MX2012009342A

MX2012009342A - Compuestos de union del dominio de repeticion de inhibidores de proteinas de apoptosis de baculovirus.

Info

Publication number: MX2012009342A
Application number: MX2012009342A
Authority: MX
Inventors: Alain Laurent; Scott Jarvis; Melanie Proulx; Yannick Rose; Irina Denissova; Kenza Dairi; James B Jaquith
Original assignee: Pharmascience Inc
Priority date: 2010-02-12
Filing date: 2011-02-11
Publication date: 2012-11-29
Also published as: EP2534170B1; RU2567544C2; SG10201501095WA; CN102985439B9; RU2012139033A; NZ602368A; ZA201206802B; EP2534170A1; CN102985439A; IL221069A0; AU2011214057A1; EP2534170A4; AU2011214057B2; US20130040892A1; MX340870B; KR20120140658A; US9284350B2; WO2011098904A1; BR112012020113A2; EP3263583A1

Abstract

Un compuesto de fórmula 1: (Ver formula) o una sal del mismo, así como también métodos de preparación de los compuestos de fórmula 1, métodos de uso de los compuestos de fórmula 1 para tratar trastornos proliferativos como el cáncer, y compuestos, composiciones y métodos relacionados.

Description

COMPUESTOS DE UNIÓN DEL DOMINIO DE REPETICIÓN DE INHIBIDORES DE PROTEÍNAS DE APOPTOSIS DE BACULOVIRUS REFERENCIA CRUZADA CON SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama la prioridad de las solicitudes provisionales de patente de EE. UU. 61/303,809, presentada el 12 de febrero de 2010, y 61/415,638, presentada el 19 de noviembre de 2010.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La apoptosis o muerte celular programada ocurre normalmente en el desarrollo normal y mantenimiento de los tejidos sanos en los organismos multicelulares. Es un proceso complejo que resulta en la eliminación de células dañadas, enfermas o de desarrollo redundante, en ausencia de signos de inflamación o necrosis.

Se sabe que rutas apoptóticas intrínsecas están descontroladas en una variedad de trastornos que incluyen el cáncer y trastornos linfoproliferativos, enfermedades neurodegenerativas y afecciones autoinmunes e inflamatorias tales como la esclerosis múltiple y la artritis reumatoide. Por ejemplo, las células cancerosas adquieren la capacidad de superar o vencer la apoptosis y continúan con proliferación inapropiada a pesar de fuertes señales pro-apoptóticas, tales como hipoxia, citocinas endógenas, tratamientos de radiación y quimioterapia. Las células anormalmente resistentes a la apoptosis también se han asociado con enfermedades autoinmunes e inflamatorias. Por ejemplo, se ha observado resistencia a la apoptosis en los sinoviocitos similares a fibroblasto en la artritis reumatoide (RA), y en los queratinocitos en la psoriasis. También se han observado células T anormalmente resistentes a la apoptosis en varias enfermedades autoinmunes o inflamatorias como la esclerosis múltiple, artritis reumatoide, púrpura trombocitopénica idiopática y alepocia areata. También se ha mostrado que células efectoras patogénicas tienen resistencia a las señales apoptóticas normales. Se cree que la resistencia a la apoptosis normal es causada, por lo menos en parte, por un aumento de la actividad de las rutas anti-apoptóticas o la expresión de genes anti-apoptóticos.

Las caspasas son una parte integral de la ruta apoptótica. Las caspasas son una familia de enzimas proteolíticas de la clase de cisteína proteasas que se sabe que inician y ejecutan la apoptosis. En las células normales las caspasas están presentes como zimógenos inactivos, pero son activadas catalíticamente por cualquiera de varias señales externas. Las señales activadoras de caspasa incluyen, por ejemplo, la liberación de citocinas o agentes inmunológcos después de la activación del receptor de muerte impulsada por ligando, o la liberación de factores mitocondriales tales como citocromo C después de daño celular genotóxico, quimiotóxico o inducido por radiación.

Los inhibidores de proteínas de apoptosis (lAPs) constituyen una familia de proteínas que inhiben las caspasas, suprimiendo así la apoptosis celular. Debido a su función central en la regulación de la actividad de caspasa, los lAPs son capaces de inhibir la muerte celular programada desde una variedad amplia de disparadores. Se cree que los lAPs tienen una función en la pérdida de los mecanismos de control del crecimiento celular homeostáticos o endógenos, y también en la resistencia a los fármacos quimioterapéuticos y terapia de radiación.

Los lAPs contienen de uno a tres dominios estructurales homólogos conocidos como dominios de repetición de IAP de baculovirus (BIR). También pueden contener un dominio de dedo de zinc RING en el extremo C, con capacidad de inducir ubiquitinación de moléculas de unión de IAP por medio de su función de ligasa E3. Los lAPs humanos conocidos como XIAP, HIAP1 (también conocido como clAP2) y HIAP2 (clAP1) tienen, cada uno, tres dominios de BIR y un dedo de zinc RING carboxi terminal. Otro IAP conocido como NAIP tiene tres dominios de BIR (BIR1 , BIR2 y BIR3), pero no dominio de RING. Otros lAPs conocidos como Livin, TslAP y MLIAP solo tienen un solo dominio BIR y un solo dominio RING.

El inhibidor de apoptosis enlazado al cromosoma X (XIAP) es un ejemplo de un IAP que puede inhibir, por medio de unión directa, la caspasa iniciadora, conocida como caspasa 9 y las caspasas efectoras conocidas como caspasa 3 y caspasa 7. Es por medio del dominio BIR3 que el XIAP se une a la caspasa 9 y la inhibe. El dominio BIR2-enlazador de XIAP inhibe la actividad de las caspasas 3 y 7. Los dominios de BIR también se han asociado con las interacciones de los lAPs con el factor asociado con el receptor del factor de necrosis de tumor (TRAFs) 1 y 2, y con TAB1 , como proteínas adaptadoras que efectúan señalización de supervivencia por medio de la activación de NFkB. El XIAP también puede inducir la eliminación de caspasas por medio de la actividad de ligasa E3 del dominio de dedo de zinc RING, que induce degradación proteosómica mediada por ubiquitinación.

Así, los lAPs funcionan como un freno directo en la cascada de apoptosis, inhibiendo las caspasas activas y redirigiendo la señalización celular a un modo pro-supervivencia. La sobreexpresión sostenida de uno o más miembros de la familia de proteínas IAP, por lo tanto, permite que las células enfermas, como las células de cáncer y las células implicadas en enfermedad autoinmune, eviten la apoptosis. De hecho, se ha mostrado que la sobreexpresión de IAP es un pronóstico de desenlace clínico malo en múltiples tipos de cáncer. Además, la supresión de la expresión de IAP por medio de estrategias de ARN de antisentido o ARNci sensibiliza las células de tumor a una amplia variedad de ataques apoptóticos que incluyen quimioterapia, radioterapia y activación mediada por ligando de los receptores de muerte. En el caso de XIAP, esto se ha mostrado en tipos tan diversos de cáncer como leucemia y cáncer ovárico. La sobreexpresión de clAP1 y clAP2 también se ha observado en una diversa variedad de malignidades que incluyen meduloblastoma, carcinoma de célula renal, glioblastoma y carcinoma gástrico. Por estas razones, los lAPs son un blanco terapéutico válido y se cree que los compuestos que inhiben su expresión o función tienen utilidad significativa en el tratamiento de enfermedades proliferativas asociadas con la apoptosis descontrolada, que incluyen el cáncer y enfermedades autoinmunes e inflamatorias.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Se provee un compuesto de la fórmula 1 : o una sal del mismo, en donde: R1 es H o alquilo; R2 es metilo o etilo; R3 es alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, heteroarilo, o arilo, cualquiera de los cuales puede estar sustituido opcionalmente con amino, alquilamino o alcoxi; R4 y R5, cada uno independientemente, es H o alquilo; R6 es H, halógeno o alcoxi; X es O, S, CH2, -(CH2)2- o CH-R7, en donde R7 es NR8, OR8, NC(0)OR8, NHC(0)R8 o NHS02R8, en donde R8 es alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, arilalquilo, o heteroarilo, cualquiera de los cuales puede estar sustituido opcionalmente con alquilo o halógeno; y G es: en donde R9 es alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido; o (2) un anillo de azol o pirrol sustituido o no sustituido, fusionado opcionalmente con un arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterociclilo sustituido o no sustituido. También se proveen métodos para preparar un compuesto de fórmula 1 y sales del mismo, y también compuestos útiles como intermediarios en la preparación de un compuesto de fórmula 1 y sales del mismo.

En otro aspecto, la invención provee una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo y un vehículo farmacéuticamente aceptable, así como también un método para prepararla, que comprende combinar un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Además, la invención provee un método para intensificar la apoptosis en una célula, el método comprendiendo poner en contacto una célula con un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo. También se provee un método de tratamiento de una enfermedad o trastorno caracterizado por apoptosis insuficiente, el método comprendiendo administrar a un sujeto en necesidad del mismo un compuesto o composición farmacéutica como se describen arriba, a fin de tratar la enfermedad o trastorno.

También se provee una sonda que comprende un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo y una marca detectable, y también un método de uso de la sonda para identificar un compuesto que se une a un dominio BIR de IAP, el método comprendiendo, (a) poner en contacto un dominio BIR de IAP con la sonda para formar un complejo de sonda:dominio BIR, la sonda siendo desplazable por un compuesto de prueba; (b) medir una señal de la sonda a fin de establecer un nivel de referencia; (c) poner en contacto el complejo de sonda:dominio BIR con un compuesto de prueba; (d) medir la señal de la sonda; y (e) comparar la señal del paso (d) con el nivel de referencia, en donde una modulación de la señal (por ejemplo, un aumento o disminución de la señal con respecto al nivel de referencia) indica que el compuesto de prueba se une al dominio BIR.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Se provee un compuesto de fórmula 1 : o una sal del mismo. La invención abarca todos los compuestos descritos por la fórmula 1 y sus sales, sin limitación. Sin embargo, para fines ilustrativos se exponen aquí los aspectos y elementos preferidos de la invención.

De acuerdo con la fórmula 1 , G puede ser un grupo con la estructura: en donde R9 es alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido. Por ejemplo, R9 puede ser un grupo fenilo sustituido opcionalmente con halógeno o alcoxi.

Alternativamente, G puede ser un anillo de azol o pirrol sustituido o no sustituido, fusionado opcionalmente con un anillo de arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterociclilo sustituido o no sustituido. Por ejemplo, G puede ser: en donde X1 es CH o N, R10 es H, halógeno, hidroxilo, alquilo, alcoxi, arilo, amino, o NHC(0)-alquilo, y R11 es hidrógeno, alquilo, NHC(0)CH3. G también puede ser: en donde X2 es NH, NR12, O, o S, y cada R 2 es independientemente hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, NHC(O)CH3, o fenilo sustituido opcionalmente con uno o más grupos alquilo, alcoxi o halógeno.

De acuerdo con una modalidad, G es: o un pirrol sustituido o no sustituido, ejemplos específicos del cual incluyen, sin limitación: o un imidazol sustituido o no sustituido, ejemplos específicos del cluyen, sin limitación: o un pirazol sustituido o no sustituido, ejemplos específicos del cual incluyen, sin limitación: o un triazol sustituido o no sustituido, ejemplos específicos del cual incluyen, sin limitación: o un tiazol sustituido o no sustituido, ejemplos específicos del cual incluyen, sin limitación: en donde R11 es NHC(O)CH3 o fenilo; o un tetrazol sustituido o no sustituido, ejemplos específicos del cual incluyen, sin limitación: o un oxazol sustituido o no sustituido, ejemplos específicos del cual incluyen, sin limitación: o un isoxazol sustituido o no sustituido, ejemplos específicos del cual incluyen, sin limitación: o un oxadiazol sustituido o no sustituido, ejemplos específicos del cual incluyen, sin limitación: o un ¡ndol sustituido o no sustituido, ejemplos específicos del cual incluyen, sin limitación: o una imidazo[1 ,2-a]piridina sustituida o no sustituida, ejemplo: específicos de la cual incluyen, sin limitación: o una imidazo[1 ,2-a]pirimidina sustituida o no sustituida, ejemplos específicos de la cual incluyen, sin limitación: o una indolizina sustituida o no sustituida, ejemplos específicos de la cual incluyen, sin limitación: o una tetrahidroindolizina sustituida o no sustituida, ejemplos específicos de la cual incluyen, sin limitación: o una tetrahidroimidazo[1 ,2-a]piridina sustituida o no sustituida, ejemplos específicos de la cual incluyen, sin limitación: o un 1 H-benzo[d]imidazol sustituido o no sustituido, ejemplos específicos del cual incluyen, sin limitación: o un 6,7-dihidro-5H-pirrolo[1 ,2-a]imidazol sustituido sustituido, ejemplos específicos del cual incluyen, sin limitación: o un benzo[d]oxazol sustituido o no sustituido, ejemplos específicos del cual incluyen, sin limitación: o una ¡midazo[1 ,2-a]p¡razina sustituida o no sustituida, ejemplos específicos de la cual incluyen, sin limitación: R puede ser cualquier alquilo, tal como alquilo de C C3 (por ejemplo, metilo, etilo, o propilo, incluso isopropilo), preferiblemente metilo, y R2 es metilo o etilo.

R3 puede ser alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, heteroarilo o arilo, y además puede estar sustituido opcionalmente con amino, alquilamino o alcoxi. Ejemplos no limitativos de grupos R3 adecuados incluyen alquilo de C^-CQ o C- -C4 (por ejemplo, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, t-butilo, etc.), ciclohexilo, ciclopropilo y tetrahidro-2H-piranilo. Por ejemplo, R3 puede ser: Convenientemente, R3 es ter-butilo, ciclohexilo, tetrahidropiranilo, , R4 y R5 son, independientemente, hidrógeno o alquilo, tal como alquilo de C1-C6. R6 puede ser hidrógeno, halógeno o un alcoxi, tal como alcoxi de C1-C6. Convenientemente, R6 es hidrógeno, flúor o un alcoxi de Cr C3, tal como metoxi o etoxi.

X puede ser O, S, CH2, -(CH2)2- o CH-R7, en donde R7 es NR8, OR8, NHC(O)OR8, NHC(0)R8 o NHS02R8, y R8 es alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, arilalquilo o heteroarilo. R8 puede estar sustituido adicionalmente con alquilo, alcoxi, haloalquilo o halógeno. De acuerdo con algunas modalidades, X es CH2. En otras modalidades, X es CH-NHC(0)R8, y R8 es alquilo, arilo, arilalquilo, alcoxi o heteroarilo, cualquiera de los cuales puede estar sustituido opcionalmente con alquilo, alcoxi, haloalquilo o halógeno. En otras modalidades, X es CH-OR8 y R8 es arilo o arilalquilo que puede estar sustituido opcionalmente con halógeno. Ejemplos específicos de X incluyen, sin limitación: o, más particularmente: Cualquiera de los grupos sustituyentes anteriores, tanto en aspectos generales como preferidos, se puede utilizar en cualquier combinación para proveer un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo. En el cuadro 1 y en la sección de ejemplos se proveen ejemplos específicos del compuesto de fórmula 1 o sus sales.

Siempre que se indique una escala del número de átomos de una estructura (por ejemplo un alquilo, haloalquilo, alquilamino, alquenilo, etc., de C Ce, Ci-C6, C C4 o C1-C3), se contempla específicamente que se puede usar cualquier subescala o número individual de átomos de carbono dentro de la escala indicada. De esta manera, por ejemplo, la cita de una escala de 1-8 átomos de carbono (por ejemplo, CrC8), 1-6 átomos de carbono (por ejemplo, C Ce), 1-4 átomos de carbono (por ejemplo, CrC4), 1-3 átomos de carbono (por ejemplo, C1-C3), o 2-8 átomos de carbono (por ejemplo, C2-Cs), usada con respecto a cualquier grupo químico referido en la presente (por ejemplo, alquilo, haloalquilo, alquilamino, alquenilo, etc.), abarca y describe específicamente 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 átomos de carbono, según sea apropiado, y también cualquier subescala (por ejemplo, 1-2 átomos de carbono, 1-3 átomos de carbono, 1-4 átomos de carbono, 1-5 átomos de carbono, 1-6 átomos de carbono, 1-7 átomos de carbono, 1-8 átomos de carbono, 2-3 átomos de carbono, 2-4 átomos de carbono, 2-5 átomos de carbono, 2-6 átomos de carbono, 2-7 átomos de carbono, 2-8 átomos de carbono, 3-4 átomos de carbono, 3-5 átomos de carbono, 3-6 átomos de carbono, 3-7 átomos de carbono, 3-8 átomos de carbono, 4-5 átomos de carbono, 4-6 átomos de carbono, 4-7 átomos de carbono, 4-8 átomos de carbono, 5-6 átomos de carbono, 5-7 átomos de carbono, 5-8 átomos de carbono, 6-7 átomos de carbono, o 6-8 átomos de carbono, según sea apropiado).

Como se usa aquí, a menos que se especifique de otra manera, el término "sustituido" significa un grupo sustituido con uno a cuatro o más sustituyentes. Ejemplos de los sustituyentes incluyen, por ejemplo, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, cicloalquenilo, aroilo, halógeno, haloaiquilo (por ejemplo, trifluorometilo), haloalcoxi (por ejemplo, trifluorometoxi), hidroxi, alcoxi, alquiltioéter, cicloalquiloxi, heterociclooxi, oxo, alcanoilo, arilo, arilalquilo, alquilarilo, heteroarilo, heteroarilalquilo, alquilheteroarilo, heterociclo, ariloxi, alcanoiloxi, amino, alquilamino, arilamino, arilalquilamino, cicloalquilamino, heterocicloamino, amino mono- y di-sustituido (en donde los dos sustituyentes del grupo amino se seleccionan de alquilo, arilo o arilalquilo), alcanoilamino, aroilamino, aralcanoilamino, alcanoilamino sustituido, arilamino sustituido, aralcanoilamino sustituido, tiol, alquiltio, ariltio, arilalquiltio, cicloalquiltio, heterociclotio, alquiltiono, ariltiono, arilalquiltiono, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, sulfonamido (por ejemplo, SO2NH2), sulfonamido sustituido, nitro, ciano, carboxi, carbamilo (por ejemplo, CONH2), carbamilo sustituido (por ejemplo, CONH-alquilo, CONH-arilo, CONH-arilalquilo, o casos en donde hay dos sustituyentes sobre el nitrógeno seleccionados de alquilo o arilalquilo), alcoxicarbonilo, arilo, arilo sustituido, guanidino, heterocicloalquilo sustituido o no sustituido, heteroarilo sustituido o no sustituido (tal como indolilo, imidazolilo, furilo, tienilo, tiazolilo, pirroltdilo, piridilo, pirimidilo, etcétera).

Como se usa aquí, el término "azol" incluye un anillo de cinco miembros que contiene nitrógeno, que contiene por lo menos otro nitrógeno, azufre u oxígeno miembro del anillo. Ejemplos no limitativos de los azoles incluyen pirazol, imidazol, triazol, tetrazol, pentazol, tiazol, isotiazol, oxazol e isooxazol.

Como se usa aquí, el término "pirrol" incluye un anillo heterocíclico aromático de cinco miembros que contiene un átomo de nitrógeno. Como se usa aquí, pirrol también abarca los derivados hidrogenados 1-, 2- y 3-pirrolina.

Como se usa aquí, el término "alquilo" incluye grupos de hidrocarburo alifático saturado tanto de cadena ramificada como recta que tienen el número especificado de átomos de carbono (por ejemplo, alquilo de C1-C20, alquilo de C Ce, alquilo de C1-C6, etc.). Por ejemplo, un alquilo de C C6 incluye grupos alquilo con 1 , 2, 3, 4, 5 ó 6 carbonos en una disposición lineal o ramificada. Similarmente, un alquilo de C C4 incluye grupos alquilo que tienen 1 , 2, 3 ó 4 carbonos en una disposición lineal o ramificada, y un alquilo de C1-C20 incluye grupos alquilo que tienen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ó 20 carbonos en una disposición lineal o ramificada. Los alquilos saturados de cadena recta representativos incluyen -metilo, -etilo, -n-propilo, -n-butilo, -n-pentilo, -n-hexilo, -n-heptilo, -n-octilo, -n-nonilo y -n-decilo; mientras que los alquilos saturados ramificados representativos incluyen -isopropilo, -sec-butilo, -isobutilo, -ter-butilo, -isopentilo, 2-metilbutilo, 3-metilbutilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo, 4-rnetilpentilo, 2-metilhexilo, 3-metilhexilo, 4-metilhexilo, 5-metilhexilo, 2,3-dimetilbutilo, 2,3-dimetilpentilo, 2,4-dimetilpentilo, 2,3-dimetilhexilo, 2,4-dimetilhexilo, 2,5-dimetilhexilo, 2,2-dimetilpentilo, 2,2-dimetilhexilo, 3,3-dimetilpentilo, 3,3-dimetilhexilo, 4,4-dimetilhexilo, 2-etilpentilo, 3-etilpentilo, 2-etilhexilo, 3-etilhexilo, 4-etilhexilo, 2-metil-2-etilpentilo, 2-metil-3-etilpentilo, 2- metil-4-etilpentilo, 2-metil-2-etilhexilo, 2-metil-3-etilhexilo, 2-metil-4-etilhexilo, 2,2-dietilpentilo, 3,3-dietilhexilo, 2,2-dietilhexilo, 3,3-dietilhexilo, etcétera. Un grupo alquilo puede estar sustituido o no sustituido. Para los fines de descripción de la invención, el término "alquilo" abarca un "alquileno" cuando sea apropiado.

Como se usa aquí, el término "alquenilo" significa un grupo hidrocarburo insaturado de cadena recta o ramificada que tiene el número especificado de átomos de carbono, en donde por lo menos dos de los átomos de carbono están enlazados entre sí por un enlace doble y tienen una regioquímica E o Z o combinaciones de las mismas. Por ejemplo, un grupo alquenilo de C2-C6 incluye grupos de hidrocarburo que tienen 2, 3, 4, 5 ó 6 carbonos en una disposición lineal o ramificada, en donde por lo menos dos de los átomos de carbono están enlazados entre si por un enlace doble. Ejemplos del alquenilo de C2-C6 incluyen etenilo (vinilo), 1-propenilo, 2-propenilo, 1-butenilo, 2-butenilo, -isobutilenilo, -1-pentenilo, -2-pentenilo, -3-metil-1-butenilo, -2-met¡l-2-butenilo, -2,3-dimetil-2-butenilo, -1-hexenilo, -2-hexenilo, -3-hexenilo, - -heptenilo, -2-heptenilo, -3-heptenilo, -1-octenilo, -2-octenilo, -3-octenilo, -1-nonenilo, -2-nonenilo, -3-nonenilo, -1 -decenilo, -2-decenilo, -3-decenilo, etcétera. Un grupo alquenilo puede estar sustituido o no sustituido. Para los fines de descripción de la invención, el término "alquenilo" abarca un "alquenileno" cuando sea apropiado.

Como se usa aquí, el término "alquinilo" significa grupos de hidrocarburo insaturado de cadena recta que tienen el número especificado de átomos de carbono, y en donde por lo menos dos átomos de carbono están enlazados entre sí por un enlace triple. Por ejemplo, C2-C4 como en alquinilo de C2-C4 incluye grupos que tienen 2, 3 ó 4 átomos de carbono en una cadena, en donde por lo menos dos de los átomos de carbono están enlazados entre sí por un enlace triple. Ejemplos de estos alquinilos incluyen etinilo, 1-propinilo, 2-propinilo, -1-butinilo, -2-butinilo, -1-pentinilo, -2-pentinilo, -3-metil-1 -butinilo, -4-pentinilo, -1-hexinilo, -2-hexinilo, -5-hexinilo, -1-heptinilo, -2-heptinilo, -6-heptinilo, -1-octinilo, -2-octinilo, -7-octinilo, -1-noninilo, -2-noninilo, -8-noninilo, - -decinilo, -2-decinilo, -9-decinilo, etcétera. Un grupo alquinilo puede estar sustituido o no sustituido. Para los fines de descripción de la invención, el término "alquinilo" abarca un "alquinileno".

Como se usa aquí, el término "cicloalquilo" significa un grupo hidrocarburo alifático monociclico saturado que tiene el número especificado de átomos de carbono, por ejemplo C3-C7 como en cicloalquilo de C3-C7 incluye grupos que tienen 3, 4, 5, 6 ó 7 carbonos en una disposición monocíclica. Ejemplos del cicloalquilo de C3-C7 arriba definido incluyen, sin limitación, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo. Para los fines de descripción de la invención el término "cicloalquilo" abarca un "cicloalquileno".

Como se usa aquí, el término "cicloalquenilo" significa un grupo hidrocarburo alifático monociclico insaturado que tiene el número especificado de átomos de carbono, por ejemplo C3-C7 como en cicloalquenilo de C3-C7 incluye grupos que tienen 3, 4, 5, 6 o 7 carbonos en una disposición monociclica. Ejemplos del cicloalquenilo de C3-C7 arriba definido incluyen, sin limitación, ciclopentenilo y ciclohexenilo. Para los fines de descripción de la invención, el término "cicloalquenilo" abarca un "cicloalquenileno".

Como se usa aquí, el término "halo" o "halógeno" significa flúor, cloro, bromo y yodo.

Como se usa aquí, el término "haloalquilo" significa un alquilo como se define arriba en el cual cada átomo de hidrógeno puede estar reemplazado sucesivamente por un átomo de halógeno. Ejemplos del haloalquilo incluyen, sin limitación, CH2F, CHF2 y CF3.

Como se usa aquí, el término "arilo", solo o combinado con otro radical, significa un grupo carbocíclico monocíclico aromático que contiene 6 átomos de carbono, que además puede estar fusionado con un segundo o un tercer grupo carbocíclico de 5 ó 6 miembros que puede ser aromático, saturado o insaturado. Arilo incluye, sin limitación, fenilo, indanilo, 1-naftilo, 2-naftilo, tetrahidronaftilo, 1-antracenilo, 2-antracenilo, 9-antracenilo, 1-fenantrilo, 2-fenantrilo, 3-fenantrilo, 4-fenantrilo y 5-fenantrílo. Los arilos pueden estar unidos a otro grupo en una posición adecuada del anillo cicloalquilo o del anillo aromático. Por ejemplo: Las líneas dibujadas perpendicularmente a un enlace entre los miembros de un anillo, tales como las líneas de flecha mostradas arriba, indican un enlace que puede estar unido a cualquiera de los átomos de anillo adecuados (por ejemplo, un punto de unión en cualquier miembro adecuado del anillo). Para los fines de descripción de la invención, el término "arilo" abarca un "arileno" cuando sea apropiado.

Como se usa aquí, el término "heteroarilo" significa un sistema de anillo monocíclico o bicíclico de hasta diez átomos, en donde por lo menos un anillo es aromático y contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en O, N y S. El sustituyente heteroarilo puede estar unido ya sea por medio de un átomo de carbono del anillo o por medio de uno de los heteroátomos. Ejemplos de los grupos heteroarilo incluyen, sin limitación, tienilo, bencimidazolilo, benzo[b]tienilo, furilo, benzofuranilo, piranilo, isobenzofuranilo, cromenilo, xantenilo, 2H-pirrolilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, piridilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, indolizinilo, isoindolilo, 3H-indolilo, indolilo, indazolilo, purinilo, 4H-quinolizinilo, isoquinolílo, quinolilo, ftalazinilo, naftiridinilo, quinoxalinilo, quinazolinilo, cinolinilo, pteridinilo, isotiazolilo, ¡socromanilo, cromanilo, isoxazolilo, furazanilo, indolinilo, isoindolinilo, tiazolo[4,5-b]-piridina, y derivados de fluoresceína tales como: O^^O-^^O Para los fines de descripción de la invención, el término "heteroarilo" abarca un "heteroarileno".

Como se usa aquí, el término "heterociclilo" significa un sistema de anillo no aromático de 5, 6 ó 7 miembros que contiene de 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en O, N y S. ejemplos de los heterociclos incluyen, sin limitación, pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, piperidilo, pirrolinilo, piperazinilo, imídazolidinilo, morfolinilo, imidazolinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, y Para los fines de descripción de la invención, el término "heterociclilo" abarca un "heterociclileno".

Como se usa aquí, el término "heterobiciclo", solo o combinado con otro radical, significa un heterociclo como se define arriba, fusionado con otro grupo cíclico que es un heterociclo, un arilo o cualquier otro grupo cíclico definido en la presente. Ejemplos de dichos heterobiciclos incluyen, sin limitación, cumarina, benzo[d][1 ,3]dioxol, 2,3-dihidrobenzo[b][1 ,4]dioxina y 3,4-dihidro-2H-benzo[b][1 ,4]dioxepina.

Como se usa aquí, el término "heteroátomo" significa O, S o N.

Siempre que cualquier grupo sustituyente indicado sea incompatible con los métodos sintéticos descritos en la presente, el sustituyente se puede proteger con un grupo protector (PG) adecuado que sea estable en las condiciones de reacción usadas en estos métodos. El grupo protector se puede quitar en un punto adecuado de la secuencia de reacción del método para proveer un intermediario deseado o el compuesto objetivo. Los grupos protectores adecuados y los métodos de protección y desprotección de diferentes sustituyentes que usan tales grupos protectores adecuados, son muy conocidos para los expertos en la materia; ejemplos de estos se encuentran en T. Greene y P. Wuts, "Protecting Groups in Chemical Synthesis" (3a ed.), John Wiley & Sons, NY (1999), que se incorpora aquí como referencia en su totalidad. Ejemplos de grupos protectores usados en toda la descripción incluyen, sin limitación, Fmoc, Bn, Boc, CBz y COCF3. En algunos casos, se puede seleccionar específicamente un sustituyente para ser reactivo bajo las condiciones de reacción usadas en los métodos de esta invención. Bajo estas circunstancias, las condiciones de reacción convierten el sustituyente seleccionado en otro sustituyente que es útil en un compuesto intermediario en los métodos de esta invención, o es un sustituyente deseado en un compuesto objetivo.

La invención abarca cualquier sal de los compuestos descritos en la presente, especialmente las sales farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de adición de ácido y base. Las sales de adición de ácido abarcan, por ejemplo, sales formadas con ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, etcétera, o ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido salicilico, etcétera. Las sales de adición de base incluyen las preparadas por medio de la adición de una base inorgánica o una base orgánica a un ácido libre. Las sales derivadas de bases inorgánicas incluyen, sin limitación, las sales de sodio, potasio, litio, amonio, calcio, magnesio, hierro, zinc, cobre, manganeso, aluminio, etcétera. Las sales derivadas de bases orgánicas incluyen, sin limitación, sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas que incluyen aminas sustituidas naturales, aminas cíclicas y resinas básicas de intercambio iónico, tales como resinas de isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, 2-dietilamínoetanol, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colína, betaína, etilendiamina, glucosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina, poliamina, etcétera. Preferiblemente, la sal retiene la eficacia biológica deseada y las propiedades de la forma de ácido o base libre del compuesto.

El compuesto de fórmula 1 o su sal se une preferiblemente a un dominio BIR de un IAP. Ejemplos de proteínas de unión de BIR incluyen, sin limitación, caspasas y proteínas de unión de BIR derivadas de mitocondria, tales como Smac, Omi/WTR2A, etcétera. Ejemplos de lAPs incluyen, sin limitación, NAIP de humano o ratón (Birc 1), HIAP-1 (clAP2, Birc 3), HIAP-2 (clAP1 , Birc 2), XIAP (Birc 4), survivin (Birc 5), livin (ML-IAP, Birc 7), ILP-2 (Birc 8) y Apollon/BRUCE (Birc 6) (véanse, por ejemplo las patentes de EE. UU. Nos. 6,107,041 ; 6,133,437; 6,156,535; 6,541 ,457; 6,656,704; 6,689,562; y Deveraux y Reed, Genes Dev. 13, 239-252, 1999; Kasof y Gomes, J. Biol. Chem., 276, 3238-3246, 2001 ; Vucic et al., Curr. Biol. 10, 1359-1366, 2000; Ashab eí al. FEBS Lett., 495, 56-60, 2001 , cuyo contenido se incorpora aquí como referencia). Los dominios BIR de los lAPs están documentados en la literatura relevante y se caracterizan normalmente por varios residuos de aminoácido invariables que incluyen cisteinas conservadas y un residuo de hisitidina conservado dentro de una secuencia particular. Los residuos del dominio BIR de algunos lAPs humanos incluyen, por ejemplo, los residuos 21-93 (BIR1), 159-230 (BIR2) y 258-330 (BIR3) de XIAP (Referencia Suiza-Prot P98170), residuos 41-113 (BIR1 ), 179-250 (BIR2) y 264-336 (BIR3) de HIAP-1 (Referencia XP-006266), y residuos 24-96 (BIR1), 164-235 (BIR2) y 250-322 (BIR3) de HIAP-2 (Referencia XP-006267) (véase Verhagen et al., Genome Biology 2(7): revisiones 3009.1-3009.10 (2001 )).

Convenientemente, el compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo se une a un dominio BIR de XIAP, preferiblemente XIAP humana. La unión del dominio BIR se puede detectar por medio de cualquier técnica adecuada. Por ejemplo, la unión del dominio BIR se puede detectar basándose en la capacidad de los compuestos de prueba para competir con la unión de una proteina de unión de dominio BIR conocida (por ejemplo inhibiendo o impidiendo la unión de una proteína de unión del dominio BIR conocida con un dominio BIR dado). Se conocen proteínas de unión del dominio BIR naturales y sintéticas. En algunas modalidades, el compuesto de fórmula 1 o su sal se une a uno o más lAPs (tales como NAIP, HIAP-1 , HIAP-2, XIAP, survivin, livin, ILP-2, o Apollon/BRUCE) con una K¡ menor o igual a aproximadamente 500 µ?, 250 µ?, 100 µ?, 50 µ?, 25 µ?, 10 µ?, 1 µ?, 500 ??, 250 ??, 100 ??, o 50 ?? (en donde un valor de K¡ más bajo representa una mayor afinidad de unión). En algunas modalidades, el compuesto de fórmula 1 o su sal se une a uno o más lAPs con una K¡ de aproximadamente 500 µ? a aproximadamente 50 nM, tal como de aproximadamente 250 µ? a aproximadamente 50 nM, de aproximadamente 100 µ? a aproximadamente 1 µ?, o de aproximadamente 1 µ? a aproximadamente 50 nM. En algunas modalidades, el compuesto de fórmula 1 o su sal se une tanto a XIAP como a HIAP2 con una K¡ en una de las escalas arriba indicadas.

Los compuestos descritos en la presente pueden contener uno o más centros asimétricos, ejes quirales y planos quirales. Así, estos compuestos pueden dar lugar a enantiómeros, diasterómeros y otras formas estereoisoméricas, y se pueden definir en función de la estereoquímica absoluta, tal como (R) o (S), o (D) o (L) para aminoácidos, y/o por la actividad óptica, tal como (+) y (-). La presente invención abarca todos y cada uno de tales estereoisómeros posibles, presentes en forma pura o sustancialmente pura (por ejemplo, una forma ópticamente pura), o como una mezcla de isómeros en cualquier proporción, incluso mezclas racémicas. Los isómeros (+) y (-). (R) y (S), o (D) y (L) ópticamente activos se pueden preparar mediante síntesis quiral (asimétrica) usando reactivos, sustratos, catalizadores o disolventes ópticamente activos (sintones quirales o reactivos quirales), o convirtiendo un enantiómero en otro por medio de transformación asimétrica. Alternativamente, los isómeros se pueden resolver partiendo de mezclas de las formas isoméricas (por ejemplo, mezclas racémicas) usando las técnicas convencionales que incluyen sin limitación HPLC de fase inversa, formación de sales diasteroisoméricas, que se pueden separar por cristalización, cromatografía de líquido o gas-líquido, reacción selectiva de un estereoisómero con un reactivo específico de enantiómero. Cuando el enantiómero deseado se convierte en otra entidad química por medio de una técnica de separación, se puede requerir un paso adicional para formar la forma enantiomérica deseada.

Algunos compuestos de la presente invención también pueden existir, bajo ciertas condiciones, en formas aniónicas, catiónicas o zwitteriónicas. Los compuestos de fórmula 1 y otras fórmulas descritas específicamente en la presente abarcan tales formas alternativas.

De acuerdo con una modalidad preferida, el compuesto de fórmula 1 o su sal presenta biodisponibilidad oral cuando se le administra a un mamífero, preferiblemente un humano. Convenientemente, el compuesto de fórmula 1 o su sal presentan una biodisponibilidad oral de aproximadamente 10% o más, aproximadamente 15% o más, o aproximadamente 20% o más. De preferencia, el compuesto de fórmula 1 o su sal presenta una biodisponibilidad oral de aproximadamente 25% o más, aproximadamente 30% o más, aproximadamente 50% o más, o incluso aproximadamente 75% o más (por ejemplo, aproximadamente 80% o más, aproximadamente 90% o más, o aproximadamente 95% o más). En algunas modalidades, el compuesto de fórmula 1 o su sal presentan una biodisponibilidad oral de entre aproximadamente 25% y aproximadamente 50%, entre aproximadamente 50% y aproximadamente 75%, o entre aproximadamente 75% y aproximadamente 100%.

Métodos de síntesis Los compuestos de la invención descritos en la presente se pueden preparar mediante cualquiera de varias técnicas. De acuerdo con un aspecto de la invención, los compuestos se pueden preparar de acuerdo con cualquiera de los métodos A-C ilustrados en los esquemas 1-4.

El método A consiste en un método de preparación de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo y un método de preparación de compuestos intermediarios asociados con el mismo, que comprende uno o más de los siguientes pasos: (1) combinar un derivado de prolinal (1-i) con una amina que tiene la fórmula: seguido por reducción con un hidruro, para proveer el compuesto intermediario 1-ii, en donde PG1 es un grupo protector; (2) proteger el grupo amino del compuesto intermediario 1-ii con un grupo protector (PG2) que es diferente de PG1, seguido por eliminación de PG1 para proveer el compuesto intermediario 1-iii; (3) acoplar el compuesto intermediario 1-iii con PG3(H)N(R3)CHC02H usando agentes de acoplamiento de aminoácido, en donde PG3 es un grupo protector que es diferente de PG2, seguido por eliminación de PG3 para proveer el compuesto intermediario 1-iv; (4) acoplar el compuesto intermediario 1-iv con PG (R )N(R2)CHCO2H usando agentes de acoplamiento de aminoácido, en donde PG4. es un grupo protector que es diferente de PG2, para proveer el compuesto intermediario 1-v; (5) eliminar el PG2 del compuesto intermediario 1-v para proveer el compuesto intermediario 1 -vi; y (6) acilar el compuesto intermediario 1-vi combinando el compuesto intermediario 1-vi con un compuesto de fórmula LG-C(0)-G, en donde "LG" es un grupo saliente, seguido por eliminación de PG4 para proveer el compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo. El método A se ilustra más abajo en el esquema 1. Cada compuesto intermediario del método A, y también cada paso individual del proceso para preparar el compuesto intermediario, se consideran un aspecto adicional de la invención. De esta manera, se provee un compuesto de cualquiera de las fórmulas 1-i a 1-v del esquema 1 , incluyendo las sales del mismo. También se provee un método de preparación de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo, o un compuesto intermediario de cualquiera de las fórmulas 1-i a 1-vi del esquema 1 , incluyendo las sales del mismo, que comprende uno o más de los pasos (1) a (6) del método A arriba descrito.

ESQUEMA 1 El método B provee una forma alternativa de preparación de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo y también de preparación de compuestos intermediarios asociados con el mismo, que comprende uno o más de los siguientes pasos: (1) acoplar un derivado de prolinol (compuesto intermediario 2-i) con un compuesto de fórmula PG3(H)N(R3)CHC02H usando reactivos de acoplamiento de aminoácido, en donde PG3 es un grupo protector, seguido por eliminación de PG3 para proveer el compuesto intermediario 2-ii; (2) acoplar el compuesto intermediario 2-ii con un compuesto de la fórmula PG (R1)N(R2)CHC02H para proveer el compuesto intermediario 2-iii, en donde PG4 es un grupo protector; (3) oxidar el compuesto intermediario 2-iii para proveer el aldehido correspondiente, compuesto intermediario 2-iv; (4) aminación reductiva del compuesto 2-iv, por ejemplo, combinando el compuesto 2-iv con una amina, seguido por reducción con un hidruro apropiado, para proveer el compuesto intermediario 1-vi; (5) acilación del compuesto 1-vi combinando el compuesto 1-vi con un compuesto de fórmula LG-C(0)-G, en donde LG es un grupo saliente, seguido por eliminación de PG4, para proveer un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo. El método B se ilustra abajo en el esquema 2. Cada compuesto intermediario del método B, y también cada paso individual del proceso para preparar el compuesto intermediario, se consideran un aspecto adicional de la invención. De esta manera, se provee un compuesto de cualquiera de las fórmulas 2-¡ a 2-iv o de fórmula 1-vi del esquema 2, incluyendo las sales del mismo. También se provee un método de preparación de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo, o un compuesto intermediario de cualquiera de las fórmulas 2-i a 2-iv o fórmula 1-vi del esquema 2, incluyendo las sales del mismo, que comprende uno o más de los pasos (1 ) a (5) del método B arriba descrito.

ESQUEMA 2 3) eliminación de PG 3 El método C provee otro método alternativo de preparación de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo, y también de preparación de compuestos intermediarios asociados con el mismo, que comprende uno o más de los siguientes pasos: (1) acilación del compuesto intermediario 1-i¡ (preparado como se describe en el método A, o mediante otros métodos), combinando el compuesto intermediario 1-ii con un compuesto de fórmula LG-C(0)-G, en donde PG1 es un grupo protector, seguido por eliminación de PG1 para proveer el compuesto intermediario 4-i; (2) acoplar el compuesto 4-i con un compuesto que tiene la fórmula PG3(H)N(R3)CHC02H usando agentes de acoplamiento de aminoácido, en donde PG3 es un grupo protector, seguido por eliminación de PG3 para proveer el compuesto intermediario 4-ii; (3) acoplamiento del compuesto intermediario 4-ii con un compuesto que tiene la fórmula PG4(R1)N(R2)CHC02H usando agentes de acoplamiento de aminoácido para proveer el compuesto intermediario 1 -vi, en donde PG4 es un grupo protector, seguido por la eliminación de PG4 para proveer un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo. El método C se ¡lustra abajo en el esquema 3. Cada compuesto intermediario del método C, y también cada paso individual del proceso para preparar el compuesto intermediario, se consideran un aspecto adicional de la invención. De esta manera, se provee un compuesto de la fórmula 4-i o 4-ii del esquema 3, incluyendo las sales del mismo. También se provee un método de preparación de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo, o un compuesto intermediario de la fórmula 4-i o 4-¡i del esquema 3, incluyendo las sales del mismo, que comprende uno o más de los pasos (1 ) a (3) del método C arriba descrito.

ESQUEMA 3 Utilidad Los compuestos de la invención se pueden usar para cualquier propósito. Sin embargo, se cree que los compuestos de fórmula 1 y sus sales provistos en la presente son especialmente útiles como compuestos de unión del dominio BIR de IAP. Por lo tanto, los compuestos de fórmula 1 y sus sales descritos en la presente se pueden usar para intensificar la apoptosis en una célula o sujeto, particularmente en células que presentan apoptosis anormalmente baja, o en sujetos que padecen o tienen una predisposición a tener una enfermedad o afección asociada con apoptosis insuficiente. Apoptosis insuficiente significa un grado de apoptosis que es anormal bajo ciertas condiciones, o de otra manera que conduce o causa un estado patológico. De esta manera, la apoptosis insuficiente abarca, por ejemplo, un estado en donde una enfermedad es causada o continúa porque células nocivas para el sujeto no han experimentado apoptosis. Las afecciones o enfermedades asociadas con apoptosis insuficiente abarcan enfermedades y trastornos de proliferación celular que incluyen, sin limitación, cáncer, enfermedades autoinmunes, trastornos inflamatorios y proliferación celular inducida por procedimientos médicos que incluyen, sin limitación, cirugía, angioplastia, etcétera.

Así, se provee un método para intensificar o inducir apoptosis en una célula, que comprende administrar un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo a la célula. Los compuestos de fórmula 1 o sus sales se pueden administrar a una célula por medio de cualquier método adecuado, por ejemplo, poniendo en contacto la célula con un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo, o una composición que comprende un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo. Las células objetivo pueden incluir células de cualquier tipo que presenten apoptosis insuficiente, en otras palabras, se caracterizan por resistencia a la apoptosis o porque ejercen funciones patológicas que pueden ser anuladas por apoptosis, incluyendo sin limitación células cancerosas e inflamatorias. Las células cancerosas pueden ser de cualquier tipo de malignidad que incluye, sin limitación, células de cáncer de ovario, colorrectal, hematológico, de mama, pulmón o páncreas. Las células inflamatorias pueden ser de cualquier tipo que incluye, sin limitación, células B, células T, macrófagos, células dendríticas y granulocitos. Ejemplos adicionales de células objetivo incluyen células endometriales ectópicas y queratinocitos psoriáticos.

La apoptosis de una célula o una población de células es intensificada si aumenta la apoptosis en cualquier grado en presencia del compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo, en comparación con la apoptosis mostrada en ausencia del compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo. La intensificación de la apoptosis, de esta manera, abarca la inducción de la apoptosis en una célula que de otra manera no experimentaría la apoptosis, y también el aumento de la velocidad a la cual una célula experimenta apoptosis, el aumento del número de células apoptóticas en una población celular, o el aumento de la sensibilidad de una célula a los estímulos apoptóticos. Cuando se mide en una población de células, preferiblemente el número de células que experimentan apoptosis aumenta por lo menos aproximadamente 25%, preferiblemente por lo menos aproximadamente 50%, por lo menos aproximadamente 75%, o por lo menos aproximadamente 100% (por ejemplo, un aumento de 1 vez o 2 veces). Para detectar la intensificación de la apoptosis se puede usar cualquier técnica para medir y comparar el grado de apoptosis en las células. Tales técnicas pueden estar basadas, por ejemplo, en los cambios de proliferación celular, cambios en la permeabilidad de la membrana celular, reducción de la actividad metabólica de la mitocondria, fragmentación del ADN (escalonamiento del ADN), o condensación de la cromatina, alteraciones en la asimetría de la membrana (por ejemplo, translocación de la fosfatoilserina del lado citoplásmico al extracelular de la membrana), activación de caspasas apoptóticas, liberación de citocromo C o factor inhibitorio de apoptosis (AIF) hacia el citoplasma por la mitocondria, o cualquier otra base conocida como indicadora de la apoptosis.

Los compuestos de fórmula 1 y sus sales también se pueden usar para alterar la liberación de las citocinas inflamatorias de una célula del sistema inmune, reduciendo así el potencial inflamatorio de la célula. Las citocinas inflamatorias incluyen citocinas proinflamatorias y citocinas antiinflamatorias. La liberación de las citocinas es alterada si la cantidad o velocidad de liberación de una o más citocinas aumenta o disminuye en cualquier grado en presencia del compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo, en comparación con la cantidad o velocidad de liberación de dichas citocinas en ausencia del compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo. Convenientemente, la cantidad o velocidad de liberación de cualquier citocina es alterada (aumentada o disminuida) por lo menos aproximadamente 25%, de preferencia por lo menos aproximadamente 50%, por lo menos aproximadamente 75%, o por lo menos aproximadamente 100% (por ejemplo, un aumento de por lo menos 1 vez o 2 veces). Para detectar la alteración de la liberación de las citocinas inflamatorias se puede usar cualquier técnica para medir y comparar la liberación de citocina en las células. Tales técnicas pueden estar basadas, por ejemplo, directamente en los cambios de la cantidad de citocina en una muestra o cultivo de células, o indirectamente detectando respuestas celulares a concentraciones incrementadas o reducidas de citocina.

Sin desear limitarse a ninguna teoría o mecanismo particular, se cree que los compuestos de fórmula 1 se unen, o inhiben de otra manera, a XIAP, clAP-1 , y/o clAP-2. De esta manera, en un aspecto relacionado, la invención provee un método de reducción de la actividad o cantidad de proteína de XIAP, clAP-1 , y/o clAP-2 en una célula, que comprende poner en contacto la célula con un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo. La actividad y cantidad de proteína de XIAP, clAP-1 , y/o clAP-2 se pueden medir mediante las pruebas y técnicas de cuantificación de proteína conocidas. Todos los otros aspectos del método son como se describe anteriormente.

Los compuestos de la invención descritos en la presente se pueden administrar a una célula in vitro. Como se usa aquí, el término "in vitro" significa que la célula no está en un organismo vivo. Los compuestos de la invención también se pueden administrar a una célula in vivo o ex vivo. Como se usa aquí, el término "in vivo" significa que la célula es una parte de un organismo vivo, por ejemplo, cuando la célula está en un sujeto hospedero. El término "ex vivo", como se usa aquí, se refiere a la administración de un compuesto a una célula o población de células in vitro, seguido por la administración de la célula o población de células a un sujeto hospedero. Frecuentemente las células son autólogas para el sujeto.

Cuando el compuesto se administra a una célula en un sujeto, el sujeto es convenientemente un mamífero, especialmente un humano. Los métodos de acuerdo con este aspecto de la invención son más adecuados para usarse en conjunto con un sujeto que padece una enfermedad, o está en riesgo de desarrollar una enfermedad, asociada con una apoptosis insuficiente o una enfermedad autoinmune o inflamatoria. Cuando la célula está en un sujeto, el compuesto de fórmula 1 o su sal se pueden administrar a la célula administrando al sujeto el compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo, o una composición que los comprende (por ejemplo una composición farmacéutica). Preferiblemente la administración de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo a una célula en un sujeto, que padece una enfermedad asociada con una apoptosis insuficiente o una enfermedad autoinmune o inflamatoria, es eficaz para tratar la enfermedad. De esta manera, la invención también provee un método de tratamiento de una enfermedad asociada con una apoptosis insuficiente o una enfermedad autoinmune o inflamatoria, que comprende administrar al sujeto en necesidad del mismo un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo. Como se usa aquí, el término "tratar" abarca aliviar en cualquier grado, o prevenir el inicio de cualquier síntoma de la enfermedad o afección. El término "tratar" también abarca inhibir, detener o revertir el crecimiento o proliferación de células enfermas, o el avance o diseminación (metástasis) de la enfermedad o afección, o alterar la liberación de citocinas inflamatorias. El tratamiento incluye tratamiento preventivo, tal como el tratamiento de un paciente después de la extirpación quirúrgica de células de cáncer o tumor a fin de prevenir el crecimiento nuevo del cáncer o tumor, o tratamiento para prevenir la supervivencia de células patógenas, por ejemplo, bajo condiciones que llevan a enfermedades como el asma, MS, etcétera.

Las enfermedades y afecciones asociadas con una apoptosis insuficiente abarcan enfermedades proliferativas caracterizadas por una división celular inadecuadamente alta, una apoptosis inadecuadamente baja, o ambas cosas. Tales enfermedades pueden incluir enfermedades en donde hay un defecto en la muerte celular programada normalmente o en la maquinaria apoptótica celular (TRAIL, FAS, apoptosoma).

Ejemplos de trastornos autoinmunes o inflamatorios en donde la resistencia apoptótica contribuye a la patología, o en donde un aumento de la apoptosis puede ser terapéuticamente benéfico, incluyen esclerosis múltiple, aterosclerosis, artritis (por ejemplo, artritis reumatoide (RA)), etcétera. Otro aspecto de la presente invención provee un método de inducción de apoptosis en una célula, tal como un sinoviocito similar a fibroblasto en la artritis reumatoide, con un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo, solo o combinado con citocinas o ligandos del receptor de muerte tales como Fas, TRAIL, o anticuerpos agonistas del receptor de TRAIL.

Las enfermedades en donde la resistencia apoptótica contribuye a la patología, o en donde un aumento de la apoptosis puede ser terapéuticamente benéfico, incluyen todos los tipos de cáncer incluso el cáncer de pulmón, colorrectal, de mama y de próstata. Otros tipos de cáncer que pueden ser tratados con los compuestos, composiciones y métodos de la invención incluyen, sin limitación, los que se indican en el siguiente cuadro.

El compuesto de fórmula 1 o su sal se pueden usar en una forma pura o sustancialmente pura, o como parte de una composición que comprende el compuesto de fórmula 1 o su sal y un vehículo adecuado. Cuando la composición se va a administrar a un sujeto o paciente, especialmente un sujeto o paciente humano, el vehículo debe ser un vehículo farmacéuticamente aceptable. Como se usan aquí, los términos "sujeto" y "paciente" significan humanos y mamíferos no humanos, tales como primates, gatos, perros, cerdos, reses, ovejas, cabras, caballos, conejos, ratas, ratones, etcétera.

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención se pueden preparar combinando un compuesto de la presente invención con un vehículo apropiado. El vehículo puede ser cualquiera de los usados convencionalmente y solo está limitado por las consideraciones fisicoquímicas, tales como solubilidad y falta de reactividad con el compuesto activo, y por la vía de administración. El experto en la materia apreciará que, además de la siguiente composición farmacéutica descrita, los compuestos activos de los presentes métodos de la invención se pueden formular como complejos de inclusión tales como complejos de inclusión de ciclodextrina o liposomas.

Los vehículos farmacéuticamente aceptables descritos en la presente, por ejemplo vehículos, adyuvantes, excipientes y diluentes, son muy conocidos para los expertos en la materia y están fácilmente disponibles al público. Se prefiere que el vehículo farmacéuticamente aceptable sea químicamente inerte para los agentes activos y que no tenga efectos secundarios nocivos ni toxicidad bajo las condiciones de uso.

Existe una variedad de formulaciones adecuadas para la composición farmacéutica de los presentes métodos de la invención. La formulación puede ser, por ejemplo, un sólido, semisólido o líquido, que incluyen tabletas, cápsulas, polvos, granulados, ungüentos, soluciones, supositorios, inyecciones, preparados inhalables, geles, microesferas y aerosoles.

Los métodos reales de preparación de tales formas farmacéuticas son conocidos o serán evidentes para los expertos en esta materia; véase por ejemplo "Remington's Pharmaceutical Sciences", 18a ed. (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990). La composición por administrar, en cualquier caso, contendrá una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento de una enfermedad como las que se describen arriba.

La composición farmacéutica se puede formular para cualquier vía de administración que incluye, por ejemplo, administración oral, tópica, transdérmica, transmucosal, aerosol/inhalación, parenteral (que incluye sin limitación subcutánea, intravenosa, intramuscular, ¡ntraesternal, intraperitoneal, intracerebral, intraósea e intradérmica), rectal, sublingual, ocular, intranasal y vaginal. El experto en la materia apreciará que estas vías de administración del compuesto de la invención son conocidas y, aunque se puede usar más de una vía para administrar un compuesto particular, una vía particular puede proveer una respuesta más inmediata y más eficaz que otra vía. Las siguientes formulaciones se describen con la finalidad de ilustrar más la invención y se considera que no la limitan en modo alguno.

Las formulaciones inyectables están entre las formulaciones que pueden ser adecuadas de acuerdo con la presente invención. Los requisitos para los vehículos farmacéuticos eficientes para composiciones inyectables son conocidos del experto en la materia (véase por ejemplo "Pharmaceutics and Pharmacy Practice", J.B. Lippincott Company, Filadelfia, PA, Banker and Chalmers, eds., p. 238-250 (1982), y "ASHP Handbook on Injectable Drugs", Toissel, 4a ed., p. 622-630 (1986)). Las formulaciones adecuadas para administración parenteral incluyen soluciones estériles ¡sotónicas inyectables, acuosas y no acuosas, que pueden contener antioxidantes, amortiguadores, bacteriostáticos y solutos que hacen a la formulación isotónica con la sangre del receptor deseado, y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que incluyen agentes de suspensión, solubilizantes, agentes espesantes, estabilizadores y conservadores. Los compuestos de la invención se pueden administrar en un diluente fisiológicamente aceptable en un vehículo farmacéutico, tal como un líquido o mezcla de líquidos estériles, que incluyen agua, solución salina, dextrosa acuosa y soluciones de azúcar relacionadas, alcohol como etanol, isopropanol o alcohol hexadecílíco, glicoles como propilenglicol o polietilenglicol, sulfóxido de dimetilo, cetales de glicerol tales como 2,2-dimetil-1 ,3-dioxolano-4-metanol, éteres tales como poli(etilenglicol) 400, un aceite, un ácido graso, un éster o glicérido de ácido graso, o un glicérido de ácido graso acetilado con o sin la adición de un agente tensoactivo farmacéuticamente aceptable, tal como un jabón o detergente, agente de suspensión tal como pectina, carbómeros, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa o carboximetilcelulosa, o agentes emulsionantes y otros adyuvantes farmacéuticos que incluyen gliceroles y triglicéridos pegilados o modificados con ácido graso.

Los aceites que se pueden usar en las formulaciones parenterales incluyen petróleo, aceites animales, vegetales o sintéticos. Los ejemplos específicos de aceites incluyen aceite de cacahuate, soya, ajonjolí, algodón, maíz, oliva, petrolato y mineral. Los ácidos grasos adecuados para usarse en las formulaciones parenterales incluyen ácido oleico, ácido esteárico y ácido isoesteárico. El oleato de etilo y miristato de isopropilo son ejemplos de ésteres de ácido graso adecuados.

Los jabones adecuados para usarse en las formulaciones parenterales incluyen sales grasas de metal alcalino, amonio y trietanolamina, y los detergentes adecuados incluyen: (a) detergentes catiónicos tales como por ejemplo halogenuros de dimetil-dialquil-amonio y halogenuros de alquil-piridinio; (b) detergentes aniónicos tales como por ejemplo sulfonatos de alquilo, arilo y olefina, sulfatos de alquilo, olefina, éter y monoglicérido, y sulfosuccinatos; (c) detergentes no iónicos tales como por ejemplo óxidos de amina grasos, alcanolamidas de ácido graso y copolímeros de polioxietilenpolipropileno; (d) detergentes anfotéricos tales como por ejemplo alquil-b-aminopropionatos y sales de amonio cuaternario de 2-alquil-imidazolina; y (e) mezclas de los mismos.

Las formulaciones parenterales normalmente contendrán de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 10% en peso del ingrediente activo en solución. Se pueden usar conservadores y amortiguadores. Para minimizar o eliminar la irritación en el sitio de la inyección, tales composiciones pueden contener uno o más agentes tensoactivos no iónicos que tienen un balance idrofílico-lipofílico (HLB) de aproximadamente 12 a aproximadamente 17. La cantidad de agente tensoactivo en tales formulaciones normalmente variará de aproximadamente 5% a aproximadamente 15% en peso. Los agentes tensoactivos adecuados incluyen ésteres de ácido graso de polietilensorbitán, tales como monooleato de sorbitán y los aductos de peso molecular alto de óxido de etileno con una base hidrófoba, formados por la condensación de óxido de propileno con propilenglicol. Las formulaciones parenterales se pueden presentar en recipientes sellados de dosis unitarias o multidosis, tales como ampolletas o frascos, y se pueden almacenar en una condición criodesecada (liofilizada) que solo requiere la adición del excipiente líquido estéril, por ejemplo agua inyectable, inmediatamente antes de usarse. Se pueden preparar soluciones y suspensiones inyectables extemporáneas de polvos, granulados y tabletas estériles del tipo previamente descrito.

Las formulaciones tópicas son muy conocidas para los expertos en la materia. Estas formulaciones son particularmente adecuadas en el contexto de la presente invención para su aplicación en la piel. El vehículo puede comprender convenientemente una solución, emulsión, ungüento o base de gel. La base, por ejemplo, puede comprender uno o más de lo siguiente, petrolato, lanolina, polietilenglicoles, cera de abejas, aceite mineral, diluentes como agua y alcohol, y emulsionantes y estabilizadores. En una composición farmacéutica para administración tópica pueden estar presentes agentes espesantes. Si se destina a la administración transdérmica, la composición puede incluir un parche transdérmico o un dispositivo de iontoforesis. Las formulaciones tópicas pueden contener una concentración del compuesto de la presente invención de aproximadamente 0.1% a aproximadamente 10% p/v (peso por unidad de volumen).

Las formulaciones adecuadas para administración oral pueden consistir en: (a) soluciones líquidas tales como una cantidad eficaz del compuesto activo disuelto en diluentes; (b) cápsulas, bolsitas, tabletas, pastillas y trociscos, cada una conteniendo una cantidad predeterminada de ingrediente activo, como sólidos o gránulos; (c) polvos; (d) suspensiones en un liquido apropiado; y (e) emulsiones adecuadas. Las formulaciones líquidas pueden incluir diluentes tales como agua, solución salina y alcoholes, por ejemplo etanol, alcohol bencílico y los alcoholes de polietileno, con o sin la adición de un agente tensoactivo farmacéuticamente aceptable. Las formas de cápsula pueden ser del tipo común de cubierta de gelatina blanda o dura que contienen por ejemplo agentes tensoactivos, lubricantes y rellenos inertes tales como lactosa, sacarosa, fosfato de calcio y almidón de maíz. Las formas de tableta pueden incluir uno o más de lactosa, sacarosa, manitol, almidón de maíz, almidón de papa, ácido alginico, celulosa microcristalina, acacia, gelatina, goma guar, dióxido de silicio coloidal, croscarmelosa de sodio, talco, estearato de magnesio, estearato de calcio, estearato de zinc, ácido esteárico y otros excipientes, colorantes, diluentes, agentes amortiguadores, agentes desintegradores, agentes humectantes, conservadores, agentes saborizantes y excipientes farmacológicamente compatibles. Las formas de pastilla pueden comprender el ingrediente activo en un saborizante, usualmente sacarosa y acacia o tragacanto, y también pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia, emulsiones, geles, etcétera, que contienen, además del ingrediente activo, los excipientes conocidos. Las formulaciones orales normalmente contendrán de aproximadamente 0.1% a aproximadamente 70% en peso del ingrediente activo.

Los compuestos de la invención, solos o combinados con otros componentes adecuados, se pueden presentar en formulaciones de aerosol para administrarse por medio de inhalación. Estas formulaciones de aerosol se pueden poner en propulsores aceptables presurizados tales como diclorodifluorometano, propano, nitrógeno, etcétera. También se pueden formular como composiciones farmacéuticas no presurizadas, tales como preparados para nebulizador o atomizador. Tales formulaciones de espray también se pueden usar para rociar la mucosa.

Adicionalmente, los compuestos de la invención, o las composiciones que los comprenden, se pueden presentar en supositorios mezclándolos con una variedad de bases tales como bases emulsionables o bases solubles en agua. Las formulaciones adecuadas para administración vaginal se pueden presentar como pesarios, tapones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de espray, que contienen, además del ingrediente activo, los vehículos conocidos apropiados.

Alternativamente, los compuestos de la invención descritos en la presente se pueden modificar en una forma de depósito, de tal manera que el compuesto de la invención es liberado en el cuerpo al que se le administra de manera controlada con respecto al tiempo y localización en el cuerpo (véase por ejemplo la patente de EE. UU. No. 4, 450, 150). Las formas de depósito del compuesto activo pueden ser, por ejemplo, una composición implantabie que comprende el compuesto y un material poroso, tal como un polímero, en donde el compuesto es encapsulado por el material poroso o se difunde por el mismo. El depósito se implanta entonces en el sitio deseado dentro del cuerpo y el compuesto es liberado del implante a una velocidad predeterminada difundiéndose a través del material poroso.

En algunos contextos, los compuestos de la invención se pueden administrar ventajosamente por medio de una bomba implantada que permite el suministro intratecal. Tal método de suministro es especialmente útil para el suministro de fármacos al SNC cuando los fármacos administrados, de otra manera, no penetran suficientemente la barrera hematoencefálica.

Los métodos reales de preparación de tales formas farmacéuticas son conocidos o serán evidentes para los expertos en esta materia; véase por ejemplo "Remington's Pharmaceutical Sciences", 18a ed. (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990). En cualquier caso, la composición por administrar debe contener una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el tratamiento de una enfermedad como las que se describen arriba.

El experto en la materia apreciará fácilmente que los compuestos de la invención descritos en la presente se pueden modificar de varias maneras para aumentar la eficacia terapéutica del compuesto. Por ejemplo, el compuesto o inhibidor se podrían conjugar directa o indirectamente por medio de un enlazador con una porción de direccionamiento. La práctica de conjugar compuestos o inhibidores con porciones de direccionamiento es conocida. El término "porción de direccionamiento", como se usa aquí, se refiere a cualquier molécula o agente que reconoce y se une específicamente a un receptor de superficie celular, de tal manera que la porción de direccionamiento dirige el suministro del compuesto o inhibidor a una población de células sobre cuya superficie se expresa el receptor. Las porciones de direccionamiento incluyen, sin limitación, anticuerpos o fragmentos de los mismos, péptidos, hormonas, factores de crecimiento, citocinas, y cualquier otro ligando natural o no natural que se una a los receptores de superficie celular. El término "enlazador", como se usa aquí, se refiere a cualquier agente o molécula que puentea el compuesto o inhibidor con la porción de direccionamiento. El experto en la materia reconoce que los sitios de los compuestos o inhibidores que no son necesarios para la función del compuesto o inhibidor, son sitios ideales para unir un enlazador y/o una porción de direccionamiento, siempre que el enlazador y/o porción de direccionamiento, una vez unida al compuesto o inhibidor, no altere la función del compuesto o inhibidor.

La cantidad considerada como terapéuticamente eficaz variará dependiendo de una variedad de factores que incluyen el compuesto específico usado; el tipo preciso y severidad de la afección tratada; la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del paciente; y el modo de administración. Generalmente, una dosis terapéuticamente eficaz puede ser de aproximadamente 0.1 mg a aproximadamente 40 mg /kg de peso corporal por día o dos veces al día.

Terapia de combinación El compuesto de fórmula 1 o su sal, o composición que lo comprende, se puede usar de acuerdo con los métodos descritos en la presente, solo o en combinación con uno o más ingredientes activos adicionales. Por ejemplo, dos o más compuestos diferentes de fórmula 1 o sus sales se pueden usar juntos; o uno o más compuestos de fórmula 1 o sus sales se pueden usar en conjunto con uno o más de otros compuestos terapéuticamente eficaces. Cuando el compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo se usa en conjunto con uno o más compuestos activos adicionales (ya sea otro compuesto de fórmula 1 o un compuesto diferente), el otro compuesto adicional se puede administrar simultáneamente, antes o después de la administración del compuesto de fórmula 1 o su sal. Además, cuando se administran simultáneamente, el compuesto adicional se puede administrar en la misma composición del compuesto de fórmula 1 o su sal, o en una composición diferente.

La selección de los agentes terapéuticos adicionales para usarse en combinación con un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo dependerá, por lo menos en parte, de la enfermedad o afección particular tratada. De acuerdo con un aspecto de la invención, el compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo se administra en combinación con un agente que estimula directa o indirectamente la ruta apoptótica del receptor de muerte. Sin desear limitarse por ninguna teoría particular, se cree que el uso combinado de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo y un agente que estimula la ruta apoptótica del receptor de muerte (por ejemplo, un agonista del receptor de muerte), produce un efecto intensificado y en algunos casos sinérgico. El agonista del receptor de muerte puede ser cualquier agente capaz de estimular la respuesta proapoptótica mediada por los receptores de muerte. Tales agentes incluyen TRAIL, agonistas del receptor de TRAIL y cualquier agente que aumente el nivel de TRAIL en circulación en un sujeto, que incluyen moduladores del sistema inmune tales como interferón alfa o radiación ionizante (por ejemplo UVB), que pueden inducir la liberación de citocinas tales como las interleucinas o TNF.

Los agonistas del receptor de TRAIL incluyen cualquier compuesto que imita a TRAIL estimulando el receptor de muerte de TRAIL. Tales compuestos pueden incluir, por ejemplo, una molécula pequeña o un agonista de anticuerpo del receptor de TRAIL. Se prefieren los anticuerpos agonistas dirigidos contra los receptores de muerte TRAIL-R1 y/o TRAIL-R2, particularmente los anticuerpos conocidos como HGS-ETR1 y HGS-ETR2. Los anticuerpos agonistas ejemplares incluyen los que se describen en la patente de EE. UU. No. 7, 244, 429; en las publicaciones de solicitud de patente de EE. UU. Nos. 2007/0179086, 2002/0004227, 2006/0269554, 2005/0079172, 2007/0292411 , 2006/0270837 (ahora patente de EE. UU. No. 7, 361 ,341), 2009/0026429, 2006/0269555, 2004/0214235, y 2007/0298039; y en las publicaciones de patente internacional WO2006/017961 y W098/51793. Cada una de estas publicaciones se incorpora aquí como referencia en su totalidad. En modalidades preferidas, los compuestos de la invención se usan en combinación con uno o más de estos anticuerpos agonistas del receptor de TRAIL para el tratamiento del cáncer y otros neoplasmas.

Otros agentes útiles en combinación con un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo incluyen, por ejemplo, moduladores del receptor de estrógeno, moduladores del receptor de andrógeno, moduladores del receptor retinoide, agentes citotóxicos, agentes antiproliferativos, inhibidores de prenil-proteína transferasa, inhibidores de HMG-CoA reductasa, inhibidores de proteasa de VIH, inhibidores de transcriptasa inversa, inhibidores de la angiogénesis, agonistas de PPAR-?, agonistas de PPAR-d, inhibidores de la resistencia inherente a multifármacos, agentes antieméticos, agentes usados para tratar la anemia o neutropenia, fármacos intensificadores de la inmunidad, inhibidores de proteasoma tales como Velcade y MG132 (7-Leu-Leu-aldehido) (véase He at al., Oncogene (2004) 23, 2554-2558), inhibidores de HDAC tales como butirato de sodio, butirato de fenilo, ácidos hidroámicos, tetrapéptido ciclina, etcétera (véase Rosato et al., Molecular Cáncer Therapeutics (2003), 1273-1284), inhibidores de la actividad similar a quimotripsina en el proteasoma, e inhibidores de ligasa E3. Otros de tales agentes se describen en WO 03/09921 1 (PCT/US03/15861).

Otros agentes quimioterapéuticos conocidos se pueden usar en combinación con un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo, especialmente para el tratamiento del cáncer u otras enfermedades proliferativas susceptibles de quimioterapia. Se puede usar cualquier agente quimioterapéutico en combinación con el compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo. La selección del agente quimioterapéutico puede depender, en parte, del tipo particular de cáncer o enfermedad proliferativa tratada. En los siguientes párrafos se describen agentes quimioterapéuticos ejemplares. Los agentes quimioterapéuticos descritos en la presente únicamente son ilustrativos y de ninguna manera son limitativos.

Alcaloides de la vinca y compuestos perturbadores del microtúbulo Los alcaloides de la vinca incluyen vincristina, vinblastina, vindesina, vinflunina, vinorelbina y anhidrovinblastina. Las dolastatinas son oligopéptidos que alteran principalmente la tubulina en el dominio de unión del alcaloide de la vinca. Las dolastatinas incluyen dolastatina 10 (NCS 376128), dolastatina 15, ILX651 , TZT-1027, simplostatina 1 , simplostatina 3, y LU 103793 (cemadotin). Las criptoficinas (por ejemplo, criptoficina 1 y criptoficina 52 (LY355703)) se unen a la tubulina con el dominio de unión del alcaloide de la vinca e inducen detención de G2/M y apoptosis.

Otros compuestos perturbadores del microtúbulo se describen en las patentes de EE. UU. 6,458,765; 6,433,187; 6,323,315; 6,258,841 ; 6,143,721 ; 6,127,377; 6,103,698; 6,023,626; 5,985,837; 5,965,537; 5,955,423; 5,952,298; 5,939,527; 5,886,025; 5,831 ,002; 5,741 ,892; 5,665,860; 5,654,399; 5,635,483; 5,599,902; 5,530,097; 5,521,284; 5,504,191; 4,879,278; y 4,816,444; y en las publicaciones de patente de EE. UU. Nos. 2003/0153505 A1; 2003/0083263 A1 ; y 2003/0055002 A1.

Taxanos y otros compuestos estabilizadores del microtúbulo Los taxanos incluyen paclitaxel, docetaxel, RPR 109881 A, SB-T-1213, SB-T-1250, SB-T-101187, BMS-275183, BRT 216, DJ-927, MAC-321 , IDN5109 e IDN5390. Los análogos de taxano incluyen BMS-184476, BMS-188797; y no taxanos relacionados funcionalmente incluyen epotilonas (por ejemplo, epotilona A, epotilona B (EPO906), desoxiepotilona B, y epotilona B lactama (BMS-247550)), eleuterobin, discodermolida, 2-epi-d¡scodermolida, 2-des-metildiscodermolida, 5-hidroximetildiscodermolida, 19-des-aminocarbonildiscodermolida, 9(13)-c¡clodiscodermolida, y laulimalida.

Otros compuestos estabilizadores del microtúbulo se describen en las patentes de EE. UU. 6,624,317; 6,610,736; 6,605,599; 6,589,968; 6,583,290; 6,576,658; 6,515,017; 6,531 ,497; 6,500,858; 6,498,257; 6,495,594; 6,489,314; 6,458,976; 6,441,186; 6,441 ,025; 6,414,015; 6,387,927; 6,380,395; 6,380,394; 6,362,217; 6,359,140; 6,306,893; 6,302,838; 6,300,355; 6,291 ,690; 6,291 ,684; 6,268,381; 6,262,107; 6,262,094; 6,147,234; 6,136,808; 6,127,406; 6,100,4 1 ; 6,096,909; 6,025,385; 6,0 1 ,056; 5,965,718; 5,955,489; 5,919,815; 5,912,263; 5,840,750; 5,821,263; 5,767,297; 5,728,725; 5,721,268; 5,719,177; 5,714,513; 5,587,489; 5,473,057; 5,407,674; 5,250,722; 5,010,099; y 4,939,168; y las publicaciones de solicitud de patente de EE. UU. Nos. 2003/0186965 A1; 2003/0176710 A1 ; 2003/0176473 A1 ; 2003/0144523 A1 ; 2003/0134883 A1; 2003/0087888 A1 ; 2003/0060623 A1 ; 2003/0045711 A1 ; 2003/0023082 A1; 2002/0198256 A1 ; 2002/0193361 A1 ; 2002/0188014 A1 ; 2002/0165257 A1; 2002/0156110 A1 ; 2002/0128471 A1 ; 2002/0045609 A1 ; 2002/0022651 A1; 2002/0016356 A1; 2002/0002292 A1; cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia.

Otros agentes quimioterapéuticos que se pueden administrar con un compuesto de la presente invención se indican en el siguiente cuadro: Agentes misceláneos SR-27897 (inhibidor de CCK A), Sanofi- gemtuzumab (anticuerpo CD33, Wyeth Synthelabo) Ayerst) BCX-1777 (inhibidor de PNP, BioCryst) CCI-779 (inhibidor de cinasa mTOR, Wyeth) tocladesina (agonista de AMP cíclico, PG2 (incrementador de hematopoyesis, Ribapharm) Pharmagenesis) ranpirnasa (estimulador de ribonucleasa, exisulind (inhibidor de PDE V, Cell Alfacell) PathwaysJ alvocidib (inhibidor de CDK, Aventis) Immunol (enjuague oral de triclosán, Endo) galarrubicina (inhibidor de la síntesis de CP-461 (inhibidor de PDE V, Cell Pathways) ARN, Dong-A) triacetiluridina (profármaco de uridina, CV-247 (inhibidor de COX-2, Ivy Medical) Wellstat) tirapazamina (agente reductor, SRI AG-2037 (inhibidor de GART, Pfizer) International) SN-4071 (agente de sarcoma, Signature P54 (inhibidor de COX-2, Phytopharm) BioScience) N-acetilcisteína (agente reductor, Zambón) WX-UK1 (inhibidor de activador de CapCell™ (estimulador de CYP450, plasminógeno, Wilex) Bavarian Nordic) TransMID-107™ (inmunotoxina, KS R-flurbiprofeno (inhibidor de NF-kappaB, Biomedix) Encoré) PBI-1402 (estimulador de PMN, ProMetic GCS-100 (antagonista de gal3, LifeSciences) GlycoGenesys) PCK-3145 (promotor de apoptosis, Procyon) 3CPA (inhibidor de NF-kappaB, Active bortezomib (inhibidor de proteasoma, Biotech) Millennium) Inmunógeno G17DT (inhibidor de gastrina, doranidazol (promotor de apoptosis, Pola) Aphton) SRL-172 (estimulador de células T, SR seocalcitol (agonista del receptor de Pharma) vitamina D, Leo) CHS-828 (agente citotóxico, Leo) efaproxiral (oxigenador, Allos Therapeutics) TLK-286 (inhibidor de glutatión S 131-I-TM-601 (antagonista de ADN, transferasa, Telik) TransMolecular) ácido trans-retinoico (diferenciador, NIH) PI-88 (inhibidor de heparanasa, Progen) PT-100 (agonista del factor de crecimiento, eflornitina (inhibidor de ODC, ILEX Point Therapeutics) Oncology) MX6 (promotor de apoptosis, MAXIA) tesmilifeno (antagonista de histamina, YM midoestaurina (inhibidor de PKC, Novartis) BioSciences) apomina (promotor de apoptosis, ILEX ácido minodrónico (inhibidor de Oncology) osteoclasto, Yamanouchi) briostatin-1 (estimulador de PKC, GPC histamina (agonista del receptor de Biotech) histamina H2, Maxim) urocidina (promotor de apoptosis, Bioniche) indisulam (estimulador de p53, Eisai) CDA-II (promotor de apoptosis, Everlife) tiazofurin (inhibidor de IMPDH, Ribapharm) Ro-31-7453 (promotor de apoptosis, La aplidina (inhibidor de PPT, PharmaMar) Roche) cilengitide (antagonista de integrina, Merck SDX-101 (promotor de apoptosis, KGaA Pharmacia) rituximab (anticuerpo CD20, Genentech) ceflatonina (promotor de apoptosis, SR-31747 (antagonista de IL-1 , Sanofi- ChemGenex) Synthelabo) Herceptina Cuando la enfermedad o trastorno tratado es un trastorno inflamatorio o autoinmune, especialmente artritis reumatoide (RA), el compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo se pueden administrar en combinación con uno o más fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINEs), analgésicos, corticosteroides y fármacos antirreumáticos modificadores de enfermedad. Otros agentes que pueden ser útiles en combinación con un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo para tales aplicaciones incluyen terapia de antagonista del receptor de interleucina 1 (IL-1), tal como anakinra (Kineret™), tocilizumab (Actemra™), hidroxicloroquina (Plaquenil™), sulfasalazina (Azulfidine™), leflunomida (Arava™); inhibidores del factor de necrosis de tumor tales como etanercept (Enbrel™), adalimumab (Humira™), e infliximab (Remicade™); agentes bloqueadores coestimuladores de células T tales como abatacept (Orencia™); agentes agotadores de células B tales como rituximab (Rituxan™), natalizumab (Tysabri™); oro intramuscular y otros agentes inmunomoduladores y citotóxicos como azatioprina (Imuran™), ciclofosfamida y ciclosporina A (Neoral™, Sandimmune™).

Otros agentes que pueden ser útiles en combinación con un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo para el tratamiento de RA incluyen metotrexato, alemtuzumab (Campath™), MAb anti-RANKL (denosumab), MAb anti-Blys belimumab (LymphoStat-B™), certolizumab pegol (Cimzia™), inhibidores de p38, inhibidores de JAK, agentes anti-TNF, MAbs anti-CD20, agentes de direccionamiento anti-IL/ILR tales como los que hacen blanco en IL-1 , IL-5, IL-6 (toclizumab), IL-4, IL-13, e IL-23.

Combinaciones adicionales también pueden incluir agentes que reducen la toxicidad de los agentes anteriormente mencionados, tal como la toxicidad hepática, toxicidad neuronal, nefrotoxicidad, etcétera.

Pruebas de selección Los compuestos de la presente invención también se pueden usar en un método para seleccionar otros compuestos que se unen a un dominio BIR de IAP. Hablando en términos generales, para usar los compuestos de la invención en un método para identificar compuestos que se unen a un dominio BIR de IAP, el IAP se une a un soporte y se agrega a la prueba un compuesto de la invención. Alternativamente, el compuesto de la invención se puede unir al soporte y se le agrega el IAP.

Existen varias maneras para determinar la unión de un compuesto de la presente invención al dominio BIR. En una manera, el compuesto de la invención, por ejemplo, se puede marcar fluorescentemente o radiactivamente y la unión se determina directamente. Por ejemplo, esto se puede hacer uniendo el IAP a un soporte sólido, agregando un compuesto de la invención marcado detectablemente, quitando el exceso de reactivo, y determinando la cantidad de la marca detectable presente en el soporte sólido. Se pueden usar muchos pasos de bloqueo y lavado que son conocidos para los expertos en la materia.

En algunos casos se marca solo uno de los componentes. Por ejemplo, se pueden marcar residuos específicos del dominio BIR.

Alternativamente se puede marcar más de un componente con diferentes marcas; por ejemplo, usando 125l para el dominio BIR y una marca fluorescente para la sonda.

Los compuestos de la invención también se pueden usar como competidores para seleccionar candidatos de fármaco o compuestos de prueba adicionales. Como se usan aquí, los términos "candidatos de fármaco" o "compuestos de prueba" se usan intercambiablemente y describen cualquier molécula, por ejemplo, proteína, oligopéptido, molécula orgánica pequeña, polisacárido, polinucleótido, etcétera, cuya bioactividad se va a probar. Los compuestos pueden ser capaces de alterar directa o indirectamente la actividad biológica del IAP.

Los candidatos de fármaco pueden incluir varias clases químicas, aunque normalmente son moléculas orgánicas pequeñas que tienen un peso molecular mayor de 100 Dalton y menor de aproximadamente 2,500 Dalton. Los agentes candidatos normalmente incluyen grupos funcionales necesarios para una interacción estructural con las proteínas, por ejemplo, unión de hidrógeno o unión lipofílica, y normalmente incluyen por lo menos un grupo arrimo, carbonilo, hidroxilo, éter o carboxilo. Los candidatos de fármaco frecuentemente incluyen estructuras carbocíclicas o heterocíclicas y/o estructuras aromáticas o poliaromáticas sustituidas con uno o más grupos funcionales.

Los candidatos de fármaco se pueden obtener de varias fuentes que incluyen colecciones de compuestos sintéticos o naturales. Por ejemplo, están disponibles muchos medios para la síntesis aleatoria y dirigida de una amplia variedad de compuestos orgánicos y biomoléculas, que incluyen la expresión de oligonucleótidos aleatorizados. Alternativamente, están disponibles colecciones de compuestos naturales en forma de extractos de bacterias, hongos, plantas y animales, o se producen fácilmente. Adicionalmente, las colecciones y compuestos producidos natural o sintéticamente se modifican fácilmente por medios químicos, físicos y bioquímicos convencionales.

Se pueden hacer pruebas de selección competitiva combinando un dominio BIR de IAP y una sonda para formar un complejo de sonda. dominio BIR en una primera muestra, seguido por la adición de un compuesto de prueba de una segunda muestra. Se determina la unión presente en la prueba, y un cambio o diferencia en la unión entre las dos muestras indica la presencia de un compuesto de prueba capaz de unirse al dominio BIR y modular potencialmente la actividad del IAP.

De esta manera, se provee aquí como un aspecto de la invención una sonda que comprende un compuesto de la invención y una marca detectable o cola de afinidad. Las marcas detectables incluyen cualquier porción química que se puede enlazar con un compuesto de la presente invención, de tal manera que cuando el compuesto que comprende la marca se asocia con el dominio BIR, la marca permite la detección directa o indirecta del compuesto. Preferiblemente la marca también permite la cuantificación. Las colas de afinidad son porciones que facilitan el aislamiento o purificación de los compuestos a los que se unen.

Como se usa aquí, el término "sonda" significa un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo que se marca con una marca detectable o una cola de afinidad, y que es capaz de unirse, covalentemente o no covalentemente, con un dominio BIR de IAP. Cuando por ejemplo la sonda se enlaza no covalentemente, puede ser desplazada por un compuesto de prueba. Cuando por ejemplo la sonda no se enlaza covalentemente, se puede usar para formar aductos entrelazados que pueden ser cuantificados e inhibidos por medio de un compuesto de prueba.

En un caso, la unión del compuesto de prueba se determina usando pruebas de unión competitiva. En esta modalidad, la sonda se marca con una marca fluorescente. Bajo ciertas circunstancias, puede haber unión competitiva entre el compuesto de prueba y la sonda. Se considera que los compuestos de prueba que exhiben la sonda, dando como resultado un cambio de fluorescencia en comparación con el control, se unen a la región BIR.

En un caso, el compuesto de prueba se puede marcar. El compuesto de prueba o un compuesto de la presente invención, o ambos, se agregan primero al dominio BIR de IAP durante un tiempo suficiente para permitir la unión para formar un complejo.

La formación del complejo de sonda:dominio BIR normalmente requiere una incubación entre 4 °C y 40 °C durante 10 minutos a aproximadamente 1 hora, para permitir una selección de alto rendimiento.

Generalmente cualquier exceso de reactivo se quita o se lava. Después se agrega el compuesto de prueba y se le da seguimiento a la presencia o ausencia del componente marcado para indicar la unión al dominio BIR.

En un caso, primero se agrega la sonda, seguida por el compuesto de prueba. El desplazamiento de la sonda es una indicación de que el compuesto de prueba se une al dominio BIR y por lo tanto es capaz de unirse al IAP y modular potencialmente su actividad. Se puede marcar cualquier componente. Por ejemplo, la presencia de la sonda en la solución de lavado indica el desplazamiento por parte del compuesto de prueba. Alternativamente, si se marca el compuesto de prueba, la presencia de la sonda en el soporte indica el desplazamiento.

En un caso, se puede agregar primero el compuesto de prueba, con incubación y lavado, seguido por la sonda. La ausencia de unión con la sonda puede indicar que el compuesto de prueba se une al dominio BIR con una mayor afinidad. De esta manera, si la sonda es detectada en el soporte, junto con una falta de unión del compuesto de prueba, puede indicar que el compuesto de prueba es capaz de unirse al dominio BIR.

La modulación se prueba seleccionando la capacidad de un compuesto de prueba para modular la actividad de IAP, e incluye combinar un compuesto de prueba con un dominio BIR de IAP, como se describe arriba, y determinar la alteración de la actividad biológica del IAP. Por lo tanto, en este caso, el compuesto de prueba se uniría al dominio BIR (aunque esto puede no ser necesario), y alteraría su actividad biológica como se define en la presente.

Se pueden usar controles positivos y controles negativos en las pruebas. El análisis de todas las muestras de control y de prueba se realiza múltiples veces para obtener resultados estadísticamente significativos. Después de la incubación, todas las muestras se lavan para quitarles el material unido inespecíficamente y se determina la cantidad de sonda unida. Por ejemplo, cuando se usa una radiomarca, se puede hacer un conteo en las muestras con un contador de escintilación para determinar la cantidad de compuesto unido.

Normalmente las señales que son detectadas en la prueba pueden incluir fluorescencia, transferencia de energía de resonancia, fluorescencia resuelta en el tiempo, radioactividad, polarización de fluorescencia, resonancia de plasma, quimioluminiscencia, etcétera, dependiendo de la naturaleza de la marca. Las marcas detectables útiles para realizar las pruebas de selección de esta invención incluyen una marca fluorescente tal como fluoresceina, verde de Oregon, dansilo, rodamina, tetrametil-rodamina, rojo de Texas, Eu3+; una marca quimioluminiscente como luciferasa; marcas colorimétricas; marcadores enzimáticos; o radioisótopos como tritio, 125l, etcétera. Las colas de afinidad, que pueden ser útiles para realizar las pruebas de selección de la presente invención, incluyen biotina, polihistidina, etcétera.

EJEMPLOS Los siguientes términos y abreviaturas, construcciones y procedimientos generales se usan en los ejemplos: Abreviaturas y términos Boc: f-butoxicarbonilo; Boc-Chg-OH: Boc-L-2(ciclohexil)glicina Boc-N-MeAla-OH : N-Boc-N-metilalanina CBz: benciloxicarbonilo; DIPEA: diisopropiletilamina; DMAP: 4-(dimetilamino)piridina; DMF: N,N-dimetilformamida¡ DTT: ditiotreitol; EDC: clorhidrato de 3-(dimetilaminopropil)-3-etilcarbodümida; EDTA: ácido etilendiaminotetraacético; Fmoc: N-(9-fluorenilmetoxicarbonilo); HBTU: hexafluorofosfato de O-(benzotriazol-l-il)- N, N, ?', N -tetrametiluronio HCI: ácido clorhídrico; HOAc: ácido acético; HOBt: 1 -hidroxibenzotriazol; HPLC: cromatografía de líquidos de alto rendimiento; LCMS: cromatografía de líquidos-espectrometría de masa; eOH: metanol; MgS04: sulfato de magnesio; MS: espectro de masa; Ms: metanosulfonilo; NaHC03: carbonato ácido de sodio; Pd/C: paladio sobre carbón; TEA: trietilamina; TFA: ácido trifluoroacético; THF: tetrahidrofurano; TMEDA: ?,?,?,?-tetrametiletilendiamina; Ts: para-toluenesulfonilo.

CI50: La cantidad, concentración 0 dosis de un compuesto particular con la que se obtiene 50% de una respuesta máxima.

CE50 La cantidad, concentración o dosis de un compuesto particular con la que se obtiene 50% de inhibición de supervivencia celular.

Construcciones moleculares para la expresión GST-BIR3RING enlazado a XIAP: secuencia codificadora de XIAP, aminoácidos 246-497 clonados en PGEX4T3 por medio de BamH1 y AVA I. El plásmido se transformó en E. coli DH5a para usarse en la expresión y purificación de la proteína.

GST-enlazador BIR3 de HIAP2 (clAP-1 ): secuencia codificadora de HIAP2 de los aminoácidos 251-363, clonada en PGex4T3 por medio de BamH1 y Xhol. El plásmido se transformó en E. coli DH5a para usarse en la expresión y purificación de la proteína.

GST-enlazador BIR3 de HIAP1 (clAP-2): secuencia codificadora de HIAP1 de los aminoácidos 236-349, clonada en PGex4T3 por medio de BamH1 y Xhol. El plásmido se transformó en E. coli DH5a para usarse en la expresión y purificación de la proteína.

GST-enlazador BIR2 BIR3Ring: secuencia codificadora de XIAP de los aminoácidos 93-497, clonada en PGex4T1 por medio de BamH1 y Xhol. Los aminoácidos 93-497 se amplificaron de XIAP de longitud completa en pGex4t3, usando los iniciadores: TTAATAGGATCCATCAACGGCTTTTATC y GCTGCATGTGTGTCAGAGG, usando condiciones estándares de PCR. El fragmento de PCR fue clonado en TA en pCR-2.1 (Invitrogen). El enlazador BIR2 BIR3Ring se subclonó en pGex4T1 por digestión con BamHI/Xhol. El plásmido se transformó en E. coli DH5a para usarse en la expresión y purificación de la proteína.

XIAP humano de longitud completa, plásmido AEG número 23. Secuencia codificadora de XIAP de los aminoácidos 1 -497 clonados en el vector de fusión de GST, PGEX4T3, por medio de sitios de restricción BamH1 y Xho I. El plásmido se transformó en E. coli DH5a para usarse en la purificación de la proteína.

GST-enlazador BIR 2 de XIAP: secuencia codificadora del enlazador BIR2 de XIAP de los aminoácidos 93-497, clonada en pGex4T3 por medio de BamHI y Xhol. El plásmido se transformó en E. coli DH5a para usarse en la expresión y purificación de la proteína.

Expresión de las proteínas recombinantes Proteínas marcadas con cola de glutatión-S-transferasa (GST) se expresaron en las cepas DH5-alfa de Escherichia coli. Para la expresión de XIAP de longitud completa, bacterias transformadas con los dominios BIR de XIAP, clAP-1 , clAP-2 y Livin, se cultivaron individualmente o en combinación durante la noche a 37 "C en medio de caldo Luria (LB) suplementado con 50 pg/ml de ampicilina. Después, el cultivo de la noche se diluyó 25 veces en medio LB nuevo suplementado con ampicilina y las bacterias se desarrollaron hasta A6oo = 0.6, y después se indujeron con isopropil-D-1 -tiogalactopiranósido durante 3 horas. Después de la inducción, las células se centrifugaron a 5000 RPM durante 10 minutos y el medio se eliminó. Cada pella obtenida de un cultivo de 1 litro recibió 10 mi de amortiguador de lisis (50 mM de Tris-HCI, 200 mM de NaCI, 1 mM de DTT, 1 rnM de PMSF, 2 mg/ml de lisosima, 100 pg/ml)), y se incubó a 4°C con agitación suave. Después de 20 minutos de incubación, la suspensión celular se puso a -80 °C durante la noche o hasta que se requería.

Purificación de las proteínas recombinantes Para la purificación de las proteínas recombinantes, la pella se descongeló sobre hielo y se resuspendio en 25 mi de amortiguador de lisis (50 mM de Tris-HCI pH 7.6, 0.1 mM de EDTA, 100 mM de NaCI, 100 g/ml de lisozima) /500 mi de cultivo original, y se incubó sobre hielo durante 15 min y se hicieron 5 ciclos de congelación/descongelación en nitrógeno líquido y un baño de agua a 37°C. La mezcla se sometió a sonicación usando un sonicador de sonda hasta que la suspensión ya no estaba viscosa, y se centrifugó a 13000g durante 20 minutos para recoger la fracción soluble (sobrenadante).

El sobrenadante resultante se mezcló con 3 mi de cuentas de glutatión-Sepharose (Pharmacia) durante 20 min a 4 °C. Posteriormente, las cuentas se lavaron 3 veces con una solución salina amortiguadora de Tris (TBS) 1X para quitar las proteínas no unidas. Las proteínas retenidas se eluyeron con 2 lavados de 1 mi de TRIS 50 mM pH 8.0 que contenía 10 mM de glutatión reducido. Las proteínas eluidas se mantuvieron separadamente y se les agregaron los reactivos apropiados para guardarse a -80 °C. De acuerdo con una SDS-PAGE, las proteínas purificadas eran >90% puras. La concentración de las proteínas purificadas se determinó por medio del método de Bradford.

Las proteínas marcadas con cola de His se expresaron en la cepa de E. coli en células E. coli AD494 usando una construcción pet28ACPP32. La fracción de proteína soluble se preparó como se describe arriba. Para purificar la proteína, el sobrenadante se purificó por cromatografía de afinidad usando Sepharose quelante (Pharmacia) cargado con N1SO4 de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Brevemente, el sobrenadante se cargó en Sepharose cargado con NiSO4 con 2 mi de Sepharose durante 20 min a 4°C. Posteriormente, las cuentas se lavaron 3 veces con MOPS 10 mM, pH 7.0, que contenía NaCI 500 mM, para quitar las proteínas no unidas. Las proteínas retenidas se eluyeron con 2 mi de amortiguador de elución (500 mM de imidazol en Tris pH 8.0), y se les agregaron los reactivos apropiados para guardarse a -80 °C. La pureza de la proteína eluida fue >90% determinada por SDS-PAGE. La concentración de las proteínas purificadas se determinó por medio del método de Bradford.

Preparación de las sondas P1 y P2 Se preparó una sonda de péptido fluorescente P1 , Fmoc-Ala-Val-Pro-Fe-Tyr(t-Bu)-Leu-Pro-Gly(t-Bu)-Gly-OH, usando química estándar de Fmoc sobre una resina de cloruro de 2-clorotritilo (véase Int. J. Pept. Prot. Res. 38:555-561 , 1991). La separación de la resina se hizo usando ácido acético al 20% en diclorometano (diclorometano), que dejó la cadena lateral todavía bloqueada. El ácido carboxílico C-terminal protegido se acopló con 4'-(aminometíl)fluoresceína (Molecular Probes, A-1351 ; Eugene, Oregon) usando un exceso de diisopropilcarbodiimida (DIC) en dimetilformamida (DMF) a temperatura ambiente, y se purificó por cromatografía en gel de sílice (metanol 10% en diclorometano). El grupo protector N-terminal Fmoc se eliminó usando piperidina (20%) en DMF, y se purificó por cromatografía en gel de sílice (metanol 20% en diclorometano, 0.5% HOAc). Finalmente, los grupos protectores t-butilo de la cadena lateral se eliminaron usando ácido trifluoroacético al 95% conteniendo 2.5% de agua y 2.5% de triisopropilsilano, para proveer la sonda P1 (>95% pura, HPLC).

La sonda P2 se preparó usando los métodos descritos en WO 2007/131 ,366.

EJEMPLO 1 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 5-e, que se puede usar como intermediario en la preparación de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 5 Síntesis del intermediario 5-e Paso 1 : A una solución de Boc-Chg-OH (9.16 g, 35.6 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente DIPEA (10.33 mi, 59.3 mmol), HOBt (4.81 g, 35.6 mmol) y HBTU (13.50 g, 35.6 mmol). Después de agitar durante 10 minutos se le agregó (S)-prolinol (3.0 g, 29.7 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se le agregó agua y acetato de etilo y la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico al 10 %, NaHC03 acuoso y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 5-a como un aceite incoloro.

Paso 2: Al intermediario 5-a (10.10 g, 29.7 mmol) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (30 mi) y la solución se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el intermediario 5-b «HCI como un sólido blanco.

MS {miz) +1 = 240.2.

Paso 3: A una solución de Boc-N-Me-Ala-OH (6.02 g, 29.6 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente DIPEA (20.70 mi, 118 mmol), HOBt (6.35 g, 41.5 mmol) y HBTU (14.61 g, 38.5 mmol). Después de agitar durante 10 minutos, se le agregó el intermediario 5-b «HCI (8.20 g, 29.6 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se le agregó agua y acetato de etilo y la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico al 10%, NaHC03 acuoso y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 5-c como un aceite incoloro.

Paso 4: A una solución del intermediario 5-c (1.20 g, 2.82 mmol) en CH2Cl2, enfriada a 0°C, se le agregó secuencialmente carbonato ácido de sodio (2.36 g, 28.2 mmol) y peryodinano de Dess-Martin (1.49 g, 3.52 mmol) y entonces la reacción se agitó durante 2 horas a 10 °C. Se le agregó NaHC03 acuoso y acetato de etilo y la capa orgánica se separó, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para dar el intermediario 5-d como un aceite incoloro.

Paso 5: A una solución del intermediario 5-d (500 mg, 1.18 mmol) en CH2CI2, se le agregó fenetilamina (283 µ?, 1.88 mmol). Después de agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, se le agregó triacetoxiborohidruro de sodio (300 mg, 1.41 mmol) y metanol y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se le agregó una solución acuosa saturada de NaHC03 y acetato de etilo y la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacío, para dar el intermediario 5-e como un aceite incoloro.

MS (m/z) M+ =528.4.

EJEMPLO 2 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 6-h, que se puede usar como intermediario en la preparación de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 6 Síntesis del intermediario 6-h Paso 1 : A una solución del N-(ter-butoxicarbonil)-L-prolinal 6-a (10.0 g, 50.2 mmol) en diclorometano (300 mi) se le agregó fenetilamina (6.52 mi, 50.2 mmol). Después de agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, la reacción se enfrió a 0 °C, se le agregó en porciones triacetoxiborohidruro de sodio (21.0 g, 100.3 mmol) y después la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se le agregó una solución acuosa de Na2C03 al 10% y la capa orgánica se separó; la fase acuosa se extrajo con diclorometano y el extracto orgánico combinado se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para dar el intermediario 6-b como un aceite incoloro. El intermediario 6-b se disolvió en éter dietilico (125 mi), la solución se enfrió a 0 °C y se le agregó HCI 1 N en éter dietilico (50.0 mi, 50.0 mmol). Se formó un precipitado y el intermediario 6-b «HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (miz) M+1 = 305.2.

Paso 2: A una solución del intermediario 6-b (6.1 1 g, 20.08 mmol) en 1 ,4-dioxano (50.0 mi) y agua (50 mi) enfriada a 0 °C, se le agregó NaHC03 (8.43 g, 100.0 mmol). Después de agitar durante 15 minutos se le agregó cloroformiato de bencilo (3.43 mi, 24.10 mmol) y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 horas. Se le agregó agua y acetato de etilo y la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 6-c como un aceite incoloro.

Paso 3: Al intermediario 6-c (8.41 g, 19.18 mmol) a 0°C se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (67.1 mi) y la solución se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietilico para dar el intermediario 6-d «HCI como un sólido beige.

MS (m/z) M+1 = 339.3.

Paso 4: A una solución del intermediario 6-d (394 mg, 1.05 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido (S)-2-Boc-2-(tetrahidro-2H-piran-4-il)acético (300 mg, 1.15 mmol), HATU (520 mg, 1.36 mmol), HOAt (48 µ?, 0.21 mmol) y DIPEA (733 µ?, 4.21 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante la noche. Se le agregó solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCÜ3 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 6-e esperado como un aceite amarillento.

Paso 5: Al intermediario 6-e (610 mg, 1.05 mmol) a 0 °C se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (3.68 mi) y la solución se agitó a 0 °C durante 4 horas. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para proveer el intermediario 6-f -HCI esperado como un sólido blanco.

S (m/z) M+1 = 480.4.

Paso 6: A una solución del intermediario 6-f «HCI (271 mg, 0.52 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente Boc-N-Me-Ala-OH (117 mg, 0.58 mmol), HATU (240 mg, 0.63 mmol), HOAt (175 µ?, 0.10 mmol) y DIPEA (366 µ?, 2.10 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 horas. Se le agregó solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de aHC03 y salmuera; se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 6-g esperado como un aceite amarillo claro.

Paso 7: A una solución del intermediario 6-g (277 mg, 0.41 mmol) en THF, agitada bajo N2, se le agregó Pd 10% /C (50% p/p de contenido de agua) (89 mg). La mezcla de reacción se purgó con H2 y se agitó durante 3 horas. Después, la reacción se filtró a través de celite y el filtrado se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 6-h como un aceite incoloro.

MS (m/z) M+1 = 531.5.

EJEMPLO 3 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 7-d, que se puede usar como intermediario en la preparación de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 7 Síntesis del intermediario 7-d Paso 1 : A una solución del intermediario 6-d »HCI (95.90 g, 256 mmol) en DMF (1300 mi), enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente Boc-tBu-gly-OH (65.10 g, 281 mmol), HOAt (42.6 mi, 25.6 mmol), HATU (107 g, 281 mmol) y DIPEA (179 mi, 1023 mmol), y luego la reacción se agitó a 0 X durante 30 min. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 7-a esperado como un aceite incoloro.

Paso 2: Al intermediario 7-a (141.00 g, 256 mmol) en metanol (130 mi) a 0°C se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (480 mi) y la solución se agitó durante 30 minutos a 0 °C, seguido por 3 horas a temperatura ambiente. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el intermediario 7-b'HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 452.4.

Paso 3: A una solución del intermediario 7-b*HCI (85.00 g, 174 mmol) en DMF (870 mi), enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente Boc-N-Me-Ala-OH (38.90 g, 192 mmol), HOAt (37.70, 22.64 mmol), HATU (72.80 g, 56.3 mmol) y DIPEA (122 mi, 192 mmol), y luego la reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 7-c esperado como una espuma blanca.

Paso 4: A una solución del intermediario 7-c (1.56 g, 2.45 mmol) en metanol agitada bajo N2 se le agregó Pd 10% /C (50% p/p de contenido de agua) (500 mg). La mezcla de reacción se purgó con H2 y se agitó durante 3 horas. Después, la reacción se filtró a través de celite y el filtrado se concentró al vacío para dar el intermediario 7-d como un aceite incoloro.

MS (m/z) M+1 = 503.5.

EJEMPLO 4 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 5, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 8 Síntesis del compuesto 5 Paso 1: A una solución del intermediario 5-e (150 mg, 0.28 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido imidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxílico (56 mg, 0.34 mmol), HATU (162 mg, 0.42 mmol) y DIPEA (500 µ?, 2.87 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. Se le agregó agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 8-a como un sólido blanco.

Paso 2: Al intermediario 8-a (99 mg, 0.14 mmol) en acetato de etilo (0.5 mi) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.8 mi) y la solución se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 5-2'HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 574.4.

EJEMPLO 5 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 3, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 9 Síntesis del compuesto 3 Paso 1: A una solución del intermediario 6-h (221 mg, 0.41 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido imidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxílico (74.7 mg, 0.45 mmol), HATU (206 mg, 0.5 mmol) y DIPEA (218 µ?, 1.24 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 9-a como un aceite incoloro.

Paso 2. Al intermediario 9-a (107 mg, 0.15 mmol) en acetato de etilo (0.5 mi) a 0 °C se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (554 µ?) y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 3»2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 576.4.

EJEMPLO 6 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 6, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 10 Síntesis del compuesto 6 2HCI Paso 1 : A una solución del intermediario 7-d (1 .97 g, 3.94 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido imidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxílico (642 mg, 3.94 mmol), HATU (1.94 g, 5.12 mmol) y DIPEA (2.05 mi, 1 1 .81 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 10-a como un sólido blanco.

Paso 2: Al intermediario 10-a (1.74 g, 2.69 mmol) en acetato de etilo (5 mi) a 0 °C, se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (9.40 mi) y la solución se agitó durante 3 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 6*2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 548.4.

EJEMPLO 7 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 9, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 11 Síntesis del compuesto 9 Paso 1: A una solución del intermediario 7-d (200 mg, 0.39 mmol) en diclorometano, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente DIPEA (174 µ?, 0.99 mmol) y 2-cloro-2-oxoacetato de etilo (109 mg, 0.79 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. Se le agregó HCI 1 N y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 11-a como un sólido blanco.

Paso 2: A una solución del intermediario 11 -a (215 mg, 0.35 mmol) en THF, enfriada a 0 °C, se le agregó LiOH acuoso 2N (1.0 mi, 2.0 mmol) y la reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. Se le agregó HCI 1 N y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para dar el intermediario 1 1-b como un sólido blanco.

Paso 3: A una solución del intermediario 1 1-b (200 mg, 0.34 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente anilina (41 µ?, 0.45 mmol), DIPEA (61 µ?, 0.34 mmol) y HATU (172 mg, 0.45 mmol), y la mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a 0 °C. Se le agregó agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con HCI acuoso 1 N, solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 1 1-c como un sólido blanco.

Paso 4: A una solución del intermediario 1 1-c (230 mg, 0.35 mmol) en diclorometano (2 mi), enfriada a 0°C, se le agregó TFA (2 mi) y luego la reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 9*TFA como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 =550.1.

EJEMPLO 8 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 12-g, que se puede usar como intermediario en la preparación de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 12 Síntesis del intermediario 12-g Paso 1 : A una solución del N-(ter-butoxicarbonil)-L-prolinal 6-a (30.0 g, 151.0 mmol) en diclorometano (1000 mi) se le agregó 2-(4-fluorofenil)etanamina (19.79 mi, 151.0 mmol). Después de agitar durante 2 horas a temperatura ambiente, la reacción se enfrió a 0 °C, se le agregó en porciones tnacetoxiborohidruro de sodio (38.3 g, 181.0 mmol) y la mezcla de reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante la noche. Se le agregó Na2C03 acuoso al 10% (800 mi); la capa orgánica se separó, la fase acuosa se extrajo con diclorometano, y el extracto orgánico combinado se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacío, para dar el intermediario 12-a como un aceite incoloro. El intermediario 12-a se disolvió en éter dietilico (400 mi), la solución se enfrió a 0°C y se le agregó HCI 1 N en éter dietilico (151.0 mi, 151.0 mmol). Se formó un precipitado y el intermediario 12-a*HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 323.3.

Paso 2: A una solución del intermediario 12-a*HCI (40.0 g, 111.0 mmol) en 1 ,4-dioxano (300 mi) y agua (300 mi), enfriada a 0 °C, se le agregó NaHC03 (46.8 g, 557.0 mmol). Después de agitar durante 15 minutos se le agregó cloroformiato de bencilo (17.50 mi, 123.0 mmol) y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 1.5 horas. Se le agregó agua y acetato de etilo y la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio, para dar el intermediario 12-b como un aceite incoloro.

Paso 3: Al intermediario 12-b (50.7 g, 111.0 mmol) a 0°C, se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (139 mi) y la solución se agitó durante 2.5 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietilico y hexano para dar el intermediario 12-c*HCI como una espuma blanca.

MS (m/z) M+1 = 357.3.

Paso 4: A una solución del intermediario 12-cHCI (38.9 g, 99.0 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente Boc-tBu-gly-OH (15.07 g, 65.1 mmol), HATU (48.9 g, 129.0 mmol), HOAt (24.75 mi, 14.85 mmol) y DIPEA (69.0 mi, 396.0 mmol), gota a gota durante un periodo de 30 minutos, y luego la reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 12-d esperado como una espuma blanca.

Paso 5: A una solución del intermediario 12-d (49.0 g, 86.0 mmol) en acetato de etilo (10 mi) a 0°C, se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (108 mi) y la mezcla de reacción se agitó durante 4 horas a 0 °C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el intermediario 12-e*HCI como una espuma blanca.

MS (m/z) M+1 = 470.5.

Paso 6: A una solución del intermediario 12-e*HCI (10.4 g, 20.55 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente Boc-NMe-Ala-OH (5.01 g, 24.66 mmol), HATU (10.94 g, 28.8 mmol), HOAt (5.14 mi, 3.08 mmol) y DIPEA (14.32 mi, 82.0 mmol), gota a gota durante un periodo de 30 minutos, y luego la reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 12-f esperado como una espuma blanca.

Paso 7: A una solución del intermediario 2-f (8.50 g, 16.32 mmol) en MeOH (100 mi) bajo N2, se le agregó Pd 10% /C (50% p/p de contenido de agua) (3.4 g). La mezcla de reacción se purgó con H2 y se agitó durante 1 hora. Después, la reacción se filtró a través de celite y el filtrado se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 12-g como un aceite incoloro.

MS (m/z) M+1 = 521.5.

EJEMPLO 9 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 40, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 13 Síntesis del compuesto 40 Paso 1: A una solución del intermediario 12-g (610 mg, 1.17 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido 1-metil- 1H-imidazol-4-carboxílico (177 mg, 1.40 mmol), HATU (624 mg, 1.64 mmol) y DIPEA (816 µ?, 4.69 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 horas. Se le agregó solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 13-a como una espuma blanca.

Paso 2: A una solución del intermediario 13-a (590 mg, 0.93 mmol) en acetato de etilo (0.5 mi) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (2.3 mi) y la mezcla se agitó durante 3 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 40 »2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+ = 529.5.

EJEMPLO 10 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 50, q compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 14 Síntesis del compuesto 50 Paso 1: A una solución del intermediario 12-g (400 mg, 0.76 mmol) en D F, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido 1-fenil-1 H-1 ,2,3-triazol-4-carboxílico, sal de litio (226 mg, 1.15 mmol), HATU (467 mg, 1.23 mmol) y DIPEA (535 µ?, 3.07 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 14-a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 14-a (282 mg, 0.40 mmol) en acetato de etilo (1.0 mi) se le agregó HCI 4N en 1,4-dioxano (1.0 mi) y la solución se agitó durante 5 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 50«2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 592.5.

EJEMPLO 11 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 63, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 15 Síntesis del compuesto 63 Paso 1 : A una solución del intermediario 12-g (15.17 g, 29.1 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido 6-fluoroimidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxilico, sal de HBr (86-c) (9.16 g, 35.0 mmol), HATU (13.29 g, 35.0 mmol) y DIPEA (20.0 mi, 1 7 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 horas. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 5-a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 15-a (14.96 g, 21.88 mmol) en acetato de etilo (11 mi) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (82.0 mi) y la solución se agitó durante 3 horas a 0°C. Se le agregó éter dietílico y se formó un precipitado; el compuesto 63 ·2??? se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 584.5.

EJEMPLO 12 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 66, q compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 16 Síntesis del compuesto 66 HCI N en 16-a 2HCI 1 ,4-dioxano o \\ Paso 1 : A una solución del intermediario 12-g (350 mg, 0.67 mmol) en D F, enfriada a 0 SC, se le agregó secuencialmente ácido 1-(4-fluorofenil)-1 H-im¡dazol-4-carboxíl¡co, sal de litio (88-e) (208 mg, 1.0 mmol), HATU (435 mg, 1.14 mmol) y DIPEA (468 µ?, 2.69 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 16-a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 16-a (515 mg, 0.78 mmol) en MeOH (0.5 mi) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.0 mi) y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 66 *2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 609.5.

EJEMPL0 13 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 67, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 17 Síntesis del compuesto 67 Paso 1 : A una solución del intermediario 12-g (856 mg, 1.64 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido 6,7-dihidro-5H-pirrolo[1 ,2-a]imidazol-2-carboxílico, sal de litio (87-e) (340 mg, 2.13 mmol), HATU (875 mg, 2.30 mmol) y DIPEA (859 µ?, 4.93 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 30 minutos. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 17-a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 17-a (515 mg, 0.78 mmol) en acetato de etilo (0.5 mi) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.0 mi) y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 67 *2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1= 555.6.

EJEMPLO 14 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 68, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 18 Síntesis del compuesto 68 Paso 1 : A una solución del intermediario 12-g (300 mg, 0.57 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido indolizin-2-carboxílico (107 mg, 0.66 mmol), HATU (285 mg, 0.75 mmol) y DI PEA (301 µ?, 1.72 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 30 minutos. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 18-a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 18-a (360 mg, 0.54 mmol) en acetato de etilo (0.5 mi) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.0 mi) y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 68*HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) +1 = 564.5.

EJEMPLO 15 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 62, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 19 Síntesis del compuesto 62 Paso 1 : A una solución del intermediario 12-g (300 mg, 0.57 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente benzo[d]oxazol-2-carboxilato de sodio (139 mg, 0.74 mmol), HATU (263 mg, 0.69 mmol) y DIPEA (401 µ?, 2.30 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 horas. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 19-a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 19-a (294 mg, 0.44 mmol) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.20 mi) y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 62*HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 566.5.

EJEMPLO 16 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 53, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 20 Síntesis del compuesto 53 Paso 1 : A una solución de ácido (2S,4S)-1 -(ter-butoxicarbonil)-4-fenoxipirro idin-2-carboxilico 20-a (1.40 g, 4.56 mmol) en THF, enfriada a 0°C, se le agregó complejo de borano tetrahidrofurano (18.22 mi, 18.2 mmol), y la reacción se agitó a 0°C durante 15 minutos, y a temperatura ambiente durante la noche. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío para dar el intermediario 20-b como un aceite incoloro.

Paso 2: A una solución del intermediario 20-b (1.33 g, 4.53 mmol) en DMSO (5.24 mi, 73.9 mmol) y diclorometano (10 mi) se le agregó TEA (2.53 mi, 18.13 mmol) y complejo de piridina-trióxido de azufre (1.44 g, 9.07 mmol), y la reacción se agitó a 0 °C durante 30 minutos, y a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se le agregó agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico acuoso al 10%, solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para dar el intermediario 20-c como un aceite incoloro.

Paso 3: A una solución del intermediario 20-c (1.32 g, 4.53 mmol) en diclorometano se le agregó 2-(4-fluorofenil)etanamina (595 µ?, 4.53 mmol). Después de agitar durante 30 minutos se le agregó triacetoxiborohidruro de sodio (1.21 g, 5.44 mmol) a 0 °C y la mezcla de reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante la noche. Se le agregó agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con NaOH acuoso 1 N, agua y salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacío, para dar el intermediario 20-d como un aceite incoloro.

Paso 4: A una solución del intermediario 20-d (1.87 g, 4.51 mmol) en DMF, enfriada a 0 X, se le agregó secuencialmente ácido imidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxílico (1.21 g, 4.96 mmol), HATU (2.05 g, 5.41 mmol) y DIPEA (2.36 mi, 3.53 mmol), y la mezcla de reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante la noche. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 20-e como una espuma blanca.

Paso 5: Al intermediario 20-e (800 mg, 1.43 mmol) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.0 mi) y la solución se agitó a 0°C durante 1 hora. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el intermediario 20-f «2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 =460.4.

Paso 6: A una solución del intermediario 20-f *2HCI (709 mg, 1.43 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente Boc-tBu-gly-OH (397 mg, 1.71 mmol), HOAt (357 µ?, 0.21 mmol), HATU (707 mg, 1.85 mmol) y DIPEA (1.0 mi, 5.72 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 1 hora. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 20-g esperado como una espuma blanca.

Paso 7: Al intermediario 20-g (651 mg, 0.96 mmol) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.0 mi) y la solución se agitó durante 1 hora a 0 °C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el intermediario 20-h -2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 =573.5.

Paso 8: A una solución del intermediario 20-h *2HCI (300 mg, 0.49 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente Boc-NMe-Ala-OH (140 mg, 0.69 mmol), HOAt (123 µ?, 0.07 mmol), HATU (281 mg, 0.73 mmol) y DIPEA (344 µ?, 1.97 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante la noche. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 20-i esperado como una espuma blanca.

Paso 9: Al intermediario 20-i (348 mg, 0.45 mmol) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.0 mi) y la solución se agitó durante 1 hora a 0 °C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 53 '2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 658.5.

EJEMPLO 17 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 21 -k, que se puede usar como intermediario en la preparación de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 21 Síntesis del intermediario 21 -k Paso 1 : A una solución del intermediario 21-a*HCI (10.0 g, 35.6 mmol) en 1 ,4-dioxano (89 mi) y agua (89 mi), enfriada a 0°C, se le agregó secuencialmente bicarbonato de sodio (8.98 g, 107.0 mmol) y cloroformiato de bencilo (6.72 g, 37.4 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 3 horas. Se le agregó éter dietílico (200 mi) y la capa orgánica se separó, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para dar el intermediario 21-b como un aceite incoloro.

Paso 2: Al intermediario 21-b (13.0 g, 34.4 mmol) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (30.0 mi) y la solución se agitó durante 1 hora a 0 °C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el intermediario 21-cHCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 279.3.

Paso 3: A una solución del intermediario 21-c «HCI (10.52 g, 33.4 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente Boc-tBu-gly-OH (8.50 g, 36.8 mmol), HOAt (5.57 mi, 3.34 mmol), HATU (13.98 g, 36.8 mmol) y DIPEA (23.35 mi, 134.0 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 3 horas. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 21-d esperado como un aceite incoloro.

Paso 4: Al intermediario 21-d (15.8 g, 32.1 mmol) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (30.0 mi) y la solución se agitó durante 1 hora a 0 °C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el intermediario 21-e*HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 392.5.

Paso 5: A una solución del intermediario 21-e «HCI (15.2 g, 35.5 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente Boc-NMe-Ala- OH (7.58 g, 37.3 mmol), HOAt (5.92 mi, 3.55 mmol), HATU (14.86 g, 39.1 mmol) y DIPEA (24.8 mi, 142.0 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 horas. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 21 -f esperado como una espuma blanca.

Paso 6: A una solución del intermediario 21 -f (20.2 g, 35.0 mmol) en THF, enfriada a 0°C, se le agregó borohidruro de litio (1.60 g, 73.6 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se le agregó agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico acuoso al 10%, solución acuosa saturada de NaHCÜ3 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 2 -g como una espuma blanca.

Paso 7: A una solución del intermediario 21-g (10.1 g, 18.41 mmol) en DMSO (5.23 mi, 73.6 mmol) y diclorometano (184 mi), enfriada a 0°C, se le agregó DIPEA (11.22 mi, 64.4 mmol) y complejo de piridina y trióxido de azufre (8.79 g, 55.2 mmol), y la reacción se agitó a 0°C durante 2 horas. Se le agregó agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico acuoso al 10%, solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para dar el intermediario 21 -h como una espuma blanca.

Paso 8. A una solución del intermediario 21-h (10.60 g, 19.39 mmol) en diclorometano se le agregó 2-(4-fluorofenil)etanamina (2.70 g, 19.39 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante la noche, se le agregó en porciones, a 0 °C, triacetoxiborohidruro de sodio (4.93 g, 23.27 mmol), y la mezcla de reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 horas. Se le agregó una solución acuosa saturada de NaHC03¡ la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para dar el intermediario 21 -i como una espuma blanca.

MS (m/z) M+1 = 670.6.

Paso 9: A una solución del intermediario 21 -i (10.0 g, 14.93 mmol) y ácido imidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxílico, sal de HBr (84-c) (3.64 g, 14.93 mmol), en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente HATU (6.24 g, 16.42 mmol) y DIPEA (10.43 mi, 59.70 mmol); la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 21 -j como una espuma beige.

Paso 10: A una solución del intermediario 21 -j (2.75 g, 3.37 mmol) en TEA (4.0 mi, 28.7 mmol) se le agregó secuencialmente cloruro de paladio (II) (60 mg, 0.34 mmol) y trietilsilano (1.34 mi, 8.45 mmol). La mezcla de reacción se purgó con H2 y se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Después, la reacción se filtró a través de celite y el filtrado se concentró al vacio para dar el intermediario 21 -k como un sólido beige.

MS (m/z) M+1 = 681.7.

EJEMPLO 18 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 55, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 22 Síntesis del compuesto 55 DIPEA, D AP cloruro de acetilo 22-a HCI 4¦>N,, e«:n., t 2HCI 1 ,4-dioxano Paso 1 : A una solución del intermediario 21 -k (420 mg, 0.61 mmol) en diclorometano (2.0 mi), enfriada a 0°C, se le agregó secuencialmente DIPEA (385 µ?, 2.20 mmol), DMAP (4.50 mg, 0.03 mmol) y cloruro de acetilo (63 µ?, 0.88 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. Se le agregó agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico acuoso al 10%, solución acuosa saturada de NaHCOa y salmuera; se secó sobre MgS0 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para dar el intermediario 22-a como un sólido blanco.

Paso 2: Al intermediario 22-a (230 mg, 0.32 mmol) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (2.0 mi) y la solución se agitó durante 1 hora a 0 °C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 55 '2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1= 623.5.

EJEMPL0 19 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 59, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 23 Síntesis del compuesto 59 DIPEA, D AP cloruro de bencenosulfonilo 1 ,4-dioxano Paso 1 : A una solución del intermediario 21-k (420 mg, 0.61 mmol) en piridina (4.0 mi), enfriada a 0°C, se le agregó secuencialmente DIPEA (323 µ?, 1.85 mmol), DMAP (3.8 mg, 0.03 mmol) y cloruro de bencenosulfonilo (79 µ?, 0.61 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se le agregó agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico acuoso al 10%, solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio para dar el intermediario 23-a como un sólido blanco.

Paso 2: Al intermediario 23-a (100 mg, 0.12 mmol) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (2.0 mi) y la solución se agitó durante 1 hora a 0 °C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 59 ^HCI como un sólido blanco.

MS (miz) M+1 = 721 .5.

EJEMPLO 20 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 24-d, que se puede usar como intermediario en la preparación de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 24 Síntesis del intermediario 24-d Paso 1 : A una solución del intermediario 12-c «HCI (13.7 g, 34.9 mmol) en DMF, enfriada a -10 °C, se le agregó secuencialmente Boc-Thr(Me)-OH (8.1 g, 34.9 mmol), HATU (14.6 g, 38.4 mmol), HOAt (63.9 mi, 38.4 mmol) y DIPEA (24.4 mi, 139.0 mmol), y luego la reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgSÜ4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 24-a esperado como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 24-a (10.8 g, 18.9 mmol) en acetato de etilo (10 mi) a 0 °C, se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (94.0 mi) y la solución se agitó durante 3 horas a 0 °C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el intermediario 24-b «HCI como una espuma blanca.

MS (m/z) M+1 = 472.5.

Paso 3: A una solución del intermediario 24-b «HCI (25.0 g, 49.2 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente Boc-NMe-Ala-OH (12.0 g, 59.0 mmol), HATU (26.2 g, 68.9 mmol), HOAt (12.3 mi, 7.38 mmol) y DIPEA (34.3 mi, 197 mmol), y luego la reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCÜ3 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 24-c esperado como una espuma blanca.

Paso 4: A una solución del intermediario 24-c (15.88 g, 23.67 mmol) en MeOH (118 mi) bajo N2 se le agregó Pd 10% /C (50% p/p de contenido de agua) (3.53 g). La mezcla de reacción se purgó con H2 y se agitó durante 5 horas. Después, la reacción se filtró a través de celite y el filtrado se concentró al vacío para dar el intermediario 24-d como un aceite incoloro.

MS (m/z) M+1 = 537.5.

EJEMPLO 21 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 58, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 25 Síntesis del compuesto 58 Paso 1: A una solución del intermediario 24-d (15.0 g, 28.7 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido imidazo[1 ,2-a]piridin-2-carboxilico, sal de litio (85-d) (5.79 g, 34.40 mmol), HATU (13.10 g, 34.40 mmol) y DIPEA (20.0 mi, 1 15.0 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 3 horas. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 25-a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 25-a (12.30 g, 18.45 mmol) en acetato de etilo (9.20 mi) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (69.20 mi) y la solución se agitó durante 3 horas a 0 °C. Se le agregó éter dietílico y se formó un precipitado; el compuesto 58 *2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 567.5.

EJEMPLO 22 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 72, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 26 Síntesis del compuesto 72 Paso 1 : A una solución del intermediario 24-d (400 mg, 0.76 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido 1-(4-fluorofenil)-1 H-imidazol-4-carboxílico, sal de litio (88-e) (212 mg, 1 .0 mmol), HATU (437 mg, 1.14 mmol) y DIPEA (400 µ?, 2.29 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCÜ3 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 26-a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 26-a (385 mg, 0.54 mmol) en acetato de etilo (0.5 mi) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.30 mi) y la solución se agitó durante 2 horas a 0 °C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 72 •2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 611.5 .

EJEMPLO 23 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 73, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 27 Síntesis del compuesto 73 Paso 1 : A una solución del intermediario 24-d (580 mg, 1.11 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido 1-metil- H-imidazol-4-carboxílico (168 mg, 1 .33 mmol), HATU (591 mg, 1 .55 mmol) y DIPEA (581 µ?, 3.33 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS0 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 27-a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 27-a (510 mg, 0.81 mmol) en acetato de etilo (0.5 mi) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (2.0 mi) y la solución se agitó durante 3 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietilico para dar el compuesto 73 «2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 531.5.

EJEMPLO 24 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 75, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 28 Síntesis del compuesto 75 Paso 1 : A una solución del intermediario 24-d (1.8 g, 3.44 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido 6,7-dihidro-5-H-pirrolo[1 ,2-a]imidazol-2-carboxílico, sal de litio (87-e) (743 mg, 4.48 mmol), HATU (2.0 g, 5.51 mmol) y DIPEA (1.80 mi, 10.33 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 28-a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 28-a (1.62 g, 2.46 mmol) en acetato de etilo (1.0 mi) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (6.17 mi) y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. Se le agregó éter dietílico y se formó un precipitado; el compuesto 75-2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 557.4.

EJEMPLO 25 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 74, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 29 Síntesis del compuesto 74 Paso 1 : A una solución del intermediario 24-d (956 mg, 1.82 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido 6-fluoroimidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxilico, sal de HBr (86-c) (575 mg, 2.19 mmol), HATU (1.04 g, 2.74 mmol) y DIPEA (958 µ?, 5.49 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 29-a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 29-a (1.0 g, 1.45 mmol) en acetato de etilo (1.0 mi) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (3.65 mi) y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. Se le agregó éter dietílico y se formó un precipitado; el compuesto 74 ·2?0? se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 586.4.

EJEMPLO 26 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 30-d, que se puede usar como intermediario en la preparación de un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 30 Síntesis del intermediario 30-d Paso 1 : A una solución del intermediario 12-c «HCI (13.7 g, 34.9 mmol) en DMF, enfriada a -10 °C, se le agregó secuencialmente Boc-Thr(Et)-OH (8.1 g, 34.9 mmol), HATU (14.6 g, 38.4 mmol), HOAt (63.9 mi, 38.4 mmol) y DIPEA (24.4 mi, 139.0 mmol), y luego la reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 30-a esperado como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 30-a (10.8 g, 18.9 mmol) en acetato de etilo (10 mi) a 0°C se le agregó HCI 4N en 1,4-dioxano (94.0 mi) y la solución se agitó durante 3 horas a 0 °C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el intermediario 30-b -HCI como una espuma blanca.

MS (m/z) M+1 = 486.5.

Paso 3: A una solución del intermediario 30-b*HCI (25.0 g, 49.2 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente Boc-NMe-Ala-OH (12.0 g, 59.0 mmol), HATU (26.2 g, 68.9 mmol), HOAt (12.3 mi, 7.38 mmol) y DIPEA (34.3 mi, 197 mmol), y luego la reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 30-c esperado como una espuma blanca.

Paso 4: A una solución del intermediario 30-c (15.88 g, 23.67 mmol) en MeOH (118 mi) bajo N2 se le agregó Pd 10% /C (50% p/p de contenido de agua) (3.53 g). La mezcla de reacción se purgó con H2 y se agitó durante 1 hora. Después, la reacción se filtró a través de celite y el filtrado se concentró al vacío para dar el intermediario 30-d como un aceite incoloro.

MS (m/z) M+1 = 537.5.

EJEMPLO 27 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 76, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 31 Síntesis del compuesto 76 Paso 1 : A una solución del intermediario 30-d (2.0 g, 3.73 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido 1-metil-1 H-imidazol-4-carboxílico (564 mg, 4.47 mmol), HATU (1.70 g, 4.47 mmol) y DIPEA (2.60 mi, 14.91 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 31 -a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 31 -a (1.90 g, 2.95 mmol) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-d¡oxano (11.05 mi) y la solución se agitó durante 3 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 76 *2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 545.5 EJEMPLO 28 El siguiente ejemplo ¡lustra la preparación del compuesto 78, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 32 Síntesis del compuesto 78 Paso 1: A una solución del intermediario 30-d (2.0 g, 3.73 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido imidazo[1 ,2-a]piridin-2-carboxílico, sal de litio (85-d) (752 mg, 4.47 mmol), HATU (1.70 g, 4.47 mmol) y DIPEA (2.60 mi, 14.91 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 32-a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 32-a (1.60 g, 2.35 mmol) en acetato de etilo (0.783 mi) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (8.81 mi) y la solución se agitó durante 3 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 78 -2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 581.4.

EJEMPLO 29 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 79, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 33 Síntesis del compuesto 79 Paso 1 : A una solución del intermediario 30-d (1.6 g, 2.98 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido 1-(4-fluorofenil)- 1 H-imidazol-4-carboxílico, sal de litio (88-e) (632 mg, 2.98 mmol), HATU (1.36 g, 3.58 mmol) y DIPEA (2.10 mi, 1 1.93 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2 horas. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 33-a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 33-a (1.28 g, 1.76 mmol) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (6.62 mi) y la solución se agitó durante 3 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico para dar el compuesto 79 *2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) +1 = 625.5.

EJEMPLO 30 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 80, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 34 Síntesis del compuesto 80 Paso 1 : A una solución del intermediario 30-d (1.60 g, 2.98 mmol) en DMF, enfriada a 0 °C, se le agregó secuencialmente ácido 6-fluoroimidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxílico, sal de HBr (86-c) (937 mg, 3.58 mmol), HATU (1.36 g, 3.58 mmol) y DIPEA (2.07 mi, 11.93 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 horas. Se le agregó una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCC>3 y salmuera; se secó sobre gSO4 anhidro, se filtró y se concentró, al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 34-a como una espuma blanca.

Paso 2: Al intermediario 34-a (1.48 g, 2.11 mmol) se le agregó HCI 4N en 1 ,4-dioxano (7.93 mi) y la solución se agitó durante 3 horas a 0 °C. Se le agregó éter dietílico y se formó un precipitado; el compuesto 80 *2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 600.5.

EJEMPLO 31 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 81 , que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 35 Síntesis del compuesto 81 Paso 1 : A una solución del intermediario 30-d (1.6 g, 2.98 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 6,7-dihidro-5- H-pirrolo[1 ,2-a]imidazol-2-carboxílico, sal de litio (87-e) (566 mg, 3.58 mmol), HATU (1.36 g, 3.58 mmol) y DIPEA (2.0 mi, 11.93 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCC>3 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 35-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (6.48 mi) al intermediario 35-a (1.45 g, 2.16 mmol), y la solución se agitó durante 3 horas a 0°C. Se añadió éter dietílico, se formó un precipitado y el compuesto 81 *2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 571.5.

EJEMPLO 32 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 36-h, que puede usarse como un intermediario en la preparación de un compuesto de fórmula 1 o sal del mismo.

ESQUEMA 36 Síntesis del intermediario 36-h Paso 1 : A una solución del intermediario 21-a *HCI (15.0 g, 53.4 mmol) en diclorometano, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente DIPEA (37.3 mi, 214.0 mmol), DMAP (326 mg, 2.67 mmol) y cloruro de benzoilo (6.82 mi, 58.8 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron agua y acetato de etilo, la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico acuoso a 10%, solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 36-a esperado como un sólido blanco.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (141.0 mi) al intermediario 36-a (19.6 g, 56.3 mmol), y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el intermediario 36-b HCI como un sólido blanco: MS {miz) M+1 = 249.2.

Paso 3: A una solución del intermediario 36-b HCI (14.7 g, 51 .6 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente Boc-tBu-Gly-OH (13.13 g, 56.8 mmol), HOAt (8.60 mi, 5.16 mmol), HATU (21.59 g, 56.8 mmol) y DIPEA (36.1 mi, 207.0 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 36-c esperado como un aceite incoloro.

Paso 4: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-díoxano (130.0 mi) al intermediario 36-c (24.0 g, 52.0 mmol), y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el intermediario 36-d HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 362.2.

Paso 5: A una solución del intermediario 36-d HCI (10.73 g, 52.8 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente Boc-NMe-Ala-OH (10.73 g, 52.8 mmol), HOAt (8.80 mi, 5.28 mmol), HATU (22.07 g, 58.1 mmol) y DIPEA (36.9 mi, 2 1.0 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 36-e esperado como una espuma blanca.

Paso 6; A una solución del intermediario 36-e (29.0 g, 53.0 mmol) en THF enfriada a 0°C se le añadió borohidruro de litio (2.42 g, 111.0 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadieron agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico acuoso a 10%, solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 36-f como una espuma blanca.

Paso 7: A una solución del intermediario 36-f (25.8 g, 49.7 mmol) en DMSO (14.13 mi, 199.0 mmol) y diclorometano (200 mi) enfriada a 0°C se añadieron DIPEA (30.3 mi, 174.0 mmol) y complejo de piridína-trióxido de azufre (23.75 g, 149.0 mmol), y la reacción se agitó entonces a 0°C durante 1 hora. Se añadieron agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico acuoso a 10%, solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para proveer el intermediario 36-g como una espuma blanca.

Paso 8: A una solución del intermediario 36-g (25.7 g, 49.7 mmol) en diclorometano se le añadió 2-(4-fluorofenil)etanamina (6.21 mi, 47.4 mmol). Después de agitación a temperatura ambiente durante la noche sé le añadió triacetoxiborohidruro de sodio (21.14 g, 95.0 mmol) en porciones a 0°C, y la mezcla de reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió solución acuosa saturada de NaHCO3; la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para proveer el intermediario 36-h como una espuma blanca. A una solución del intermediario 36-h (27.4 g, 42.8 mmol) en éter dietílico (500 mi) se le añadió HCI 1N en éter dietílico (52.1 mi, 52.1 mmol), se formó un precipitado, y el intermediario 36-h HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+ = 640.6.

EJEMPLO 33 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 49, que compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 37 Paso 1 : A una solución del intermediario 36-h «HCI (2.0 g, 2.96 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido imidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxílico (507 mg, 3.11 mmol), HATU (1.23 g, 3.25 mmol) y DIPEA (2.06 mi, 11.83 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 37-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (3.19 mi) al intermediario 37-a (1.0 g, 1.27 mmol), y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 49*2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 685.5.

EJEMPLO 34 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 69, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 38 Síntesis del compuesto 69 Paso 1 : A una solución del intermediario 36-h HCI (2.0 g, 2.96 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido imidazo[1 ,2-a]piridin-2-carboxílico, sal de litio (85-d) (525 mg, 3.11 mmol), HATU (1.23 g, 3.25 mmol) y DIPEA (2.06 mi, 11.83 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 38-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (3.19 mi) al intermediario 38-a (1.24 g, 1.58 mmol), y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 69 *2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 684.4.

EJEMPLO 35 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 86, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 39 Síntesis del compuesto 86 Paso 1 : A una solución del intermediario 36-h HCI (2.0 g, 2.96 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1-metil-1 H-imidazpl-4-carboxílico (448 mg, 3.55 mmol), HATU (1.23 g, 3.25 mmol) y DIPEA (2.06 mi, 11.83 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 39-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (4.68 mi) al intermediario 39-a (1.40 g, 1.87 mmol), y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 86 «2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 648.5.

EJEMPLO 36 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 87, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 40 Síntesis del compuesto 87 Paso 1 : A una solución del intermediario 36-h HCI (2.0 g, 2.96 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1 -(4-fluorofenil)-1 H-imidazol-4-carboxílico, sal de litio (88-e) (662 mg, 3.1 1 mmol), HATU (1.23 g, 3.25 mmol) y DIPEA (2.06 mi, 1.83 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre gS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 40-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (5.92 mi) al intermediario 40-a (1.40 g, 1.87 mmol), y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 87 -2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 728.5.

EJEMPLO 37 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 89, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 41 Síntesis del compuesto 89 Paso 1: A una solución del intermediario 36-h HCI (2.0 g, 2.96 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 6,7-dihidro-5-H-pirrolo[1 ,2-a]imidazol-2-carboxílico, sal de litio (87-e) (589 mg, 3.55 mmol), HATU (1.23 g, 3.25 mmol) y DIPEA (2.06 mi, 11.83 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCC>3 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 41 -a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (3.29 mi) al intermediario 41 -a (1.02 g, 1.32 mmol), y la solución se agitó durante 1 hora 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 89 *2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 674.5.

EJEMPLO 38 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 42-h, que puede usarse como un intermediario en la preparación de un compuesto de fórmula 1 o sal del mismo.

ESQUEMA 42 Síntesis del intermediario 42-h Paso 1 : A una solución de 4-hidroxipirrolidin-2-carboxilato de (2S, 4R)-metilo, sal de HCI 42-a (4.0 g, 22.02 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente Boc-tBu-Gly-OH (6.1 1 g, 26.4 mmol), HOAt (5.51 mi, 3.30 mmol), HATU (10.89 g, 28.6 mmol) y DIPEA (15^39 mi, 88.0 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 42-b esperado como un sólido de color beige.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (80 mi) al intermediario 42-b (7.89 g, 22.0 mmol), y la solución se agitó durante 3 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el intermediario 42-c-HCI como una espuma blanca.

MS (m/z) M+1 = 259.1.

Paso 3: A una solución de Boc-NMe-Ala-OH (7.16 g, 35.2 mmol) e¡n DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente HOBt (5.73 g, 37.4 mmol), HBTU (14.19 g, 37.4 mmol) y DIPEA (19.23 mi, 40.0 mmol). Después de agitación por 10 minutos se le añadió el intermediario 42-c (6.49 g, 25.1 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico acuoso a 10%, solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgS0 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 42-d esperado como un sólido blanco.

Paso 4: A una solución del intermediario 42-d (2.32 g, 5.23 mmol), 4-fluorofenol (704 mg, 6.28 mmol) y trifenilfosfina (1.92 g, 7.32 mmol) en THF se le añadió DIAD (1.42 mi, 7.32 mmol) gota a gota, y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 días. Se añadieron éter dietílico y hexano, se formó un precipitado, y el óxido de trifenilfosfina se separó por filtración. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice, para proveer el intermediario 42-e esperado como un aceite incoloro.

Paso 5: A una solución del intermediario 42-e (4.6 g, 8.56 mmol) en THF enfriada a 0°C se le añadió borohidruro de litio (559 mg, 25.7 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico a 10%, solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 42-f como un aceite incoloro.

Paso 6: A una solución del intermediario 42-f (4.2 g, 8.24 mmol) en DMSO (2.33 mi, 33.0 mmol) y diclorometano (80 mi) enfriada a 0°C, se le agregó DIPEA (5.04 mi, 28.8 mmol) y complejo de piridina-trióxido de azufre (3.94 g, 24.72 mmol), y la reacción se agitó entonces a 0°C durante 1 hora. Se añadieron agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico a 10%, solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para proveer el intermediario 42-g como un sólido de color beige.

Paso 7: A una solución del intermediario 42-g (3.8 g, 7.49 mmol) en diclorometano se le añadió 2-(4-fluorofenil)etanamina (935 µ?, 7.13 mmol). Después de agitación a temperatura ambiente durante la noche se le añadió en porciones a 0°C triacetoxiborohidruro de sodio (3.18 g, 14.26 mmol), y la mezcla de reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió solución acuosa saturada de NaHC03; la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacío, para proveer el intermediario 42-g como un aceite amarillo. A una solución del intermediario 42-g en éter dietílico (100 mi) se le añadió HCI 1 N en éter dietílico (7.84 mi, 7.84 mmol), se formó un precipitado, y el intermediario 42-h HCI se recogió por filtración como un sólido de color beige.

MS (m/z) M+1 = 631.5.

EJEMPLO 39 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 82, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 43 Síntesis del compuesto 82 Paso 1 : A una solución del intermediario 42-h HCI (1.50 g, 2.24 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1- metil-1 H-imidazol-4-carboxílico (397 mg, 3.15 mmol), HATU (1.19 g, 3.15 mmol) y DIPEA (1.57 mi, 8.99 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 43-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (4.50 mi) al intermediario 43-a (1.10 g, 1.48 mmol), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietilico, para proveer el compuesto 82 «2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 639.5.

EJEMPLO 40 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 83, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 44 Síntesis del compuesto 83 Paso 1 : A una solución del intermediario 42-h HCI (1.40 g, 2.01 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 6,7-dihidro-5-H-pirrolo[1 ,2-a]imidazol-2-carboxílico, sal de litio (87-e) (447 mg, 2.94 mmol), HATU (1.12 g, 2.94 mmol) y DIPEA (1.46 mi, 8.39 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre gS0 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 44-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (6.69 mi) al intermediario 44-a (1.02 g, 1.33 mmol), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 83 -2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 665.5.

EJEMPLO 41 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 84, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 45 Síntesis del compuesto 84 Paso 1 : A una solución del intermediario 42-h «HCI (2.0 g, 2.96 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido imidazo[1 ,2-a]piridin-2-carboxílico, sal de litio (85-d) (494 mg, 2.94 mmol), HATU (1.11 g, 2.94 mmol) y DIPEA (1.46 mi, 8.39 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 45-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (5.97 mi) al intermediario 45-a (926 mg, 1.19 mmol), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 84 i2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 675.5.

EJEMPLO 42 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 10, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 46 Síntesis del compuesto 10 Paso 1 : A una solución del intermediario 12-a-HCI (25.0 g, 69.7 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido imidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxílico (13.64 g, 84.0 mmol), HATU (34.4 g, 91 .0 mmol) y DIPEA (48.5 mi, 279.0 mmol) gota a gota durante un período de 45 minutos, y la reacción se agitó entonces a 0°C durante 30 minutos. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre gSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 46-a como una espuma de color beige.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (171 mi) al intermediario 46-a (32.0 g, 68.4 mmol), y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C. Se añadió éter dietílico, y el intermediario 46-b *2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 368.3.

Paso 3: A una solución del intermediario 46-D -2HCI (25.0 g, 56.8 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente Boc-tBu-gly-OH (14.44 g, 62.5 mmol), HATU (28.1 g, 73.8 mmol), HOAt (14.19 mi, 8.52 mmol) y DIPEA (39.6 mi, 227.0 mmol) gota a gota durante un período de 30 minutos, y la reacción se agitó entonces a 0°C durante 45 minutos. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCC>3 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 46-c esperado como una espuma blanca.

Paso 4: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (62.4 mi) al intermediario 46-c (14.5 g, 24.97 mmol), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. Se añadió éter dietílico, y el intermediario 46-d *2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 481.5.

Paso 5: A una solución del intermediario 46-d *2HCI (13.8 g, 26.7 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente Boc-NMe-Ala-OH (5.97 g, 29.4 mmol), HATU (13.19 g, 34.7 mmol), HOAt (6.67 ml, 4.0 mmol) y DIPEA (18.6 ml, 107.0 mmol) gota a gota durante un período de 30 minutos, y la reacción se agitó entonces a 0°C durante 30 minutos. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCÜ3 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 46-e esperado como una espuma blanca.

Paso 6: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (58.2 ml) al intermediario 46-e ( 5.5 g, 23.28 mmol) en acetato de etilo (5 ml), y la solución se agitó durante 1.5 horas a 0°C. Se añadió éter dietílico, y el compuesto 10 «2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 566.5.

EJEMPLO 43 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 47-d, que puede usarse como un intermediario en la preparación de un compuesto de fórmula 1 o sal del mismo.

ESQUEMA 47 Síntesis del intermediario 47-d Paso 1 : A una solución del intermediario 12-c HCI (29.57 g, 75.0 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente Boc-Chg-OH (22.27 g, 87.0 mmol), HATU (42.9 g, 113.0 mmol), HOAt (18.82 mi, 11.29 mmol) y DIPEA (41.4 mi, 226.0 mmol) durante un período de 30 minutos, y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgSQ4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 47-a esperado como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (188 mi) al intermediario 47-a (44.7 g, 75.0 mmol) en acetato de etilo (10 mi) a 0°C, y la solución se agitó durante 4 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el intermediario 47-b *HCI como una espuma blanca.

S (m/z) M+1 = 596.4.

Paso 3: A una solución del intermediario 47-b HCI (25.8 g, 48.50 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente Boc-NMe-Ala-OH (11.33 g, 55.8 mmol), HATU (25.8 g, 67.9 mmol), HOAt (8.08 mi, 4.85 mmol) y DI PEA (33.8 mi, 194.0 mmol) gota a gota durante un período de 30 minutos, y la reacción se agitó entonces a 0°C durante 1 hora. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 47-c esperado como una espuma blanca.

Paso 4: A una solución del intermediario 47-c (23.7 g, 34.8 mmol) en MeOH (100 mi) bajo N2 se le añadió Pd al 10%/C (50% p/p de contenido de agua) (7.4 g). La mezcla de reacción se purgó con H2 y se agitó durante 2 horas. La reacción se filtró entonces a través de celite y el filtrado se concentró al vacío, para proveer el intermediario 47-d como una espuma blanca.

MS (m/z) M+1 = 547.4.

EJEMPLO 44 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 20, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 48 Síntesis del compuesto 20 Paso 1 : A una solución del intermediario 47-d (17.9 g, 32.7 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido imidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxílico, sal de HBr (84-c) (9.59 g, 39.3 mmol), HATU (18.67 g, 49.1 mmol) y DIPEA (17.11 mi, 98.0 mmol) durante un periodo de 30 minutos, y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 48-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (44.5 mi) al intermediario 48-a (12.32 g, 17.81 mmol) en acetato de etilo (10 mi) a 0°C, y la solución se agitó durante 4 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 20-»2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 592.4.

EJEMPLO 45 El siguiente ejemplo ¡lustra la preparación del compuesto 103, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 49 Síntesis del compuesto 103 Paso 1 : A una solución del intermediario 47-d (500 mg, 0.91 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 6-fluoroimidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxílico, sal de HBr (86-c) (276 mg, 1.05 mmol), HATU (522 mg, 1.37 mmol) y DIPEA (478 µ?, 2.74 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0o por 1 hora. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 49-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (882 µ?) al intermediario 49-a (250 mg, 0.35 mmol) en acetato de etilo (500 µ?), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietilico, para proveer el compuesto 103 »2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 610.3.

EJEMPLO 46 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 18, que es un compuesto de fórmula 1 o una sal del mismo.

ESQUEMA 50 Síntesis del compuesto 18 47-d Paso 1 : A una solución del intermediario 47-d (303 mg, 0.55 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente DIPEA (483 µ?, 2.77 mmol) y cloruro de imidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carbonilo (250 mg, 1.38 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS0 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 50-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.85 mi) al intermediario 50-a (366 mg, 0.53 mmol) en metanol (200 µ?), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 18 *2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 591.4.

EJEMPLO 47 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 120, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 51 Síntesis del compuesto 120 Paso 1 : A una solución del intermediario 47-d (500 mg, 0.91 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1-metil-1 H-imidazol-4-carboxílico (138 mg, 1.09 mmol), HATU (522 mg, 1.37 mmol) y DIPEA (478 µ?, 2.74 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 51-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (918 µ?) al intermediario 51-a (240 mg, 0.37 mmol) en acetato de etilo (500 µ?), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 120 »2HCI como un sólido blanco.

MS (miz) M+1 = 555.3.

EJEMPLO 48 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 1 13, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 52 Síntesis del compuesto 113 Paso 1 : A una solución del intermediario 47-d (500 mg, 0.91 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 6,7-dihidro-5-H-pirrolo[1 ,2-a]imidazol-2-carboxílico, sal de litio (87-e) (152 mg, 915 mmol), HATU (522 g, 1.37 mmol) y DIPEA (478 µ?, 2.74 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 52-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.37 mi) al intermediario 52-a (373 mg, 0.54 mmol) en acetato de etilo (500 µ?), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. Se añadió éter dietílico, se formó un precipitado, y el compuesto 113 '2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 581.3.

EJEMPLO 49 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 104, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 53 Síntesis del compuesto 104 Paso 1 : A una solución del intermediario 47-d (500 mg, 0.91 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1-(4-fluorofenil)-1 H-imidazol-4-carboxílico, sal de litio (88-e) (224 mg, 1.05 mmol), HATU (522 mg, 1.37 mmol) y DIPEA (478 µ?, 2.74 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCÜ3 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 53-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (886 µ?) al intermediario 53-a (260 mg, 0.35 mmol) en acetato de etilo (0.5 mi), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 104 «2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 635.3.

EJEMPLO 50 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 91 , que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 54 Síntesis del compuesto 91 Paso 1 : A una solución del intermediario 12-g (1.50 g, 2.88 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1- ciclopentil-1 H-imidazol-4-carboxílico, sal de litio (831 mg, 4.47 mmol), HATU (1.31 g, 3.46 mmol) y DIPEA (2.0 ml, 11.52 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 54-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (8.79 mi) al intermediario 54-a (1.20 g, 1.75 mmol) en acetato de etilo (500 µ?), y la solución se agitó durante 1.5 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 91 »2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 583.5.

EJEMPLO 51 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 93, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 55 Síntesis del compuesto 93 Paso 1 : A una solución del intermediario 12-g (1.40 g, 2.69 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1-ciclohexil-1 H-imidazol-4-carboxílico (783 mg, 4.03 mmol), HATU (1.23 g, 3.23 mmol) y DIPEA (1.87 mi, 10.76 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 55-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (5.17 mi) al intermediario 55-a (960 mg, 1.37 mmol) en acetato de etilo (1.0 mi), y la solución se agitó durante 1.5 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 93 *2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 597.4.

EJEMPLO 52 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 94, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 56 Síntesis del compuesto 94 Paso 1: A una solución del intermediario 12-g (1.60 g, 3.07 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1-isopropil-1 H-imidazol-4-carboxílico, sal de litio (734 mg, 4.76 mmol), HATU (1.40 g, 3.69 mmol) y DIPEA (2.14 mi, 12.29 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 56-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (4.14 mi) al intermediario 56-a (850 mg, 1.10 mmol) en acetato de etilo (1.0 mi), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietilico, para proveer el compuesto 94 *2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1= 557.4.

EJEMPLO 53 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 95, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 57 Síntesis del compuesto 95 Paso 1 : A una solución del intermediario 12-g (1.30 g, 2.49 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido í- (tetrahidro-2H-piran-4-il)-1 H-imidazol-4carboxílico, sal de litio (89-d) (656 mg, 3.25 mmol), HATU (1.23 g, 3.25 mmol) y DIPEA (1.74 mi, 10.0 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidrOj se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 57-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (4.43 mi) al intermediario 57-a (960 mg, 1.18 mmol) en acetato de etilo (1.0 mi), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietilico, para proveer el compuesto 95 *2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 599.4.

EJEMPLO 54 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 61 , que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 58 Síntesis del compuesto 61 Paso 1: A una solución del intermediario 12-g (350 mg, 0.67 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1 -fenil-1 H-imidazol-4-carboxílico, sal de litio (190 mg, 1.0 mmol), HATU (435 mg, 1.14 mmol) y DIPEA (468 µ?, 2.69 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 58-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.25 mi) al intermediario 58-a (345 mg, 0.50 mmol) en metanol (500 µ?), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietilico, para proveer el compuesto 61 «2HCI como un sólido blanco.

MS (miz) M+1 = 591 .5.

EJEMPLO 55 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 122, que es un compuesto de fórmula .

ESQUEMA 59 Síntesis del compuesto 122 Paso 1: A una solución del intermediario 12-g (213 mg, 0.41 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1-fenil-1 H-pirrol-3-carboxílico (90-c) (100 mg, 0.53 mmol), HATU (203 mg, 0.53 mmol) y DIPEA (286 µ?, 1.64 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruró de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 59-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.22 mi) al intermediario 59-a (244 mg, 0.32 mmol) en acetato de etilo (325 µ?), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 122 «2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 590.2.

EJEMPLO 56 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 109, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 60 Síntesis del compuesto 109 Paso 1 : A una solución del intermediario 12-g (229 mg, 0.44 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 5-fenil- 1 H-imidazol-2-carboxílico (195 mg, 0.87 mmol), HATU (220 mg, 0.57 mmol) y DIPEA (310 µ?, 1.78 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 60-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (2.22 mi) al intermediario 60-a (307 mg, 0.44 mmol) en acetato de etilo (445 pl), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 109··2?? como un sólido blanco.

MS (m/z) +1 = 591.2.

EJEMPLO 57 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 90, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 61 Síntesis del compuesto 90 Paso 1 : A una solución del intermediario 12-g (598 mg, 0.44 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1 -fenil- H-pirazol-4-carboxílico (217 mg, 1.15 mmol), HATU (526 mg, 1.38 mmol) y DIPEA (803 µ?, 4.61 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 61 -a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (3.13 mi) al intermediario 61 -a (577 mg, 0.83 mmol) en acetato de etilo (500 pl), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 90 *2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 591.4.

EJEMPLO 58 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 88, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 62 Síntesis del compuesto 88 Paso 1 : A una solución del intermediario 12-g (1.2 g, 2.30 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 5-fenil-1 H-pirazol-3-carboxílico (455 mg, 2.42 mmol), HATU (1.0 g, 2.77 mmol) y DIPEA (1.60 mi, 9.22 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de aHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 62-a como un sólido blanco.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (6.15 mi) al intermediario 62-a (850 mg, 1.23 mmol) en acetato de etilo (500 µ?), y la solución se agitó durante 1.5 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 88-»2HCI como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 591.4.

EJEMPLO 59 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 117, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 63 Síntesis del compuesto 117 Paso 1 : A una solución del intermediario 12-g (1.0 g, 1.92 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 5-fenil- 1 ,3,4-oxadiazol-2-carboxílico, sal de sodio (91 -c) (1.36 g, 6.41 mmol), HATU (2.19 g, 5.76 mmol) y DIPEA (1.34 mi, 7.68 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 63-a como un sólido blanco.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (10.0 mi) al intermediario 63-a (453 mg, 0.65 mmol), y la solución se agitó durante 3 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 117 *2HCI como un sólido blanco.

S (m/z) M+1 = 593.2.

EJEMPLO 60 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 115, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 64 Síntesis del compuesto 115 Paso 1: A una solución del intermediario 12-g (847 g, 1.62 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 5- fenilisoxazol-3-carboxílico (431 mg, 2.27 mmol), HATU (1.05 g, 2.77 mmol) y DIPEA (1.13 mi, 6.51 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 64-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (5.0 mi) al intermediario 64-a (356 mg, 0.51 mmol), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. Se añadió éter dietilico, se formó un precipitado, y el compuesto 115--2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 592.1.

EJEMPLO 61 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 65-i, que puede usarse como un intermediario en la preparación de un compuesto de fórmula 1 o sal del mismo.

ESQUEMA 65 Síntesis del intermediario 65-i Paso 1 : A una solución de (2S,4R)-1-Boc-2-metil-4-hidroxipirrolidin-2-carboxilato (18.0 g, 73.4 mmol), 4-fluorofenol (9.05 g, 81.0 mmol) y trifenilfosfina (21.17 g, 81.0 mmol) en THF se le añadió gota a gota DIAD (17.07 g, 84.0 mmol) en THF (20 mi), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 días. Se añadieron éter dietilico y hexano, se formó un precipitado, y el óxido de trifenilfosfina se separó por filtración. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice, para proveer el intermediario 65-b esperado como un sólido amarillo.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (78 mi, 312 mmol) al intermediario 65-b (21.2 g, 62.5 mmol), y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C y luego 30 minutos a temperatura ambiente. Se añadió éter dietilico, se formó un precipitado, y el intermediario 65-c «HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 240.0.

Paso 3: A una solución del intermediario 65-c «HCI (14.2 g, 51.5 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente Boc-Thr(Me)-OH (13.22 g, 56.7 mmol), HATU (21.54 g, 56.7 mmol), HOAt (8.58 mi, 5.15 mmol) y DIPEA (36.0 mi, 206 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 65-d esperado como una espuma blanca.

Paso 4: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (63.3 mi) al intermediario 65-d (23.0 g, 50.6 mmol), y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C y luego 30 minutos a temperatura ambiente. Se añadió éter dietílico, se formó un precipitado, y el intermediario 65-e HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 355.2.

Paso 5: A una solución del intermediario 65-e HCI (16.2 g, 41.4 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le. añadieron secuencialmente Boc-NMe-Ala-OH (9.27 g, 45.6 mmol), HATU (1734 g, 45.6 mmol), HOAt (6.91 mi, 4.14 mmol) y DIPEA (29.0 mi, 166.0 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 3 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgSO4, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 65-f esperado como una espuma blanca.

Paso 6: A una solución del intermediario 65-f (23.0 g, 42.6 mmol) en THF enfriada a 0DC se le añadió borohidruro de litio (1.95 g, 90.0 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico acuoso a 10%, solución acuosa saturada de aHC03 y salmuera; se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 65-g como una espuma blanca.

Paso 7: A una solución del intermediario 65-g (8.7 g, 17.01 mmol) en DMSO (4.83 mi, 68.0 mmol) y diclorometano (150 mi) enfriada a 0°C se añadieron DIPEA (10.40 mi, 59.5 mmol) y complejo de piridina-trióxido de azufre (8.12 g, 51.0 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico a 10%, solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para proveer el intermediario 65-h como una espuma blanca.

Paso 8: A una solución del intermediario 65-h (8.0 g, 15.70 mmol) en diclorometano se le añadió 2-(4-fluorofenil)etanamina (1.87 mi, 14.3 mmol). Después de agitación a temperatura ambiente durante 2 horas, se añadió en porciones triacetoxiborohidruro de sodio (6.37 g, 28.5 mmol), y la mezcla de reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió solución acuosa saturada de NaHCOa; la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para proveer el intermediario 65-i como un aceite amarillo. A una solución del intermediario 65-i en éter dietílico (100 mi) se le añadió HCI 1 N en éter dietílico (15.7 mi), se formó un precipitado, y el intermediario 65-i-HCI se recogió por filtración como un sólido de color beige.

MS (m/z) M+1 = 633.4.

EJEMPLO 62 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 100, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 66 Síntesis del compuesto 100 Paso 1 : A una solución del intermediario 65-i HCI (1.5 g, 2.24 rnmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido imidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxilico (464 mg, 2.84 mmol), HATU (992 mg, 2.61 mmol) y DIPEA (1.65 ml, 9.48 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 66-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (2.0 ml) al intermediario 66-a (760 mg, 0.97 mmol) a 0°C, y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C y luego 30 minutos a temperatura ambiente. Se añadió acetato de etilo, se formó un precipitado, y el compuesto 100 «2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (miz) M+1 = 678.5.

EJEMPLO 63 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 102, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 67 Síntesis del compuesto 102 Paso 1 : A una solución del intermediario 65-i *HCI (2.0 g, 2.98 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido imidazo[1 ,2-a]piridin-2-carboxílico, sal de litio (85-d) (641 mg, 3.79 mmol), HATU (1.32 g, 3.48 mmol) y DIPEA (2.20 mi, 12.64 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 67-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (3.0 mi) al intermediario 67-a (900 mg, 1.16 mmol) a 0°C, y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C y luego 30 minutos a temperatura ambiente. Se añadió acetato de etilo, se formó un precipitado, y el compuesto 102 «2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 677.5.

EJEMPLO 64 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 99, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 68 Síntesis del compuesto 99 Paso 1. A una solución del intermediario 65-i HCI (2.0 g, 2.98 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1-metil-1 H-imidazol-4-carboxílico (478 mg, 3.79 mmol), HATU (1.32 g, 3.48 mmol) y DIPEA (2.20 mi, 12.64 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora y a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 68-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (3.0 mi) al intermediario 68-a (900 mg, 1.16 mmol) a 0°C, y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C y luego 30 minutos a temperatura ambiente. Se añadió acetato de etilo, se formó un precipitado, y el compuesto 99 »2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 641.4.

EJEMPLO 65 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 1 14, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 69 Síntesis del compuesto 114 Paso 1 : A una solución del intermediario 65-i «HCI (600 mg, 0.90 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 6,7-dihidro-5-H-pirrolo[1 ,2-a]imidazol-2-carboxílico, sal de litio (87-e) (236 mg, 1.42 mmol), HATU (397 mg, 1.04 mmol) y DIPEA (662 µ?, 3.79 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora y a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 69-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (750 µ?) al intermediario 69-a (230 mg, 0.30 mmol) a 0°C, y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C y luego 30 minutos a temperatura ambiente. Se añadió acetato de etilo, se formó un precipitado, y el compuesto 114 »2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 667.1.

EJEMPLO 66 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 107, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 70 Síntesis del compuesto 107 Paso 1 : A una solución del intermediario 65-i HCI (600 mg, 0.87 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 6-fluoroimidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxílico, sal de HBr (86-c) (298 mg, 1.13 mmol), HATU (397 mg, 1.04 mmol) y DIPEA (662 µ?, 3.79 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora y a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 70-a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.41 mi) al intermediario 70-a (450 mg, 0.56 mmol) a 0°C, y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C. Se añadió de etilo, se formó un precipitado, y el compuesto 07 -2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 696.3.

EJEMPLO 67 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 108, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 71 Síntesis del compuesto 108 Paso 1 : A una solución del intermediario 65-i *HCI (600 mg, 0.87 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1-(4-fluorofenil)-1 H-imidazol-4-carboxílico, sal de litio (88-e) (303 mg, 1.42 mmol), HATU (397 mg, 1.04 mmol) y DIPEA (662 µ?, 3.79 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora y a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 71 -a como una espuma blanca.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (670 µ?) al intermediario 71 -a (220 mg, 0.26 mmol) a 0°C, y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C. Se añadió acetato de etilo, se formó un precipitado, y el compuesto 108 '2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 721.1.

EJEMPLO 68 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 72-d, que puede usarse como un intermediario en la preparación de un compuesto de fórmula 1 o sal del mismo.

ESQUEMA 72 Síntesis del intermediario 72-d Paso 1 : A una solución del intermediario 42-d (18.0 g, 40.6 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ¡midazol (3.32 g, 48.7 mmol), DMAP (496 mg, 4.06 mmol) y ter-butilclorodimetilsilano (6.73 mi, 44.6 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de aHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 72-a como un aceite incoloro.

Paso 2: A una solución del intermediario 72-a (6.0 g, 10.76 mmol) en THF enfriada a 0°C se le añadió borohidruro de litio (1.17 g, 53.8 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico acuoso a 10%, solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre gS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 72-b como una espuma blanca.

Paso 3: A una solución del intermediario 72-b (5.6 g, 10.57 mmol) en DMSO (3.0 mi, 42.3 mmol) y diclorometano (80 mi) enfriada a 0°C se añadieron TEA (5.89 mi, 42.3 mmol) y complejo de piridina-trióxido de azufre (5.05 g, 31.7 mmol), y la reacción se agitó entonces a 0°C durante 30 minutos y a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con ácido cítrico acuoso a 10%, solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para proveer el intermediario 72-c como una espuma blanca.

Paso 4: A una solución del intermediario 72-c (3.0 g, 5.68 mmol) en diclorometano se le añadió 2-(4-fluorofenil)etanamina (746 µ?, 5.68 mmol). Después de agitación a temperatura ambiente durante la noche, la reacción se enfrió a -5°C se le añadió en porciones triacetoxiborohidruro de sodio (2.54 g, 11.37 mmol), y la mezcla de reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió solución acuosa saturada de NaHC03; la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacío, para proveer el intermediario 72-d como una espuma amarilla. A una solución del intermediario 72-d en éter dietilico (100 mi) se le añadió HCI 1 en éter dietilico (5.68 mi), se formó un precipitado, y el intermediario 72-d -HCI se recogió por filtración como un sólido de color beige.

MS (m/z) M+1 = 651.6.

EJEMPLO 69 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 73-b, que puede usarse como un intermediario en la preparación de un compuesto de fórmula 1 o sal del mismo.

ESQUEMA 73 Síntesis del intermediario 73-b Paso 1 : A una solución del intermediario 72-d HCI (7.02 g, 10.78 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido ¡m¡dazo[1 ,2-a]pir¡din-2-carboxílico, sal de litio (85-d) (3.08 g, 18.33 mmol), HATU (6.97 g, 18.33 mmol) y DIPEA (7.53 mi, 43.1 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 73-a como una espuma blanca.

Paso 2. A una solución del intermediario 73-a (6.14 g, 7.72 mmol) en THF enfriada a 0°C se le añadió una solución 1.0 M de TBAF en THF (10.04 mi, 10.04 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadieron agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 73-b como una espuma blanca.

EJEMPLO 70 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 111 , que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 74 Síntesis del compuesto 111 Paso 1 : A una solución del intermediario 73-b (1.95 g, 2.86 mmol), 4-(trifluorometoxi)fenol (561 mg, 3.15 mmol) y trifenilfosfina (901 mg, 3.44 mmol) en THF se le añadió en porciones DIAD (724 µ?, 3.72 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 días. Se añadieron éter dietílico y hexano, se formó un precipitado, y el óxido de trifenilfosfina se separó por filtración. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice, para proveer el intermediario 74-a esperado como un aceite incoloro.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (6.85 mi) al intermediario 74-a (921 mg, 1.09 mmol) en acetato de etilo (500 µ?), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. Se añadió éter dietílico, se formó un precipitado, y el compuesto 1 11 *2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 741.3.

EJEMPLO 71 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 106, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 75 Síntesis del compuesto 106 Paso 1: A una solución del intermediario 73-b (2.30 g, 3.38 mmol), piridin-4-ol (353 mg, 3.72 mmol) y trifenilfosfina (1.06 g, 4.05 mmol) en THF se le añadió en porciones DIAD (854 µ?, 4.39 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 días. Se añadieron éter dietílico y hexano, se formó un precipitado, y el óxido de trifenilfosfina se separó por filtración. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice, para proveer el intermediario 75-a esperado como un aceite incoloro.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (9.24 mi) al intermediario 75-a (1.12 g, 1.47 mmol) en acetato de etilo (500 µ?), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. Se añadió éter dietílico, se formó un precipitado, y el compuesto 106 ·3??? se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 658.1.

EJEMPLO 72 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 105, que es un compuesto de fórmula .

ESQUEMA 76 Síntesis del compuesto 105 Paso 1 : A una solución del intermediario 73-b (1.79 g, 2.63 mmol), 4-metoxifenol (359 mg, 2.89 mmol) y trifenilfosfina (828 mg, 3.16 mmol) en THF, se le añadió en porciones DIAD (665 µ?, 3.42 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 días. Se añadieron éter dietílico y hexano, se formó un precipitado, y el óxido de trifenilfosfina se separó por filtración. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice, para proveer el intermediario 76-a esperado como un aceite incoloro.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (4.05 mi) al intermediario 76-a (510 mg, 0.64 mmol) en acetato de etilo (500 µ?), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. Se añadió éter dietílico, se formó un precipitado, y el compuesto 105--2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 687.1.

EJEMPLO 73 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 77-b, que puede usarse como un intermediario en la preparación de un compuesto de fórmula 1 o sal del mismo.

ESQUEMA 77 Síntesis del intermediario 77-b Paso 1 : A una solución del intermediario 72-d HCI (3.0 g, 4.61 mmol) en DMF, enfriada a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1-N-metilimidazol carboxílico (988 mg, 7.83 mmol), HATU (2.98 g, 7.83 mmol) y DIPEA (3.22 mi, 18.43 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron solución acuosa saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 77-a como una espuma blanca.

Paso 2: A una solución del intermediario 77-a (570 mg, 0.75 mmol) en THF enfriada a 0°C se le añadió una solución 1.0 M de TBAF en THF (970 µ?, 0.97 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadieron agua y acetato de etilo; la capa orgánica se separó, se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 77-b como una espuma blanca.

EJEMPLO 74 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 97, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 78 Síntesis del compuesto 97 Paso 1 : A una solución del intermediario 77-b (700 mg, 1.08 mmol), 4-(trifluorometoxi)fenol (445 mg, 2.49 mmol) y trifenilfosfina (712 mg, 2.71 mmol) en THF se le añadió DIAD (549 µ?, 2.82 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 días. Se añadieron éter dietílico y hexano, se formó un precipitado, y el óxido de trifenilfosfina se separó por filtración. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice, para proveer el intermediario 78-a esperado como un aceite incoloro.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (6.0 mi) al intermediario 78-a (450 mg, 0.56 mmol) en acetato de etilo (500 µ?), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. Se añadió éter dietílico, se formó un precipitado, y el compuesto 97 »2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS (m/z) M+1 = 705.4.

EJEMPLO 75 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 96, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 79 Síntesis del compuesto 96 2HCI Paso 1. A una solución del intermediario 77-b (484 mg, 0.75 mmol), 4-metoxifenol (214 mg, 1.72 mmol) y trifenilfosfina (492 mg, 1.87 mmol) en THF se le añadió DIAD (379 µ?, 195 mmol), y la reacción se agitó entonces a temperatura ambiente durante 2 días. Se añadieron éter dietílico y hexano, se formó un precipitado, y el óxido de trifenilfosfina se separó por filtración. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice, para proveer el intermediario 79-a esperado como un sólido de color beige.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (2.80 mi) al intermediario 79-a (420 mg, 0.56 mmol) en acetato de etilo (500 µ?), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. Se añadió éter dietílico, se formó un precipitado, y el compuesto 96 «2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

MS {miz) M+1 = 651.4.

EJEMPLO 76 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 123, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 80 Síntesis del compuesto 123 Paso 1 : A una solución del intermediario 12-g (0.478 g, 0.919 mmol) en D F a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 5-feniloxazol-2- carboxilico, sal de sodio (92-d) (0.194 g, 0.919 mmol), HATU (1.05 g, 2.76 rnmol) y DIPEA (0.642 mi, 3.68 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron acetato de etilo y solución acuosa saturada de cloruro de amonio; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 80-a como un sólido blanco.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (5 mi, 20.0 mmol) al intermediario 80-a (390 mg, 0.564 mmol) a 0°C, y la solución se agitó durante 3 horas a 0°C. Se añadió éter dietilico, se formó un precipitado, y el compuesto 123 *2HCI se recogió por filtración como un sólido blanco.

S m/z M+1 = 592.2.

EJEMPLO 77 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 125, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 81 Síntesis del compuesto 125 Paso 1 : A una solución del intermediario 12-g (316 mg, 0.608 mmol) en DMF a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 1-(4-fluorofenil)- 1 H-1 ,2,3-triazol-4-carboxílico, sal de sodio (93-c) (0.2 g, 0.790 mmol), HATU (0.347 g, 0.912 mmol) y DIPEA (0.423 mi, 2.431 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron acetato de etilo y solución acuosa saturada de cloruro de amonio; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHCO3 y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 81 -a como un sólido blanco.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.5 mi, 6.06 mmol) a una solución del intermediario 81 -a (0.43 g, 0.606 mmol) en acetato de etilo (1.2 mi), y la solución se agitó durante 2 horas a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietílico, para proveer el compuesto 125 *2HCI como un sólido blanquecino.

MS m/z M+1 = 610.1.

EJEMPLO 78 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 119, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 82 Síntesis del compuesto 119 Paso 1 : A una solución del intermediario 42-h (250 mg, 0.396 mmol) en DMF a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 2-(4-fluorofenil)-2H-1 ,2,3-triazol-4-carboxílico (94-d) (130 mg, 0.630 mmol), HATU (271 mg, 0.713 mmol) y DIPEA (207 µ?, 1.189 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a 0°C y a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron acetato de etilo y solución acuosa saturada de cloruro de amonio; las capas orgánicas se separaron. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo; el extracto orgánico combinado se lavó con solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 82-a como un sólido blanco.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (924 µ?, 3.70 mmol) al intermediario 82-a (303 mg, 0.370 mmol), y la solución se agitó durante 1 hora a 0°C. El material volátil se eliminó bajo presión reducida y el residuo se trituró con éter dietilico, para proveer el compuesto 1 19--2HCI como un sólido blanco.

MS m/z M+1 = 720: 1.

EJEMPLO 79 El siguiente ejemplo ilustra la preparación del compuesto 126, que es un compuesto de fórmula 1.

ESQUEMA 83 Síntesis del compuesto 126 Paso 1 : A una solución del intermediario 2-g (300 mg, 0.576 mmol) en DMF a 0°C, se le añadieron secuencialmente ácido 2-(4-fluorofenil)- 2H-tetrazol-5-carboxilico, sal de sodio (95-d) (190 mg, 0.749 mmol), HATU (329 mg, 0.864 mmol) y DIPEA (400 µ?, 2.305 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 hora. Se añadieron acetato de etilo y solución acuosa saturada de cloruro de amonio; las capas orgánicas se separaron. La fase acuosa se extrajo con acetato de etilo; el extracto orgánico combinado se lavó con solución acuosa saturada de cloruro de amonio, una solución acuosa saturada de NaHC03 y salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para dar el intermediario 83-a.

Paso 2: Se añadió HCI 4N en 1 ,4-dioxano (1.76 mi, 7.03 mmol) a una solución del intermediario 83-a (303 mg, 0.370 mmol), y la solución se agitó a 0°C durante 2 horas. El material volátil se eliminó bajo presión reducida. La purificación por cromatografía de fase invertida, dio el compuesto 26 -2HCI como un sólido blanco.

MS m/z M+1 = 611.1.

EJEMPLO 80 El siguiente ejemplo ilustra la preparación de ácido imidazo[1,2-a]pirimidin-2-carboxílíco, sal de HBr (84-c).

ESQUEMA 84 Síntesis de 84-c Paso 1 : A una solución de 2-aminopirimidina 84-a (50.00 g, 526 mmol) en DMF (375 mi) enfriada a 0°C, se añadió ácido 3-bromo-2-oxopropanoico (88.00 g, 526 mmol). La reacción se agitó a 0°C durante 2 horas y entonces se calentó a temperatura ambiente durante 2 horas y se agitó durante 18 horas. Se añadió acetonitrilo (650 mi); se formó un precipitado y se recogió por filtración. El precipitado se enjuagó con acetonitrilo y éter dietilico y se secó al vacío, para dar el intermediario 84-b »HBr como un sólido blanco.

MS m/z M+1 =182.0.

Paso 2: A una suspensión del intermediario 84-b «HBr (98.80 g, 377 mmol) en THF (600 mi) se le añadió N,N-dimet¡lacetamida (48 mi). La reacción se agitó a 80°C durante 48 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se vertió en acetonitrilo (700 mi). Se formó un precipitado y se recogió por filtración, se enjuagó con acetonitrilo y éter dietilico y se secó al vacío, para dar ácido imidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxílico, sal de HBr (84-c), como un sólido de color beige.

MS m/z M+1 = 164.2.

EJEMPLO 81 El siguiente ejemplo ilustra la preparación de ácido imidazo[1 ,2-a]piridin-2-carboxílico, sal de litio (85-d).

ESQUEMA 85 Síntesis de 85-d 85-d Paso 1 : A una solución de 2-aminopiridina 85-a (20.00 g, 213 mmol) en THF (417 mi) se le añadió bromopiruvato de etilo (30.0 mi, 215 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas. Se formó un precipitado y se recogió por filtración y se enjuagó con THF, para proveer el intermediario 85-b »HBr como un sólido amarillo.

Paso 2: A una suspensión del intermediario 85-b ·??G en etanol (550 mi) se le añadió AcOH (5 mi) y la mezcla se calentó a reflujo por 3 horas para dar una solución clara. La solución se concentró al vacío, se formó un precipitado y se trituró con éter dietílico; el intermediario 85-c »HBr se recogió por filtración como un sólido de color beige, se disolvió en agua (0.5 L) y se basificó a pH 8 usando pellas de NaOH. Esta solución se extrajo cuatro veces con acetato de etilo; la capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para dar el intermediario 85-c como un sólido blanquecino.

Paso 3: A una solución del intermediario 85-c (26.40 g, 0.139 mmol) en etanol (140 mi) se le añadió LiOH acuoso 2M (70 mi, 140 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a 0°C, se formó un precipitado, se recogió por filtración y se enjuagó con éter dietílico, para dar ácido imidazo[1 ,2-a]piridin-2-carboxílico, sal de litio (85-d), como un sólido blanco. 1H RMN (200 MHz, CD3OD), d ppm 8.41 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 8.1 (s, 1 H), 7.53 (d, J= 9.2 Hz, 1 H), 7.29 (dd, J= 8.0 Hz, J= 7.3 Hz, 1 H), 6.90 (dd, J= 6.7 Hz, J= 6.7 1 H).

EJEMPLO 82 El siguiente ejemplo ilustra la preparación de ácido 6-fluoroimidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxilico, sal de HBr (86-c).

ESQUEMA 86 Síntesis de 86-c Paso 1 : A una solución de 5-fluoropirimidin-2-amina 86-a (3.17 g, 28.0 mmol) en DMF (14 mi) a 0°C se le añadió ácido bromopirúvico (7.73 g, 53.4 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a 0°C y entonces por 2 días a temperatura ambiente. La reacción se diluyó con acetona; se formó un precipitado, y el intermediario 86-b HBr se recogió por filtración como un sólido de color beige.

Paso 2: Una suspensión del intermediario 86-b HBr (8.40 g, 30.0 mmol) en THF (100 mi) y AcOH (10 mi), se agitó a 70°C durante 72 horas. Se añadió THF y el precipitado se recogió por filtración, se enjuagó con THF y éter dietílico y se secó al vacío, para dar ácido 6-fluoroimidazo[1 ,2-a]pirimidin-2-carboxílico, sal de HBr (86-c) como un sólido de color beige pálido.

MS m/z M+1 = 182.0.

EJEMPLO 83 El siguiente ejemplo ilustra la preparación de ácido 6,7-dihidro-5H-pirrolo[1 ,2-a]imidazol-2-carboxílico, sal de litio (87-e).

ESQUEMA 87 Síntesis de 87-e Paso 1 : A una solución del intermediario 87-a (5.00 g, 70.3 mmol) en THF se le añadió propiolato de etilo (6.90 g, 70.3 mmol) a 10°C. La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente y se concentró al vacio, para proveer el intermediario 87-b como un aceite amarillo.

Paso 2: A una solución del intermediario 87-b (11.90 g, 70.3 mmol) en acetonitrilo (1400 mi) se le añadió tetrafluoroborato de 4-nitrobencendiazonio (16.66 g, 70.3 mmol), y la reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente para proveer una solución del intermediario 87-c.

Paso 3: A una solución del intermediario 87-c se le añadió TEA (19.0 mi, 141 mmol), y la mezcla de reacción se calentó a reflujo por 2 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 87-d como un sólido pardo.

MS m/z M+Na = 202.9.

Paso 4: A una solución del intermediario 87-d (5.36 g, 29.7 mmol) en THF se le añadió LiOH acuoso 2N (32.7 mi, 65.4 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 48 horas y se concentró al vacío, para dar ácido 6,7-dihidro-5H-pirrolo[1,2-a]imidazol-2-carboxílico, sal de litio (87-e) como un sólido de color beige pálido.

MS m/z M+1 = 153.0.

EJEMPLO 84 El siguiente ejemplo ilustra la preparación de ácido 1-(4-fluorofenil)-1 H-imidazol-4-carboxílico, sal de litio (88-e).

ESQUEMA 88 Síntesis de 88-e Paso 1 : A una solución de óxido de zinc (7.32 g, 90 mmol) en ácido fórmico (20.7 mi, 540 mmol) a 0°C se le añadió 4-fluoroanilina 88-a (20.00 g, 180 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 70°C durante 1 hora, se enfrió a temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo y se filtró sobre una almohadilla de celite. El filtrado se lavó con agua, Na2C03 acuoso a 10% y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para dar el intermediario 88-b como un sólido de color beige.

MS m/z M+1 = 140.0.

Paso 2: A una solución del intermediario 88-b (8.35 g, 60.0 mmol) en diclorometano (111 ml), se le añadieron secuencialmente trifenilfosfina (17.79 g, 67.8 mmol), TEA (8.32 ml, 60.0 mmol) y tetracloruro de carbono (6.21 ml, 64.2 mmol). Después de agitación por 72 horas a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se enfrió a 0°C. Se formó un precipitado, se recogió por filtración y se desechó. El filtrado se concentró y se suspendió en éter dietilico frío. Un residuo insoluble se recogió por filtración y se desechó. El filtrado se concentró al vacío, para dar el intermediario 88-c como un aceite pardo.

Paso 3: A una suspensión de óxido de cobre (1.20 g, 8.40 mmol) y 1 ,10-fenantrolina (3.03 g, 16.80 mmol) en THF (400 ml) purgada con nitrógeno, se le añadieron secuencialmente el intermediario 88-c (7.27 g, 60.0 mmol) e isocianoacetato de etilo (9.2 ml, 84 mmol). Después de agitación a 70°C durante 18 horas, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se filtró sobre una almohadilla de Celite. El filtrado se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 88-d como un sólido amarillo claro.

MS m/z M+1 = 235.0.

Paso 4: A una solución del intermediario 88-d (10.47 g, 44.7 mmol) en THF se le añadió LiOH acuoso 2N (24.6 mi, 49.2 mmol). Después de agitación a temperatura ambiente durante la noche, la mezcla de reacción se concentró al vacío. El residuo resultante se diluyó con agua y se extrajo con diclorometano. Las fracciones orgánicas se desecharon y la capa acuosa se concentró al vacío, para proveer ácido 1-(4-fluorofen¡l)-1 H-imidazol-4-carboxilico, sal de litio (88-e) como un sólido amarillo claro.

MS m/z M+1 = 207.

EJEMPLO 85 El siguiente ejemplo ilustra la preparación de ácido 1 -(tetra h id ro-2H-piran-4-il)-1 H-imidazol-4-carboxílico, sal de litio (89-d).

ESQUEMA 89 Síntesis de 89-d Paso 1: A una solución de 2-isocianoacetato de etilo 89-a (5 g, 44.2 mmol) en etanol anhidro (50 mi) a 0°C se le añadió 1 ,1-dimetoxi-N,N-dimetilmetanamina (10.53 g, 88 mmol). Después de agitación a temperatura ambiente durante la noche, la mezcla de reacción se concentró al vacio. La purificación por cromatografía sobre aluminio neutro, dio el intermediario 89-b como un aceite amarillo.

Paso 2: A un tubo sellado se añadieron el intermediario 89-b (1.00 g, 5.95 mmol) y tetrahidro-2H-piran-4-amina (1.80 g, 17.84 mmol). El tubo se llenó con nitrógeno, se selló y se calentó a 70°C durante 2 horas. Después de enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se purificó por cromatografía en gel de sílice para proveer el intermediario 89-c como un sólido de color beige.

Paso 3: A una solución del intermediario 89-c (0.72 g, 3.22 mmol) en una mezcla 3:1 de metanol/agua se le añadió LiOH (0.116 g, 4.83 mmol). Después de agitación a temperatura ambiente durante 18 horas, la mezcla de reacción se concentró al vacío para dar ácido 1 -(tetra h id ro-2H - piran-4-il)-1H-imidazol-4-carboxilico, sal de litio (89-d) como una espuma blanca.

MS m/z M+1 = 197.0.

EJEMPLO 86 El siguiente ejemplo ilustra la preparación de ácido 1 -fenil-1 H- pirrol-3-carboxílico, sal de litio (90-c).

ESQUEMA 90 Síntesis de 90-c Paso 1 : A un tubo sellado desecado se le añadieron 1H-pirrol-3- carboxilato de metilo 90-a (150 mg, 1.199 mmol), yoduro de cobre (I) (11.4 mg, 0.060 mmol), K3P04 (534 mg, 2.52 mmol), yodobenceno (160 µ?, 1.439 mmol) y tolueno (1.2 mi). Se burbujeó nitrógeno a través de la mezcla por 5 minutos, seguido de la adición de A/7,A/2-dimetiletano-1 ,2-diamina (21 mg, 0.240 mmol). El tubo se selló y la reacción se agitó durante la noche a 100°C. Se diluyó entonces con acetato de etilo y se filtró sobre una almohadilla de Celite. El filtrado se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío, para dar el intermediario 90-b.

MS m/z M+1 = 202.2.

Paso 2: A una solución del intermediario 90-b (241 mg, 1.198 mmol) en una mezcla 2:1 de THF/agua se le añadió LiOH (92 mg, 3.832 mmol). La mezcla de reacción se calentó a 50°C durante la noche y se concentró al vacio. El residuo se disolvió en agua, se extrajo con diclorometano y éter dietilico, y los extractos orgánicos se desecharon. La fase acuosa se acidificó a pH 2 usando HCI acuoso a 37% y se extrajo dos veces con diclorometano. Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre MgS04 anhidro y se concentraron al vacío, para dar ácido 1-fenil-1 H-pirrol-3-carboxílico, sal de litio (90-c) como un sólido blanco.

MS m/z M+Na = 210.2.

EJEMPLO 87 El siguiente ejemplo ilustra la preparación de ácido 5-fenil-1 ,3,4-oxadiazol-2-carboxílico, sal de sodio (91 -c).

ESQUEMA 91 Síntesis de 91-c Paso 1: A una solución de 2-cloro-2-oxoacetato de etilo 91-a (5.61 g, 41.1 mmol) en tolueno se le añadió 5-fenil-1H-tetrazol (6.00 g, 41.1 mmol). Después de agitación a reflujo por 2 horas, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo y agua. La capa orgánica se lavó dos veces con HCI acuoso 1N, agua y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 91-b como un sólido amarillo.

MS m/z M+1 = 219.1.

Paso 2: A una solución del intermediario 91-b (1.40 g, 6.42 mmol) en THF se le añadió NaOH acuoso 1N (6.7 mi, 6.74 mmol) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y se concentró al vacío, para proveer ácido 5-fenil-1 ,3,4-oxadiazol-2-carboxílico, sal de sodio (91-c) como un sólido blanco.

S m/z +1 = 191.1.

EJEMPLO 88 El siguiente ejemplo ilustra la preparación de ácido 5-feniloxazol-2-carboxílico, sal de sodio (92-d).

ESQUEMA 92 Síntesis de 92-d Paso 1 : A una solución de clorhidrato de éster de etilglicina 92-a (4.64 g, 33.2 mmol) en diclorometano a 0°C, se le añadieron secuencialmente cloruro de benzoilo (3.22 mi, 27.7 mmol) y TEA (11.49 mi, 83 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 horas y a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron acetato de etilo y agua; la capa orgánica se separó, se lavó dos veces con HCI acuoso 1N, seguido de agua y lavado con salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio, para dar el intermediario 92-b como un aceite.

Paso 2: A una solución del intermediario 92-b (1.10 g, 4.68 mmol) en tolueno (5.0 mi) se le añadió oxicloruro de fósforo (2.18 mi, 23.38 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante la noche y se enfrió a temperatura ambiente. Se añadieron acetato de etilo y solución acuosa saturada de NaHC03; la capa orgánica se separó, se lavó con una solución acuosa saturada de NaHCO3, agua y salmuera; se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacio. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 92-c como un sólido blanco.

MS m/z M+1 = 218.1.

Paso 2: A una solución del intermediario 92-c (200 mg, 0.921 mmol) en THF se le añadió NaOH acuoso 1 N (1.1 mi, 1.105 mmol) a 0°C. Después de agitación a temperatura ambiente durante 3 horas la mezcla de reacción se concentró al vacío, para dar ácido 5-feniloxazol-2-carboxílico, sal de sodio (92-d) como un sólido blanco.

MS m/z M+1 = 190.2.

EJEMPLO 89 El siguiente ejemplo ilustra la preparación de ácido 1-(4-fluorofenil)-1 H-1 ,2,3-triazol-4-carboxílico, sal de sodio (93-c).

ESQUEMA 93 Síntesis de 93-c F Paso 1 : A una solución de 1-fluoro-4-yodobenceno 93-a (0.926 g, 4.17 mmol) en DMSO (4.0 mi) y agua (0.44 mi), se le añadieron secuencialmente azida de sodio (0.325 g, 5.01 mmol), carbonato de sodio (0.088 g, 0.833 mmol), L-prolina (0.096 g, 0.833 mmol), propiolato de etilo (0.409 g, 4.17 mmol), L-ascorbato de sodio (0.207 g, 1.043 mmol) y sulfato de cobre (II) (0.052 g, 0.208 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 65°C durante 18 horas y se enfrió a temperatura ambiente. Se añadieron amoníaco acuoso (1 mi), acetato de etilo (25 mi) y agua (20 mi). Las fases se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. El extracto orgánico combinado se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía de fase invertida, dio el intermediario 93-b.

MS m/z M+1 = 236.1.

Paso 2: A una solución del intermediario 93-b (200 mg, 0.850 mmol) en THF se le añadió NaOH acuoso 2N (0.425 mi, 0.850 mmol). Después de agitación a temperatura ambiente durante 18 horas, la mezcla de reacción se concentró al vacío para proveer ácido 1-(4-fluorofenil)-1 H-1 ,2,3- tr¡azol-4-carboxílico, sal de sodio (93-c) como un sólido amarillo.

MS m/z M+Na = 230.0.

EJEMPLO 90 El siguiente ejemplo ilustra la preparación de ácido 2-(4-fluorofenil)-2H-1 ,2,3-triazol-4-carboxílico, sal de sodio (94-d).

ESQUEMA 94 Síntesis de 94-d Paso 1 : A una solución de 94-a (1.75 g, 15.08 mmol) en etanol (16 mi) se le añadió 4-fluorofenilhidrazina (1.90 g, 15.08 mmol), y la reacción se agitó a 70°C durante 30 minutos. Se añadió agua (16 mi), la mezcla de reacción se calentó a 85°C, se concentró hasta una tercera parte y se enfrió en un baño de hielo. Se formó un precipitado amarillo y se recogió por filtración. El precipitado se disolvió en una mezcla de tolueno/etanol al 25% (40 mi). El matraz se equipó con un condensador y una trampa de Dean-Stark, y la mezcla de reacción se calentó a reflujo hasta que todo el etanol se recogiera en la trampa de Dean-Stark. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente; se formó un precipitado, y el intermediario 94-b se recogió por filtración como un sólido pardo.

Paso 2: Una solución del intermediario 94-b (1.64 g, 7.32 mmol) en anhídrido acético (13.8 mi, 146 mmol), se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La reacción se diluyó con agua (60 mi), se agitó durante 30 minutos, y el precipitado resultante se recogió por filtración. El sólido se dividió entre acetato de etilo y agua. Las capas se separaron; la capa orgánica se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se disolvió en THF y se le añadió carbonato de cesio (2.62 g, 8.05 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos y se filtró. El filtrado se concentró al vacío; el residuo se disolvió en éter dietílico y se lavó con agua, se secó sobre MgSO4 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. El sólido resultante se disolvió en HCI acuoso 2 (50 mi) y se le añadió paraformaldehído (0.433 g, 14.41 mmol), y la mezcla de reacción se calentó a reflujo por 2 horas. Después de enfriamiento a temperatura ambiente, la mezcla se extrajo con éter dietílico. La capa orgánica se separó y se lavó con agua, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice dio el intermediario 94-c como un sólido amarillo pálido.

Paso 3: A una solución del intermediario 94-c (300 mg, 1.569 mmol) en metanol (15 mi) a 0°C, se añadieron cianuro de potasio (171 mg, 2.62 mmol) y óxido de manganeso (IV) (1078 mg, 12.40 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 horas, se filtró sobre una almohadilla de celite, y la torta se enjuagó con metanol. El filtrado se concentró al vacío. La purificación por cromatografía en gel de sílice, dio ácido 2-(4-fluorofenil)-2H-1 ,2,3-triazol-4-carboxílico, sal de sodio (94-d) como un sólido amarillo pálido.

MS m/z M+1 = 244.2.

EJEMPLO 91 El siguiente ejemplo ilustra la preparación de ácido 2-(4-fluorofenil)-2H-tetrazol-5-carboxílico, sal de sodio (95-e).

ESQUEMA 95 Paso 1 : A una solución de 4-fluoroanilina 95-a (2.00 g, 18.00 mmol) en etanol (5.7 mi) y agua (2.0 mi) se le añadió HCI acuoso a 37% (3.7 mi, 45.0 mmol), y la mezcla de reacción se enfrió a -5°C. A la mezcla se le añadió gota a gota nitrito de sodio acuoso 5N (3.96 mi, 19.80 mmol) seguido de la adición de acetato de sodio acuoso 6N (9.0 mi, 54.0 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante 10 minutos a 0°C, entonces se añadió 2-cloro-3-oxobutanoato de etilo (2.96 g, 18.00 mmol), y se continuó la agitación durante la noche a 27°C. Se añadió THF (20 mi) y la mezcla de reacción se calentó hasta 40°C y se transfirió a un embudo de separación. La capa acuosa se separó y se desechó. La capa orgánica contenía al intermediario 95-b como una solución de THF.

MS m/z M+Na = 267.1.

Paso 2: A una solución del intermediario 95-b (4.40 g, 18 mmol) en THF se le añadió NH4OH acuoso al 25% (16 mi, 108 mmol) a 0°C. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas y se transfirió a un embudo de separación. La capa acuosa se separó y se desechó. La capa orgánica se concentró y el residuo se trituró con una mezcla de éter dietílico/hexanos; se formó un precipitado y el intermediario 95-c se recogió como un sólido de color rojo ladrillo.

Paso 3: A una solución del intermediario 95-c (1.36 g, 6.04 mmol) en THF (27 mi) se le añadió ácido acético (1.1 mi, 18.12 mmol), y la mezcla de reacción se calentó hasta 85°C. A la reacción se le añadió nitrito de sodio acuoso 2.6N (2.8 mi, 7.25 mmol), y la mezcla se agitó a 85°C durante 4 horas y se concentró al vacio. El residuo se disolvió en acetato de etilo y se lavó con una solución acuosa saturada de NaHC03, las capas se separaron, y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica combinada se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 anhidro, se filtró y se concentró al vacío. La purificación por cromatografía de vaporización instantánea en gel de sílice, dio el intermediario 95-d como un sólido amarillo.

MS m/z M+Na = 258.9.

Paso 4: A una solución del intermediario 95-d (840 mg, 3.56 rnmol) en THF se le añadió NaOH acuoso 2N (1.78 mi, 3.56 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 50°C durante 18 horas y se concentró al vacío, para proveer ácido 2-(4-fluorofenil)-2H-tetrazol-5-carboxílico, sal de sodio (95- e) como un sólido amarillo.

MS m/z M+1 = 209.1.

En el cuadro 1 se ilustran los compuestos preparados de acuerdo con los procedimientos anteriores o modificaciones menores de los mismos. Para el experto en la materia serán evidentes modificaciones menores de los procedimientos anteriores y el uso de materiales de partida adecuados según sea necesario, para llegar a los compuestos del cuadro 1.

CUADRO 1 CUADRO 1 (CONTINUACIONl CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN! CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN! CUADRO 1 (CONTINUACIÓN! CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN! CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) CUADRO 1 (CONTINUACIÓN) EJEMPLO 92 El siguiente ejemplo ilustra el uso de un compuesto de fórmula 1 o sal del mismo.

Prueba de competencia basada en fluorescencia-polarización La unión de los compuestos de fórmula 1 a dominios BIR objetivo, se midió usando una prueba de fluorescencia-polarización (FP). Se evaluó la fluorescencia-polarización usando una lectora de microplacas GENios (TECAN), con el filtro de excitación puesto a 485 nm y el filtro de emisión puesto a 535 nm. La cantidad final de proteina usada en la prueba corresponde a la cantidad de proteina necesaria para obtener 80% del valor de FP máximo en un experimento de saturación de la sonda fluorescente P1 o P2 (FITC). La potencia (CI50) y selectividad de los compuestos se evaluó en presencia de la cantidad de proteína objetivo establecida, la sonda fluorescente y una dilución en serie de 10 puntos en amortiguador de prueba (HEPES 50 mM, pH 7.5, 250 mcg/ml de ?-globulina, DTT 2 mM, DMSO a 1%) de los compuestos seleccionados.

Se llevaron a cabo pruebas por duplicado usando placas de 96 pocilios negras sin tratar (Corning No.3915) y un volumen total de 100 microlitros, conteniendo 25 microlitros de sonda fluorescente a una concentración final de 2 nM en amortiguador de prueba, 25 microlitros de compuesto diluido, 25 microlitros de proteina de BIR en amortiguador de prueba y 25 microlitros de amortiguador de prueba. Amortiguador solo (blanco) o sonda sola en amortiguador (factor G), se usaron como controles para la calibración. La placa se incubó a temperatura ambiente en la oscuridad por 1 hora, y se registraron los valores de FP en unidades de rnilipolarización (mP) usando la lectora Genios Pro FP.

Los valores de FP medidos (mP) se graficaron entonces contra la concentración de compuesto, y se calcularon los valores de Cl50 con base en un ajuste de curva sigmoidea de dosis-respuesta (variable-pendiente) usando GraphPad Prism versión 4.02 para Windows, GraphPad Software, San Diego California USA y/o CambridgeSoft BioAssay Enterprise versión 10.1. El valor de Cl50, es la concentración del compuesto de prueba a la cual 50% del trazador fue desplazado. Se derivaron valores de k¡ de los valores de Cl50 calculados como se describió anteriormente, y de acuerdo con la ecuación descrita en Nikolovska-Coleska, Z. (2004) Anal Biochem 332, 261-273. Los resultados se muestran en el cuadro 2, en donde A = menor de 25 nM; B = menor de 250 nM¡ C = menor de 1000 nM; y D = mayor de 1000 nM. Los compuestos se identifican en el cuadro 3 de acuerdo con el número de compuesto mostrado en el cuadro 1. Como muestran los resultados, los compuestos de fórmula 1 demuestran buena afinidad de unión.

CUADRO 2 CUADRO 2 (CONTINUACIÓN) Cultivo de células y pruebas de muerte celular Se cultivaron células de carcinoma colorrectal HCT116 como monocapas en placas de 96 pocilios, a una densidad de 2000 células por pocilio en medio 5a de McCoy (HyClone) complementado con 2.2 g/L de bicarbonato de sodio, FBS al 10% (HyClone) y penicilina al 1%/estreptomicina (HyClone). Veinticuatro horas después, los pocilios por triplicado se trataron con HGS ETR1 (30 ng/ml) en combinación con el compuesto. Se incubaron las células en presencia del compuesto y anticuerpo del receptor de Trail agonista de HGS, ETR1 (Mapatubamab, 30 ng/ml) por 72 horas. La variabilidad metabólica de las células restantes se evaluó mediante una prueba de MTT (bromuro de tiazolil azul tetrazolio, Sigma).

Se calcularon valores de CE50 (50% de supervivencia de las células en presencia de los compuestos, en comparación con controles sin tratar) a partir de las curvas de supervivencia usando el software BioAssay (CambridgeSoft) y GraphPad Prism (GraphPad Software Inc.). Los resultados se muestran en el cuadro 3 siguiente, en donde A = menor de 50 nM¡ B = menor de 250 nM; C= menor de 1000 nM; y D = mayor de 1000 nM. Los compuestos se identifican en el cuadro 3, de acuerdo con el número de compuesto mostrado en el cuadro 1. Como muestran los resultados, los compuestos de fórmula 1 puestos a prueba demostraron fuerte potencia.

CUADRO 3 CUADRO 3 (CONTINUACIÓN) Modelo de artritis inducida por adyuvante (AIA) Ratas Lewis machos (Charles River, 125-150 g) fueron habituadas a la instalación para animales por una semana antes del día de la provocación con el adyuvante sintético amina lipoidal (LA). En el día del experimento (d)=0, cuando el peso corporal (BW) medio del grupo era de 165 a 200 g, las ratas fueron anestesiadas con isoflurano, el lomo inferior fue afeitado y limpiado con alcohol, y entonces se inyectaron subcutáneamente 0.1 mi de LA disuelta en adyuvante completo de Freund (CFA) (50 mg/ml de LA en CFA) en la base de la cola. En el día experimental 7, se registró el BW de cada animal, y se midió el ancho del tobillo usando calibradores electrónicos (micrómetro QuantuMike; Mitutoyo). Se formaron grupos balanceados con base en el ancho del tobillo y se inició el tratamiento. Se trató a los animales oralmente (vía oral) una vez al día (QD) o dos veces al día (BID) con los compuestos de prueba 5, 6, 7 ó 10 (véase el cuadro 1 ) a 10, 30 y 60 mg/kg, vía oral, dexametasona (0.15 mg/kg, vía oral) o vehículo solo (5 mg/kg, vía oral) de d=7 hasta d=14, con el BW y el ancho del tobillo registrados diariamente.

Los compuestos puestos a prueba a las dosis más altas, demostraron más de 50% de reducción en el hinchamiento de la pata en comparación con los controles. Algunos compuestos mostraron eficacia similar a las dosificaciones más bajas puestas a prueba. Estos resultados indican la eficacia de los compuestos de prueba para esta indicación.

Artritis inducida por colágena (CIA): dosificación semi-terapéutica Ratones B10 RUI machos (7 a 8 semanas, Jackson Labs) fueron habituados a la instalación para animales por 1 semana. Entonces fueron provocados con colágena, la cual se emulsionó en CFA complementado con Mycobacterium tuberculosis, en el día experimental 0 y 15. Del día experimental 12 en adelante, los animales fueron dosificados con el compuesto de prueba 6, 7 ó 10 (véase el cuadro 1 ) a 3, 10, 30 mg/kg (vía oral, dos veces al día) o dexametasona (0.2 mg/kg, control positivo). Se evaluó la severidad clínica de la artritis usando un sistema de calificación establecido por la duración del estudio.

Los compuestos puestos a prueba demostraron más de 50% de reducción en la puntuación artrítica a las dosis más altas. Algunos compuestos mostraron eficacia similar a las dosificaciones más bajas puestas a prueba. Estos resultados indican la eficacia de los compuestos puestos a prueba para esta indicación.

CIA: dosificación terapéutica Ratones B10 RUI machos (7 a 8 semanas, Jackson Labs) fueron habituados a la instalación para animales por 1 semana. Entonces fueron provocados con colágena, la cual se emulsionó en CFA complementado con Mycobacterium tuberculosis, en el día experimental 0 y 15. Del día experimental 15 en adelante, los animales fueron dosificados con el compuesto de prueba 10, 40, 45 o 66 (véase el cuadro 1) a 3, 10, 30 mg/kg (vía oral, dos veces al día) o dexametasona (0.2 mg/kg, control positivo). Se evaluó la severidad clínica de la artritis usando un sistema de calificación establecido por la duración del estudio.

Los compuestos puestos a prueba redujeron la puntuación artrítica media en los animales tratados en comparación con el control de vehículo (agua) a las dosis más altas.

Estudio de xenoinjerto usando el compuesto MDA-MB-231 + mapatubamab Ratones hembras sin pelo recibieron 5 X 106 células MDA-MB-231 (CD) subcutáneamente en el flanco derecho (volumen de 0.1 mi) en el día 0 del experimento. Cuando el tamaño promedio del tumor alcanzó -100 mm3, se formaron grupos usando un diseño balanceado con base en el tamaño del tumor, y se inició la dosificación. Se dio diariamente el compuesto de prueba 10 ó 7 (véase el cuadro 1) (o el vehículo correspondiente solo), y se dio dos veces por semana mapatubamab (o el vehículo correspondiente solo). El tamaño del tumor y el peso corporal se midieron dos veces por semana a lo largo del estudio.

Los compuestos 10 y 7, cuando se dosificaron a 30 y 60 mg/kg (vía oral, QD) en combinación con mapatubamab (10 mg/kg, IV), redujeron el volumen del tumor en 50% en comparación con el control, demostrando eficacia combinatoria entre los compuestos puestos a prueba y mapatubamab.

Estudio de xenoinjerto usando el compuesto MDA-MB-231 más taxol Ratones sin pelo CD-1 hembras recibieron 5 X 106 células MDA-MB-231 (CD) subcutáneamente en el flanco derecho (volumen de 0.1 mi, células suspendidas en medio libre de suero) en el día 1 del experimento. Cuando el tamaño promedio del tumor alcanzó ~100 mm3, se formaron grupos usando un diseño balanceado con base en el tamaño del tumor. Se administraron entonces los compuestos 10, 7, 20, 40, 45, 58, 63 y 66 dos veces por semana a 30 y 100 mg/kg, vía oral, por dos semanas. Se coadministró taxol (20 mg/kg, i.p.) con el tratamiento inicial con el compuesto de prueba, y entonces una vez por semana durante el estudio. El tamaño del tumor y el peso corporal se midieron dos veces por semana.

Los compuestos puestos a prueba lograron estasis o regresión del tumor en el estudio de xenoinjerto.

Estudio de dosis tolerada máxima (MTD) Ratones CD-1 machos (20 a 25 g a la llegada, Charles River) fueron habituados a la instalación para animales por cuatro días, y entonces fueron asignados aleatoriamente a los grupos de tratamiento. Se dosificó a los animales mediante gavaje oral dos veces por semana, por un total de seis tratamientos, con los compuestos 63, 58, 45, 10, 20, 40 y 66 a 15, 70 ó 350 mg/kg en agua, vía oral, o agua sola (5 ml/kg, vía oral). El peso corporal y la salud general se monitorearon a lo largo del experimento. Veinticuatro horas después de la última dosis (día 19), los animales fueron anestesiados con isoflurano, y se extrajo sangre para determinar la bioquímica del suero. Los parámetros bioquímicos del suero fueron restringidos a glucosa aleatoria, urea, creatinina, proteína total, albúmina, globulina, relación A:G, bilirrubina total, AST, ALT, fosfatasa alcalina, GGT y amilasa. Una vez exanguinados, los animales se sometieron a necropsia completa, y se registró el peso de los órganos cerebro, corazón, hígado, bazo, ríñones, estómago (vacío) e intestino (vacio, del estómago al ciego). Debido a que algunos tratamientos estuvieron suprimiendo el aumento de peso (véase más adelante), el peso de los órganos fue normalizado al peso del cerebro, y expresado entonces como cambio en por ciento del grupo control tratado con vehículo.

Los ratones mostraron curvas de crecimiento positivo y signos clínicos mínimos o ausencia de los mismos como resultado del tratamiento, con ligera pérdida de peso observada para los compuestos 63 y 40 a la dosis de 350 mg/kg.

Farmacocinética (PK) del compuesto en el plasma Se dosificó a ratones CD-1 con los compuestos 5, 6, 7, 10, 17, 34, 58, 63, 66, 77, 78, 80, 81 , 86, 87, 99 y 114 mediante administración IV u oral. Después de la administración, la concentración de fármaco en el plasma de los ratones tratados se determinó mediante HPLC-espectrometría de masa, y se estimaron las concentraciones de los fármacos respecto a curvas estándar de los compuestos de prueba. El área bajo la curva (ABC) de tiempo-concentración se determinó a partir de las concentraciones en el plasma, y se calculó la biodisponibilidad oral (% de F).

Los compuestos de fórmula 1 puestos a prueba demostraron buena biodisponibilidad oral (19% a 100% de F) en los ratones CD-1. Además, los compuestos seleccionados del grupo de compuestos puestos a prueba mostraron escalamiento alométrico positivo a dosis equivalentes en humanos.

Todas las referencias, incluyendo publicaciones, solicitudes de patente y patentes, citadas en la presente, se incorporan de esta manera en la presente como referencia, al mismo grado como si se indicara que cada referencia fuese individual y específicamente incorporada en la presente como referencia y fuese expuesta en su totalidad en la presente.

Debe considerarse que el uso de los términos "un" y "una" y "la" "el" y referencias similares en el contexto de describir la invención (especialmente en el contexto de las siguientes reivindicaciones), abarca el singular y el plural, a menos que se indique de otra manera en la presente o sea contradicho claramente por el contexto. Los términos "que comprende", "que tiene", "que incluye" y "que contiene" deben considerarse como términos ampliables (es decir, significan "que incluye, sin limitación"), a menos que se indique de otra manera. La cita de escalas de valores en la presente sólo tiene el propósito de servir como un método taquigráfico para referirse individualmente a cada valor separado que esté dentro de la escala, a menos que se indique de otra manera en la presente, y cada valor separado se incorpora en la especificación como si se citara individualmente en la presente. Todos los métodos descritos en la presente pueden llevarse a cabo en cualquier orden adecuado, a menos que se indique de otra manera en la presente o sea contradicho claramente de otra manera por el contexto. Se considera que el uso de todos y cada uno de los ejemplos, o el lenguaje ejemplar provisto en la presente (por ejemplo, "tal como"), únicamente es para explicar mejor la invención y no plantea una limitación sobre el alcance de la invención, a menos que se afirme de otra manera. Debe considerarse que ninguna expresión en la especificación indica algún elemento no reclamado esencial para la práctica de la invención.

Se describen en la presente modalidades preferidas de esta invención, incluyendo el mejor modo conocido por los inventores para llevar a cabo la invención. Variaciones de las modalidades preferidas pueden llegar a ser evidentes para los expertos en la materia después de que lean la descripción anterior. Los inventores esperan que los expertos en la materia usen dichas variaciones según sea adecuado, y consideran que la invención puede practicarse de forma diferente a la descrita específicamente en la presente. Por consiguiente, esta invención incluye todas las modificaciones y equivalentes de la materia en cuestión citada en las reivindicaciones anexas, como lo permite la ley aplicable. Además, cualquier combinación de los elementos descritos anteriormente en todas las variaciones posibles de la misma es abarcada por la invención, a menos que se indique de otra manera en la presente o sea contradicho claramente de otra manera por el contexto.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto de la fórmula 1 : o una sal del mismo, en donde: R1 es H o alquilo; R2 es metilo o etilo; R3 es alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, heteroarilo, o arilo, cualquiera de los cuales puede estar sustituido opcionalmente con amino, alquilamino o alcoxi; R4 y R5, cada uno independientemente, es H o alquilo; R6 es H, halógeno o alcoxi; X es O, S, CH2, -(CH2)2- o CH-R7, en donde R7 es NR8, OR8, NC(0)OR8, NHC(O)R8 o NHSO2R8, en donde R8 es alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo, arilalquilo, o heteroarilo, cualquiera de los cuales puede estar sustituido opcionalmente con alquilo o halógeno; y G es: en donde R9 es alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido; o (2) un anillo de azol o pirrol sustituido o no sustituido, fusionado opcionalmente con un arilo, heteroarilo, cicloalquilo o heterociclilo sustituido o no sustituido.

2 - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque G es: y R9 es alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo o heteroarilo sustituido o no sustituido.

3.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque G es: y X1 es CH o N; R10 es H, halógeno, hidroxilo, alquilo, alcoxi, arilo, NHC(0)-alquilo; y R11 es hidrógeno, alquilo o NHC(0)CH3; o G es: en donde X2 es NH, NR12, 0, o S, y cada R2 es, independientemente, hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, heterociclilo, NHC(O)CH3, o fenilo sustituido opcionalmente con uno o más grupos alquilo, alcoxi o halógeno.

4.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque G es: 315 316 en donde R11 es NHC(0)CH3 o fenilo; o en donde R 1 es H o alquilo.

5. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizado además porque R6 es H, F o metoxi.

6. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado además porque X es -CH2-.

7. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado además porque X es CH-NHC(0)R8 y R8 es alquilo, arilo, arilalquilo, alcoxi o heteroarilo, cualquiera de los cuales puede estar sustituido opcionalmente con alquilo o halógeno.

8.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado además porque X es CH-OR8 y R8 es arilo o arilalquilo, que puede estar sustituido opcionalmente con halógeno.

9.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-5, caracterizado además porque X es:

10.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-9, caracterizado además porque R4 y R5 son ambos hidrógeno.

11.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -10, caracterizado además porque R1 y R2 son ambos metilo.

12. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-11 , caracterizado además porque R3 es ter-butilo, ciclohexilo, tetrahidropiranilo,

13. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque es: G Nstructura 321 Estructura Estructura Estructura Estructura Estructura 328 Estructura Estructura 331 Estructura 333 334 335 336 337 338 Estructura 340 341 342 343 ?44 G Nstructura ??? ??? ??? ??? 350 351 20 Estructura Estructura ?55 ??? ??? ??? No. Estructura o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

14. - Un método para intensificar la apoptosis en una célula, que comprende poner en contacto una célula con un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-13.

15. - El método que se reclama en la reivindicación 14, caracterizado además porque la célula es una célula de cáncer.

16. - Un método para alterar la liberación de citocinas inflamatorias de una célula, que comprende poner en contacto una célula con un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-13.

17. - El método que se reclama en la reivindicación 16, caracterizado además porque la célula es un linfocito, un granulocito o una célula presentadora de antígeno.

18. - El uso del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-13, para preparar un medicamento para mejorar la apoptosis en una célula, en donde la célula está en un sujeto.

19. - El uso como se reclama en la reivindicación 18, en donde un agente quimioterapéutico es administrable antes, simultáneamente o después del medicamento.

20. - El uso como se reclama en la reivindicación 18, en donde un agonista del receptor de muerte es administrable antes, simultáneamente o después de la administración del medicamento.

21 - El uso como se reclama en la reivindicación 20, en donde el agonista del receptor de muerte es el TRAIL

22. - El uso como se reclama en la reivindicación 21 , en donde el agonista del receptor de muerte es un anticuerpo de receptor de TRAIL.

23. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 20-22, en donde el agonista del receptor de muerte es administrable en una cantidad que produce un efecto sinérgico.

24. - El uso como se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 14-23, en donde el sujeto es un humano.

25. - El uso como se reclama en la reivindicación 24, en donde el sujeto padece una enfermedad proliferativa.

26. - El uso como se reclama en la reivindicación 25, en donde la enfermedad proliferativa es el cáncer.

27. - El uso como se reclama en la reivindicación 25, en donde la enfermedad proliferativa es una enfermedad autoinmune o un trastorno inflamatorio.

28. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-13, caracterizado además porque es para usarse en es intensificar la apoptosis en una célula.

29. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-13, caracterizado además porque es para usarse como un medicamento para el tratamiento de una enfermedad proliferativa.

30. - El uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-13, para preparar un medicamento para el tratamiento de una enfermedad proliferativa.

31. - Un compuesto de cualquiera de las fórmulas 1-i a 1-vi, 2-i a 2-iv, 4-i, o 4-ii.

32. - Un método para preparar un compuesto de la reivindicación 1 , que comprende combinar el compuesto 1-vi con un compuesto de fórmula LG-C(0)-G, en donde LG es un grupo saliente y PG4 es un grupo protector, seguido por eliminación de PG4 para proveer un compuesto de fórmula 1: en donde, opcionalmente, el método comprende: (a) eliminación de PG2 del compuesto 1-v para proveer el compuesto 1 -vi, en donde PG2 es un grupo protector: en donde, opcionalmente, el método comprende: (b) acoplar el compuesto 1 con PG (R1)N(R2)CHC02H, en donde PG4 es un grupo protector que diferente de PG2, para proveer el compuesto 1 -v: en donde, opcionalmente, el método comprende: (c) acoplar el compuesto 1-iii con PG3(H)N(R3)CHC02H, en donde PG3 es un grupo protector que es diferente de PG2, seguido por eliminación de PG3 para proveer el compuesto 1-iv: en donde, opcionalmente, el método comprende: (d) proteger el grupo amino del compuesto 1-ii con un grupo protector (PG2) que es diferente de PG1, seguido por eliminación de PG1, para proveer el compuesto 1-iii: en donde, opcionalmente, el método comprende: (e) combinar el compuesto 1 -i con una amina que tiene la fórmula: seguido por reducción con un hidruro, para proveer el compuesto 1-ii, donde PG1 es un grupo protector:

33.- Un método para preparar un compuesto de fórmula 1 , que comprende combinar el compuesto -vi con un compuesto de fórmula LG-C(O)-G, en donde LG es un grupo saliente, seguido por eliminación de PG4, para proveer un compuesto de fórmula 1 : en donde, opcionalmente, el método comprende: (a) aminación reductiva del compuesto 2-iv para proveer el compuesto 1-vi: en donde, opcionalmente, el método comprende: (b) oxidación del compuesto 2-iii para proveer el compuesto 2-iv: 2-i¡¡ 2-iv en donde, opcionalmente, el método comprende: (c) acoplar el compuesto 2-ii con un compuesto de la fórmula PG4(R1)N(R2)CHC02H para proveer el compuesto 2-iii, en donde PG4 es un grupo protector: en donde, opcionalmente, el método comprende: (d) acoplar el compuesto 2-i con un compuesto de la fórmula PG3(H)N(R3)CHC02H, en donde PG3 es un grupo protector, seguido por eliminación de PG3 para proveer el compuesto intermediario 2-ii: 3 3) eliminación de PG

34.- Un método para preparar un compuesto de la reivindicación 1 , que comprende desproteger el compuesto 1-vi para proveer un compuesto de fórmula 1 : en donde, opcionalmente, el método comprende: (a) acoplar el compuesto 4-ii con un compuesto que tiene la fórmula PG4(R1)N(R2)CHC02H para proveer el compuesto 1 -vi, en donde PG4 es un grupo protector: en donde, opcionalmente, el método comprende: (b) acoplar el compuesto 4-i con un compuesto que tiene la fórmula PG3(H)N(R3)CHC02H, en donde PG3 es un grupo protector, seguido por eliminación de PG3 para proveer el compuesto 4-ii: en donde, opcionalmente, el método comprende: (c) combinar el compuesto 1-i¡ con un compuesto de fórmula LG-C(0)-G, en donde PG1 es un grupo protector, seguido por eliminación de PG1 para proveer el compuesto intermediario 4-i: