NO162193B - Radioaktiv steroidte ved dets fremst., middel for p visning in vitro av mottagere for glucocg for bestemmelse av antall bindingspunkter for glucocorticoidene og anvendel - Google Patents
Radioaktiv steroidte ved dets fremst., middel for p visning in vitro av mottagere for glucocg for bestemmelse av antall bindingspunkter for glucocorticoidene og anvendel Download PDFInfo
- Publication number
- NO162193B NO162193B NO841797A NO841797A NO162193B NO 162193 B NO162193 B NO 162193B NO 841797 A NO841797 A NO 841797A NO 841797 A NO841797 A NO 841797A NO 162193 B NO162193 B NO 162193B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- compound
- glucocorticoids
- formula
- general formula
- determining
- Prior art date
Links
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 title claims abstract description 23
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 title claims abstract description 15
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 7
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 8
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 55
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- -1 cyclic secondary amine Chemical class 0.000 claims description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 5
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims description 4
- 239000012022 methylating agents Substances 0.000 claims description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 3
- 125000004423 acyloxy group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 claims description 2
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 abstract 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 abstract 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 abstract 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 abstract 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 abstract 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 14
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 14
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 6
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 4
- HJUGFYREWKUQJT-UHFFFAOYSA-N tetrabromomethane Chemical group BrC(Br)(Br)Br HJUGFYREWKUQJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- WBJINCZRORDGAQ-UHFFFAOYSA-N formic acid ethyl ester Natural products CCOC=O WBJINCZRORDGAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GKASDNZWUGIAMG-UHFFFAOYSA-N triethyl orthoformate Chemical compound CCOC(OCC)OCC GKASDNZWUGIAMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HZNVUJQVZSTENZ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone Chemical compound ClC1=C(Cl)C(=O)C(C#N)=C(C#N)C1=O HZNVUJQVZSTENZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 2
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- OSVMTWJCGUFAOD-KZQROQTASA-N formestane Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1O OSVMTWJCGUFAOD-KZQROQTASA-N 0.000 description 2
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 2
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 150000002576 ketones Chemical group 0.000 description 2
- 239000002395 mineralocorticoid Substances 0.000 description 2
- 229940037129 plain mineralocorticoids for systemic use Drugs 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 2
- DJPXTHIJILUPOE-VMXHOPILSA-N (8s,9s,10r,13s,14s)-10,13-dimethyl-8,9,11,12,14,15,16,17-octahydrocyclopenta[a]phenanthren-3-one Chemical compound C1=CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CCC[C@@]1(C)CC2 DJPXTHIJILUPOE-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OMFXVFTZEKFJBZ-UHFFFAOYSA-N Corticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 OMFXVFTZEKFJBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000295146 Gallionellaceae Species 0.000 description 1
- 102000003676 Glucocorticoid Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000079 Glucocorticoid Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 238000010934 O-alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010085012 Steroid Receptors Proteins 0.000 description 1
- YVJBCTFVENNIOV-UHFFFAOYSA-M [Br-].CC#C[Mg+] Chemical compound [Br-].CC#C[Mg+] YVJBCTFVENNIOV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N acetyl chloride Chemical compound CC(Cl)=O WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012346 acetyl chloride Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- OMFXVFTZEKFJBZ-HJTSIMOOSA-N corticosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OMFXVFTZEKFJBZ-HJTSIMOOSA-N 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 1
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910001623 magnesium bromide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- NXJCBFBQEVOTOW-UHFFFAOYSA-L palladium(2+);dihydroxide Chemical compound O[Pd]O NXJCBFBQEVOTOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 125000000587 piperidin-1-yl group Chemical group [H]C1([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical class [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000004289 sodium hydrogen sulphite Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 102000005969 steroid hormone receptors Human genes 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
- C07J1/0003—Androstane derivatives
- C07J1/0033—Androstane derivatives substituted in position 17 alfa and 17 beta
- C07J1/004—Androstane derivatives substituted in position 17 alfa and 17 beta the substituent in position 17 alfa being an unsaturated hydrocarbon group
- C07J1/0048—Alkynyl derivatives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
- C07J1/0003—Androstane derivatives
- C07J1/0011—Androstane derivatives substituted in position 17 by a keto group
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/534—Production of labelled immunochemicals with radioactive label
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/743—Steroid hormones
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Denne oppfinnelse angår et radioaktivt steroid, en fremgangsmåte ved dets fremstilling og et middel som, inneholder det radioaktive steroid som en aktiv bestanddel, og som er anvendelig for påvisning in vitro av mottagere for glucocorticoider og for bestemmelse av antall bindingspunkter for glucocorticoidene. Oppfinnelsen angår også anvendelsen av steroidet for dette formål.
Det er fra tidligere kjent at ikke-radioaktivt 1 lfi, 17(3-dihydroxy-6-methyl-l7a-(prop-l-ynyl)-androsta-1,4,6-trien-3-on bindes selektivt til mottagere for glucocorticoider (G. Teutsch, R. Deraedt et al, Steroids, Vol. 38, N 6, sider 651-665, 1981). Andre naturlig forekommende eller syntetiske corticoider som anvendes ved undersøkelser av denne type, binder seg derimot samtidig til andre steroidmottagere og spesielt til mottagere for mineralcorticoider.
Ved bruk av ikke-radioaktivt lip, 17|i-dihydroxy-6-methyll7a-(prop-l-ynyl)-androsta-1,4,6-trien-3-on måtte man likevel ofte - og spesielt når de undersøkte organvev samtidig hadde mottagere for glucocorticoider og mottagere for mineralcorticoider - benytte en serie av kompliserte og tidkrevende metoder.
Det har nu vist seg at et nytt, radioaktivt, tritium-merket steroid oppviser den samme selektive reaktivitet over-for mottagere for glucocorticoider som de analoge ikke-radioaktive forbindelser.
Med oppfinnelsen tilveiebringes det således et nytt, radioaktivt steroid, nemlig lip , 17p-dihydroxy-6-methyl-^H.j-17a-(prop-l-ynyl)-androsta-1,4,6-trien-3-on med formel (I):
hvor symbolet H betegner tritium.
Ved hjelp av den nye radioaktive forbindelse med formel (I) er det blitt meget enklere å påvise tilstedeværelse av mottagere for glucocorticoider i organvev når det samtidig er tilstede mottagere for mineralcorticoider, f.eks. i organvev som hippocampus og andre strukturer i hjernen, nyrene, kolon, hypyfysen og andre perifere vev, fordi man kan benytte de vanlige metoder for bestemmelse av binding.
Det som ikke var mulig med en ikke-radioaktiv forbindelse, f.eks. bestemmelse av antallet bindingssteder for mottagere for glucocorticoider, er nu blitt mulig ved anvendelse av forbindelsen med formel (I).
Oppfinnelsen angår som nevnt også en fremgangsmåte for fremstilling av det radioaktive steroid med formel (I). Denne fremgangsmåte utmerker seg ved at: en forbindelse med den generelle formel (II):
hvor R_ betegner en alkoxygruppe med 1-6 carbonatomer, en acyloxygruppe med 2-12 carbonatomer eller resten av et cyklisk sekundært amin, omsettes med et halogenmethyleringsmiddel for dannelse av en forbindelse med den generelle formel (III):
hvor X betegner et halogenatom,
den erholdte forbindelse reduseres ved innvirkning av tritium i nærvær av en katalysator,
ketonfunksjonen i 3-stillingen i den resulterende forbindelse med den generelle formel (IV):
blokkeres i surt miljø ved hjelp av ét O-alkyleringsmiddel med formel H-CJOR^)^» hvor R^ betegner en alkylgruppe med 1-6 carbonatomer, for dannelse av en forbindelse med den generelle formel (V):
hvor R^ er som ovenfor angitt,
den sistnevnte forbindelse omsettes med et propynyle-ringsmiddel, og
den resulterende forbindelse med den generelle formel
(VI) :
omsettes med et dehydrogeneringsmiddel, hvorved forbindelsen med formel (I) fåes.
Hva angår betydningene av R2 i den ovenstående generelle formel (II) menes med resten av et cyklisk, sekundært amin f.eks. grupper som pyrrolidino, morfolino og piperidino.
Foretrukne utførelsesformer av fremgangsmåten utmerker seg ved de følgende trekk: halogenmethyleringsmidlet er carbontetrabromid, og reaksjonen utføres under inert atmosfære i dioxan i nærvær av pyridin, ved omgivelsenes temperatur og deretter ved reak-sjonsblandingens tilbakeløpstemperatur,
katalysatoren i hvis nærvær tritiumet tillates å inn-virke på forbindelsen, er palladiumhydroxyd, og reaksjonen utføres i dioxan i nærvær av triethylamin,
midlet for O-alkylering av ketonfunksjonen i 3-stillingen i forbindelsen med den generelle formel (IV) er ethylorthoformiat, og reaksjonen utføres under inert atmosfære i surt miljø,
propynyleringsmidlet som omsettes med forbindelse med den generelle formel (V), er propyl-l-yl-magnesiumbromid,
og reaksjonen utføres under tetrahydrofuran,
dehydrogeneringsmidlet som omsettes med forbindelsen med den generelle formel (VI), er diklordicyanokinon, og reaksjonen utføres under inert atmosfære i et aromatisk eller klorert oppløsningsmiddel, såsom benzen eller methylenklorid.
Ved omsetningen av halogenmethyleringsmidlet med en forbindelse med formelen (II) kondenseres dette middel først med steroidet ved romtemperatur, hvoretter det ved oppvarm-ning finner sted en avspaltning av hydrogenklorid fra det in situ dannede molekyl.
Med oppfinnelsen tilveiebringes det også et middel
for påvisning in vitro av mottagere for glucocorticoider og for bestemmelse av antall bindingspunkter for glucocorticoidene. Midlet er karakteristisk ved at det inneholder en forbindelse med den ovenfor angitte formel (I).
Likeledes angår oppfinnelsen anvendelse av forbindelsen med formel (I) for - påvisning in vitro av mottagerne for glucocorticoider og for bestemmelse av antall bindingspunkter for glucocorticoidene.
Forbindelsen med formel (I) undergår ikke metabolisme under arbeidsbetingelser in vitro eller i vev under inkuba-sjonsbetingelser hvorunder f.eks. cortisteron eller cortisol undergår metabolisme.
De benyttede teknikker for påvisning av mottagere for steroider og for bestemmelse av antall bindingssteder, er de teknikker som oftest benyttes på dette område, se:
- Raynaud J.P., Philibert D. et al., J. of Steroid Biochem.,
6 (1975), sider 615 - 622; - Moguilewski et al., J. of Steroid Biochem., 12 (1980), sider 309 - 314.
Under forsøk med forbindelsen med formel (I), dvs. 11|3,17P-dihydroxy-6-methyl- 3 H^- lla- (prop-l-ynyl) -androsta-1,4,6-trien-3-on, har det vist seg at denne forbindelse lett tilfredsstiller alle krav ved påvisning av mottagere for glucocorticoider og for bestemmelse av bindingsstedene. Det er således blitt fastslått følgende: a) Forbindelse (I)gir ikke opphav til noen spesifikk binding til plasmatiske proteiner hos mennesker og dyr, hvilke proteiner vanligvis forurenser ethvert preparat av vevmottagere.
b) Ved 0°C er assosiasjonskonstanten for forbindelsen (I)
9 -1
(K as 10 M ) med hensyn til mottagere for glucocorticoider i rottebrissel-cytasol, bestemt ved opptegning av adsorpsjonen ved hjelp av kull-dextran, omtrent dobbelt så høy som for dexamethason.
c) Forbindelse (I) oppviser høy assosiasjonshastighet (K+^c:10^M ^mn"^) og en lav dissosiasjonshastighet vis-å-vis
mottagere for glucocorticoider i brisselen (t 1/2—16 h) og vis-å-vis mottagere for glucocorticoider i hippocampus (t 1/2^24 h). I disse vev dissosierer forbindelsen i henhold
3 3
til en kurve med én helning, mens H-dexamethason og H-cor-ticosteron i hippocampus-cytasol oppviser en dissosiasjons-kurve med to helninger, hvilket er karakteristisk for en binding på minst to steder for tilbinding av glucocorticoider og mineralcorticoider.
d) Ved 0°C og 15°C danner forbindelsen med formel (I) med brisselens mottagere for glucocorticoider komplekser som er
stabile i minst 24 timer.
Under disse betingelser oppviser forbindelsen med formel (I) intet tap av tritium. Den undergår ikke metabolisme og oppviser bare en svak ikke-spesifikk binding. e) Underkastet inkubering ved 15°C i 24 timer erstatter forbindelsen med formel (I) fullstendig ikke-radioaktivt corti-costeron og ikke-radioaktiv cortisol som er bundet til mottagere for glucocortocoider. Av denne grunn muliggjør forbindelsen bestemmelse av det totale antall bindingssteder for glucocorticoider under forskjellige fysiologiske betingelser.
Det etterfølgende eksempel illustrerer oppfinnelsen.
Eksempel
110,17|3-dihydroxy-6-methyl- 3 E^- lla- (prop-l-ynyl) -androsta-1,4,6-trien-3-on.
Trinn A 110,hydroxy-6-dibrommethylen-androsta-4-en-3,17-dion.
Man fremstiller en reaksjonsblanding av 3,7 g 3-ethoxy-113-hydroxy-androsta-3,5-dien-17-on, 20 ml dioxan, 1 ml pyridin og 4 g carbontetrabromid og omrører blandingen ved romtemperatur i ca. 24 timer under inert atmosfære, hvoretter utfelningen fraskilles og vaskes flere ganger med dioxan og de organiske filtrater slåes sammen og kokes med tilbake-løpskjøling i ca. 4 timer. Etter avkjøling av oppløsningen tilsettes 50 ml 2N saltsyre, hvoretter blandingen omrøres i ca. 10 minutter. Det ekstraheres med ethylacetat, og de organiske faser vaskes suksessivt med vann og natriumkloridmettet vann, hvoretter det tørkes og inndampes til tørrhet. Residuet tas opp i ethylacetat, og den ønskede forbindelse tillates å krystallisere ved -20°C. Forbindelsen renses ved omkrystalli-sering fra ethylacetat, hvorved det fåes 0,6 g av den ønskede forbindelse. Smeltepunkt 256°C. UV-spektret (EtOH). maks.- 252 nm infl. - 284 nm.
Renheten kan bestemmes ved tynnskiktkromatografering
på silika med eluering med en blanding av cyclohexan og ethylacetat (1:1), hvorved det fåes Rf = 0,2.
Av utgangsmaterialene med den generelle formel (II)
er lip-hydroxy-3-ethoxy-androsta-3,5-dien-17-on beskrevet i japansk patentsøknad nr. 9577/71.
Andre forbindelser svarende til denne formel kan frem-stilles etter i og for seg kjente fremgangsmåter.
Trinn B 113-hydroxy-6-methyl- 3H.j-androsta-4-en- 3 ,17-dion.
I flytende nitrogen kjøles en reaksjonsblanding bestående av 80 mg av den dibromerte forbindelse fremstilt i det foregående trinn, 2 ml dioxan, 20 mg 2% palladiumbehand-let carbon på talkum og 120 pl triethylamin.
Det innføres i vakuum 15,5 ml tritium med en spesifikk aktivitet på 58 Ci/mmol. Reaksjonsblandingen tillates å komme tilbake til romtemperatur, hvoretter den oppvarmes henimot 40°C og omrøres under tritium inntil absorpsjonen er avslut-tet. Overskuddet av tritium gjenvinnes, hvoretter det foretas filtrering og tilsetning av 1 ml 2N HC1. Blandingen tillates å stå i ro i ca. 1 time ved romtemperatur, hvoretter det foretas ekstråksjon med ethylacetat, vaskning med vann, tørring og inndampning til tørrhet. Det erholdes 60 mg uren forbindelse som anvendes i denne tilstand i det neste trinn. UV-spektrum (EtOH) maks. 240 nm.
Forbindelsens renhet kan bestemmes ved tynnskiktkromatografering på silika med eluering med en blanding av cyclohexan og ethylacetat (1:1), hvorved det fåes Rf = 0,17.
Trinn C 3-ethoxy-ll|3-hydroxy-6-methyl- 3H.j-androsta-3,5-dien-17-on .
Under inert atmosfære og under omrøring settes den tritierte forbindelse erholdt i det foregående trinn til 120 ml ethylorthoformiat og 20 pl ethylorthoformiat inneholdende 1% acetylklorid, hvoretter det tilsettes 4 00 ul ethanol. Om-røringen opprettholdes ved romtemperatur i ca. 10 minutter, hvoretter det tilsettes 100 pl triethylamin, og reaksjonsblandingen deretter inndampes til tørrhet under redusert trykk. Det fåes 59 mg uren forbindelse som anvendes i den erholdte tilstand i det neste trinn.
Forbindelsens renhet kan bestemmes ved tynnskiktkromatografering på silika med eluering med en blanding av cyclohexan og ethylacetat (1:1), hvorved det fåes Rf = 0,5.
Trinn D 3-ethoxy-113,173_dihydroxy-6-methyl- 3H^-^a-(prop-l-ynyl) -androsta-3,5-dien.
Den i det foregående trinn erholdte forbindelse tilsettes under omrøring og under inert atmosfære til 100 ul tetrahydrofuran, hvoretter det tilsettes 2 ml av en oppløs-ning av IM propyn-l-yl-magnesiumbromid i tetrahydrofuran. Reaksjonsblandingen omrøres ved romtemperatur i ca. 30 minutter, hvoretter det tilsettes 5 ml av en 10%-ig vandig oppløsning av ammoniumklorid. Det foretas ekstraksjon med ethylacetat, hvoretter ekstrakten vaskes med vann, tørres og inndampes til tørrhet. Det erholdes 60 mg forbindelse med en aktivitet på 7 Ci. Forbindelsen anvendes i denne form i det neste trinn.
Forbindelsens renhet kan bestemmes ved tynnskiktkromatografering på silika ved eluering med en blanding av cyclohexan/ethylacetat (1:1), hvorved det fåes Rf = 0,4.
Trinn E 113,173-dihydroxy-6-methyl- 3H^-^ct-(prop-l-ynyl) -
androsta-1,4,6 -trien-3-on.
Til den i det foregående trinn erholdte forbindelse
i 0,5 ml benzen tilsettes i løpet av 15 minutter, under om-røring og under inert atmosfære, en oppløsning av 90 mg diklordicyanokinon. Omrøringen fortsettes i ca. 30 minutter, hvoretter det tilsettes 0,5 ml aceton, 100 ul natriumbisul-fitt (en vandig oppløsning med d = 1,32) og 1 ml av en 10%-ig og vandig oppløsning av natriumbicarbonat. Blandingen ekstraheres med ethylacetat, og ekstrakten vaskes med en 10%-ig vandig oppløsning av natriumbicarbonat. Etter rensning ved høytrykksvæskekromatografering på silika, med eluering med en blanding av kloroform og methanol inneholdende 5% vann (99:1) fåes 50,3 mg av den ønskede forbindelse, hvis spesifikke aktivitet er 37 Ci/mmol.
Ved tynnskiktkromatografering på silika med eluering med en blanding av cyclohexan og ethylacetat (1:1) fåes Rf = 0,25.
Claims (4)
1. Radioaktivt steroid,
karakterisert ved at det er 11(3,17(3-dihyd-roxy-6-methyl-<3>H3-17cx-(prop-l-ynyl)-androsta-1,4,6-trien-3-on med formelen:
hvor symbolet <3>H betegner tritium.
2. Fremgangsmåte ved fremstilling av det radioaktive steroid ifølge krav 1,
karakterisert ved at: en forbindelse med den generelle formel (II):
hvor R2 betegner en alkoxygruppe med 1-6 carbonatomer, en acyloxygruppe med 2-12 carbonatomer eller resten av et cyklisk sekundært amin, omsettes med et halogenmethyleringsmiddel for dannelse av en forbindelse med den generelle formel (III):
hvor X betegner et halogenatom,
den erholdte forbindelse reduseres ved innvirkning av tritium i nærvær av en katalysator,
ketonfunksjonen i 3-stillingen i den resulterende forbindelse med den generelle formel (IV):
blokkeres i surt miljø ved hjelp av et O-alkyleringsmiddel med formel H-CfOR^)^, hvor R^ betegner en alkylgruppe med 1-6 carbonatomer, for dannelse av en forbindelse med den generelle formel (V):
hvor R^ er som ovenfor angitt,
den sistnevnte forbindelse omsettes med et propynyle-ringsmiddel, og
den resulterende forbindelse med den generelle formel (VI) :
omsettes med et dehydrogeneringsmiddel, hvorved forbindelsen med formel (I) fåes.
3. Middel for påvisning in vitro av mottagere for glucocorticoider og for bestemmelse av antall bindingspunkter for glucocorticoidene,
karakterisert ved at det inneholder forbindelsen ifølge krav 1.
4. Anvendelse av forbindelsen ifølge krav 1 for påvisning in vitro av mottagere for glucocorticoider og for bestemmelse av antall bindingspunkter for glucocorticoidene.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8309811A FR2547587B1 (fr) | 1983-06-14 | 1983-06-14 | Steroides radioactifs, leur procede de preparation, leur application a la mise en evidence des recepteurs de glucocorticoides et au dosage du nombre de sites de fixation |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO841797L NO841797L (no) | 1984-12-17 |
| NO162193B true NO162193B (no) | 1989-08-14 |
| NO162193C NO162193C (no) | 1989-11-22 |
Family
ID=9289758
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO841797A NO162193C (no) | 1983-06-14 | 1984-05-04 | Radioaktiv steroid, fremgangsmaate ved dets fremst., middel for paavisning in vitro av mottagere for glucocorticoiderog for bestemmelse av antall bindingspunkter for glucocorticoidene og anvendelse av steroidet for dette formaal |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4664850A (no) |
| EP (1) | EP0128839B1 (no) |
| JP (1) | JPS6034987A (no) |
| AT (1) | ATE43132T1 (no) |
| CA (2) | CA1222743A (no) |
| DE (1) | DE3478225D1 (no) |
| FI (1) | FI83784C (no) |
| FR (1) | FR2547587B1 (no) |
| NO (1) | NO162193C (no) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2592047B1 (fr) * | 1985-12-19 | 1988-03-04 | Roussel Uclaf | Complexes organometalliques de produits steroides ayant une affinite pour les recepteurs progestogene et gluco-corticoide et leur application au dosage des recepteurs hormonaux |
| AU4093799A (en) | 1998-05-22 | 1999-12-13 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Bifunctional molecules and therapies based thereon |
| CA2789262C (en) | 2005-04-28 | 2016-10-04 | Proteus Digital Health, Inc. | Pharma-informatics system |
| EP1945240B1 (en) | 2005-09-16 | 2016-12-28 | Raptor Pharmaceutical Inc | Compositions comprising receptor-associated protein (rap) variants specific for cr-containing proteins and uses thereof |
| TR201908314T4 (tr) | 2009-02-20 | 2019-06-21 | 2 Bbb Medicines B V | Glutatyon bazlı ilaç dağıtım sistemi. |
| KR101909711B1 (ko) | 2009-05-06 | 2018-12-19 | 라보라토리 스킨 케어, 인크. | 활성제-칼슘 포스페이트 입자 복합체를 포함하는 피부 전달 조성물 및 이들을 이용하는 방법 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1465484A (fr) * | 1965-10-27 | 1967-01-13 | Composés stéroïdes du type cétonique | |
| FR2398077A1 (fr) * | 1977-07-19 | 1979-02-16 | Roussel Uclaf | Steroides marques au tritium, leur procede de preparation et leur application pour le dosage et la localisation des recepteurs tissulaires hormonaux des steroides |
| FR2398076A1 (fr) * | 1977-07-19 | 1979-02-16 | Roussel Uclaf | Steroides marques au tritium, leur procede de preparation et leur application pour le dosage et la localisation des recepteurs tissulaires hormonaux des steroides |
| FR2430952A1 (fr) * | 1978-07-13 | 1980-02-08 | Roussel Uclaf | Nouveaux derives acetyleniques de l'androst 4-ene, leur procede de preparation et leur application comme medicament |
-
1983
- 1983-06-14 FR FR8309811A patent/FR2547587B1/fr not_active Expired
-
1984
- 1984-05-04 NO NO841797A patent/NO162193C/no unknown
- 1984-06-13 EP EP84401202A patent/EP0128839B1/fr not_active Expired
- 1984-06-13 DE DE8484401202T patent/DE3478225D1/de not_active Expired
- 1984-06-13 AT AT84401202T patent/ATE43132T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-06-13 CA CA000456494A patent/CA1222743A/fr not_active Expired
- 1984-06-13 FI FI842397A patent/FI83784C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-06-14 JP JP59120899A patent/JPS6034987A/ja active Granted
- 1984-06-14 US US06/620,457 patent/US4664850A/en not_active Expired - Lifetime
-
1985
- 1985-12-19 US US06/797,140 patent/US4865767A/en not_active Expired - Fee Related
-
1987
- 1987-02-17 CA CA000529937A patent/CA1242696A/fr not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI83784B (fi) | 1991-05-15 |
| JPH0460479B2 (no) | 1992-09-28 |
| EP0128839B1 (fr) | 1989-05-17 |
| FI83784C (fi) | 1991-08-26 |
| CA1222743A (fr) | 1987-06-09 |
| EP0128839A3 (en) | 1985-09-18 |
| JPS6034987A (ja) | 1985-02-22 |
| US4664850A (en) | 1987-05-12 |
| FI842397L (fi) | 1984-12-15 |
| NO162193C (no) | 1989-11-22 |
| FR2547587B1 (fr) | 1985-10-25 |
| FI842397A0 (fi) | 1984-06-13 |
| CA1242696A (fr) | 1988-10-04 |
| ATE43132T1 (de) | 1989-06-15 |
| NO841797L (no) | 1984-12-17 |
| DE3478225D1 (en) | 1989-06-22 |
| US4865767A (en) | 1989-09-12 |
| EP0128839A2 (fr) | 1984-12-19 |
| FR2547587A1 (fr) | 1984-12-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Dehennin et al. | Simple methods for the synthesis of twenty different, highly enriched deuterium labelled steroids, suitable as internal standards for isotope dilution mass spectrometry | |
| SU1340593A3 (ru) | Способ получени производных @ @ 19-норстероидов | |
| CA1266466A (fr) | Procede de preparation de steroides substitues en position 10 | |
| BG61370B2 (bg) | Заместени андроста-1,4-диен-3,17-диони и метод за тяхното получаване | |
| HU211080B (en) | Process for producing 9(11)-dehydro steroid derivatives | |
| FR2618783A1 (fr) | Nouveaux 17-aryle steroides, leurs procedes et des intermediaires de preparation comme medicaments et les compositions pharmaceutiques les renfermant | |
| Gaši et al. | New D-modified androstane derivatives as aromatase inhibitors☆ | |
| NO156694B (no) | Analogifremgangsmaate ved fremstilling av terapeutisk aktive 10-(1,2-propadienyl)-steroider. | |
| NO162193B (no) | Radioaktiv steroidte ved dets fremst., middel for p visning in vitro av mottagere for glucocg for bestemmelse av antall bindingspunkter for glucocorticoidene og anvendel | |
| US2768189A (en) | Method of producing alpha-brominated keto steroid compounds | |
| EHRENSTEIN et al. | Investigations on Steroids. XXX. New Transformation Products of Strophanthidin: 19-Hydroxytestosterone, 19-Hydroxy-1-dehydrotestosterone Diacetate and Estradiol-17β1-3 | |
| HU182158B (en) | Process for preparing 17-/hydroxy-acetyl/-steroid derivatives | |
| Wintersteiner et al. | Stereochemical studies on 6, 7-substituted derivatives of estra-3, 17β-diol | |
| JP2008275425A (ja) | ステロイドの高感度測定法 | |
| US4102907A (en) | Desulfinylation process for preparing androsta-4,9(11)-diene-3,17-dione | |
| Engel et al. | Favorskii rearrangements of. alpha.-halogenated acetylcycloalkanes. 4. Stereochemistry of cyclopropanonic rearrangements and the influence of steric factors on the competing formation of. alpha.-hydroxy ketones | |
| NO162194B (no) | Radioaktivt oestradienderivat, fremgm ved dets fremst, middel for radioimmunovisn og best in vitro av ikke-r adioaktivt 17beta-hydroksy-11beta-(4-dimethylaminofenyl)-17beta-(prop-1-ynyl)-oestra-4,9-dien-3-on og dets metab .. | |
| US3773758A (en) | 7alpha-cyano-17-hydroxy-3-oxo-17alpha-pregn-4-ene-21-carboxylic acid ypsilon-lactone and related compounds | |
| JPS6360035B2 (no) | ||
| US3272801A (en) | Steroidal spiro-oxazolidinones | |
| US3133913A (en) | 17alpha-methyl steroids and process to make same | |
| Mukawa et al. | A New Steroid with an Unnatural Configuration: 8α, 14β-Progesterone | |
| Sondheimer et al. | Steroidal Sapogenins. XXXIII. 1 Aromatization Experiments in the Diosgenin Series | |
| Szpilfogel et al. | Dehydration of 17α‐hydroxy‐20‐ketopregnanes | |
| Rothman et al. | Steroidal Sapogenins. XLVIII. Four Routes to Cortisone Acetate from Gentrogenin Acetate2a, b |