MX2007014143A - Metodo para producir grasas o aceites. - Google Patents

Abstract

La presente invencion esta dirigida a mejorar la productividad de un metodo enzimatico para producir grasas o aceites esterificadas, transesterificadas o interesesterificadas. Especificamente, se describe un metodo que puede mejorar en gran medida la productividad de la esterificacion, transesterificacion o interesterificacion enzimaticas al purificar el aceite al sustrato, para extender la vida util de la enzima.

Description

son útjiles para la alcohólisis (intercambio de alcoholes enlazados a los esteres) para productos tales como biodiesel gli éridos parciales. Las lipasas pueden ser también utilizabas para catalizar reacciones de intercambio de acilo tales como la interesterificación (también conocida como transeáterificación) de sustratos de esteres mixtos para crear iiezclas únicas de triacilgliceroles con caracteristicas funcionales deseadas. Los biocatalizadores tales como lipasas son también atractivos debido a su uso bajo condiciones de operación leves y sus altos grados de selectividad. Los biocatálizadores también ofrecen rutas sintéticas que evitan la necesidad para productos químicos ambientalmente peligrosos . Las lipasas son útiles además para la fabricación de gliséridos de especialidad. Por ejemplo, las lipasas 1,3-especifiicas son útiles en la fabricación de 1, 3-diglicéridos, como se describe por ejemplo en la Patente de los Estados Unidos ¡No. 6,004, 611. La reacción de transesterificación se ha vuelto también una solución importante a una amenaza recientemente identificada para la salud humana: los ácidos grasos trans. Estos ácidos grasos trans eran muy deseados por sus caracteristicas funcionales en el uso en alimentos y han sido producidos a escala industrial mediante hidrogenación parcial de ace ites vegetales. De este modo, éstos han sido fácilmente disponibles y relativamente baratos por décadas. Actúalmente, los proveedores de productos alimenticios están buscando grasas para reemplazar el aceite vegetal parcialmente hidrogenado, preferentemente a precios comparable-s o más bajos. La transesterificación de grasas y aceites adecuadamente seleccionados puede proporcionar grasas para r ¡emplazar el aceite vegetal parcialmente hidrogenado. Si tal ;s grasas son producidas mediante transesterificación de grasas y aceites libres de ácidos grasos trans, los ácidos grasos trans estarán sustancialmente ausentes de la grasa trans esterificada . La selección apropiada de las composiciones de ácido graso de grasas iniciales y aceites proporc ionarán la funcionalidad adecuada en las grasas de reempla zo transesterificadas para el aceite parcialmente hidrogenado, ventajosamente sintetizado por la interésterificación catalizada por lipasa. La estabilidad de los biocatalizadores tales como las li ?asas es más convenientemente expresada en términos de la vida media, la cual es el tiempo después del cual la activic.ad inicial del catalizador ha disminuido hasta la mitad ce1 valor original. Diks, Rob M. M. , "Lipase stability in oil, " Lipid Technology, 14(1): 10-14 (2002). Otra manera de exp esar la estabilidad de la enzima es la productividad de la nzima, la cual es medida por la cantidad del producto por unidad de enzima (gramo de aceite producido/gramo de enzima) , durante la primera mitad de vida. Las vidas medias típicas de la lipasa en las reacciones de interesterificación son de siete dias. Ver, por ejemplo, Huang, Fang-Cheng y Ju, Yi-Hsu, "Interesterification of palm midfraction and stearic acid with Rhizopus arrhizus lipase immobilized on polypropylene, " Journal of the Chinese Institute of Chemical Engineers, 28(2): 73-78 (1997); Van der Padt, A. et al, "Synthesis of triacylglycerols . The crucial role of water activity control," Progress in Biotechnology, 8 (Biocatalysis in Non-Conventional Media): 557-62 (1992). Las vidas medias varían en gran medida dependiendo de las lipasas mismas. No obstante, las vidas medias variarían también dependiendo de la calidad de los sustratos. Cuando los biocatalizadores tales como las enzimas son utilizados, los componentes en la mezcla de sustrato pueden disminuir el tiempo de vida efectivo del catalizador. En operaciones continuas, la proporción del sustrato procesado a la enzima es muy grande, de modo que componentes menores del aceite pueden tener un efecto dañino acumulativo sobre la actividad enzimática. Varios compuestos de oxidación en el aceite, tales cromo los hidroperóxidos y los productos de oxidación secundarios (por ejemplo, aldehidos o cetonas), pueden provocar inactivación significativa de la lipasa en los aceites Ver, por ejemplo, Pirozzi, Domenico, "Improvement of lipase stability in the presence of commercial triglycerides, " European Journal of Lipid Science and Technology 105(10): 608-613 (2003); Gray, J. L, "Measurement of Lipid Oxidation: A Review," J. Amer. Oil Chem. Soc. 55: 539-546 (1978); Solicitud de Patente de los Estados Unidos Publicación No. 2005/0014237 Al, y publicaciones citadas en ésta, Los productos de oxidación incluyen especies oxidativas que inician las vias de reacción por radicales, auto-propagadas, u otras especies de oxigeno reactivas (tales como peróxidos, ozono, superóxido, etc.). Éstos y otros constituyentes que provocan o que surgen de la degradación de la grasa o el aceite pueden dar como resultado la degradación de la enzima. La presencia de agua y otras sustancias puede también influenciar fuertemente la actividad de las lipasas utilizadas en la transesterificación. Ver, por ejemplo, Jung, H. J. y Bauer, W., "Determination of process parameters and modeling of lipase-catalyzed transesterification in a fixed bed reactor," Chemical Engineering & Technology, 15(5): 341-8 (11992) . Algunos iones metálicos (Mg2+ y Fe2+) han sido también citados como inhibidores para algunas lipasas No obstante, los procesos y los factores causales por los cuales las lipasas se vuelven inactivas, no son completamente entendidos . I Se ha observado que utilizando diferentes lotes de la mislma retroalimentación en un aceite catalizado por lipasa, dio variaciones amplias en la vida media de la lipasa. Diks, Rob M. M. , "Lipase stability in oil," Lipid Technology, 14(1): 10-14 (2002). No se encontró ninguna relación entre la vida media de la lipasa y el PV del aceite o el valor de para-anisidina (PAV) . Además, no pudo ser establecida ninguna correlación entre los niveles de metal ¡hierro y cobre) , glicéridos polimerizados o fosfolipidos y la vida media de la lipasa. Una investigación hacia la causa de la pérdida de la actividad de la lipasa inmovilizada en la acidólisis del aceite de girasol altamente oleico, con ácido esteárico, determinó que los productos de oxidación incrementaron la velocidad de desactivación, pero la eliminación de los product¬os de oxidación de los aceites previene la pérdida de actividad. Nezu, T. et al., "The effect of lipids oxidation on the activity of interesterification of triglyceride by immobilized lipase," en Dev. Food Eng., 6th Proc. Int. Congr, Eng. Food, 591-3 (Yano, T. et al, eds., Blackie, Glasgow, 1994). Las lipasas inmovilizadas incubadas con aldehidos 2-insaturados (tipicamente formados como productos de oxidación secundaria en el rompimiento oxidativo de los aceites! perdieron su actividad catalítica. Los hidroperóxidos de ácido L.inoleico a niveles de PV>5 meq/kg provoca la pérdida de la actividad de lipasa, y la velocidad de inactivación de la enzima se incrementa conforme se incrementó el PV; el mecanismo de inactivación enzimática fue la generación de radicalbs libres en la enzima conforme se descomponían los peroxidbí Wang, Y. y Gordon, M. "Effect of lipid oxidation products on the transesterification activity of an immobilized lipase," Journal of Agricultural and Food Chemistry, 39(9): 1693-5 (1991). Cuando los lipidos oxidados fueron separados de una muestra de aceite de palma y fracciohados, se demostró que las fracciones que muestran altos grados de inactivación pudieran ser aislados, pero los compuestos inhibitorios no fueron identificados. Id. La disminución de la actividad de lipasa rápida durante reacciones continuas catalizadas por lipasa, es común . Ver, por ejemplo, Ferreira-Dias, S. et al. "Recovery of the activity of an i mobilized lipase after its use in fat transesterification, " Progress in Biotechnology, 15 (Stability and Stabilization of Biocatalysis) : 435-440 (1998) ; Diks, Rob M. M., "Lipase stability in oil," Lipid Technology, 74 (1) :10-14 (2002) . Han sido intentados varios métodos para eliminar la pérdida de actividad o para recuperar la actividad de la lipasa inactivada . a) La recuperación de la actividad de lipasa perdida en las reacciones de transesterificación fue llevada a cabo mediante el lavado de la preparación de lipasa con hexano y ajustando la actividad de agua de la preparación a 0.22. Ferreira-Dias, S. et al. "Recovery of the activity of an immobilized lipase after its use ín fat transes|terification, " Progress in Biotechnology, 15 (Stability and Stabilization of Biocatalysis) : 435-440 (1998). Aunque el mecanismo era desconocido, este tipo de recuperación de actividad es consistente con la pérdida de activicad provocada por la acumulación de compuestos inhibitorios tales como productos de oxidación de lipidos. Id. b) La reducción de la actividad del agua de un sustratlo de transesterificación (aceite de palma crudo/aceite de semilla de colsa desgomado) desde 280 ppm hasta 60 ppm fue acompañada por un incremento de la vida media de la lipasa inmovilizada desde 10 horas hasta 100 horas. Huang, Fang-Cheng and Ju, Yi-Hsu, "Interesterification of palm midfradtion and stearic acid with Rhizopus arrhizus lipase immobilized on polypropylene, " Journal of the Chinese Instituye of Chemical Engineers, 28(2):73-78 (1997). c) La vida media de la lipasa ha sido incrementada por la inmovilización de ciertas composiciones con lipasa. Por ejemplo, la vida media de la lipasa inmovilizada sobre silice de poro controlado se incrementó cinco veces cuando el PEG-1500 fue co-inmovilizado con la lipasa. Soares, C. M. F. et al., "Selection of stabilizing additive for lipase immobilization on controlled pore silica lipasa por medio de un pre-tratamiento del aceite sustrato.

La Patente Japonesa 08-140689 A2 describe el uso de la resina de intercambio iónico Duolite A-7 para tratar una mezcla de aceite de palma con esterato de etilo antes de la interesjterificación utilizando una lipasa de Rhizopus inmovilizada, para incrementar la vida media de 3 dias a 8 dias, Duolite A-7 es una resina de intercambio iónico que contierie grupos amino. La Patente Japonesa JP 08-140689 A2 tambié? describe el pre-tratamiento de los aceites sustrato con prDteinas o péptidos que contienen un gran número de residuos de aminoácidos básicos tales como histona, i protamijna, lisozima o polilisina. La Patente Japonesa JP 08-140689 A2 establece que se cree que los grupos amino reaccicnan con aldehidos o cetonas (productos de oxidación secundarios) para formar una base de Schiff; y que tales productos de oxidación secundarios se cree que son un factor estabil-dad de la enzima. h) La Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 2003/0054509 describe el uso de medios de purificación no modificados (por ejemplo, gel de silice) para incrementar la vida media enzimática, La Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 2005/0014237 describe el uso de los proceso de desodorización para incrementar la vida media enzimát:?ca. Por lo tanto, existe una necesidad de soluciones largamente detectada en la técnica de la catálisis enzimática para es>ta pérdida de actividad. Ver también Diks, Rob M. M., "Lipase stability in oil," Lipid Technology, 14(1): 10-14 (2002) ; Wang, Y. y Gordon, M. H., "Effect of lipid oxidation product:s on the transesterification activity of an immobil-ized lipase," Journal of Agricultural and Food Chemistry, 39(9): 1693-5 (1991). El periodo de tiempo sobre el cual la lipasa conserva su actividad enzimática es una consideración de costo importante en la interesterificación catalizada por lipasa. La pérdida de actividad enzimática efectiva es dañina para el procesamiento industrial, debido al costo de reemplazo de la enzima y del tiempo de producción necesario para cambiar enzimas, cambiar columnas, y estabilizar una nueva columna. De este modo, la extensión de I la vide. media de la enzima es extremadamente critica para la comercialización exitosa de la interesterificación enzimática. Esta necesidad largamente detectada es una barrera primaria para la expansión de las reacciones catalizadas por enzimas, para la producción de productos químicos de utilidad o "a granel". Aunque la mayoria de los mecanismos de la inactivación de la lipasa y su prevención son pobremente comprenjdidos a la fecha, el presente procedimiento describe una solución efectiva para prevenir la degradación de la lipasa e incrementar su productividad y vida media.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Las modalidades de la invención están dirigidas a diversojs métodos para producir grasas o aceites, al poner en contacto un sustrato inicial que comprende uno o más glicéridos, con uno o más tipos de medios de purificación para generar un sustrato purificado, y poner en contacto el sustrat purificado con lipasa para efectuar la esterificación, la interesterificación y la transesfterificación creando las grasas o los aceites. En las j diversajs modalidades de la invención, el medio o medios de purificación pueden ser uno o más de los aminoácidos, péptidos, polipéptidos o proteinas. Los aminoácidos, péptidos, polipéptidos o proteinas pueden ser recubiertos sobre un portador de soporte, con lo cual se forma un medio de purificación o el medio utilizado en los métodos de la invencípn. En una modalidad de la invención, la proteina vegetal es utilizada como un medio de purificación. De este modo, una modalidad de la invención está dirigida a un método para producir grasas o aceites que comprenden: (a) poner en contacto un sustrato inicial que incluye uno o más glicéri'dos, con uno más tipos de proteina vegetal para generar un sustrato purificado; y (b) poner en contacto el sustrato purificado con la lipasa para efectuar la esterificación, la interesterificación o la transesterificación creando las grasas o los aceites. En diversas modalidades de la invención, la proteina vegetal puede ser una proteina de soya, o una proteina vegetal texturizada tal como una proteina de soya texturizada. En otra modalidad más de la invención, uno o más aminoácidos son recubiertos sobre uno o más tipos de medios de purificación. De este modo, una modalidad de la invención está dirigida a un método para producir grasas o aceites que comprende: (a) poner en contacto un sustrato inicial que comprende uno o más glicéridos con uno o más tipos de medios de pur:-ficación para generar un sustrato purificado; y (b) poner en contacto el sustrato purificado con lipasa para efectuar la esterificación, interesterificación o transesterificación creando las grasas o los aceites; en donde uno o más aminoácidos son recubiertos sobre uno o más tipos ce medios de purificación. En diversas modalidades de la invención, uno o más aminoácidos pueden ser cualesquiera de arginina, lisina, histidina y/o cisteina. En otra modalidad más de la invención, uno o más péptidcjs, polipéptidos y/o proteinas ("material proteico") son recubiertos sobre uno o más tipos de medios de purificación. De este modo, una modalidad de la invención está dirigida a un método para producir grasas o aceites que compre?den: (a) poner en contacto un sustrato inicial que incluye uno o más glicéridos con uno o más tipos de medios de purificación para generar un sustrato purificado; y (b) poner en contacto el sustrato purificado con la lipasa para efectuar la esterificación, interesterificación o transesterificación creando las grasas o los aceites; en donde uno o más péptidos, polipéptidos o proteinas (uno o más "materi-ales proteicos") son recubiertos sobre uno o más tipos de medios de purificación. La vida media de la actividad enzimática de la lipasa puede ser más de aproximadamente 2.5 mayor que la vida media de la actividad enzimática que resulta1 de poner en contacto la lipasa con el sustrato i inicial . En otra modalidad adicional, la invención está dirigida al uso de una proteina como un medio de purifiqación. De este modo, una modalidad de la invención está dirigida a un método para producir grasas o aceites que incluye (a) poner en contacto un sustrato inicial que incluye uno o más glicéridos con una o más proteinas para generar un sustrato purificado; y (b) poner en contacto el sustrato purificado con la lipasa para efectuar la esterificación, la interesterificación o la transesterificación creando las grasas o los aceites. La vida media de la actividad enzimática de la lipasa puede ser más de aproximadamente 2.5 veces mayor que la vida media de la actividad enzimática que resulta de poner en contacto la lipasa con el sustrato inicial En otra modalidad adicional, la invención está dirigida al uso de una proteina texturizada como un medio de purificación. De este modo, una modalidad de la invención está dirigida a un método para producir grasas o aceites que incluye: (a) poner en contacto un sustrato inicial que comprende uno o más glicéridos, con uno o más tipos de proteina texturizada para generar un sustrato purificado; y (b) poner en contacto el sustrato purificado con la lipasa para efectuar la esterificación, la interesterificación o la transes'terificación, creando las grasas o los aceites. ! En varias modalidades de la invención, los métodos para prtoducir las grasas o los aceites pueden también incluir (c) el monitoreo de la actividad enzimática mediante la medición de una o más propiedades físicas de las grasas o los aceites después de haberse puesto en contacto con la lipasa; (d) ajustar la duración del tiempo para el cual el sustrato purificado hace contacto con la lipasa, o ajustar la temperatura del sustrato inicial, el sustrato purificado, uno o más tipos de medios de purificación o la lipasa en respuesta a un cambio en la actividad enzimática, para producir grasas o aceites que tienen una proporción incrementada sustancialmente uniforme de esterificación, interésterificación o transesterificación con relación al sustrato inicial; y/o (e) ajustar la cantidad y tipo de uno o más tipos de medios de purificación en respuesta a los cambios en las propiedades físicas de las grasas o los aceites para incrementar la productividad enzimática de la lipasa. Una o más propiedades físicas pueden incluir la temperatura del punto de goteo de Mettler de las grasas o aceites y/o el perfil del contenido de grasa sólida de las grasas o aceites. En los métodos de la invención, el sustrato inicial puede también incluir cualesquiera ácidos grasos libres, alcoholes monohidroxilicos, alcoholes polihidroxilicos, ésteresj y combinaciones de los mismos. ! Uno o más glicéridos utilizados en los métodos de la invención pueden ser cualquiera de i) grasa de mantequilla, manteca de cacao, sustitutos de manteca de cacao, manteca de illipe, manteca de coco, grasa de leche, grasa de mowrah, manteca de phulwara, grasa de sal, grasa de shea, debo de borneo, manteca, lanolina, cebo de carne, cebo de carrilero, cebo, grasa animal, aceite de cañóla, aceite de ricino, aceite de coco, aceite de cilantro, aceite de maiz, aceite de semilla de algodón, aceite de avellana, aceite de semilla de henequén, aceite de jatrofa, aceite de semilla de lino, ceite de hueso de mango, aceite de espuma de salvia, aceite de mostaza, aceite de pata de vaca, aceite de oliva, aceite de palma, aceite de semilla de palma, aceite de cacahué te, aceite de semilla de colsa, aceite de salvado de arroz, aceite de cártamo, aceite de sasanqua, manteca de shea, ceite de frijol de soya, aceite de semilla de girasol, aceite del subproducto de la producción de pulpa química de madera, aceite de tsubaki, aceites vegetales, aceites marinos que pr.edén ser convertidos a grasas plásticas, aceites marino: que pueden ser convertidos a grasas sólidas, aceite de sáb Jo , aceite de pez vela, aceite de higado de bacalao, aceite de áspero anaranjado, aceite de pile herd, aceite de sardin. , aceites de ballena, aceites de arengue, 1,3-dipalmi toil-2-monooleina (POP), 1 (3) -palmitoil-3 (1) -estearc il-2-monooleina (POSt) , 1, 3-distearoil-2-monooleina (StOSt) , triglicérido, diglicérido, monoglicérido, trigli érido de ácido behénico, trioleina, tripalmitina, triste-, riña, oleina de palma, estearina de palma, oleína de semill de palma, estearina de semilla de palma, trigliceridos de ácidos grasos de cadena media, o combinaciones de los mismos; ii) aceites parcialmente hidrogenados procesados de (i) ; iii) aceites completamente hidrogenados procesados de (i) ; o iv) aceites fraccionados de (i) • El sustrato inicial utilizado en los métodos de la invención puede también incluir esteres. Los esteres pueden ser cualquiera de los esteres de cera, esteres de alquilo, esteres de metilo, esteres de etilo, esteres de isopropilo, esteres de octadecilo, esteres de arilo, esteres de propilenglicol, esteres de etilenglicol, esteres de 1,2-propanodiol, esteres de 1, 3-propanodiol, y combinaciones de los mismos. Los esteres pueden ser formados a partir de la esterificación o transesterificación de los alcoholes monohidroxilicos o alcoholes polihidroxilicos . Los alcoholes monohidroxilicos o los alcoholes polihidroxilicos pueden ser alcoholes primarios, secundarios o terciarios de compuestos de cadena anular, lineal o ramificada. Los alcoholes monohidroxilicos pueden ser cualquiera de alcohol metílico, alcohol isopropilico, alcohol áulico, etanol, propanol, n-butanol|, iso-butanol, sec-butanol, ter-butanol, n-pentanol, iso-pentanol, n-hexanol o alcohol octadecilico. Los i alcoholes polihidroxilicos pueden ser cualquiera de glicerol, propilenglicol, etilenglicol, 1, 2-propanodiol o 1,3-propanodiol . ' El sustrato inicial utilizado en los métodos de la invencíón puede también tener alcoholes monohidroxilicos primarios, secundarios o terciarios de compuestos de cadena anular lineal o ramificada. Los alcoholes monohidroxilicos pueden ser cualquiera de alcohol metílico, alcohol isopropilico, alcohol áulico, etanol, propanol, n-butanol, iso-butanol, sec-butanol, ter-butanol, n-pentanol, iso-pentano1, n-hexanol o alcohol octadecilico . El sustrato inicial utilizado en los métodos de la invención puede también tener alcoholes polihidroxilicos primarios, secundarios o terciarios de compuestos de cadena anular, lineal o ramificada. Los alcoholes polihidroxilicos pueden ser cualquiera de glicerol, propilenglicol, etilengiicol, 1, 2-propanodiol o 1, 3-propanodiol . El sustrato inicial utilizado en los métodos de la invención puede tener uno o más ácidos grasos que son saturados, insaturados o poliinsaturados. Uno o más ácidos grasos pueden tener cadenas de carbono de aproximadamente 4 a aproxirradámente 22 carbonos de longitud. Los ácidos grasos pueden ser cualquiera de ácido palmitico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico, ácido linolénico, ácido araquidóónico, ácido erúcico, ácido caproico, ácido caprilico, ácido cáprico, ácido láurico, ácido miristico, ácido eicosar. entaenoico (EPA) , ácido docosahexaenoico (DHA) , ácido 5-eicos enoico, ácido butírico, ácido ?-linolénico o ácido linolei co conjugado.

En modalidades que utilizan los métodos de la invención, uno o más tipos de medios de purificación y la lipasa son empaquetados en una o más columnas. Las columnas pueden ser columnas forradas en las cuales es regulada la temperatura del sustrato inicial, el sustrato purificado, uno o más tipos de medios de purificación o la lipasa. En otras modalidades que utilizan los métodos de la invención, el sustrato purificado puede ser preparado al mezclar el sustrato inicial con uno o más tipos de medios de purificación en un tanque para una reacción de purificación de suspensión por lotes o el mezclado del sustrato inicial en una serie de tanques para una serie de reacciones de purificación de suspensión por lotes. El sustrato purificado puede se separado de uno o más tipos de medios de purific¡ación via la filtración, centrifugación o concentración, antes de hacer reaccionar el sustrato purificado con la lipasa. El sustrato purificado puede ser luego mezclado con la lipasa en un tanque para una reacción en suspensión por lotes, o haciendo fluir el sustrato purificado a través de una columna que contiene la lipasa. I En otras modalidades adicionales de los métodos de la invención, un lecho de uno o más tipos de medios de purificación es colocado sobre un lecho de la lipasa dentro de una columna. La columna puede ser una columna cerrada en la cual la temperatura del sustrato inicial, el sustrato purificado, uno o más tipos de medios de purificación o la lipasa es regulada. La lipasa utilizada en los métodos de la invención puede ssr obtenida a partir de una linea celular eucariótica o procariótica cultivada. La lipasa puede ser una lipasa 1, 3-selectiva o una lipasa no selectiva. Las grasas o aceites producidos pueden ser 1, 3-diglicéridos . En modalidades de la invención, uno o más glicéridos utilizados en los métodos de la invención pueden ser aceite de soya parcialmente hidrogenado, aceite de maiz parcialmente hidrogenado, aceite de semilla de algodón parcialmente hidrogenado, aceite de semilla de frijol de soya complet amenté hidrogenado, aceite de maiz completamente hidrogenado, y/o aceite de semilla de algodón completamente hidrogenado . En otras modalidades de la invención, uno o más glicéridos utilizados en los métodos de la invención pueden ser aceite de palma parcialmente hidrogenado, aceite de semilla de palma parcialmente hidrogenado, aceite de palma complet¡amenté hidrogenado, aceite de semilla de palma completamenté hidrogenado, aceite de palma fraccionado, aceite de semilla de palma fraccionado, aceite de palma parcialmente hidrogenado fraccionado, y/o aceite de semilla de palma parcialmente hidrogenado, fraccionado.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 muestra el ajuste de la velocidad de bombeo como una función del tiempo de corrida para la lipasa expuesta al sustrato no tratado (circuios abiertos) , el sustrat 0 tratado con arginina granular (circuios cerrados) o el sustrato tratado con silice recubierta con arginina (diamarites cerrados) . 1 La Figura 2 muestra el ajuste de la velocidad de bombeo como una función del tiempo de corrida para la lipasa expuesta al sustrato tratado con silice recubierta con arginina (diamantes cerrados), silice recubierta con lisina (circuíos abiertos) , silice recubierta con histidina (triángulos cerrados) , y silice recubierta con cisteina (estrel-las ) .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN El presente procedimiento se refiere al incremento de la productividad o la vida media enzimática de las enzimas que catalizan la esterificación, interesterificación o transesterificación. En particular, el presente procedimiento se refiere a la eliminación de un sustrato inicial de los constituyentes que provocan la degradación de la lipé.sa. Tales constituyentes pueden provocar o surgir de la degradación de la grasa o aceite, a partir del manejo o procesamiento del sustrato, o de otras causas. Tales constifluyentes pueden ser removidos por tratamiento del sustrato inicial con un medio de purificación antes del contacto con la lipasa. El medio de purificación puede ser uno o más aminoácidos, péptidos, polipéptidos o proteinas, que son mantenidos separados de la enzima. Los aminoácidos, péptidos, polipéptidos o proteinas pueden ser recubiertos sobre un portador de soporte sólido via la absorción, adsorción, enlaces covalentes, enlaces iónicos o enlaces de hidrógeno, El tratamiento de los sustratos con aminoácidos es ventajeaso sobre el uso de las sustancias convencionales que contienen grupo amino, tales como aquellas descritas en la Patente Japonesa JP 08-140689 A2. La ventaja de utilizar aminoácidos es debido a la mayor libertad estérica de los aminoácidos libres. Los grupos amino de las sustancias convencionales que contienen grupos amino, son enlazados y menos fácilmente disponibles para reaccionar con los i produetjos de oxidación secundarios. El presente procedimiento también se refiere a la prueba de los aminoácidos para su habilidad de ser utilizados para purificar el sustrato inicial e incrementar la vida media de las enzimas. Un aminoácido que es crucial para la inactivación de una enzima, puede ser especificamente selecci-onado mediante experimentos para la protección de una enzima Por ejemplo, la cisteina puede ser utilizada para la enzima cuya inactivación está relacionada a la oxidación del grupo sulfhidrilo. La desnaturalización de las cadenas laterales de las enzimas, especialmente en los sitios activos, se cree que es una causa de la pérdida de actividad enzimática. La desnaturalización puede ser provocada por reacciones entre las cadenas laterales de aminoácidos sobre la enzima y los constitjuyentes de impureza del sustrato que provocan la degradación de la enzima. No obstante, diferentes enzimas tienen diferentes cadenas laterales de aminoácidos involucradas en la desnaturalización de la enzima. Por lo tanto, el presente procedimiento contempla la selección de aminoácidos, péptidos, polipéptidos o proteinas por su habilidad para reaccionar con los constituyentes de impurezas de sustirato aislados, y por lo tanto sirven como un medio de purificlación del sustrato inicial, para incrementar la vida i media ánzimática. Tal selección puede ser también realizada I con el | sustrato inicial que contiene los constituyentes de impureza del sustrato. Alternativamente, el presente procedimiento contempla el uso de aminoácidos o péptidos o polipéptidos para la purificación inicial del sustrato donde se sabe que uno o más residuos de aminoácidos particulares son propensos a reaccionar con las impurezas del sustrato donde las reacciones dan como resultado la inactivación de la enzima.! De este modo, los aminoácidos, péptidos o polipéptidos pueden tener un efecto protector para las enzimas, mediante funcionamiento como una "trampa" para reaccionar con y remover los compuestos de inactivación en los sustratos, previniendo que las enzimas sean desnaturalizadas por los compuestos. El atrapamiento de los compuestos de inactivación puede también proporcionar un medio para concentrar los compuestos de inactivación, para la recuperación y uso, tal como el uso como inactivadores selectivos de enzima. Los aminoácidos consisten de un grupo amino y un grupo e;arboxilo, ambos unidos a un átomo de carbono, que es llamado el carbono alfa. El carbono alfa es tipicamente adicionalmente enlazado a un hidrógeno y un grupo R, denominado como cadena lateral. No obstante, el carbono alfa puede también ser enlazado a dos grupos R. Las cadenas laterales pueden variar en tamaño, forma, carga, capacidad de enlace al hidrógeno y reactividad química. Las cadenas laterales pueden ser apolar, polares, cargadas o no cargadas.

Algunoá aminoácidos tienen cadenas laterales básicas con más i de un! grupo amino. Los ejemplos de tales aminoácidos incluyen lisina, arginina e histidina. La asparagina y la glutamina tienen cadenas laterales amida. La cisteina y la metionina tienen cadena lateral que contiene azufre. El grupo amino (enlazado al carbono alfa, o parte de la cadena lateral del grupo R) puede ser un grupo amino primario, secundario o terciario. Cualquier aminoácido puede ser utilizado de acuerdo al presente procedimiento, incluyendo aminoácidos artificiales e isoméricos. Excepto para el uso en el contexto de un residuo que es parte de un péptido, polipéptido o proteina, "aminoácido" como se utiliza en la presente se refiere a un aminoácido no enlazado a otros aminoácidos via un enlace peptidico (o via un enlace amida) . Excepto para el uso en el contexto de los residuos que son parte de un péptido, polipéptido o proteina, "uno o más aminoácidos" como se utilizan en la presente, se refieren a uno o más tipos de aminoácidos, en donde los aminoácidos no están enlazados uno al otrc via un enlace peptidico (o via un enlace amida) . Los péptidcs, polipéptidos y proteinas contienen todos más de un aminoácido covalentemente enlazado a otro más a través de enlaces amida (-NH-C (0) CHR-, donde R es el grupo R enlazado I al carbono alfa) . Los péptidos y polipéptidos pueden estar comprendidos de los mismos o diferentes tipos de residuos de aminoácidos (por ejemplo, los aminoácidos que tienen los mismos ' o diferentes tipos de grupos R enlazados al carbono alfa) . Los ejemplos no limitantes de aminoácidos útiles de i acuerdó a la presente, incluyen alanina, valina, leucina, isoleusina, prolina, fenilalanina, triptofano, metionina, glicina, serina, treonina, cisteina, tirosina, asparagina, glutamina, ácido aspártico, ácido glutámico, lisina, arginina, histidina, ácido 2-aminoadipico, ácido 3-aminoadipico, beta-alanina, ácido 2-aminobutirico, ácido 4-aminobUjtirico, ácido 6-aminocaproico, ácido 2-aminohebtanoico, ácido 2-aminoisobutirico, ácido 3-aminoisobutirico, ácido 2-aminopimélico, ácido 2,4-diaminobutirico, desmosina, ácido 2 , 2 ' -diaminopimélico, ácido 2, 3-diaminopropiónico, N-etilglicina, N-etilasparagina, hidroxilisina, alohidroxilisina, 3-hidroxiprolina, 4-hidroxiprolina, isodesmosina, alo-isoleucina, N-metilglicina, N-metilisoleucina, 6-N-metil-lisina, N-metilvalina; norvalijna, norleucina y ornitina. Los aminoácidos pueden ser del estereoisómero levorrotatorio convencional, o del estereoisómero dextrorrotatorio . En una modalidad preferida, el aminjoácido es arginina, lisina, histidina o cisteina. Como se utiliza en la presente, el término "material proteico" se utiliza aqui para referirse a y abarcar los péptidos, polipéptidos y proteinas. Por ejemplo, el térpjtino "uno o más materiales proteicos" está destinado a referirse a uno o más péptidos, polipéptidos y/o proteinas. Otro aspecto más del presente procedimiento son los aminoácidos, péptidos, polipéptidos o proteinas recubiertos sobre portadores de soporte, para incrementar el área de la superficie de contacto. Los aminoácidos no son solubles en aceite y no pueden ser dispersados bien en el sustrato aceitos o para la reacción con las impurezas de inactivación en el aceite sustrato. Los aminoácidos no son tampoco materiales porosos. El área superficial grande es benéfica para un contacto eficiente entre los aminoácidos y las impurezas. Otra ventaja más de utilizar los portadores de soporte es el costo. Los portadores de soporte son usualmepte más baratos que los aminoácidos. Como se utiliza en la presente, "recubierto" se refiere a un recubrimiento que r sulta de mezclar, adsorber, absorber, enlazar covalentemente, enlazar con hidrógeno o asociar iónicamente los aminoácidos, péptidos, polipéptidos o proteinas a los portadores de soporte. Los ejemplos no limitantes de portadores de soporte incluyen carbón activado, carbón de huya activado, carbón de madera activado, carbón de turba activado, carbón activado de cascara de coco, minerales naturales, minerales procesados, montmorillonita, atapulgita, bentonita, paligorskita, tierra de Ful -er, diatomita, esmectita, hormita, arena de cuarzo, piedra caliza, kaolin, arcilla de bola, talco, pirofilita, perlita , silice, silicato de sodio, hidrogel de silice, gel de si -ice, silice ahumada, silice precipitada, silice coloida1, silice dialitica, materiales fibrosos, celulosa, esteres de celulosa, éteres de celulosa, celulosa microcr istalina; alumina, zeolita, almidones, tamices moleculares, lipasa inmovilizada previamente utilizada, tierra pe diatomeas, resina de intercambio iónico, resina de cromatografía de extrusión de tamaño, resinas quelantes, resinas quirales, ceniza de cascarilla de arroz, silice de fase inversa, y arcillas de blanqueo. El medio de purificación puede ser resinoso, granulado, particulado, membranpso o fibroso. Preferentemente, el soporte sólido es relativamente I barato jy tiene un área superficial grande. Los ejemplos no limitantes de tales soportes incluyen carbones activados, minerales naturales (tales como arcillas) , minerales procesados (tales como arcillas activadas con ácido) , diatomita, kaolin, talco, perlita, diversos productos de silice, alumina, zeolita, almidones, tamices moleculares, arena de cuarzo, piedra caliza, materiales fibrosos (tales como celulosa o celulosa microcristalina) , tierra de diatomeas, ceniza de cascarilla de arroz y resinas de intercambio iónico. El presente procedimiento también se refiere al uso de la proteina como un medio de purificación del sustrato. La protJeina puede ser proteina vegetal (por ejemplo, proteina de soya) , proteina vegetal texturizada (por ejemplo, proteina de soya texturizada) y/o otras proteinas, tales como proteina de suero de leche. En particular, el presente procedimiento está dirigido al uso de tal proteina para purificar el sustratjo inicial antes de poner en contacto el sustrato con la lipasa. En una modalidad del presente procedimiento, se utiliza proteina vegetal texturizada. La proteina vegetal texturizada tiene una textura rigida y una estructura abierta, expandida que proporciona mayor área superficial para interactuar con el aceite, confiriendo de este modo ventajas sustanciales sobre la proteina convencional en su uso para el tratamiento del aceite. En contraste, los grupos amino en los péptidos o proteiras convencionales (tales como aquellos descritos en la Patente Japonesa JP 08-140689 A2) son enlazados y no tan fácilmente disponibles para reaccionar con los productos de oxidación secundarios. En una matriz no acuosa, las fuerzas iónicas que mantienen juntas las proteinas tienden a ser al menos un orden de magnitud mayor que otras fuerzas (por ejemplo, las interacciones de van der Waals o los puentes de hidrógeno) . Las proteinas convencionales en una matriz no acuosa ' tienden a aglomerarse entre si y presentar el área superficial total más pequeña posible hacia el medio no acuoso. De este modo, las proteinas convencionales reducen al minimo los grupos amino disponibles para la interacción con los componentes aceitosos que se cree provocan inactivación de la enzima. Por lo tanto, los aminoácidos de proteínas convencionales son relativamente impenetrables (y no disponibles) a los aceites y otros medios no acuosos, y no reaccionan tan fácilmente con los componentes aceitosos que se cree provocan la inactivación de la enzima. Las proteinas utilizadas de acuerdo al presente procedimiento proporcionan ventajas sobre las proteinas convencionales. De acuerdo a una modalidad del presente procedimiento, la proteina vegetal texturizada marca TVP® disponible de Archer-Daniels-Midland Company de Decatur, Illinois es utilizada. El contenido de humedad de este producto es tipicamente de aproximadamente 6%. Las ventajas conferidas por el proceso de texturización incluyen la rigidez de las partículas y el área superficial incrementada con relación la proteina no texturizada. Otros tratami -entos tales como expansores de frijol de soya típicos y dispositivos de formación de collar pueden ser también utilizados para conferir las propiedades deseadas sobre la protei?a. El buen contacto entre el sustrato inicial y un medio de purificación de sustrato proteico, puede ser facilitlado mediante el uso de una proteina que es relativamente anhidra. De este modo, en una modalidad, el contenido de humedad de la proteina (por ejemplo, una proteina vegetal o una proteina vegetal texturizada) es menor de aprc'ximadamente 5%. Por ejemplo, el contenido de humedad de la proteina puede ser de aproximadamente 0% a aproximadamente 5%, o cualquier cantidad entre aproximadamente 0% y aproximadamente 5% (por ejemplo aproximadamente 0%, aproximadamente 1%, aproximadamente 2%, aproximadamente 3%, aproximadamente 4%, o aproximadamente 5%), c cualquier intervalo entre aproximadamente 0% y aproximadamente 5% (por ejemplo aproximadamente 2% a aproximadamente 4%). El intervalo de humedad de la proteina (por ejemplo una proteina vegetal o una proteina vegetal texturizada) puede ser controlado durante la fabricación para dar el contenido de humedad deseado. Alternativamente, el contenido de humedad de la proteina puede ser ajustado después de la fabricación, por ejemplo mediante secado al horno o el contacto con un solvente que elimina algo de la humedad de la proteina vegetal texturizada. La humedad puede ser removida mediante otros métodos conocidos, tales como mediante lavado con solventes anhidros. Por ejemplo, el contenido de humedad de la plroteina vegetal texturizada que contiene 6% de humedad puede áer reducido mediante lavado con etanol anhidro. La proteina vegetal texturizada lavada con etanol puede ser enjuagada con un solvente que tiene buena miscibilidad con los triacilgliceroles, tales como acetona, acetato de etilo o hexano. La composición típica del frijol de soya es aproximadamente 18% de aceite, aproximadamente 38% de proteina, aproximadamente 15% de carbohidrato insoluble (fibra dietética) , aproximadamente 15% de carbohidrato soluble (sucrosa, estaquiosa, rafinosa, otras) aproximadamente 14% de humedad, cenizas y otros. Ver, por e emplo >. Egbert, W. R., "Isolated soy protein: Technology, propert:Les, and applications, " ín Soybeans as Functional Foods aind Ingredients, 134-163 (KeShun L., ed., AOCS Press, Champaign, IL 2004). La proteina de soya textupzada es elaborada primeramente mediante la trituración de los fpjolefs de soya para mover la cascarilla y laminando los frijoles en hojuelas de grasa completa. El proceso de laminación desintegra la célula aceitosa, facilitando la extracción con solvente del aceite. Después de que el aceite ha sido extraído, el solvente es removido y las hojuelas son secadas, creando hojuelas de soya desgrasadas. Las hojuelas desgrasadas pueden ser luego trituradas para producir harina de soya, clasificada por tamaño para producir granos de soya o text rizada para producir proteina de soya texturizada tal como la proteina vegetal texturizada marca TVP® de Archer-Daniels-Midland Company. Las hojuelas desgrasadas pueden ser posteriormente procesadas para producir concentrados de proteinla de soya y proteina de soya aislada. Esto es logrado mediante la eliminación de los componentes carbohidratos del frijol de soya, seguido por secado. Las proteínas de soya son en general clasificadas en tres grupos: harinas de soya, concentrados de proteina de soya y proteinas de soya aisladas, con contenidos mínimos de proteina de aproximadamente 50%, aproximadamente 65% y aproximadamente 90% (base seca), respectivamente. Las harinas de soya son vendidas ya sea como polvos finos o granulos con un tamaño de particula en el intervalo de aproximadamente 0.2 a 5 mm. Estos productos pueden ser fabricados utilizando calor minimo para mantener la actividad enzimática inherente del frijol de soya, o tostados I ligeramente a altamente para reducir o eliminar las enzimas activas;. Las harinas de soya y los granulos han sido tradicionalmente utilizados como un ingrediente en la industria de la panadería. Los concentrados de proteina de soya son tradicionalmente fabricados utilizando alcohol acuoso para remover los azúcares solubles de las hojuelas de soya desgrasadas (harina de soya) . Este proceso da como resultado una prDteina con baja solubilidad y un producto que puede absorbeír agua pero que carece de la habilidad para gelificar o emulsificar la grasa. i i Los concentrados tradicionales lavados con alcohol i son utilizados para la fortificación de las proteinas de los alimentos, asi como en la fabricación de concentrados de proteina de soya texturizada. Los concentrados de proteina de soya funcionales se enlazan al agua, emulsifican la grasa y forman un gel después del calentamiento. Los concentrados funcionales de proteina de soya pueden ser producidos a partir de un concentrado lavado con alcohol, utilizando calor y homog=neización seguida por secado por roció; o producidos utilizando un proceso de lavado con agua a un pH ácido para eliminar los azúcares solubles, seguido por la neutralización, procesamiento térmico, homogeneización y secado por roció. Los concentrados de proteina de soya funcionales son ampliamente utilizados en la industria de la carne para enlazar el agua y emulsificar la grasa. Estas proteinas son también efectivas en la estabilización de sopas y salsas con alto contenido de grasa. Las proteinas de soya texturizadas o estructuradas pueden ser elaboradas a partir de harina de soya, concentrado de proteina de soya o proteina de soya aislada. La proteina vegetal texturizada marca TVP® es fabricada a través de la extrusión termoplástica de la harina de soya bajo calor húmedo y alta presión. El experto en la técnica está familiarizado con las variedades de proteina vegetal texturizada. El concentrado de proteina vegetal texturizada de soya es producido a partir de polvos de concentrado de proteinja de soya utilizando tecnología de fabricación similar a la proteina vegetal texturizada marca TVP® de Archer- Daniels-Midland Company. Los productos únicos de proteina texturizada pueden ser producidos utilizando combinaciones de proteina de soya u otros ingredientes proteicos en polvo tales como gluten de trigo en combinación con diversas fuentes de carbohidrato (por ejemplo almidones) . El experto en la materia está familiarizado con los productos texturilzados fabricados por la tecnología de extrusión termoplástica. Tales productos son distribuidos a todo lo largo del mundo en la forma anhidra. Estos productos son hidratados en agua o son soluciones saborizadas antes de utilizarse en los productos de carne procesada, análogos vegetarianos o utilizados solos en otros productos alimenticios acabados para simular carne. La tecnología de fibra centrifugada puede ser utilizada para producir una proteira texturizada fibrosa a partir de la proteina de soya aislada, con una estructura que se asemeja estrechamente a las fibras de la carne. Las proteinas de soya aisladas pueden ser fabricadas de hojuelas de soya desgrasadas mediante separación de la proteina de soya del carbohidrato soluble e insoluble del frijol de soya. ! La proteina de soya, adecuada para el uso en el presentie procedimiento, incluye la proteina vegetal texturilzada marcad TVP® Archer-Daniels-Midland Company (Decatiir, IL) . Tal proteina de soya es un producto de comercio que contiene nominalmente aproximadamente 53% de proteira, aproximadamente 3% de grasa, aproximadamente 18% de fibra dietética total, aproximadamente 30% de carbohidratos y aproximadamente 9% de humedad máxima. Este material es disponible en una variedad de texturas, tamaños y colores y es utilizado en la industria de los alimentos como un sustituto para la carne molida en frituras de carne, salsas, alimentos vegetarianos, mezcla de carne picada y otras aplicaciones en alimentos similares. Un producto preferido es el código de producto 165 840 de Archer-Daniels-Midland Company, que es suministrado como granulos amarillo pálido de aproximadamente 1.58 mm (1/16 de pulgada) de diámetro. La proteina de soya fabricada de acuerdo a otro proceso es también útil en el presente procedimiento. Por ejemplo , la proteina de soya puede también ser proteinas vegetales texturizadas descritas en las Patentes de los Estados) Unidos Nos. 4,103,034 y 4,153,738, que son incorporadas por referencia en la presente. ¡ El presente procedimiento también se refiere al uso de un medio de purificación no modificado para reducir dentro de un sustrato de grasa o aceite, los constituyentes que provocan o que surgen de la degradación de la grasa o el aceite. En consecuencia, el método de elaboración de un producto esterificado, transesterificado o interesterificado puede comprender además la puesta en contacto del sustrato inicial (grasas o aceites únicamente, o mezclado con componejntes adicionales tales como esteres, ácidos grasos libres o alcoholes) , con uno o más tipos de medios de purifiqación no modificados, con lo cual se produce un sustrato procesado con el medio de purificación. El medio de purificación puede contactar el sustrato en una o más columnas o en una o más reacciones tipo suspensión en lotes.

El medio de purificación preferentemente entran en contacto con el sustrato antes de que el sustrato entre en contacto con la enzima. Cualquiera de los medios de purificación y métodos de uso descritos en la Solicitud de Patente de los Estados Unidos Publicación No. 2003/0054509 Al pueden ser utilizaldos junto con el presente procedimiento, y son incorporados por referencia en la presente. La desodorización puede ser utilizada junto con las técnicas de purificación descritas por el presente procedimiento. Los ejemplos de procesos de desodorización incluyen las técnicas de desodorización descritas por O. L. Brekke, Deodorization, en Handbook of Soy Oil Processing and Utilization, Erickson, D. R. et al. eds., pp. 155-191 publicada por la American Soybean Association (Asociación Norteamericana de la Soya) y la American Oil Chemists' Society (Sociedad Norteamericana de Químicos de Aceite) ; o por Bailey's Industrial Oil and Fat Products, 5a ed., Vol. 2 (pp. 537-540) y Vol. 4 (pp. 339-390), Hui, Y. H. ed., publicada por John Wiley and Sons, Inc. La desodorización a temperatura ambiente puede también ser utilizada ya que ésta eliminará el aire del aceite, que provoca oxidación del aceite. Otros procesos de desodorización son descritos en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 6,172,248 6,511, 6 90; y en la Solicitud de Patente de los Estados Unidos Publicación No. 2005/0014237 Al. Todas estas técnicas de desodorización son incorporadas por referencia en la presente. En una modalidad preferida, los métodos de pretratamiento del presente procedimiento evitan la necesidad para l|a desodorización del sustrato antes de entrar en contacto con la lipasa. El presente procedimiento también contempla la prevenqión de la oxidación del aceite sustrato al mantener el aceite bajo gases inertes, tales como nitrógeno, dióxido de carbono o helio durante o después de la purificación. Los producidos esterificados, transesterificados o interes'terificados del presente procedimiento pueden también ser des,odorizados después del tratamiento con enzima. Para fines de la presente, el término "sustrato inicial!" incluye las grasas o aceites refinados o no refinados, blanqueados o no blanqueados y/o desodorizados o no desqdorizados . Las grasas o aceites pueden comprender una grasa f aceite simple, o combinaciones de diversas grasas o aceites1. De acuerdo al presente procedimiento, un sustrato puede ser reciclado (por ejemplo, desodorizado, puesto en contacto con el medio de purificación, esterificado, transesterificado o interesterificado más de una vez) . Por lo tanto, el experto en la técnica podria reconocer que el interésterificados una o más veces. El proceso de esterificación, transesterificación o interesterificación puede ser catalizado enzimáticamente, tal como con una lipasa, o quimicamente, o tal como con catalizadores alcalinos o de alcóxido. Los términos "sustrato procesado con medio de purifiqación" o "sustrato purificado" se refieren a un sustrato que ha sido puesto en contacto con uno o más medios de purificación al menos una vez. Antes de su contacto con la enzima, un sustrato inicial o un sustrato procesado con el medio de purificación puede ser mezclado con componentes adiciónales que incluyen esteres, ácidos grasos libres o alcoholes. Estos esteres, ácidos grasos libres o alcoholes que son agregados al sustrato inicial o al sustrato procesado con el medio de purificación, pueden hacer contacto opcionallmente con medios de purificación antes del contacto con la enzima .

Los términos "producto" y "producto esterificado, transesterificado o interesterificado" son utilizados interca-jribiablemente e incluyen las grasas esterificadas, transesterificadas o interesterificadas, aceites, triglicéridos, diglicéridos, monoglicéridos, alcoholes mono-o pol hidroxilicos o esteres de alcoholes mono- o polihidroxilicos producidos via el proceso enzimático de transesterificación o esterificación. El término "producto" como se utiliza en la presente, ha entrado en contacto al menos una vez con una enzima capaz de provocar esterificación, transesterificación o interesterificación. Un procucto que puede ser un fluido o sólido a temperatura ambiente, y es incrementado en su contenido proporcional de grasas, aceites, triglicéridos, diglicéridos, monoglicéridos, alcoholes mono- o polihidroxilicos o esteres de alcoholes mono- o polihidroxilicos, todos esterificados, transesterificados o interesterificados, como resultado de haber sido puestos en contacto con la enzima de transesterificación o esterificación. El producto esteriflicado, transesterificado o interesterificado va a ser distinguido de los contenidos del sustrato inicial o del sustrato procesado con el medio de purificación, en que el producto ha sufrido reacción enzimática adicional de transesterificación o esterificación. El presente procedimiento contempla el uso de cualquier combinación de desodorización, purificación y procesos de transesterificación o esterificación para la producción de aceites , grasas, triglicéridos, diglicéridos, monoglicéridos, alcoholes mono- o polihidroxilicos, o esteres de alcoholes mono- o polihidroxilicos. El término "enzima" como se utiliza en el método del présente procedimiento, incluye, pero no está limitado a las lipasas, como se discuten en la presente, o cualquier otra enzima capaz de provocar la modificación de las grasas o los aceites, tales como mediante esterificación, transesterificación o interesterificación del sustrato. Otras enzimas capaces de modificar las grasas y los aceites incluyen, . pero no están limitadas a oxidorreductasas, peroxicasas y esterasas. Las grasas y aceites están compuestos principalmente de triglicéridos constituidos de una cadena principal de glicerol en la cual los grupos hidroxilo están esterifjicados con ácidos carboxilicos. Mientras que las grasas sólidas tienden a ser formadas por triglicéridos que tienen ácidos grasos saturados, los triglicéridos con ácidos grasos insaturados tienden a ser líquidos (aceites) a temperatura ambiente. Los monoglicéridos y diglicéridos, que tienen respectivamente un éster de ácido graso y dos grupos alcohólicos o dos esteres de ácido graso y un grupo alcohólico, son también encontrados en las grasas y aceites a un grado menor que los triglicéridos. Los glicéridos útiles en el presente procedimiento incluyen moléculas de la fórmula química CH2RCHR1CH2R" en donde R, R1 y R" son alcoholes (OH) o grupos ácido graso dados por -OC(=0)R'", en donde R" ' es una cadena de carbono saturaca, insaturada o poliinsaturada, lineal o ramificada, con o sin sustituyentes. R, R', R" y los grupos ácido graso sobre un glicérido dado pueden ser iguales o diferentes. Los grupos ácido R, R' y R" pueden ser obtenidos a partir de cualqui era de los ácidos grasos libres descritos en la presentje. Los glicéridos para el presente procedimiento incluyen triglicéridos en los cuales R, R' y R" son todos grupos ácido graso, diglicéridos en los cuales dos de R, R1 y R" son grupos ácido graso y está presente un grupo funcional alcohol; los monoglicéridos en los cuales uno de R, R' y R" es un ¡grupo ácido graso y dos grupos funcionales alcohol están presentes; y el glicerol en el cual cada uno de R, R' y R" es | un grupo alcohol. Los glicéridos útiles como materiales iniciales del presente procedimiento incluyen grasas y aceites naturales, grasas y aceites procesados, grasas y aceites refinados, grasas y aceites refinados y blanqu ados, grasas y aceites refinados, blanqueados y desodor izados, grasas y aceites expulsados, y grasas y aceitesi sintéticos. El proceso puede también ser llevado a cabo en presencia de un sustrato en contacto con un solvente.

Un ejemplo es la miscela de aceite de soya, que es el producto de la extracción con solvente del aceite de soya y a menudo comprende aceite de soya crudo en hexano. Los e emplo s de grasas y aceites refinados se describen en la presenta y en Stauffer, C, Fats and Oils, Eagan Press, St. Paul, Minn. (1996). Los ejemplos de grasas y aceites procesados son grasas y aceites refinados, refinados y blanqueados, hidrogenados y fraccionados. Los términos "grupos ácido graso" o "grupos ácido" se refieren ambos a los grupos químicos dados por -OC(=0)R"'.

Tales grupos ácido graso" o "grupos ácido" están conectados al resto del glicérido via un enlace covalente al átomo de oxigeno que está unido de manera simple al carbono carbonilico. En contraste, los términos "ácido graso" o "ácido graso libre" se refieren ambos a HOC(=0)R'" y no están covalentemente enlazados a un glicérido. En los "grupos ácido graso", "grupos ácido", "ácidos grasos libres" y "ácidos! grasos", R" ' es una cadena de carbono saturada, insaturada o poli-insaturada, lineal o ramificada con o sin sustituyentes, como se discute en la presente. El experto en la técnica reconocerá que R" ' de los "ácidos grasos libres" o "ácidos grasos" (por ejemplo, HOC(=0)R" ') descritos en la presente, son útiles como R" ' en los "grupos ácido graso" o "grupos ácido" enlazados a los glicéridos o a otros esteres utilizaldos como sustratos en el presente procedimiento. Es decir, | un sustrato del presente procedimiento puede comprender grasas, aceites u otros esteres que tienen grupos ácido graso formados a partir de ácidos grasos libres o ácidos grasos discutidos en la presente. Una o más grasas o aceites no refinados y/o no blanqueados pueden comprender grasa de mantequilla, manteca de cacalo, sustitutos de manteca de cacao, manteca de illipe, manteca de coco, grasa de leche, grasa de mowrah, manteca de phulwara, grasa de sal, grasa de shea, cebo de borneo, manteca, lanolina, cebo de carne, cebo de carnero, cebo u otra grasa animal, aceite de cañóla, aceite de ricino, aceite de coco, aceite de cilantro, aceite de maiz, aceite de semilla de algodón, aceite de avellana, aceite de semilla de henequén, aceite de jatrofa, aceite de semilla de lino, aceite Ide hueso de mango, aceite de espuma de salvia, aceite de mostaza, aceite de pata de vaca, aceite de oliva, aceite de palma, aceite de semilla de palma, oleína de palma, I estearina de palma, oleína de semilla de palma, estearina de semilla de palma, aceite de cacahuate, aceite de semilla de colsa, aceite de salvado de arroz, aceite de cártamo, aceite de sasánqua, aceite de soya, aceite de semilla de girasol, aceite del subproducto de la producción de pulpa química de madera, aceite de tsubaki, aceites vegetales, aceites marinos que pueden ser convertidos a grasas plásticas o sólidas, tales como aceite de sábalo, aceite de pez vela, aceite de higado de bacalao, aceite de áspero anaranjado, aceite de pile herd, aceite de sardina, aceites de ballena, aceites de arenque, 1, 3-dipalmitoil-2-monooleina (POP), 1 (3) -palmitoil- 3(1) -estearoil-2-monooleina (POSt) , 1, 3-distearoil-2-monoole :ina (StOSt) , triglicérido, diglicérido, monoglicérido, triglic:érido de ácido behénico, trioleina, tripalmitina, tristeairina, triglicéridos de ácidos grasos de cadena media, o combi-naciones de los mismos. Las grasas y aceites procesados tales como aceites y grasas hidrogenadas o fraccionadas pueden ser también utilizadas. Los ejemplos de grasas fraccionadas incluyen oleina de palma, estearina de palma, oleina de semilla de palma, y estearina de semilla de palma. Las formas parcialmente hidrogenada, saturada, insaturada o poliinsaturada de las grasas anteriormente listadas, aceites, triglicéridos o diglicéridos, son también útiles para el presente procedimiento. Para el método de este i procedimiento, las grasas descritas, aceites, triglicéridos o diglicqridos son utilizables solos, o al menos dos de ellos pueden ser utilizados en mezcla. I La "esterificación" o "transesterificación" son los proceses mediante los cuales es agregado un grupo ácido graso, recolocado o reemplazado sobre uno o más componentes del sustrato. El grupo ácido puede ser derivado de una grasa o aceite que es parte del sustrato inicial, o de un ácido graso c éster que ha sido agregado al sustrato inicial o al sustrato procesado con el medio de purificación. El término "esterificación" incluye el proceso en el cual R, R' o R" sobre un glicérido es convertido de un grupo alcohólico (OH) a un grupo ácido graso dado por -0C(=0) R" ' . El grupo ácido graso que reemplaza el grupo alcohol.ico puede venir del mismo o de diferente glicérido, o de un ácido graso libre o de éster que ha sido agregado al sustrat inicial al sustrato procesado con el medio de purificación. El presente procedimiento contempla también la esterificación de los alcoholes que han sido agregados al sustrato inicial o al sustrato procesado con el medio de purificación. Por ejemplo, un alcohol agregado asi puede ser esterificado por un ácido graso libre agregado o por un grupo ácido graso presente sobre un glicérido, que fue un componente del sustrato inicial. Un ejemplo no limitante de la esterificación incluye la reacción de un ácido graso libre con un alcohol . La esterificación también incluye los procesos que pertenecen a la fabricación de biodiesel, tal como se discute en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,578,090; 5,713,965; y 6,398,707, las cuales se incorporan por referencia en la presente. El término "biodiesel" incluye los esteres de alquilo inferior de grupos ácido graso encontrados sobre glicéridos animales o vegetales. Los esteres de alquilo inferior incluyen éster de metilo, éster de etilo, éster de n-propilo y éster de isopropilo. En la produceion de biodiesel, el sustrato inicial comprende grasas o aceites. Uno o más alcoholes inferiores (por ejemplo, metanol, etanol, n-propanol e isopropanol) son agregados a este sustrato y la mezcla entra luego en contacto con la enzima.1 La enzima provoca que los alcoholes sean esterifjicados con los grupos ácidos graso que es parte de los glicéridos de grasa o aceite. Por ejemplo, R, R1 o R" sobre un gliférido es un grupo ácido graso dado por -OC(=0)R" Después de la esterificación del metanol, el producto de biodiesel es CH3OC (=0) R" ' . Los productos de biodiesel también! incluyen la esterificación de alcoholes inferiores con acidos grasos libres u otros esteres que son agregados al sustrato inicial o el sustrato procesado por el medio de purificación. El término "transesterificación" incluye el proceso en el cual R, R' o R" sobre un glicérido es un primer grupo ácido graso dado por -0C(=0)R"', y el primer grupo ácido graso 'es reemplazado por un segundo grupo ácido graso I diferenlte. El segundo grupo ácido graso que reemplaza al primer grupo ácido graso puede venir de la misma o diferente grasa o aceite presente en el sustrato inicial. El segundo ácido graso puede también venir de un ácido graso libre o éster agregado al sustrato inicial o al sustrato procesado con el medio de purificación. El presente procedimiento también contempla la transesterificación o interésterificación de los alcoholes esterificados u otros esteres que han sido agregados al sustrato inicial o al sustrato procesado con el medio de purificación. Por ejemplo, un alcohol agregado asi puede ser transesterificado o interiesterificado por un ácido graso libre agregado, por un grupo ácido graso sobre un éster agregado, o por un grupo ácido graso presente sobre un glicérido, que fue un compone!nte del sustrato inicial. Un ejemplo no limitante de la transesterificación incluye la reacción de una grasa o aceite con un alcohol (por ejemplo, metanol) o con un éster. El término "interesterificación" incluye, por ejemplo, los procesos de acidólisis, alcoholisis, glicerólisis y transesterificación. Los ejemplos de estos procesos son descritos en la presente, y en Fousseau, D. y Marangcni, A.G., "Chemical Interesterification of Food Lipids: Theory and Practice," in Food Lipids Chemistry, Nutrition, and Biotechnology, Second Edition, Revised and Expanded, Akoh, CC . and Min, D.B. eds., Marcel Dekker, Inc., New York, NY, Capitulo 10, que es incorporada por referencia en la presente. La acidólisis incluye la reacción de un ácido graso con un éster, tal como un triacilglicerol; la alcoholisis incluye la reacción de un alcohol con un éster, tal co o triacilglicerol; y la glicerólisis incluye las reacciones de alcoholisis en las cuales el alcohol es glicero1. Un ejemplo no limitante de interesterificación o transesterificación incluye las reacciones de diferentes triglicéridos que dan como resultado el reacomodo de los grupos ácido graso en los glicéridos y triglicéridos resultantes . Un producto esterificado, transesterificado o interésterificado ha sufrido respectivamente el proceso de esterificación, transesterificación o interesterificación. El presente procedimiento se refiere a las enzimas capaces de efectúar el proceso de esterificación, transesterificación o interésterificación para las grasas, aceites, triglicéridos, diglicéridos, monoglicéridos, ácidos grasos libres, alcoholes mono- ó polihidroxilicos, o esteres de alcoholes mono- o polihidroxilicos. Como se utiliza en la presente, la "vida media" de I una enzJma es el tiempo en el cual la actividad enzimática de una muestra de enzima es disminuida a la mitad. Si por ejemplo, una muestra de enzima disminuye su actividad relativja de 100 unidades a 50 unidades en 10 minutos, entonces la vida media de la muestra de enzima es de 10 minutos!. Si la vida media de esta muestra es constante, entonces la actividad relativa será reducida de 100 a 25 en 20 minutos (dos vidas medias), la actividad relativa será reducida de 100 a 12.5 en 30 minutos (tres vidas medias), la constituyentes también incluyen otros compuestos caracterizados o no caracterizados reconocidos por el experto en la materia que provocan o que surgen de la degradación de la grasa o el aceite. Tales constituyentes pueden surgir de las vias de oxidación, o de otras vias reconocidas por el experto en la materia, para dar como resultado la degradación de la grasa o el aceite. La "reducción" de los constituyentes que provocan o que surgen de la degradación de la grasa o el aceite en una muestra de sustrato, se refiere a la disminución de la concentración, el porcentaje o tipos de tales constituyentes en la muestra. El método de elaboración de un producto esterificado, transesterificado o interesterificado puede comprender además el mezclado del sustrato inicial y/o el sustrato procesado con el medio de purificación, con la enzima en uno o más tanques para una reacción de suspensión I por lotes, o haciendo fluir el sustrato inicial y/o el sustrato procesado con el medio de purificación, a través de una columna que contiene la enzima. Un lecho de uno o más tipos de medios de purificación puede ser colocado sobre un lecho ce la enzima, dentro de una columna corriente arriba de la enzijma. El sustrato inicial, el sustrato procesado con el medio de purificación, el producto esterificado, transesterificado o interesterificado y la enzima pueden estar qn un ambiente de gas inerte. El gas inerte puede ser seleccionado del grupo que consiste de N2, C02, He, Ar y Ne.

Preferentemente, los métodos del presente procedimiento comprenlden además la prevención de la degradación oxidativa del su trato inicial, el sustrato procesado con el medio de purificación, el producto esterificado, transesterificado o interésterificado, o la enzima. El método de elaboración de un producto esterificado, transesterificado o interésterificado puede comprender además la prevención de la degradacion oxidativa al sustrato inicial, el sustrato procesado con el medio de purificación, el producto esterificado, transesterificado o interesterificado, o la enzima El experto en la técnica podria reconocer que con respect_o al método de elaboración de un producto esterifjicado, transesterificado o interesterificado, cualquier combinación de los particulares anteriormente descritos que pertenezcan a las opciones de desodorización (por e' emplo, velocidad de flujo, tiempo de residencia o de retención, temperatura, presión, elección del gas inerte) , sustratlo inicial, componentes (por ejemplo, ácidos grasos libres, esteres no glicéridos, alcoholes) opcionalmente agregados al sustrato inicial o al sustrato procesado con el medio le purificación, la enzima, los métodos de monitoreo o de ajuste, las grasas o aceites producidos, el uso de las columnas o las reacciones en suspensión por lotes, y el medio de purificación, son útiles en el presente procedimiento. La transesterificación, esterificación o interés terificación de acuerdo al presente procedimiento es efectuada por una lipasa. La lipasa puede ser especifica o no especifica con respecto a su sustrato. El sustrato inicial! puede estar compuesto de uno o más tipos de grasa o I aceite ' y tener las propiedades físicas modificadas en un procese de esterificación, transesterificación o interés terificación . Las enzimas no selectivas provocan el reacomedo mediante transesterificación en las tres posiciones sobre un glicérido, y puede dar como resultado la repartición aleatortia en el equilibrio termodinámico; pero las lipasas 1, 3-especificas provocan reacomodos preferentemente en las posicicnes sn-1 y sn-3 sobre un glicérido. Por ejemplo, cuando (una mezcla de aceite de oliva y aceite de semilla de palma cíompletamente hidrogenado es tratada con una enzima no selectiva, los componentes del producto tienen diferentes propiedades físicas de los sustratos iniciales. Las lipasas 1, 3-especificas y las lipasas no selectivas son capaces de realizar este proceso de reacomodo. Preferentemente, la lipasa es una lipasa 1,3-selectiva, la cual cataliza preferentemente la esterificación o transesterificación de los esteres terminales en las posiciones sn-1 y sn-3 de un glicérido. La lipasa puede también ser una lipasa no especifica, no selectiva. El proceso puede producir grasas esterificadas, transesterificadas o interesterificadas con contenido nulo o reducido de ácidos grasos trans para la margarina, shortening (grasa para hacer la pastelería más friable) y otras grasas de confitería tales como sustituto de manteca de cacao. El producto esterificado, transesterificado o interesterificado puede cambien ser un 1, 3-diglicérido, tales como aquellos descrit-os en la Patente de los Estados Unidos No. 6,004,611. La enzima utilizada de acuerdo al presente procedimiento puede ser una lipasa obtenida a partir de una linea celular procariótica o eucariótica cultivada, o tejido animal. Tales lipasas caen tipicamente en una de tres catego ias (Macrae, A. R. , J.A. O. C.S. 60:243 A-246A (1983)) La primera categoria incluye las lipasas no especificas capaces de liberar o de enlazar cualquier grupo ácido graso a partir I de o hacia alguna posición del glicérido. Tales i lipasas( han sido obtenidas de Candida cylindracae, ! Corynebacteri um acnés y Staphylococcus aureus (Macrae, 1983; Patente1 de los Estados Unidos No. 5,128,251). La segunda categoria de lipasas únicamente agrega o elimina grupos de ácido graso específicos hacia o desde los glicéridos específicos. De este modo, estas lipasas son útiles en la producción o modificación de los glicéridos específicos. Tales j lipasas han sido obtenidas de géneros Geotrichu/n candidi um y Rhi zopus , Aspergill us. y Mucor (Macrae, 1983; Patente de los Estados Unidos No. 5,128,251). La última categoria de lipasas cataliza preferentemente la eliminación o adic Lón de grupos ácido graso desde los carbonos del glicérido sobre el extremo en las posiciones 1 y 3. Tales lipasas han sido obtenidas a partir de --J-eri-io-T-yces lanugin osa , Rhizomucor miehei , Aspergillus niger, Mucor javanic us , Rhi zopus delemar, y Rhizopus arrhizus (Macrae, 1983) Las enzimas de fuentes animales, tales como la lipasa de páncreas de cerdo, pueden ser también utilizadas. Existen muchos microorganismos a partir de los cuales son obtenidas las lipasas útiles en el presente procedimiento. La Patente de los Estados Unidos No, 5,219,7 33 lista los ejemplos de tales microorganismos que incluyen aquellos del género Achromobacter tales como A. iofurgi s y A. lipolyticum; el género Chromobacterium tales como C. viscosum var. paralipolyticum; el género Corynebacterium tales como C. acnés; el género Staphylococcus tales como S . a ureus; el género Aspergillus tales como A. niger y A. oryzae; el género Candida tales como C. cylindracea , C. antárctica b, C. rosa y C. rugosa ; el género Humicora tales como H. lanuginosa ; el género Penicillium tales omo P. casei colmn , P. crustosum , P. cyclopium y P. roqueforti ; el género Torulopsis tales como T. ernobii ; el género Mucor tales como M. miehei , M. japonicus y M. javanic us; el género Bacillus tales como B . subtilis; el género Thermomyces tales como T. ibadanensis y T. lanuginosa (ver Zhang, H. et al. J.A.O.C.S. 78: 57-64 (2001)); el género Rhizopus tales como R . delemar, R . japonicus , R . arrhizus y R . nevé us; el género Pseudomonas tales como P. aeruginosa , P. fra gi , P. cepa cia , P. mephi tica var. lipolytica y P. fl úores cens; el género Alcaligenes; el género Rhizomucor tales como R . miehei ; el género Humicolo tales como H. rosa ; y el género Geotrichum tales como G. candidum . Varias lipasas obtenidas de estos organismos son comercialmente disponibles como enzimas purificadas. El experto en la técnica podria reconocer otras enzimas capaces de afectar la esterificación, transesterificación o interesterificación, incluyendo otras lipasas útiles para el presente procedimiento. Las lipasas obtenidas a partir de los organismos anteriores son inmovilizadas para el presente procedimiento sobre portadores adecuados, mediante un método usual conocido para las personas de experiencia ordinaria en la técnica. Las Parientes de los Estados Unidos Nos. 4,798,793; 5,166,064; 5,219,733; 5,292,649; y 5,773,266 describen los ejemplos de lipasa inmovilizada y los métodos de preparación. Los ejemplos de métodos de preparación incluyen el método de atrapamiento, el método de enlace covalente de portador inorgánico, el método de enlace covalente de portador inoxidable o alumina, gel de silice poroso, tamiz molecular, carbón activo, arcilla, kaolinita, perlita, fibras de vidrio, tierra de diatomeas, bentonita, hidroxiapatita, gel de fosfato de calcio y derivados de alquilamina de portadores inorgánicos. Los ejemplos de portadores orgánicos preferidos incluyen teflón microporoso, polimero olefinico alifático (por jemplo, polietileno, polipropileno, un homo- o copolimjero de estireno o una mezcla de los mismos, o un soporte inorgánico pretratado) , nailon, poliamidas, policar onatos, nitrocelulosa y acetilcelulosa. Otros portadores orgánicos adecuados incluyen polisacáridos hidrofilieos tales como gel de agarosa con un grupo alquilo, fenilo,1 tritilo u otro grupo hidrofóbico similar, para proporc :ionar una superficie porosa hidrofóbica (por ejemplo "Octyl--Sepharose CL-4B", "Phenyl-Sepharose CL-4B", ambos productios de Pharmacia Fine Chemicals (Kalamazoo, Michigan) . Las resinas de adsorción microporosas incluyen aquellas elaboradas de polimero de estireno o de alquilamina, resina de queíato, resina de intercambio iónico tales como "DOWEX MWA-I" i (resina de intercambio aniónico débilmente básica fabricada por the Dow Chemical Co., que tiene una amina terciaria como el grupo de intercambio, compuesta básicamente de cadenas de poliestireno reticuladas con divinilbenceno, 150 A en el radio de poro promedio y tamaño de particula de malla 20 a 50) , y resina de celulosa hidrofílica tal como una preparada mediante el enmascaramiento del grupo hidrofílico de un portador celulósico, por ejemplo, "Cellulofine GC700-m" producto de Chisso Corporation (Tokyo, Japón) , tamaño de particula de 45 a 105 µm) . La esterificación, transesterificación o interésterificación puede ser conducida en una columna o en reacciones tipo suspensión por lotes, como se describe en la sección de Ejemplos más adelante. En las reacciones de suspension por lotes, la enzima y los sustratos son mezclados vigorosamenté para asegurar un buen contacto entre ellos, teniendo cuidado en no mezclar bajo alto esfuerzo cortante, lo cual podría provocar pérdida de la actividad enzimática.

Preferentemente, la reacción de transesterificación o de esterificación es llevada a cabo en un reactor de lecho fijo con liriasas inmovilizadas. ! Los grupos ácido graso descritos en la presente pueden ' ser agregados al sustrato inicial o al sustrato procesado con el medio de purificación, para esterificar los grupos alcohólicos presentes sobre los glicéridos del sustratJo inicial, o los grupos alcohólicos de otros compuestos (por ejemplo, alcoholes o esteres) agregados al sustrato procesado con el medio de purificación. Los glicéridos que tienen cualquiera de los grupos ácido graso como se describen en la presente, pueden ser también utilizados en el sustrato inicial; y otros esteres que tienen cualquiera de los grupos ácido graso descritos en la presente pueden ser agregados al sustrato inicial o al sustrato purificado con el medio de purificación. Tales ácidos grasos incluyen grupos ácido graso de cadena lineal o ramificada, saturac.os, grupos ácido graso de cadena lineal o ramificada insaturados, grupos ácido graso hidroxílicos, y grupos ácido policarboxilico, o contienen sustituyentes no carbono que incluyen oxigeno, azufre o nitrógeno. Los grupos ácido graso pueden ser de origen natural, procesados o refinados a partir de productos naturales o sintéticamente producidos. Aunque no existe límite superior o inferior para la longitud de la cadena ' de carbono más larga en los ácidos grasos útiles, es preferible que su longitud sea de aproximadamente 6 a aproximadamente 34 átomos de carbono de longitud. Los grupos ácido graso específicos útiles para el presente procedimiento pueden j ser formados a partir de ácidos grasos descritos en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,883,684; 5,124,166; 5,149,6,42; 5,219,733; y 5,399,728. Los ejemplos de grupos ácido graso de cadena lineal, saturados, útiles que tienen un número par de átomos de carbono pueden ser formados a partir de ácidos grasos descritos en la Patente de los Estados Unidos No. 5,219,733, incluyendo ácido acético, ácido butírico, ácido caproico, ácido caprilico, ácido cáprico, ácido láurico, ácido mirístico, ácido palmitico, ácido esteárico, ácido aráquico, ácido behénico, ácido lignocérico, ácido hexacosanoico, ácido octacosanoico, ácido triacontanoico ácido n-dotriacontanoico, y aquellos que tienen un número impar de átomos de carbono, tales como el ácido propiónico, ácido n-valérido, ácido enántico, ácido pelargónico, ácido hendecanoico, ácido tridecanoico, ácido pentadecanoico, ácido heptadecanoico, ácido nonadecanoico, ácido heneicosanoico, ácido tricosanoico, ácido pentacosanoico y ácido heptacqsanoico . Los ejemplos de grupos ácido graso ramificados saturados útiles pueden ser formados a partir de los ácidos grasos descritos en la Patente de los Estados Unidos No. 5,219,733 incluyendo el ácido isobutírico, ácido isocaproico, isoláurico, ácido ácido 13-metil- ácido 15-metil- ácido 17- ácido 19-metil- a-hexildecanoico, ácido c-f-heptilundecanoico, ácido 2-deciltetradecanoico, ácido 2-undeqiltetradecanoico, ácido 2-decilpentadecanoico, ácido 2-undecilpentadecanoico, y el ácido Fine oxocol 1800 (produqto de Nissan Chemical Industries, Ltd.). Los ejemplos de grupos ácido graso ramificados, con número ¡impar de átomos de carbono, saturados, útiles pueden ser formados a partir de ácidos grasos descritos en la Patente de los Estados Unidos No. 5,219,733 incluyendo ácidos graso anteiso que terminan con un grupo isobutilo, tal como el ácido 6-metiloctanoico, ácido 8-metil-decanoico, ácido 10-metil-dodecanoico, ácido 12-metil-tetradecanoico, ácido 14-metil-hexadecanoico, ácido 16-metil-octadecanoico, ácido 18-metil-eícosanoico, ácido 20-metil-docosanoico, ácido 22-metil-tetracosanoico, ácido 24-metil-hexacosanoico y ácido 26-meti1-octacosanoico. Los ejemplos de grupos ácido graso insaturados útiles pueden ser formados a partir de ácidos grasos descritos en la Patente de los Estados Unidos No. 5,219,733 incluyendo ácido 4-decenoico, ácido caproleico, ácido 4-dodecenoico, ácido 5-dodecenoico, ácido lauroleico, ácido 4-tetradecenoico, ácido 5-tetradecenoico, ácido 9-tetradecenoico, ácido palmitoleico, ácido 6-octadecenoico, ácido leico, ácido 9-octadecenoico, ácido 11-octadecenoico, ácido 9-eicosenoico, ácido cis-11-eicosenoico, ácido cetoleico, ácido 13-docosenoico, ácido 15-tetracosenoico, ácido J -hexacosenoico , ácido 6, 9, 12, 15-hexadecatetraenoico, ácido linoleico, ácido linolénico, ácido a-eleosteárico, ácido ß-eleosteárico, ácido punicico, ácido 6,9,12,15-octadecatetraenoico, ácido parinarico, ácido 5,8,11,14-eicosatetraenocio, ácido 5, 8, 11, 14 , 17-eicosapentaenoico (EPA) ácido 7, 10, 13, 16, 19-docosapentaenoico, ácido 4, 7, 10, 13, 16, 19-docosahexaenoico (DHA) y similares. Los ejemplos de grupos ácido graso hidroxílico útiles pueden ser formados a partir de los ácidos grasos descritos en la Patente de los Estados Unidos No. 5,219,733 incluyendo el ácido a-hidroxilaurico, ácido a-hidroximirístico, ácido a-hidroxipalmítico, ácido a-hidroxilesteárico, ácido ?-hidroxiláurico, ácido a-hidroxiaraquico, ácido 9-hidroxi-12-octadecenoico, ácido ricinoleico, ácido a-hidroxibehénico, ácido 9-hidroxi-trans-10, 12-dctadecadienico, ácido kamolénico, ácido ipurólico, ácido 9, 10-dihidroxiesteárico, ácido 12-hidroxiestéarico y similares . Los ejemplos de grupos ácido graso policarboxílicos útiles pueden ser formados a partir de ácidos grasos descritos en la Patente de los Estados Unidos No. 5,219,733 incluyendo ácido oxálico, ácido cítrico, ácido malónico, ácido ¡succínico, ácido glutárico, ácido adípico, ácido pimélico, ácido subérico, ácido azelaico, ácido sebácico, ácido p,L-málico y similares. Preferentemente, los grupos ácido graso tienen cadenas de carbono de aproximadamente 4 a aproximadamente 34 carbones de longitud. Más preferentemente, los grupos ácido graso tienen cadenas de carbono de aproximadamente 4 a aproximadamente 26 carbonos de longitud. Los más preferentemente, los grupos ácido graso tiene cadenas de carbono de aproximadamente 4 a aproximadamente 22 átomos de carbono de longitud. Preferentemente, los grupos ácido graso son forjmados a partir del siguiente grupo de ácidos grasos libres: ácido palmítico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico, ácido linolénico, ácido araquidónico, ácido erucico, ácido caproico, ácido caprílico, ácido cáprico, ácido eicosapentanoico (EPA) , ácido docosahexaenoico (DHA) , ácido láurico, ácido mirístico, ácido 5-eicosenoico, ácido butírico, ácido ?-linolénico y ácido linoleico conjugado. Los grupos ácido graso formados a partir de ácidos grasos derivados de diversas grasas y aceites vegetales y animales (tales como los ácidos grasos de aceite de pescado) y ácidos grasos procesados o refinados provenientes de grasas o aceites, vegetales y animales (tales como los ácidos grasos de aceite de pescado fraccionado en los cuales EPA y DHA están concentrados) pueden ser también agregados. Los grupos ácido graso p)ueden también ser formados a partir de ácidos grasos de cadena media (como se describe por Merolli, A. et al, INFORM, 8:597-603 (1997)). También preferentemente, los grupos ácido graso son formados a partir de ácidos grasos libres que tienen cadenas de carbono de aproximadamente 4 a aproximadamente 36, aproximadamente 4 a aproximadamente 24, o aproximadamente 4 a aproximadamente 22 átomos de carbono de longitud. I ' Los alcoholes o esteres de alcoholes pueden ser I también agregados al sustrato inicial al sustrato purificado con el medio de purificación. Estos alcoholes y esteres pueden ser esterificados, transesterificados o interesterificados por grupos ácido presentes sobre los glicéridos del sustrato inicial. Alternativamente, estos alcoholas o esteres de los mismos pueden ser esterificados, transesterificados o interesterificados por ácidos grasos libres o esteres agregados al sustrato purificado con el medio die purificación. Los "esteres" incluyen cualquiera de los alcoholes descritos en la presente esterificados por cualquiera de los ácidos grasos descritos en la presente. Los ejemplos de esteres útiles diferentes de los glicéridos incluyen esteres de cera, esteres de alquilo tales como ésteres de metilo, etilo, isopropilo, hexadecilo u octadecilo, esteres de arilo, esteres de propilenglicol, esteres de etilenglicol, esteres de 1, 2-propanodiol y esteres de 1,3-propanodiol. Los esteres pueden ser formados a partir de la esterificación, transesterificación o interés.terificación de alcoholes monohidroxílicos o alcoholes polihidroxílicos por los ácidos grasos libres, grasas o aceites, como se describen en la presente. El sustrato inicial o el sustrato purificado con el medio de purificación puede ser mezclado con alcoholes monohicroxílieos o alcoholes polihidroxílicos antes del contactio con el medio de purificación o la enzima. El producto esterificado, transesterificado interesterificado puede ser formado a partir de la esterificación, transesterificación o interesterificación de los alcoholes monohidroxílieos o los alcoholes polihidroxílicos. Los alcoholes monohidroxílicos o los alcoholes polihidroxílicos pueden ser alcoholes primarios, secundarios o terciarios de compuesjtos de cadena anular, lineal o ramificada Los alcohol -es monohidroxílicos pueden ser seleccionados del grupo que consiste de alcohol metílico, alcohol isopropílico, alcohol alílico, etanol, propanol, n-butanol, iso-butanol, sec-butanol, ter-butanol, n-pentanol, iso-pentanol, n-hexanol, alcohol hexadecilico o alcohol octadecílico . Los alcoholes polihidroxilicos pueden ser seleccionados del grupo que consiste de glicerol, propilenglicol, etilenglicol, 1,2-propancdiol y 1, 3-propanodiol . Los ejemplos de alcoholes útiles en el presente procedimiento incluyen alcoholes monohidroxílicos o alcoholes polihidroxílicos. Los alcoholes monohidroxilicos pueden ser alcoholes primarios, secundarios o terciarios de compuestos de cade¡na anular, lineal o ramificada con uno o más carbonos tales como alcohol metílico, alcohol isopropílico, alcohol alílicc, etanol, propanol, n-butanol, iso-butanol, sec-butanol, ter-butanol, n-pentanol, iso-pentanol, n-hexanol, alcohol hexadecilico o alcohol octadecílico. El grupo hidroxillo puede ser enlazado a un anillo aromático, tal como fenol. Los ejemplos de alcoholes polihidroxílicos incluyen glicerol, propilenglicol, etilenglicol, 1, 2-propanodiol y 1, 3-pro;panodiol , La Patente de los Estados Unidos No. 5,219,733 indica otros alcoholes útiles para el presente procedimiento, Estos alcoholes incluyen, pero no están limitados a 14-metilheixadecanol-1, 16-metiloctadecanol-l, 18-metilnonadecanol, 18-metileicosanol, 20-metilheneicosanol, 20-metildocosanol, 22-metiltricosanol, 22-metiltetracosanol, 24-metilpentacosanol-1 y 24-metilhexacosanol . Uno o más tipos de medios de purificación y la enzima pueden ser empaquetados conjuntamente o separadamente en una o más columnas, a través de lo cual el sustrato inicial , el sustrato procesado con el medio de purificación o el producto esterificado, transesterificado o interésterificado. Las columnas pueden ser columnas forradas en las cuales la temperatura de uno o más del sustrato i inicial], el sustrato purificado con el medio de purificación, I uno o ás tipos de medios de purificación, la enzima o el I productjo esterificado, transesterificado o interesterificado pueden ser regulados. El sustrato purificado con el medio de purifiqación puede ser preparado mediante el mezclado del sustrato inicial con uno o más tipos de medios de purifidación en un tanque para una reacción de purificación en suspensión por lotes o el mezclado del sustrato inicial en propósitos de eliminar diferentes tipos de impureza en el sustrato inicial. Las columnas y otros conductos de fluido pueden ser forrados para regular así la temperatura del sustrato inicial, el sustrato purificado con el medio de purificación, el medio de purificación o la enzima. El medio de purificación puede ser regenerado para el uso repetido. También, en el método del presente procedimiento, ¡ el susjtrato purificado con el medio de purificación es preparado al mezclar el sustrato inicial con uno o más tipos de medios de purificación en un tanque para una reacción de purificación tipo suspensión por lotes, o mezclando el sustrato inicial en una serie de tanques para una serie de reacciones de purificación tipo suspensión por lotes. En estas reacciones de purificación tipo suspensión por lotes, pueden ser Después de reaccicnar con un tipo de medio de purificación (o mezcla específica del medio de purificación) , el sustrato inicial es separado del medio de purificación (o los medios) vía la filtradión, centrifugación o concentración. Después de este paso de separación, el sustrato inicial es además purificado con otros medios de purificación o sirve como sustrato purifiqado con el medio de purificación y se hace reaccionar con la lipasa. El sustrato purificado con el medio de purifiqación preparado mediante este método de reacción de purificación tipo suspensión por lotes, se puede hacer reaccionar con la lipasa en un tanque para la transesterificación o esterificación tipo suspensión por lotes. Alternativamente, el sustrato procesado con el medio de purificación puede hacerse fluir a través de una columna de lipasa. Los tanques de reacción, las columnas y otros conductos de fluido pueden ser forrados para regular asi la temperatura del sustrato inicial, el sustrato procesado con el medro de purificación, los medios de purificación o la enzima, Otras maneras de regulación de temperatura, tales como 1os serpentines de calentamiento/enfriamiento o las habitaciones de temperatura controlada, son contempladas y bien cfnocidos en la técnica. Los medios de purificación pueden ser regenerados para el uso repetido. La actividad enzimática de la lipasa es también afectada por factores tales como la temperatura, el contenido de luz y humedad. La temperatura es controlada como se describe anteriormente. La luz puede ser mantenida fuera mediante el uso de diversos medios de bloqueo o filtración de luz conocidos en la técnica. El contenido de humedad, el cual incluye la humedad atmosférica ambiental, es controlado por la operación del proceso como un sistema cerrado. Donde el proqeso incluye la desodorización utilizando vapor como un agente de depuración, el proceso de desodorización puede ser mantenido aislado de la enzima. Debido a que la desodorización es realizada a alta temperatura y a vacío, el contenido de humedad en el aceite desodorizado es muy bajo. Donde el proceso de desodorización utiliza un gas inerte como el agente de depuración, el proceso de desodorización es opcionalmente mantenido aislado de la enzima. Alternativamente, un lecho de gas nitrógeno (u otro gas inerte) puede ser colocado sobre la parte superior del lecho o la °lumna ciue contiene el medio de purificación o la enzima. Esta técnica tiene el beneficio agregado de mantener las especies oxidativas atmosféricas (incluyendo el oxigeno) lejos del sustrato, el producto o la enzima. La lipasa inmovilizada puede ser mezclada con el sustrato inicial o el sustrato purificado con el medio de de la¡ columna para el contacto con la enzima de i transesterificación o esterificación. Si las grasas sólidas muy viscosas, aceites, triglicéridos o diglicéridos son utilizaldos, el sustrato es calentado hasta un estado fluido o menos viscoso. El sustrato puede hacerse fluir a través de la o las columnas bajo la fuerza de gravedad, mediante el uso de una bomba peristáltica o de pistón, bajo la influencia de una bonba de succión o de vacío, o utilizando una bomba centrífuga. Las grasas y aceites transesterificados producidos son recolectados y los glicéridos deseados son separados de la mezcla de los productos de reacción mediante métodos bien conocidos en la materia. Este método continuo involucra una probabilidad reducida de permitir la exposición de los ¡sustratos al aire durante la reacción, y por lo tanto tiene 1a ventaja de que los sustratos no serán expuestos a la humedad o a las especies oxidativas. Alternativamente, los tanques de reacción para la producción tipo suspensión por lotes como se describe anteriormente, pueden ser también utilizados. Preferentemente, estos tanques de reacción son también sellados del aire para prevenir así la exposición al oxigeno , a la humedad, y a otras especies oxidantes ambientales . El método del presente procedimiento también comprende el monitoreo de la actividad enzimática, mediante la medición de una o más propiedades físicas del producto I esterifjicado, transesterificado o interesterificado; y i ajustanjdo opcionalmente la duración del tiempo para el cual i el sustrato purificado hace contacto con la lipasa, o ajustando la temperatura del sustrato inicial, el sustrato purificado, uno o más tipos de medio de purificación o la lipasa en respuesta a un cambio en la actividad enzimática, para producir grasas o aceites que tienen una proporción increme.ntada sustancialmente uniforme de esterificación, transesterificación o interesterificación con relación al sustrato inicial como se mide por las propiedades físicas. La duración del tiempo para el cual el sustrato purificado hace c¿ntacto con la lipasa, puede ser ajustada al ajustar la velocidad de flujo del sustrato purificado, proporcionado para hacer contacto con la lipasa. También, la cantidad y tipo d uno o más tipos del medio de purificación pueden ser se entiende que la cantidad o grado de esterificación, transesterificación o interesterificación del aceite o la grasa producidos a partir de un sustrato inicial particular mediante los métodos de la invención, varía por no más de aproximadamente 10%, preferentemente no más de aproximadamente 5% como se mide por un cambio en una de las mediciones de las propiedades físicas, más adelante. En el presente procedimiento, los cambios en la actividad enzimática son monitorizados al seguir los cambios i en las i propiedades físicas del producto. Conforme disminuye la actividad enzimática, la velocidad de conversión del sustrato disminuye, de modo que menos del sustrato es convert,ido al producto vía la esterificación, transesterificación o interesterificación a una velocidad de flujo ada que la cantidad inicial de conversión. En consecuencia, conforme decae la actividad enzimática, las propiedades físicas del producto se parecen cada vez más a las propiedades físicas de los componentes del sustrato. La persona experta en la técnica reconoce que al seguir los cambios en las propiedades físicas, los parámetros del proceso de producción de esterificación, transesterificación o interesterificación pueden ser ajustados, con lo cual se incremeinta la proporción del producto esterificado, transesterificado interesterificado con relación al sustrato, de modo que las grasas y aceites con un grado deseado! de esterificación, transesterificación o interésterificación pueden ser producidos mientras que se mejora la productividad enzimática de la lipasa. Una o más propiedades físicas de las grasas o los aceites; que pueden ser medidas durante los métodos de la invenciJón incluyen la temperatura del punto de goteo del producto, el perfil del contenido de grasa sólida del producto, y los cambios en los espectros ópticos. El punto de goteo de Mettler (MDP) es un ejemplo de una propiedad física que puede ser medida para seguir los cambios; en la actividad enzimática. El MDP es determinado utilizando los instrumentos de análisis térmico Mettler Toledo, Inc. (Columbus, OH) de acuerdo al Método Oficial #Cc 18-80 de la American Oil Chemists Society. El MDP es la temperatura a la cual una mezcla de grasas o aceites se vuelve fluida. El perfil del contenido de grasa sólida (SFC) del producto (como una función de temperatura) es otra propiedad física [ útil para rastrear los cambios en la actividad enzimática. SFC puede ser medido de acuerdo al Método Oficial #Cd 16b-93 de la American Oil Chemists Society. Los siguientes cambios en los espectros ópticos son I otra manera más de monitorizar los cambios en la actividad enzimática. El sustrato y el producto pueden tener un espectro óptico característico. Conforme decae la actividad de la {Lipasa, la cantidad de producto que da origen a las señales espectroscópicas atribuibles al producto esterificado, transesterificado o interesterificado (y no i atribuijble al sustrato) disminuye. ¡ Todas estas propiedades son medidas utilizando técnicajs bien conocidas en la materia, y son útiles en los siguientes cambios en la actividad enzimática y para determinar la uniformidad de esterificación, transesterificación o interesterificación de los aceites o grasas producidos. i Por ejemplo, conforme decae la actividad enzimática de la 1ipasa, menos sustrato es convertido al producto dando como resultado una proporción incrementada de sustrat -j:producto. Esta proporción incrementada es manifes tada en un cambio de las propiedades físicas del product que fluye hacia afuera, tendiendo hacia las propiedades físicas del sustrato no esterificado o no transes terificado. Para reducir al mínimo este cambio, la velocidad de flujo del sustrato es reducida, de modo que éste es expi-jiesto por un periodo más prolongado de tiempo a la lipasa empaquetada. La reducción en la velocidad de flujo incrementa la proporción del producto : sustrato y en consecuencia las propiedades físicas de las grasas o aceites que f1 uyen reflejan aquella del producto esterificado, transesterificado o interesterificado deseado. Otros parámetros del proceso que pueden ser alterados incluyen la velocidad de flujo, la temperatura o la presión del sustrato inicial! o el sustrato purificado con el medio de purificjación. Donde el sustrato purificado con el medio de purifidación se hace reaccionar con la lipasa en un tanque para la producción tipo suspensión en lotes, los cambios en las propiedades físicas del producto pueden también ser monitor izados como se describe anteriormente. En un proceso tipo suspensión por lotes, una duración optimizada de tiempo es déterminada para poner en contacto el sustrato inicial con el medio de purificación (o medios) . Un tiempo optimizado es también determinado para poner en contacto el sustrato purificado con el medio de purificación con la enzima. De este modo, las modalidades de la invención involucran el monitoreo de la actividad enzimática mediante la medición de una o más propiedades físicas del producto después] de haber fluido a través de la lipasa, ajustando la velocidad de flujo, el tiempo de residencia en la columna, o la temperatura del sustrato inicial, o el sustrato purificado con el medio de purificación, y ajustando los parámetros de proceso o la cantidad y tipo del medio de purificación en respuesta a los cambios en las propiedades físicas con el fin de incrementar o mejorar la productividad enzimática de la lipasa i y/o para incrementar la proporción de las grasas o aceites esterificados, transesterificados o interésterificados en el producto, de modo que las grasas o aceites con un grado deseado de esterificación, transesterificación o interesterificación pueden ser i producidos, particularmente aquellos que tienen una ¡ proporción incrementada sustancialmente uniforme de esterifJcación, transesterificación o interesterificación con relacióin al sustrato inicial. El producto esterificado, transesterificado o infere terificado puede ser sometido a proceso usuales de ref inaijiiento de aceite incluyendo refinación, blanque:amiento, fraccionamiento, separación o purificación, o proces miento de desodorización adicional. El producto del presen e proceso puede ser separado de cualquier ácido graso libre -i otros subproductos mediante técnicas de refinación bien conocidas en la materia. En el caso de los métodos tipo suspen ion por lotes, el producto deseado puede ser separado utiliza ndo un solvente adecuado tal como hexano, eliminando el mat srial de ácido graso con un álcali, deshidratando y secando la capa del solvente, y eliminando el solvente de la capa, El producto deseado puede ser purificado, por ejemplo, median e cromatografía en columna. Los productos deseados obtenidos de este modo son utilizables para una amplia variedad de aplicaciones culinarias. Los siguientes ejemplos muestran el efecto del pretra tamiento del sustrato sobre la productividad de la enzima EJEMPLOS Los ejemplos descritos enseguida muestran que la produc ividad de la transesterificación o esterificación enzimát:ica es mejorada en gran medida mediante purificación del aceite sustrato. Los siguientes ejemplos son ilustr tivos únicamente y no se pretende que limiten el alcanc : de la invención como se define por las reivindicaciones anexas.

EJEMPLO 1 i El siguiente ejemplo muestra el efecto del pretratamiento con arginina del sustrato sobre la vida media de la lipasa. Los siguientes tres experimentos fueron realizados en este ejemplo: i) la actividad de la lipasa fue monitorizada después de la exposición al sustrato que no había sufrido pre-tratamiento con arginina ("control"); ii) la actividad de la lipasa fue monitorizada después de la exposición al sustrato que fue pre-tratado con arginina granular; y iii) la actividad de la lipasa fue monitorizada después de la exposición al sustrato que fue pre-tratado con sílice recubierta con arginina. 9.4 g de enzima (TL IM de Novozymes A/S, Dinamarca) fue empaquetada en una columna forrada de 1.5 cm de diámetro (30 cm de longitud) a una altura de 11.8 cm, que dio 20.8 ml de volumen de lecho de enzima. El agua que circula a través del forro de la columna fue mantenida a 70 °C. La bomba de pistón y las líneas de alimentación fueron envueltas con para Los materiales de pre-tratamiento (por ejemplo, los medios de purificación) fueron probados como pre-columnas. de aceite mediante la adición de 1.5 veces el volumen del lecho del material de pre-tratamiento a la columna sobre la parte superior de la lipasa inmovilizada. Para el control, i unicamente la enzima fue empaquetada en la columna sin ninguna pre-columna sobre la parte superior. La arginina granular fue adquirida de Sigma Chemical (St. Louis, MO) , y utilizada sin ninguna modificación adicional para probar el efecto de la arginina granular. La sílice recubierta con la arginida fue preparada mediante la disolución de la arginina regular en agua desionizada a 50°C antes de agregar gel de sílice (Davisil grado 636 de Aldrich Chemical) . Después de mezclar la solución de gel de silice-arginina por 15 minutos, el liqu ido fue separado del gel de sílice mediante filtración a través de un papel filtro grado medio bajo presión reducica. El gel de sílice húmedo recuperado fue secado en un horno a 70°C toda la noche. El aceite sustrato fue constituido con aceite de soya blanqueado, refinado (RB) , el cual formó la porción líquida del aceite en el sustrato, y aceite de soya completamente hidrogenado, el cual constituyó la grasa sólida en el sustrato. Una mezcla de sustrato de aceite de soya RB y aceice de soya completamente hidrogenado (80/20 en peso) fue preiparada e introducida a la parte superior de la columna utilizando una bomba de pistón para alimentar el sustraco . El grado de reacción de la enzima fue monitorizado por el cambio de las propiedades de fusión del sustrato y los productos, medido por el Punto de Tabla 1 Efecto de Pre-tratamiento de Arginina sobre la Vida Media y la Productividad de la Enzima TL IM Tratamiento Vida Productividad (g media de aceite/g de (días) enzima) Control 13 1220 Arginina granular 15 1451 Sili.ce recubierta con 62 5000 arginina La primera vida media del control fue de 13 días, dando una productividad de 1220 g de aceite/g de enzima. Esta pérdida de la actividad inicial es muy tipica para las lipasas inmovilizadas utilizadas de esta manera. El control no mostró el efecto de protección inicial, el cual demostró los tratamientos con arginina. La arginina granular preservó la actividad inicial de la enzima por los primeros 8 días, y luego sobreviene una caída rápida. La vida media y la productividad fueron mejoradas por el tratamiento con argininia granular. El pre-tratamiento del sustrato con sílice recubierta con arginina, previene la pérdida de actividad enzimática para los primeros 20 días antes de mostrar los signos de decaimiento de la actividad de lipasa, La vida media y la productividad de pre-tratamiento con sílice recubierta con arginina es más de cuatro veces aquella del control.

Estos experimentos muestran que la arginina granulajr mejora significativamente la vida media de la lipasa TL IM. Un mejoramiento aún mayor en la vida media de la lipasa TL IM es demostrado cuando el gel de sílice recubierto con ardinina es utilizado como el medio de purificación. Se cree que este mayor mejoramiento en la vida media es debido al hecho de que la sílice recubierta con arginina tiene mayor área superficial que la arginina granular.

EJEMPLO 2 Otros aminoácidos fueron probados por su habilidad para ncrementar la vida media de la lipasa. Las preparaciones de la sílice recubierta con aminoácido y las condiciones para la operación de la columna fueron las mismas que se describen en el Ejemplo 1. El grado de reacción enzimát ica fue monitorizado por el cambio de las propiedades de fus ón del sustrato y los productos, medido por el Punto de Gote o de Mettler (MDP) como se describe en la Solicitud de los Estados Unidos Publicación No. 2003/0054509 Al. La mezcla del sustrato fue bombeada hacia la columna a una velocicad que dio el Punto de Goteo de Mettler deseado (40.5-41.6°C (105.107°F)) del aceite producido que sale de la columna de lipasa, y la velocidad de bombeo fue ajustada durante las pruebas para compensar la pérdida de la actividad de lipa sa. i La Figura 2 muestra el ajuste de las velocidades de bombeo para el sustrato tratado con la sílice recubierta con arginina (diamantes cerrados ) , sílice recubierta con lisina ( círculos abiertos) , sílice recubierta con histidina (triángulos cerrados) , y silice recubierta con cisteína (estrellas "*") . Los datos de la Figura 2 se resumen en la Tabla 2.

Fue obtenido un efecto protector significativo con la lisina y la histidina sobre silice. La cisteína I proporcionó un efecto protector pequeño sobre la vida media de la lipasa (15 dias) con relación al control (13 días). i EJEMPLO 3 9.4 g de enzima (TL IM de Novozymes) se empaquetaron en una columna forrada de 1.5 cm de diámetro (30 cm de longitud) a una altura de 11.8 cm, que dio 20.8 ml de volumen de lecho de enzima. El agua que circula a través del forro de la columna fue mantenida a 70°C. Una mezcla de sustrato del aceite de soya y aceite de soya completamente hidrogenado (80/20 en peso) fue preparada e introducida a la parte superior de la columna utilizando una bomba de HPLC para al-imentar el sustrato. La bomba de HPLC y las líneas de alimentación fueron envueltas con cinta de calentamiento y cubiertas con aislamiento para prevenir cualquier solidif icación del sustrato. El grado de reacción enzimática fue moriiitorizado por el cambio de las propiedades de fusión del sustrato y los productos, medido como el Punto de Goteo Mettler (MDP) como se describe en la Solicitud de los Estados Unidos Publicación No. 2003/0054509 Al. La mezcla de sustrat-jo fue bombeada a la columna a una velocidad que dio el Punto ?ie Goteo de Mettler deseado (40.5-41.6°C (105-107°F)) de aceite que sale de la columna, y la velocidad de bombeo fue ajustada durante las pruebas para compensar la pérdida de actividad de lipasa. ! ¡ El aceite sustrato estuvo constituido en algunos casos :on aceite de soya refinado, blanqueado, desodorizado (RBD) , el cual es equivalente al producto del comercio. En alguno.; casos el aceite sustrato estuvo constituido con aceite que había sido únicamente la refinación y el aceite de blanqueo (RB) . El último aceite forma un sustrato preferido desde el punto de vista de costo de proceso. Estos aceites formaron la porción liquida del aceite en el sustrato dado en la tabla 3.

Tabla 3. Ejemplos comparativos. Todos los aceites sustrato contenían 20% de aceite de soya completamente hidrogenado y 80% del aceite indicado en la tabla.

Material de Aceite líquido Vida media de Productividad la la lipasa g de aceite/g precolumna (días) de enzima Ninguno Soya RB 462.4 Ninguno Soya RBD 681.9 Ninguno Soya RBD 798.4 (repetición) Ninguno Soya RBD, 423.3 temperatura de la columna 80°C Ninguno Soya RBD, 618.4 temperatura de la columna 90°C Ninguno Soya RBD, (aceite 10 786.4 sustrato recientemente re- desodorizado) La vida media de la enzima utilizando el sustrato elaborado con aceite RBD promedió 8 días, y fue únicamente 6 días utilizando el sustrato elaborado con la soya RBD. Mediante la re-desodorización de la mezcla de aceite de soya RBD y aceite de soya completamente hidrog nado, la vida media fue extendida hasta 10 días.

EJEMPLO 4 Las pruebas de la tabla 4 fueron conducidas como el Ejemplo 3 a 70°C, y los materiales fueron probados como precolumnas de aceite mediante la adición de un volumen de lecho igual de material hacia la columna sobre la superficie de la lipasa inmovilizada. El grado de reacciepn de la enzima fue monitorizada por el cambio de las propiedades de fusión del sustrato y los productos, medidos por el Punto de Goteo de Mettler (MDP) como se describe en la Solicitud de los Estados Unidos Publicación No. 2003/0054509. La mezcla de sustrato fue bombeada hacia la columna a una velocidad que dio el Punto de Goteo de Mettler deseado (40-5-41.6°C (105-107°F ) del aceite producto que sale de la columna de lipasa r y la velocidad de bombeo fue ajustada durante las pruebas para compensar la pérdida de actividad de lipasa. utilizada previamente en las reacciones de interestif icación i idénticas hasta que la actividad había sido agotada .

EJEMPLO 5 Las resinas de intercambio iónico fueron probadas como precolumnas (Tabla 5) ; de otro modo las pruebas fueron conducidas a 70°C cono en el Ejemplo 3. Para elaborar una mezcla re-desodorizada, el aceite de soya completamente hidrogenado fue fundido en aceite de soya RBD y la mezcla fundida fue desodorizada hasta condiciones de refinación de aceite comestible estándares. El grado de reacción de la enzirra fue monitorizado por el cambio de las propiedades de fusión de sustrato y los productos, medidos por el Punto de Goteo Mettler (MDP) como se describe en la Solicitud de los Estados Unidos Publicación No. 2003/0054509 Al. La mezcla de sustrato fue bombeada a la columna a la velocidad que dio el Punto de Goteo Mettler de (40.5-41-.6°C (105-107°F)) del aceite producto que sale de la columna de lipasa y la velocidad de bombeo fue ajustada durante las pruebas para corrpensar la pérdida de actividad de lipasa.

Tabla 5 Resina precolumna Aceite líquido Vida media de la Productividad g de lipasa aceite/g de enzima EXC04 Soya RBD, re- 861.9 desodorizada A-7*de Rohm & Haas Soya RBD 825.2 A-7 de Rohm & Haas, Soya RBD 16 1478.3 deshidratada" La¡ resina de intercambio iónico fue secada a 110°C por 2 horas La resina de intercambio iónico fue secada en etanol y el etanol fue eliminado antes del uso.

Cuando la resina A-7 de Rohm & Haas fue secada con etanol Cuando se secó TVP toda la noche a 70-80°C antes del uso, se notó un incremento en la vida media y la productividad de la lipasa.

EJEMPLO 7 Se llevó a cabo una reacción de interesterificación a escala de producción utilizando la proteína vegetal texturizada marca TVP® de Archer-Daniels-Midland Company como medio de purificación. Un lote de TVP® que tiene código de produce 165 840 (granulos de 1.58 mm (1/16 de pulgada)) se secó sobre un secador de banda a 135°C (275°F) durante la fabricación hasta un contenido final de humedad de 2%. El TVP® secado fue empaquetado dentro de dos columnas de medio de purificación (diámetro de 30.5 cm (12 pulgadas) y altura 116.8 cm (46 pulgadas), 39.7 kg (87.5 libras) de TVP® por columna1). La lipasa (108.8 kg (240 libras) (Novozy e TL IM) ) se empaquetó en una columna de reactor caliente (diámetro de 60.96 cjm (2 pies) y altura de 152.4 cm (5 pies)). El aceite de alimentación (una mezcla que comprende 80 paites de aceite de soya desodorizado, blanqueado, refinado y 20 partes de aceite de soya completamente hidrogenado) se mezcló y se calentó a 70°C para asegurar la fusión completa del aceite de soya hidrogenado y el mezclado completo de los componentes de aceite de alimentación, El aceite de alimentación fue bombeado a través de las columnas de los medios de purificación desde el fondo hasta la parte superior en serie antes de entrar al fondo de la columna del reactor caliente a una velocidad de flujo inicial de I aproximadamente 15.14 l/minuto (4 galones/minuto). El aceite interestificado salió de la parte superior de la columna del reactor caliente como producto. La velocidad de flujo de aceite de alimentación fue reducida conforme la actividad de la enzjlma disminuía lentamente para proporcionar el producto que tenía propiedades de fusión consistentes. El grado de reacción de la enzima fue monitorizado por el cambio de las propiedades de fusión del sustrato y los productos, medido por el Punto de Goteo Mettler (MDP) como se describe en la Solicitud de los Estados Unidos Publicación No. 2003/0054509 Al. La mezcla de sustrato fue bombeada a la columna a una velocidad que dio el Punto de Goteo de Mettler deseado (40.5-41.6°C (105-107°F)) del aceite producto que sale de la columna de lipasa, y la velocidad de bombeo fue ajustada durante las pruebas para compensar la pérdida de la actividad de lipasa. La temperatura de la columna del reactor caliente se mantuvo a 70°C. 1 La lipasa produjo 451,241 kg (994,800 libras) de aceite interesterificado que contenía propiedades de fusión satisfactorias (Punto de Goteo de Mettler deseado (40.5- 41.6°C (105-107°F) ) , de modo que la productividad de la lipasa fue de 4,145 g de aceite/g de enzima.

Mientras que la invención anterior ha sido descrita en cierto detalle para fines de claridad y entendimiento, podrá ser apreciado por una persona experta en la técnica a partir de una lectura de esta descripción que pueden ser realizados diversos cambios en la forma y detalle, sin apartarjse del alcance verdadero de la invención y las reivindicaciones anexas. Todas las publicaciones mencionadas anteriqrmente son incorporadas en la presente por referencia en su totalidad. Se hace constar que con relación a esta fecha el i mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (1)

1. de soya. 3. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la proteína vegetal es una proteína vegeta]- texturizada. 4. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la proteína vegetal texturizada es una prfteína de soya texturizada. i 5. El método de conformidad con la reivindicación i 1, caracterizado porque la proteína vegetal tiene un contenido de humedad menor de aproximadamente 5%. 6. El método de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado porque el contenido de humedad de la proteír a vegetal es de aproximadamente 2% a aproximadamente 4%. 7. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el sustrato inicial comprende además cualquiera de los ácidos grasos libres, alcoholes monohidroxílicos, alcoholes polihidroxílicos, esteres o combinaciones de los mismos. 8. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque uno o más glicéridos comprende cualqurera de (i) grasa de mantequilla, manteca de cacao, sustitutos de manteca de cacao, manteca de illipe, manteca de coco, grasa de leche, grasa de mowrah, manteca de phulwara, g::asa de sal, grasa de shea, cebo de borneo, manteca, l nolina, cebo de carne, cebo de carnero, cebo, grasa animal, aceite de cañóla, aceite de ricino, aceite de coco, aceite de cilantro, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de avellana, aceite de semilla de henequén, aceite de jatrofa, aceite de semilla de lino, aceite de hueso de mango, aceite de espuma de salvia, aceite de mostaza, aceite de pata de vaca, aceite de oliva, aceite de palma, aceite de semilla de palma, aceite de cacahuate, aceite de semilla de colsa, aceite de salvado de arroz, aceite de cártamo, aceite de sasanqua, manteca de shea, aceite de frijol de soya, aceite de semilla de girasol, aceite del subproducto de la producción de pulpa química de madera, aceite de tsubaki, aceites vegetales, aceites marinos que pueden ser convertidos a grasas plásticas, aceites marinos que pueden ser convertidos a grasas sólidas, aceite de sábalo, aceite de pez vela, aceite de hígado de bacalao, aceite de áspero anaranjado, aceite de pile herd, aceite de sardina, aceites de ballena, aceites de arenque, 1, 3-dipalmitoil-2-monooleina (POP), 1(3)- palmitoil-3 (1) -estearoil-2-monooleina (POSt), 1,3- distearoil-2-monooleina (StOSt) , triglicérido, diglicérido, monoglicérido, triglicérido de ácido behénico, trioleina, tripalmitina, tristearina, oleína de palma, estearina de palma, oleína de semilla de palma, estearina de semilla de palma, triglicéridos de ácidos grasos de cadena media, o combinaciones de los I mijsmos; (ii) aceites parcialmente hidrogenados procesados de (i) ; I (iii) a'ceites completamente hidrogenados procesados de (i) ; o (iv) adeites fraccionados de (i). 9. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el sustrato inicial comprende además I esteres . 10. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque los esteres comprenden cualquiera de los esteres de cera, esteres de alquilo, esteres de metilo, esteres de etilo, esteres de isopropilo, esteres de octadedilo, esteres de arilo, esteres de propilenglicol, esteres, de etilenglicol, esteres de 1, 2-propanodiol o esteres de 1, 3- ropanodiol . 11. El método de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque los esteres son formados a partir de la esterificación o transesterificación de alcoholes I monohidroxilicos o alcoholes polihidroxílicos. 12. El método de conformidad con la reivindicación 11, car Iacterizado porque los alcoholes monohidroxílicos o los alcoholes polihidroxílicos son alcoholes primarios, secundarios o terciarios de compuestos de cadena anular, i lineal | o ramificada. 13. El método de conformidad con la reivindicación ! 12, caracterizado porque los alcoholes monohidroxílicos comprenden cualquiera de alcohol metílico, alcohol isopropilico, alcohol alílico, etanol, propanol, n-butanol, i iso-butanol, sec-butanol, ter-butanol, n-pentanol, iso-pentanbl, n-hexanol o alcohol octadecilico. ! 14. El método de conformidad con la reivindicación 12, daracterizado porque los alcoholes polihidroxílicos comprenden cualquiera de glicerol, propilenglicol, etilenglicol, 1, 2-propanodiol o 1, 3-propanodiol 15. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el sustrato inicial comprende además alcoholes monohidroxilicos primarios, secundarios o terciarios de compuestos de cadena anular, lineal o ramificada. 16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque los alcoholes monohidroxílicos comprenden cualquiera de alcohol metílico, alcohol isopropilico, alcohol áulico, etanol, propanol, n-butanol, iso-butanol, sec-butanol, ter-butanol, n-pentanol, iso-pentanol, n-hexanol o alcohol octadecílico. 17. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el sustrato inicial comprende además alcoholes monohidroxilicos primarios, secundarios o 1 terciarios de alcoholes polihidroxílicos compuestos de cadena anular lineal o ramificada. ! 18. El método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque los alcoholes polihidroxílicos comprenden cualquiera de glicerol, propilenglicol, etilenglicol, 1, 2-propanodiol o 1, 3-propanodiol . I ¡ 19. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el sustrato inicial comprende además uno o más ácidos grasos. 20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque uno o más ácidos grasos comprenden cadenas! de carbono de aproximadamente 4 a aproximadamente 22 átomos de carbono de longitud. 21. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque los ácidos grasos comprenden cualquiera de ácido palmitico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico, ácido linolénico, ácido araquidónico, ácido erúcicq, ácido caproico, ácido caprílico, ácido laúrico, ácido j mirístico, eicosapentaenoico (EPA) , ácido docosat|exaenoico (DHA) , ácido 5-eicosenoico, ácido butírico, ácido ? -ünolénico o ácido linoleico conjugado. 22. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque uno más tipos de proteína vegetal y la lipa sa son empaquetados en una o más columnas. 23. El método de conformidad con la reivindicación i 22, caracterizado porque las columnas son columnas forradas en las cuales es regulada la temperatura del sustrato inicial, el sustrato purificado, uno o más tipos de proteina I vegetal o la lipasa. ! I 24. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el sustrato purificado es preparado al mezclar el sustrato inicial con uno o más tipos de proteína vegetal en un tanque para la reacción de purificación en suspensión por lotes, o el mezclado del sustrato inicial en una serie de tanques para una serie de reacciones de purificación en suspensión por lotes. 25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque el sustrato purificado es separado de une' o más tipos de proteína vegetal por medio de filtra ion, centrifugación o concentración, antes de hacer reacci nar el sustrato purificado con la lipasa. 26. El método de conformidad con la reivindicación 25, ca racterizado porque comprende además el mezclado del sustra o purificado con la lipasa con un tanque para una reaccn?n en suspensión por lotes, y haciendo fluir el sustra" o purificado a través de una columna que contiene la lipasa 27. El método de conformidad con la reivindicación 1, caríaeterizado porque un lecho de uno o más tipos de proteíhas vegetales colocados sobre un lecho de la lipasa dentro de una columna. 28. El método de conformidad con la reivindicación 27, ca :acterizado porque la columna es una columna forrada en la cua1 es regulada la temperatura del sustrato inicial, sustra :o purificado, uno o más tipos de proteína vegetal o la lipasa 29. El método de conformidad con la reivindicación 1, car, eterizado porque la lipasa es obtenida a partir de una linea i elular eucariótica o procariótica cultivada. 30. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la lipasa es una lipasa 1,3-selectiva . 31. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la lipasa es una lipasa no selectiva. 32. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque comprende además: el monitoreo de la actividad enzimática al medir una o más propiedades físicas de las grasas o aceites después de haber entrado en contacto con la lipasa; y el ajuste de la duración del tiempo para el cual el sustrato purificado hace contacto con la lipasa, o ajustando la temperatura del sustrato inicial, el sustrato purificado, uno o más tipos de proteína vegetal o la lipasa, en respuesta a un cambio en actividad enzimática para producir grasas o aceites que tienen una proporción incrementada sustancjialmente uniforme de esterificación, interesterificación, o transesterificación con relación al sustrato inicial, 33. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque comprende además: ¡ el ajuste de la cantidad y tipo de uno o más tipos i de proteína vegetal en respuesta a los cambios de las propiedades físicas de las grasas o aceites, para incrementar la productividad enzimática de la lipasa. 34. El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque una o más propiedades físicas incluyen la temperatura del punto de goteo de Mettler de las grasas o aceites. 35. El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque una o más propiedades físicas incluyen el perfil de contenido de grasas sólida de las grasas ¡o aceites. 36. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque las grasas o aceites producidos son 1, 3-diglicéridos . ' 37. El método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque uno o más glicéridos comprenden aceite de soya parcialmente hidrogenado, aceite de maíz i parcialmente hidrogenado, aceite de semilla de algodón parcialmente hidrogenado, aceite de soya completamente hidrogenado, aceite de maíz completamente hidrogenado, o aceite de semilla de algodón completamente hidrogenado. 38. El método de conformidad con la reivindicación 1, car ¡acterizado porque uno o más glicéridos comprenden aceite de palma parcialmente hidrogenado, aceite de semilla de pa Ima parcialmente hidrogenado, aceite de palma completamenté hidrogenado, aceite de semilla de palma completamenté hidrogenado, aceite de palma fraccionado, aceite de semilla de palma fraccionado, aceite de palma parcialmente hidrogenado fraccionado o aceite de semilla de palma parcialmente hidrogenado fraccionado. 39. Un método para producir grasas o aceites, caracte -rizado porque comprende: poner en contacto un sustrato inicial que comprende uno o más glicéridos, con uno o más tipos de proteína vegetal para generar un sustrato purificado; y poner en contacto el sustrato purificado con lipasa para efectuar la purificación, la interesterificación o la transessterificación, creando las grasas o los aceites; en donde uno o más aminoácidos son recubiertos sobre uno o más tipos de medios de purificación. 40. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el sustrato inicial comprende además i cualquiera de los ácidos grasos libres, alcoholes monohidroxilicos, alcoholes polihidroxílicos, esteres o combinaiciones de los mismos. 41. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque uno o más glicéridos comprenden I cualquiera de (i) grjasa de mantequilla, manteca de cacao, sustitutos de manteca de cacao, manteca de illipe, manteca de coco, asa de leche, grasa de mowrah, manteca de phulwara, grasa de sal, grasa de shea, cebo de borneo, manteca, lanolina, cebo de carne, cebo de carnero, cebo, grasa animal, aceite de cañóla, aceite de ricino, aceite de coco, aceite de cilantro, aceite de maiz, aceite de semilla de algodón, aceite de avellana, aceite de semilla de henequén, aceite de jatrofa, aceite de semilla de lino, aceite de hueso de mango, aceite de espuma de salvia, aceite de mostaza, aceite de pata de vaca, aceite de oliva, aceite de palma, aceite de sejt-illa de palma, aceite de cacahuate, aceite de semilla I dej colsa, aceite de salvado de arroz, aceite de cártamo, aceite de sasanqua, manteca de shea, aceite de frijol de soya, aceite de semilla de girasol, aceite del subproducto de la producción de pulpa química de madera, aceite de tsubaki, aceites vegetales, aceites marinos que pueden ser convertidos a grasas plásticas, aceites malrinos que pueden ser convertidos a grasas sólidas, aceite de sábalo, aceite de pez vela, aceite de hígado de bacalao, aceite de áspero anaranjado, aceite de pile herd, aceite de sardina, aceites de ballena, aceites de arenque, 1, 3-dipalmitoil-2-monooleina (POP), 1(3)-palmitoil-3 (1) -estearoil-2-monooleina (POSt), 1,3-distearoil-2-monooleina (StOSt) , triglicérido, di¡glicérido, monoglicérido, triglicérido de ácido behénico, trioleina, tripalmitina, tristearina, oleína de palma, estearina de palma, oleína de semilla de paIma, estearina de semilla de palma, triglicéridos de ácidos grasos de cadena media, o combinaciones de los mismos; (ii) aceites parcialmente hidrogenados procesados de (i) ; [iii) aceites completamente hidrogenados procesados de (i) ; o (iv) aceites fraccionados de (i¡ 42. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el sustrato inicial comprende además esteres. 43. El método de conformidad con la reivindicación 42, car!acterizado porque los esteres comprenden cualquiera de los éstleres de cera, esteres de alquilo, esteres de metilo, esteres de etilo, esteres de isopropilo, esteres de octadecilo, esteres de arilo, esteres de propilenglicol, esteres de etilenglicol, esteres de 1, 2-propanodiol o esteres i de 1, 3-jpropanodiol . 44. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque los esteres son formados a partir de la esterificación o transesterificación de alcoholes monohicroxílicos o alcoholes polihidroxílicos. 45. El método de conformidad con la reivindicación 44, caijacterizado porque los alcoholes monohidroxílicos o los I alcoholes polihidroxílicos son alcoholes primarios, I secundarios o terciarios de compuestos de cadena anular, lineal o ramificada, 46. El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque los alcoholes monohidroxílicos comprenden cualquiera de alcohol metílico, alcohol isopropílico, alcohol alílico, etanol, propanol, n-butanol, iso-butanol, sec-butanol, ter-butanol, n-pentanol, iso-pentano1, n-hexanol o alcohol octadecílico. 47. El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque los alcoholes polihidroxílicos comprenden cualquiera de glicerol, propilenglicol, etilenglicol, 1, 2-propanodiol o 1, 3-propanodiol . 48. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el sustrato inicial comprende además alcoholes monohidroxílicos primarios, secundarios o terciarios de compuestos de cadena anular, lineal o ramificada . 49. El método de conformidad con la reivindicación 48, c racterizado porque los alcoholes monohidroxílicos comprenden cualquiera de alcohol metílico, alcohol isopropílico, alcohol áulico, etanol, propanol, n-butanol, iso-butanol, sec-butanol, ter-butanol, n-pentanol, iso-pentancl, n-hexanol o alcohol octadecilico. i 50. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el sustrato inicial comprende además alcoholes polihidroxílicos primarios, secundarios o terciarios de compuestos de cadena anular, lineal o ramificada . 51. El método de conformidad con la reivindicación I 50, caracterizado porque los alcoholes polihidroxílicos comprenden cualquiera de glicerol, propilenglicol, etilenglicol, 1, 2-propanodiol o 1, 3-propanodiol . 1 52. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque el sustrato inicial comprende además uno o más ácidos grasos. 53. El método de conformidad con la reivindicación 52, caí acterizado porque uno o más ácidos grasos comprenden cadenas de carbono de aproximadamente 4 a aproximadamente 22 átomos de carbono de longitud. 54. El método de conformidad con la reivindicación 53, carjacterizado porque la longitud comprende cualquiera de I ácido palmítico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleijco, ácido linolénico, ácido araquidónico, ácido erúcicoj, ácido caproico, ácido caprílico, ácido láurico, ácido mirístico, eicosapentaenoico (EPA) , ácido docosahjexaenoico (DHA), ácido 5-eicosenoico, ácido butírico, ácido ?-linolénico o ácido linoleico conjugado. 55. El método de conformidad con la reivindicación 39, carjacterizado porque uno más tipos de proteína vegetal y la lipasa son empaquetados en una o más columnas. I 56. El método de conformidad con la reivindicación 55, caracterizado porque las columnas son columnas forradas en las cuales es regulada la temperatura del sustrato inicial , el sustrato purificado, uno o más tipos de proteína vegetal o la lipasa. 57. El método de conformidad con la reivindicación 39, ca acterizado porque el sustrato purificado es preparado al mezciar el sustrato inicial con uno o más tipos de proteína vegetal en un tanque para la reacción de purificación en suspensión por lotes, o el mezclado del sustrato inicial en una serie de tanques para una serie de reaccicnes de purificación en suspensión por lotes. 58. El método de conformidad con la reivindicación 57 , ca .acterizado porque el sustrato purificado es separado de une o más tipos de proteína vegetal por medio de filtrae ion, centrifugación o concentración, antes de hacer reacciqnar el sustrato purificado con la lipasa. 59. El método de conformidad con la reivindicación 58, caracterizado porque comprende además el mezclado del sustrat o purificado con la lipasa con un tanque para una reaccic)n en suspensión por lotes, y haciendo fluir el sustra 0 purificado a través de una columna que contiene la lipasa. 60. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque un lecho de uno o más tipos de proteírias vegetales escolocado sobre un lecho de la lipasa dentro de una columna. 61. El método de conformidad con la reivindicación 60, ca acterizado porque la columna es una columna forrada en la cua 1 es regulada la temperatura del sustrato inicial, sustrato purificado, uno o más tipos de proteína vegetal o la lipasa. 62. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque la lipasa es obtenida a partir de una líníea celular eucariótica o procariótica cultivada. 63. El método de conformidad con la reivindicación 39, cairacterizado porque la lipasa es una lipasa 1,3-selecti-va . 64. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque la lipasa es una lipasa no selectiva . 65. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque comprende además: el monitoreo de la actividad enzimática al medir una o más propiedades físicas de las grasas o aceites después de haber entrado en contacto con la lipasa; y el ajuste de la duración del tiempo para el cual el sustrato purificado hace contacto con la lipasa, o ajustando la temperatura del sustrato inicial, el sustrato purificado, I uno o r-jás tipos de proteína vegetal o la lipasa, en respuesta I a un cambio en actividad enzimática para producir grasas o aceites que tienen una proporción incrementada sustancjialmente uniforme de esterificación, interesterificación, o transesterificación con relación al sustrato inicial. 66. El método de conformidad con la reivindicación 65, caracterizado porque comprende además el ajuste de la cantidad y tipo de uno o más tipos de prdteína vegetal en respuesta a los cambios de las propiedades físicas de las grasas o aceites, para incrementar la productividad enzimática de la lipasa. j 67. El método de conformidad con la reivindicación i 66, ca.racterizado porque una o más propiedades físicas incluyein la temperatura del punto de goteo de Mettler de las grasas o aceites. 68. El método de conformidad con la reivindicación 66, caracterizado porque una o más propiedades físicas incluyen el perfil de contenido de grasas sólida de las grasas o aceites. 69. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque las grasas o aceites producidos son 1, 3-di licér?dos . 70. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque uno o más glicéridos comprenden aceite de soya parcialmente hidrogenado, aceite de maíz I parcialmente hidrogenado, aceite de semilla de algodón parcialmente hidrogenado, aceite de soya completamente hidrogenado, aceite de maíz completamente hidrogenado, o aceite de semilla de algodón completamente hidrogenado. 71. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque uno o más glicéridos comprenden aceite de palma parcialmente hidrogenado, aceite de semilla de palma parcialmente hidrogenado, aceite de palma completamente hidrogenado, aceite de semilla de palma completamenté hidrogenado, aceite de palma fraccionado, aceite de semilla de palma fraccionado, aceite de palma parcialmente hidrogenado fraccionado o aceite de semilla de palma parcialmente hidrogenado fraccionado. 72. El método de conformidad con la reivindicación 39, ca racterizado porque uno o más aminoácidos comprenden cualquiera de arginina, lisina, histidina o cisteína. 73. Un método para producir grasas o aceites, caracterizado porque comprende: poner en contacto un sustrato inicial que comprende uno o más glicéridos, con uno o más tipos de proteína vegetal para generar un sustrato purificado; y poner en contacto el sustrato purificado con lipasa para e -ectuar la purificación, la interesterificación o la transesterificación, creando las grasas o los aceites; en donciie uno o más péptidos o polipéptidos son recubiertos sobre uno o más tipos de medios de purificación. 74. El método de conformidad con la reivindicación 73, caracterizado porque la vida media de la actividad enzimát ica de la lipasa es más de aproximadamente 2.5 veces mayor <que la vida media de la actividad enzimática resultante de poner en contacto la lipasa con el sustrato inicial. 75. Un método para producir grasas o aceites, caracterizado porque comprende: poner en contacto un sustrato inicial que comprende uno o más glicéridos, con una o más proteínas para generar un sustrato purificado; y I poner en contacto el sustrato purificado con la lipasa para efectuar la esterificación, interesterificación o transesterificación, creando las grasas o aceites. 76. El método de conformidad con la reivindicación 75, caracterizado porque la vida media de la actividad enzimática de la lipasa es más de aproximadamente 2.5 veces mayor que la vida media de la actividad enzimática resultante de poner en contacto la lipasa con el sustrato inicial. 77. Un método para producir grasas o aceites, caracterizado porque comprende: ¡ poner en contacto un sustrato inicial que comprende uno o ¡más glicéridos, con uno o más tipos de proteínas texturi¡zadas, para generar un sustrato purificado; y poner en contacto el sustrato purificado con la lipasa para efectuar la esterificación, interesterificación o transesterificación, creando las grasas o los aceites.