NO774312L - Ne ny cellelinje, samt fremgangsmaate for viderefoering av den - Google Patents

Ne ny cellelinje, samt fremgangsmaate for viderefoering av den

Info

Publication number
NO774312L
NO774312L NO774312A NO774312A NO774312L NO 774312 L NO774312 L NO 774312L NO 774312 A NO774312 A NO 774312A NO 774312 A NO774312 A NO 774312A NO 774312 L NO774312 L NO 774312L
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
cells
culture
cell
medium
cell line
Prior art date
Application number
NO774312A
Other languages
English (en)
Inventor
Dimitri Viza
Original Assignee
Int Inst Of Differentiation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Int Inst Of Differentiation filed Critical Int Inst Of Differentiation
Publication of NO774312L publication Critical patent/NO774312L/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0635—B lymphocytes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Data Exchanges In Wide-Area Networks (AREA)
  • Vehicle Body Suspensions (AREA)
  • Electrochromic Elements, Electrophoresis, Or Variable Reflection Or Absorption Elements (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører cellelinjer som kan anvendes ved fremstilling av immunologisk materiale.
Utviklingen av nye cellelinjer som kan subkultiveres kontinuer-lig er et forskningsfelt som er vist betydelig interesse i de senere år. Slike cellelinjer frembyr betydelige fordeler over primærkulturer innen flere felter av mikrobiologien.
F.eks. er de av stor interesse for virologer både for eksperi-mentelt arbeide og for kultivering av vira for vaksineproduk-sjon. F.eks. beskrives i britisk patent nr. 1.015.262 cellelinjen generelt som BHK 21, som er utviklet i forbindelse med slike virakulturer.
Under den siste dekade har flere laboratorier forsøkt å eta-
blere en cellelinje avledet fra humane perifere blodleukocyt-
ter. Flere slike cellelinjer innbefattende lin jer avledet fra lymfoblastoidceller (leukocyttcelledannende) har blitt eta- .
blert av forskjellige forskningsgrupper. Se eksempelvis Nilsson, K., et al, Int. J. Cancer, Vol. 3. sidene 183 - 190, 1968, "Development of Immunocytes and Immunoglobulins,
Production in Long Term Cultures from Normal and Malignant
Human Lymph Nodes"; og Moore, G.E. et al, J. of Amer. Med.
Assoc, Vol. 199, 8, sidene 87 - 92, 1967, "Culture of Normal Human Leukocytes".
En ny cellelinje er nå utviklet som kan dyrkes uten vesentlige karakterforandringer og som er basert på perifere blodleuko-cytter erholdt fra en 75 år gammel, tilsynelatende sunn mann. Denne cellelinje er betegnet LDV/7. Cellene fra denne linje er funnet å være i stand til å produsere spesifikt inmunologisk materiale, eksempelvis spesifikke antilegemer og immun RNA. Cellene kan dyrkes i suspensjonskulturer, enten i statiske kulturer eller spinnekulturer, men de kan også kultiveres i agar. Denne egenskap er særlig nyttig da det muliggjør at veletablerte bakteriologiske metoder kan anvendes for in vitro kontroll av menneskeceller. F.eks. er kloning mulig og det er også mulig å studere innvirkningen av forskjellige fak-torer, såsom kolonistimulerende faktor på cellenes differensiering.
Følgelig har foreliggende oppfinnelse tilveiebrakt et cellekultursystem omfattende celler av en cellelinje identifisert méd henvisningstallet LDV/7 i et næringskulturmedium for denne.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også en fremgangsmåte for dyrking av celler av den ovenfor identifiserte cellelinje, som omfatter kultivering av celler i et næringskulturmedium for denne.
Cellelinjen -ble initialt etablert ved den følgende prosedyre (prosentangivelsene i det følgende er volum-%): Mesteparten av erytrocyttene ble separert fra den opprinne-lige blodprøve ved tilsetning av 20% plasmagel og kastet etter sedimentasjon i prøverør. Den gjenvunne suspensjon inneholdt erytrocytter/leukocytter i et forhold mindre enn 20:1. De således erholdte leukocytter ble suspendert i et "RPMI 1640"-medium inneholdende 20% kalvefosterserum, ved en konsentrasjon på 2 x 10 leukocytter/ml. 2/3 av dette medium ble erstattet med friskt medium to ganger i uken. Da celledød fant sted
i løpet av de første uker ble kulturen konsentrert i den' grad det var nødvendig for å holde cellekonsentrasjonen over 10 celler/ml.
Cellene ble kultivert i glass "Roux"-flasker. 6 uker etter påbegynt kultivering viste cellene i én av flaskene tegn
på vekst, nemlig de ble større og begynte å formere seg og disse ble anvendt for påbegynnelsen av LDV/7-cellelinjen.
Denne cellelinje er siden dyrket i store mengder under anven-deise av den beskrevne dyrkningsmetode: LDV/7-cellelinjen kan bibeholdes i et antall forskjellige næringsmedia. Den kan kultiveres i "RPMI 1640"-medium inneholdende 5 - 30% kalvefosterserum. Fortrinnsvis består næringsmediet av "'RPMI"-medium inneholdende 10% kalvefosterserum. Ytterligere kan "McCoy's" og "Eagle's Essential Medium" anvendes ved subkultivering av cellelinjen.
Cellene vokser i suspensjonen ved 37°C og danner klumper som kan dispergeres ved forsiktig omrøring av mediet. Cellene videreføres (are passaged) minst 3 ganger om uken. Det ak-tuelle podningstall er 5 x 10 5 celler/ml og cellene får vokse i en statisk kultur inntil en cellekonsentråsjon på 10 celler/ ml nås. Deretter vil cellene vokse i en omrørt kultur hvori en roterende, steril magnetisk omrører holder cellene i suspensjon i næringsmediet. Ehhøyere konsentrasjon på stør-relsesorden 1,5 x 10 gceller/ml kan derved erholdes. Pro-sentandelen av døde celler er ca. 5%, men varierer i henhold til kulturbetingelsene. Genereringstiden for cellene er ca.
24 timer, igjen avhengig av kulturbetingelsene.
Generelt er betingelsene slik at pH og temperatur under hvilke cellelinjen formeres i det vesentlige de samme som leukocytter ville måte i et menneskelegeme.
Karyotype-analyse av cellene viser at LDV/7-ce.llelinjen er hypotetraploid. Antallet av kromosomer varierer mellom, 80
og 93. Én undersøkelse av cellenes morfologi ved hjelp av optiske mikroskop viste en heterogen cellestørrelse og at flesteparten av cellene hadde et oppblåst (blast-like) ut-seende. Ytterligere undersøkelse ved hjelp av et elektron-mikroskop bekreftet cellelinjens heterogenitet og viste runde, monocellulare celler av varierende størrelse med cytoplasmisk differensiering og "rough" endoplasmisk reticulum og makro-fage egenskaper. Det synes å være minst to cellepopulasjoner, hvorav den ene hadde celler med en diameter mindre enn 15 pm og den andre med større celler med en diameter på 15 - 30 um.
Tilsynelatende er de større celler avledet fra de små.
3 kloner har blitt erholdt med kromosomtall på 84 for den første og 85 for den andre og tredje, og underbygger således kloningseffektiviteten.
De fagocytiske egenskaper for cellene ble også undersøkt
ved hjelp av elektronmikroskopet. Det kunne klart sees at noen av cellene ble fagocyttisert av andre celler. Ingen vi-rale partikler ble oppdaget på elektronmikrofotografier erholdt enten fra prøver tatt under vanlige kulturbetingelser eller fra kulturvekst ved +40°C. Det er verdt å bemerket at cellelinjen er meget følsom overfor det adrenale kortikale steroidhormon-kortison, hvilket indikerer tilstedeværelsen av lymfoblastoidceller og/eller stamceller. Det er også viktig å bemerke at ingen EB-virus-antigener ble påvist ved immuno-fluorescens.
Ved vevtypebestemmelse av LDV/7-cellene for histokompatibili-tet viste HL-A-antigener tilstedeværelsen av de følgende særpreg (specificities) : HLA 2 og HLA 32 for den første locus, og HLA "specificity" W 14 for den andre locus. Imid-lertid ble svak reaktivitet med andre antisera og andre HLA-spesifisiteter også observert, men dette ble betraktet
som uspesifikt.
LDV/7-cellelinjen. er uttømmende studert i forbindelse med eksperimenter vedrørende fremstilling av immunologisk materiale. Det ble funnet at LDV/7-cellene kan induseres av nukleinsyrer (RNA og DNA) avledet fra lymfoidorganer av dyr immunisert med spesifikke antigener. Etter induksjon kunne det vises at cellene var i stand til å replisere nukleinsyrene anvendt for deres induksjon. Det ble funnet at disse "kopierte" nukleinsyrer bibeholdt deres antigene spesifisitet. Ytterligere er det vist at dialysater avledet fra LDV/7-celler indusert med nukleinsyrer for spesifikke antigener vil overføre celleimmunitet mot disse antigener når de injiseres in vivo til mennesker.
På den annen side er det vist at celledialysater erholdt fra human-eller animal-lymfoidceller sensitisert for et gitt anti-gen, så vel som fra induserte LDV/7-celler var i stand til å indusere "naive" LDV/7-celler til å produsere nukleinsyrer som var i stand til å overføre immun reaktivitet spesifikk for disse antigener. Det blé ytterligere funnet at LDV/7-cellene etter indusering med disse "immune" nukleinsyrer, og/eller celledialysater ville produsere antigelegemer spesifikke for de antigener mot hvilke lymfoidcelléne, som danner de immune nukleinsyrer eller de immune celledialysater var sensitisert. Antilegemene ble gjenvunnet fra supernatantene fra disse kulturer, men i tillegg inneholdt disse supernatanter materiale som kunne anvendes for å indusere "naive" lymfoidceller til å produsere immune nukelinsyrer og immune celledialysater for den samme antigene spesifisitet mot hvilke cellene som danner supernatantene var sensitisert. Fremstillingen av immune materialer, som beskrevet ovenfor, er også beskrevet og krevd i norsk patentsøknad nr. 77.4311. LDV/7-cellene er deponert i Laboratoire d'Immonobiologie, Faculté de Médecine Broussais Hdtel-Dieu, 15, rue de 1'Ecole de Médecine, Paris 75006 og er tilgjengelige på anmodning.

Claims (19)

1. Et kutlursystem av celler i et næringsmedium, karakterisert ved at cellene er av cellelinjen identifisert med henvisningstallet LDV/7.
2. Cellekultursystérrrif ølge" krav"l; karakterisert ved at cellekulturen foreligger i form av en suspensjonskultur.
3. Cellekultursystem ifølge krav 2, karakterisert ved at næringsmediet for suspensjonskulturen er I RPMI 1640-medium inneholdende 5 - 30% kalvefosterserum.
4. Cellekultursystem ifølge krav 3, karakterisert ved at RPMI 1640-mediet inneholder 10% kalvefosterserum.
5. Cellekultursystem ifølge krav 2, karakterisert ved at næringsmediet for suspensjonskulturen er McCoy <1> s eller Eagle's Essential Medium.
6. Cellekultursystem ifølge kravene 2-5, karakterisert ved at kultursystemet foreligger i form av en spinnekultur.
7. ■ Cellekultursystem ifølge kravene 2-5, karakterisert ved at kultursystemet foreligger i form av en statisk kultur.
8. Cellekultursystem ifølge krav 1, karakterisert ved at næringsmediet er agar.
9. Fremgangsmåte ved formering av celler i et kultursystem, karakterisert ved at céller av cellelinjen identifisert med henvisningstallet LDV/7 kultiveres i et næringsmedium derfor.
10. Fremgangsmåte ifølge krav 9, karakterisert ved at kultiveringen utføres i en suspensjonskultur.
11. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert ved ' at det som næringskulturmedium for suspensjonskulturen anvendes RPMI 1640-medium inneholdende 5 - 30% kalvefosterserum.
12. Fremgangsmåte ifølge krav 11, karakterisert ved at det anvendes et RPMI 16 40-medium inneholdende 10% kalvefosterserum.
13. Fremgangsmåte ifølge krav 10, karakterisert ved at det som næringskulturmedium for suspensjonskulturen anvendes McCoy's eller Eagle's Essential Medium.
14. Fremgangsmåte ifølge kravene 10-13, karakterisert ved at cellene formeres i en spinnekultur.
15. Fremgangsmåte ifølge kravene 10-13, karakterisert ved at cellene formeres i en statisk kultur.
16. Fremgangsmåte ifølge krav 15, karakterisert ved at cellene subkultiveres når en cellekon-sentrasjon på 10 g celler/ml er oppnådd.
17. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at cellene subkultiveres når en cellekon-sentrasjon på 1,5 x 10 celler/ml er oppnådd..
18. Fremgangsmåte ifølge kravene 16-17, karakterisert ved at det anvendes 5 x 10^ celler/ml for poding av subkulturen.
19. Fremgangsmåte ifølge kravene 9-18, karakterisert ved at formeringen utføres ved 37°C.
NO774312A 1976-12-16 1977-12-14 Ne ny cellelinje, samt fremgangsmaate for viderefoering av den NO774312L (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB52675/76A GB1592954A (en) 1976-12-16 1976-12-16 Cell line

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NO774312L true NO774312L (no) 1978-06-19

Family

ID=10464838

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO774312A NO774312L (no) 1976-12-16 1977-12-14 Ne ny cellelinje, samt fremgangsmaate for viderefoering av den

Country Status (13)

Country Link
US (1) US4316962A (no)
JP (1) JPS5386077A (no)
AT (1) AT353408B (no)
BE (1) BE861858A (no)
CA (1) CA1117044A (no)
DK (1) DK557577A (no)
ES (1) ES465060A1 (no)
FI (1) FI773785A7 (no)
FR (1) FR2374418A1 (no)
GB (1) GB1592954A (no)
LU (1) LU78689A1 (no)
NL (1) NL7713834A (no)
NO (1) NO774312L (no)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8614733D0 (en) * 1986-06-17 1986-07-23 Lefesvre A Aids treatment
WO2001021792A1 (en) * 1999-09-21 2001-03-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Transporter genes oatp-b, c, d and e

Also Published As

Publication number Publication date
US4316962A (en) 1982-02-23
FR2374418B3 (no) 1981-02-06
NL7713834A (nl) 1978-06-20
LU78689A1 (fr) 1979-06-13
DK557577A (da) 1978-06-17
AT353408B (de) 1979-11-12
ES465060A1 (es) 1978-09-01
ATA895077A (de) 1979-04-15
BE861858A (fr) 1978-06-14
JPS5386077A (en) 1978-07-29
FI773785A7 (fi) 1978-06-17
GB1592954A (en) 1981-07-15
FR2374418A1 (fr) 1978-07-13
CA1117044A (en) 1982-01-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Siegel Hereditary endosymbiosis in Paramecium bursaria
von Ehrenstein [76] Isolation of sRNA from intact Escherichia coli cells
Pontén Neoplastic human glia cells in culture
EP0014519B1 (en) Cell lines, process for preparing them and process for producing antibodies
EP0043718A2 (en) Improvements in or relating to cell lines
NO774311L (no) Fremgangsmaate ved fremstilling av immunologiske materialer
Barski et al. Malignant transformation in vitro of cells from C57BL mouse normal pulmonary tissue
Evans et al. Effect of Serum on Spontaneous Neoplastic Transformations In Vitro ¹
Gabelman et al. Appearance of C‐type virus‐like particles after co‐cultivation of a human tumor‐cell line with rat (XC) cells
Minowada et al. Studies of Burkitt lymphoma cells. I. Establishment of a cell line (B35M) and its characteristics
Högman Blood group antigens on human cells in tissue culture: The effect of prolonged cultivation
DK0460414T3 (da) Dyrknings- og detektionsfremgangsmåde til sterilfiltrerbare, autonomt replikerende biologiske partikler
US3887430A (en) Culture medium for tissue culture techniques
JPH0588116B2 (no)
Massicot et al. Cell line derived from a murine sarcoma virus (Moloney pseudotype)-induced tumor: cultural, antigenic, and virological properties
GB2153364A (en) Lymphokine, monoclonal antibody specific to the lymphokine, and their production and uses
Kurnit et al. Variable satellite DNA's in the African green monkey Cercopithecus aethiops
IE47060B1 (en) Process for the cultivation of viruses
WATANABE et al. Virus-specific proteins produced in HeLa cells infected with poliovirus: characterization of subunit-like protein
Olsen et al. Influence of culture conditions on growth of FL-74 cells and feline oncornavirus cell membrane associated antigen production
NO310305B1 (no) Matrise med adherent bundede celler, samt fremgangsmåte ved fremstilling av forsommer-meningo-encefalitis-(FSME)-virus-antigen
Takemoto et al. Hamster tumor cells doubly transformed by SV40 and polyoma viruses
US4316962A (en) Novel cell line
EP0251106A2 (en) Improved fusion method
Appella et al. Biological and biochemical properties of soluble tumor-specific transplantation antigen of a simian virus 40-induced neoplasm