NO317112B1 - En fremgangsmate for fremstilling av en virusaktivert fraksjon inneholdende faktor VIII ved hjelp av kromatografiske metoder - Google Patents
En fremgangsmate for fremstilling av en virusaktivert fraksjon inneholdende faktor VIII ved hjelp av kromatografiske metoder Download PDFInfo
- Publication number
- NO317112B1 NO317112B1 NO19961816A NO961816A NO317112B1 NO 317112 B1 NO317112 B1 NO 317112B1 NO 19961816 A NO19961816 A NO 19961816A NO 961816 A NO961816 A NO 961816A NO 317112 B1 NO317112 B1 NO 317112B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- factor viii
- exhibits
- membrane
- virus
- takes place
- Prior art date
Links
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 title claims abstract description 39
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 title claims abstract description 39
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 title claims abstract description 39
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 11
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 28
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000011140 membrane chromatography Methods 0.000 claims abstract description 10
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 4
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 30
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 16
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 8
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 8
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims description 7
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 5
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 4
- -1 poly(glycidyl methacrylates) Polymers 0.000 claims description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 3
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 claims description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims 1
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 8
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 5
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical group CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N glucosamine group Chemical group OC1[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 238000007445 Chromatographic isolation Methods 0.000 description 1
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 1
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 1
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 125000006165 cyclic alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 150000002734 metacrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920002454 poly(glycidyl methacrylate) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 238000004094 preconcentration Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 150000003856 quaternary ammonium compounds Chemical group 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-N sulfonic acid Chemical group OS(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- A61K38/37—Factors VIII
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Oppfinnelsen angår en fremgangsmåte for fremstilling av en virusinaktivert fraksjon inneholdende faktor VIII, ved hjelp av kromatografiske metoder.
Faktor VIII er et livsviktig stoff som spiller en betydelig rolle ved blodkoaguleringen. Forstyrrelser av blodkoaguleringen lar seg således behandle ved administrasjon av faktor VIII. Det er derfor et stort behov for administrerbare faktor VIIl-preparater. Det har ikke manglet på forsøk på isolering av faktor VIII i sterkt anriket form fra naturlige kilder. Således er det allerede kjent kromatografiske metoder for rensing av faktor VIII fra kryopresipitater. Sistnevnte er en fraksjon som kan oppnås ved kjølebehandling av plasma. EP 367 840 B1 vedrører en kromatografisk fremgangsmåte for isolering av faktor VIII fra blodplasma uten forutgående kryopresipitering. Fraksjonen som inneholder faktor VIII separeres herunder ved en kromatografisk separasjon på et hydrofilt kromatografimateriale, som er modifisert med ionebyttergrupper. EP 0 238 701 vedrører en fremgangsmåte for fremstilling av en høyrenset, infeksiøs anti-hemofilifaktor, hvor de forbehandlede fraksjonene er et kryopresipitat som ved etanolfelling er befridd for fibrinogen, globulin, albuminer og andre forstyrrende bestanddeler. I den europeiske patentsøknad EP 0 343 275 beskrives en kromatografisk separasjon med ionebyttere etter virusinaktivering av kryopresipitatfraksjonen. EP 0 173 242 A beskriver en fremgangsmåte for kromatografisk isolering av faktor VII l-preparater på ionebyttermaterialer som utelukkende er basert på karbohydrater. Den anvendte karbohydratmatriks er modifisert med DEAE-grupper. Spesielt beskrives DEAE-Sepharose samt DEAE-cellulose, som egnet. I GB-A-1.178.958 beskrives en rensing av faktor VIII med ECTEOLA-cellulosesøyler. Den modifiserte cellulose inneholder basiske substituenter som er innført ved omsetning med epiklorhydrin og trietanolamin. Teknikkens stand som beskrevet ovenfor, benytter enten kromatografisk separering i form av satsvis teknikk eller søylekromatografi. Ved hjelp av disse fremgangsmåter oppnås riktignok ganske gode resultater, men det er både av økonomiske og etiske grunner ønskelig å øke utbyttet av den biologisk verdifulle faktor VIII.
EP-A-0 286 323 omhandler en fremgangsmåte for rensing av polypeptider med immobiliserte antistoffer. Videre utføres ytterligere rensetrinn med anionbytter-modifisert cellulosemembran. Faktor VIII lar seg rense ved hjelp av den der beskrevne fremgangsmåten.
Det tekniske problem som har ligget til grunn for oppfinnelsen består altså i å frembringe en fremgangsmåte som med bakgrunn i teknikkens stand, muliggjør en forbedret fremstilling av faktor VIII med hensyn til utbytte og biologisk aktivitet.
Problemet løses ved hjelp av en fremgangsmåte for fremstilling av en virusinaktivert fraksjon inneholdende faktor VIII, ved hjelp av kromatografiske metoder, kjennetegnet ved at idet det med utgangspunkt i kryopresipitat etter oppløsning derav eller blodplasma, eventuelt etterfulgt av en behandling med aluminiumhydroksyd, foretas en virusinaktivering gjennom behandling av fraksjonen med et di- eller tri-alkylfosfat og et ikke-ionisk tensid, fulgt av minst ett separasjonstrinn ved bruk av membrankromatografi på membraner eller kompaktskiver av porøse hydrofile polymerer poly(glycidylmetakrylater) eller hydrofilisert polystyren.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen lar seg også gjennomføre med kommersielt tilgjengelig kryopresipitat eller blodplasma. For å oppnå en forkonsentrering av faktor VIII, behandles det opptinte kryopresipitat fortrinnsvis med aluminiumhydroksyd for videre forutgående rensing av prøven.
Før den egentlige kromatografiske rensing på materialer som er anordnet i eller på membraner, foretas en virusinaktivering. Virusinaktiveringen skjer herunder ifølge metoden som er beskrevet i EP 131 740 A1 ved behandling med biokompatible organiske løsningsmidler (detergenter), Triton® X-100/TNBP, fortrinnsvis Tween®/TNBP (tri-n-butylfosfat). Det oppnås også gode resultater med natriumcholat/TNBP. Fortrinnsvis anvendes detergentmengder på opp til 15vekt%.
Det kromatografiske separasjonstrinn for rensing av faktor VIII i prøven, kan skje på basismaterialer, spesielt anionbyttere, som er modifisert med ionebyttergrupper, eller på materialer som er modifisert med immunaffinitetsligander. Avgjørende er herunder at de nevnte materialer er anordnet i membraner. Membraner <p>g kompakte skiver av porøse potyglycidylmetakrylater i likhet med hydrofilisert polystyren, er egnet.
En membran som er egnet for separeringen består av kompakte skiver eller polymere bærere. Basismaterialene for membranene eller skivene er forsynt med tilsvarende anionbyttergrupper eller immunaffinitetsligander. Som ionebyttergrupper er det særlig tale om anionbyttergrupper som kvartære aminer eller dietylaminoetylgrupper. Som kationbyttere kommer prinsipielt svake og sterkt sure, kationbyttere bestående av materialer som er modifisert med sulfonsyre- eller fosforsyre-grupper, i betraktning.
lonebyttergruppene kan være bundet til basismaterialets fibere med eller uten en såkalt spacer. Materialer forsynt med spacer betegnes også tentakel-materialer. I DE 42 04 694 er det nevnt tilsvarende spacere og ligander. Som spacer kan eksempelvis også benyttes en glukosaminrest. Også til membranene av porøst polyglycidylmetakrylat eller de øvrige nevnte materialer, kan det være bundet anionbyttergrupper som DEAE eller kvartære aminer. Bindingen av anionbyttergruppen skjer herunder enten direkte til materialet som danner membranen, eller via en spacer, f.eks. en glukosaminrest.
I en annen utførelsesform av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen, benyttes affinitetsmembrankromatografi med immobiliserte substanser som oppviser en høy affinitet for faktor VIII.
Substansene med affinitet for faktor VIII immobiliseres på bæreren ved hjelp av kjemisk virksomme grupper. Fortrinnsvis vil den aktive gruppe ikke angripe bærermaterialet direkte, men i enden av en spacer. Immobiliseringen av substansene for faktor VIII skjer ved binding til aktive grupper som tosyl, tresyl, hydrazid og andre. Tilsvarende fremgangsmåter er kjent fra T.M. Phillips "Affinity chromatography" i "Chromatography" (E. Heftmann, red.) 5.utg. Elsevier, Amsterdam, 1992.
I en annen foretrukket utførelsesform anvendes materialer til separasjon av faktor VIII, som kan sikre en hydrofob vekselvirkning. Som hydrofobe materialer anvendes acykliske og/eller cykliske alkylkjeder, som f.eks. Cr til Cis-alkylkjeder så vel som aromatiske substanser. Aktuelle materialer som kan bevirke hydrofob vekselvirkning, er fortrinnsvis også slike som har gradert hydrofobisitet. Hydrofobisiteten kan graderes ved innføring av polare grupper, som polar-protiske eller polar-aprotiske grupper, som hydroksy-, amino- eller cyano-grupper. Fortrinnsvis tilpasses denne de respektive separasjonsbetingelsene.
Virusinaktiveringen kan også skje gjennom en varmebehandling. I den forbindelse underkastes den faktor Vlll-holdige eluerte prøve etter en første membrankromatografering, fortrinnsvis et pasteuriseringstrinn. En tilsvarende fremgangsmåte er foreslått i DE-A-43 18 435. Herunder bringes faktor VIII-anrikede fraksjoner, i nærvær av stabilisatorer, i kontakt med di- eller tri-alkyl-fosfater og eventuelt med fuktemidler og behandles samtidig eller suksessivt ved temperaturer i området fra 55°C til 67°C i 5 til 30 timer. Det kan være fordelaktig å kombinere de to virusinaktiveirngsmetodene, detergent- og varmebehandlingen.
For å fjerne kjemikalier benyttet ved pasteuriseringstrinnet, kan det også legges inn en ytterligere membrankromatografering. Fortrinnsvis skjer separeringen av de tilsatte stabilisatorer med en membran som er modifisert med DEAE- eller kvartære ammonium-forbindelser som er anordnet på overflaten av det kromatografiske bærermaterialet via en spacer. Det er likeledes mulig å anordne de tilsvarende ligander på bærermaterialets overflate uten spacer. Stabilisatorene retarderes ikke av dette anionbyttermaterialet under de valgte betingelser, mens faktor VIII adsorberes på kromatografimaterialet.
Deretter elueres faktor VIII med et vandig løsningsmiddelsystem med trinnvis tiltagende saltkonsentrasjoner.
Den således oppnådde faktor VIIl-holdige fraksjon konsentreres, tappes og underkastes eventuelt lyofilisering, ved hjelp av konvensjonelle metoder.
Fortrinnsvis påsettes faktor VIII i det første membrankromatografiske separasjonstrinn som en løsning av lav ionestyrke. Fortrinnsvis oppviser det vandige system en ionestyrke som tilsvarer en 0 til 150 mM natriumkloridløsning. Ved denne ionestyrke er faktor VIII fremdeles adsorbert til det kromatografiske materiale, mens derimot svakere bindende forurensninger kan utvaskes med vandige systemer av samme ionestyrke.
En rensing av det adsorberte materialet kan i henhold til en annen utførelsesform av fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen, skje med et vandig system med en ionestyrke som tilsvarer en 200 til 400 mM natriumkloridløsning. Desorbsjonen av faktor VIM og eluering av denne fraksjon skjer deretter med et vandig system med en ionestyrke som tilsvarer 500 til 1500 mM natriumklorid-løsning. Herunder holdes pH-verdien i området fra 4 til 9. Foretas en kation-bytterkromatografi, skjer dette fortrinnsvis ved en pH-verdi <6, mens anionbytter-kromatografien heller foretas ved høyere pH-verdier på mer enn 6.
Utføres rensingen av faktor VIII ved immunaffinitetsmembrankromatografi skjer elueringen til forskjell fra ovennevnte metoder, med anionbyttermaterialer, med chaotrope reagenser eller høykonsentrerte saltløsninger. Elueringen skjer fortrinnsvis med konsentrasjoner av chaotrope reagenser eller salter som er tilstrekkelige til å løse bindingen mellom substansen med høy affinitet for faktor VIII og selve faktor VIII. Konsentrasjonen av de nevnte stoffer i de respektive elueringssystemer avhenger herunder av affinitetsstyrken til faktor VIII og den tilsvarende bindende komponent. Derved kan det skje en eluering med vandige løsninger av lavere denaturerende styrke. Fortrinnsvis benyttes vandige urealøsninger med en konsentrasjon på 1 til 6M, spesielt 2 til 4M, urea eller tilsvarende høyt konsentrerte saltløsninger, for eluering av faktor VIII fra immunaffinitetsmembranen.
Ved hydrofob interaksjonskromatografi påsettes prøven i en vandig løsning av meget høy ionestyrke, som eksempelvis høykonsentrert ammoniumsulfat (opp til en konsentrasjon på 4M) eller natriumklorid (opp til en konsentrasjon på 5M). Elueringen foretas fortrinnsvis trinnvis eller kontinuerlig med saltløsninger av lavere ionestyrke. Som løsninger med lavere ionestyrke for eluering av prøvene ved den hydrofobe interaksjonsmembrankromatografering, kan det også benyttes en vandig løsning av organiske løsningsmidler, spesielt en fortynnet alkoholisk løsning.
Fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen sikrer på en overraskende måte en hurtig og ukomplisert rensing av faktor VIII som samtidig fører til høy renhet og høyt utbytte. Dessuten er den spesifikke aktivitet av den derved oppnådde faktor VIII ganske høy, hvilket lar seg forklare gjennom en liten grad av denaturering av den virksomme faktor.
i
Claims (11)
1. Fremgangsmåte for fremstilling av en virusinaktivert fraksjon inneholdende faktor VIII, ved hjelp av kromatografiske metoder, karakterisert ved at idet det med utgangspunkt i kryopresipitat etter oppløsning derav eller blodplasma, eventuelt etterfulgt av en behandling med aluminiumhydroksyd, foretas en virusinaktivering gjennom behandling av fraksjonen med et di- eller tri-alkylfosfat og et ikke-ionisk tensid, fulgt av minst ett separasjonstrinn ved bruk av membrankromatografi på membraner eller kompaktskiver av porøse hydrofiie polymerer poly(glycidylmetakrylater) eller hydrofilisert polystyren.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor separasjonstrinnet skjer på et ionebyttermateriale, spesielt anionbyttermateriale, som er anordnet i eller på en membran.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 og/eller 2, hvor virusinaktiveringen skjer gjennom et pasteuriseirngstrinn, eventuelt etterfulgt av et ytterligere separasjonstrinn, ved hjelp av membrankromatografi.
4. Fremgangsmåte ifølge minst ett av kravene 1 til 3, hvor membrankromatograferingen skjer på et materiale som oppviser høy affinitet for faktor VIII.
5. Fremgangsmåte ifølge minst ett av kravene 1 til 4, hvor materialet som oppviser den høye affinitet for faktor VIII, er modifisert med ligander med høy og/elter lav molekylvekt.
6. Fremgangsmåte ifølge minst ett av kravene 4 til 5, hvor det modifiserte materialet som oppviser høy affinitet for faktor VIII, oppviser immobiliserte ligander med høy affinitet for faktor VIII.
7. Fremgangsmåte ifølge krav 1 til 3, hvor det kromatografiske materialet muliggjør en hydrofob vekselvirkning med den faktor VIII som skal fraskilles, eller oppviser tilsvarende ligander som formidler en hydrofob vekselvirkning.
8. Fremgangsmåte ifølge minst ett av kravene 1 til 3, hvor prøven som skal renses, påsettes membranen inneholdende ionebyttermaterialet i et vandig system med lav ionestyrke tilsvarende 0 til 150 mM natriumklorid, eventuelt vaskes med et vandig system av høyere ionestyrke tilsvarende 200 til 400 mM natriumklorid-løsning og deretter elueres med et vandig system av høy ionestyrke tilsvarende 500 til 1500 mM natriumkloridløsning, mens pH-verdien opprettholdes på 4 til 9.
9. Fremgangsmåte ifølge minst ett av kravene 1, 3 til 7, hvor prøven som skal renses, påsettes som en løsning av meget høy ionestyrke på en membran som på overflaten oppviser hydrofobe ligander og elueres med løsningsmiddelsystemer av lavere ionestyrker.
10. Fremgangsmåte ifølge minst ett av kravene 1 til 9, hvor den eluerte fraksjon som inneholder faktor VIII, konsentreres, fylles i passende beholdere og/eller lyofiliseres.
11. Fremgangsmåte ifølge minst ett av kravene 1 til 10, hvor virusinaktiveringen skjer ved behandling med opp til 15 vekt% detergent.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4337573A DE4337573C1 (de) | 1993-11-04 | 1993-11-04 | Verfahren zur Herstellung einer virusinaktivierten Faktor VIII enthaltenden Fraktion mittels chromatographischer Methoden |
| PCT/EP1994/003258 WO1995012609A1 (de) | 1993-11-04 | 1994-09-30 | Verfahren zur herstellung einer virusinaktivierten faktor viii enthaltenden fraktion mittels chromatographischer methoden |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO961816D0 NO961816D0 (no) | 1996-05-03 |
| NO961816L NO961816L (no) | 1996-05-03 |
| NO317112B1 true NO317112B1 (no) | 2004-08-16 |
Family
ID=6501733
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19961816A NO317112B1 (no) | 1993-11-04 | 1996-05-03 | En fremgangsmate for fremstilling av en virusaktivert fraksjon inneholdende faktor VIII ved hjelp av kromatografiske metoder |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0726907B1 (no) |
| JP (1) | JP3739788B2 (no) |
| KR (1) | KR960705841A (no) |
| CN (1) | CN1109045C (no) |
| AT (1) | ATE228533T1 (no) |
| AU (1) | AU687451B2 (no) |
| CA (1) | CA2175670C (no) |
| CZ (1) | CZ290186B6 (no) |
| DE (2) | DE4337573C1 (no) |
| ES (1) | ES2182846T3 (no) |
| FI (1) | FI116569B (no) |
| HU (1) | HU222087B1 (no) |
| IL (1) | IL111263A (no) |
| MY (1) | MY113294A (no) |
| NO (1) | NO317112B1 (no) |
| PL (1) | PL181725B1 (no) |
| RU (1) | RU2148411C1 (no) |
| SK (1) | SK284215B6 (no) |
| UA (1) | UA43855C2 (no) |
| WO (1) | WO1995012609A1 (no) |
| ZA (1) | ZA948667B (no) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19618851C1 (de) * | 1996-05-10 | 1997-07-24 | Octapharma Ag | Verfahren zur Eignungsprüfung von Faktor VIII-haltigen Proteinfraktionen |
| DE59702207D1 (de) * | 1996-03-08 | 2000-09-21 | Octapharma Ag Lachen | Verfahren zur eignungsprüfung von faktor viii-haltigen proteinfraktionen |
| ES2137878B1 (es) * | 1997-12-01 | 2000-10-01 | Grifols Grupo Sa | Procedimiento de obtencion de un plasma humano atenuado de virus para uso terapeutico. |
| RU2253475C1 (ru) * | 2004-02-02 | 2005-06-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Гемоцентр" | Способ получения препарата фактора viii |
| RU2324495C1 (ru) * | 2006-08-31 | 2008-05-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ получения препарата фактора свертывания viii крови человека |
| EP2300497B1 (en) * | 2008-06-24 | 2012-08-08 | Octapharma AG | A process of purifying coagulation factor viii |
| AU2011343813B2 (en) | 2010-12-15 | 2015-05-21 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Eluate collection using conductivity gradient |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4540573A (en) * | 1983-07-14 | 1985-09-10 | New York Blood Center, Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| DE3432083A1 (de) * | 1984-08-31 | 1986-03-06 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Pasteurisierte, isoagglutininfreie faktor viii-praeparation und verfahren zu ihrer herstellung |
| US5043428A (en) * | 1984-08-31 | 1991-08-27 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Pasteurized, isoagglutinin-free factor VIII preparation and a process for its production |
| JPS62191042A (ja) * | 1986-02-17 | 1987-08-21 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | 血液凝固第８因子吸着体およびそれを用いた血液凝固第８因子の精製法 |
| CA1339946C (en) * | 1987-03-31 | 1998-07-07 | Michael J. Griffith | Ultrapurification process for polypeptides |
| US4774323A (en) * | 1987-06-29 | 1988-09-27 | Rorer Pharmaceutical Corporation | Purification of von Willebrand Factor solutions using gel permeation chromatography |
| US4795806A (en) * | 1987-07-16 | 1989-01-03 | Miles Laboratories, Inc. | Phospholipid affinity purification of Factor VIII:C |
| CA2001720C (en) * | 1988-10-31 | 2001-10-02 | Randal A. Goffe | Membrane affinity apparatus and purification methods related thereto |
| EP0367840B1 (de) * | 1988-11-05 | 1993-02-03 | Octapharma AG | Verfahren zur Herstellung eines hochreinen, nicht infektiösen Antihämophiliefaktors mittels Chromatographie |
| CH678155A5 (no) * | 1989-08-09 | 1991-08-15 | Fischer Ag Georg | |
| AT399818B (de) * | 1992-04-24 | 1995-07-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer hochgereinigten virussicheren faktor viii-präparation |
-
1993
- 1993-11-04 DE DE4337573A patent/DE4337573C1/de not_active Revoked
-
1994
- 1994-09-30 CZ CZ19961187A patent/CZ290186B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-09-30 JP JP51297795A patent/JP3739788B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-30 CA CA002175670A patent/CA2175670C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-30 CN CN94194020A patent/CN1109045C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-30 UA UA96041756A patent/UA43855C2/uk unknown
- 1994-09-30 HU HU9601192A patent/HU222087B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-09-30 SK SK566-96A patent/SK284215B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1994-09-30 KR KR1019960702337A patent/KR960705841A/ko not_active Ceased
- 1994-09-30 PL PL94314185A patent/PL181725B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1994-09-30 RU RU96110890A patent/RU2148411C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1994-09-30 AU AU78109/94A patent/AU687451B2/en not_active Expired
- 1994-09-30 EP EP94928846A patent/EP0726907B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-30 ES ES94928846T patent/ES2182846T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-30 DE DE59410213T patent/DE59410213D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-30 AT AT94928846T patent/ATE228533T1/de active
- 1994-09-30 WO PCT/EP1994/003258 patent/WO1995012609A1/de not_active Ceased
- 1994-10-12 IL IL11126394A patent/IL111263A/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-11-03 MY MYPI94002921A patent/MY113294A/en unknown
- 1994-11-03 ZA ZA948667A patent/ZA948667B/xx unknown
-
1996
- 1996-05-03 NO NO19961816A patent/NO317112B1/no not_active IP Right Cessation
- 1996-05-03 FI FI961900A patent/FI116569B/fi active IP Right Grant
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8062848B2 (en) | Nucleic acid-free thermostable enzymes and methods of production thereof | |
| CZ277939B6 (en) | Process for preparing stable concentrate of a complex factor viii-von willebrand factor exhibiting high specific activity | |
| NO317112B1 (no) | En fremgangsmate for fremstilling av en virusaktivert fraksjon inneholdende faktor VIII ved hjelp av kromatografiske metoder | |
| WO2001048016A1 (en) | Separation of fibrinogen from plasma proteases | |
| US5071961A (en) | Method of enrichment of coagulation factors ii, vii, ix and x | |
| US7811807B2 (en) | Nucleic acid purification | |
| SK22695A3 (en) | Isolation and purification method of proteins dependent from vitamin k | |
| US6893856B2 (en) | Process for preparing virus-inactivated factors 1X and X by membrane chromatography | |
| NO178882B (no) | Fremgangsmåte for separasjon av vitamin K-avhengige blodkoagulerende faktorer | |
| Cocucci et al. | Co-sedimentation of one form of plasma membrane H+-ATPase and of the fusicoccin receptor from radish microsomes | |
| CZ2000983A3 (cs) | Způsob čištění antithrombinu III |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |