NL8003854A - Pteridinederivaten en radio-immunologische bepalingsmethode. - Google Patents
Pteridinederivaten en radio-immunologische bepalingsmethode. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8003854A NL8003854A NL8003854A NL8003854A NL8003854A NL 8003854 A NL8003854 A NL 8003854A NL 8003854 A NL8003854 A NL 8003854A NL 8003854 A NL8003854 A NL 8003854A NL 8003854 A NL8003854 A NL 8003854A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- pteridine
- group
- hydroxy
- erythro
- mixture
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 18
- CPNGPNLZQNNVQM-UHFFFAOYSA-N pteridine Chemical class N1=CN=CC2=NC=CN=C21 CPNGPNLZQNNVQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 18
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 28
- -1 5-carboxypentylamino Chemical group 0.000 claims description 27
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 22
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000011630 iodine Substances 0.000 claims description 20
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 20
- 150000003195 pteridines Chemical class 0.000 claims description 19
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 12
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000004464 hydroxyphenyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 5
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 4
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 claims description 3
- XMBWDFGMSWQBCA-RNFDNDRNSA-M iodine-131(1-) Chemical compound [131I-] XMBWDFGMSWQBCA-RNFDNDRNSA-M 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 47
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 30
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 27
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 22
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 19
- LHQIJBMDNUYRAM-AWFVSMACSA-N D-erythro-biopterin Chemical compound N1=C(N)NC(=O)C2=NC([C@H](O)[C@H](O)C)=CN=C21 LHQIJBMDNUYRAM-AWFVSMACSA-N 0.000 description 18
- LHQIJBMDNUYRAM-UHFFFAOYSA-N L-erythro-Biopterin Natural products N1=C(N)NC(=O)C2=NC(C(O)C(O)C)=CN=C21 LHQIJBMDNUYRAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 16
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 15
- 229960003732 tyramine Drugs 0.000 description 13
- DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-O tyraminium Chemical group [NH3+]CCC1=CC=C(O)C=C1 DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 13
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-N Tyramine Natural products NCCC1=CC=C(O)C=C1 DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 11
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 10
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 10
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 8
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 8
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- FKHIFSZMMVMEQY-UHFFFAOYSA-N talc Chemical compound [Mg+2].[O-][Si]([O-])=O FKHIFSZMMVMEQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 6
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 6
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 5
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 5
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 5
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 5
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 5
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- BMQYVXCPAOLZOK-UHFFFAOYSA-N Trihydroxypropylpterisin Natural products OCC(O)C(O)C1=CN=C2NC(N)=NC(=O)C2=N1 BMQYVXCPAOLZOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- BMQYVXCPAOLZOK-XINAWCOVSA-N neopterin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)C1=CN=C2NC(N)=NC(=O)C2=N1 BMQYVXCPAOLZOK-XINAWCOVSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000473945 Theria <moth genus> Species 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229940001584 sodium metabisulfite Drugs 0.000 description 3
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- UJFBUGYDKFCOBD-GARJFASQSA-N (2S,3R,4S)-5-(phenylhydrazinylidene)pentane-1,2,3,4-tetrol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=NNC1=CC=CC=C1 UJFBUGYDKFCOBD-GARJFASQSA-N 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKAYRHLZQHITSP-UHFFFAOYSA-N 6-amino-2-methylsulfanyl-5-nitroso-1h-pyrimidin-4-one Chemical compound CSC1=NC(=O)C(N=O)=C(N)N1 XKAYRHLZQHITSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 6S-folinic acid Natural products C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100132433 Arabidopsis thaliana VIII-1 gene Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000298 Cellophane Polymers 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N Diacetyl Chemical group CC(=O)C(C)=O QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MPJKWIXIYCLVCU-UHFFFAOYSA-N Folinic acid Natural products NC1=NC2=C(N(C=O)C(CNc3ccc(cc3)C(=O)NC(CCC(=O)O)CC(=O)O)CN2)C(=O)N1 MPJKWIXIYCLVCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- FEMXZDUTFRTWPE-DZSWIPIPSA-N L-erythro-7,8-dihydrobiopterin Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1NCC([C@@H](O)[C@@H](O)C)=N2 FEMXZDUTFRTWPE-DZSWIPIPSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OOAYUBIIDJANMN-UHFFFAOYSA-N N-hexanoyltyramine Chemical compound CCCCCC(=O)NCCC1=CC=C(O)C=C1 OOAYUBIIDJANMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N folinic acid Chemical compound C1NC=2NC(N)=NC(=O)C=2N(C=O)C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 VVIAGPKUTFNRDU-ABLWVSNPSA-N 0.000 description 2
- 235000008191 folinic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011672 folinic acid Substances 0.000 description 2
- LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N glyoxal Chemical compound O=CC=O LEQAOMBKQFMDFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960001691 leucovorin Drugs 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000004817 pentamethylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:1] 0.000 description 2
- 125000004894 pentylamino group Chemical group C(CCCC)N* 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DZRKTNFMEKSPOU-UHFFFAOYSA-N 2,4-dimethylpteridine Chemical compound N1=CC=NC2=NC(C)=NC(C)=C21 DZRKTNFMEKSPOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 2-METHOXYETHANOL Chemical compound COCCO XNWFRZJHXBZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMQYVXCPAOLZOK-UJURSFKZSA-N 2-amino-6-[(1r,2s)-1,2,3-trihydroxypropyl]-1h-pteridin-4-one Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)C1=CN=C2NC(N)=NC(=O)C2=N1 BMQYVXCPAOLZOK-UJURSFKZSA-N 0.000 description 1
- VWNVTVHTUBZECM-UHFFFAOYSA-N 2-methylsulfanyl-5-nitrosopyrimidine Chemical compound CSC1=NC=C(N=O)C=N1 VWNVTVHTUBZECM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004203 4-hydroxyphenyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- SJSPIVYHDWWPRR-UHFFFAOYSA-N 5,6-diamino-2-methylsulfanyl-1h-pyrimidin-4-one Chemical compound CSC1=NC(=O)C(N)=C(N)N1 SJSPIVYHDWWPRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FDUJKFABVNHUAS-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-1h-pteridin-2-one Chemical compound C1=NC(=O)NC2=C1N=C(C)C(C)=N2 FDUJKFABVNHUAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 101001053401 Arabidopsis thaliana Acid beta-fructofuranosidase 3, vacuolar Proteins 0.000 description 1
- 101100459319 Arabidopsis thaliana VIII-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDYRRXVKMKZUGR-UHFFFAOYSA-N N1=CN=CC2=NC=CN=C21.NCCC1=CC=C(O)C=C1 Chemical compound N1=CN=CC2=NC=CN=C21.NCCC1=CC=C(O)C=C1 BDYRRXVKMKZUGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QHTCTQNDVMCFSJ-UHFFFAOYSA-N NC1N(C2=NC=CN=C2C=N1)O Chemical class NC1N(C2=NC=CN=C2C=N1)O QHTCTQNDVMCFSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 201000011252 Phenylketonuria Diseases 0.000 description 1
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000008065 acid anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000037354 amino acid metabolism Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 125000004063 butyryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000005243 carbonyl alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- AOGYCOYQMAVAFD-UHFFFAOYSA-N chlorocarbonic acid Chemical compound OC(Cl)=O AOGYCOYQMAVAFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N diphosphonate Chemical compound O=P(=O)OP(=O)=O YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940015043 glyoxal Drugs 0.000 description 1
- 125000006289 hydroxybenzyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000011261 inert gas Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000011587 new zealand white rabbit Methods 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N phosphorus pentoxide Inorganic materials O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001042 pteridinyl group Chemical group N1=C(N=CC2=NC=CN=C12)* 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000006798 ring closing metathesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- FNKQXYHWGSIFBK-RPDRRWSUSA-N sapropterin Chemical compound N1=C(N)NC(=O)C2=C1NC[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O)C)N2 FNKQXYHWGSIFBK-RPDRRWSUSA-N 0.000 description 1
- 229960004617 sapropterin Drugs 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- AWDBHOZBRXWRKS-UHFFFAOYSA-N tetrapotassium;iron(6+);hexacyanide Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[Fe+6].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] AWDBHOZBRXWRKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001479 tosylchloramide sodium Drugs 0.000 description 1
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
- C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
- C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
- C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
- C07D239/48—Two nitrogen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D475/00—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems
- C07D475/02—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems with an oxygen atom directly attached in position 4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D475/00—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems
- C07D475/02—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems with an oxygen atom directly attached in position 4
- C07D475/04—Heterocyclic compounds containing pteridine ring systems with an oxygen atom directly attached in position 4 with a nitrogen atom directly attached in position 2
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/534—Production of labelled immunochemicals with radioactive label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/82—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving vitamins or their receptors
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
*
Pteridinederivaten en radio-immunologische bepalingsmethode.
De uitvinding heeft betrekking op nieuwe pteridinederivaten en een radio-immunologische bepalingsmethode (radio-immuno-assay, RIA) voor pteridinen met behtilp van een pteridinederivaat dat een radio-aktief jodium isotoop bevattende tyraminerest als 5 "label" bevat.
In de afgelopen jaren is ontdekt dat pteridinen zoals folinezuurj een rol spelen als co-enzym in het aminozuurmeta-bolisme. Op grond hiervan is de gedachte ontwikkeld, dat de kwantitatieve bepaling van pteridinen in levende organismen toege-10 past zou kunnen worden voor de diagnostiek van verschillende enzymdeficiencies. Onlangs is melding gemaakt van het verband tussen fenylketonurie en biopterine in Annals of Neurology, Vol. 3, biz. 22U-230 (1978), The New England Journal of Medicine, Vol. 299» blz. 673-679 (1978) en Clinica Chimiea Acta, Vol. 93, blz. 251-262 15 (1979)· Daarbij is veel aandacht besteed aan de kwantitatieve verandering van pteridinen (2-amino-i*-hydroxypteridinederi vaten) in het menselijk lichaam.
Een enzym-immunologische bepaling van biopterine (2-amino-4-hydroxy-6-(L-erythro-1,2-dihydroxypropyl)pteridine) is 20 beschreven in Methods in Enzymology, Vol. 18 B, blz. 618 (1971)· Deze bepalingsmethode leent zich echter niet voor praktische toepassing vanwege de betrekkelijk lange bepalingstijd. Een methode voor het bepalen van neopterine (2-amino-^-hydroxy-6-(L- of D-erythro-1,2,3-trihydroxypropyl)-pteridine) is nog niet voorgesteld 25 maar kan in de toekomst nodig worden.
De uitvinding heeft betrekking op nieuwe pteridinederivaten met de formule 1 waarin R een hydroxyfenylgroep, radio-aktief 8003854 - ί 2 jodium bevattende hydroxyfenylgroep, tyraminocarbonylgroep, radio-aktief jodium bevattende tyraminocarbonylgroep, proteinocarbonyl-groep of carboxylgroep voorstelt, Q een rechte of vertakte alkyleen-groep met 1 - 6 koolstofatomen voorstelt en Hg en R^ elk een 5 waterstofatoom, alkylgroep met 1 - 6 koolstofatomen of hydroxyl alkylgroep met 1 - 6 koolstofatomen voorstellen.
De uitvinding heeft verder betrekking op een radio-immunologische bepalingsmethode met behulp van pteridinederivaten met de formule 1 waarin R een radio-aktief jodium bevattende 10 hydroxyfenylgroep of een radio-aktief jodium bevattende tyraminocarbonylgroep voorstelt, Q een rechte of vertakte alkyleengroep met 1 - 6 koolstofatomen voorstelt en Rg en Rγ elk een waterstofatoom, alkylgroep met 1 - 6 koolstofatomen of hydroxyalkylgroep met 1 - 6 koolstofatomen voorstellen, 15 In fig. 1 en 2 zijn standaardkrommen voor biopterine weergegeven waarbij B de radio-aktiviteit (aantal tellen per minuut, afgekort "tmp"), Bo de radio-aktiviteit (tmp) bij afwezigheid van de standaardstof (biopterine) en N de radio-aktiviteit van een niet-specifieke binding (tmp) bij afwezig-20 heid van de antistof en de standaardstof (biopterine) betekenen.
Voorbeelden van radio-aktief gemerkte verbindingen (tracers) volgens de uitvinding zijn radio-aktie’f."jodium bevattend 2-/.5- (tyraminocarbonyl) pentyl aminq/-U-hydroxy-6- (L-erythro-1,2- dihydroxypropyl)pteridine en radio-aktief jodium bevattend 25 ^-hydroxy-2-/2-(U-hydroxyfenyl)ethyl7amino^-( L-erythro-1,2-di- hydroxypropyl) -pt en dine.
Daarnaast kunnen nieuwe proteïnocarbonylalkylptendanen zoals biopterinylcaproylproteine worden bereid voor de vorming van antistof.
De verbindingen met de formule 1 kunnen worden bereid 30 zoals weergegeven in de reactieschema's A en B. Daarin is het pteridinederivaat biopterine, het proteïne runderserumalbumine (afgekort BSA) en de alkyleengroep in de formule 1 pentyleen.
* I staat voor radio-aktief jodium. Reactiestappen die met dezelfde hoofdletter zijn aangegeven, worden steeds onder dezelfde 35 of nagenoeg dezelfde omstandigheden uitgevoerd.
Volgens de reactieschema's wordt U-amino-6-hydroxy-2- 8003854 . * \ 3 methylthio-5-nitrosopyrimidine (formule 2) tot reactie gebracht a.
met fc, -aminocapronzuur in water onder verwarmen waarbij U-amino- 2-(2-earboxypentylamino-6-hydroxy-5-nitroso-pyri dimine (formule 7) ontstaat. Wanneer het aminozuur een -aminozuur is, wordt de 5 reactie bij voorkeur uitgevoerd in basisch milieu, bijvoorbeeld in een 0,25M waterige natriumhydroxydeoplossing. Wanneer de verbinding met de formule 2 of 7 katalytisch wordt gereduceerd, wordt de 5-nitrosogroep omgezet in een aminogroep onder vorming van respectievelijk de verbinding met de formule 3 en 8. Als 10 katalysator kan bijvoorbeeld palladium-op-kool worden gebruikt.
De verbinding met de formule 3 of 8 wordt, eventueel na zuiveren, tot reactie gebracht met 5-deoxyarabinosefenylhydrazon in een oplosmiddel onder verwarmen waarbij ringsluiting tot een pteridinekern optreedt onder vorming van de verbinding met de 15 formule ka. of 9a* Een geschikt oplosmiddel is waterige alcohol.
De reactie wordt bij voorkeur uitgevoerd in een stroom inert gas bijvoorbeeld stikstof. Door de verbinding met de formule k& te laten reageren met tyramine op dezelfde wijze als de reactie van de verbinding met de formule 2 en het aminozuur, ontstaat 20 H-hy droxy-6- (1,2-dihydroxypropyl) -2-Z.2- (4-hydroxy fenyl) ethyl- aminoTpteridine met de formule 5a. De verbinding met de formule 5a kan worden gemerkt met radio-aktief jodium zoals hierna aangegeven. De aldus verkregen gemerkte verbinding met de formule 6a kan worden gebruikt als tracer bij de radio-immunologische 25 bepalingsmethode volgens de uitvinding.
De verbinding met de formule 9a kan dan worden geconjugeerd met'tyramine of een proteïne bijvoorbeeld rundërserumalbumine (afgekort BSA), konijneserumalbumine of menselijk serumalhumine op een voor het vormen van een zuur-amidebinding gebruikelijke 30 wijze, bijvoorbeeld volgens de gemengd-zuuranhydride methode waarbij een zuur (zoals de verbinding met de formule 9a) tot reactie wordt gebracht met een ester van chloormierezuur bij aanwezigheid van een tertiair amine onder vorming van een gemengd anhydride dat vervolgens tot reactie wordt gebracht met tyramine 35 of een proteïne.
Verbindingen met een tyraminerest zoals die met de formule 8003854 \ ν ΐ
It 5a of 10a worden gemerkt met radio-aktief jodium op gebruikelijke wijze, en bij voorkeur volgens een modificatie van de chloor-amine T (natrium p-tolueensulfonchlooramide) methode. Volgens deze methode wordt het tyramineconjugaat tot reactie gebracht 5 met radio-aktief natriumjodide bij aanwezigheid van chlooramine T gedurende ongeveer 30 sec. tot 5 min. en beëindigd door toevoegen van natriummetabisulfiet. Als radio-aktieve jodium-isotopen hebben I en I de voorkeur vanwege de beschikbaarheid, halfwaardetijd en specifieke aktiviteit, met de meeste 125 10 voorkeur voor I. Tyramine kan ook eerst worden gemerkt met radio-aktief jodium en daarna worden geconjugeerd met een pteridinederivaat zoals boven aangegeven.
Wanneer bij de ringsluiting in stap B D- of L-arabinose-fenylhydrazon wordt gebruikt, ontstaat een neopterineverbinding.
15 Voorbeelden van andere reactanten die in deze stap kunnen worden gebruikt zijn diacetyl en glyoxal. Ook kunnen verbindingen met de formule 1 worden bereid waarin de alkyleengroep methyleen, ethyleen, propyleen, butyleen of pentyleen met eventueel een substituent zoals methyl, ethyl of hydroxybenzyl, is.
20 Voor de vorming van antiserum voor het pteridine kunnen bekende immuniseringsmethoden worden toegepast. Bijvoorbeeld worden zoogdieren, bijvoorbeeld konijnen, geiten, schapen en hamsters, geïmmuniseerd door injectie van een proteïne geconjugeerd pteridine in de vorm van een emulsie waaraan Freund-25 adjuvans (een olieachtig mengsel van gedode mycobacteriën) is toegevoegd. Na enkele booster-injectiès (injectie van een vaccin waardoor een aanwezige immuniteit binnen korte tijd wordt versterkt) wordt bloed verzameld en worden de bloedlichaampjes daaruit verwijderd. Het antiserum kan als zodanig voor de radio-30 immunologische bepaling worden gebruikt maar meestal wordt het eerst gezuiverd bijvoorbeeld door uitzouten of chromatograferen.
Bij de radio-immunologische bepalingsmethode, in het hier-^· navolgende afgekort met RIA, kan het te onderzoeken monster bijvoorbeeld een urinemonster, eerst worden voorbehandeld indien 35 nodig. Voor het bepalen van bijvoorbeeld biopterine in urine, kan het gereduceerde biopterine (dihydrobiopterine en tetra- 8003854 , f
V
5 hydrobiopterine) eerst vorden geoxydeerd, bijvoorbeeld met jodium als oxydatiemiddel.
De RIA voor pteridinen kan op gebruikelijke wijze worden uitgevoerd. Bijvoorbeeld wordt het antiserum met een buffer verdund 5 en7een monsteroplossing of een standaardoplossing geincubeerd. Het gevormde mengsel wordt daarna geincubeerd met de tracer volgens de uitvinding bij een geschikte temperatuur bijvoorbeeld kamertemperatuur. Na enige tijd worden gebonden antigenen en vrije antigenen gescheiden, bijvoorbeeld volgens de dubbele antistof-10 methode, de vaste dragermethode of de methode met dextran in combinatie met aktieve kool. De radio-aktiviteit van de gescheiden fracties wordt gemeten volgens de scintillatiemethode. Uit de tellingen voor de standaardoplossing wordt een ijklijn geconstrueerd en de concentratie antigeen in het testmonster (urine) 15 wordt bepaald door bij de gemeten hoeveelheid gemerkt antigeen-antistof met behulp van de ijklijn de bijbehorende waarde op de X-as af te lezen.
Het is gebleken dat de uitwisselings-reaktiviteit van het biopterine-antiserum met tetrahydrobiopterine, dihydrobiopterine, 20 neopterine, 6,T-dimethylpteridine, pteridine of folinezuur, verwaarloosbaar is. De antistof voor neopterine of dimethyl-pteridine vertoont ook een hoge selectiviteit en weinig uit-wisselingsreaktiviteit met andere pteridinen.
De radio-immunologische bepalingsmethode met de tracer 25 en het pterinylproteine volgens de uitvinding is zeer nauwkeurig en duurt kort, korter dan bijvoorbeeld de enzym-immunologische bepaling beschreven in bovengenoemd Methods in Enzymology, Vol. 18 B, blz. 618 (1971)· Het redio-aktief gemerkt 2-/“2-(H-hydroxy-f enyl)ethyl_7aminopteridinederivaat is gevoeliger dan een radio-30 gemerkt 2-(tyraminocarbonylalkylamino)pteridine omdat eerstgenoemde verbinding een andere brug heeft dan het antigeen (pro-teineconjugaat).
In de RIA voor laag-moleculaire verbindingen die zelf geen antistof kunnen vormen (dat wil zeggen een hapteen of half antigeen) 35 wordt immunisatie bereikt door aan een zoogdier een hapteen-proteineconjugaat toe te dienen. Het aldus gevormde antiserum 8003854 » t 6 bevat een antistof aan het bruggedeelte alsook aan het hapteen. Aangenomen vordt dat wanneer onder dergelijke omstandigheden een gemerkt hapteen (tracer) met dezelfde brug als in het hapteen-proteineconjugaat vordt toegepast, de bepalingsmethode een neiging 5 vertoont tot betrekkelijk hoge niet-specifieke bindingen en betrekkelijk lage gevoeligheid.
Wanneer de tracer en het antigeen dezelfde brug hebben, bijvoorbeeld caproyl, propionyl of butyryl, is het nodig om het antiserum naar de brug te verplaatsen.
10 Voorbeeld 1-1
In 500 ml van een 0,5M waterige kaliumhydroxydeoplossing werd l8g 4-amino-6-hydroxy-2-methylthio-5-nitrosopyrimidine (formule 2) opgelost. Aan de oplossing werd 10g 5-2*ig palladium-op-kool toegevoegd. De verbinding met de formule 2 werd gehydroge-15 neerd bij kamertemperatuur onder atmosferische druk totdat de theoretische hoeveelheid waterstof was verbruikt. Na verwijderen van de katalysator door filtreren, werd het filtraat met miere-zuur op een pH van 3-4 gebracht waarop 4,5-diamino-6-hydroxy-2-methylthiopyrimidine (formule 3) als kleurloze naaldjes precipi-20 teerde. Het kristallijne produkt werd vervolgens zonder te isoleren toegevoegd aan een mengsel van 32g 5-deoxy-L-arabinose-fenylhydrazon en 400 ml methanol. Het mengsel werd 90 minuten bij 25°C onder stikstof geroerd en daarna nog 30 minuten bij refluxtemperatuur. Na afloop werd het reactiemengsel gekoeld in 25 een ijsbad waarna 1Q0g kaliumhexacyanoferraat (formule 3) en een waterige kaliumjodideoplossing (5g/500 ml) werden toegevoegd. Het mengsel werd 20 uren bij 25°C en een pH van 3-4 geroerd onder inleiden van zuurstof. Na afloop werd het reactiemengsel in vacuo geconcentreerd tot een volume van 500 ml. Het concen-30 traat werd met ammoniak op een pH van 9-10 gebracht. Niet-fluorescerende vaste stof werd door filtreren verwijderd. Het filtraat werd door een Florisilkolom (5 x 60 cm) geleid en geëlueerd met water. Twee fracties met blauwe fluorescentie werden opgevangen. De hoofdfractie werd geconcentreerd tot 35 150 ml en daarna weer door een Florisilkolom geleid onder elueren met water. Het eluaat werd in vacuo geconcentreerd tot 8003854 7 droog waarna het residu werd geëxtraheerd met 500 ml hete methanol. De extractoplossing werd geconcentreerd tot een volume van 50 ml waaruit hij koelen 5»5g 4-hydroxy-6-(L-erythro-1,2-dihydroxypropyl)-2-methylthiopteridine (formule 4a) als kleurloze 5 naaldjes precipiteerde. De ontledingstemperatuur van het produkt lag hoven 210°C (na omkristalliseren uit water).
Elementair analyse, in % berekend voor C^H^N^O^S^HgO: 0,39,½i H, 5,31; N, 18,41 10 gevonden C,40,27; H, 4,45; N, 18,65«
Op dezelfde wijze maar gebruikmakend van D- of L-arabinose-fenylhydrazon in plaats van 5-deoxy-L-arabinosefenylhydrazon, werden 4-hydroxy-6-(D-erythro-1,2,3-trihydroxypropyl)-2-methyl-thiopteridine (formule 4b) of het L-isomeer (formule 4c) ver-15 kregen. De ontledingstemperatuur van beide isomeren na omkristalliseren uit water bedroeg 158°C.
Elementair analyse, in % berekend voor cjqii12IW3*H20: C, 39,72; H, 4,68; N, 18,54 20 gevonden voor het D-isomeer C, 39,63; H, 4,68; N, 18,03 gevonden voor het L-isomeer C, 39,75; H, 4,63; N, 18,17.
Voorbeeld 1-2 25 Een mengsel van 1,0g 4-hydroxy-6-(L-erythro-1,2-dihydroxy- propyl)-2-methylthiopteridine (formule 4a), 3,0g tyramine, 0,8g azijnzuur en een 50-^'ige waterige oplossing van 2-methoxy-ethanol werd 6 uren verwarmd bij 100 - 105°C. Na afloop werd de pH van het reactiemengsel met zoutzuur op 1 - 2 gebracht waar-30 na het reactiemengsel door een Florisilkolom (3,5 x 40 cm) werd geleid. Niet omgezet uitgangsmateriaal werd verwijderd door de kolom eerst te wassen met 500 ml 2M mierezuur en daarna met 500 ml water waarna het produkt werd geëlueerd met waterige ammoniakoplossingen met verschillende concentraties van 0 tot 35 2.1 in een totale hoeveelheid van 1 liter (gradiënt-eluatie). Het eluaat werd geconcentreerd tot een volume van 150 ml en daarna 8003854 4 r 8 op de boven aangegeven wijze behandeld met een Florisilkolom.
Het eluaat werd geconcentreerd tot droog en het residu werd geëxtraheerd met 200 ml waterige ammoniak. De extractoplossing werd geconcentreerd tot een volume van 100 ml. De pH van het 5 concentraat werd met mierezuur op 3 - 1+ gebracht waarna het werd gekoeld waarop !+-hy droxy-2-/2-(l+-hy droxy f enyl)ethyl7amino-6-(L-erythro-1,2-dihydroxypropyl)pteridine (formule 5a) als gele naaldjes met een ontledingspunt bij 165°C (na omkristalliseren uit water) precipiteerden.
10 Elementair analyse, in % berekend voor C^H^N^O^.HgO: C, 5^»39; H, 5,6U; N, 18,66 gevonden C, 5^,56; H, 5,62; N, 18,38.
Voorbeeld 1-3 15 Merken met radio-aktief jodium.
Aan 20^ul van een 0,05M fosfaatbuffer (pH 7,1+) werd 10yUg van de in voorbeeld 1-2 bereide verbinding met de formule 5a in 10^ul dimethylformamide toegevoegd. Daarna werd 10^ul (1,2 mCi) Na 12^I toegevoegd en vervolgens 20^ug chloramine -T 20 opgelost in 10 ,ul van voomoemde buffer. Men liet het mengsel 30 sec. bij 25°C reageren. De reactie werd beëindigd door toevoegen van een oplossing van 1+0/ig natriummetabisulfiet in 10^ul van voornoemde buffer. Het reactiemengsel werd gezuiverd door elektroforese op celluloseacetaat onder scheiden met een 0,05M 25 fosfaatbuffer (pH 7,6) en geëxtraheerd met een fosfaatbuffer die runderserumalbumine (BSA) in een concentratie van 5 gev.$ bevatte. Aldus werd 'I-gemerkt l+-hydroxy-2-/2-(l+-hydroxy-fenyl)ethyl7 amino-6-(L-erythro-1,2-dihydroxypropyl)pteridine (formule 6a) verkregen. Rf: 0,1+8 (dunne laag chromatografie op 30 silicagelplaten met als loopmiddel een mengsel van 1 vol.dl ethylacetaat, 1 vol.dl methanol en 0,2 vol.‘dln 5#'ige waterigere ammoniak.
Voorbeeld 1-1+
Bereiding van standaardmonsters.
35 Een mengsel van Q,2g l+-hydroxy-6-(L-erythro-1,2-dihydroxy propyl )-2-methylthiopteridine (formule 1+a), 0,6g ammoniumacetaat 8003854 9 en 5 ml geconcentreerde waterige ammoniak werd U uren verwarmd "bij refluxtemperatuur. Na afloop werd het mengsel met zoutzuur aangezuurd tot een pH 2 en daarna door een Florisilkolom (3,5 x 20 cm) geleid onder elueren met water. Het eluaat werd in vacuo 5 geconcentreerd tot droog. Het residu werd geëxtraheerd met 50 ml waterige ammoniak. De extractoplossing werd geconcentreerd tot een volume van 10 ml. Bij koelen van het concentraat werd 90 mg biopterine als ivoorkleurige naaldjes verkregen. De fysisch chemische eigenschappen van het produkt waren identiek met die 10 van een authentiek monster.
Op dezelfde wijze werden D-erythro-neopterinê (opbrengst 6o%) en L-erythro-neopterine (opbrengst 72$) verkregen uit de overeenkomstige 2-methylthioverbindingen met respectievelijk de formule Ub en l*c.
15 Voorbeeld II
Aan 1*00 ml water werden 10g !*-amino-6-hydroxy-2-methylthio- 5- nitrosopyrimidine (formule 2) en 20g £-aminocapronzuur toegevoegd. Het mengsel werd 1 uur verwarmd bij refluxtemperatuur. Na afloop werd de pH met mierezuur op 2-3 ingesteld waarna het 20 reactiemengsel werd gekoeld. Het neerslag werd door filtreren verzameld. Aldus werd 8,5g ^-amino^-i5-carboxypentylamino)- 6- hydroxy-5-nitrosopyrimidine (formule 7) verkregen. Het produkt werd opgelost in hete verdunde waterige ammoniak en aangezuurd met mierezuur waarbij roodachtig oranje naaldjes ontstonden.
25 Op dezelfde wijze werden met de verbinding met de formule 7 analoge verbindingen met de formule 13 bereid waarin Q-R de in onderstaande tabel A aangegeven betekenis hebben.
8003854 10
Tabel A
Q-R Smeltpunt. °C Aminozuur CH2C00H 300, zwart verkleuring glycine bij 280 5 (CHgJgCOOH 300 β -alanine (CHgJ^COOH 2ΐ+0-2ί*1 (ontleding) Y -aminoboter- zuur (CHg) C00H 232,5-233,5 (ontleding) £ -aminocapron- zuur CH(CH_)C0OH(1S) 300, zwart verkleuring L-alanine 10 bij 2U5 CH(CH3)C00H(1R) 300 D-alanine
.C00H
CHC // 300 L-tyrosine
CH // y-0H
15 ~
Voorbeeld III-1
Aan 60 ml van een 2M natriumhydroxydeoplossing in water werd U,3g ^-amino-2-(5-carboxypentylamino)-6-hydroxy-5-nitrosopyriaidine (formule 7) toegevoegd, De verbinding werd 20 katalytisch gehydrogeneerd bij aanwezigheid van 2g palladium- op-kool. Toen geen waterstof meer werd geabsorbeerd werd aan het reactiemengsel 20 ml geconcentreerd zoutzuur toegevoegd waarna de katalysator door filtreren werd verwijderd. Het filtraat werd geconcentreerd en de gevormde kristallen werden 25 gedroogd met fosforpentoxyde. Aldus werd 9»5g ^,5-diamino-2- (5-carboxypentylamino)-6-hydroxypyrimidinedihy drochloridemono-hydraat (formule 8) verkregen. Van het produkt werden 5»0g alsmede 3,7g 5-deoxy-L-arabinosefenylhydrazon toegevoegd aan UOO ml 50% (v/v) methanol. Het mengsel werd 20 minuten in een 30 stikstofstroom verwarmd bij refluxtemperatuur. Na afloop werd de pH op 5 ingesteld waarna 6 uren lucht door het reactiemengsel werd geleid. Vervolgens werd het reactiemengsel geconcentreerd -tot droog. Aan het residu werd 100 ml water toegevoegd en daarna mierezuur tot een pH 2,0. Het mengsel werd door een Florisil-35 kolom (1+00 ml) geleid. De kolom werd gewassen met 0,25M mierezuur en geëlueerd met water. Het eluaat werd geconcentreerd tot droog 8003854 f 11 waarna het residu werd geëxtraheerd met 250 ml methanol. De extractoplossing werd geconcentreerd tot droog waarna het daarbij verkregen residu werd gekristalliseerd uit 10 ml ethanol. Aldus werd 1+65 mg 2- (5-carboxypentylamino) -l+-hy droxy-6-L-erythro-5 1,2-dihydroxypropyl)pteridine (formule 9a) verkregen.
Elementair analyse, in % berekend voor Ο^Η^Ν^.^Ο: C, 1+8,17; H, 6,28; N, 18,96 gevonden C, 1+8,55; H,6,25; N, 18,55-10 Voorbeeld III-2
In 100 ml water werden l+,3g 1+,5-diamino-2-(5-carboxypentylamino )-6-hydroxypyrimidinedihydrochloridemonohydraat en 2,5gdiacetyl opgelost. Nadat de pH op 2-3 was gebracht, werd de oplossing 1 uur verwarmd bij refluxtemperatuur. Na afloop werd 15 het reactiemengsel gekoeld. Het neerslag werd omgekristalliseerd in 50$ (v/v) methanol. Aldus werd 3,1g 2-(5-carboxypentylamino)-l+-hydroxy-6,7-dimethylpteridine als gele naaldjes met een smeltpunt van 215-219°C (ontleding) verkregen.
Voorbeeld IV-1 20 Aan 2 ml dimethylformamide werden 7*+ mg 2-(5-carboxy pentylamino )-4-hydroxy-6-(L-erythro-1,2-dihydroxypropyl) pteridine en 126^ul triethylamine toegevoegd. Aan het mengsel werd 65^ul ethylchloorformiaat toegevoegd onder koelen bij -5°C waarna het mengsel 15 minuten werd geroerd. Hierna werd 25 52 mg tyramine in 2 ml dimethylformamide toegevoegd waarna het mengsel eerst 30 minuten werd geroerd bij -5°C en daarna 1 uur bij 0°C. Na’afloop werd het reactiemengsel in vacuo geconcentreerd. Aan het residu werd 3 ml van een 1M natriumhydroxyde-oplossing in water toegevoegd. Na 30 minuten staan bij 30°C werd 30 het reactiemengsel aangezuurd met mierezuur en gezuiverd door chromatograferen over een Florisilkolom (100 ml) onder elueren met een mengsel van ethanol en water. Het produkt werd in water gekristalliseerd waarbij 66 mg 2-(5-carboxypentylamino )-1+-hydroxy-6-(L-erythro-1,2-dihydroxypropyl)pteridine-tyramine-35 conjugaat (biopterinyl-caproyltyramine, formule 10a) als kleurloze naaldjes met een smeltpunt van 169—1T1°C (ontleding) werd ver- 8003854 12 kregen.
Elementair analyse, in % berekend voor Cg^H^QNgO^.HgO: C, 56,5^; H, 6,60; N, 17,20 5 gevonden C, 56,65; H, 6,U8; N, 17,3^.
Voorbeeld IV-2
Aan een oplossing van 18U mg 2-(5-carboxypentylamino)-U-hydroxy-6-(L-erythro-1,2,3-trihydroxypropyl)pteridine en !*00yUl triethylamine in 2 ml dimethylformamide verd 2Q0^ul 10 ethylchloorformiaat toegevoegd bij -5°C. Na 15 minuten roeren bij -5°C verd 137 mg tyramine opgelost in 2 ml dimethylformamide toegevoegd waarna het mengsel eerst 30 minuten werd geroerd bij -5°C, daarna 1 uur bij 0°C en tenslotte 30 minuten bij kamertemperatuur. Hierna werd het reactiemengsel in vacuo geconcen-15 treerd. Aan het concentraat werd 2 ml van een 1M natriumhydroxyde- oplossing in water toegevoegd. Na 30 minuten staan bij kamertemperatuur werd het mengsel aangezuurd met mierezuur en gezuiverd door chromatografie over een Florisilkolom (100 ml) onder elueren met een mengsel van ethanol en water. Aldus werd 101 mg 2-(5-20 carboxypentylamine)-U-hydrox-6-(L-erythro-1,2,3-trihydroxypropyl) pteridine-tyramineconjugaat (neopterinylcaproyltyramine) verkregen. Het smeltpunt na omkristalliseren in waterige ethanol bedroeg 192-1960C (ontleding).
Elementair analyse, in % 25 berekend voor C23H3oIi6°6,H20: C, 51*,75; H, 6,39; N, 16,66 gevonden C, 5U.94; H, 6,40; N, 16,33.
Voorbeeld IV-3
Aan een oplossing van 2^9 mg 2-(5-carboxypentylamino)-L-30 hydroxy-6,7-dimethylpteridine en 200^ul triethylamine in 1+ ml dimethylformamide werd 100^ul ethylchloorformiaat bij -5°C toegevoegd. Men liet het mengsel 15 minuten bij -5°C reageren. -Na afloop werd aan het reactiemengsel 205 mg tyramine opgelost in 2 ml dimethylformamide toegevoegd waarna het mengsel eerst 35 30 minuten werd geroerd bij -5°C en daarna 1 uur bij kamertempe ratuur. Het reactiemengsel werd geconcentreerd in vacuo waarna 8003854 13 het concentraat werd opgelost in water. De oplossing werd aangezuurd met mierezuur en gezuiverd door chromatograféren over een Florisilkolom onder gradiëntelutie met 1 liter water en 1 liter waterige oplossing van 200 ml aceton en Ug ammoniak.
5 Aldus werd 209 nig 2-( 5-carboxypentylamino)-l+-hydroxy-6 ,J- dimethylpteridine-tyramineconjugaat verkregen. Het smeltpunt na omkristalliseren in 50% (v/v) ethanol bedroeg 200°C (ontleding).
Elementair analyse, in % 10 berekend voor ^8S6°3-H20: c, 59,τη H, 6,83; N, 18,99 gevonden C, 59,77; H, 7,35; N, 18,76.
Ifoorbeeld V
Merken met radio-aktief jodium.
15 Aan 20^ul 0,05M fosfaatbuffer (pH 7,¾) werd 10^ug biopterinyl- caproyltyramineconjugaat in 10 ,ul dimethylformamide toegevoegd.
. 125
Aan het mengsel werden 10^ul (1,2 mCi) Na JÏ en 20^ug chloramine T opgelost in lO^ul van voornoemde buffer, toegevoegd, Men liet het mengsel 30 sec. bij 25°C reageren. De reactie 20 werd beëindigd door toevoegen van een oplossing van U0^ug natriummetabisulfiet in 10^ul van voornoemde buffer. Het produkt werd gezuiverd door elektroforese over celluloseacetaat onder scheiden met 0,05M fosfaatbuffer (pH 7,6) en extraheren met een 0,5# runderserumalbumine (BSA) bevattende fosfaatbuffer. Aldus 125 25 werd I-gemerkt 2-(5-carboxypentylamino) -1)—hydroxy-6- (L~ erythro-1,2-dihydroxypropyl)pteridine-tyr amineconjugaat verkregen. Rf: 0,50 (dunne laag chromatografie over silicagelplaten met als loopmiddel een mengsel van 1 vol.dl ethylacetaat, 1 vol.dl methanol en 0,2 vol.dln 5#'ige waterige ammoniak).
30 Voorbeeld VI-1
Conjugatie met runderserumalbumine (BSA).
Aan 1 ml dimethylformamide werden 7¾ mg biopterinyl-caproyltyramine en l68^ul triethylamine toegevoegd en daarna 87jul ethylchloorformiaat bij -5°C. Na 15 minuten roeren werd 35 het mengsel toegevoegd aan een mengsel van 11¾ mg runderserum albumine (BSA), 2 ml water en 200^ul 1M natriumhydroxydeoplossing 8003854 11* ί in water. Het mengsel werd 30 minuten geroerd bij -5°C onder instellen van een pH op 9, daarna 1 uur bij 0°C en tenslotte 1 uur bij kamertemperatuur. Na toevoegen van 5 ml 1M natrium-hydroxydeoplossing in water liet men het mengsel 30 minuten bij 5 kamertemperatuur staan. Vervolgens werd het mengsel gedialyseerd onder gebruikmaking van een cellofaanbuis tegen stromend water.
De cellofaanbuis werd in een beker geplaatst die een oplossing bevatte van 1g natriumacetaat in 300 ml water, op een pH U,5 ingesteld en 6 uren gedialyseerd. Hierna werd de binnenste oplos-10 sing gecentrifugeerd. Het precipitaat werd gelyofiliseerd waarbij 95 mg 2-(5-carboxypentylamino)-i+-hydroxy-6-(L-erythro-1,2-dihydroxypropyl)-pteridine-BSA-conjugaat (biopterinylcaproyl-BSA) werd verkregen.
Voorbeeld VI-2 15 Aan 1 ml dimethylformamide werden 73, ^ mg 2-(5-carboxy- pentylamino)-4-hydroxy-6-(L-erythro-1,2,3-trihydroxypropyl) pteridine en l68^ul triethylamine toegevoegd en daarna 87^ul ethylchloorformiaat bij -5°C. Na 15 minuten roeren werd de reactieoplossing toegevoegd aan een mengsel van 11U mg BSA, 20 2 ml water en 200^ul 1M natriumhydroxydeoplossing in water. Het mengsel werd 30 minuten geroerd bij -5°C onder instellen van de pH op 9» daarna 1 uur bij 0°C en tenslotte 1 uur bij kamertemperatuur. Na toevoegen van 1M natriumhydroxydeoplossing in water liet men het reactiemengsel 30 minuten staan bij kamertemperatuur. 25 Vervolgens werd het reactiemengsel gedialyseerd op de in voorbeeld VI-1 aangegeven wijze en daarna gecentrifugeerd. Het precipitaat werd gelyofiliseerd waarbij 100 mg 2-(5-carboxy-pentylamino)-^-hydroxy-6-(L-erythro-1,2,3-trihydroxypropyl) pteridine-BSA-conjugaat (neopterinylcaproyl-BSA) werd verkregen.
30 Voorbeeld VI-3
Op dezelfde wijze als in voorbeeld VI-2 werd 2-(5-earboxy-pentyl)amino-h-hydroxy-6,7-dimethylpteridine-BSA-conjugaat (83 mg) verkregen uit 6l mg 2-(5-carboxypentylamino)-lt-hydroxy- 6,7-dimethylpteridine. De sübstitutiegraad voor pteridine bedroeg 35 82# /berekend uit Δ. (pH 7,0)7· 8003854 15
Voorbeeld VI-h
Op dezelfde wijze als in voorbeeld VI-2 werd 2-carboxy-methylamino-^-hydroxy-6-(L-erythro-1,2,3-trihydroxypropyl) pteridine-BSA-conjugaat (V* mg) verkregen uit 31 mg van de 5 overeenkomstige 2-carboxymethylamino verbinding.
Voorbeeld VI-5
Op dezelfde wijze als in voorbeeld VI-2 werd 2-carboxy-methylamino-4-hydroxy-6,7-dimethylpteridine-BSA-conjugaat (32 mg) verkregen uit 25 mg van de overeenkomstige 2-carboxy-10 methylamino verbinding.
In onderstaande tabel B is een samenvatting gegeven van de verbindingen volgens de voorbeelden I - 2 t/m VI - 5.
8003854 16
Tabel B
Verbindingen volgens de voorbeelden 1-2 t/m VI-5 met de formule 1 waarin Q-R R,· R Smeltpunt,°C of Rf ^ -- ch2ch2 O OH DHP H 165 (ontleding) " THP(D) " 180-182 (ontleding) " THP " 182-18U (ontleding) 10 125χ 0Η20Η2<^ OH DHP " Rf 0,1*8 CHgCOOH Me Me 206-210 (ontleding) 15 (CH2)2C00H " " 275 (zwart verkleuring) (CHg)^COOH " " 238-2^0 (ontleding) (CH^COOH " " 215-219 (ontleding) CH(CH3)C00H(1S) " " 193-191* (ontleding) (CH2)5C00H DHP H 216-218 (ontleding) 20 CHgCOOH THP " 177-1Ö0 (ontleding) (CHg)jCOOH " " 186-190 (ontleding) (CH2)5CO-tyramine CH3 CH3 200 (ontleding) " THP H 192-196 (ontleding) " DHP " 169-171 (ontleding) 25 (CH^CO-BSA Me Me
" THP H
" DHP " CH2C0-BSA Me Me
" THP H
30 (CHg)^CO-tyramine-^I Me Me Rf 0»58 " THP H Rf 0,36 " DHP " Rf 0,50 DHP: L-erythro-1,2-dihydroxypropyl THP: L-erythro-1,2,3-trihydroxypropyl 35 THP(D): D-erythro-1,2,3-trihydroxypropyl 8003854
IT
De Rf-waarde werd bepaald door dunne laag chromatografie op silicagelplaten met als loopmiddel een mengsel van 1 vol.dl ethyiacetaat, 1 vol.dl methanol en 0,2 vol.dln 5%'ige waterige ammoniak.
5 Voorbeeld VII
Bereiding van antistof.
Nieuw-Zeelandse witte konijnen werden intradermaal geïnjecteerd met 2- (5-carboxypentylamino) -i+-hydroxy-6- (L-erythro-1,2-dihydroxypropyl)pteridine-BSA-conjugaat en Freund 10 adjuvans (l mg per konijn). Na 1 maand werd de immunisering herhaald waarbij de injectie (0,¼ mg per konijn) op dezelfde wijze in totaal k keer om de week werd uitgevoerd. 10 Dagen na de laatste injectie werd bloed van de konijnen verzameld waaruit antiserum werd gewonnen.
15 Voorbeeld VIII-1 (a) Voorbehandeling van een urinemonster.
Aan 5»0 ml verse menselijke urine werden 500^ul 5M zoutzuur en 1 ml van een 0,2 gew.#rige Ig-0,U gew.#'ige KI oplossing toegevoegd waarna men het mengsel 1 uur bij kamer-20 temperatuur liet staan. Daarna werd de behandeling herhaald, echter met dit verschil dat in plaats van zoutzuur 0,5M natrium-hydroxydeoplossing in water werd gebruikt. De oxydatie werd beëindigd door toevoegen van 0,5 ml 2#’ig ascorbinezuur. Het mengsel werd 15 minuten gecentrifugeerd bij een omwentelings-25 snelheid van 7000 omw./ain. De bovenstaande vloeistof werd gechromatografeerd over een kolom van Dowex-50 (H+) (0,9 x 2 cm). Na wassen van de kolom met 20 ml water werd biopterine geëlueerd met 5 ml TM waterige ammoniumoplossing. Het eluaat werd op een pH 7,0 gebracht en aangevuld tot een volume van 6,0 ml met 30 250^ul 0,5M fosfaatbuffer (pH 7,0) en 5M zoutzuur om vervolgens te worden gebruikt voor bepaling.
(b) RIA van biopterine.
Voor de bepaling werd 0,1# BSA bevattende 0,0175M fosfaatbuffer gebruikt.
35 Om de antistof naar het capronzuurgedeelte over te brengen werden twee series van het mengsel van 10^ug van 2-(5-carboxy- 8003854 * l * 18 * pentylamino)-U-hydroxy-6-(L-erythro-1,2-dihydroxypropyl) pteridine en 100^ul 800-voudig verdund antiserum 30 minuten bij 37°C geincubeerd. Aan de ene serie van de verkregen oplossing werd 100ƒul van voornoemde buffer toegevoegd die standaard-5 biopterine (0 - 710 pmol) bevatte, en aan de andere serie van de oplossing 100^ul van het verdunde urinemonster (4, 8, 16 en 32-voudige verdunning). De mengsels verden 30 minuten bij o 125
37 C geincubeerd. Hierna werd aan elk mengsel 10^ul met JT
gemerkt 2-(5-carboxypentyland.no)-U-hydroxy-6-(L-erythro-1,2-10 dihydroxypropyl)pteridine-tyramine-conjugaat (20.000 tmp) toegevoegd waarna men het mengsel 30 minuten bij kamertemperatuur liet staan. Vervolgens werd als tweede antistof 100^ul anti-konijne—· immunoglobuline IgB toegevoegd waarna men het mengsel 15 minuten bij kamertemperatuur liet staan. Na toevoegen van 500^ul 15 'ig dextran T-70 (Pharmacia) werd het mengsel krachtig geroerd en daarna 15 minuten bij h-°C gecentrifugeerd bij een omwente-lingssnelheid van 2000 omw./min.. Van elk neerslag werd de radio-aktiviteit gemeten. De biopterineconcentraties in de urinemonsters zijn in onderstaande tabel C vermeld. Ter vergelijking 20 zijn ook de waarden vermeld die werden verkregen met eerder genoemde enzym-immunologische bepaling. Een standaardkromme voor de biopterineconcentraties i? weergegeven in figuur 1 , waarin de (Β-ίίΒα-Ν) waarden in grafiek zijn gebracht.
Tabel C
„ Biopterine (n mol/ml urine)
Monster, nr. -5=7-5-=-—- . . . .
’ RIA Enzym-immunologische 25 _ _ bepaling_ 1 5,75 5,1* 2 15,1 16,0 3 8,0 7,2 b 10,7 8,9 30 5 9,7 8,9
Voorbeeld VIII-2 (a) Voorbehandeling van een urinemonster.
Aan 500^ul verse menselijke urine werden 50^ul 2M zoutzuur en 50yul van een 2%'ige Ig-^'ige KI oplossing toegevoegd waarna 35 men het mengsel 1 uur in het donker bij kamertemperatuur liet staan. De oxydatie werd beëindigd door aan het mengsel 50/Ul 8003854 19 2 gev.$'ig ascorbinezuur toe te voegen. Hierna werd het zoutzuur verwijderd door het reactiemengsel te lyofiliseren waarna het residu werd opgelost in 0,3$ BSA bevattende 0,02M fosfaat-buffer (pH 7»5) om te worden gebruikt voor de RIA.
5 (b) RIA van biopterine.
Voor de bepaling werd een 0,1$ BSA bevattende 0,02M fosfaat buff er (pH 7Λ) gebruikt.
Aan een mengsel van 100^ul van voornoemde buffer en 100ƒul antiserum (ongeveer UOOO - 5000-voudige verdunning) werd 10 10^ul standaardbiopterine (0 - 300 pmol) in bufferoplossing of 100/Ul urinemonster (50 - 100-voudige verdunning) toegevoegd.
Het mengsel werd 30 minuten bij 37°C geincubeerd. Aan elk mengsel werd 100yul met JI gemerkt 4-hydroxy-2-/Ci2-(it-hydroxyfenyl) ethyl7amino-6-(L-erythro-1,2-dihydroxypropyl)pteridine (10.000 -15 20.000 tmp) toegevoegd waarna men het mengsel 1 - 2 uren bij
If°C liet staan.
Vervolgens verd aan het reactiemengsel als tweede antistof 100^ul anti-konijne ^-immunoglobuline IgG toegevoegd.
Na 10 minuten staan bij kamertemperatuur werd 100^ul U$’ig 20 dextran T-70 (Pharmacia) toegevoegd waarna het mengsel krachtig verd geroerd en 15 minuten bij k°C werd gecentrifugeerd bij een omwentelingssnelheid van 2500 omw./min.. De radio-aktiviteit van het neerslag werd gemeten.en de (B-N/B0-N) waarden werden in grafiek gebracht. .......
De aldus verkregen standaardlijn (A) is in fig. 2 ver- 25 geleken met de standaardlijn verkregen bij de bepaling die is uitgevoerd in voorbeeld VIII-1. Zoals uit de figuur blijkt, is bij toepassing van dé tracer met een andere brug dan het antigeen de gevoeligheid hoger dan wanneer dezelfde brug wordt toegepast en vertonen de lijnen scherpe dosisresponsies geschikt Yoor RIA.
8003854
Claims (7)
1. Pteridinederivaat, gekenmerkt door de formule 1 waarin R een hydroxyfenylgroep, radio-aktief jodium bevattende hydroxyfenylgroep, tyraminocarbonylgroep, radio-aktief jodium 5 bevattende tyraminocarbonylgroep, proteinocarbonylgroep of carboxylgroep voorstelt, Q een rechte of vertakte alkyleengroep met 1 - 6 koolstofatomen voorstelt en Rg en R^ elk een waterstofatoom, alkylgroep met 1 - 6 koolstofatomen of hydroxyalkylgroep met 1 - 6 koolstofatomen voorstellen.
2. Pteridinederivaat volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de verbinding met radio-aktief jodium gemerkt k-hydroxy-2-/2-(^-hydroxyfenyl)ethyl7amino-6-(L-erythro-1,2-dihydroxypropyl)-pteridine is.
3.Pteridinederivaat volgens conclusie 1, met het kenmerk, 15 dat de verbinding met radio-aktief jodium gemerkt 2-/.5-(tyramino- carbonyl)-pentylamino7-^-hydroxy-6-(L-erythro-1,2-dihydroxypropyl) -pteridine is. H. Pteridinederivaat volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de verbinding 2-(5-carboxypentylamino)-U-hydroxy-6-(L-erythro-20 1,2-dihydroxypropyl)pteridine-BSA conjugaat is.
4 Λ
5. Pteridinederivaat volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de verbinding 2-(5-carboxypentylamino)-lMiydroxy-6-(L-erythro- 1,2-dihydroxypropyl)pteridine is.
6. Radio-immunologische bepalingsmethode voor pteridinen, 25 met het kenmerk, dat een verbinding wordt gebruikt met de for mule 1 waarin R een met radio-aktief jodium gemerkte hydroxy-fenylgroep of een met radio-aktief jodium gemerkte tyraminocarbonylgroep voorstelt, Q een rechte of vertakte alkyleengroep met 1 - 6 koolstofatomen voorstelt en Rg en Rj elk een waterstof- 30 atoom, alkylgroep met 1 - 6 koolstofatomen of hydroxyalkylgroep met 1 - 6 koolstofatomen voorstellen.
7. Verbindingen, werkwijzen alsmede daarbij gebruikte en-' verkregen verbindingen, en radio-immunologische bepalingsmethoden zoals beschreven in de beschrijving en voorbeelden. 8003854
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8456879 | 1979-07-04 | ||
| JP8456879A JPH0231720B2 (ja) | 1979-07-04 | 1979-07-04 | Puterinjudotaioyobiputerinruinosokuteiho |
| JP188480A JPS5699484A (en) | 1980-01-11 | 1980-01-11 | Pterin derivative and determination of pterins |
| JP188480 | 1980-01-11 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8003854A true NL8003854A (nl) | 1981-01-06 |
Family
ID=26335174
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8003854A NL8003854A (nl) | 1979-07-04 | 1980-07-03 | Pteridinederivaten en radio-immunologische bepalingsmethode. |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4371514A (nl) |
| AU (1) | AU526214B2 (nl) |
| CA (1) | CA1150243A (nl) |
| DE (1) | DE3025226C2 (nl) |
| FR (1) | FR2460952A1 (nl) |
| GB (1) | GB2056459B (nl) |
| NL (1) | NL8003854A (nl) |
| SE (1) | SE441529B (nl) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1076495B (de) * | 1954-08-17 | 1960-02-25 | Ing Ernst Godderidge | Rotierende Verdraengerpumpe |
| US4550109A (en) * | 1984-05-31 | 1985-10-29 | The Board Of Regents, The University Of Texas System | Lipoidal biopterin compounds |
| DE4215275A1 (de) * | 1992-05-09 | 1993-11-11 | Merck Patent Gmbh | Mittel und Verfahren zur Behandlung von Körperflüssigkeiten bei der Bestimmung von Neopterin |
| DE4308739C1 (de) * | 1993-03-19 | 1994-06-23 | Henning Berlin Gmbh | Pterinderivate, ihre Herstellung und ihre Verwendung |
| US5525711A (en) * | 1994-05-18 | 1996-06-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Pteridine nucleotide analogs as fluorescent DNA probes |
| US6562969B1 (en) * | 1996-12-24 | 2003-05-13 | Research Development Foundation | Ricin inhibitors and methods for use thereof |
| WO1998028298A1 (en) * | 1996-12-24 | 1998-07-02 | Research Development Foundation | Ricin inhibitors and methods for use thereof |
| KR20070005550A (ko) | 2003-11-17 | 2007-01-10 | 바이오마린 파머수티컬 인크. | 대사 장애 치료를 위한 조성물 및 방법 |
| WO2006055511A2 (en) | 2004-11-17 | 2006-05-26 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Stable tablet formulation of tetrahydrobiopterin |
| US20120115244A1 (en) * | 2010-11-09 | 2012-05-10 | Abbott Laboratories | Materials and methods for immunoassay of pterins |
| US9216178B2 (en) | 2011-11-02 | 2015-12-22 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Dry blend formulation of tetrahydrobiopterin |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB785353A (en) * | 1953-01-30 | 1957-10-30 | Merck & Co Inc | Substituted pteridine derivatives |
| GB785352A (en) * | 1953-10-21 | 1957-10-30 | Merck & Co Inc | Preparation of pteridine derivatives |
| US4202976A (en) * | 1973-09-11 | 1980-05-13 | Bayly Russell J | Selenium-75 labelled derivatives of folates |
| GB1458978A (en) * | 1973-12-11 | 1976-12-22 | Radiochemical Centre Ltd | Saturation analysis |
| US3972991A (en) * | 1974-03-18 | 1976-08-03 | Case Western Reserve University | Radioisotopic assay and binder therefor |
| US3989812A (en) * | 1974-08-09 | 1976-11-02 | Smithkline Instruments, Inc. | Folic acid derivatives and use in radio-assay |
| US3988431A (en) * | 1974-12-12 | 1976-10-26 | Becton, Dickinson And Company | Radioassay of folates |
| CA1078827A (en) * | 1975-02-20 | 1980-06-03 | Nathan Lewin | Isotopically labeled derivatives of folic acid |
| IL49283A0 (en) * | 1975-03-31 | 1976-05-31 | Rosen I | A process for the radioassay of folates and novel 125 iodinated folic acid derivatives used therein |
| US4028465A (en) * | 1975-11-10 | 1977-06-07 | Bio-Rad Laboratories | Assay method for serum folate |
| US4276280A (en) * | 1976-09-29 | 1981-06-30 | Becton, Dickinson And Company | Radiolabeled derivatives of folic acid |
| US4146602A (en) * | 1977-01-27 | 1979-03-27 | Becton, Dickinson & Company | Simultaneous radioassay of folate and vitamin B12 |
| US4136159A (en) * | 1977-02-28 | 1979-01-23 | New England Nuclear Corporation | Radioassay of folates |
| US4135880A (en) * | 1977-08-19 | 1979-01-23 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Folate assay with ion exchange resin bound-free separation |
| EP0012444B1 (de) * | 1978-12-18 | 1984-07-25 | Wachter, Helmut, Univ.-Prof. Dr. | Diagnostizierverfahren, insbesondere zur Früherkennung von malignen Tumoren und/oder viralen Erkrankungen und Mittel zu seiner Durchführung |
-
1980
- 1980-07-02 GB GB8021637A patent/GB2056459B/en not_active Expired
- 1980-07-03 DE DE3025226A patent/DE3025226C2/de not_active Expired
- 1980-07-03 NL NL8003854A patent/NL8003854A/nl active Search and Examination
- 1980-07-03 SE SE8004933A patent/SE441529B/sv not_active IP Right Cessation
- 1980-07-04 CA CA000355429A patent/CA1150243A/en not_active Expired
- 1980-07-04 FR FR8014984A patent/FR2460952A1/fr active Granted
- 1980-07-04 AU AU60106/80A patent/AU526214B2/en not_active Ceased
- 1980-07-07 US US06/166,519 patent/US4371514A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB2056459A (en) | 1981-03-18 |
| US4371514A (en) | 1983-02-01 |
| FR2460952B1 (nl) | 1983-05-20 |
| SE8004933L (sv) | 1981-01-05 |
| AU6010680A (en) | 1981-10-29 |
| DE3025226C2 (de) | 1982-07-22 |
| AU526214B2 (en) | 1982-12-23 |
| SE441529B (sv) | 1985-10-14 |
| DE3025226A1 (de) | 1981-01-22 |
| GB2056459B (en) | 1983-03-09 |
| CA1150243A (en) | 1983-07-19 |
| FR2460952A1 (fr) | 1981-01-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3327551B2 (ja) | 流体試料中のチロキシンを検出・定量するための試薬および方法 | |
| US5359093A (en) | Reagents and methods for the detection and quantification of thyroxine in fluid samples | |
| US4347176A (en) | Compounds and methods of making same | |
| CA1146937A (en) | Chemiluminescent aminophthalhydrazide-labeled conjugates for use in specific binding assays | |
| NL8003854A (nl) | Pteridinederivaten en radio-immunologische bepalingsmethode. | |
| US5843404A (en) | Detection of hypoxia | |
| Shipchandler et al. | 4′-[Aminomethyl] fluorescein and its N-alkyl derivatives: useful reagents in immunodiagnostic techniques | |
| US4347382A (en) | 3H Labeled compounds | |
| US4356165A (en) | Bupropion radioimmunoassay, and kit | |
| US6063908A (en) | Reagents for lysergic acid diethylamide immunoassay | |
| US4355179A (en) | Radioactive nuclide labeled propiophenone compounds | |
| US4347177A (en) | Compounds and methods of making them | |
| JPH08325266A (ja) | 新規なキニジン誘導体 | |
| EP1767947B1 (en) | An immunoassay method and kit to leucomalachite green and malachite green | |
| US20170362579A1 (en) | Conjugates for assays for oxycodone and oxymorphone | |
| AU661013B2 (en) | ddI immunoassays, derivatives, conjugates and antibodies | |
| EP0597034B1 (en) | Haptens, tracers, immunogens and antibodies for immunoassays for propoxyphene | |
| EP0038071B1 (en) | New unlabelled and radioactive labelled derivatives of butylamino propiophenone, their preparation, immunogens obtained from the unlabelled derivatives and a process for immunogen preparation, antisera raised using the immunogens and a method for raising antisera, a radioimmunoassay method and a test kit for use in the assay method | |
| JPH0231720B2 (ja) | Puterinjudotaioyobiputerinruinosokuteiho | |
| JPS61140553A (ja) | ロイコトリエンとタンパク質との結合体 | |
| JPH01149773A (ja) | 化学発光性環状ヒドラジドおよびその製法 | |
| HK1026264B (en) | Reagents for the detection and quantification of thryoxine in fluid samples |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BATV | A request for search has been withdrawn | ||
| BA | A request for search or an international-type search has been filed | ||
| BB | A search report has been drawn up | ||
| BC | A request for examination has been filed | ||
| A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
| BN | A decision not to publish the application has become irrevocable |