MC1935A1 - Procedes pour la preparation d'arabinosides puriques substitues,de leurs derives pharmaceutiquement acceptables et de formulations pharmaceutiques les contenant - Google Patents

Description

La présente invention concerne certains arabino-sides puriques substitués et leurs dérivés/ en particulier leurs esters, physiologiquement acceptables, et leur emploi dans le traitement de certaines maladies à virus ADN.

L1herpesvirus varicellae (HVV) qui est l'agent causal de la varicelle et du zona, est un virus ADN de la famille des virus herpétiques. La varicelle est la première maladie provoquée par HVV chez un hôte dépourvu d'immunité ; c'est généralement une affection peu sévère du jeune enfant qui se manifeste par de la fièvre et une éruption prurigineuse. Le zona {herpes zoster) est la forme récurrente de la maladie, survenant chez les adultes qui ont été préalablement infectés par 1'herpesvirus varicellae. Les manifestations cliniques de cette infection se caractérisent par une névralgie et une éruption cutanée de vésicules dont la distribution est unilatérale et radiculaire. L'extension de l'inflammation peut conduire à Une paralysie ou à des convulsions, et au coma si les méninges viennent à être atteintes.

Chez les sujets immunodéficients, le virus peut se disséminer en provoquant des maladies graves, souvent mortelles. L'immunodépression peut être causée par des médicaments utilisés chez des patients ayant subi une greffe ou dans le traitement de néoplasmes malins, ou par des affections qui, tel le SIDA, s'attaquent au système immunitaire en laissant la victime vulnérable à des infections qui ne seraient autrement pas dangereuses.

Le cytomégalovirus (CMV) est un autre virus de la famille des virus herpétiques. L'infection peut être acquise dans l'enfance ou au début de l'âge adulte et,

chez le foetus, l'infection intra-utérine est sans doute la forme d'infection la plus commune, mais jusqu'à 90 % des infections congénitales sont asymptomatiques à la naissance. Il est généralement considéré qu'une infection primaire de la mère au cours de la grossesse expose l'enfant à naître aux plus grands risques, tandis qu'en réacti

vation, les infections foetales sont generalement clinique-ment muettes. Les effets cliniques s'échelonnent depuis la mort et des atteintes graves (microcéphalie/ hépatospléno-mégalie/ ictère/ arriération mentale) jusqu'à une absence de tout effet pathologique manifeste/ en passant par une stagnation du développement pondéro-statural et une prédisposition aux infections pulmonaires et auriculaires. Chez les jeunes adultes/ l'infection peut très bien passer inaperçue ou se manifester comme une maladie ressemblant à la mononucléose infectieuse transmise par un proche contact physique.

Des infections tout aussi sérieuses peuvent également survenir par réactivation du virus en sommeil chez des sujets présentant un fléchissement de l'immunité tels que décrits à propos des infections à HVV. Ces infections conduisent à un accroissement de la morbidité et de la mortalité dues aux rétinites/ pneumopathies et troubles gastro-intestinaux.

On a maintenant découvert que certains nucléosides arabino-puriques décrits ci-après / caractérisés par 1 a présence de groupes substituants aux positions 2 et 6 du noyau puri-que/ sont doués d'une puissante activité contre des infections virales humaines/ en particulier celles causées par 1'herpesvirus varicellae (HVV) ou le cytomégalovirus (CMV).

Certains nucléosides arabino-puriquçs substitués, en particulier la 9-&-D-arabinofurannosyl-6-rnéthoxy-9H-purine; la 9-fJ-D-arabinof urannosyl-6-pyrrolidino-9H-purine , la 9-&-D-arabinofurannosyl-6-méthylamino-9H-purine et la 9-B-D-arabinofurannosyl-6-diméthylamino-9H-purine, décrits ci-après pour leur utilisation dans le traitement d'infections à HVV et CMV/ ont été antérieurement décrits dans J. Org. Chem./ Vol. 27/ 3274-9 (1962) ; Cancer Treatment Rep./ 60(10)/ 1567-84 (1976) ; Tetrahedron/ 40(4)/ 709-13 (1984) ; Canada J. Biochem./ 43(1)/ 1-15 (1965) ; J. Med. Chem./ 12/ 498-504 (1969) ; J. Biol. Chem./ 251(13)/ 4055-61 (1976) ; Ann. N.Y. Acad. Sci./ 284, 81-90 (1977) ; le

H

10

15

20

brevet européen N° 002 192 ; le brevet des E.U.A. N° 3 666 856 ; et le brevet des E.U.A. N° 3 758 684.

Ainsi/ sous le premier aspect de la présente invention/ il est fourni un composé de formule (I) :

dans laquelle représente un atome d'halogène (par exemple de chlore ou d'iode)/ un groupe alcoxy en C]_-(~5 (Par exemple méthoxy ou éthoxy) : un groupe alcoxy en substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène (par exemple trifluoro-méthoxy), un groupe amino qui est substitué par un ou deux groupes choisis parmi les groupes alkyle en C-^-C,- (par exemple méthyle ou éthyle)/ les groupes alkyle en substitués par un ou plusieurs atomes de fluor (par exemple 2-fluoro-éthyle ou 2/2/2-trifluoréthyle) et les groupes cycloalkyle en C^-Cg (par exemple cyclopropyle)/ ou le terme amino d'un cycle contenant 4 à 7 atomes de carbone et facultativement une double liaison (par exemple pyrrolidino) et/ou un autre atome d'azote ; et R£ représente l'hydrogène/ un halogène ou le groupe amino ; et leurs dérivés physiologiquement aceptables/ pour le traitement ou la prophylaxie d'infections virales humaines causées par HVV ou CMV.

posés de formule (I) dans lesquels R£ est l'hydrogène et est un groupe méthoxy/ pipéridino ou pyrrolidino et ceux dans lesquels R£ est le groupe amino et R^ est le chlore/ et leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables/ pour leur emploi en thérapie médicale.

Ai

(i)

La présente invention inclut également les corn-

Dans la formule (I) ci-dessus/ les groupes alkyle (y compris ceux qui font partie des groupements alcoxy/ alkylamino ou dialkylamino) sont de préférence des groupes méthyle/ éthyle ou propyle.

Les composés préférés de formule (i) comprennent ceux dans lesquels :

(a) R2 est l'hydrogène : et

(b) est un groupe alcoxy en C^-C^/ notamment méthoxy : ou bien

(c) R^ est un groupe alkylamino en Cj_-C5' notaïïiment diméthyl-amino ; ou encore

(d) R^ est un halogène/ notamment l'iode.

Les composés suivants sont des composés préférés de la présente invention en raison de leur puissante activité antivirale contre HVV ou CMV :

1) 9-B-D-arabinofurannosyl-6-méthylamino-9H-purine/

2) 9-B-D-arabinofurannosyl-6-diméthylamino-9H-purine,

3) 9-3-D-arabinofurannosyl-6-méthoxy-9H-purine,

4) 9-3-D-arabinofurannosyl-6-éthoxy-9H-purine,

5) 9-3-D-arabinofurannosyl-6-iodo-9H-purine,

6) 9-3-D-arabinofurannosyl-2-amino-6-iodopurine,

1) 9-B-D-arabinofurannosyl-6-pyrrolidino-9H-purine,

8) 9-3-D-arabinofurannosyl-2-chloro-6-méthylamino-9H-purine,

9) 9-B-D-arabinofurannosyl-6-cyclopropylamino-9H-purine/

10 ) 9-fJ-D-arabinofurannosyl-6-éthylméthylamino-9H-purine, 11) 9-B-D-arabinofurannosyl-2-amino-6-méthoxy-9H-purine/ et 12 ) 9-B-D-arabinof urannosyl-6-n-propoxy-9H_-purine .

Parmi les composés numérotés ci-dessus/ les composés 2)/ 3) et 5) sont particulièrement préférés. La présente invention inclut également les composés nouveaux de formule (I) et leurs dérivés physiologiquement acceptables/ en particulier les composés 4), 5)/ 6)/ 8)/ 9)/ 10)/ 11) et 12) énumérés ci-dessus.

Sous un second aspect de la présente invention/

11 est fourni les nouveaux composés de formule générale I (a) :

€

dans laquelle représente un atome d'halogène (par exemple de chlore ou d'iode)/ un groupe alcoxy en Cj_-C5 (Par exemple méthoxy ou éthoxy), un groupe alcoxy en substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène (par exemple trifluoro-5 méthoxy), un groupe amino qui est substitué par un ou deux groupes choisis parmi les groupes alkyle en Cj_-<~5 (Par exem~ pie méthyle ou éthyle), les groupes alkyle en C-^-C,. substitués par un ou plusieurs atomes de fluor (par exemple 2-fluoro-éthyle ou 2,2,2-trifluoréthyle) ou les groupes cycloalkyle 10 en Cg-Cg (par exemple cyclopropyle), ou le terme amino d'un cycle contenant 4 à 7 atomes de carbone et facultativement une double liaison (par exemple pyrrolidino) et/ou un autre atome d'azote ; et R2 représente l'hydrogène/ un halogène ou le groupe amino/ à condition que si R2 est l'hydrogène, 15 ne représente alors pas le chlore ni un groupe méthoxy,

méthylamino, éthylamino, diméthylamino, pipéridino ou pyrrolidino, et que si R2 est le groupe amino, R^ ne représente alors pas le chlore ni le groupe méthylamino : et leurs dérivés physiologiquement acceptables autres que les 2',3',5'-20 triacétates. et les dérivés 2',3',5'-tribenzyliques des composés de formule l(a) dans lesquels R^ est le chlore ou le fluor et R2 est le chlore, le fluor, l'hydrogène ou le groupe amino.

La présente invention inclut en outre un composé de formule l(a) pour son utilisation en thérapie médicale, 25 en particulier dans le traitement d'infections virales humaines causées par HVV ou CMV.

f

Sous un autre aspect de la présente invention/ il est fourni des dérivés pharmaceutiquement acceptables des composés de formule (I), à savoir tout éther, sel,

ester ou sel d'un tel ester, pharmaceutiquement acceptable ou tout autre composé qui, par administration à un sujet humain, est capable de fournir (directement ou indirectement) un composé de formule (I) ou un métabolite ou résidu doué d'activité antivirale d'un tel composé de formule (I)

Les esters pharmaceutiquement acceptables des composé de formule (I) ci-dessus sont particulièrement préférés car ils sont capables de fournir des taux élevés du composé originel dans le plasma d'un sujet après une administration par voie orale. La présente invention propose notamment/ comme classe préférée de nouveaux composés les esters pharmaceutiquement acceptables du composé 3) ci-dessus, formés par estérification d'un ou plusieurs des groupes hydroxy des positions 2', 3' et 5' du fragment arabinose.

Des dérivés particulièrement préférés des composés de formule (I) comprennent les mono-, di- et tri-esters du résidu d'arabinose, substitués aux positions 2', 3' et 5' de ce résidu.

Ces esters préférés comprennent les esters d'acides carboxyliques dont le fragment non carbonylé du groupement.ester est choisi parmi les groupes, alkyle à chaîne droite ou ramifiée (par exemple n-propyle, t-butyle, n-butyle)/ alcoxyalkyle (par exemple méthoxyméthyle)/ aralkyle (par exemple benzyle)/ aryloxyalkyle (par exemple phénoxyméthyle)/ aryle (par exemple phényle) facultativement substitué par un ou plusieurs groupes halogéno/ alkyle en C^-C4 ou alcoxy. en C2-C4' nitro ou amino ; des sulfonates tels que les esters alkylsulfonyliques "ou alkylarylsulfo-nyliques (par exemple méthanesulfonylique ou tosylsulfony-lique) ; des esters d'amino-acides (par exemple de L-valine) et les esters mono-/ di- et triphosphoriques. Les sels pharmaceutiquement acceptables de ces esters comprennent

s les sels de sodium, potassium, NR^+ où R = H ou un groupe alkye en cjl~£ç' et des sels d'addition d'acide. Dans les groupes ester susmentionnés, les groupes alkyle (y compris ceux des groupements alcoxy) contiennent 1 à 12 atomes de carbone et les groupes aryle sont de préférence le groupe phényle.

Les esters et éthers suivants sont de nouveaux composés préférés de la présente invention :

13 ) 9 - ( 5-0-benzoyl-B-D-arabinof urannosyl ) -6-méthoxy-

9H-purine,

14 ) 6-méthoxy-9- [ 5-0- ( 4-méthylphénylsulf onyl )-f$-D-arabino-

furannosyl]-9H-purine,

15) 6-méthoxy-9-(5-0-méthylsulfonyl-B-D-arabinofurannosyl)-9H-purine,

16) 9-(5-0-(4-méthylbenzoyl)-B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9ïî-purine,

17) 9-(5-0-(4-chlorobenzoyl)-B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine,

18) 9-(5-0-(4-méthoxybenzoyl)-B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine,

19) 6-méthoxy-9-(5-0-phénylacétyl-B-D-arabinofurannosyl)-9H-purine,

20 ) 6-méthoxy-9- ( 5-0-phényloxyacétyl-(j-D-arabinof urannosyl ) -9H-purine,

21) 6-méthoxy-9-(5-0-méthoxyacétyl-£-D-arabinofurannosyl)-9H-purine,

22) 9-15-0-(4-nitrobenzoyl)-B-D-arabinofurannosyl]-6-méthoxy-9H-purine,

23) 6-méthoxy-9-(5-0-pentanoyl-B-D-arabinofurannosyl)-9H-purine,

24) 9- [ 5-0- (4-aminobenzoyl)-B-D-arabinof urannosyl ] -6-méthoxy-9H-purine,

25) 6-méthoxy-9-(5-0-propionyl-B-D-arabinofurannosyl)-9îl-purine,

26) 9-(5-0-butanoyl-B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9ji-purine,

5

10

15

20

25

30

27) 9-[5-0-(2,2-diméthylpropionyl)-B-D-arabinofurannosyl]-6-méthoxy-9H-purine,

28) 9-(5-0-acétyl-B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine,

29) 6-méthoxy-9-[5-0-(2-méthylpropionyl)-B-D-arabino-f urannosyl ] -9î3-purine,

30) 6-méthoxy-9-[2-0-(2/2-diméthylpropionyl)-p-D-arabino-furannosyl]-9H-purine,

31) 6-méthoxy-9-[(2/3,5-tri-0-acétyl)-3-D-arabino-furannosylJ-9H-purine,

32) 6-méthoxy-9-(2-0-pentanoyl-B-D-arabinofurannosyl)-9H-purine/

33) 9-(2-0-butanoyl-B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine/

34) 6-méthoxy-9-[2-0-(2-méthylpropionyl)-B-D-arabino-f urannosyl ] -9îî-purine /

35) 9-(3-O-benzoyl-B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine,

36) 9-(2/3-anhydro-B-D-lyxofurannosyle)-6-méthoxypurine,

37) 6-méthoxy-9-[(2-0-(4-méthoxybenzoyl))-B-D-arabino-furannosyl ] -9!î-purine,

38) 6-méthoxy-9-[(2-0-(4-méthylbenzoyl))-B~D-arabino-furannosyl]-9H-purine,

39) 9-[2-0-(4-chlorobenzoyl)-b-d-arabinofurannosyl]-6-méthoxy-9H-purine,

40) 6-méthoxy-9-[3,5-0-(1,1/3,3-tétra-isopropyl-l,3-di-siloxane-l / 3-diyl ) - B-D-arabinof urannosyl ] -9J3-purine,

41) 6-méthoxy-9-[2-0-(2-aminobenzoyl)-B-D-arabino-furannosyl]-9H-purine,

42) 6-méthoxy-9-[2-(4-méthylbenzoyl)-3,5-0-(1,1,3,3-tétra-isopropyldisiloxane-1,3-diyl)-B-D-arabinofurannosyl]-9H_-purine,

43) 6-méthoxy-9-[2-(4-méthoxybenzoyl)-3,5-0-(l,l,3,3-tétra-isopropyldisiloxane-1,3-diyl)-B-D-arabinofurannosyl]-9î3-purine /

44) 9-[2-(4-chlorobenzoyl)-3,5-0-(l,l,3,3-tétra-isopropyl-

\ô

disiloxane-1,3-diyl)-3-D-arabinofurannosyl]-6-méthoxy-9H-purine,

45) ester 51-monophosphorique de 9-3-D-arabinofurannosyl-6-diméthylamino-9H-purine,

46) 5'-monophosphate d'arabinoside 6-méthoxypurique/ et

47) 51-triphosphate d'arabinoside 6-méthoxypurique.

Les composés 16, 24 et 32 ci-dessus sont particulièrement préférés.

Les nucléosides puriques de formule (I) et leurs dérivés seront appelés ci-après des composés selon 1'invention ou des ingrédients actifs.

Sous un autre aspect préféré de la présente invention, il est proposé d'utiliser un composé selon l'invention dans la fabrication d'un médicament pour le traitement ou la prophylaxie d'infections virales humaines causées par HVV ou CMV.

La présente invention fournit encore un procédé pour le traitement ou la prophylaxie d'infections à HVV ou CMV chez un sujet humain, qui consiste à administrer audit sujet humain une quantité efficace d'un composé selon 1 ' invention.

Le procédé ci-dessus inclut un procédé d'inhibition de la réplication de virus HVV ou CMV dans des cellules-hôtes d'un mammifère, qui consiste à appliquer au cellules infectées une quantité efficace pour inhiber la réplication des virus d'un composé de formule (I) ou d'un de ses dérivés pharmaceutiquement acceptables.

Des exemples des cas cliniques provoqués par des infections à HVV ou CMV qui peuvent être traités selon l'invention comprennent ceux qui sont visés ci-dessus.

Les composés de formule (I) et leurs dérivés pharmaceutiquement acceptables (appelés collectivement ci-après des ingrédients actifs) peuvent être administrés par toute voie appropriée au cas à traiter, des voies convenables comprenant les voies orale, rectale, nasale, topique (y compris buccale et sublinguale), vaginale et parentérale

(y compris sous-cutanée/ intramusculaire, intraveineuse, intradermique, intrathécale et épidurale). On réalisera que la voie préférée peut varier selon, par exemple, l'état du receveur.

Pour chacune des utilisations et indications susmentionnées, la quantité requise d'un ingrédient actif (tel que défini ci-dessus) dépendra d'un certain nombre de facteurs comprenant la gravité de l'affection à traiter et l'identité du receveur et sera en fin de compte laissée à l'appréciation du médecin traitant. En général, cependant, pour chacune de ces utilisations et indications, une dose efficace convenable se situe dans l'intervalle de 0,1 à 250 mg par kilogramme de poids corporel du receveur et par jour, de préférence dans l'intervalle de 0,1 à 100 mg par kilogramme de poids corporel et par jour, et mieux encore dans l'intervalle de 1 à 20 mg par kilogramme de poids corporel et par jour,' une dose optimale étant d'environ 15 mg par kilogramme de poids corporel et par jour (sauf indication contraire, tous les poids d'ingrédient actif sont calculés sur la base du composé originel de formule (I) ; pour leurs sels et esters, les chiffres doivent être proportionnellement accrus). La dose désirée est de préférence présentée en deux, trois ou quatre sous-doses, ou davantage, administrées à intervalles appropriés tout au long de la journée. Ces sous-doses peuvent être administrées en formes poso-logiques unitaires contenant, par exemple, 5 à 1000 mg, de préférence 20 à 500 mg, et mieux encore 100 à 400 mg, de l'ingrédient actif par forme posologique unitaire.

Bien que les ingrédients actifs puissent être administrés seuls, il est préférable de les présenter sous forme de formulations pharmaceutiques. Les formulations de la présente invention comprennent au moins un ingrédient actif, tel que défini ci-dessus, ainsi qu'un ou plusieurs supports acceptables pour celui-ci, et, facultativement, d'autres ingrédients thérapeutiques. Le ou les supports doivent être "acceptables" en ce sens qu'il doivent être

compatibles avec les autres ingrédients de la formulation et ne pas être nocifs pour leurs receveurs.

Les formulations comprennent celles qui sont adaptées à l'administration par les voies orale, rectale, nasale, topique (y compris buccale et sublinguale), vaginale ou parentérale (y compris sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intradermique, intrathécale et épidurale). Les formulations peuvent commodément être présentées sous forme posologique unitaire et peuvent être préparées par n'importe lesquels des procédés bien connus dans l'art pharmaceutique. Ces procédés comprennent l'étape qui consiste à mettre l'ingrédient actif en association avec le support qui se compose d'un ou plusieurs ingrédients secondaires. En générais les formulations sont préparées en mettant uniformément et intimement l'ingrédient actif en association avec des supports liquides ou des supports solides finement divisés, ou les deux, puis, si nécessaire, en conformant le produit.

Les formulations de la présente invention qui sont adaptées à l'administration par voie orale peuvent être présentées sous forme d'unités discrètes telles que capsules, cachets ou comprimés, contenant chacun une quantité prédéterminée de l'ingrédient actif ; sous forme d'une poudre ou de granulés ; sous forme d'une solution ou d'une suspension dans un liquide aqueux ou un liquide non aqueux ; ou sous forme d'une émulsion liquide du type huile-dans-eau ou d'une émulsion liquide du type eau-dans-huile. L'ingrédient actif peut également être présenté sous forme d'un bol, d'un électuaire ou d'une pâte.

Un comprimé peut être préparé par compression ou moulage, facultativement avec un ou plusieurs ingrédients secondaires. On peut préparer des comprimés pressés en comprimant, dans une machine appropriée, l'ingrédient actif sous une forme s'écoulant librement telle qu'une poudre ou des granulés, facultativement mélangé à un liant (par exemple la polyvinylpyrrolidone, la gélatine, 1'hydroxypropyl-

méthyl-cellulose)/ un lubrifiant/ un diluant inerte/ un conservateur/ un délitant (par exemple 1'amidon-glycolate de sodium/ la polyvinylpyrrolidone réticulée/ la carboxyméthyl-cellulose sodique réticulée)/ un agent tensio-actif ou un agent dispersant. On peut préparer des comprimés moulés en moulant/ dans une machine appropriée/ un mélange du composé réduit en poudre humidifié par un diluant liquide inerte. Les comprimés peuvent facultativement être enrobés ou entaillés et peuvent être formulés de façon à réaliser une libération lente ou réglée de l'ingrédient actif qu'ils renferment/ en utilisant par exemple de 1'hydroxypropyl-méthyl-cellulose en diverses proportions pour obtenir le programme de libération désiré.

Pour les infections de l'oeil ou d'autres tissus externes/ par exemple de la bouche et de la peau/ les formulations sont de préférence appliquées sous forme d'une pommade ou crème à usage topique contenant l'ingrédient actif en une proportion de/ par exemple/ 0/075 à 20 % en poids/ de préférence 0/2 à 15 % en poids et mieux encore 0/5 à 10 % en poids. S'ils sont formulés en une pommade/ les ingrédients actifs peuvent être utilisés avec une base de pommade soit paraffinique, soit miscible à l'eau. Dans l'alternative/ les ingrédients actifs peuvent être formulés en une crème avec une base de crème du type huile-dans-eau.

Si on le désire/ la phase aqueuse de la crème peut contenir/ par exemple, au moins 30 % en poids d'un polyalcool/ c'est-à-dire un alcool comportant deux ou plusieurs groupes hydroxyle/ tel que le propylène-glycol/ le butane-1/3-diol/ le mannitol/ le sorbitol, le glycérol et un polyéthylène-glycol/ et leurs mélanges. Les formulations à usage topique peuvent avantageusement contenir un composé qui favorise l'absorption ou la pénétration de l'ingrédient actif à travers la peau ou autre zone affectée. Des exemples de ces agents favorisant l'absorption ou la pénétration dans le derme comprennent le diméthylsulfoxyde et des composés analogues apparentés.

La phase huileuse des émulsions de la présente invention peut être élaborée d'une manière connue à partir d'ingrédients connus. Bien que cette phase puisse être uniquement constituée d'un agent émulsionnant (également 5 appelé un émulgateur)/ elle consiste avantageusement en un mélange d'au moins un agent émulsionnant avec une graisse ou une huile, ou avec à la fois une graisse et une huile. De préférence, un agent émulsionnant hydrophile est incorporé en même temps qu'un agent émulsionnant lipophile qui 10 agit comme stabilisant. Il est également préférable d'incorporer à la fois une graisse et une huile. Le ou les agents émulsionnants constituent avec ou sans un ou plusieurs agents stabilisants ce que l'on nomme une cire émulsionnante, et cette cire, associée à l'huile et/ou à 15 la graisse constitue ce que l'on nomme la base émulsionnante de pommade qui forme la phase huileuse dispersée des formulations de crème.

Les émulgateurs et agents stabilisants d'émulsion qui conviennent pour être utilisés dans les formulations 20 de la présente invention comprennent Tween 60, Span 80, l'alcool cétostéarylique, l'alcool myristylique, le mono-stéarate de glycéryle et le laurylsulfate de sodium.

Le choix d'huiles ou graisses appropriées pour la formulation est à faire en fonction des propriétés cos-25 métiques désirées, car le composé actif présente une très faible solubilité dans la plupart des huiles susceptibles d'être utilisées dans les formulations pharmaceutiques en émulsion. Ainsi, la crème doit, de préférence, être un produit non graisseux, non tachant et éliminable par lavage, 30 possédant une consistance appropriée pour éviter son suintement hors de tubes ou autres récipients. On peut utiliser des mono- ou diesters d'alkyle à chaîné droite ou ramifiée tels qu'un di-iso-adipate, le stéarate d'isocétyle, un di-ester de propylène-glycol d'acides gras de coprah, le myristate 35 d'isopropyle, l'oléate de décyle, le palmitate d'isopropyle, le stéarate de butyle, le palmitate de 2-éthylhexyle ou un

(U

mélange d'esters à chaîne ramifiée connu sous la désignation Crodamol CAP, les trois derniers esters étant préférés. On peut les utiliser seuls ou en association, selon les propriétés demandées. Dans l'alternative, on peut utiliser des lipides à haut point de fusion tels que la vaseline blanche et/ou l'huile de paraffine ou d'autres huiles minérales.

Les formulations adaptées à l'administration topique à l'oeil comprennent également des collyres dans lesquels l'ingrédient actif est dissous ou en suspension dans un véhicule approprié, notamment un solvant aqueux de l'ingrédient actif. Dans ces formulations, l'ingrédient actif est de préférence présent en une concentration de 0,5 à 20 % en poids, avantageusement de 0,5 à 10 % en poids et notamment d'environ 1,5 % en poids.

Les formulations adaptées à l'administration topique dans- la bouche comprennent des pastilles où l'ingrédient actif est contenu dans une base aromatisée, en général du saccharose et de la gomme arabique ou adragante ; des pastilles où l'ingrédient actif est contenu dans une base inerte telle que la gélatine ou la glycérine, ou du saccharose et de la gomme adragante ; et des collutoires où l'ingrédient actif est contenu dans un véhicule liquide approprié.

Les formulations adaptées à l'administration par voie rectale peuvent être présentées sous forme d'un suppositoire comprenant une base inerte appropriée,telle que le beurre de cacao ou un salicylate.

Les formulations adaptées à l'administration par voie nasale et dont le support est une matière solide comprennent une poudre à gros grains ayant par exemple une dimension particulaire comprise dans l'intervalle de 20 à 500 micromètres, qui est administrée à la manière dont on prend une prise, c'est-à-dire par inhalation rapide par le passage nasal de la poudre contenue dans un récipient maintenu tout près du nez. Des formulations dont le support est un liquider adaptées par exemple à une administration

16

en pulvérisation nasale ou en gouttes nasales, comprennent des solutions aqueuses ou huileuses de l'ingrédient actif.

Les formulations adaptées à l'administration par voie vaginale peuvent être présentées en pessaires, tampons, crèmes, gels, pâtes, produits moussants ou produits à pulvériser contenant, outre l'ingrédient actif, des supports tels que connus dans l'art pour être appropriés.

Les formulations adaptées à l'administration par voie parentérale comprennent des solutions injectables stériles aqueuses et non aqueuses qui peuvent contenir des antioxydants, tampons, bactériostats et solutés servant à rendre la formulation isotonique vis-à-vis du sang du receveur auquel on la destine ; et des suspensions stériles aqueuses et non aqueuses qui peuvent contenir des agents suspendants et des agents épaississants. Ces formulations peuvent être présentées en récipients à dose unitaire ou à doses multiples, par exemple des ampoules scellées et des flacons, et peuvent être conservées à l'état lyophilisé, en ne nécessitant que l'addition du véhicule liquide stérile, par exemple de l'eau pour injections, immédiatement avant l'emploi. Des solutions et suspensions pour injection extemporanée peuvent être préparées à partir des poudres, granulés et comprimés, stériles, du genre précédemment décrit.

Les formulations à dose unitaire préférées sont celles qui contiennent un ingrédient actif en une dose journalière ou en une sous-dose journalière unitaire, comme exposé ci-dessus, ou en une fraction appropriée de telles doses.

Il est bien entendu qu'en plus des ingrédients spécifiquement mentionnés ci-dessus, les formulations de la présente invention peuvent contenir d'autres agents classiques dans l'art pharmaceutique, eu égard au type de formulation en question ; par exemple, celles qui sont adaptées à l'administration par voie orale peuvent contenir des agents aromatisants.

pr

La présente invention fournit également un procédé pour la préparation d'un composé de formule (I)a, ou d'un dérivé/ notamment un ester/ pharmaceutiquement acceptable de celui-ci/ qui consiste soit A. à faire réagir un composé de formule (II)

(II)

dans laquelle et R2 sont tels que définis précédemment, avec un composé de formule (III)

(III)

10

dans laquelle X représente une base pyrimidique ou purique (autre qu'un composé de formule (II)) ; soit B. à faire réagir un composé de formule (IV)

(IV)

dans laquelle Z est un groupe partant et R2 est tel que défini précédemment/ avec un composé capable d'introduire le groupe nécessaire à la position 6 ; et/ facultativement/

par la suite ou en même temps, lorsque le composé résultant est un composé de formule (I)/ à le convertir en l'un de ses dérivés pharmaceutiquement acceptables, ou, lorsque le composé résultant est un dérivé pharmaceutiquement acceptable, à le convertir en un autre dérivé pharmaceutiquement acceptable ou en un composé de'formule (I).

En ce qui concerne le procédé A, X est avantageusement une base uracilique. La réaction peut être accomplie, par exemple, en traitant les composés de formules II et III par un enzyme tel qu'une phosphorylase, par exemple.1'uri-dine-phosphorylase ou la (nucléoside purique)-phosphorylase ou un mélange d'entre elles, de préférence en présence d'un sel d'acide phosphorique à un pH de 5,0-9,0 et une température de 15 à 90°C, avantageusement de 40 à 60°C.

En ce qui concerne le procédé B, celui-ci peut être conduit selon le mode opératoire décrit par E.J. Reist et collaborateurs, J. Org. Chem., 27 (1962), 3274-3279. Un groupe partant commode est un atome d'halogène, par exemple le chlore, la réaction étant avantageusement conduite dans un solvant organique, par exemple le méthanol absolu, avec un agent capable d'apporter le groupe nécessaire à la position 6, par exemple une aminé appropriée dans le cas où R^ représente un groupe alkyl- ou dialkyl-amino.

Les esters et sels physiologiquement acceptables des composés de formule (I) peuvent être préparés de manière classique ; par exemple, les esters peuvent être préparés par estérification du composé originel par un halogénure ou anhydride d'acyle approprié. En variante, les esters peuvent être préparés en déplaçant un groupe partant approprié, par exemple halogénure, au moyen d'un acide carboxy-lique approprié, ou par ouverture d'un anhydro-nucléoside approprié du composé originel au moyen d'un acide carboxy-lique approprié ou d'un sel de celui-ci.

Les Exemples suivants illustrent la présente invention mais ne la limitent en aucune façon.

M.

Exemple 1 : 9-3-D-arabinofurannosyl-6-méthylamino-9H-purine

On mélange et refroidit à -10°C, tout en les protégeant de l'humidité/ 100 mg (0,35 mmole) de 6-thiol-9-(3-D-arabinofurannosyl)-9H-purine (E.J. Reist et coll., J. Org.

5 Chem., 27 (1962 3274-3279) et 5 ml de méthanol absolu. On fait doucement barboter du chlore gazeux dans la suspension pendant 2 minutes. On agite la solution résultante pendant 5 minutes à -10°C, puis on fait barboter de l'azote anhydre dans la solution froide pendant 15 minutes jusqu'à ce que 10 l'excès de chlore soit éliminé. On ajoute 2 ml de méthyl-

amine aqueuse à 40 % au mélange réactionnel que l'on chauffe ensuite à 115°C pendant 4,5 heures dans une bombe en acier inoxydable. On refroidit la bombe à 0°C et évapore son contenu à siccité- po-ur obtenir le composé du titre en un rende-15 ment de 88 %. Après recristallisation dans l'eau, l'échantillon présente un point de fusion de 201,5-202,5°C.

Analyse, calculé pour C]_]_H]_3N5°4 :

Calculé : C-47,0 -, H-5,38 ; N-24,9 Trouvé : C-47,2 •, H-5,72 ; N-25,2 20 Exemple 2 : 9-g-D-arabinofurannosyl-6-diméthylaminopurine

On mélange 1,04 g (6,4 mmoles) de 6-diméthylamino-purine (Sigma Chemical Co., MO, U.S.A.) et 1,96 g (8 mmoles) d'uracile-arabinoside (P.F. Torrence et coll., J . Med. Chem., 22(3) (1979), 316-319) dans 0,412 litre de phosphate de 25 potassium 5mM, pE 8,0, contenant 0,02 % d'azoture de potassium.-On ajoute 3260 unités de (purine-nucléoside)-phosphorylase et 810 unités d'uridine-phosphorylase purifiées et on agite la solution à 35°C. Au bout de 59 jours, on lyophilise le mélange réactionnel. On met le résidu en suspen-30 sion dans 250 ml d'eau et l'agite à la température ambiante pendant 1 heure. On sépiare les matières solides par filtra-tion et abandonne le filtrat à 3°C. Au bout de 72 heures, on recueille le précipité et le combine au gâteau précédent. On ajoute le tout à 100 ml de solvant à 95 % d'éthanol/eau, 35 on chauffe à l'ébullition et on filtre. On chasse le solvant sous vide et chromatographie le résidu sur résine BioRad P-2

0

avec un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau/ une fois en utilisant une colonne de 7/5 x 90 cm/ et deux fois en utilisant une colonne de 5 x 90 cm. Ce mode opératoire donne 0/12 g de 6-diméthylaminopurine-9-g-D-arabinofurannoside sous forme 0/5 hydratée.

Analyse/ calculé pour ci2Hi7N504 • 0 / :

Calculé : C-47/36 ; H-5,96 ; n-23,01 Trouvé : C-47/23 ; H-5/59 ; n-22/75 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 3 : 9-B-D-arabinofurannosyl-6-méthoxypurine

On met en suspension 1 g (6/6 mmoles) de 6-méthoxy purine (Sigma Chemical Co./ St. Louis/ MO/ u.s.a.) et 2/45 g (10/1 mmoles) d1uracile-arabinoside (P.F. Torrence et coll./ J. Med. Chem./ 22(3) (1979)) dans 575 ml d'une solution de phosphate de potassium lOmM et 0/04 % d'azoture de potassium/ pH 7/8/ contenant 10 % de n-propanol (en volume). On ajoute 560 U.I. d'uridine-phosphorylase et 10 000 u.i. de (purine-nucléoside)-phosphorylase purifiées (T.A. Krenitsky et coll. Biochemistry/ 20, 3615 (1981)/ et brevet des e.u.a. N° 4 381 444) et on agite la solution à 35°C. Trente jours plus tard/ on filtre le mélange réactionnel. On ajuste le filtrat à pH 10,5 avec de l'hydroxyde d'ammonium et le chromatographie sur une colonne de 2/5 x 7 cm contenant de la résine Dowex-l-formiate. On élue la résine avec un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau. On rassemble les fractions contenant le produit et chasse le solvant sous vide. On dissout le résidu dans un solvant à 30 % en volume de n-propa-nol/eau et le chromatographie sur une colonne de BioRad P-2 (7/5 x 90 cm). On rassemble les fractions contenant le produit' et/ après lyophilisation/ on obtient 0/922 g de 6-méthoxypurine-9-B-D-arabinofurannoside sous forme di-hydratée.

Analyse/ calculé pour C]_]_H]_4N4°5. 21^0 :

Calculé : C-41/51 : H-5/70 ; N-17/60 Trouvé : C-41/46 ; H-5/74 ; N-18/13 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

2f

Exemple 4 : 9-B-D-arabinofurannosyl-6-éthoxypurine

On met en suspension 0,5 g (3/05 mmoles) de 6-éthoxypurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO/ U.S.A.) et 1/48 g (6/09 mmoles) d'uracile-arabinoside dans 100 ml 5 d'une solution à pH 7,4 de phosphate de potassium lOmM contenant 0/04 % d'azoture de potassium. On ajoute 6000 U.I. d1uridine-phosphorylase et 8400 U.I. de (purine-nucléoside)-phosphorylase purifiées (T.A. Krenitsky et coll./ Biochemistry, 20/ 3615 (1981)/ et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) et on 10 agite la suspension à 35°C.

Au bout de 168 heures/ on ajoute un supplément de 18 000 unités d'uridine-phosphorylase et 75 600 unités de (purine-nucléoside)-phosphorylase. Sept jours plus tard/ on filtre le mélange réactionnel et chromatographie le fil-15 trat,sur une colonne contenant de la résine Dowex-l-hydroxyde (2/5 x 8 cm). On élue la colonne avec un solvant à 90 % en volume de méthanol/eau/ on rassemble les fractions contenant le produit et on chasse le solvant sous vide. On dissout le résidu dans un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau et 20 le chromatographie sur une colonne contenant de la résine BioRad P-2 (5 x 90 cm). On élue le produit avec un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau. On rassemble les fractions contenant le produit et chasse le solvant sous vide pour obtenir 0/363 g de 6-éthoxypurine-9-b-D-arabinofurannoside 25 que l'analyse montre comme 0/3 hydraté.

Analyse, calculé pour c;j_2H16N405 "°' ^H2° :

Calculé : C-47/78 ; H-5/55 ; N-18/57 Trouvé : C-47/99 ; H-5/54 ; N-18/40 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. 30 Exemple 5 : 9-B-D-arabinofurannosyl-6-iodopurine

On dissout 1 g (4 mmoles) de 6-iodopurine (Sigma Chemical Co./ St. Louis/ MO, U.S.A.) dans 15 ml de 1,2-di-méthoxyéthane sous chauffage. On ajoute 50 ml d'une solution d'uracile-arabinoside (10,1 mmoles) dans une solution de 35 phosphate de potassium lOmM contenant 0,04 % d'azoture de potassium, pH 7,4. On ajoute 6800 U.I. d ' uridine-phosphorylase

4

et 12 000 U.I. de (purine-nucléoside)-phosphorylase purifiées et on agite le mélange réactionnel à 35°C. Au bout de 21 jours, on ajoute un supplément de 4800 unités d'uridine-phosphorylase et 20 000 unités de (purine-nucléoside)-phosphorylase. Quatre-vingt-dix jours plus tard/ on filtre le mélange réactionnel et chasse le solvant sous vide. On dissout le résidu dans 100 ml d'eau/ le chauffe à la vapeur d'eau, puis le filtre. On chromatographie le filtrat sur une colonne contenant de la résine XAD-2 (5 x 35 cm). On élue cette colonne avec 2 litres d'eau puis 2 litres d'éthanol. On rassemble les fractions contenant le produit et chasse le solvant sous vide. On dissout le résidu dans un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau et le chromatographie sur une colonne contenant de la résine BioRad P-2 (5 x 90 cm). On élue le produit avec un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau. On rassemble les fractions contenant le produit et chasse le solvant sous vide. On dissout le résidu dans un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau et le chromatographie sur une colonne de Sephadex G-10 (5 x 90 cm). On élue cette colonne avec un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau. On rassemble les fractions contenant le produit pour obtenir/ après avoir chassé le solvant sous vide/ 0,253 g de 6-iodopurine-9-f3-D-arabinofurannoside que 1'analyse montre comme 1/5 hydraté.

Analyse, calculé pour C^, . 1, 51^0 :

Calculé : C-29,65 ; H-3,48 ; N-13,83 ; 1-31,32 Trouvé : C-29,43 ; H-3,53 ; N-13,66 ; 1-31,20 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 6 : 9-g-D-arabinofurannosyl-2-amino-6-iodopurine

On mélange 6,75 g (25,5 mmoles) de 2-amino-6-iodo-purine (Sigma Chemicals Co., St. Louis, MO, U.S.A.) et 15,1 g (61,9 mmoles) d'uracile-arabinoside dans 0/31 litres de phosphate de potassium lOmM, pH 6/9/ contenant 0/02 % d'azoture de potassium. On ajoute 17 000 unités de (purine-nucléoside ) -phosphorylase et 2000 unités d'uridine-phospho-rylase et on agite la solution à 37°C. Au bout de 18 jours,

9.

on ajoute un supplément de 5700 unités d1uridine-phosphory-lase. Cinquante-sept jours plus tard/ on filtre le mélange réactionnel et chromatographie le filtrat sur une colonne contenant de la résine XAD-2 (8 x 11 cm). On élue la colonne 5 avec un gradient échelonné d'éthanol dans l'eau/ comme suit (en volume) : 0/35 litre à 10 % ; 1 litre à 20 % ; 1 litre à 50 % ; 0/2 litre à 95 %. On rassemble les fractions contenant le produit et chasse l'éthanol sous vide. On dissout le résidu dans un solvant à 30 % en volume de n-10 propanol/eau- et le chromatographie sur une colonne contenant de la résine BioRad P-2 (7/5 x 90 cm). Par ce mode opératoire, on obtient 1/1 g de 2-amino-6-iodopurine-9-g-D-arabinofuran-noside sous forme 0/5 hydratée.

Analyse/ calculé pour C^q H12t)504'°'5H20 :

15 Calculé : C-29,87 ; H-3,26 ; N-17,41

Trouvé : C-29/86 ; H-3/29 ; N-17/39 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 7 : 9-g-D-arabinofurannosyl-6-pyrrolidinopurine

20 6-pyrrolidinopurine (Sigma Chemical Co./ St. Louis, MO/

U.S.A.) et 1/29 g (5,29 mmoles) d'uracile-arabinoside dans 100 ml d'une solution à pH 7/4 de phosphate de potassium lOmM contenant 0/04 % d'azoture de potassium. On ajoute 6000 U.I. d'uridine-phosphorylase et 8400 U.I. de (purine-25 nucléoside)-phosphorylase purifiées (T.A. Krenitsky et.coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) et on agite la suspension à 35°C. Vingt jours plus tard/ on filtre le mélange réactionnel et chromatographie le filtrat sur une colonne contenant de la résine 30 Dowex-l-hydroxyde (2/5 x 8 cm). On sépare le produit de la colonne par élution avec un solvant à 90 % en volume de méthanol/eau. On rassemble les fractions contenant le produit et chasse le solvant sous vide. On dissout le résidu dans 50 ml d'un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau et le 35 chromatographie sur une colonne de BioRad P-2 (5 x 90 cm). On élue la colonne avec un mélange à 30 % en volume de

On met en suspension 0/5 g (2/6 mmoles) de

n-propanol/eau. On rassemble les fractions contenant le produit et chasse le solvant sous vide pour obtenir 0,573 g de 6-pyrrolidinopurine-9-3-D-arabinofurannoside.

Analyse, calculé pour C]_4H]_9N5°4 :

Calculé : C-52,33 ; H-5,96 ; N-21,79 Trouvé : C-52,60 ; H-6,09 ; N-21,51 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 8 : 9-g-D-arabinofurannosyl-2-chloro-6-méthylamino-

ambiante dans une bombe scellée une solution de 5,92 g (10 mmoles) de 2,6-dichloro-2',3',51-tri-O-benzyl-9-(B-D-arabinof urannosyl ) purine (F. Relier et coll., J. Org. Chem., 32, 1644 (1967) ; J.A. Montgomery et K.J. Hewson, J. Med. Chem., 12, 498 (1967)) dans 35 ml d'une solution benzénique contenant 0,6 g de méthylamine pour 10 ml de benzène. On refroidit complètement la bombe dans de la glace, l'ouvre et filtre le contenu pour éliminer le chlorhydrate de méthylamine. On chasse le solvant sous vide pour obtenir une huile que l'on combine à une huile provenant d'une réaction conduite à la même échelle, mais à 125°C. Le poids total est de 11,4 g. Une chromatographie en couche mince (CCM) révèle qu'il s'agit d'un mélange de la matière de départ et de composés mono- et diméthylaminés. On chromatographie l'huile sur 285 g de gel de silice en utilisant un mélange à 30 % d'acétone et 70 % de cyclohexane en volume. On recueille le composant qui s'écoule au-dessous de la matière de départ (CCM, gel de silice, mélange acétone: cyclohexane à 3:7) et on chasse le solvant sous vide. On obtient 4,8 g de 2-chloro-6-méthylamino-2',3',5'-tri-O-benzyl-9- (B-D-arabinofurannosyl)purine sous forme d'une huile. On ajoute une portion de 1,1 g de ce produit dans 40 ml de 2-méthoxyéthanol à 0,87 g de chlorure de palladium ayant été préalablement réduit dans un appareil de Parr. On hydrogène le produit pendant 30 minutes sous 345 kPa en changeant l'atmosphère d'hydrogène après les 15 premières purine

On maintient pendant 4 jours à la température

minutes. On enlève le catalyseur par filtration à travers un lit de Celite et le lave avec du méthanol. On neutralise le filtrat par addition de Dowex-1-(HCO^)• On enlève la résine par filtration et la lave avec du méthanol. On évapore le filtrat sous vide et triture le résidu avec du chloroforme. On lave le produit brut à l'eau chaude, le dissout dans du méthanol chaud, le filtre, le refroidit et recueille la matière solide. Une cristallisation dans l'eau bouillante donne le produit sous forme hydratée. Quantité obtenue : 44,5 mg ; P.F. 224-225°C.

Analyse, calculé pour C^^H^^N^O^Cl. ï^O :

' Calculé : C-39,58 ; n-20,98 ; n-4,84 Trouvé ■ : C-.39, 27 ; n-20,83 ; H-5,16 Exemple 9 : 9-b-d-arabinofurannosyl-6-cyclopropylamino-purine

On met en suspension 0,5 g (2,85 mmoles) de 6-cyclopropylaminopurine (préparée par déplacement nucléo-phile du chlore de la 6-chloropurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, U.S.A.) par la cyclopropylamine dans l'acéto-nitrile) et 1,39 g (5,71 mmoles) d'uracile-arabinoside (P.F. Torrence et coll., J. Med. Chem., 22(3) (1979) 316-319) dans 100 ml d'une solution à pH 7,4 de phosphate de potassium lOmM contenant 0,04 % d'azoture de potassium. On ajoute 6000 U.I. d'uridine-phosphorylase et 8400 U.I. de (purine-nucléoside)-phosphorylase purifiées (Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) et on agite la suspension à 35°C. Au bout de 120 heures, on filtre le mélange réactionnel et chromatographie le filtrat sur une colonne contenant de la résine Dowex-l-hydroxyde (2,5 x 10 cm). On élue la colonne avec un solvant à 90 % en volume de méthanol/eau. On rassemble les fractions contenant le produit et chasse le solvant sous vide. On dissout le résidu dans un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau et le chromatographie sur BioRad P-2 (5 x 90 cm). On élue la colonne avec un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau. On recristallise dans

du méthanol chaud le précipité issu du mélange réactionnel/ ce qui donne 0/0352 g d'un produit que l'analyse montre comme étant du 6-cyclopropylaminopurine-9-£5-D-arabinofuran-noside monohydraté. On chromatographie le filtrat provenant de la recristallisation sur une colonne de résine BioRad P-2 (5 x 90 cm) de la manière décrite ci-dessus. On rassemble les fractions contenant le produit qui ont été extraites des deux colonnes et on chasse le solvant sous vide pour obtenir 0/342 g de 6-cyclopropylaminopurine-9-g-D-arabino-furannoside que l'analyse montre comme 0/8 hydraté et 0/3 propanolique.

Analyse, calculé pour C^2H]_yN5°4 • 0 ' 8H2° " 0 ' ^C3H8° :

Calculé : C-48,00 ; H-5,89 ; N-21,53 Trouvé : C-48,05 ; H-5,89 ; N-21,55 Les spectres-RMN et ■•de masse confirment la structure.

Exemple 10 : 9-g-D-arabinofurannosyl-6-éthyl(méthyl)amino-purine

On prépare la 6-éthyl(méthyl)aminopurine par déplacement nucléophile du chlore de la 6-chloropurine (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, U.S.A.) par la 6-éthyl-(méthyl)aminé dans 1'acétonitrile. On met en suspension 0,5 g (2,8 mmoles) de 6-éthyl(méthyl)aminopurine et 1,38 g (5,6 mmoles) d'uracile-arabinoside dans 575 ml d'une solution à pH 7,4 de phosphate de potassium lOmM contenant 0,04 % d'azoture de potassium et 10 % en volume de n-propanol. On ajoute 6000 U.I. d'uridine-phosphorylase et 8400 U.I. de (purine-nucléoside)-phosphorylase purifiées (Krenitsky et coll., Biochemistry, 20, 3615 (1981) et brevet des E.U.A. N° 4 381 444) et on agite la solution à 37°C. Dix-neuf jours plus tard/ on filtre le mélange réactionnel et on chromatographie le filtrat sur une colonne de 2/5 x 13 cm contenant de la résine Dowex-l-hydroxyde. On élue la résine avec un solvant à 90 % en volume de méthanol/eau. On rassemble les fractions contenant le produit et chasse le solvant sous vide. On dissout le résidu dans un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau et le chromatographie sur une colonne de

tSf

10

15

20

25

30

BioRad P-2 (7,5 x 90 cm). On rassemble les fractions contenant le produit et, après lyophilisation, on obtient 0,680g de 6-éthyl(méthyl)aminopurine-9-B-D-arabinofurannoside. Analyse, calculé pour C23Hj_9N504 :

Calculé : C-50,48 ; H-6,19 ; N-22,64 Trouvé : C-50,36 ; H-6,25 ; N-22,52 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 11 : 9-g-D-arabinofurannosyl-2-amino-6-méthoxypurine méthoxypurine (préparée par déplacement nucléophile du chlore de la 2-amino-6-chloropurine (Sigma Chemical Co., • St. Louis, MO, U.S.A.) par du méthanol avec de l'hydrure de sodium dans le tétrahydrofuranne) avec 35 ml d'une solution de 1,75 g (7,04 mmoles) d1uracile-arabinoside dans du phosphate de potassium lOmM contenant 7 % en volume de n-propanol. On ajuste le pH à 6,75. On ajoute 18 000 unités de (purine-nucléoside ) -phosphorylase et 1020 unités d'uridine-phospho-rylase purifiées et on fait incuber la solution à 37°C. Au bout de 26 jours, on filtre le mélange réactionnel et chromatographie le filtrat sur une colonne de résine Dowex-1-formiate (2x7 cm) après avoir ajusté le pH à 10,5 avec de l'hydroxyde d'ammonium concentré. On élue la colonne avec un solvant à 7 % en volume de n-propanol/eau et on rassemble les fractions contenant le produit et chasse le solvant sous vide. On. extrait -le résidu avec 25 ml d'eau et on^sépare le filtrat des matières solides.par centrifugation. Par un repos à la température ambiante, la liqueur surnageante forme des cristaux de 2-amino-6-méthoxypurine-9-g-D-arabinofurannoside qui, après séchage sous vide, donnent 0,327 g de produit. Analyse, calculé pour *

Calculé : C-44,44 ; H-5,09 ; N-23,56 Trouvé : C-44,49 ; H-5,13 ; N-23,52 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 12 : 9-g-D-arabinofurannosyl-6-n-propoxypurine

(Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, U.S.A.) avec 545 ml

On mélange 1,05 g (6,04 mmoles) de 2-amino-6-

On mélange 1 g (5,6 mmoles) de 6-n-propoxypurine

H

10

15

20

25

30

d'une solution d'uracile-arabinoside (10,1 mmoles) dans du phosphate de potassium lOmM contenant 7 % en volume de n-propanol. On ajoute 680 U.I. d'uridine-phosphorylase et 12 000 U.I. de (purine-nucléoside)-phosphorylase purifiées et on agite le mélange réactionnel à 35°C. Au bout de 58 jours, on filtre le mélange réactionnel et on abandonne le filtrat à 3°C pendant 20 heures. On recueille le précipité résutant par centrifugation, le dissout dans un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau et le chromatographie sur une colonne de résine Dowex-l-formiate (2,5 x 5 cm) après avoir ajusté le pH à 10,5 avec de 1'hydroxyde .d'ammonium concentré. On élue la colonne avec un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau et on rassemble les fractions contenant le produit et chasse le solvant sous vide. On dissout le résidu dans du n-propanol et le chromatographie sur une colonne contenant du BioRad P-2 (5 x 90 cm). On élue la colonne avec un solvant à 30 % en volume de n-propanol/eau. On rassemble les fractions contenant le produit et, après avoir chassé le solvant sous vide, on dissout le résidu dans de l'eau et le chromatographie sur une colonne contenant du BioRad P-2 (5 x 90 cm). On élue la colonne avec de l'eau. On rassemble les fractions contenant le produit pour obtenir, après lyophilisation, 0,758 g de 6-n-propoxypurine-9-p-D-arabinofurannoside que l'analyse montre comme monohydraté.

Analyse, calculé pour C]_3H]_8N4°5. 1, 0^0 :

Calculé : C-47,56 ; H-6,14 ; N-17,06 Trouvé : C-47,63 ; H-6,13 j N-17,11 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Exemple 13 : 9-(5-O-benzoyl-g-D-arabinofurannosyl)-

furannosyl)-6-méthoxy-9H-purine venant de l'Exemple 3 dans 5,0 ml de diméthylacétamine anhydre, on refroidit à 4°C et on ajoute 0,155 g (1,1 mmole) de chlorure de benzoyle. On agite le mélange pendant 24 heures sous argon, en le

6-méthoxy-9H-purine On dissout 0,283 g (1,0 mmole) de 9-(B-D-arabino-

«4

10

laissant se réchauffer lentement jusqu'à la température ambiante. On ajoute ensuite, à la température ambiante, une seconde portion de 1,1 équivalent de chlorure de ben-zoyle et on continue à agiter pendant 24 heures de plus. On arrête la réaction en versant le mélange réactionnel dans 50 ml d'eau glacée et on 1'épuise avec 3 x 30 ml de CHCl^ et déshydrate les extraits organiques sur MgSO^. Après évaporation, on purifie le résidu par chromatographie instantanée sur gel de silice (25,0 g ; 2,5 x 15 cm) avec un gradient échelonné de CHCl^ jusqu'à un mélange CHCl^: acétone à 1:1. On rassemble les fractions qui contiennent le produit présentant un de 0,21 (gel de silice, mélange CHCl^: acétone à 1:1) pour obtenir 92 mg du composé désiré ; P.F. 202-204°C.

15 Analyse, calculé pour C28H18N4°6 :

Calculé : C-5-5,96 ; H-4,70 ; N-14,50 Trouvé : C-56,04 ; H-4,74 ; N-14,40 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Exemple 14 : 6-méthoxy-9-[5-0-(4-méthylphénylsuifonyl)-20 g-D-arabinofurannosyl]-9H-purine

On met en suspension dans 25 ml d'acétonitrile anhydre 0,312 g (1,63 mmole) de chlorure de 4-toluènesulfo-nyle fraîchement recristallisé et 0,308 g (1,09 mmoles) de 9-(g-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de 25 l'Exemple 3, on refroidit à 3°C dans un bain de glace et on ajoute 5,0 ml de pyridine pour dissoudre le nucléoside. On agite la solution sous argon à 3°C pendant 1 heure, puis la maintient à -15°C pendant 42 heures. On arrête brusquement la réaction avec 3 ml de NaHCO^ à 5 %. On évapore le 30 mélange réactionnel jusqu'à un volume de 10 ml, puis le co-évapore avec de 1'éthanol à 95 %. On adsorbe le résidu sur une quantité minimale de gel de silice et l'applique à une colonne pour chromatographie instantanée garnie de gel de silice (25,0 g ; 2,5 x 15 cm) dans un mélange 35 CH^C^^MeOH à 15:1. Une élution avec 450 ml de ce solvant, puis avec 550 ml de mélange C^C^^MeOH à 10:1, donne trois

yo produits absorbant dans l'UV. On rassemble les fractions qui contiennent une matière présentant un de 0,42 (gel de silice, mélange CH2Cl2:MeOH à 10:1) et les purifie davantage sur trois plaques successives de gel de silice pour chromatographie préparative, en utilisant un mélange CH2Cl2:MeOH à 10:1 sur la première plaque et un mélange acétone :CH2C12 à 1:1 sur les deux dernières plaques, pour obtenir 88 mg du produit désiré sous forme d'un verre transparent ; P.P. 177-181°C.

Analyse, calculé pour C^gH^N^O^S. 0,15H20 :

Calculé : C-49,23 ; H-4,66 ; N-12,76 Trouvé : C-49,28 ; H-4,71 ; N-12,71 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Exemple 15 : 6-méthoxy-9-(5-0-méthylsuifonyl-&-D-arabino-furannosyl)-9H-purine On met en suspension dans 40 ml d'acétonitrile anhydre 0,600 g (2,13 mmoles) de 9-(B-D-arabinofurannosyl) 6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3 et on ajoute 8 ml de pyridine anhydre. On refroidit le ballon dans un bain de glace et de sel à -3°C et on ajoute 0,16 ml (2,13 mmoles) de chlorure de méthanesulfonyle. Au bout de 25 minutes, on arrête brusquement la réaction avec 3 ml de H20 et on concentre la solution jusqu'à un volume de 10 ml puis la co-évapore avec plusieurs additions d'éthanol, en maintenant constamment la température au-dessous de 38°C. On chasse la pyridine résiduelle avec une pompe à vide. On applique le résidu sur une colonne de gel de silice pour chromatographie instantanée (25,0 g ; 2,5 x 15 cm) équilibrée dans un mélange CH2Cl2:MeOH à 15:1. On élue tout d'abord la colonne avec 150 ml de ce solvant, puis avec 450 ml de mélange CH2Cl2:MeOH à 10:1. Les fractions qui contiennent une substance présentant un R^ de 0,34 (gel de silice, mélange CH2Cl2:MeOH à 10:1) donnent 0,448 g du produit (57 %) sous forme d'une mousse blanche ; P.F. 177-181°Ç.

31

Analyse, calculé pour C]_2H16N4°7S * 0 ' 5H20 :

Calculé : C-39/02 ; H-4,64 ; N-15,17 Trouvé : C-39/02 ; H-4/66 ; N-15/08 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Exemple 16 : 9-(5-0-(4-méthylbenzoyl)-B-D-arabino-furannosyl)-6-méthoxy-9H-purine On met en suspension dans 10/0 ml d'acétonitrile anhydre 0/283 g (1/0 mmole) de 9-(3-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3 et on ajoute 2/3 ml de pyridine pour effectuer une dissolution complète/ puis 0/170 g (1/1 mmole) de chlorure de 4-méthylbenzoyle. On agite le mélange à la température ambiante sous argon pendant 24 heures/ et/ après avoir arrêté brusquement la réaction en ajoutant 5 ml d'isopropanol/ l'évaporé à sic-cité/ puis le co-évapore avec 2 x 10 ml d'éthanol. On purifie ensuite le résidu par chromatographie instantanée sur gel de silice (25/0 g ; 2/5 x 15 cm) avec un gradient échelonné de CHCl^ jusqu'à un mélange CHCl^: acétone à 1:1. On rassemble les fractions contenant le produit présentant un R^ de 0/41 (gel de silice, mélange CHCl^: acétone à 1:1) pour obtenir 132 mg du composé désiré ;

P.F. 127-128 °C.

Analyse/ calculé pour ci9H2oN4°6 .0 , 5^0 :

Calculé : C-55,74 ; H-5,17 ; N-13,69 Trouvé : C-55-48 ; H-5/36 ; N-13/64 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Exemple 17 : 9-(5-0-(4-chlorobenzoyl)-g-D-arabino-furannosyl)-6-méthoxy-9H-purine On met en suspension dans 10/0 ml d'acétonitrile anhydre 0/283 g (1/0 mmole) de 9-(p-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3 et on ajoute 2/3 rnl de pyridine pour effectuer une dissolution complète/ puis 0/193 g (1/1 mmole) de chlorure de 4-chlorobenzoyle. On agite le mélange à la température ambiante sous argon pendant 24 heures/ et/ après avoir arrêté brusquement la réaction en ajoutant 5 ml d'isopropanol, on l'évaporé à

32-

siccité/ puis le co-évapore avec 2 x 10 ml d'éthanol. On purifie ensuite le résidu par chromatographie instantanée sur gel de silice (25/0 g ; 2/5 x 15 cm) avec un gradient échelonné de CHCl^ jusqu'à un mélange CHCl^: acétone à 1:1. On rassemble les fractions qui contiennent le produit présentant un de 0/37 (gel de silice/ mélange CHCl^ : acétone à 1:1) pour obtenir 105 mg du composé désiré : P.F. 122-124°C Analyse/ calculé pour C^gH^ClN^Og . 0 / 5^0 :

Calculé : C-50,30 ; H-4/22 ; N-13,04 Trouvé : C-50,20 ; H-4,28 ; N-12,94 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. .Exemple 18 : 9-(5-0-(4-méthoxybenzoyl)-B-D-arabino-furannosyl)-6-méthoxy-9H-purine On met en suspension dans 10/0 ml d'acétonitrile anhydre 0/283 g (l/'O mmole) de 9-(B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3, et on ajoute 2/3 m,l de pyridine pour effectuer une dissolution complète/ puis 1/1 mmole de chlorure de 4-méthoxybenzoyle. On agite le mélange à la température ambiante sous argon pendant 24 heures/ et/ après avoir arrêté la réaction en ajoutant 5 ml d'isopropanol/ on l'évaporé à siccité/ puis le co-évapore avec 2 x 10 ml d'éthanol. On purifie ensuite le résidu par chromatographie instantanée sur gel de silice (25/0 g ; 2/5 x 15 cm) avec un gradient échelonné de CHCl^ jusqu'à un mélange CHCl^: acétone à 1:1. On rassemble les fractions qui contiennent le produit présentant un R^ de 0/30 (gel de silice/ mélange CHCl^: acétone à 1:1) pour obtenir 110 ml du composé désiré ; P.F. 195-197°C.

Analyse, calculé pour C]_9H2oN4°7 . 0 , 251^0 :

Calculé : C-54,22 ; H-4/91 ; n-13/31 Trouvé : C-54/22 ; H-4/94 ; n-13/30 Les spectres rmn et de masse confirment la structure. Exemple 19 : 6-méthoxy-9-(5-Q-phénylacétyl-B-D-arabino-furannosyl)-9H-purine On met en suspension dans 25 ml d'acétonitrile anhydre 0/300 g (1/06 mmole) de 9-(B-D-arabinofurannosyl)-

6-méthoxy-9H_-purine provenant de l'Exemple 3, puis on ajoute 5 ml de pyridine anhydre. On refroidit la solution à 3°C dans un bain de glace et on ajoute 0,20 ml (1,5 mmole) de chlorure de phénylacétyle. Après avoir agité à 3°C pendant une heure, on refroidit la solution à -15°C pendant 40 heures On arrête la réaction avec 3 ml de NaHC0_ à 5 %, et on con-centre le mélange réactionnel jusqu'à un volume de 10 ml, puis l'évaporé avec plusieurs additions d'éthanol. On reprend le résidu dans un mélange Cf^C^iMeOH à 15:1 et l'applique à une colonne pour chromatographie instantanée garnie de gel de silice (25,0 g ; 2,5 x 15 cm) dans le même solvant, et on élue avec 500 ml de ce solvant, puis avec 500 ml de mélange C^C^^MeOH à 15:1. Les fractions présentant un de 0,38 (silice, mélange CE^Cl^:méthanol à 10:1) donnent 0,128 g de produit brut souillé par une impureté présentant un R^ plus élevé. On purifie davantage par chromatographie préparative sur couche avec un mélange Ct^C^^MeOH à 10:1, puis avec une seconde plaque en utilisant un mélange acétone : CE^C^ à 1:1, pour obtenir 0,102 g du composé désiré sous forme d'une mousse blanche P.F. 74-75°C.

Analyse, calculé pour C29H20N4°6 ' 0 ' 1H2° :

Calculé : C-56,74 ; H-5,06 ; n-13,93 Trouvé : C-56,74 ; H-5,11 ; n-13,90 Les spectres rmn et de masse confirment la structure.

Exemple 20 : 6-méthoxy-9-(5-O-phényloxyacétyl-B-D-arabino-furannosyl)-9H-purine On met en suspension dans 25 ml d'acétonitrile anhydre 0,322 g (1,14 mmole) de 9-(B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3, puis on ajoute 5 ml de pyridine anhydre. On refroidit la solution à 3°C dans un bain de glace et on ajoute 0,24 ml (1,7 mmole) de chlorure de phénoxy-acétyle. Après avoir agité pendant deux heures à 3°C, on arrête la réaction avec 2 ml de NaHCO^ à 5 %, et on concentre le mélange réactionnel jusqu'à un volume de 10 ml et l'évaporé avec plusieurs additions d'éthanol. On purifie le résidu par chromatographie instan

tanée sur gel de silice (25,0 g ; 2,5 x 15 cm) dans un mélange :méthanol à 15:1. Par élution avec 400 ml de ce solvant, puis 500 ml de mélange : méthanol à 10:1

et 300 ml de mélange CE^C^ : méthanol à 9:1, on obtient 0,213 g de produit brut. On recristallise cette matière dans du méthanol pour obtenir 0,101 g (20 %) d'une substance cristalline blanche ; P.F. 193-195°C.

Analyse, calculé pour C H N O .O/OSl^O :

Calculé : C-54,69 ; H-4,85 ; N-13,43 Trouvé : C-54,69 ; H-4,89 ; N-13,40 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 21 : 6-méthoxy-9-(5-O-méthoxyacétyl-B-D-arabino-furannosyl)-9H-purine On met en suspension dans 25 ml d'acétonitrile 0,300 g (1,06 mmole) de 9-(B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3, puis on ajoute 5 ml de pyridine anhydre. On refroidit la solution à -3°C dans un bain de glace et de sel, et on ajoute 0,10 ml (1,1 mmole) de chlorure de méthoxyacétyle. Après avoir agité au bain de glace et sel pendant deux heures, on arrête la réaction avec 2 ml de NaHCO^ à 5 %, et on concentre le mélange réactionnel jusqu'à un volume de 10 ml, puis l'évaporé avec plusieurs additions d'éthanol. On applique le résidu à une colonne pour chromatographie instantanée garnie de gel de silice (25,0 g ; 2,5 x 15 cm) dans un mélange Cî^Cl^MeOH à 10:1. Par élution avec 500 ml de ce solvant, puis avec 300 ml de mélange Cî^C^îMeOH à 9:1, on obtient 0,086 g de produit brut. On recristallise cette matière dans MeOH et î^O pour obtenir 0,035 g (9,3 %) de cristaux blancs ; P.F. 137-139°C. Analyse, calculé pour C^H^gN^O^ . 0 , 5^0 :

Calculé : C-46,28 ; H-5,27 N-15,42 Trouvé : C-46,33 ; H-5,27 ; N-15,37 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 22 : 9-[5-0-(4-hitrobenzoyl )-B-D-arabinofurannosyl]-6-méthoxy-9H-purine On met en suspension dans 10,0 ml d'acétonitrile anhydre 0,283 g (1,0 mmole) de 9-(B-D-arabinofurannosyl)-

6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3, et on ajoute 2,3 ml de pyridine pour effectuer une dissolution complète, puis 0,205 g (1,1 mmole) de chlorure de 4-nitrobenzoyle. On agite le mélange à la température ambiante sous argon pendant 24 heures et, après avoir arrêté la réaction en ajoutant 5 ml d'isopropanol, on l'évaporé à siccité, puis le co-évapore avec 2 x 10 ml d'éthanol. On purifie ensuite le résidu par chromatographie instantanée sur gel de silice (25,0 g ; 2,5 x 15 cm) avec un gradient échelonné de CHCl^ jusqu'à un mélange CHC13: acétone à 1:1. On rassemble les fractions qui contiennent le produit présentant un Rf de 0,37 (gel de silice, mélange CHCl^: acétone à 1:1) pour obtenir 105 mg du composé désiré ï P.F. 202-203°C.

Analyse, calculé pour C]_gH]_7N5°8 :

Calculé : C-50,12 ; H-3,97 ; N-16,24 Trouvé : C-50,21 ; H-4,02 ; N-16,16 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Exemple 23 : 6-méthoxy-^9- ( 5-0-pentanoyl-B -D-arabino-furannosyl)-9H-purine On met en suspension dans 75 ml d'acétonitrile anhydre 0,852 g (3,01 mmoles) de 9-(g-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3 et on ajoute 15 ml de pyridine anhydre. On refroidit la solution dans un bain de glace et d'eau et on ajoute 0,4 ml (3,31 mmoles) de chlorure de pentanoyle. On arrête la réaction au bout de deux heures en ajoutant 3 ml de méthanol et on évapore le mélange réactionnel jusqu'à obtention d'une huile visqueuse limpide. On purifie le résidu par chromatographie instantanée sur gel de silice avec un gradient échelonné de CHCl^ jusqu'à un mélange CHCl3:MeOH à 9:1. On obtient ainsi 330 mg du produit souillé par le 2'-ester correspondant (voir Exemple 32) et un composé non identifié de R^ inférieur. On purifie davantage le résidu par chromatographie préparative en phase liquide à haute performance à phases inversées (Alltech C^g, 10 mm x 25 cm, dimension particulaire de 10 micromètres, mélange Ë^O^H^CN à 70:30, 4,0 ml/min)

)6

en préparant une solution à 10 mg/ml dans le même solvant et avec un volume d'injection de 1,0 ml. On co-évapore le résidu avec de l'acétone pour obtenir 260 mg (24 %) d'une mousse blanche cassante ; P.F. 85-95°C.

Analyse, calculé pour C-^H^N^Og. 0 , 05 ( CH^ ) 2C0. 0, 55H20 : Calculé : C-51,16 ; H-6,22 ; N-14,78 Trouve : C-50,98 ; H-6,03 ; N-14,63 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 24 : 9-[5-0-(4-aminobenzoyl-g-D-arabinofurannosyl)]-6-méthoxy-9H-purine On met en suspension dans 100,0 ml d'éthanol 0,350 g (0,81 mmole) de 9-(5-0-(4-nitrobenzoyl)-B-D-arabino-furannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 22, et on ajoute 0,100 g de palladium à 10 % sur charbon. Après avoir tour à tour fait le vide et introduit de l'hydrogène dans le système, on secoue le mélange réactionnel sur un appareil de Parr sous 345 kPa pendant 3 heures. On filtre ensuite le mélange sur Celite et évapore le filtrat à sic-cité. Après 1'évaporation, on met le résidu en suspension dans du méthanol et le filtre pour obtenir 0,285 g (88 %) du composé désiré sous forme d'un solide blanc :

P.F. 198-200 0 C.

Analyse, calculé pour C^gH-^N^Og . 0 , 3H20 :

Calculé : C-5315 ; H-4,86 ; N-17,22 Trouvé : C-52,96 ; H-4,64 ; N-17,07 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 25 : 6-méthoxy-9-(5-o-propionyl-b-d-arabino-furannosyl)-9H-purine On met en suspension dans 30,0 ml d'acétonitrile anhydre 0,847 g (3,0 mmoles) de 9-(b-d-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3 et on ajoute 9,0 ml de pyridin'e pour effectuer une dissolution complète. Après refroidissement à 5°C, on ajoute 0,305 g (3,3 mmoles) de chlorure de propionyle et on agite le mélange pendant une nuit sous argon tandis qu'il se réchauffe jusqu'à 13°C. Après arrêt de la réaction avec 5 ml d'isopropanol, évapo-

ration à siccité/ puis co-évaporation avec 2 x 10 ml d'éthanol/ on purifie le résidu par chromatographie instantanée sur gel de silice (25,0 g ; 2/5 x 15 cm) avec un gradient échelonné de CHCl^ jusqu'à un mélange CHCl^acé-tone à 1:1. On rassemble les fractions qui contiennent le produit présentant un de 0,38 (gel de silice, mélange CHCl^: acétone à 1:1) et on purifie davantage cette matière par chromatographie à moyenne pression sur gel de silice (colonnes en série de 1,5 x 25,0 cm et 1,5 x 100,0 cm ; mélange CHCl^: acétone à 3:1) pour obtenir 0,114 g du composé désiré sous forme d'un solide blanc : P.F. 62-64°C. Analyse, calculé pour C-^H^gN^Og . 0 , 5 CH^OH :

Calculé : C-50,68 ; H-5,76 ; N-15,25 Trouvé : C-50,72 ; H-5,80 ; N-15,28 Les spectres.RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 26 : 9-(5-O-butanoyl-g-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine On met en suspension dans 30,0 ml d'acétonitrile anhydre 0,847 g (3,0 mmoles) de 9-(g-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3 et on ajoute 9,0 ml de pyridine pour effectuer une dissolution complète. Après refroidissement à 5°C, on ajoute 0,352 g (3,3 mmoles) de chlorure de butyryle et on agite le mélange pendant une nuit sous argon tandis qu'il se réchauffe jusqu'à 13°C.

Après arrêt de la réaction avec 5 ml d'isopropanol et éva-poration à siccité, puis co-évaporation avec 2 x 10 ml d'éthanol/ on purifie le résidu par chromatographie instantanée sur gel de silice (25,0 g : 2,5 x 15 cm) avec un gradient échelonné de CHCl^ jusqu'à un mélange CHCl^: acétone à 1:1. On rassemble les fractions qui contiennent le produit présentant un R^ de 0,38 (gel de silice, mélange CHCl^îacé-tone à 1:1). On purifie davantage cette matière par chromatographie à moyenne pression sur gel de silice (colonnes en série de 1,5 x 25,0 cm et 1,5 x 100,0 cm ; mélange CHCl^: acétone à 2:1) pour obtenir 267 mg du composé désiré sous forme d'un solide blanc t P.F. 108-110°C.

H

10

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20

25

30

Analyse, calculé pour C25H20N4O6 :

Calculé : C-51,13 ; H-5,72 ; N-15,90 Trouvé : C-51/21 ; H-5/73 : N-15,81 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Exemple 27 : 9-[5-0-(2,2-diméthylpropionyl)-g-D-arabino-

anhydre 0/850 g (3/01 mmoles) de 9-(g-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H_-purine provenant de l'Exemple 3/ et on ajoute 15 ml de pyridine anhydre. On refroidit la solution à 3°C dans un bain de glace et on ajoute 0/41 ml (3/3 mmoles) de . chlorure de 2/2-diméthylpropionyle. Après avoir agité à 3°C pendant 6 heures/ on arrête la réaction avec 2 ml de MeOH/ et on concentre le mélange réactionnel jusqu'à un volume de 10 ml/ puis le co-évapore avec plusieurs additions d'éthanol. On applique le résidu à une colonne pour chromatographie instantanée garnie de gel de silice (20,0 g • 2/5 x 12/0 cm) dans un mélange CE^C^îMeOH à 10:1. Une élution avec 300 ml de ce solvant donne 0/464 g de matière de départ et 0/553 g de produit brut. Par une nouvelle purification par chromatographie instantanée (silice ; 2,5 x 10 cm) en éluant avec un gradient de C^C^ jusqu'à un mélange MeOE^Cï^C^ à 1:9, on obtient 0,419 g (38 %) d'un verre transparent ; P.F. 73-76°C.

Analyse, calculé pour C]_5H22N4°6 . 0, 5^0 :

Calculé : C-51,19 ; H-6,18 ; N-14,93 Trouvé : C-51,43 ; H-6,06 ; N-14,91 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 28 : 9-(5-O-acétyl-g-D-arabinofurannosyl)-

anhydre 0,850 g (3,01 mmoles) de 9-(B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3, et on ajoute 15 ml de pyridine anhydre. On refroidit la solution à 3°C dans un bain de glace et on ajoute 0,24 ml (3,4 mmoles) de chlorure d'acétyle. Après avoir agité au bain de glace furannosyl]-6-méthoxy-9H-purine On met en suspension dans 75 ml d'acétonitrile

6-méthoxy-9H-purine On met en suspension dans 75 ml d'acétonitrile

34

pendant une demi-heure/ on arrête la réaction avec 2 ml de méthanol et on concentre le mélange réactionnel jusqu'à un volume de 10 ml, puis l'évaporé avec plusieurs additions d'éthanol. On purifie le résidu par chromatographie instantanée sur gel de silice (25/0 g ; 2/5 x 15 cm) en éluant avec 300 ml de mélange CH2Cl2:MeOH à 10:1/ pour obtenir 0/710 g de produit brut. Après passage dans une seconde colonne (25/0 g ; 2/5 x 15 cm)/ en éluant avec un mélange CH2Cl2:MeOH à 15:1/ on obtient 0/610 g d'un verre transparent qui contient encore une petite quantité d'une impureté présentant un supérieur. On purifie davantage le produit par chromatographie préparative sur couche avec un mélange CH2Cl2:MeOH à 9:1/ puis en introduisant les fragments de plaque sur une colonne pour chromatographie instantanée (20/0 g ; 2/5 x 12 cm) chargée dans CH2C12 et en éluant avec un gradient de MeOH dans CH2Cl2, pour obtenir 0/308 g (31 %) du produit désiré sous forme d'une mousse blanche ; P.F. 64-67 °C.

Analyse/ calculé pour C]_3H]_5N4°5 • 0 / 5H20 :

Calculé : C-46/85 ; H-5,14 ; N-16,81 Trouvé : C-47,04 ; H-5,12 ; N-16/72 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Exemple 29 : 6-méthoxy-9-[5-0-(2-méthylpropionyl)-B-D-arabinofurannosyl]-9H-purine On met en suspension dans 25 ml d'acétonitrile anhydre 0/500 g (1/77 mmole) de 9-(B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3/ et on ajoute 5 ml de pyridine anhydre. On refroidit la solution à 3°C dans un bain de glace et on ajoute 0/21 ml (2/0 mmoles) de chlorure d'isobutyryle. Après agitation à 3°C pendant trois heures/ on arrête la réaction avec 2 ml de MeOH et on concentre le mélange réactionnel jusqu'à un volume de 10 ml/ puis le co-évapore avec plusieurs additions d'éthanol. On applique le résidu à une colonne pour chromatographie instantanée garnie de gel de silice (25/0 g ; 2,5 x 15 cm) dans un mélange CH2Cl2:MeOH à 10:1. Par élution avec 300 ml

de ce solvant/ on obtient 0/167 g de matière de départ et 0/221 g de produit brut. On purifie davantage le produit par chromatographie préparative sur couche avec un mélange CH2Cl2:MeOH à 9:1/ puis en introduisant les fragments de plaque sur une colonne pour chromatographie instantanée garnie de gel de silice (16,0 g ; 2/5 x 10 cm) dans Cî^C^. On élue la colonne avec un gradient de MeOH dans CH2Cl2, pour obtenir 0/127 g (20 %) d'un verre transparent ; P.F. 68-71°C.

Analyse/ calculé pour C]_5H20N4°6 . 0 / 25H20. 0 / 05MeOH :

Calculé : C-50/43 ï H-5/82 ; N-15/63 Trouvé : C-50/49 ; H-5/83 •, N-15/62 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Exemple 30 : 6-méthoxy-9-[2-0-(2/2-diméthylpropionyl)-3-D-arabinofurannosyl]-9H-purine Dans un ballon tricol à fond rond équipé d'un thermomètre/ d'un robinet d'entr.ée d'argon/ d'un agitateur magnétique/ d'un condenseur et d'une enveloppe chauffante/ on introduit 298/5 mg (1/06 mmole ) de 9-(3-D-arabinofurannosyl ) -6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3, 1 mg (10 pmoles) de 4-diméthylaminopyridine/ 20ml d'acétonitrile et 5 ml de pyridine. On ajoute 0/22 ml (1/06 mmoles) d'anhydride triméthylacétique et on chauffe la solution à 40°C pendant 26 heures. On arrête la réaction à ce moment en ajoutant 2 ml d'eau et on. évapore le mélange réactionnel jusqu'à obtention d'une huile limpide. On purifie le résidu par chromatographie instantanée sur gel de silice avec un gradient échelonné de CHCl^ jusqu'à un mélange CHCl^MeOH à 9:1. On purifie davantage cette matière par chromatographie préparative sur couche avec un mélange CHCl^MeOH à 9:1 et on co-évapore le produit avec du tétrachlorure de carbone et de l'acétone pour obtenir 90 mg d'une mousse blanche cassante.

Analyse, calculé pour C]_5H22N4°6.0,05(CHg)2C0.0/45CCl4 : Calculé : C-45/57 ; H-5/13 ; N-12,78 Trouvé : C-45/67 ; H-5/27 ; N-12/67 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

4f

Exemple 31 : 6-méthoxy-9-[(2,3/5-tri-O-acétyl)-B-D-arabino-furannosyl]-9H-purine Dans un ballon tricol à fond rond équipé d'un thermomètre, d'une entrée d'argon, d'un agitateur magné-5 tique et d'un bain de glace carbonique et d'acétone, on introduit 1,009 g (3,57 mmoles)'de 9-(B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3, 0,0098 g (80 pmoles) de 4-diméthylaminopyridine, 0,59 ml (4,2 mmoles) de triéthylamine et 52 ml d'acétonitrile anhydre. Après 10 avoir refroidi la solution laiteuse à -20°C, on ajoute 2,4 ml (25,4 mmoles) d'anhydride acétique. La solution devient immédiatement limpide. Au bout de 5 minutes, on arrête la réaction avec 5 ml de MeOH et évapore le mélange réactionnel jusqu'à obtention d'une huile visqueuse limpide. 15 Par chromatographie instantanée sur gel de silice avec un gradient de CHCl^ et MeOH, on obtient le produit sous forme d'une huile visqueuse limpide. En dissolvant cette matière dans une quantité minimale d'acétone, en diluant avec de l'eau et en lyophilisant, on isole 1,03 g (71 %) du produit 20 sous forme d'une poudre blanche.

Analyse, calculé pour cj_7H20N4°8 :

Calculé : C-50,00 ; H-4,94 ; N-13,72 Trouvé : C-49,80 ; H-5,09 ; N-13,50 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. 25 Exemple 32 : 6-méthoxy-9-(2-O-pentanoyl-b-p-arabino-

furannosyl)-9H-purine

Méthode 1

Dans un ballon tricol à fond rond équipé d'un thermomètre, d'un robinet d'entrée d'argon et d'un agita-30 teur magnétique, on introduit 283 mg (1,0 mmole) de 9-(B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3, 20 ml d'acétonitrile et 5 ml de pyridine. On ajoute 0,2 ml (1,0 mmole) d'anhydride valérique et on met la solution sous agitation à 20°C pendant 3 heures. 35 On arrête la réaction avec 2 ml d'eau et évapore le mélange réactionnel jusqu'à obtention d'une huile limpide que l'on

W

purifie ensuite par chromatographie instantanée sur silice avec un gradient échelonné de CHCl^ jusqu'à un mélange CHClgiMeOH à 9:1. On obtient ainsi 110 mg du 2'-ester souillé par le 5'-ester (voir Exemple 23), une substance présentant un inférieur. On purifie davantage cette matière par chromatographie préparative sur couche de silice en utilisant un mélange CHCl3:MeOH à 9:1 et la co-évapore avec de l'acétone pour obtenir 70 mg du 2'-ester sous forme d'un verre transparent.

Analyse, calculé pour C]_5H22N4°6 ' ^ ^ ^CH3 ) 2C0 :

Calculé : C-53,16 ; H-6,17 ; N-14,17 Trouvé : C-52,89 ; H-6,37 ; N-13,96 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Méthode 2

Dans un ballon à fond rond de 250 ml, on introduit 2,5 g (4,8 mmoles) de 6-méthoxy-[3,5-0-(1,1,3,3-tétra-iso-propyldisiloxane-1,3-diyl)-3-D-arabinofurannosylj-9H-purine 1 ' exemple 40 ainsi-que 0,06 g (0,47 mmole) de 4-diméthylaminopyridine. On ajoute 30 ml d'acétonitrile et 2,65 ml de triéthylamine anhydres et on charge une ampoule pour addition continue avec 20 ml d'acétonitrile et 1,13 ml (5,7 mmoles) d'anhydride pentanoxque. On refroidit le mélange réactionnel dans un bain de glace à 3°C sous un courant d'argon. On effectue une addition lente de la solution d'anhydride pentanoïque en une période de 2 heures. On traite ensuite le mélange réactionnel avec 10 ml de méthanol et le concentre sous pression réduite. On reprend le résidu dans 200 ml de CHCl^ et l'épuise', avec 2 x 50 ml de E^O. On réépuise les phases aqueuses rassemblées avec 25 ml de CHCl^ et on déshydrate les phases organiques rassemblées sur MgSO^, les filtre et les concentre pour obtenir 3,44 mg de produit brut.

On dissout la 6-méthoxy-9-[2-0-pentanoyl-3,5-0-(1,1,3,3-tétra-isopropyldisiloxane-l,3-diyl)-B-D-arabino-f uranosyl ]-9îî-purine brute dans 120 ml de tétrahydrof uranne et 3 ml de E^O. On refroidit la solution à 3°C dans un bain de glace et on ajoute une solution 1, 0M de fluorure de tétra-

butyl-ammonium dans 6,0 ml de tétrahydrofuranne. Au bout de 1,5 heure, on ajoute 2 ml d'une solution saturée de chlorure d'ammonium et on fait passer directement le mélange réactionnel sur une colonne de purification (5,0 x 8,0 cm) garnie de gel de silice dans du chloroforme. On élue la colonne avec 200 ml de chloroforme, puis avec 400 ml d'un mélange acétone : chloroforme à 1:1, et on rassemble et concentre toutes les fractions contenant le produit. On accomplit la purification finale sur une colonne de gel de silice pour chromatographie instantanée (5,0 x 15 cm) éluée avec un gradient échelonné d'acétone dans CHCl^, pour obtenir 1,17 g (67 %)d'un verre transparent collant souillé par de l'acide pentanoïque.

Analyse, calculé pour C]_5H22N4°6. 0 , 2C^H^0O2 :

Calculé : C-52,79 ; H-6,25 ; N-14,48 Trouvé : C-52,97 ; H-6,38 ; N-14,60 Exemple 33 : 9-(2-O-butanoyl-B-D-arabinofurannosyl)-

thermomètre, d'une entrée d'argon, d'un agitateur magnétique et refroidi à 4°C, on introduit 283 mg (1,0 mmole) de 9-(B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3, 20 ml d'acétonitrile et 5 ml de pyridine anhydre. On ajoute 170 jal (1,0 mmole) d'anhydride butyrique et on met la solution sous agitation à 5°C sous argon pendant 6 heures. A ce moment, on arrête la réaction en ajoutant 2 ml d'eau et on évapore le mélange réactionnel jusqu'à obtention d'une huile limpide. On purifie le mélange réactionnel par chromatographie instantanée en utilisant un gradient échelonné de CHClg jusqu'à un mélange CHCl^acé-tone à 1:1. On purifie davantage cette matière par chromatographie préparative sur couche de gel de silice avec un mélange CHCl^MeOH à 9:1 pour obtenir 90 mg du 2'-ester sous forme d'une huile limpide.

Analyse, calculé pour C^2H20N4°6"^'^H2° :

Calculé : C-50,36 ; H-5,80 ; N-15,66 rj

Trouvé : C-50,36 ; H-5,81 ; N-15,66

6-méthoxy-9H-purine Dans un ballon tricol à fond rond équipé d'un

Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Exemple 34 : 6-méthoxy-9-[2-0-(2-méthylpropionyl)-g-D-arabinofurannosyl]-9H-purine Dans un ballon tricol à fond rond équipé d'un thermomètre, d'une entrée d'argon, d'un agitateur magnétique, d'un condenseur et d'une enveloppe chauffante, on introduit 290,0 mg (1,03 mmole) de 9-(B-D-arabinofurannosyl) 6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3, 20 ml d'acéto nitrile et 5 ml de pyridine. On ajoute 170 jjl (1,0 mmole) d'anhydride isobutyrique et on chauffe la solution à 30°C pendant 4 heures. On arrête la réaction à ce moment en ajoutant 2 ml d'eau et on évapore le mélange réactionnel jusqu'à obtention d'une huile limpide. On purifie le résidu par chromatographie instantanée sur gel de silice avec un gradient échelonné de CHCl^ jusqu'à un mélange CHCl^MeOH à 9:1. On purifie davantage les fractions qui contiennent le produit présentant un R^ de 0,54 (silice, mélange CHCl^: MeOH à 20:1) par chromatographie préparative sur couche de gel de silice en utilisant un mélange CHCl^îMeOH à 9:1. On obtient ainsi 90,0 ml du 2'-ester sous forme d'un verre transparent.

Analyse, calculé pour C^ç.H2qN^06 . 0 , ÎC^H^O :

Calculé : C-51,31 ; H-5,80 t N-15,64 Trouvé : C-51,41 : H-5,81 ; N-15,72 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Exemple 35 : 9-(3-O-benzoyl-B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine On dissout 0,264 g (1,0 mmole) de 9-(2,3-anhydro-3-D-lyxofurannosyl )-6-méthoxy-9.H-purine (pour la préparation voir l'Exemple 36) dans 20,0 ml d'éthanol anhydre, on chauffe au reflux et on ajoute sous argon 0,209 g (1,5 mmole) de benzoate d'ammonium. Au bout de 24 et 35 heures, on ajoute un supplément de 1,5 mmole de benzoate d'ammonium. Au bout de 48 heures au reflux, on évapore le mélange réactionnel à siccité. Après 1'évaporation, on purifie le résidu par chro matographie instantanée sur gel de silice (25,0 g •, 2,5 x 15 cm

avec un mélange CHCl^: acétone à 3:1. On rassemble les fractions qui contiennent le produit présentant un de 0/52 (gel de silice ; mélange CHCl^: acétone à 1:1) pour obtenir 138 mg du composé désiré ; P.F. 180-182°C.

Analyse/ calculé pour C]_gH]_8N406 :

Calculé : C-55/96 ; H-4/70 ; N-14/50 Trouvé : C-55/90 ; H-4/71 ; N-14/44 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 36 : 9-(2/3-anhydro-B-D-lyxofurannosyl)-6-méthoxypurine On dissout 5/902 g (22/5 mmoles) de triphényl-phosphine dans 138 ml de dioxanne et on chauffe la solution à 70°C. On y ajoute 4/234 g (15/0 mmoles) de 9-(B-D-arabino-furannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3, on agite le mélange pendant 10 minutes et on ajoute goutte à goutte 3/919 g (22,5 mmoles) d'azodicarboxylate de di-éthyle dans 50 ml de 1/4-dioxanne en une période de 10 minutes. On agite le< mélange réactionnel à 70°C pendant 1 heure/ le refroidit à la température ambiante et l'évaporé jusqu'à obtention d'une huile brune épaisse. On purifie cette matière par chromatographie instantanée sur silice (188/0 g ; 5/0 x 21/0 cm) en éluant avec 3/6 litres de mélange CHCl^: acétone à 5:1 et 2/0 litres de mélange CHClg: acétone à 3:1. On rassemble les fractions qui contiennent la matière présentant un R^ de 0/24 (silice ; mélange CHCl^: acétone à 1:1) et les évapore à siccité. On purifie davantage le résidu par chromatographie instantanée sur silice (250/0 g ; 5/0 x 28/0 cm) en éluant avec EtOAc pour obtenir 2/452 g (62 %) de la substance désirée sous forme d'une mousse blanche ;

P.F. 144-145/5 °C.

Analyse/ calculé pour C^H^ 2N4°4 * ® ' ^C3H6°. o , OSCHCl^ : Calculé : C-49/78 ; H-4,80 ; N-19/68 Trouvé : C-49,80 ; H-4,95 ; N-19,87 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

u

Exemple 37 : 6-méthoxy-9-[(2-0-(4-méthoxybenzoyl))-B-D-arabinofurannosyl3-9H-purine On dissout dans 40 ml de THF 0,86 g (1,3 mmole) de 6-méthoxy-9-[2-(4-méthoxybenzoyl)-3,5-0-(1,1,3,3-tétra-5 isopropyldisiloxane-1,3-diyl)-B-D-arabinofurannosyl]-9H-purine (pour la préparation, voir l'Exemple 43 ci-après) et on ajoute 1 ml de H20. On refroidit la solution à 3°C et on ajoute 6,3 ml d'une solution 1, OM de fluorure de tétra-butyl-ammonium dans THF. Au bout de 30 minutes, on ajoute 10 un supplément de 5 ml de H20, on concentre le mélange réactionnel à la moitié de son volume et le fait passer directement sur une colonne pour chromatographie instantanée garnie de gel de silice (25,0 g ; 2,5 x 15 cm) dans CH2Cl2. On élue la colonne avec 200 ml de CH2Cl2, puis avec 400 ml 15 de mélange CH2Cl2:MeOH à 20:1 et on rassemble toutes les fractions qui contiennent la matière présentant un de 0,20 (silice, mélange CH2Cl2:MeOH à 20:1) pour obtenir 0,570 g d'une mousse blanche. On accomplit une purification finale sur une colonne pour chromatographie instantanée 20 (5,0 x 15 cm) garnie de gel de silice dans CHCl^- Par élution avec un gradient échelonné d'acétone dans le chloroforme, on obtient 0,325 g (60 %) de produit sous forme d'une mousse blanche ; P.F. 71-75°C.

Analyse, calculé pour C]_9H20N4°7 . 0 , 3CHCl3 - 0 , 250^^0 : 25 Calculé : C-51,60 ; H-4,71 ; N-12,00

Trouvé : C-51,56 ; H-4,70 ; N-11,95 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Exemple 38 : 6-méthoxy-9-[(2-0-(4-méthylbenzoyl))-B-D-arabinofurannosyl]-9H-purine 30 On dissout dans 40 ml de THF et 1 ml de H20

0,85 g (1,3 mmole) de 6-méthoxy-9-[2-(4-méthylbenzoyl)-3,5-0-(1,1,3/3-tétra-isopropyldisiloxane-l,3-diyl)-B-D-arabinofurannosyl]-9H-purine (pour la préparation/ voir l'Exemple 42 ci-après). On refroidit la solution à 3°C et 35 on ajoute 5 ml d'une solution 1,0M de fluorure de tétra-butyl-ammonium dans THF. Au bout de 30 minutes, on ajoute

un supplément de 5 ml de E^O et on concentre le mélange réactionnel à la moitié de son volume et le fait passer directement sur une colonne pour chromatographie instantanée garnie de gel de.silice (20/0 g ; 2,5 x 12 cm) dans

On élue la colonne avec 200 ml de C^C^/ puis avec 400 ml de mélange CE^C^îMeOH à 15:1 et on rassemble toutes les fractions qui contiennent la matière présentant un de 0/20 (silice ; mélange CE^C^^MeOH à 20:1). On applique le produit brut à une seconde colonne pour chromatographie instantanée garnie de gel de silice (25/0 g ; 2,5 x 18 cm) dans un mélange acétone : à 1:1. Par élution avec le même solvant, on obtient 0/633 g de produit que l'on purifié davantage par chromatographie préparative sur couche (silice ; mélange acétone : CE^C^ à 1:1) et chromatographie instantanée (25/0 g ; 2,5 x 15 cm). On élue la colonne avec un gradient échelonné d'acétone dans CHCl^ pour, obtenir 0,243 g (47 %) d'un verre transparent ; P.F. 69-73 0 C.

Analyse, calculé pour cigH20N406 . 0 / 4C3HgO. 0 , 25CHC12 : Calculé : C-54,17 ; H-5,03 ; N-12,36 Trouvé : C-54,00 ; H-5,08 ; N-12,30 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Exemple 39 : 9-[2-0-(4-chlorobenzoyl)-g-D-arabino-furannosyl]-6-méthoxy-9H-purine On dissous dans 40 ml de THF et 1 ml de H^O 1/07 g (1/7 mmole) de 9-[2-(4-chlorobenzoyl)-3,5-0-(l, 1,3,3-tétra-isopropyldisiloxane-1,3-diyl)-g-D-arabinofurannosyl]-6-méthoxy-9H-purine (pour la préparation, voir l'Exemple 44 ci-après). On refroidit la solution à 3°C et on ajoute 4,5 ml d'une solution 1,0M de fluorure de tétrabutyl-ammonium dans THF. Au bout de 30 minutes/ on ajoute un supplément de 5 ml de E^O et on fait passer directement le mélange réactionnel sur une colonne pour chromatographie instantanée garnie de gel de silice (20/0 g •, 2,5 x 12 cm) dans CH2C12* On élue la colonne avec 200 ml de CH2CI2/ puis avec 400 ml de mélange CH2Cl2:MeOH à 20:1/ et on rassemble toutes les fractions

qui contiennent la matière présentant un de 0/20 (silice/ mélange CE^C^îMeOH à 20:1). On applique le produit brut sur une colonne pour chromatographie instantanée garnie de gel de silice (30,0 g ; 2/5 x 18 cm) dans un mélange acé-tone^HCl^ à 1:1. Par élution avec le même solvant/ on obtient 0/269 g de produit que l'on purifie davantage par chromatographie préparative sur couche (silice/ mélange acétone :CHCl^ à 2:3) et chromatographie instantanée (25/0 g; 2,5 x 15 cm). On élue la colonne avec un gradient échelonné d'acétone dans CHCl^» On prépare un échantillon analytique en reprenant le produit dans l'éther anhydre, en le précipitant avec de l'éther de pétrole (40-60°C) et en lyophilisant le précipité pour obtenir 0/082 g (12 %) d'une poudre blanche ; P.F. 76-81°C.

Analyse, calculé pour C^gH-^N^OgCl. 1, 20^0. 0 , 35C3HgO : Calculé : C-49,45 ; H-4,68 N-12,11 Trouvé : C-49,78 ; H-4,38 ; N-11,88 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 40 : 6-méthoxy-9-[3,5-0-(l,2,3,3-tétra-isopropyl-l,3-disiloxane-l/3-diyl)-£-D-arabino-furannosyl]-9H-purine On dissout 1/0 g (3/54 mmoles) de 9-(g-D-arabino-furannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3 et 0/965 g (14/2 mmoles) d'imidazole dans 10 ml de diméthyl-formamide anhydre et on refroidit la solution à 3°C. On ajoute ensuite 1/35 ml (3,90 mmoles) de 1,3-dichloro-l,1,3,3-tétra-isopropyldisiloxane et on agite le mélange sous argon pendant 3 heures. On arrête ensuite la réaction avec 1 ml de E^O et concentre le mélange réactionnel sous pression réduite. On partage le résidu entre 150 ml d'acétate d'éthyle et 50 ml de H^O et on déshydrate la phase d'acétate d'éthyle sur MgSO^, la filtre et la concentre. On reprend le produit brut dans l'acétate d'éthyle et le purifie par chromatographie instantanée sur gel de silice (25,0 g ; 2/5 x 15cm) dans l'acétate d'éthyle. Les fractions présentant un R^ de 0,70 (silice, acétate d'éthyle) donnent 1,48 g (80 %) de

H

la substance désirée sous forme d'un solide blanc ;

UV max (EtOH) : 248,4 nra.

Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 41 : 6-méthoxy-9-[2-0-(2-aminobenzoyl)-g-d-arabino-furannosyl]-9H-purine Dans un ballon tricol à fond rond équipé d'un thermomètre, d'un robinet d'entrée d'argon, d'un agitateur magnétique, d'un condenseur et d'une enveloppe chauffante, on introduit 0,283 g (1,0 mmole) de 9-(B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine provenant de l'Exemple 3, 15 ml d'acétonitrile, 0,189 g (1,1 mmole) d'anhydride isatoïque et 84 mg (1/0 mmole) de bicarbonate de sodium. On chauffe la suspension au reflux pendant 3/5 heures/ puis on ajoute un second équivalent d'anhydride isatoïque. Après chauffage au reflux pendant une heure de plus/ on refroidit le mélange réactionnel à la température ambiante/ le filtre et évapore le filtrat jusqu'à obtention d'un verre mousseux. On purifie le résidu par chromatographie instantanée sur silice avec un gradient échelonné de CHCl^ jusqu'à un mélange CHCl^MeOH à 9:1. On obtient ainsi 53/1 mg du 2'-ester sous forme d'un verre cassant ; P.F. 91-93°C.

Analyse/ calculé pour C^gH^gNç-Oç. - 0 , 3H20. 0, 2CH40 :

Calculé : C-52,90 ; H-4/98 : N-16/95 Trouvé : C-53/23 ; H-4/98 ; N-17,21 Les spectres RMN et de masse confirment la structure.

Exemple 42 : 6-méthoxy-9-[2-(4-méthylbenzoyl)-

3,5-0-(1,1,3,3-tétra-isopropyldisiloxane-1,3-diyl)-B-D-arabinofurannosyl]-9H-purine Dans un ballon à fond rond de 100 ml contenant 0,02 g (0,16 mmole) de 4-diméthylaminopyridine, 25 ml d'acétonitrile et 0,4 ml de triéthylamine, on ajoute 1,0 g (1/9 mmole) de'6-méthoxy-9-[3,5-0-(1/1,3,3-tétra-isopropyl-disiloxane-1,3-diyl)-B-D-arabinofurannosyl]-9H-purine provenant de l'Exemple 40 et on refroidit la solution dans un bain de glace à 3°C pendant 5 minutes. On ajoute 0,30 ml (2,3 mmoles) de chlorure de toluyle et on agite le mélange

pendant 3 heures à 3°C. On ajoute ensuite un supplément de 0/5 ml de triéthylamine et 0/5 ml de chlorure de toluyle/ et on réchauffe le mélange jusqu'à la température ambiante. Au bout de 7 heures, on traite le mélange par 2 ml de méthanol/ le concentre sous pression réduite et applique le résidu à une colonne pour chromatographie instantanée (2/5 x 15 cm) garnie de gel de silice dans CB^C^- On élue la colonne avec 400 ml de mélange CH^Cl^iMeOH à 10:1 pour obtenir 0/90 g (74 %) du produit désiré.

Analyse/ calculé pour C3]_H45N4°7S^2 :

Calculé : C-57,92 ; H-7,21 ; N-8,71 Trouvé : C-57/69 î H-7/43 : N-8/40 Les spectres RMN et de masse confirment la structure. Exemple 43 : 6-méthoxy-9-[2-(4-méthoxybenzoyl)-

3/5-0-(1/1/3/3-tétra-isopropyldisiloxane-1/3-diyl)-g-D-arabinofurannosyl]-9H-purine Dans un ballon à fond rond de 100 ml contenant 0/02 g (0/16 mmole) de 4-diméthylaminopyridine/ 25 ml d'acétonitrile et 0/4 ml de triéthylamine, on ajoute 1/0 g (1/9 mmole) de 6-méthoxy-9-[3/5-0-(1/1/3/3-tétra-isopropyl-disiloxane-1, 3-diyl ) - g-D-arabinof urannosyl ] -9H_-purine provenant de l'Exemple 40/ puis 0/35 ml (2/5 mmoles) de chlorure d'anisoyle. Au bout de 4 heures à la température ambiante/ on traite le mélange réactionnel par 2 ml de méthanol et le concentre sous pression réduite. On applique le résidu à une colonne pour chromatographie instantanée garnie de gel de silice (25/0 g ; 2/5 x 15 cm) dans un mélange C^Cl^MeOH à 20:1. Par élution avec le même solvant/ on obtient 0/930 g (74 %) du produit désiré.

Analyse, calculé pour C^H^N^gS^ . 0 , 35H20 :

Calculé : C-55/97 ; H-7,08 ; N-8,42 Trouvé : C-56/02 ; H-7/01 ; N-8/32 Exemple 44 : 9- [ 2- ( 4-chlor.obenzoyl )-3/5-0-(l/l/3/3-tétra-isopropyldisiloxane-1/3-diyl)-g-D-arabino-furannosyl]-6-méthoxy-9H-purine Dans un ballon à fond rond de 250 ml contenant 0/02 g (0/16 mmole) de 4-diméthylaminopyridine/ 25 ml

d'acétonitrile et 0/4 ml de triéthylamine/ on ajoute 1/0 g (1/9 mmole) de 6-méthoxy-9-[3/5-0-(1/1/3/3-tétra-isopropyl-disiloxane-1/3-diyl)-B-D-arabinofurannosyl]-9H;-purine provenant de l'Exemple 40, et on refroidit la solution dans un bain de glace à 3°C pendant 5 minutes. On ajoute 0/31 ml (2,5 mmoles) de chlorure de 4-chlorobenzoyle et on retire le mélange réactionnel du bain de glace. Au bout de 8 heures passées à la température ambiante/ on traite la solution avec 3 ml de MeOH et la concentre sous pression réduite. On reprend le résidu dans CH2CI2 et l'applique à une colonne pour chromatographie instantanée garnie de gel de silice (25/0 g ; 2,5 x 15 cm) dans le même solvant. On élue la colonne avec 200 ml de CH2CI2/ puis 400 ml de mélange C^C^îMeOH à 20:1, pour obtenir 1,05 g (82 %) de produit, homogène par chromatographie en couche mince (silice, mélange CH2Cl2:MeOH à 20:1 7 = 0,44).

Analyse, calculé pour C^QH^N/^OyClS^ :

Calculé : C-54,32 ; H-6,53 ; N-8,45 Trouvé : C-54/48 ; H-6,72 ; N-8,28 Exemple 45 : 5'-monophosphate de 9-B-D-arabinofurannosyl-6-diméthylamino-9H-purine

On synthétise le 5'-monophosphate de 9-B-D-ara-binofurannosyl-6-diméthylamino-9H-purine en réalisant le transfert, catalysé par la thymidine-kinase (TK) extraite de 1'herpesvirus varicellae (HVV) (Fyfe, Molecular Pharmac./ 21 / 432 (1982))/ du groupe phosphate terminal de 1'adéno-sine-5'-triphosphate (ATP) vers le groupe OH en position 5' de la 9-B-D-arabinofurannosyl-6-diméthylamino-9H-purine.

A 0/5 ml de tampon tris(hydroxyméthyl)amino-méthane-HCl 0/02M/ pH 7/5/ on ajoute 50 nmoles de 9-B-D-arabinof urannosyl-6-diméthylamino-9_H-purine / 55 nmoles de ATP (Sigma Chemical Co./ St. Louis/ MO/ U.S.A.), 55 nmoles de MgCl2 et 0/005 U.I. de TK de HVV. On fait incuber la solution à 21°C pendant 2/5 heures/ puis la filtre à travers un filtre "Centricon 10" (une membrane de YM ayant un poids moléculaire critique de 10K ; fourni par Amicon/ Inc./

Danvers, MA/ U.S.A.) pour éliminer la protéine. Le produit se caractérise par chromatographie en couche mince par échange d'ions sous forme d'une tache absorbant la lumière ultraviolette qui migre avec un R typique d'un monophosphate .

Exemple 46 : 5'-monophosphate de 6-méthoxypurine-arabinoside

On dissout 1/5 g (4/9 mmoles) du nucléoside/ le 6-méthoxypurine-arabinoside/ dans 15 ml de phosphate de triéthyle et 4/8 ml de triéthylamine. On refroidit cette solution à -10°C. Sous agitation/ on ajoute 0/91 ml d'oxy-chlorure de phosphore. Au bout de 10 minutes, on ajoute un supplément de 0/3 ml d'oxychlorure de phosphore. Au bout de 10 minutes supplémentaires/ on met fin à la réaction en ajoutant de la triéthylamine glacée 0/5M dans l'eau.

Tous les réactifs ci-dessus proviennent de chez Aldrich.

On sépare les composants du mélange réactionnel final par chromatographie par échange d'ions sur QAE-Sephadex (Pharmacia). On sépare les composants en éluant avec un gradient de bicarbonate d'.ammonium 50mM à 1M. Le 5'-monophosphate de 6-méthoxypurine-arabinoside ne représente qu'environ 10 % de la matière extraite de la colonne par élution. Pour éliminer 1'orthophosphate minéral du composé/ on recourt à une chromatographie par échange d'ions sur résine BioRad AG-1X8 avec un gradient échelonné de bicarbonate d'ammonium lOOmM à 750mM. On évapore immédiatement sous vide les fractions contenant le composé pour éliminer l'excès de bicarbonate d'ammonium/ puis les lyophilise.

On obtient 50 mg (0/14 mmole) du 5'-monophosphate de 6-méthoxypurine-arabinoside/ soit un rendement de 3 %. Le spectre UV (max à 250 nm et min à 221 nm( à pH 7) et le rapport base/phosphate (1,00/1,08) confirment la structure du composé. Celui-ci peut être clivé par la phospha-tase alcaline et la 5'-nucléotidase pour donner le nucléoside .

*

Exemple 47 : 5'-triphosphate de 6-méthoxypurine-arabinoside

On dissout 36 mg (93 pmoles) du 5'-monophosphate de 6-méthoxypurine-arabinoside provenant de l'Exemple 46 5 dans 2 ml d'hexaméthylphosphoramide. On ajoute 82 mg (506 pmoles) de carbonyldiimidazole' et on agite le mélange à la température ambiante pendant 2 heures. On ajoute 0,032 ml (800 pmoles) de méthanol et on agite le mélange pendant 20 minutes. On ajoute 220 mg (470 pmoles) de pyrophosphate 10 de tributyl-ammonium (Sigma) ayant été dissous dans 1,5 ml d1hexaméthylphosphoramide et on agite le mélange à la température ambiante pendant 18 heures. On met fin à la réaction en ajoutant 50 ml d'eau. Les réactifs ci-dessus proviennent de chez Aldrich, sauf indication contraire. On 15 purifie le 5'-triphosphate par chromatographie par échange d'ions sur QAE-Sephadex A-25 (Pharmacia) en éluant avec un gradient échelonné de bicarbonate d'ammonium 50mM à 800mM. On évapore immédiatement sous vide les fractions contenant le composé pour éliminer l'excès de bicarbonate d'ammonium, 20 puis les redissout dans l'eau et les conserve à l'état congelé à -20°C.

On obtient 30 mg (57 pmoles) du 5'-triphosphate de 6-méthoxypurine-arabinoside, soit un rendement de 60 %. Le spectre UV (max à 250 nm et min à 223 nm, à pH 7) et le 25 -rapport base/phosphate (1,00/3,10) confirment la structure du composé. Celui-ci peut être clivé par la phosphatase alcaline pour donner le nucléoside et par la phosphodies-térase 1 pour donner le monophosphate.

Exemple 48 : 6-Diméthylamino-9- (2-0-valéry 1 ) -^-D-arabinosyl-30 9H-purine.

On dissout 0,501 g (1,67 mmol) de 6-diméthylamino-purine-arabinoside dans un mélange de 20 ml de pyridine et 20 ml de DMF, on refroidit la solution à 4°C et on lui ajoute lentement 0,43 ml (2,17 mmoles) d'anhydride valérique 35 (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI) en solution dans un mélange de 5 ml de pyridine et 5 ml de DMF puis on la porte à 40°C et après 2 heures ou élimine le solvant sous vide.

soi v w

On soumet la m-atière restante à une chromatographie instantanée sur une colonne de gel de silice de 4,8 x 20 cm avec 150 ml de chacun des mélanges successifs suivants de dichlorométhane et de méthanol dans les proportions volu-miques respectives de 100:0, 98:2, 96:4, 94:6, 92:8 et 90:10, puis on réunit les fractions qui contiennent le produit formé et en les lyophilisant on obtient 0,195 g de 6-diméthylamino-9- (2-0-valéry 1-/9-D-arabinosyl) - 9H-purine, dont une TLC (chromatographie en couche mince) sur gel de silice, avec un mélange 9:1 de dichlorométhane et méthanol, donne un Rf de 0,55.

Analyse pour ^17^25^5^5 . 0 , 5H,-,Û :

Calculé : C-52,57 H-6,75 ; N-18,03 Trouvé : C-52,61 ; H-6,77 ; N-17,99 Les spectres de RMN et de masse sont en accord avec la structure indiquée.

Exemple 49 : 6-Diméthylamino-9-(2,3,5-tria cet yl^®-D-arabinosyl)-9H-purine.

On dissout 3,0 g (10 mmoles) de 6-diméthylamino-purine-arabinoside dans un mélange de 20 ml d'acétonitrile et 45 ml de pyridine maintenu à 4°C, on ajoute goutte à goutte à la solution 2,85 ml (40,08 mmoles) de chlorure d'acétyle (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI) dans 7 ml d1acétonitrile, et après 5 heures on élimine le solvant sous vide au-dessous de 45°C et on place la matière restante pendant 24 heures dans une pompe à haut vide: On soumet ensuite la matière séchée à une chromatographie instantanée sur une colonne de gel de silice de 4,8 x 25 cm avec un mélange 9:1 de dichlorométhane et méthanol, on réunit les fractions contenant le produit formé et en les lyophilisant on obtient 0,445 g de 6-diméthylamino-9-(2,3,5-tri-acétyl-£-D-arabinosyl)-9H-purine, dont une TLC sur gel de silice avec un mélange 9:1 de dichlorométhane et méthanol donne Rf de 0,61.

Analyse pour la formule ^ig^23^5^7 :

Calculé : C-51,30 ; H-5,50 ; N-16,62

Trouvé : C-51,40 ; H-5,55; N-16,54

Les spectres ,de RMN et de masse sont en accord avec la structure xndxquee.

Exemple 50 : Formulations de Comprimés

On prépare les formulations A et B suivantes en granulant les ingrédients par voie humide avec une solution de la Povidone, puis en ajoutant le stéarate de magnésium et en comprimant.

Formulation A

(a) Ingrédient actif

(b) Lactose B.P. (Pharmacopée

Britannique)

(c) Povidone B.P.

(d) Amidon-glycolate de sodium

(e) Stéarate de magnésium

Formulation B

(a) Ingrédient actif

(b) Lactose

(c) Avicel PH 101

(d) Povidone B.P.

(e) Amidon-glycolate de sodium

(f) Stéarate de magnésium

Formulation C Ingrédient actif Lactose Amidon

Povidone B.P.

Stéarate de magnésium mg/comprimé 250 210

15 20 5

mg/comprimé 250 26

9 12 3

500 mg/comprimé 250 150 60 15 20

5

500 mg/comprimé 100 200 50 5

4

359

. ' 300 mg/comprimé 250

26 9 12 3

300

On prépare des comprimés à partir des ingrédients (C) précédents en granulant par voie humide, puis en comprimant. Dans une variante de préparation, la Povidone B.P. peut être remplacée par de la polyvinylpyrrolidone.

On prépare les formulations D et E suivantes en comprimant directement les ingrédients mélangés. Le lactose de.la formulation E est du type pour compression directe (Dairy Crest - "Zeparox").

Formulation D mg/capsule

250 150

Ingrédient actif Amidon prégélatinisé

400

ÇS

Formulation E mg/capsule

Ingrédient actif 250

Lactose 150

Avicel 100

500

Formulation F (Formulation à Libération Réglée) o ———

On prépare cette formulation en granulant les ingrédients (ci-dessous) par voie humide avec une solution de la Povidone, puis en ajoutant le stéarate de magnésium et en comprimant. 10 mg/comprimé

(a) Ingrédient actif 500

(b) Hydroxypropylméthyl-cellulose

(Methocel K4M Premium) 112

(c) Lactose B.P. 53 25 (d) Povidone B.P. . 28

(e) Stéarate de magnésium 7

700

La libération du médicament s'effectue sur une période d'environ 6-8 heures et est achevée au bout de 20 12 heures.

Exemple 51 : Formulations de Capsules Formulation A

On prépare une formulation de capsule en mélangeant les ingrédients de la Formulation D de l'Exemple 50 ci-dessus et en en remplissant une capsule de gélatine dure en deux parties. On prépare la Formulation B (ci-dessous) d'une manière similaire.

Formulation B mg/capsule

(a) Ingrédient actif 250

(b) Lactose B.P. 143

(c) Amidon-glycolate de sodium 25

(d) Stéarate de magnésium 2

420

Formulation C mg/capsule

(a) Ingrédient actif 250

(b) Macrogol -4000 B.P. 350

25

30

35

600

f?

On prépare les capsules en faisant fondre le

Macrogol 4000 B.P./ en dispersant l'ingrédient actif dans la masse fondue et en introduisant la masse fondue dans une capsule de gélatine dure en deux parties.

g Formulation E (Capsule à Libération Réglée)

On prépare la formulation suivante de capsule à

libération réglée en extrudant les ingrédients (a)/ (b) et

(c) au moyen d'une extrudeuse/ puis en nodulisant l'extrudat sous forme sphérique "et en le séchant. On revêt ensuite

10 les pastilles séchées avec une membrane (d) régulatrice de libération et on en remplit une capsule de gélatine dure en deux parties.

mg/capsule

(a) Ingrédient actif 250

15 (b) Cellulose microcristalline 125

(c) Lactose B.P. 125

(d) Ethyl-cellulose 13

513

Exemple 52 : Solution à Usage Ophtalmique

20 Ingrédient actif 0/5

Chlorure de sodium/ qualité analytique 0/9 g

Thiomersal 0/001 g

Eau purifiée/ jusqu'à 100 ml pH ajusté à 7/5

25 Exemple 53 : Formulation Injectable

Ingrédient actif 0/200 g

Tampon phosphate stérile apyrogène

(pH 9/0)/ jusqu'à 10 ml

On dissout l'ingrédient actif dans la majeure 30 partie du tampon phosphate (35-40°C)/ puis on complète au volume et filtre à travers un filtre microporeux stérile en introduisant dans un flacon en verre ambré de 10 ml (type 1) que l'on bouche au moyen d'éléments d'obturation stérile et de capuchons protecteurs.

35 Exemple 54 : Injection Intramusculaire

Ingrédient actif 0/20 g

Alcool benzylique 0/10 g

Glycofurol 75 1,45 g /j

Eau pour injections, q.s. jusqu'à 3,00 ml

/M

a

On dissout l'ingrédient actif dans le glycofurol. On ajoute ensuite l'alcool benzylique et le dissout et on ajoute de l'eau jusqu'à 3 ml. On filtre ensuite le mélange à travers un filtre microporeux stérile et l'introduit dans une ampoule en verre ambré de 3 ml (type 1) stérile que l'on scelle.

Exemple 55 : Suspension dans un Sirop

Ingrédient actif 0,25 g

Solution de sorbitol 1,50 g

Glycérol 2,00 g

Cellulose dispersible 0,0075 g

Benzoate de sodium - 0,005 g

Arôme, Pêche 17.42.3169 0,0125 ml

Eau purifiée, q.s. jusqu'à 5,00 ml

On dissout le benzoate de sodium dans une partie de l'eau purifiée et on ajoute la solution de sorbitol. On ajoute et disperse l'ingrédient actif. On disperse l'agent épaississant (cellulose dispersible) dans le glycérol. On mélange les deux dispersions et porte le tout au volume requis avec l'eau purifiée. On épaissit au besoin davantage la suspension,en la soumettant de plus à un cisaillement. Exemple 56 : Suppositoire mg/suppositoire Ingrédient actif (63 pm)* 250

Graisse dure, B.P.

(Witepsol H15 - Dynamit Nobel) 1700

1950

* .L'ingrédient actif est utilisé sous forme d'une poudre dont au moins 90 % des particules ont un diamètre de 63 pm ou moins.

On fait fondre le cinquième du Witepsol H15 dans une cuve à chemise de vapeur d'eau à une température de 45°C au maximum. On passe l'ingrédient actif au tamis de 200 pm et on l'ajoute à la base fondue tout en mélangeant, en utilisant un appareil de Silverson muni d'une tête coupante jusqu'à obtention d'une dispersion lisse. Tout en

54

maintenant le mélange à 45°C/ on ajoute le reste du Witepsol H15 à la suspension et on agite pour assurer un mélange homogène. On passe la totalité de la suspension à travers un tamis en acier inoxydable de 250 pm et/ tout en continuant à agiter/ on la laisse se refroidir jusqu'à 40°C. A une température de 38°C à 40°C/ on introduit 2,02 g du méange dans des moules en matière plastique appropriés. On laisse les suppositoires refroidir à la température ambiante.

Exemple 5 7 : Pessaires mg/pessaire

Ingrédient actif, 63 pm 250

Dextrose anhydre 380

Fécule de pomme de terre 363

Stéarate de magnésium 7

1000

On mélange directement les ingrédients ci-dessus et on prépare des pessaires par compression directe du mélange résultant.

Exemple 5 8 : Essais de Toxicité Antivirale et de

Biodisponibilité Détermination de l'Activité Anti-Herpesvirus Varicellae :

On évalue les effets inhibiteurs exercés par les composés sur la réplication de HVV (souche Oka) par une méthode ELISA (F..E. Berkowitz et M.J. Levin, Antimicrob. Agents and Chemother., 28: 207-210 (1985)) qui est modifié

comme suit. On fait débuter les infections en présence du méd cament/ et non avant l'addition du médicament. A la fin de l'incubation de trois jours du médicament et du virus avec les cellules non infectées (fibroblastes diploïdes humains souche MRC-5), on centrifuge les plaques à 96 alvéoles pen dant 5 minutes à 200 £ pour sédimenter les cellules détachées avant la fixation au glutaraldéhyde. Dans la présente épreuve ELISA/ on utilise comme second anticorps une IgG anti-humaine conjuguée à de la phosphatase alcaline. On détermine le taux de clivage du phosphate de p-nitrophényle

éo par la phosphatase alcaline liée en procédant d'une manière décrite par ailleurs (S.M. Tadepalli/ R.P. Quinn et D.R. Averett, Antimicrob. Agents and Chemother., 29: 93-98 (1986)). On utilise des cellules non infectées pour obte-5 nir des taux de réaction témoins que l'on retranche des taux obtenus lorsque le virus est présent. Cette épreuve convient pour détecter des virus engendrés dans des cultures ayant été initialement infectées par 15 à 3600 particules infectieuses par alvéole.

10 Détermination de l'Inhibition de la Croissance de Cellules de Mammifère Non Infectées

On évalue la capacité qu'ont les composés-candidats d'inhiber la croissance de cellules D98 (humaines) et de cellules L (murines) en dénombrant les cellules après 15 avoir exposé pendant trois jours un nombre déterminé de cellules à diverses dilutions du composé (J.L. Rideout/ T.A. Krenitsky/ G.W. Koszalka/ N.K. Cohn, E.Y. Chao, G.B. Elion/ V.S. Latter et R.B. Williams, J. Med. Chem., 25 : 1040-1044 (1982)). On compare ensuite le nombre de cellules 20 au nombre obtenu en l'absence du composé. On exécute la numération cellulaire soit par comptage direct des particules après trypsination de la monocouche, soit par détermination spectrophotométrique de la quantité de colorant vital absorbé par les cellules. Ces deux méthodes donnent 25 des résultats comparables.

Analyse des Résultats.

On calcule la concentration du composé qui correspond à 50 % des valeurs témoins (.CI^q), soit par interpolation directe sur des graphiques rapportant le logari-30 thme de la concentration du composé au pourcentage sur la base de la valeur témoin, soit par un programme d'ordinateur qui analyse les résultats selon le même algorithme. Dans ces calculs, on utilise les résultats qui se situent dans la fourchette de 20 % à 80 % du témoin.

Exemple

HW (CI50,

pM)

Toxicité (% du envers témoin les Cellules à 100yM)

Cellules

D-98

Cellules L

1

3

93

87

2

1

85

69

3

co •»»

o

96

72

4

6

107

97

5

1

50

50

6

3

61

47

ACV

20

100

50

(Acyclovir)

Détermination de la Biodisponibilité et Résultats

On administre le composé à deux rats Long-Evans par gavage au moyen d'un tube intragastrique, en une dose de 10 mg/kg de composé de l'Exemple 3 ou l'équivalent molaire des composés des Exemples 16/ 24 et 32. On place les animaux dans des cages métaboliques et on recueille les urines pendant les périodes de 0-24 heures et 24-48 heures consécutives à l'administration. On analyse les urines par chromatographie en phase liquide à haute performance à phases inversées. Les résultats sont exprimés par le pourcentage de dose récupéré dans l'urine en 48 heures sous forme de composé de l'Exemple 3.

Exemple % de dose

3 4,9/2,5

16 11,7

24 7,9

32 15,9

62-

Claims (9)

1. REVENDICATIONS 1. Procédé pour la préparation d'un composé de formule I(a)

   I(a)

   10

   15

   20

   dans laquelle R^ représente un halogène, un groupe alcoxy en C^-C^, un groupe amino qui est substitué par un ou deux substituants choisis parmi les groupes alkyle en C2_-C5' les groupes alkyle en substitués par un ou deux atomes de fluor et les groupes cycloalkyle en C^-C^, ou le terme amino d'un cycle contenant 4-7 atomes de carbone et facultativement une double liaison et/ou un autre atome d'azote, et R2 représente l'hydrogène, un halogène ou un groupe amino, à condition que si R2 est l'hydrogène, R^ ne représente alors pas le chlore ni un groupe méthoxy, méthylamino, éthylamino, diméthylamino, pipéridino ou pyrrolidino, et que si R2 est un groupe amino, ne représente alors pas le chlore ni le groupe méthylamino ; et de ses sels physio-logiquement acceptables autres que le 2',3',5'-triacétate et le dérivé 2' , 3',5'-tribenzylique du composé de formule I(a) dans lequel R^ est le chlore ou le fluor lorsque R2 est le chlore, le fluor, l'hydrogène ou un groupe amino, caractérisé en ce qu'il consiste soit,

   A. à faire réagir un composé de formule (II)

   N :

   (II)

   di

   dans laquelle et R2 sont tels que définis ci-dessus, avec un composé de formule (III)

   dans laquelle X représente une base pyrimidique ou purique (autre qu'un composé de formule (II)) ; soit B. à faire réagir un composé de formule (IV)

   dans laquelle Z est un groupe partant et R2 est tel que défini ci-dessus, avec un composé capable d'introduire le groupe nécessaire à la position 6 ; et, facultativement, par la suite ou en même temps, lorsque le composé résultant est un composé de formule I(a), à le convertir en l'un de ses dérivés pharmaceutiquement acceptables, ou, lorsque le composé résultant est un dérivé pharmaceutiquement acceptable, à le convertir en un autre dérivé pharmaceutiquement acceptable ou en un composé de formule I(a).
2. 2. Procédé pour la préparation d'un dérivé pharmaceutiquement acceptable d'un composé de formule I(b)

   (III)

   (xv)

   CM

   £i

   t*

   dans laquelle représente un atome d'halogène, un groupe alcoxy en un groupe alcoxy en Ci-C2 substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, un groupe amino qui est substitué par un ou deux substituants choisis parmi les groupes alkyle en C^-C,-, les groupes alkyle en subs titués par un ou plusieurs atomes de fluor et les groupes cycloalkyle en C^-C^, ou le terme amino d'un cycle contenant 4-7 atomes de carbone et facultativement une double liaison et/ou un autre atome d'azote, et R2 représente l'hydrogène, un halogène 'ou un groupe amino, autre que le 2',3',5'-tri-acétate et le dérivé 2',3',5'-tribenzylique dans lesquels est le chlore ou le fluor lorsque R^ est le chlore, le fluor, l'hydrogène ou un groupe amino, caractérisé en ce qu'il consiste : (1) à préparer un composé de formule l(b), soit

   A. en faisant réagir un composé de formule (II)

   dans laquelle R^ et R2 sont tels que définis ci-dessus, avec un composé de formule (III)

   (II)

   H

   (III)

   OH

   dans laquelle X représente une base pyrimidique ou purique (autre qu'un composé de formule (II)) ; soit B. en faisant réagir un composé de formule (IV)

   (IV)

   OA

   dans laquelle Z est un groupe partant et R2 est tel que défini ci-dessus, avec un composé capable d'introduire le groupe nécessaire à la position 6 ; et (2) par la suite ou en même temps, lorsque le composé résultant est un com-5 posé de formule I(b), à le convertir en l'un de ses dérivés pharmaceutiquement acceptables, ou, lorsque le composé résultant est un dérivé pharmaceutiquement acceptable, à le convertir en un autre dérivé pharmaceutiquement acceptable d'un composé de formule I(b).

   10
3. 3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé

   en ce que le dérivé pharmaceutiquement acceptable est un ester choisi parmi les esters d'acides carboxyliques dont le fragment non carbonylé du groupement ester est un groupe, à chaîne droite ou ramifiée, alkyle, alcoxyalkyle, aralkyle, 15 aryloxyalkyle, aryle facultativement substitué par un ou plusieurs groupes halogéno, alkyle en ou alcoxy en

   C^-C^, nitro ou amino les sulfonates tels que les esters d'alkylsulfonyles ou d'alkylarylsulfonyles 7 les esters d'acides aminés ; et les esters mono-, di- et triphospho-20 riques.
4. 4. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que le dérivé pharmaceutiquement acceptable est un dérivé physiologiquement acceptable de la 9-B-D-arabino-furannosyl-6-méthoxy-9H-purine.

   25
5. 5. Procédé selon la revendication 2, caractérisé

   en ce que le dérivé pharmaceutiquement acceptable est un ester choisi parmi :

   la 9-(5-0-(4-méthylbenzoyl)-B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine,

   la 9-(5-0-(4-aminobenzoyl)-B-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine, et la 6-méthoxy-9-(2-0-pentanoyl-B-D-arabinofurannosyl)-9H-purine.
6. 6. Procédé pour la préparation d'une formulation pharmaceutique contenant un composé de formule (I)

   10

   15

   20

   di

   (d dans laquelle représente un atome d'halogène, un groupe alcoxy en Ci-C5' un groupe alcoxy en substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, un groupe amino qui est substitué par un ou deux substituants choisis parmi les groupes alkyle en Cj_-C5' les groupes alkyle en Cj_-C5 substitués par un ou plusieurs atomes de fluor et les groupes cycloalkyle en C^-C^, ou le terme amino d'un cycle contenant 4-7 atomes de carbone et facultativement une double liaison et/ou un autre atome d'azote, et R2 représente l'hydrogène, un halogène ou un groupe amino, caractérisé en ce qu'il consiste : (1) à préparer ledit composé de formule (I),

   soit

   A. en faisant réagir un composé de formule (II)

   A.

   ^ M

   (II)

   lî

   Qr dans laquelle et R2 sont tels que définis ci-dessus, avec un composé de formule (III)

   (III)

   dans laquelle X représente une base pyrimidique ou purique (autre qu'un composé de formule (II)) ; soit B. en faisant réagir un composé de formule (IV)

   (IV)

   dans laquelle Z est un groupe partant et R2 est tel que défini ci-dessus, avec un composé capable d'introduire le groupe nécessaire à la position 6, et, facultativement, par la suite ou en même temps, lorsque le composé résultant 10 -"est un .composé de formule (I), en le convertissant en l'un de ses dérivés pharmaceutiquement acceptables, ou, lorsque le composé résultant est un dérivé pharmaceutiquement acceptable, en le convertissant en un autre dérivé pharmaceutiquement acceptable ou en un composé de formule (I) ; et 15 (2) à mettre le composé résultant de formule (I) en association avec au moins un excipient pharmaceutique pour former ladite formulation pharmaceutique.'
7. 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le composé de formule (I) est la 9-B-D-arabino-20 furannosyl-6-méthoxy-9H-purine.

   v5

   éi

   5

   10
8. 8. Procédé selon la revendication 6/ caractérisé

   en ce que le composé de formule (I) est la 9-g-D-arabino-f urannosyl-6-diméthylamino-9H-purine.
9. 9. Procédé selon la revendication 6/ caractérisé

   en ce que le composé de formule (I) est choisi parmi : la 9-(5-0-(4-méthylbenzoyl)-3-D-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine /

   la 9-(5-0-(4-aminobenzoyl)-b-d-arabinofurannosyl)-6-méthoxy-9H-purine, et la 6-méthoxy-9-(2-O-pentanoyl-B-D-arabinofurannosyl)-9_H-purine.