réaction à la température ambiante pendant 30 minutes, en maintenant le pH du mélange à 7 par l'acide chlorhydrique 0,2N. On filtre ensuite le mélange de réaction et on évapore le filtrat à siccité sous vide. On triture le résidu avec 2 ml de méthanol et on filtre. On dilue le filtrat avec 100 ml d'acétone et on sépare par filtration le produit qui s'est séparé et on le sèche ; rendement : 180 mg.

EXEMPLE 12

Préparation du (triméthvl-1,3,3 butyl)-BM-123y

A une solution de 200 mg de chlorhydrate de BM~123y dans 50 ml de méthanol, on ajoute 3 ml de diméthyl-4,4 pentanone-2 et 106 mg de cyanoborohydrure de sodium. On maintient la solution réactionnelle à pH 7 en ajoutant goutte à goutte du chlorure d'hydrogène méthanolique. On agite le mélange de réaction à la température ambiante pendant 18 heures et on filtre. On évapore le filtrat à siccité sous vide. On dissout le résidu dans 3 ml de méthanol, on dilue avec 50 ml d'acétone et on filtre;

rendement : 125 mg.

EXEMPLE 13

Préparation du(méthyl-l phénéthyl)-BM-123y

A une solution de 200 mg de BM-123y dans 50 ml de méthanol, on ajoute 5 ml de phénylacétone. A cette solution on ajoute 170 mg de cyanoborohydrure de sodium et on agite le mélange de réaction à la température ambiante pendant 3 heures 1/2. Pendant cette durée, on maintient le pH du mélange de réaction à 7,0 par le méthanol saturé de gaz chlorhydrique. On concentre le mélange de réaction jusqu'à environ 5 ml, on dilue par 2 ml

22

de méthanol et on filtre. On verse le filtrat dans 100 ml d'acétone et on sépare par filtration le produit solide qui se sépare et on sèche; rendement : 233 mg.

EXEMPLE 14

5 Préparation du (méthyl-1 nonyl)-BM-123y

On ajoute 100 mg de cyanoborohydrure de sodium à uçe solution de 200 mg de BM-123y et 1 ml de décanone-2 dans 40 ml de méthanol. On ajuste le pH de la solution à 7,0 et on le maintient à 7,0 £ 0,2 par addition si nécessaire de chlorure d'hydrogène méthanolique 0,IN. Après 10 19 heures 1/2, on filtre le mélange de réaction et on concentre le filtrat sous vide à 30°C. On délaie le résidu dans 5 ml de méthanol et on filtre. On ajoute le filtrat à 50 ml d'acétone. On recueille par filtration le solide blanc sale qui précipite, on le lave à l'acétone et on sèche sous vide. Rendement en (méthyl-1 nonyl)-BM-123y brut : 167 mg. 15 EXEMPLE 15

Préparation du (diméthyl-1,3 butyl)-BM-l23y

A une solution de 210 mg de BM-l23y dans 50 ml de méthanol, on ajoute 5 ml de méthylisobutylcétone. A cette solution on ajoute 166 mg de cyanoborohydrure de sodium et on agite le mélange de 20 réaction à la température ambiante pendant 5 heures. Pendant cette durée, on maintient le pH du mélange de réaction à 7,0 par le méthanol saturé de gaz chlorhydrique. On évapore le mélange de réaction à siccité sous vide. On triture le résidu avec 2 ml de méthanol et on filtre. On dilue le filtrat avec 100 ml d'acétone et on sépare par filtration le produit 25 solide qui s'est séparé et on sèche ; rendement : 210 mg.

EXEMPLE 16 Préparation du (norbornyl-2)-BM-123y

On ajoute 100 mg de cyanoborohydrure de sodium à une solution de 200 mg de BM-l23y et 400 mg de norbornanone-2 dans 40 ml de 30 méthanol. On ajuste le pH de la solution à 7,0 par le chlorure d'hydrogène méthanolique 0,1N. On maintient le pH à 7,0 t 0,2 par addition si nécessaire de chlorure d'hydrogène 0,1N. Après 21 heures 1/2, on filtre le mélange de réaction et on concentre le filtrat sous vide à 35°C. On délaie le résidu dans 5 ml de méthanol et on filtre. On ajoute le filtrat à 50 ml d'acétone. 35 On recueille par filtration le solide blanc sale qui précipite, on le lave à l'acétone et on sèche sous vide. Rendement en norbornyl-2-BM-l23y : 175 mg.

23

EXEMPLE 17

Préparation de 1'isopropyl-BM-l23r^

On agite à la température ambiante pendant 40 minutes, un mélange de 50 mg de BM-1237-^, 5 ml d'acétone et 60 mg de cyanoborohydrure de sodium. On maintient le pH de la solution à 7,0 par addition goutte à goutte d'une solution méthanolique de chlorure d'hydrogène. On évapore le mélange à siccité sous vide. On triture le résidu avec 5 ml de méthanol et on dilue la solution résultante avec 50 ml d'acétone ; rendement : 49 mg.

EXEMPLE 18

Préparation de 1'isopropyl-BM-123'y^

On agite à la température ambiante pendant 40 minutes, un mélange de 41 mg de BM-12372, 5 ml d'acétone et 50 mg de cyanoborohydrure de sodium. On maintient le pH de la solution à 7 par addition goutte à goutte d'une solution méthanolique saturée de chlorure d'hydrogène. On filtre le mélange et on évapore à siccité sous vide. On triture le résidu avec 5 ml de méthanol et on dilue la solution résultante avec 50 ml d'acétone ; rendement : 46 mg.

EXEMPLE 19

Préparation du (méthyl-1 phényl-2 éthyl)-BM-123y„

On agite à la température ambiante pendant 3 heures et 45 minutes, un mélange de 200 mg de BM-12372, 5 ml de phénylacétone et 170 mg de cyanoborohydrure de sodium dans 50 ml de méthanol. Pendant cette durée, on maintient le pH du mélange de réaction à 7 par addition goutte à goutte d'une solution méthanolique saturée de chlorure d'hydrogène. On évapore le mélange à siccité sous vide. On triture le résidu avec 5 ml de méthanol et on dilue la solution méthanolique résultante avec environ 50 ml d'acétone; rendement : 233 mg.

EXEMPLE 20

Préparation de l'(éthyl-2 cyclopentyl)-BM-1237

On conserve à la température ambiante pendant 18 heures, une solution de 200 mg de BM-1237, 3 ml d'éthyl-2 cyclopentanone et 101 mg de cyanoborohydrure de sodium dans 50 ml de méthanol. Pendant cette durée , on maintient le pH de la solution à 7 par addition d'une solution saturée de chlorure d'hydrogène dans le méthanol. On évapore le mélange de reaction à siccité. On triture le résidu avec 3 ml de méthanol, on filtre et on dilue le filtrat avec 40 ml d'acétone; rendement : 157 mg.

24

EXEMPLE 21

Préparation du (diméthyl-3.5 cyclohexyl)-BM-l23y

On conserve à la température ambiante pendant une heure, une solution de 200 mg de BM-123y, 5 ml de diméthyl-3,5 cyclohexanone et 5 200 mg de cyanoborohydrure de sodium dans 50 ml de méthanol. Pendant cette durée, on maintient le pH delà solution à 7 par addition d'une solution saturée de chlorure d'hydrogène dans le méthanol. On triture le mélange de réaction avec 3 ml de méthanol, on filtre et on dilue le filtrat avec 40 ml d'acétone ; rendement : 200 mg. 10 EXEMPLE 22

Préparation du (diméthyl-2,4 cyclopentyl)-BM-l23y

On conserve à la température ambiante pendant 6 heures, une solution de 206 mg de BM-l23y, 3 ml de diméthyl-2,4 cyclbpentanone et 104 mg de cyanoborohydrure de sodium dans 50 ml de méthanol. Pendant cette 15 durée, on maintient le pH de la solution à 7 par addition d'une solution saturée de chlorure d'hydrogène dans le méthanol. On triture le mélange de réaction avec 3 ml de méthanol, on filtre et on dilue le filtrat avec 40 ml d'acétone ; rendement : 101 mg.

EXEMPLE 23

20 Préparation de l'(éthyl-2 cyclohexyl)-BM-123y

On conserve à la température ambiante pendant 3 heures, une solution de 200 mg de BM~123y, 5 ml d'éthyl-2 cyclohexanone et 213 mg de cyanoborohydrure de sodiumckns 50 ml de méthanol. Pendant cette durée on maintient le pH de la solution à 7 par addition de chlorure d'hydrogène 25 saturé dans le méthanol. On triture le mélange de réaction avec 3 ml de méthanol, on filtre et on dilue le filtrat avec 40 ml d'acétone; rendement : 200 mg. EXEMPLE 24

•Préparation du (méthyl-3 cyclohexyl)-BM-l23y

On conserve à la température ambiante pendant 2 heures, 30 une solution de 200 mg de BM-I23y, 1,5 ml de méthyl-3 cyclohexanone et 200 mgde cyanoborohydrure de sodium dans 50 ml de méthanol. Pendant cette durée, on maintient le pH de la solution à 7 par addition d'une solution saturée de chlorure d'hydrogène dans le méthanol. On triture le mélange de réaction avec 3 ml de méthanol, on filtre et on dilue le filtrat avec 40 ml 35 d'acétone ; rendement : 200 mg.

25

EXEMPLE 25

Préparation du (triméthyl-2.4.4 cyclopentyl)-BM-l23y

On conserve à la température ambiante pendant 24 heures, une solution de 200 mg de BM-I23y, 5 ml de triméthyl-2,4,4 cyclopentanone et 179 mg de cyanoborohydrure de sodium dans 50 ml de méthanol. Pendant cette durée,on maintient le pH de la solution à 7 par addition d'une solution saturée de chlorure d'hydrogène dans le méthanol. On triture le mélange de réaction avec 3 ml de méthanol, on filtre et on dilue le filtrat avec 40 ml d'acétone ; rendement : 176 mg.

EXEMPLE 26

Préparation du (propyl-2 cyclohexyl)-BM-l23y

On conserve à la température ambiante pendant 4 heures, une solution de 200 mg de BM-123y, 3 ml de propyl-2 cyclohexanone et 157 mg de cyanoborohydrure de sodium dans 50 ml de méthanol. Pendant cette durée, on maintient le pH de la solution à 7 par addition d'une solution saturée de chlorure d'hydrogène dans le méthanol. On triture le mélange de réactionnel avec 3 ml de méthanol, on filtre et on dilue le filtrat avec 40 ml d'acétone ; rendement : 75 mg.

EXEMPLE 27

Préparation du (méthyl-2 cyclopentyl)-BM-l23y

On conserve à la température ambiante pendant 3 heures 1/2, une solution de 211 mg de BM-I23y, 3 ml de méthyl-2 cyclopentanone et 98 mg de cyanoborohydrure de sodium dans 50 ml de méthanol. Pendant cette durée, on maintient le pH de la solution à 7 par addition d'une solution saturée de chlorure d'hydrogène dans le méthanol. On triture le mélange de réaction avec 3 ml de méthanol, on filtre et on dilue le filtrat avec 40 ml d'acétone : rendement : 157 mg.

TABLEAU I

Caractéristiques de culture de Nocardia sp. NRRL 5646

Incubation : 14 jours Température : 32°C

Milieu

Croissance

Mycélium aérien et/ou spores

Pigment soluble

Couleur de 11 envers

Remarques j j

Gélose - extrait de levure

Modérée

Mycélium aérien blanchâtre, clair

Non

Moutarde (3 ie)

Zones foncées dans le mycélium de substrat. Corémies formées sur le mycélium de surface

Gélose de Hickey et Tresner

Légère

Pas de mycélium aérien

Non

Incolore à vert jaunâtre

Zones périphériques des colonies devenant vert olive

Gélose asparagine-dextrose

Modérée

Traces de mycélium aérien blanchâtre

Non

Ambré (3 le)

Surface légèrement ridée

Gélose de Benedict

Modérée

Mycélium aérien blanchâtre, clair

Non

Marron (4 gc)

Corémies formées en abondance sur le mycélium de surface

Gélose de Bennett

Modérée

Traces de mycélium aérien blanchâtre

Non

Chameau (3 ie)

Surface légèrement ridée

Gélose - sels inorganiques- amidon

Traces

Pas de mycélium aérien

Non

Incolore

TABLEAU I (suite)

Milieu

Croissance

Mycélium aérien et/ou spores

Pigment soluble

Couleur de 1'envers

Remarques

Gélose - flocons d'avoine de Kuster

Traces

Pas de mycélium aérien

Non

Incolore

Gélose - solution de Czapek

Traces

Pas de mycélium aérien

Non

Incolore

Gélose - pomme de terre - dextrose

Modérée

Mycélium aérien blanchâtre, clair

Non

Chameau (3 ie)

Gélose - pâte de tomate - farine d'avoine

Légère

Pas de mycélium aérien

Non

Incolore

Gélose Pablum

Légère

Pas de mycélium aérien

Non

Incolore

Gélose - riz

Traces

Pas de mycélium aérien

Non

Incolore

Gélose de Weinstein

Modérée

Pas de mycélium aérien

Non

Incolore à jaunâtre

.

28

TABLEAU II

Micromorphologie de Nocardia sp. NRRL 5646

Milieu

Mycélium aérien et/ou structures sporifères

Gélose-extrait de levure

Le mycélium aérien s'élève du mycélium de substrat en éléments flexibles rarement ramifiés, se terminant couramment en spirales primitives allongées. Les éléments flexibles sont irrégulièrement segmentés en sections elliptiques ou cylindriques courtes (spores 1) qui se désarticulent facilement. Les portions terminales en spirales sont moins nettement segmentées. Les segments ont en général des dimensions de 0,8 à 1,7 p x 0,3 à 0,5 p, en moyenne de 0,4 x 1,2 p.

TABLEAU III

Réactions physiologiques diverses de Nocardia sp. NRRL 5646

Milieu

Période d'incubation

Croissance

Réaction physiologique

Gélatine

7 jours légère pas de liquéfaction

Gélatine

14 jours bonne pas de liquéfaction

Bouillon organique -nitrates

7 jours bonne nitrates réduits en nitrites

Bouillon organique -nitrates

14 jours bonne nitrates réduits en nitrites

Gélose -peptone-fer

24 - 48 heures bonne pas de production de pigments mélanoîdes

Lait au pourpre de bromocrésol

7 jours bonne pas de peptonisation ni formation de caillot j

j Gélose-extrait de levure + ; NaCl (4, 7, 10 et 137=)

i

7 jours modérés tolérance à NaCl ^ 47= mais ,<^77o

30

TABLEAU IV

Diagramme d'utilisation des sources de carbone par Nocardia sp. NRRL 5646 Incubation : 10 jours Température : 32°C

Source de carbone

Utilisation adonitol

0

1-arabinose

0

glycérol

3

d-fructose

1

i-inositol

2

lactose

0

d-mannitol

0

salicine

2

d-mélibiose

0

d-raffinose

0

rhamnose

0

maltose

1

saccharose

0

d-tréhalose

3

d-xylose

0

dextrose

3

témoin négatif

0

i 3 - bonne

2 - assez bonne 1 - mauvaise 0 -pas d'utilisation

TABLEAU V

Composition chimique de Nocardia sp. NRRL 5646

Type de parois cellulaires

Constituants principaux'

Type IV

acide méso-diamino-2,6 pimélique, arabinose, galactose

TABLEAU VI

Réactif carbonylé utilisé

Nom du dérivé

DE5qj mg/kg de poids corporel dipropylamino-1 propanone-2

[méthyl-1 (N,N-dipropylaminp)-2 éthyl]-BMl23y

0,3

chloro-1 pentanone-3

(éthyl-1 chloro-3 propyl)-BM123y

0,12

cyclooctanone cyclooctyl-BMl23y

0,18

méthyl-4 pentanone-2

(diméthyl-1,3 butyl)-BM123y

<0,12

phénylacétone

(méthyl-1 phényl-2 éthyl)-BM123y

0,18

trans-phényl-4 butène-3 one-2

(méthyl-1 phényl-3 propène-2 yl)-BM123y

0,25

cyclohexyl-1 propanone-1

(cyclohexyl-1 propyl)-BM123y

0,37

méthyl-6 heptène-5 one-2

(diméthyl-1,5 hexène-4 yl)-BM123y

0,06

méthyl-3 pentanone-2

(diméthyl-1,2 butyl)-BM123y

0,12

méthyl-5 hexanone-2

(diméthyl-1,4 pentyl)-BMl23y

0,12

éthyl-3 pentanone-2

(méthyl-1 éthyl-2 butyl)-BM123y

0,18

diméthyl-3,5 octanone-2

(triméthyl-1,2,4 heptyl)-BM123y

0,37

°ctanone-3

(éthyl-1 hexyl)-BM123y

0,18

TABLEAU VI(suite 1)

Réactif carbonylé utilisé

Nom du dérivé

mg/kg de poids corporel méthyl-3 hexanone-2

(diméthyl-1,2 pentyl)-BM123y

0,18

indolyl-3 acétone

[méthyl-1 (P-indolyI)-2 éthyl]-BM123y

0,12

pentanone-2

(méthyl-1 butyl)-BM123y

< 0,12

butanone-2

(méthyl-1 propyl)-BM123y

< 0,12

cyclopentène-2 yl-1 acétone

[méthyl-1 (cyclopentène-2 yl)-2 éthyl]-BM123y

<0,12

acétone isopropyl-BM123y

<0,12

décanone-3

(éthyl-1 octyl)-BM123y

0,25

undécanone-3

(éthyl-1 nonyl)-BM123y

0,38

o-acétoacétotoluidide

[méthyl-1 (o-tolylcarbamoyl)-2 éthyl]-BM123y

0,25

oxyde de mésityle

(diméthyl-1,3 butène-2 yl)-BM123y

0,3

méthoxyacétone

(méthyl-1 méthoxy-2 éthyl)-BM123y

0,3

cyclohexylacétone

(méthyl-1 cyclohexyl-2 éthyl)-BM123y

0,18

| (p-hydroxyphényl)-4 butanone-2

[méthyl-1 (p-hydroxyphényl)-3 propyl]-BM123y

0,3

TABLEAU VI (suite 2)

Réactif carbonylé utilisé

Nom du dérivé

DE50, mg/kg de poids corporel

(oxo-2 heptyl)phosphonate de diméthyle

[(diméthoxyphosphinyl)méthyl-l hexyl]-BM123T

0,3

méthyl-4 hexanone-2

(diméthyl-1,3 pentyl)-BM123y

< 0,12

tétraméthyl-2,2,4,4 cyclopentanone

(tétraméthyl-2,2,4,4 cyclopentyl)-BM123y

0,75

triméthy1-2,4,4 cyclopentanone

(triméthyl-2,4,4 cyclopentyl)-BM123y

0,3

cyclopentyl-2 cyclopentanone

(cyclopentyl-2 cyclopentyl)-BMl23y

0,37

(cyclohexène-1 yl)-2 cyclohexanone

[(cyclohexène-1 yl)-2 cyclohexyl]-BM123y

0,19

tertiopentyl-3 cyclopentanone

(tertiopentyl-3 cyclopentyl)-BM123y

0,5

cyclohexyl-2 cyclohexanone

(cyclohexyl-2 cyclohexyl)-BM123y

0,75

éthyl-2 cyclohexanone

(éthyl-2 cyclohexyl)-BM123y

0,19

diméthyl-3,3 butanone-2

(triméthyl-1,2,2 propyl)-BM123y

40,12

undécanone-2

(méthyl-1 décyl)-BM123y i

i

>2 ,

tétrahydrothiopyrannone-4

(tétrahydrothiopyrannyl-4)-BM123y

0,38 j diméthyl-3,5 cyclohexanone

(diméthyl-3,5 cyclohexyl)-BM123y i

(0,12

tétradécanone-2

(méthyl-1 tridécyl)-BM123y

2,0

TABLEAP VI (suite 3)

Réactif carbonyls utilisé

Nom du dérivé

DE^Q3 mg/kg de poids corporel méthoxy-1 butène-1 one-3

(méthyl-1 méthoxy-3 propène-2 yl)-BM123y

">2,0

hydroxy-4 méthyl-3 butanone-2

(diméthyl-1,2 hydroxy-3 propyl)-BM123T

0,12

menthone

(méthyl-3 isopropyl-6 cyclohexyl)-BM123y

0,38

cyclononanone cyclononyl-BM123y

0,18

méthyl-1 décalone-2

(décahydrométhyl-1 naphtyl-2)-BM123y

0,25

isophorone

(diméthyl-3,3 cyclohexène-4 yl)-BMl23y

0,37

méthyl-3 décalone-2

(décahydrométhyl-3 naphtyl-2)-BM123y

0,37

(diméthoxy-3,4 phényl)-1 butanone-2

[éthyl-1 (diméthoxy-3,4 phényl)-2 éthyl]-BM123y

1,0

diéthylamino-1 butanone-3

[méthyl-1 (N,N-diéthylamino)-3 propyl]-BM123y

0,18

acétylchloroacétate d'éthyle

(méthyl-1 chloro-2 carbéthoxy-2 éthyl)-BM123y

1,5

hydroxy-3 méthyl-3 butanone-2

(diméthyl-1,2,2 hydroxy-2 propyl)-BM123y

0,18

pentanone-3

(éthyl-1 propyl)-BM123y

0,12

i

TABLEAU VI (suite 4)

Réactif carbonylé utilisé

Nom du dérivé

DE5qj mg/kg de poids corporel méthyl-3 butanone-2

(diméthyl-1,2 propyl)-BM123y

0,19

p-chlorophénylacétone

[méthyl-1 p-chlorophényl)-2 éthyl]-BMl23y

0,25

N-(tertio-butyl)acétoacétamide

[(tertiobutylcarbamoyl)-2 méthyl-1

0,38

éthyl]-BM123T

diméthoxy-1,1 acétone

(méthyl-1 diméthoxy-2,2 éthyl)-BM123y

0,5

heptanone-4

(propyl-1 butyl)-BM123y

0,25

méthoxy-3 phénylacétone

[méthyl-1 (méthoxy-3 phényl)-2 éthyl]-BMl23y

0,30

acide acétonedicarboxylique-1,3

(carboxy-2 carboxyméthyl-1 éthyl)-BM123y

0,5

phényl-2 cyclohexanone

(phényl-2 cyclohexyl)-BM123y

0,38

phénoxypropanone-2

(méthyl-1 phénoxy-2 éthyl)-BM1237

0,3

i butyne-3 one-2

(méthyl-1 butyne-2 yl)-BM123y

<2,0

diméthylaminoacétone

[méthyl-1 (N,N-diméthylamino)-2 propyl]-BM123y

1,5

diéthylamino-5 pentanone-2

[méthyl-1 (N,N-diéthylamino)-4 butyl]-BM123y

0,5

TABLEAU VI (suite 5)

Réactif carbonylé utilisé

Nom du dérivé

DE^q mg./kg en poids corporel cyclohexène-2 one-1

(cyclohexène-2 yl)-BM123y

0,25

cyc1opropylméthylc ét one

(cyclopropyl-1 <éthyl)-BM123y

0,25

diméthoxy-4,4 butanone-2

(méthyl-1 diméthoxy-3,3 propyl)-BM123y

0,75

acétonedicarboxylate-1,3 de diméthyle

(carbométhoxy-1 carbométhoxyméthylr-2 éthyl)-

BM123y

0,75

méthoxy-2 phénylacétone

[méthyl-1 (méthoxy-2 phényl)-2 éthyl]-BM123y

0,7

acétylacétone

(méthyl-1 acéty1-2 éthyl)-BM123y

1,5

cyclobutanone cyclobutyl-BM123y

0,38

p-chlor ophénylac ét one

[méthyl-1 (p-chlorophényl)-2 -éthyl]-BM123y

0,25

octanone-2

(méthyl-1 heptyl)-BM123y

0,38

phényl-4 butanone-2

(méthyl-1 phényl-3 propyl)-BM123y

0,38

chloro-5 pentanone-2

(méthyl-1 chloro-4 butyl)t-BM123y

0,37

o-chlorophénylacétone

[méthyl-1 (o-chlorophényl)-2 éthyl]-BMl23y

0,37

m-chlorophénylacétone

[méthyl-1 -(m-chlorophényl)-2 éthyl]-BMl23y

0,38

hexène-5 one-2

(méthyl-1 -pentène-4 yl)-BM123y

0,38

cyclohexanone c yc 1ohexy1-BM12 3y

0,75

hexanone-2

(méthyl-1 'pentyl)-BM123y

0,38

u>

ON

TABLEAU VI (suite 6)

Réactif carbonylé utilisé

Ncm du dérivé

mg/kg en poids corporel heptanone-2

(méthyl-1 hexyl)-BM123y

0,38

cycloheptanone cycloheptyl-BMl23y •

0,3

cyclopentanone cyclopentyl-BM123y

0,25

diméthyl-4,4 pentanone-2

(triméthyl-1,3,3 butyl)-BM123y

0,18

acétamido-2 butanone-3

(acétamido-2 méthyl-1 propyl)-BM123y

0,50

diméthyl-2,6 heptanone-3

(isopropyl-1 méthyl-4 pentyl)-BMl23y

0,39

octanone-4

(propyl-1 pentyl)-BMl23y

0,39

acétylpyridine-3

(£pyridyl-3)-l éthyl]-BMl23y

0,75

heptanone-3

(éthyl-1 pentyl)-BM123y

0,25

butyrylacétate d1éthyle

[(carbéthoxyméthyl)-l butyl]-BM123y

0,75

benzyl-l pipéridone-4

(benzyl-l pipéridyl-4)-BM123y

0,18

méthyl-1 pipétidone-4

(méthyl-1 pipéridyl-4)-BM123y

0,75

méthyl-3 cyclopentanone

(méthyl-3- cyclopentyl)-BMl23y

0,25

diméthyl-333 butanone-2

(méthyl-1 diméthyl-2,2 propyl-)-BM123y

0,18

acétyl-2 norbornène-5

[(norbornène-5 yl-2)-l éthyl]-BM123y

<0,12

bicyclo[3.2.l]-octanone-2

(bicyclo[3.2 ,l]octyl-2)-BM123y

<0,25

quinuclidinone-3

(quinuclidinyl-3)-BM123y

0,39

méthoxy-5 tétralone-2

(méthoxy-5 tétralyl-2)-BM123y

0,18

LO

TABLEAU VI (suite 7)

Réactif carbonylé utilisé

Nom du dérivé

DE^q mg/kg en poids corporel méthyl-4 heptanone-2

(diméthyl-1,3 hexyl)-BM12 3y

0,5

diméthyl-3,4 hexanone-2

(triméthyl-1,2,3 pentyl)-BM123y

0,39

triméthyl-1,3,3 cyclopentanone

(triméthyl-1,3,3 cyclopentyl)-BM123y

0,37

acétylcyclopentanone .

(cyclopentyl-1 éthyl)-BMl23y

0,18

hexène-5- one-2

(méthyl-1 pentène-4 yl)BM123y

0,18

méthyl-2 cyclopentanone

(méthyl-2 cyclopentyl)-BMl23y

0,25

diméthyl-2,4 cyclopentanone

(diméthyl-2,4 cyclopentyl)-BMl23y

0,18

éthyl-2 cyclopentanone

(éthyl-2 -cyclopentyl)-BMl23y

0,12

adamantone-2

( adamantyl-2 ) -BM123y

0,25

hexanone-3

(éthyl-1 butyl)-BM123y

0,39

a-méthylacétoacétate d1éthyle

(méthyl-1 carboéthoxy-2 propyl)-BM123y

0,18

norbornone

( n orb orny 1)-BM12 3y

0,18

hexène-5 one-2

(méthyl-1 pentène-5 yl)-BMl23y

0,18

hydroxy-3 butènone-2

(méthyl-1 hydroxy-2 propyl)-BMl23y

0,37

hydroxy-4 méthyl-3 butanone-2

(diméthyl-1,2 hydroxy-3 propyl)-BM123y

0,18

nonanone-2

(méthyl-1 cctyl)-BMl23y

0,37

hydroxy-5 pentanone-2

(méthyl-1 hydroxy-4 -butyl)-BM123y

0,18

TABLEAU VI (suite 8)

Réactif carbonylé utilisé

Nom du dérivé

DE^q mg/kg en poids corporel décanone-2

(méthyl-1 nonyl)-BM123y

0,18

t-butyl-4 cyclohexanone

(t-butyl-4 cyclohexyl)-BMl23y

0,12

éthylidène-2 cyclohexanone

(éthylidène->2 cyclohexyl)-BM123y

0,12

phénylacétaldéhyde

(phényl-2 éthyl)-BMl23y

0,18

p-méthoxyphénylacétaldéhyde

[(p-méthoxyphényl)-2 éthyl]-BM123y

0,18

éthyl-2 hexanal

(éthyl-2 hexyl)-BM123y

0,37

diméthyl-2,2 butanal

(diméthyl-2,2 butyl)-BMl23y

0,12

diméthyl-2,2- propanai

(diméthyl-2,2 -propyl)-BM123y

0,18

éthyl-2 butène-2 al

(éthyl-2 butène-2 yl)-BM123y

0,18

trans-méthyl-2 butène-2 al

(trans-méthyl-2 butène-2 yl)-BM123y

0,18

méthyl-1 cyclo hexène-3 yl méthanal

[(méthyl-1 cyclo hexène-3 yl)-méthyl]-

BM123y

0,18

trans-méthyl-2 pentène-2 al

(trans-méthyl-2- pentène-2 yl)-BM123y

0,18

formaldéhyde méthyl-BM123y

0,12

acétaldéhyde

éthyl-BM123y

0,38

40

TABLEAU VII

Constituant

Rf

BM-123y BM-123P

0,85 0,50 ; 0,70

TABLEAU VIII

Constituant

Rf

BM-1237 BM-123P

0,17 ; 0,23 0,08 ; 0,14

41

Claims

REVENDICATIONS 1. Nouveaux composés caractérisés en ce qu'ils répondent aux formules générales :

R

0

f/ \ trams ||

// x\_ ch=ch-c-nh-(ch2)3-nh-(ch2)4-nh-ch2-r1

10

(I)

/ w trans r_// x>_ ch=ch-c-nh-(ch2)3-nh-(ch2)4-n:

ih2-Ri

'CHg-Rj

(II)

trans

çh2-Ri

// \\ || i *■ *

r _// ch=ch-c-nh-(ch2)3-n-(ch2)4-nh-ch2-r1

15

(III)

R-

/ ^

ch2-ei trans

!h=ch-c -nh- ( ch2 ) 3 -n- ( ch2 ) 4 -n ;

ch2-Ri

:H2-R]L

(IV)

20 dans lesquelles R est un groupe de formule :

25

30

H C-NSn H NH

il f° I

O I c=o

NH i
2 I

NHn

(V)

42

h h

0

1/

C

II

0

"0

m t1

h nh

I

C=0

I

nh~

ou h

CH.

h u

oh h.

0 II \

11 /

0, h

NH

I

C=0

I

nh9

(vi)

nh-c-iin II 0

Y» N

\0h <

T \

O-

H NH

I

C=NH

I

nh-,

et est un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle inférieur, halogéno-alkyle inférieur, alcényle inférieur, phényle, phényle monosubstitué, phénylalkyle inférieur, furyle-2, méthylfuryl-2, thiényle-2, méthyl-thiényle-2,pyrryle-2, méthylpyrryle-2, pyridyle-2 ou quinoléyle-2. 2. Nouveaux composés caractérisés en ce qu'ils répondent

à la formule générale :

0

/ w trans r—^ n)- ch=ch-c-nh-(ch2)3-nh-(ch2)4-nh-cï

■Rr r„

dans laquelle R est un groupe de formule :

(a)

ou

43

0

Cb)

R2 est un groupe alkyle inférieur, halogéno-alkyle inférieur ou phénylalkyle inférieur ; et R^ est un groupe alkyle inférieur, halogéno-alkyle inférieur, alcényle inférieur, cycloalkyle inférieur, phényle, phényle monosubstitué, phénylalkyle inférieur, ou (phényl monosubstitué)-alkyle inférieur ; ou bien R2 et R^ pris avec le groupe méthylidyne auquel ils sont liés forment un groupe cyclopentyle, mono(alkyl inférieur)-cyclopentyle, di-(alkyl inférieur)-cyclopentyle, tri(alkyl inférieur)-cyclopentyle, cyclohexyle, mono(alkyl inférieur)-cyclohexyle, di(alkyl inférieur)cyclohexyle ou tri(alkyl inférieur)cyclohexyle.
3. Procédé pour la préparation des composés selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on alkyle une aminé de formule générale :

0

fi V.CH=CH-C-NH-(CH2)3-NH-(CH2)4-NH2

dans laquelle R est tel que défini ci-dessus avec un aldéhyde de formule R^-CHO dans laquelle R^ est tel que défini ci-dessus en présence d'un agent réducteur dans un solvant inerte vis-à-vis des réactifs pendant une durée suffisante pour que l'alkylation réductrice ait lieu à un degré notable.
4. Procédé pour la préparation des composés selon la revendication 2, caractérisé en ce que l'on alkyle une aminé de formule 'générale :

44

J~\

trans

.ch=ch-c-nh-(ch2)3-nh-(ch2)4-nh2

dans laquelle R est tel que défini ci-dessus avec une cétone de formule 5 0

ff

R2-C-R3 dans laquelle R2 et R^ sont tels que définis ci-dessus en présence d'un agent réducteur dans un solvant inerte vis-à-vis des réactifs pendant une durée suffisante pour que l'alkylation réductrice ait lieu à un degré notable.

10
5. Nouveaux antibiotiques caractérisés en ce qu'ils consistent en composés selon les revendications 1 et 2 et leurs sels d'addition d'acides pharmaceutiquement acceptables.
6, Compositions thérapeutiques, caractérisées en ce qu'elles contiennent un médicament selon la revendication 5. 15
7. Formes pharmaceutiques d'administration des compositions selon la revendication 6.

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51