NO322018B1

NO322018B1 - Fremgangsmate ved fremstilling av gallesyrederivater og derivater fremstilt derved.

Info

Publication number: NO322018B1
Application number: NO20020969A
Authority: NO
Inventors: Pier Lucio Anelli; Marino Brocchetta; Massimo Visigalli; Chiara Gallotti
Original assignee: Bracco Imaging Spa
Priority date: 1999-08-31
Filing date: 2002-02-27
Publication date: 2006-08-07
Also published as: IT1313617B1; US6307074B1; NO20020969D0; ATE295368T1; ES2240165T3; EP1210359B1; CA2383505C; EP1210359A2; IL148404A0; KR100700474B1; CN1174994C; KR20020092903A; HU0203193D0; HUP0203193A3; US6479681B2; NO20020969L; WO2001016157A3; CN1371387A; PT1210359E; JP4842475B2

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører en ny fremgangsmåte ved fremstillingen av gallesyrederivater hvor en aminogruppe er til stede i 3(3-stillingen. Oppfinnelsen vedrører videre derivater fremstilt i henhold til nevnte fremgangsmåte

De viktigste gallesyrer er representert i det følgende

skjema 1:

Mer spesielt vedrører oppfinnelsen en fremgangsmåte ved fremstillingen av forbindelser med formel (I) fra forbindelser med formel (II):

hvor

Ri er H eller OH;

R2 er H, a-OH eller (3-OH; og

R3 er en rett eller forgrenet C1-C4 alkylgruppe, eller en benzylgruppe.

Forbindelsene med generell formel (I) er viktige intermediater for fremstillingen av forbindelser nyttige i mange farmasøytiske applikasjoner. De anvender, for eksempel, for fremstillingen av inhibitorer av gallesyrer-intestinal-absorpsjon (se EP-A-0489423) eller som bærere for aktive forbindelser i den enter-hepatiske sirkulasjon (se EP-A-0417725).

Til sist, men ikke minst, er anvendelsen derav ved fremstillingen av kontrastmidler for medisinsk diagnose ved å anvende magnetisk resonans, slik som de som beskrevet i W0-A-95/32741, resulterende fra konjugasjonen av en gallesyre med et chelaterende middel, hvilket er i stand til å chelatere ionene av paramagnetiske bi- og trivalente metaller, spesielt gadoliniumionet, eller i publikasjonen: Anelli P.

L. et al., Acta Radiologica, 38, 125, 1997.

EP-A-614 908 bringer for dagen fremstillingen av derivatene med generell formel (I), omfattende de følgende trinn:

a) dannelse av ftaliraidoderivater med generell formel {III) ved å reagere forbindelser med generell formel (II) med ftalimid; b) behandling av forbindelser med generell formel (III) med hydrazinhydrat eller fenylhydrazin; c) etterfølgende behandling av reaksjonsproduktene fra trinn b) med mineralsyrer for å danne addisjonssaltene, og d) frigjøring fra saltet for å gi forbindelsene med generell formel (I).

Som allerede vidt diskutert i EP-A-614 908 utføres dannel-sen av ftalimidoderivatet ved hjelp av den velkjente Mitsunobu-reaksjon (se Synthesis, 1, 1981; Org. React. Vol. 42, 335 (1992)), nemlig i nærvær av et passende fosfin og DEAD (dietylazodikarboksylat) eller DIAD (diisopropylazodikarboksylat), i et organisk løsningsmiddel slik som dioksan eller tetrahydrofuran, ved en temperatur som strekker seg fra 20 til 50<*>C. Mitsunobu-reaksjonen gir sluttproduktene med inversjon av konfigurasjon.

Den illustrerte fremgangsmåte anvender hydrazinhydrat eller fenylhydrazin, spesielt farlige produkter på grunn av deres fastlagte cancerogenisitet.

Det har overraskende blitt funnet at reduksjonen av ftali-midogruppen i forbindelsene med formel (III) fordelaktig kan utføres med natriumborhydrid.

Målet for den foreliggende oppfinnelse er derfor en fremgangsmåte ved fremstillingen av forbindelsene med generell formel {I) omfattende reduksjonsreaksjonen av forbindelsene med generell formel (III) i nærvær av natriumborhydrid og i et dipolart aprotisk løsningsmiddel valgt fra gruppen bestående av dimetylacetamid, dimetylformamid, dimetylsulfoksid, N-metylpyrrolidon, i henhold til det følgende skjema 2:

Ri er H eller OH;

R2 er H, a-OH eller (J-OH; og

R3 er en rett eller forgrenet C1-C4 alkylgruppe, eller en benzylgruppe; gjennom dannelse av de nye forbindelser med generell formel (IV), og etterfølgende avbeskyttelse av forbindelser (IV) ved behandling av forbindelsene med syrer, i henhold til det følgende skjema 3:

hvor Ri, R2 og R3 har betydningene som definert over.

Forbindelser med generell formel (IV) er nye, nyttige intermediater i fremgangsmåten i henhold til skjema 3 og deres gjenvinning vil bli beskrevet i den eksperimentelle del.

Spesielt foretrukket er fremgangsmåten ved fremstillingen av forbindelser med formel (Ia), i henhold til skjema 3, startende fra forbindelser med formel (Illa), som er derivater av kol- eller deoksykolsyre,

hvor

R3 har betydningene definert over og

R4 kan være et hydrogenatom eller en hydroksylgruppe.

Et ytterligere mål for den foreliggende oppfinnelse er fremgangsmåten ved fremstillingen av forbindelser med formel (Ib), i henhold til skjema 4, startende fra forbindelser med formel (Illb), som er deoksykolsyrederivater,

hvor R3 har betydningene definert over.

Spesielt foretrukket er fremgangsmåten ved fremstillingen av forbindelse (Ic), i henhold til skjema 5, startende fra forbindelse (Ille), et deoksykolsyrederivat, Forbindelsene med formel (Ille) og (IVc), henholdsvis (3|1,5(J, 12a) -3-ti, 3-dihydro-l, 3-diokso-2H-isoindol-2-yl) ] - 12-hydroksykolan-24-syre-metylester og (3(5, 5(5,12a)-12-hydroksy-3-[[(2-hydroksymetyl)benzoyl)amino]kolan-24-syre-metylester, er nye og de er nyttige intermediater ved fremstillingen av forbindelse med formel (Ic), et deoksykolsyrederivat.

Forbindelsene med formel (III) syntetiseres i henhold til den generelle prosedyre som allerede beskrevet over og ek-semplifisert i EP-A-614 908.

Foretrukne reaksjonsbetingelser omfatter:

1) valg av reaksjonstemperatur fra 15 til 25 °C, for såle-des å minske mengden diisopropylazodikarboksylat til et lite overskudd til den stoikiometriske; 2) krystallisasjon av ftalimidoderivater (III) fra MeOH istedenfor 2-PrOH, for derved å redusere volumet av kry-stallisasjonsløsningsmiddel med minst 4 ganger.

Reduksjonen av ftalimidoderivater med NaBH4 har aldri tid-ligere blitt beskrevet i feltet for forbindelsene av den foreliggende oppfinnelse, men referanser eksisterer i lit-teraturen, (T.W. Greene; P.G.M. Wuts "Protective groups in Organic Synthesis"; 3. utg. John Wiley and sons, New York, 1999), som rapporterer anvendelsen av et stort overskudd med dette reduksjonsmiddel (5-10 mol) for å avbeskytte en ftalimidogruppe.

Skoleringen inneholdt i den viktigste artikkel [Osby, Tetrahedron Letters, vol. 25, 2093 (1984)] dvs. anvendelsen av 2-PrOH/H20 = 6/1 som et reduksjonsløsningsmiddel viste seg definitivt å være uegnet for fremgangsmåten av den foreliggende oppfinnelse. Faktisk var det på grunn av den dårlige løselighet av forbindelser med formel (III), nød-vendig å operere ved temperaturer rundt 40 °C og med en 2,5 % maksimum konsentrasjon som er selvfølgelig er industrielt uakseptabel.

På annen side viste allerede Osby at de foreslåtte betingelser ikke var spesielt egnet for å avbeskytte ftalimido-grupper fra derivater inneholdende en esterfunksjon. Osby selv observerte faktisk at avbeskyttelsen av denne gruppe i nevnte derivater ble ledsaget av reduksjon og hydrolyse av estergruppen med etterfølgende minsking i reaksjonsutbyt-ter.

Søkeren fant at når forbindelsene med formel (III) reduseres under Osby-betingelsene, ble forbindelser med formel (I) gjenvunnet i rundt 65 % utbytter, men kontaminert med bemerkelsesverdige mengder biprodukter, hovedsakelig produktet fra reduksjonen av estergruppen i 24- til alkohol. Dette fenomen er fremdeles betydelig selv når NaBH4-over-skuddet reduseres markert. For å bedre forstå opprinnelsen til biproduktene, ble reaksjonen utført under Osby-betingelsene opparbeidet ved slutten av reduksjonen med NaBH4 og før syrehydrolysen, og biproduktene gjenvunnet ved silika-kromatografi hadde formler (V)-(VIII). Disse biprodukter er selvfølgelig forløperne til forurensningene vist i forbindelsene med formel (I) og forklarer årsaken til de lave reaksj onsutbytter.

I den eksperimentelle del vil gjenvinningen og karakteri-seringen av de forskjellige intermediater, spesielt i til-fellet med deoksykolsyre, bli rapportert.

Forbindelser med formel (IV) er hovedsakelig uatskillelige fra forbindelser (V) ved krystallisasjon fra forskjellige løsningsmidler. Selv ikke konversjonen av forbindelser (IV) til de tilsvarende syrer med formel (VI) tillater elimi-nasjonen av biproduktene med formel (V).

Det er overraskende blitt funnet at ved å anvende dipolare aprotisk løsningsmidler slik som DMA (dimetylacetamid), DMF (dimetylformamid), DMSO (dimetylsulfoksid), NMP (N-metylpyrrolidon), istedenfor et alkoholisk løsningsmiddel, slik som isopropanol beskrevet av Osby, kunne disse problemer overvinnes. Spesielt foretrukket er dimetylacetamid og N-metylpyrrolidon.

Ved å anvende nevnte løsningsmidler kunne konsentrasjonen av forbindelser (III) økes opp til mer enn 10 %, uten å øke mengden med biprodukter.

Under betingelsene i den foreliggende oppfinnelse, kunne dessuten Na BH4-over skuddet minskes, sammenlignet med det rapportert over.

Spesielt kan de molare ekvivalenter av reduksjonsmiddel senkes fra et kraftig overskudd (cirka 5) til hovedsakelig støikiometriske verdier (1,2-0,85) til substratet, uten å ugunstig påvirke reaksjonsutbyttene.

Et ytterligere aspekt av den foreliggende oppfinnelse er anvendelsen av, samtidig med de dipolare aprotiske løs-ningsmidler, en bufferløsning ved pH 7,5-9 som tillater å kontrollere pH under reaksjonen. Dette tillater hemming av hydrolysen av sensitive funksjoner som minimaliserer dan-nelsen av biprodukter (VI)-(VIII).

Forbindelsene med formel (IV) omdannes deretter til de med formel (I) ved behandling i dipolart aprotisk eller alkoholisk løsningsmiddel, eventuelt i blanding med vann, og i nærvær av en mineral- eller organisk syre (slik som eddiksyre).

Spesielt foretrukket er anvendelsen av HC1 i metanol-løsning. Etterfølgende frigjøring av den frie base fra saltet utføres ved behandling av løsningen i en av de oven-nevnte løsningsmidler med vandige baser (slik som NaOH, Na2C03...) .

Som allerede nevnt over er forbindelser med formel (I) nyttige ved fremstillingen av medikamenter for å minske kole-sterolnivåer i plasma, (EP-A-417 725 eller EP-A-489 423) eller av kontrastmidler for den kjerne magnetiske resonans diagnose, som beskrevet i WO-A-95/32741.

For den sistnevnte omfattet den kjente syntese omdannelsen av forbindelser (II) til de tilsvarende forbindelser (I) ved mellomliggende dannelse av azidet i 30-stillingen, i henhold til Mitsunobu-reaksjon, som beskrevet i det følgen-de skjema 6:

Dette synteseskjema er uegnet for oppskalering for diazider potensielt er farlige og nøkkelreagenset (difenylfosforyl-azid) er ekstremt dyrt.

Den foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte ved fremstillingen av chelaterende midler med generell formel (IX), som er i stand til å chelatere paramagnetiske bi-trivalente metallioner, valgt fra gruppen bestående av Fe(<2+>),

hvor

Ri og R2 har betydningene definert over;

R5 er et hydrogenatom eller en (C1-C5) alkylgruppe usub-stituert eller substituert med en karboksylgruppe;

X er residuet av en polyaminokarboksyl-ligand og derivater derav, valgt fra gruppen bestående av: etylendiamino-tetraeddiksyre (EDTA), dietylentriaminopentaeddiksyre (DTPA), 1,4,7,10-tetraazacyklododekan-l,4,7,10-tetraeddik-syre (DOTA), 1,4,7,10-tetraazacyklododekan-l,4,7-trieddiksyre (D03A), [10-(2-hydroksypropyl)-1,4,7,10-tetraazacyklo-dodekan-l, 4, 7-trieddiksyre (HPD03A), 4-karboksy-5,8,11-tris(karboksymetyl)-1-fenyl-2-oksa-5,8,11-triazatridekan-13-syre (BOPTA);

L er et residu med formel

m er et heltall fra 1 til 10, hvori for verdier over 1, kan verdiene av p og q være forskjellige i monomerenhetene; q er 0 eller 1;

p kan strekke seg fra 0 til 10, p og q er ikke på samme tid null,

fremgangsmåten omfattende de følgende trinn:

a) dannelse av forbindelser (III) startende fra forbindelser (II) ved reaksjon med ftalimid i henhold til Mitsunobus prosedyre, ved temperaturer som strekker seg fra 15 til 25 °C, i nærvær av et azodikarboksylat valgt fra DEAD (dietylazodikarboksylat) eller DIAD (diisopropylazodikarboksylat) i mengder som strekker seg fra 1,1 til 1,3 molare ekvivalenter, i et løsnignsmiddel valgt fra gruppen bestående av THF, dioksan, toluen og DMF; b) reduksjon av forbindelser (III) med NaBH4 for å gi forbindelser (IV); c) sur hydrolyse av forbindelser (IV) etterfulgt av nøyt-ralisering for å gi forbindelser (I); d) kondensasjon av forbindelser (I) med de reaktive residuer av polyaminokarboksyl-ligandene definert over.

Spesielt foretrukket er fremgangsmåten ved fremstillingen av forbindelser (IXa), som er kol- eller deoksykolsyrederivater, i henhold til det følgende skjema 7:

hvor R3/ R4 og Rs har betydningene definert over.

Spesielt foretrukket er videre fremgangsmåten ved fremstillingen av forbindelser (X), hvor i formel (IXa) residuet X er DTPA substituert på kjeden i sentral stillingen, Re kan være et hydrogenatom eller en karboksylgruppe og L-kjeden, R4 og R5 har betydningene definert over. Spesielt foretrukket er fremgangsmåten ved fremstillingen av forbindelser (Xa)

hvor L-kjeden, R4 og R5 har betydningene definert over.

Spesielt foretrukket er videre fremgangsmåten ved fremstillingen av den følgende nye forbindelse, med generell formel (Xa) : [30 (S), 5(5,12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis <karboksymetyl) amino] - etyl]amino]-4-karboksy-l-oksobutyl]amino]-12-hydroksykolan-24-syre;

Andre forbindelser som tilhører denne klasse, hvis fremstilling allerede har blitt beskrevet i WO-A-95/32741, er de følgende: [30(S), 5(5,7a, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis {karbo ksymet yl) amino] - etyl]amino]-4-karboksy-l-oksobutyl]amino]-7,12-dihydroksy-kolan-24-syre; [3(5 (S), 5p, 7a, 12a] -3- [ [4- [ [5- [bis [2- [bis {karboksymetyl) - amino]-etyl]amino]-5-karboksypentyl]amino]-1,4-dioksobu-tyl]-amino]-7,12-dihydroksykolan-24-syre.

Den er videre den foretrukne fremgangsmåte ved fremstillingen av de følgende forbindelser med formel (Xb) hvor i formel (X) Re er et hydrogenatom, og R<, Rs og L har betydningene definert over.

Også foretrukket er fremgangsmåten ved fremstillingen av den følgende nye forbindelse, som tilhører klassen med generell formel (Xb):

(3p,5p,7a,12a)-3-[[[bis[2-[bis(karboksymetyl)amino]etyl]-amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroksykolan-24-syre.

Andre forbindelser som tilhører denne klasse, allerede beskrevet i WO-A-95/32741, er de følgende:

(30,50,7a,12a)-3-[[[[[bis[2-[bis(karboksymetyl)amino]-etyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroksykolan-24-syre; (30,50,7a,12a)-3-[[6-[[[bis[2-[bis(karboksymetyl)amino]-etyl]amino]acetyl]amino]-1-oksoheksyl]amino]-7,12-dihydrok-sykolan-24-syre.

Spesielt foretrukket er også fremgangsmåten ved fremstillingen av forbindelser med formel (XI), hvor i formel (IXa) residuet X avledes fra DTPA, og R4, R5 og L har betydningene definert over.

Andre forbindelser som tilhører denne klasse, hvis fremstilling allerede beskrevet i WO-A-95/32741, er de følgen-de:

(3(3, 5(3,7a, 12a) -3- [ [N- [N- [2- [ [2- [bis (karboksymetyl) amino] - etyl]-(karboksymetyl)amino]etyl]-N-(karboksymetyl)-gly-cyl]glycyl]amino]-7,12-dihydroksykolan-24-syre; 18- [ [ (3(3, 5(3, 7a, 12a) -23-karboksy-7,12-dihydroksy-24-nor-kolan-3-yl]amino]-3,6,9-tris(karboksymetyl)-11,18-diokso-3,6,9,12-tetrazazoktadekansyre.

Spesielt foretrukket er også fremgangsmåten ved fremstillingen av de følgende forbindelser med formel (XII), hvor i formel (IXa) residuet X er DOTA, og R4, R5 og L har betydningene definert over.

Foretrukket er dessuten fremgangsmåten ved fremstilling av forbindelser med formel (XIII), hvor i formel (IXa) residuet X er EDTA, og R4, R5 og L har betydningene definert over.

Spesielt foretrukket er fremgangsmåten ved fremstillingen av de følgende forbindelser med formel (XIII): [33(S),50,12a]-3-[[4-[[2-[[bis(karboksymetyl)amino]etyl]-(karboksymetyl)amino]-4-karboksy-l-oksobutyl]amino]-12-hydroksykolan-24-syre [30(S),50]-3-[[4-[[2-[[bis(karboksymetyl)amino]etyl](karboksymetyl) amino]-4-karboksy-l-oksobutyl]amino]-12-okso-kolan-24-svre

De anvendte eksperimentelle betingelser vil bli illustrert i detalj i den eksperimentelle del.

Eksperimentell del

Eksempel 1

(3(3, 5(3,12a) -3- [1, 3-dihydro-l, 3-diokso-2H-isoindol-2-yl) ] - 12-hydroksykolan-24-syre-metylester

Ftalimid (202,8 g; 1,378 mol) suspenderes i en løsning av (3(3, 5(3,12a) -3,12-dihydroksykolan-24-syre-metylester (fremstilt som beskrevet i Steroids, vol. 37, 239) (511,9 g; 1,259 mol), og trifenylfosfin (372,7 g; 1,421 mol) i THF (1,5 1), deretter dryppes en løsning av diisopropylazodikarboksylat (284,7 g; 1,408 mol) i THF (0,49 1) deri over 1,5 t, mens temperaturen holdes ved 15 °C. Den resulterende løsning etterlates ved romtemperatur i 18 timer. Løsnings-midlet destilleres av og oljeaktig residu tilsettes MeOH (3,2 1) og omrøres i 20 timer. Det resulterende krystal-linske produkt filtreres, vaskes med MeOH (1,4 1) og tørkes for å gi det ønskede produkt (481,3 g; 0,898 mol). Moder-væsker og vasking konsentreres for å gi en andre mengde produkt (61,6 g; 0,114 mol)

Utbytte: 80 %

smp.: 160-162 °C

HPLC-analyse: 98,7 %

Stasjonær fase: Lichrosorb RP-Select B 5 um; kolonne 250 x 4 mm Merck KGaA;

Temperatur: 45 °C;

Mobilfase: gradient eluering

A = 0,017 M H3PO4 i vann

B = CH3CN

Strømningshastighet: 1 ml min"<1 >Deteksjon (UV): 210 nm;

TLC: slikagelplate 60F 254 Merck

Eluent: AcOEt/n-heksan = 4:6 Rf:0,35

Deteksjon: 2 % Ce(S04)-4 H20, 4,2 % (NH4) eMo7024, 6 % H2S04 i vann

<1>H-NMR-, <13>C-NMR-, IR- og MS-spekterne er overensstemmende med den indikerte struktur.

Eksempel 2

Reduksjon av forbindelser med formel (III) i henhold til en prosedyre lignende den beskrevet i Osby, Tetrahedron Letters, Vol. 25, 2093 (1984).

(3(3, 5(3,12a) -3-amino-12-hydroksykolan-24-syre-metylester

Forbindelsen fremstilt i eksempel 1 (75 g; 0,14 mol) løses i 2-PrOH (2,5 1) ved 75 °C. Løsningen omrøres kraftig og avkjøles til 50 °C, tilsettes deretter H20 (430 ml) for å oppnå en suspensjon som tilsettes fast NaBH4 (26,5 g; 0,70 mol) i porsjoner i løpet av 30 min. Reaksjonsblandingen om-røres ved 40 °C i 2,5 timer. CH3C00H tilsettes forsiktig til pH 4,5-5 og blandingen varmes ved 80 °C i 24 timer, mens pH holdes ved 4,5-5 ved gjentatte tilsetninger av CH3COOH. Etter avkjøling til romtemperatur og fordampning av løsningsmidlet, oppnås et residu som løses i vann (1 1). Løsningen alkaliseres til pH 10 med 2 M NaOH for å oppnå et presipitat som omrøres i 1 time, filtreres deretter, vaskes med vann og tørkes.

Krystallisasjon fra acetonitril (1,2 1) gir det ønskede produkt (36,9 g; 0,091 mol)

Utbytte: 65 %

HPLC-analyse: 87 %

Stasjonær fase: Lichrosorb RP-Select B 5 um; kolonne 250 x 4 mm Merck KGaA;

Temperatur: 45 °C

Mobilfase: gradient eluering

A = 0,01 M natriumpentansulfonat i vann bufferet til pH 2,5 med H2S04

B = CH3CN

Strømningshastighet: 1 ml min<-1>

Deteksjon (UV): 210 nm;

Silikagelkromatografi av råforbindelsen ga hoved-bipro-duktet (2,5 g) som var:

smp.: 174-175 °C<1>H-NMR-, <13>C-NMR-, IR- og MS-spekterne er overensstemmende med den indikerte struktur. I en annen reaksjon utført under de over beskrevne betingelser, ble, ved slutten av reduksjonen, NaBH4-overskuddet ødelagt med eddiksyre og reaksjonsblandingen (cirka nøytral pH) ble dampet inn og tatt opp i vann for å oppnå et råprodukt som ble renset ved silikagelkromatografi. Sammen med den forventede forbindelse (IVb) (se eksempel 3) ble bemerkelsesverdige mengder av biproduktene, rapportert heri under sammen med deres analytiske karakterisering, gjenvunnet. Dette forklarer i stor grad årsaken til det lave gjenvunnede utbytte av forbindelse (Ib) etter hydrolyse med eddiksyre ved 80 °C. N- [ (3(5, 5(5,12a) -12, 24-dihydroksykolan-3-yl] -2- (hydroksymetyl)benzamid smp.: 200-203 °C (3(3, 5(3,12a) -12-hydroksy-3- [ [2- (hydroksymetyl) benzoyl] - amino]kolan-24-syre smp.: >260 °C N- [ (3(3, 5(3,12a) -12-hydroksy-24-metoksy-24-oksokolan-3-yl] -2-(hydrometyl)benzamid Produktet ble karakterisert som ammoniumsalt smp.: 156-162 °C (3P, 5(3,12a) -12-hydroksy-3- [ [2-karboksybenzoyl] amino] kolan-24-syre smp.: 193-196 °C<1>H-NMR-, <13>C-NMR-, IR- og MS-spekterne er overensstemmende med den indikerte struktur. Eksempel 3 (30,50,12a)-12-hydroksy-3-[[2-(hydroksymetyl)benzoyl]-amino]kolan-24-syre-metylester

En løsning av forbindelsen fremstilt i eksempel 1 (225 g; 0,42 mol) i DMA (1,75 1), kraftig omrørt ved 34 °C, fortynnes med 2 M fosfatbuffer pH 8 (500 ml) for å oppnå en blanding ved 43 °C. Fast NaBH4 (15,45 g; 0,408 mol) tilsettes over 5 minutter og suspensjonen omrøres ved 47-48 °C. Etter 55 minutter oppnås nesten klar løsning som tilsettes CH3COOH for å nøytralisere hydridoverskuddet og justere pH fra 12,8 til cirka 8.

Blandingen helles i H20 og omrøres i 3 timer, presipitatet filtreres og suspenderes i H20 og omrøres deretter i 30 minutter. Til sist filtreres presipitatet, vaskes med H20 og tørkes for å gi det ønskede produkt (224,6 g; 0,416 mol).

Utbytte: 99 %

smp.: 190,2-192,7°C

HPLC-analyse: 93 %

Stasjonær fase: Lichrosorb RP-Select B 5 um; kolonne 250 x 4 mm Merck KGaA;

Temperatur: 45 °C

Mobilfase: gradient eluering

A = 0,017 M H3PO4 i vann

B = CH3CN

Strømningshastighet: 1 ml min 1 Deteksjon (UV): 210 nm;

TLC: silikagelplate 60F 254 Merck

Eluent: AcOEt/n-heksan/MeOH = 5:5:1 Rf: 0,79 Deteksjon: 2 % Ce(S04)-4 H20, 4,2 % (NH4) 6Mo7024, 6 % H2S04 i vann

Eksempel 4

(3(3, 5(3,12a) -3-amino-12-hydroksykolan-24-syre-metylesterhy-droklorid

Suspensjon av forbindelsen fremstilt i eksempel 3 (223,5 g;

0,414 mol) i MeOH (1,5 1) og 37 % HC1 (52 ml; 0,63 mol) varmes ved 50 °C under omrøring. Etter cirka 1,5 timer oppnås en løsning og etter ytterligere 2 timer, er reaksjonen

fullført. Løsningsmidlet dampes av og residuet omrøres ved 60 °C i 2 timer med CH3CN. Etter 15 timer ved romtemperatur filtreres presipitatet, vaskes med CH3CN og tørkes for å gi det ønskede produkt (183,3 g; 0,414 mol).

Utbytte: 100 %

smp.: > 250 °C

HPLC-analyse: 95 %

Stasjonær fase: Lichrosorb RP-Select B 5 um; kolonne 250 x 4 mm Merck KGaA;

Temperatur: 45 °C

Mobilfase: gradient eluering

A = 0,01M natriumpentansulfonat i vann bufferert til pH 2,5 med H2S04

B = CH3CN

Strømningshastighet: 1 ml min"<1>

Deteksjon (UV): 210 nm;

Eksempel 5

(3p,5p,12a)-3-amino-12-hydroksykolan-24-syre-metylester

Forbindelsen fremstilt i eksempel 4 (89,5 g; 0,202 mol) lø-ses i MeOH (460 ml) ved 55 °C, deretter avkjøles løsningen til cirka 40 °C og helles, under kraftig omrøring, i H20 mens fast Na2C03 tilsettes for å holde pH på 9,8. Etter om-røring i 2 timer, filtreres suspensjonen, det faste stoff suspenderes i H20 og omrøres i 2 timer, filtreres og vaskes med H20. Etter tørking oppnås det ønskede produkt (74,9 g; 0,185 mol).

Utbytte: 91 %

smp.: > 155-155,5 °C

HPLC-analyse: 96,5 %

Stasjonær fase: Lichrosorb RP-Select B 5 um; kolonne 250 x 4 mm Merck KGaA;

Temperatur: 45 °C

Mobilfase: gradient eluering

A = 0,01 M natriumpentansulfonat i vann bufferert til pH 2,5 med H2S04

B = CH3CN

Strømningshastighet: 1 ml min"<1>

Deteksjon (UV): 210 nm;

GC-analyse: 96,3 %

Stasjonær fase: PE 1 (OV 1)

Filmtykkelse: 0,25 um

Kolonne (WCOT): 30 m x 0,32 mm

Start-temperatur i ovnen: 255 °C, etter 5 minutter økes temperaturen med 0,6 °C/min for å nå 290 °C.

Injektor-temperatur: 290 °C

Temperatur FID: 290 °C

TLC: silikagelplate 60F 254 Merck

Eluent: CHCl3/MeOH/25 % NH40H - 6:2:0,5 Rf:0,69 Deteksjon: 2 % Ce(S04)-4 H20, 4,2 % (NH4)6Mo7024, 6 % H2S04 i vann

^-NMR-, <13>C-NMR-, IR- og MS-spekterne er overensstemmende med den indikerte struktur.

Forbindelser med formel (I), hvis formel og analytiske data er rapportert under, ble fremstilt analogt:

<a>TLC: silikagelplate 60F 254 Merck Eluent: CHCl3/MeOH/25 % NH4OH = 6:2:0,5 Deteksjon: 2 % Ce(S04)-4 H20, 4,2 % (NH4) 6Mo7024, 6 % H2S04 i vann ""■fi-NMR-, <13>C-NMR-, IR- og MS-spekterne samt elementære ana-lysene er overensstemmende med den indikerte struktur. Eksempel 6 [3p{S),5p,12a]-3-[(4-[bis[2-[bis(karboksymetyl)amino]-etyl]amino]-4-karboksy-l-oksobutyl]amino]-12-hydroksykolan-24-syre

A) [3p <S),5<p>,12a]-3-[[4-[bis[2-[bis[2-(1,1-dimetyletok-sy)-2-oksoetyl]amino]etyl]amino]-5-(1,1-dimetyletoksy)-1,5-dioksopentyl]amino]-12-hydroksykolan-24-syre-metylester

Trietylamin (2,23 g; 22 mmol) tilsettes til en løsning av 8,93 g [3p,5p,12a]-3-amino-12-hydroksykolan-24-syre-metylester (fremstilt i eksempel 5) (22 mmol), 16,41 g N,N-bis-[2-[bis[2-(1,1-dimetyletoksy)-2-oksoetyl]amino]etyl]-L-glu-taminsyre (1,1-dimetyletyl)ester (fremstilt som beskrevet i WO-A-95/32741:eksempel 15) (22 mmol) og 3,91 g dietylcyano-fosfat (24 mmol) i 300 ml DMF ved 0 °C. Etter 1,5 timer ved 0° C og 18 timer ved romtemperatur dampes reaksjonsblandingen inn og residuet løses i AcOEt. Løsningen vaskes med en NaHC03 mettet løsning og H20, tørkes (Na2S04) og dampes inn. Råproduktet renses ved flashkromatografi for å gi det ønskede produkt (20,67 g; 18,2 mmol).

Utbytte: 83 %

[a] £ = -6,75 (c 2,0, CHC13)

TLC: bærer: silikagelplate 60F 254 Merck Eluent: n-heksan/EtOAc = 1:1 Rf:0,09

Deteksjon: Ce(S04)2-4 H20 {0,18 %) og (NH4) 6Mo7024-4 H20 (3,83 %) i 10 % H2S04

B) [3p(S),5p,12a]-3-[[4-[bis[2-[bis(karboksymetyl)amino]-etyl]amino]-4-karboksy-l-oksobutyl]amino]-12-hydroksykolan-24-syre

Forbindelsen fremstilt i trinn A) {19,72 g; 17,4 mmol) lø-ses i 105 ml CF3C02H ved romtemperatur. Etter 26 timer dampes løsningen inn og residuet behandles med H20; det faste stoffet filtreres, vaskes med H20 og tørkes delvis under vakuum. Det resulterende intermediat løses i H20 ved pH 13 med IM NaOH.

Etter 5 timer ved romtemperatur tilsettes løsningen dråpevis 0,5 M HC1 ved pH 1,4. Etter 15 timer ved romtemperatur filtreres presipitatet, vaskes med H2O og tørkes under vakuum for å gi et råprodukt som renses ved kromatografi på Amberlite(<R>) XAD 1600 resin for å oppnå det ønskede produkt (9, 92 g; 11,8 mmol) .

Utbytte: 68 % smp.: 184 °C (dek.)

Kompleksimetrisk titrevæske (0,1 M GdCl3):99,3 %

Sur titrevæske {0,1 M NaOH):99,8 %

[a] 0 (c 2,0; 1 M NaOH)

TLC: silikagelplate 60F 254 Merck Eluent: CHCl3/MeOH/NH4OH = 5:4:2 Rf:0,13

Deteksjon: Ce(S04)2-4 H20 (0,18 %) og (NH4) 6Mo7024-4 H20 (3,83 %) i 10 % H2S04

Eksempel 7

(3(3, 5(3, 7a, 12a) -3- [ [ [bis [2- [bis (karboksymetyl) amino] etyl] - amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroksykolan-24-syre

A) N-[[bis[2-[bis[2-(1,l-dimetyletoksy-2-oksoetyl]-amino]etyl]amino]-acetyl]glysin 6,5 g glycylglysin (49,3 mmol) suspenderes i 100 ml av en 1:1 = H20:EtOH-blanding og løses ved pH 10 med 10 M NaOH (4,8 ml). N-(2-brometyl)-N[2-(1,1-dimetyletoksy)-2-oksoetyl]glysin-1,1-dimetyletylester (42 g; 110,9 mmol) i 40 ml EtOH dryppes inn 2 timer mens pH holdes ved 10,5 med 10 M NaOH (5,8 ml). Løsningen går hurtig over til en emul-sjon, som løses etter 2,5 timer ved tilsetning av 10 M NaOH. Etter 22 timer dampes løsningsmidlet av, residuet fortynnes med vann og ekstraheres med CH2C12. Den organiske fase vaskes med H20, tørkes og dampes inn, for å gi et residu som renses ved flashkromatografi. Residuet løses i vann, pH justeres til 4,5 ved tilsetning av 1 M HC1 og løs-ningen ekstraheres med kloroform. Den organiske fase vaskes med H20, tørkes og dampes inn for å gi 13 g av den ønskede forbindelse (19,3 mmol). <1>H-NMR-, <13>C-NMR-, IR- og MS-spekterne er overensstemmende med den indikerte struktur. B) (3(3,5(3,7a, 12a)-3-[ [ [ [ [bis [2-(bis [2- {1,1-dimetyletok-sy) -2-oksoetyl]amino]etyl]amino]acetyl]amino]acetyl]-amino] -7,12-dihydroksykolan-24-syre-metylester 2,8 ml TEA {20,2 mmol) tilsettes dråpevis i 5 minutter til en løsning av 13,6 g med forbindelsen fremstilt i trinn A) (20,2 mmol), 8,52 g (3p, 5|3,7a, 12a)-3-amino-7,12-dihydroksy-kolan-24-syre-metylester (fremstilt i eksempel 5) {20,2 mmol) og DEPC (3,4 ml; 22,2 mmol) i DMF (290 ml) som omrø-res ved 0 °C. Etter 1 time varmes reaksjonen til romtemperatur og løsningen omrøres i 6,5 timer. 0,3 ml DEPC (2 mmol) tilsettes og løsningen omrøres i ytterligere 15,5 timer. DMF dampes av, residuet løses i EtOAc, vaskes med aq. NaHC03 og deretter vann og tørkes til sist. Rensing med flashkromatografi gir 13,7 g av det ønskede produkt {12,7 mmol).

C) (3(3, 5(3, 7a, 12a) -3- [ [ [ [ [bis [2- [bis (karboksymetyl) amino] - etyl]-amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroksyko-lan-24-syre

12,85 g av forbindelsen fremstilt i trinn trinn B) (12 mmol) løses i TFA (210 ml) under omrøring ved 0-5 "C. Etter 16 timer dampes TFA for å gi et residu som løses i 90 ml 0,8 M NaOH ved pH 13 og omrøres ved romtemperatur i 15 timer. Løsningen konsentreres til 50 ml, dryppes i 105 ml 0,6 M HC1 og omrøres i 2 timer. Det faste stoffet filtreres, vaskes med 0,1 M HC1 og tørkes for å oppnå et råprodukt som renses ved kromatografi. Fraksjonene inneholdende den ønskede forbindelse i saltform dampes inn for å gi et residu som løses i vann og dryppes inn 1 M HC1 ved pH 1,45. Presipitatet filtreres, vaskes med 0,1 M HC1 og tørkes for å gi 2,6 g av det ønskede produkt (3,1 mmol).

Utbytte: 26 % smp.: 120-125 °C

HPLC-analyse: 98 % (areal %)

Eksempel 8

Fremstilling av kolsyrederivat chelaterende midler.

Ved å anvende (3(3, 5(3,7a, 12a) -3-amino-7,12-dihydroksykolan-24-syre-metylester fremstilt som beskrevet i eksempel 5, over følger prosedyrene beskrevet i WO-A-95/32741, ble de følgende chelaterende midler fremstilt: [3|3 (S), 50,7a, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (karboksymetyl)amino] - etyl]-amino]-4-karboksy-l-oksobutyl]amino]-7,12-dihydrok-sykolan-24-syre;

[3(3 (S), 5(3,7a, 12a] -3- [ [4-[ [5-bis [2- [bis (karboksymetyl) - amino]etyl]amino]-5-karboksypentyl]amino]-1,4-dioksybutyl]-amino]-7,12-dihydroksykolan-24-syre;

(30,50,7a,12a)-3-11[E[bis[2-[bis(karboksymetyl)amino]etyl]-amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroksykolan-24-syre;

(30,50,70,120)-3-[[6-[[[bis[2-[bis(karboksymetyl)amino]-etyl]amino]acetyl]amino]-1-oksoheksyl]amino]-7,12-dihydro ks ykolan-2 4-s yre;

(30,50,7a,12o)-3-[[N-[N-[2-[[2-[bis(karboksymetyl)amino]-etyl]-(karboksymetyl)amino]etyl]-N-(karboksyamino)glycyl]-glycyl]amino]-7,12-dihydroksykolan-24-syre; 18-[[(30,50,7a,12a)-23-karboksy-7,12-hydroksy-24-norckolan-3-yl]amino]-3,6,9-tris(karboksymetyl)-11,18-diokso-3, 6, - 9,12-tetraazaoktadekansyre.

Claims

1. Fremgangsmåte ved fremstillingen av forbindelser med generell formel (I) hvor Ri er H eller OH; R2 er H, a-OH eller (3-OH; og R3 er en rett eller forgrenet C1-C4 alkylgruppe, eller en benzylgruppe; karakterisert ved reduksjonen av forbindelser med generell formel (III) hvori Ri, R2 og R3 har de samme betydningene som i formel (I), i nærvær av natriumborhydrid og i et dipolart aprotisk løsningsmiddel valgt fra gruppen bestående av dimetylacetamid, dimetylformamid, dimetylsulfoksid, N-metylpyrrolidon for å gi forbindelser med generell formel (IV), hvor Ri, R2 og R3 har de samme betydningene som i formel (I), og den etterfølgende avbeskyttelse av forbindelser (IV) ved syrebehandling.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved fremstillingen av forbindelser med generell formel (Ia), hvor R3 har de samme betydningene som i krav 1 og R4 kan være et hydrogenatom eller en hydroksylgruppe.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved fremstillingen av forbindelser med generell formel (Ib), hvor R3 har de samme betydningene som i krav 1.

4. Fremgangsmåte ifølge krav 3, karakterisert ved fremstillingen av forbindelsen med formel (Ic)

5. Fremgangsmåte ifølge et hvilket som helst av kravene 1-4, karakterisert ved at reduksjonen med natriumborhydrid utføres i et dipolart aprotisk løsningsmid-del valgt fra dimetylacetamid og N-metylpyrrolidon.

6. Fremgangsmåte ifølge krav 1 til 5, karakterisert ved at antall mol NaBH4 strekker seg fra 1,2 til 0,85.

7. Fremgangsmåte ifølge krav 1 til 6, karakterisert ved at reduksjonen med natriumborhydrid utføres i et dipolart aprotisk løsningsmid-del og i nærvær av en bufferløsning ved pH 7,5-9.

8. Fremgangsmåte ifølge krav 1 til 7, karakterisert ved at forbindelser med formel (IV) omdannes til de med formel (I) ved behandling i et dipolart aprotisk løsningsmiddel, eventuelt i en blanding med vann, og i nærvær av en mineral- eller organisk syre.

9. Fremgangsmåte ifølge krav 8, karakterisert ved at mineralsyren er HC1 i metanolløsning.

10. Forbindelsen (30,50,12a)-3-[1,3-dihydro-l,3-diokso-2H-isoindol-2-yl)]-12-hydroksykolan-24-syre-metylester med formel (Ille)

11. Forbindelser med generell formel (IV) nvui ; Ri er H eller OH, R2 er H, a-OH eller (3-OH; og R3 er en rett eller forgrenet C1-C4 alkylgruppe, eller en benzylgruppe.

12. Forbindelse ifølge krav 11, (3(3, 50,12a) -12-hydroksy-3-[[(2-hydroksymetyl)benzoyl]amino]kolan-24-syre-metylester med formel (IVc)

13. Fremgangsmåte ifølge et hvilket som helst av kravene 1-9, ved fremstillingen av de chelaterende midler med formel (IX), som er i stand til å chelatere paramagnetiske bi-trivalente metallioner valgt fra gruppen bestående av Fe(2+>, Fe(<3+>), Cu(<2+>), Cr(<3+>), Gd(<3+>), Eu(<3+>), Dy(<3+>), La(<3+>), Yb(<3+>) eller Mn(<2+>), hvor Ri er H eller OH, R2 er H, a-OH eller |3-OH; og R5 er et hydrogenatom eller en (C1-C5)alkylgruppe usubsti-tuert eller substituert med en karboksylgruppe; X er residuet av en polyaminokarboksyl-ligand og derivater derav, valgt fra gruppen bestående av: etylendiaminotetra-eddiksyre, dietylentriaminopentaeddiksyre, 1,4,7,10-tetraazacyklodedekan-1,4,7,10-tetraeddiksyre, 1,4,7,10-tetraazacyklododekan-l, 4, 7-trieddiksyre, [10-(2-hydroksypropyl)-1,4,7,10-tetraazacyklododekan-l,4,7-trieddiksyre, 4-karboksy-5,8,1l-tris(karboksymetyl)-1-fenyl-2-oksa-5,8,ll-triazatridekan-13-syre; L er et residu med formel m er et heltall fra 1 til 10, hvori for verdier over 1, kan verdiene av p og q være forskjellige i monomerenhetene; q er 0 eller 1; p kan strekke seg fra 0 til 10, p og q er ikke på samme tid null, karakterisert ved at fremgangsmåten omfatter de følgende trinn: a) fremstilling av forbindelser med formel (III) startende fra forbindelser med formel (II) ved reaksjon med ftalimid i henhold til Mitsunobus prosedyre, ved temperaturer som strekker seg fra 15 til 25 °C, i nærvær av et azodikarboksylat valgt fra dietylazodikarboksylat eller diisopropylazodikarboksylat i mengder fra 1,1 til 1,3 molar-ekvivalenter, i et løsningsmiddel valgt fra gruppen bestående av THF, dioksan, toluen og DMF; b) reduksjon av forbindelser med formel (III) med NaBH4 for å gi forbindelser med formel (IV); c) sur hydrolyse av forbindelser med formel (IV) etterfulgt av nøytralisering for å gi forbindelser med formel (I) ; d) kondensasjon av forbindelser med formel (I) med reaktive residuer av polyaminokarboksyl-ligandene definert over.

14. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved fremstillingen av forbindelser med formel (IXa), hvori R4 har de samme betydningene som i krav 2 og R$, X og L har de samme betydningene som i krav 13.

15. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved fremstillingen av forbindelser med formel (IXb), hvor X, L og Rs har samme betydningene som i krav 13.

16. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved fremstillingen av forbindelser med formel (X), hvor Rg kan være et hydrogenatom eller en karboksylgruppe, R4 har de samme betydningene som i krav 2 og L og R5 har de samme betydningene som i krav 13.

17. Fremgangsmåte ifølge krav 16, karakterisert ved fremstillingen av forbindelser med formel (Xa) hvor R4 har de samme betydningene som i krav 2 og L og R5 har de samme betydningene som i krav 13.

18. Fremgangsmåte ifølge krav 17, karakterisert ved fremstillingen av de føl-gende forbindelser:

[3(3 (S), 5(3, 12a] -3-[[4- [bis [2- [bis (karboksymetyl) amino] etyl] - amino]-4-karboksy-l-oksobutyl]amino]-12-hydroksykolan-24-syre;

[3(3 (S), 5(3,7a, 12a] -3- [ [4- [bis [2- [bis (karboksymetyl) amino] - etyl]amino]-4-karboksy-l-oksobutyl]amino]-7,12-dihydroksy-kolan-24-syre.

19. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved fremstillingen av forbindelser med formel (Xb), hvor R4 har de samme betydningene som i krav 2 og Rs og L har de samme betydningene som i krav 13.

20. Fremgangsmåte ifølge krav 19, karakterisert ved fremstillingen av den følgende forbindelse: (3B,5B,7a,12oc)-3-[ [ [bis [2- [bis (karboksymetyl) amino]etyl] - amino]acetyl]amino]-7,12-dihydroksykolan-24-syre.

21. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved fremstillingen av forbindelser med formel (XI), hvor R4 har de samme betydningene som i krav 2 og R5 og L har de samme betydningene som i krav 13.

22. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved fremstillingen av forbindelser med formel (XII), hvor R4 har de samme betydningene som i krav 2 og R5 og L har de samme betydningene som i krav 13.

23. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved fremstillingen av forbindelser med formel (XIII), hvor R4 har de samme betydningene som i krav 2 og Rs og L har de samme betydningene som i krav 13.

24. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved fremstillingen av de følgende forbindelser: [3B(S),5B,12a]-3-[[4-[[2-[[bis(karboksymetyl)amino]etyl]-(karboksymetyl)amino]-4-karboksy-l-oksobutyl]amino]-12-hydroksykolan-24-syre; [3B(S),56]-3-[[4-[[2-[[bis(karboksymetyl)amino]etyl](karboksymetyl) amino]-4-karboksy-l-oksobutyl]amino]-12-oksy-kolan-24-syre.