NO773093L - Vevspesifikt protein og fremgangsmaate til dets fremstilling - Google Patents
Vevspesifikt protein og fremgangsmaate til dets fremstillingInfo
- Publication number
- NO773093L NO773093L NO773093A NO773093A NO773093L NO 773093 L NO773093 L NO 773093L NO 773093 A NO773093 A NO 773093A NO 773093 A NO773093 A NO 773093A NO 773093 L NO773093 L NO 773093L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- protein
- tissue
- tissue protein
- solution
- approx
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 98
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 98
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 14
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 14
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 12
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 claims description 11
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 claims description 11
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 9
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 8
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 7
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 5
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 claims description 4
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 3
- 238000007693 zone electrophoresis Methods 0.000 claims description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 2-Amino-2-Deoxy-Hexose Chemical compound NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 claims description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 claims description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 claims description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 2
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 claims description 2
- CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N neuraminic acid Natural products NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims description 2
- 108020001775 protein parts Proteins 0.000 claims description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 2
- CERZMXAJYMMUDR-QBTAGHCHSA-N 5-amino-3,5-dideoxy-D-glycero-D-galacto-non-2-ulopyranosonic acid Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)CC(O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO CERZMXAJYMMUDR-QBTAGHCHSA-N 0.000 claims 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 claims 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 claims 1
- 239000002052 molecular layer Substances 0.000 claims 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 87
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 59
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 10
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 8
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 6
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 6
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 5
- JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 2-(4-fluorophenyl)-1,3-dioxoisoindole-5-carboxylic acid Chemical compound O=C1C2=CC(C(=O)O)=CC=C2C(=O)N1C1=CC=C(F)C=C1 JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001425 Diethylaminoethyl cellulose Polymers 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 4
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- VRQURTHVUQBIMS-UHFFFAOYSA-N 2-acridin-1-yloxyethane-1,1-diamine;2-hydroxypropanoic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O.C1=CC=C2C=C3C(OCC(N)N)=CC=CC3=NC2=C1 VRQURTHVUQBIMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IYLLULUTZPKQBW-UHFFFAOYSA-N Acrinol Chemical compound CC(O)C(O)=O.C1=C(N)C=CC2=C(N)C3=CC(OCC)=CC=C3N=C21 IYLLULUTZPKQBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 2
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008857 Ferritin Human genes 0.000 description 1
- 108050000784 Ferritin Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000026062 Tissue disease Diseases 0.000 description 1
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- CGMRCMMOCQYHAD-UHFFFAOYSA-J dicalcium hydroxide phosphate Chemical compound [OH-].[Ca++].[Ca++].[O-]P([O-])([O-])=O CGMRCMMOCQYHAD-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000004503 fine granule Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- BQINXKOTJQCISL-GRCPKETISA-N keto-neuraminic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)C[C@H](O)[C@@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO BQINXKOTJQCISL-GRCPKETISA-N 0.000 description 1
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 210000005059 placental tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 150000003248 quinolines Chemical class 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4715—Pregnancy proteins, e.g. placenta proteins, alpha-feto-protein, pregnancy specific beta glycoprotein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/85—Reproductive organs or embryos
- Y10S530/851—Placenta; amniotic fluid
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Oppfinnelsen vedrører et vevspesifikt protein,
dvs. et stoff som er bestanddel av organvev samt en fremgangsmåte til dets fremstilling.
Fra oppsluttede organer av pattedyr lar det seg isolere flere, allerede omtalte stoffer i relativt ren form. Kjent er f.eks. det jernholdige protein ferritin, som kan fremstilles av placentavev, men også er blitt påvist i maver, milt, lever, nyre, uterus og lunger..
Oppfinnelsens gjenstand er et nytt vevprotein.
Det erkarakterisert ved
en proteindel, i det vesentlige bestående av a-aminosyrer,
på 9^ 3%,
en kullhydratdel på 53^ ± 2, 2%, herav heksoser 3,0 ± 1%, heksosamin 1,2 0,5%, "fucose 0,2 0, 2%, neuraminsyre 1,0 . 0, 5%,
c = 0 ' 1
en sedimentas,]onskoeffisient Son ' på 3,5 S ± 0,5 S,
et isoelektrisk punkt på 4,9 ± 0,3j målt med polyamidgelplater,
og på 4,5 ±0,3, målt i en elektrofokussiersøyle,
en elektroforetisk bevegelighet i området mellom o^- og B-^-globuliner,
en ekstinksjonskoeffisient 1% (278 nm) på 11,9 ± ls0 og en spesifikk immunologisk reaksjon med et spesifikt mot proteinet rettet antilegeme.
Som spesielt karakteristika av det nye vevprotein kan det fastholdes at det lar seg påvise såvel i fetale organer som også i adulte organer av pattedyr. Hos primater, spesielt mennesker, er proteinet påvist i følgende fetale organer: Hjerte, lever, nyre, lunge, mave, hjerne, videre i følgende adulte organer: Hjerte, lunge, hud, mave, nyre, uterus, lever, milt, binyre, colon, rektum, blære. Med kvantitative immunologiske metoder lar det seg derved påvise vanligvis minst 10 mg av proteinet i 100 g.vevnad. Også i placenta er produktet til-stede i størrelsesorden på 10 mg/100 g vev. Placentaet byr seg imidlertid spesielt for isolering av proteinet. I erytrozyter kan det påvises et innhold på 1 mg av proteinet/100 ml erytrozyter, hvorimot i plasma og serum av friske er proteinet ikke å påvise.
For forklaring av de karakteristiske trekk ved proteinet skal det anføres følgende: Bestemmelsen av sedimentasjonskoeffisienten fore-gikk i en analytisk ultrasentrifuge ved 60.000 omdreininger/ minutt i dobbeltsektorceller ved hjelp av de i det ultrafio-lette ved bølgelengde på 280 nm vandrende bånd av stoffet under anvendelse av vann som oppløsningsmiddel og en protein-konsentrasjon på 1 mg/ml i en oversjiktscelie av en analytisk ultrasentrifuge i tilknytning til Vonograd, Proe. Acad. Sei. USA, 49, 902 (1963).
Molekylvekten ble på den ene side beregnet i ultrasentrifugen over fastslåelse av sedimentasjonslikevekten ifølge Yphantis. Det fremkom en verdi på 37.100 ± 1.400.
På den annen side ble det ved undersøkelse av proteinet i en 0,1%-ig•natriumdodecylsulfatholdig bæregel, bestående av polyakrylamid, spaltet den største del av proteinet i 2 underenheter med en molekylvekt på 22.000 ± 2.000. Herav lar det seg for det native protein avlede en molekylvekt på 44.000 ± 4.000.
For bestemmelse av det isoelektriske punkt ble
det anvendt fremgangsmåten for isoelektrisk fokussering under anvendelse av de hertil av Firma LKB, Stockholm, markedsførte apparater og reagenser.
Anvender man polyamidplater fra Firma LKB, så fremkommer et isoelektrisk punkt på 4,9 ± 0,3, anvendes derimot
■ en elektrofokussersøyle fra samme firma med de hertil anbefalte reagenser, så finner man for proteinet ifølge oppfinnelsen et isoelektrisk punkt på 4,5 ± 0,3.
Den elektroforetiske bevegelighet ble fastslått' under anvendelse av celluloseacetat som bærefolie.
Kullhydratet ble bestemt ifølge Schultze, H.E.; Schmidtberger, R.; Haupt, H.; Untersuchungen uber die gebundenen Kohlenhydrate in isolierten Plasmaproteinen. Biochem. Z., 329, .490, (1958).
En aminosyreanalyse ble gjennomført ifølge Moore, S. ; Spackman, D.H.; Stein, V/.H.: Chromatography of amino acids on sulfonated polystyrene resins. Anal. Chem., 30, 1185, (1958) under anvendelse 'av en væskekromatograf. Derved viste det seg at de- hyppigst i peptidkjeden representerte aminosyrer er leucin, glutaminsyre, asparaginsyre qgglycin.
Den immunologiske karakterisering av stoffet fore-gikk enklest etter en kjent diffusjonsfremgangsmåte, hvor anti-gener, dvs. proteinet og et mot proteinet rettet antilegemé - resp. det med hensyn til antilegemet ikke anrikede antiserum, diffunderer mot hverandre i et bæremedium som f.eks. agar. Treffer de to reaksjonskomponenter på hverandre i et gunstig forhold danner det seg en synlig utfelling. Etter denne erkjennelse er det for fagmannen innlysende.at alle-immunologiske teknikker er mulig til påvisning og bestemmelse såvel av det nye vevprotein som også av det mot vevproteinet rettede antilegemé .
Oppfinnelsens gjenstand er videre fremgangsmåter til fremstilling av ovenforkarakterisertprotein, idet fremgangsmåten erkarakterisert vedat organekstrakter, vanligvis vandige ekstrakt er.av organer, som inneholder dette protein fraksjoneres .under tilgrunnleggelse av følgende ifølge oppfinnelsen fundne kriterier: Proteinet er utfellbart med nøytralsalter. Med det vanligvis for slike utfellinger anvendte ammoniumsulfat felles proteinet ved en inetningskonsentrasjon av saltet fra 30 til 60% i et pH-^område i nærheten av nøytralpunktet.
Tilsvarende dets molekylvekt kan proteinet utvinnes ved forholdsregler som er egnet til.adskillelse av stoffer med molekylvekter mellom 35 og 50.000. Fortrinnsvis anvendes hertil metodene med gelfiltrering eller ultrafiltrering.
Vevproteinet adsorberes ved nøytralt eller svakt alkalisk pH--verdi på. svakt basiske ioneutvekslere, fortrinnsvis anvendes derved en forholdsvis lite konsentrert pufferoppløsning, for ved økning av saltkonsentrasjonen eller også ved nedsettelse av .pH-verdien kan adsorpsjonen hindres. På den annen side byr det seg ved erkjennelse av dette forhold den mulighet å adsorbere vevproteinet og igjen å eluere under anvendelse av høyere konsen-trerte saltoppløsninger resp. av pufferoppløsninger med lav pH-verdi.
Det har vist seg at vevproteinet ikke ut felles . med de vannoppløselige organiske baser av akridin- og kinolin-rekken, som vanligvis finner anvendelse for proteinutfellings-fremgangsmåter. Det forblir i den ved disse fremgangsmåter vanlige konsentrasjon i det vandige overstående. Deretter kan det eksempelvis anvendes en akridinbase, som 2~etoksy-6,9-diaminoakridin-laktat eller en kinolinbase som bis-(2-metyl-4-aminokinolyl-6)-karbamid-hydroklorid til utfelling av følge-proteiner idet vevproteinet ifølge oppfinnelsen forblir i det overstående. •Tilsvarende overveielser kan gjelde ved anvendelse av hydroksylapatit som adsorbens for proteinene. Vevproteinet viser ingen spesiell affinitet til hydroksylapatit, hvormed det kan fastholdes en rekke følgeproteiner av hydroksylapatit.
På grunn av erkjennelsen av den elektroforetiske bevegelighet kan det for anrikning resp. isolering av vevproteinet anvendes den preparativé sone-elektroforese.
Vevproteinets affinitet på grunn av dets immunologiske forhold kan derfor anvendes til å anrike proteinet ved hjelp av såkalt immun-adsorpsjonsfremgangsmåte. Hertil kan det på i og for seg kjent måte fremstilles et immunadsorbens, dvs. et bærerbundet antilegeme mot vevproteinet, som formår å binde vevproteinet spesifikt. Proteinet kan deretter igjen elueres
ved endring av miljøbetingelsene.
Ved en utvalgt kombinasjon av de nevnte metoder, som på den ene side fører til anrikelse av vevproteinet, på den annen side til'dets adskillelse fra de øvrige følgeproteiner kan isoleringen av stoffet ifølge oppfinnelsen foregå. Følgelig er oppfinnelsens gjenstand å se i de enkelte anrikelsestrinn for vevproteinet og i den fremgangsmåte for dets rensning som gir seg ved kombinasjon av forholdsreglene til anrikning.
Fremgangsmåten til anrikning erkarakterisert vedanvendelse av minst en av følgende forholdsregler på organekstrakter eller herav fremstilte oppløsninger, som inneholder vevproteinet og den etterfølgende utvinning av den med hensyn til vevproteinet anrikede fraksjon: a) Tilsetning av vannoppløselige derivater av en akridin- eller kinolinbase, fortrinnsvis av 2-etbksy-6,9-diaminoakridin-laktat i området på pH-verdier fra 5 - 10, fortrinnsvis ved ca. pH 8, inntil en sluttkonsentrasjon.på ca. 0, 8% (vekt til volum), idet vevproteinet i det vesentlige forblir i det
overstående.
b) Tilsettelse av nøytralsalter inntil utfelling av vevproteinet, fortrinnsvis av ammoniumsulfat ved omtrent nøytral
pH-verdi inntil 30 - 60% av ammoniumsulfåtets metningskon-s,entras j on.
c) Adsorpsjon av vevproteinet på en svak basisk ioneutveksler, som dietylaminoetylcellulose, ved en ledningsevne av oppløs-ningen på 0 - 2 mS og nøytral eller svak alkalisk pH-verdi, eksempelvis under anvendelse av en f.eks. 0,01 molar puffer av pH-verdi på ca. 8. En puffer som fortrinnsvis anvendes er tris-hydroksymetylaminometan-HCl. Elueringen av vevproteinet kan oppnås ved forskyvning av pH-verdien til under
pH 7,0 eller ved økning av ledningsevnen til over 5 mS.
d) Adskillelse p.å grunn av molekylstørrelse . (molekylarsikt-fraksjonering). Spesielt egnet er gelfiltrering -i en- søyle,
fylt med en polymer av tilsvarende porestørrelse, eksempelvis med epiklorhydrin-nettdannet dekstran, som fremstilles som "Sephadex" av Firma Pharmacia, Uppsala, med formål anrikning av proteiner med en molekylvekt på ca. 50.000. Men også produkter som "Ultrogel" fra LKB, Bromma eller "Bio-Gel
P" fra Bio-Rad Laboratories, Richmond, California kan anvendes. e) Gjennomføring av en adsorpsjon med hydroksylapatit. Da vevproteinet bindes av hydroksylapatit ved betingelser som vanligvis anvendes'i den preparative biokjemi er hydroksylapatit et egnet stoff til å fjerne følgeproteiner av vevproteinet fra oppløsningen. Vevprotednoppløsningen innstilles hertil fortrinnsvis på en pH-verdi rundt nøytralpunktet og ledningsevne og oppløsningen holdes på ca.' 1 mS.
f) . Preparativ soneelektroforese.
Oppløsningen som inneholder proteinet, som er egnet
•for gjennomføring av en elektroforese av proteiner, fortrinnsvis en alkalisk pufferoppløsning, eksempelvis en natriumdietylbarbituratpuffer av pH 8,6, ionestyrke = 0,1, innføres hertil en apparatur til preparativ elektroforese, slik den eksempelvis omtales av N. Heimburger og R. Schmidtberger i Behringv/erke-Mitteilungen, hefte 43, side 83 ff., spesielt på sidene 119 - 120. Ved apparatet dreier det seg om en horisontal anordning av en bæreelektroforese i et åpent trau, hvori bærematerialet til bortføring av den ved elektro-
foresen opptredende Joulske varme kjøles til under 10°C.
Som bærematerial tjener overfor proteiner indifferente stoffer, fortrinnsvis polyvinylklorid, eller dets kopoly-merisater i form av et fint granulat.
Det er å anbefale å foreta elektroforesen i alkalisk pH-område, fortrinnsvis ved ca. pH 8,6, ved en ionestyrke fra 0,08 - 0,12 og ved en feltstyrke på 4 - 6 volt/cm.' Ved anvendelse av 0,1 molar natriumdietylbarbituratpuffer av pH-verdi 8,6 vandrer vevproteinet i det elektriske felt i det som c^- og 32~sone klassifiserte område av plasmaprote-iner .
For utvinning av høymolekylært a-globulin utkuttes denne sone og elueres fra definerte bærematerial ved hjelp av vann eller vandige saltoppløsninger, eksempelvis en 0,5 til koksaltoppløsning. I et siste rens-etrinn kan eluatet fortrinnsvis etter en foregående konsentrering, eksempelvis på et ultrafilter, underkastes en gelfiltrering.
For fremstilling av det nye vevprotein kombineres flere av de anførte' forholdsregler med hverandre og viderefor-arbeides derved hver gang den fraksjon som inneholder vevproteinet mens de øvrige fraksjoner kasseres.
Uten at det derved skulle være å utlede noen be-grensning skal det i det følgende påvises eksempelvis en mulighet hvorledes vevproteinet kan utvinnes av et organvev.
Hertil knuses eksempelvis menneskeplasenta og ekstraheres med vann eller en fortynnet, hensiktsmessig mindre enn 10%- ig saltoppløsning, fortrinnsvis med en 0,5%-ig nøytral-saltoppløsning, som eksempelvis natriumklorid. Hensiktsmessig anvender man på 1 kg placenta ca. 1 - 5 liter av ekstraherings-oppløsningen. Den ikke oppløste del adskilles ved sentrifugering eller filtrering fra ekstraktet.
Det har vist seg fordelaktig å gjennomføre arbeidene ved fremstilling av vevproteinet under værelsestemperatur, eksempelvis ved 10°C. Det nøytrale til svakt alkaliske, fortrinnsvis til pH 8 innstilte placentaekstrakt blandes deretter med et vannoppløselig derivat av en akridinbase, eksempelvis 2-etoksy-6,9-diaminoakridin-laktat, inntil en konsentrasjon på 0,8 ± 0,4% eller med et vannopplciselig derivat av en kinolinbase, fortrinnsvis med bis-(2-mety1-4-aminokinoly1-6)-karbamid-hydroklorid inntil en konsentrasjon på 0,3 ± 0,15%'Den derved dannede utfelling kasseres. Den overstående inneholder hoveddelen av vevproteinet som skal anrikes. Deretter er det hensiktsmessig å adskille overskytende fellingsmiddel ved tilsetning av forbindelser som formår å danne en utfelling med' fellingsmidlet. Akridinbasene danner eksempelvis med halogenider tungt oppløselige forbindelser, således at det til utskillelse av akridinbasen byr seg å anvende natriumklorid. En tilfredsstillende utskillelse oppnås ved en konsentrasjon på ca. 3-7% (vekt : volum) natriumklorid. Til den overstående proteinoppløsning settes i det følgende så meget av et for felling av eggehvitelegemer anvendbart salt at vevproteinet fortrenges fra oppløsningen. Fortrinnsvis anvendes som salt ammoniumsulfat: hensiktsmessig overholdes hertil en met-ningskonsentrasjon av ammoniumsulfatet på 30 - 60%, fortrinnsvis 40 - 5-0%. Den etter tilsetning av ammoniumsulf at dannede utfelling utvinnes ved sentrifugering eller filtrering og oppløses igjen i vann. Da slike ved saltutfelling dannede utfellinger vanligvis dessuten inneslutter selve fellingsmidlet lønner det seg deretter å tilknytte en dialyse. Oppløsningen hvorimot proteinoppløsningen dialyseres er hensiktsmessig en lite konsentrert pufferoppløsning. Hensiktsmessig er her anvendelsen av pufferoppløsninger som er vanlige ved ioneutvekslingskromatogra-fi og som muliggjør en adsorpsjon av vevproteinet på en svakt basisk ioneutveksler.
Den dialyserte oppløsning av vevproteinet blandes deretter i et lite konsentrert puffermiljø med den svakt basiske ioneutveksler, f.eks. dietylaminoetylcellulose og etter foretatt adsorpsjon av vevproteinet på ioneutveksler adskiller denne fra den resterende oppløsning, f.eks. frafiltreres. Ble adsorpsjonen eksempelvis gjennomført i et svakt alkalisk miljcS (ca. pH 8,0) og en puffer av konsentrasjon på ca. 0,01 mol/liter lar det seg foreta en vaskning av ioneutveksleren med en 0.,02 molar puffer ved en noe nedsatt pH-verdi (ca. 6- 1). Elueringspufferens saltkonsentrasjon kan ligge ved tilsammen ca. 0,2 mol/liter.
Det er fordelaktig å blande eluatet på samme måte som nevnt ovenfor med så meget nøytralsalt at proteinet kan fåes fra den fortynnede oppløsning som utfelling og deretter igjen oppløses i konsentrert form. For videre rensning kan det.igjen oppløste protein underkastes en gelfiltrering. Spesielt godt anrikede fraksjoner med hensyn til det søkte vevprotein fåes når det hertil anvendes det tverrbundede dekstran fra Firma Pharmacia, "Sephadex" av typen G 150, hensiktsmessig i form av forholdsregler for en søylekromatografi. Til eluering kan det tjene i biokjemien vanlige pufferoppløsning, hvortil det for økning av fraksjoneringseffekten settes nøytralsalter, eksempelvis 0,01 - 0,1 molar tris-hydroksymetyl-aminometan saltsyre-puffer-med tilsetning av 0 - 5 molar NaCl av .tilnærmet nøytral til basisk pH-verdi. Ved denne elueringsfremgangsmåte søkes vevproteinet i de eluerte fraksjoner, hensiktsmessig med immunologiske fremgangsmåter, ifølge hvilke de fraksjoner utsondres og samles som inneholder proteinet ifølge oppfinnelsen.
Da også gelfiltreringseluatene inneholder vevproteinet i fortynnet form er det her hensiktsmessig en anrikning ved felling med nøytralsalter som omtalt.
Den ved gjenoppløsning av saltutfellingen fremstilte oppløsning av vevproteinet innstilles ved dialyse-mot en meget sterkt fortynnet pufferoppløsning på de betingelser som er egnet til å adsorbere mest mulig av de ennu tilstedeværende forurens- ■ ninger på hydroksydapatit. Egnet er her spesielt svakt konsen-trerte fosfatpuffere, eksempelvis en ca. 0,005 molar natriumfos-fatpuffer, hvis pH-verdi ligger omtrent mellom 6,5 og 7,0. Ved kontakt av hydroksylapatit med den foreliggende proteinoppløs-ning blir vevproteinet ifølge oppfinnelsen'stilt i oppløsning, således at hydroksylapatitet som hensiktsmessig er fylt i en
søyle ikke mere må tas hensyn til for den følgende fremgangsmåte. Gjennomløpet gjennom hydroksylapatitsøylen inneholder det søkte vevprotein i gjentatt anriket og renset form.
En gjentagelse av ioneutvekslerkromatografien, idet - avvikende fra tidligere omtalte trinn - ioneutveksleren fylles i en søyle, den vevproteinholdige oppløsning påføres på søylen og elueres med en saltoppløsning av stigende konsentrasjon (gradient) fører til ytterligere anrikning av vevproteinet. Den etter disse eksempelvis angitte trinn gjennomførte rensefremgangsmåte fører til vevprotein i en renhet på over 99% •
Vevproteinet lar seg selvsagt oppnå etter de over-nevnte i samme renhet og også ved kombinasjon av andre tr-inn, eksempelvis også under innføyning av et trinn med preparativ elektroforese eller immunadsorpsjon.
Vevproteinet fremstillet ifølge oppfinnelsen har antigene.egenskaper. En dermed gjennomført immunisering av dyr etter kjente metoder fører til dannelse avSDesifikke antilegemer i blodet av immuniserte dyr. Deres sera kan utvinnes etter vanlige fremgangsmåter og de deri inneholdte antilegemer anrikes.
Den påviste vevspesifitet av stoffet ifølge oppfinnelsen ligger nær en diagnostisk betydning. Vevsykdommer lar seg påvise ved uttreden av proteinet fra vevet'i blodbanen i blodet. Hertil kommer det i det vesentlige på tale de kjente immunologiske påvisningsfremgangsmåter under anvendelse av det spesifikt mot vevproteinet rettede antilegeme.
Oppfinnelsen skal forklares nærmere ved hjelp av et eksempel.
Eksempel.
150 kg dypfrossen placenta knuses og ekstraheres med 150 liter av en 0,5%-ig vandig natriumkloridoppløsning. Ekstraktet innstilles med 2 N natriumhydroksyd på pH 8 og blandes med 50 liter av en 3%-ig vandig oppløsning av diaminoetoksyakridin-laktat. Etter en ventetid på 1 time avheves det overstående som inneholder vevproteinet, blandes méd 5% fast natriumklorid (11 kg) til utskillelse av de ennu i oppløsning forbliv-ende diaminoetoksyakridin-laktat, filtreres og blandes med 30%, referert til væskevekten av fast ammoniumsulfat og gjennomrøres godt. Etter 1 time frafiltreres utfellingen.
500 g av den på filteret samlede utfelling oppløses i 500 ml destillert vann og dialyseres mot en 0,01 molar tris-(oksymetyl)-aminometan-saltsyre-pufferoppløsning av pH-verdi 7,0, som inneholder 0,05% natriumazid. Den dialyserte oppløsning sentrifugeres og det overstående oppfylles med den samme puffer-oppløsning til 2000 ml, inntilles med 0,1 N natriumhydroksydopp-løsning på pH 8,0 og utrøres med 500 g fuktig dietylaminoetylcellulose (Firma Serva, Heidelberg) i 1 time.
Deretter adskilles dietylaminoetylcellulosen ved filtrering fra oppløsningen, vaskes to ganger med hver gang 1 liter 0,01 molar tris-(oksymetyl)-aminometan-saltsyrepuffer av pH-verdi 8,0 og elueres deretter tre ganger med hver gang 500 ml 0,02 molar tris-(oksymetyl)-aminometansaltsyrepuffer, pH 6,5, som inneholder 0,85% natriumklorid og 0,05% .natriumazid.
Til.de forenede eluater settes 30% ammoniumsulfat, referert til væskevekten og det hele utrøres. Utfellingen, som inneholder vevproteinet oppløses i 300 ml destillert vann og underkastes gelfiltrering ved hjelp av "Sephadex" G-150 under anvendelse av 0,1 molar tris-(oksymetyl)-aminometan-saltsyre-puffer av pH 8,0, som inneholder 1,0 mol natriumklorid pr. liter
(100 : 20 cm-søyle). Herved tjener trispufferen i første rekke som suspensjonsmediet, hvori bæreren for gelfiltreringen,
nemlig "Sephadex" G-150 foreligger. Det i destillert vann opp-løste vevprotein påføres på den med "Sephadex" fylte søyle og elueres med den nevnte trispuffer.
Deretter undersøkes eluatet med spesifikke vevpro-teinantiserum, de vevproteinholdige fraksjoner samles og herav utfelles proteinene igjen som nevnt ovenfor med 30% fast. ammoniumsulf at .
Vidererensningen foregår på hydroksylapatit (søyle
3 x 23 cm) under anvendelse av en 0,05 molar fosfatpuffer, pH
6,8 og deretter ved kromatografi på dietylaminoetyl-"Sephadex"
(Pharmacia) (søyle 3 x 23 cm) under anvendelse av en tris-HCl-puffer, pH 7,0. For eluering anlegges en saltgradient med 0 -
2% NaCl. Det fåes 40 mg av det nye vevprotein i en renhet på 99,5%.
Aminosyreanalysen ga følgende verdier (mol%):
Claims (5)
1. Vevprotein,karakterisert ved
a) - en proteindel på 94 ± 3$,
et innhold av kullhydrater på 5,4 ± 2,2%
og herav heksose 3S0 ± 1%, heksosamin 1,2 0,5%,
fukose 0,2 ± 0,2%, neuraminsyre 1,0 ± 0,5%; b) en sedimentasjonskoeffisient Sc 2Q = 0 ^ 1 på 3,5 S ± 0,5 S; c) et isoelektrisk punkt på 4,9 ± 0,3, målt med polyakrylamid-gelplater og på 4,5 ± 0,3, målt i en elektrofokussersøyle, d) en elektroforetisk bevegelighet i området mellom o^- og B-^~ globuliner; e) en ekstinksjonskoeffisient (278 nm) på 11,9 ± 1,0.
2. Fremgangsmåte til anrikning av vevproteinet ifrflge krav 1,karakterisert vedat organekstrakter eller herav utvundne oppløsninger som inneholder dette protein underkastes minst en av følgende forholdsregler og den.med hensyn til vevproteinet anrikede fraksjon utvinnes: a) tilsetning av vannoppløselige derivater av enakridin-eller kinolinbase i området av pH-verdi på 5 - 10 inntil e'n s luttkonsentras j on på ca. 0,8%; b) tilsetning av nøytralsalter inntil utfelling av'vevprotein; c) adsorpsjon av vevproteinet på en svak basisk ioneutveksler og eluering herav; d) molekylarsjiktfraksjonering og utvinning av fraksjonene som tilsvarer en molekylvekt på ca. 50.000; e) adsorpsjon på hydroksylapatit under unngåelse av binding av vevproteinet; f) preparativ soneelektroforese og utvinning av o^- og 8-^-mellomsonen.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2,karakterisert vedat det som organekstrakt anvendes et ekstrakt av menneskelig placenta.
4. Anvendelse av vevprotein ifølge krav 1 til utvinning av antisera etter i og for seg kjente fremgangsmåter,
5. Fremgangsmåte til utvinning av et mot det vevspesifikke protein rettede antiserum,karakterisertved at man injiserer, et dyr det vevspesifikke protein, etter noen tid uttar blod og herav utvinner serumet.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2640387A DE2640387C3 (de) | 1976-09-08 | 1976-09-08 | Gewebespezifisches Protein und Verfahren zu dessen Herstellung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO773093L true NO773093L (no) | 1978-03-09 |
Family
ID=5987430
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO773093A NO773093L (no) | 1976-09-08 | 1977-09-07 | Vevspesifikt protein og fremgangsmaate til dets fremstilling |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4254021A (no) |
| JP (1) | JPS5334913A (no) |
| AT (1) | AT365929B (no) |
| AU (1) | AU517607B2 (no) |
| BE (1) | BE858521A (no) |
| CA (1) | CA1092971A (no) |
| DE (1) | DE2640387C3 (no) |
| DK (1) | DK397677A (no) |
| ES (1) | ES462069A1 (no) |
| FI (1) | FI61192C (no) |
| FR (1) | FR2364225A1 (no) |
| GB (1) | GB1586240A (no) |
| IE (1) | IE45678B1 (no) |
| IL (1) | IL52899A (no) |
| IT (1) | IT1084741B (no) |
| LU (1) | LU78084A1 (no) |
| NL (1) | NL7709740A (no) |
| NO (1) | NO773093L (no) |
| NZ (1) | NZ185106A (no) |
| SE (1) | SE7710085L (no) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2718325C2 (de) * | 1977-04-25 | 1986-09-25 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Leucinreiches 3,1-S-α↓2↓-Glykoprotein sowie dessen Verwendung |
| DE2720704C2 (de) * | 1977-05-07 | 1986-09-25 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues Glycoprotein, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung |
| DE2842467A1 (de) * | 1978-09-29 | 1980-04-10 | Behringwerke Ag | Neues ubiquitaeres gewebsprotein pp tief 8 |
| DE2854759A1 (de) * | 1978-12-19 | 1980-07-10 | Behringwerke Ag | Neues plazentaspezifisches gewebsprotein pp tief 10 |
| DE2952792A1 (de) * | 1979-12-31 | 1981-07-02 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein (pp(pfeil abwaerts)15(pfeil abwaerts)) mit immunsuppressiver wirkung |
| DE3013724A1 (de) * | 1980-04-10 | 1981-10-15 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein pp (pfeil abwaerts)9(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowieseine verwendung |
| DE3109629A1 (de) * | 1981-03-13 | 1982-09-23 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | "neues protein (pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)6(pfeil abwaerts)), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowie seine verwendung" |
| DE3228503A1 (de) * | 1982-07-30 | 1984-02-02 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein (pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)7(pfeil abwaerts)), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3230996A1 (de) * | 1982-08-20 | 1984-02-23 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Neues protein (pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)3(pfeil abwaerts)), verfahren zu seiner anreicherung und gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3315000A1 (de) * | 1983-04-26 | 1984-10-31 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)4(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3334405A1 (de) * | 1983-09-23 | 1985-04-04 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Membranassoziierte proteine (mp(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)), verfahren zu ihrer gewinnung sowie ihre verwendung |
| DE3404563A1 (de) * | 1984-02-09 | 1985-08-14 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)9(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| DE3418888A1 (de) * | 1984-05-21 | 1985-11-21 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Gewebeprotein pp(pfeil abwaerts)1(pfeil abwaerts)(pfeil abwaerts)8(pfeil abwaerts), verfahren zu seiner gewinnung sowie seine verwendung |
| CA1265446A (en) * | 1985-09-30 | 1990-02-06 | Masahiro Maki | Anticoagulating substance, process for preparing same and anticoagulant comprising same as an effective component |
| JPH0689014B2 (ja) * | 1986-01-21 | 1994-11-09 | 興和株式会社 | トロンビン結合性物質およびその製法 |
| RU94022543A (ru) * | 1994-06-10 | 1996-05-20 | АОЗТ "Научно-практический центр медикобиологических проблем" | Основа лекарственного средства и способ ее изготовления |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3409605A (en) * | 1965-06-15 | 1968-11-05 | American Cyanamid Co | Concentration and purification of growth factor-placental origin (human) |
| US3497492A (en) * | 1968-04-02 | 1970-02-24 | American Cyanamid Co | Preparation of placental albumin |
| US3931399A (en) * | 1970-12-22 | 1976-01-06 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Process for isolating a fibrin-stabilizing factor |
| US3904751A (en) * | 1970-12-22 | 1975-09-09 | Behringwerke Ag | Process for isolating a fibrin stabilizing factor from human placenta |
| US4191533A (en) * | 1971-09-29 | 1980-03-04 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Pregnancy-specific β1 -glycoprotein and process for isolating it |
| DE2221261A1 (de) * | 1972-04-29 | 1973-11-15 | Behringwerke Ag | Ap-glykoproteine und verfahren zu ihrer isolierung |
| FR2215944A1 (en) * | 1973-02-01 | 1974-08-30 | Bellon Labor Sa Roger | Extracts of human placenta - free of proteases, and contg. histaminase, kininases and monoamine-oxidases for treating allergies |
| DE2353973C3 (de) * | 1973-10-27 | 1979-10-04 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Steroid-bindendes Globulin und Verfahren zu dessen Herstellung |
| FR2261755A1 (en) * | 1974-02-25 | 1975-09-19 | Thomas Andre | Glyco protein and mucopolysaccharides extraction - from naturally occuring materials fr use in cosmetics |
| US3910822A (en) * | 1974-03-14 | 1975-10-07 | Us Health | Isolation of glucocerebrosidase from human placental tissue |
| DE2616984C3 (de) * | 1976-04-17 | 1981-10-29 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur Isolierung und Reinigung eines plazentenspezifischen Glycoproteins |
-
1976
- 1976-09-08 DE DE2640387A patent/DE2640387C3/de not_active Expired
-
1977
- 1977-09-02 ES ES462069A patent/ES462069A1/es not_active Expired
- 1977-09-05 NL NL7709740A patent/NL7709740A/xx not_active Application Discontinuation
- 1977-09-06 FI FI772641A patent/FI61192C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-09-06 IT IT27296/77A patent/IT1084741B/it active
- 1977-09-06 NZ NZ185106A patent/NZ185106A/xx unknown
- 1977-09-06 IL IL52899A patent/IL52899A/xx unknown
- 1977-09-06 LU LU78084A patent/LU78084A1/xx unknown
- 1977-09-07 AT AT0643777A patent/AT365929B/de not_active IP Right Cessation
- 1977-09-07 AU AU28621/77A patent/AU517607B2/en not_active Expired
- 1977-09-07 IE IE1855/77A patent/IE45678B1/en unknown
- 1977-09-07 DK DK397677A patent/DK397677A/da not_active Application Discontinuation
- 1977-09-07 CA CA286,249A patent/CA1092971A/en not_active Expired
- 1977-09-07 NO NO773093A patent/NO773093L/no unknown
- 1977-09-08 SE SE7710085A patent/SE7710085L/xx not_active Application Discontinuation
- 1977-09-08 GB GB37521/77A patent/GB1586240A/en not_active Expired
- 1977-09-08 FR FR7727245A patent/FR2364225A1/fr active Granted
- 1977-09-08 JP JP10870577A patent/JPS5334913A/ja active Pending
- 1977-09-08 BE BE180770A patent/BE858521A/xx unknown
-
1979
- 1979-08-21 US US06/068,459 patent/US4254021A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI61192C (fi) | 1982-06-10 |
| GB1586240A (en) | 1981-03-18 |
| DE2640387A1 (de) | 1978-03-16 |
| IE45678B1 (en) | 1982-10-20 |
| DE2640387C3 (de) | 1981-01-22 |
| AU517607B2 (en) | 1981-08-13 |
| ATA643777A (de) | 1981-07-15 |
| LU78084A1 (no) | 1978-06-01 |
| IE45678L (en) | 1978-03-08 |
| BE858521A (fr) | 1978-03-08 |
| DK397677A (da) | 1978-03-09 |
| JPS5334913A (en) | 1978-03-31 |
| SE7710085L (sv) | 1978-03-09 |
| IL52899A (en) | 1980-09-16 |
| NL7709740A (nl) | 1978-03-10 |
| CA1092971A (en) | 1981-01-06 |
| FI61192B (fi) | 1982-02-26 |
| FI772641A7 (fi) | 1978-03-09 |
| FR2364225B1 (no) | 1982-11-19 |
| IL52899A0 (en) | 1977-11-30 |
| IT1084741B (it) | 1985-05-28 |
| DE2640387B2 (de) | 1980-05-22 |
| US4254021A (en) | 1981-03-03 |
| AT365929B (de) | 1982-02-25 |
| AU2862177A (en) | 1979-03-15 |
| NZ185106A (en) | 1980-05-27 |
| FR2364225A1 (fr) | 1978-04-07 |
| ES462069A1 (es) | 1978-06-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4217339A (en) | Glycoprotein and process for isolating it | |
| US4507229A (en) | Tissue protein PP4, a process for isolating it and its use | |
| NO773093L (no) | Vevspesifikt protein og fremgangsmaate til dets fremstilling | |
| US4269825A (en) | New glycoprotein and process for isolating it | |
| US4301064A (en) | Ubiquitary tissue protein PP8 | |
| US4402872A (en) | Protein and process for isolating it | |
| US4302385A (en) | Placenta-specific tissue protein PP10 | |
| US4500451A (en) | New protein PP13 extracted from human placental tissues and use thereof | |
| CA1154438A (en) | Protein pp in15 xx, a process for its preparation and its use | |
| US4468345A (en) | Protein (PP17), a process for concentrating and isolating it and its use | |
| CA1187076A (en) | Protein pp.sub.9, process for its enrichment and its isolation and its use | |
| US4746731A (en) | Isolated tissue protein PP18 | |
| US4325866A (en) | Protein, PP11, a process for its preparation and its use | |
| US4297274A (en) | Protein from red blood cells and process for isolating it | |
| JPS60104015A (ja) | 新規蛋白質ｐｐ↓２↓０およびその取得法 | |
| US4018885A (en) | Steroid-binding globulin and process for preparing it and antibodies thereto | |
| US4309339A (en) | Leucine-rich 3,1-S-α2 -glycoprotein, process for isolating it and its use | |
| US4599318A (en) | Tissue protein PP19, a process for obtaining it, and its use | |
| JPH0720994B2 (ja) | 組織蛋白質ｐｐ▲下２▼▲下１▼およびその取得法 | |
| Rossi | Cystic Fibrosis, Part 2: 4th International Conference on Cystic Fibrosis of the Pancreas (Mucoviscidosis), Geigy-Symposium 2, Bern/Grindelwald, September 1966. Part II: Biochemistry of Glycoproteins and Related Substances |