NO813087L - Fremgangsmaate ved fremstilling av herpes simplex type i-vaksine - Google Patents
Fremgangsmaate ved fremstilling av herpes simplex type i-vaksineInfo
- Publication number
- NO813087L NO813087L NO813087A NO813087A NO813087L NO 813087 L NO813087 L NO 813087L NO 813087 A NO813087 A NO 813087A NO 813087 A NO813087 A NO 813087A NO 813087 L NO813087 L NO 813087L
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- extract
- vaccine
- herpes simplex
- simplex type
- dna
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 25
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 title abstract 2
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 11
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 5
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 27
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 21
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 21
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 21
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 15
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 14
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 claims description 4
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 claims description 4
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 4
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000011800 void material Substances 0.000 claims description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 7
- 210000003837 chick embryo Anatomy 0.000 abstract description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 10
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 7
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 5
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 5
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 4
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 4
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 4
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 2
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 2
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 1
- 241000269350 Anura Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000025157 Oral disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000282520 Papio Species 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 alkali metal hydrogen phosphate salt Chemical class 0.000 description 1
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 210000000991 chicken egg Anatomy 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 231100000590 oncogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002246 oncogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000004894 snout Anatomy 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000007143 thioglycolate medium Substances 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
- C12N2710/16634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår fremstilling av en herpesvirus subenhetvaksine, og særlig en Herpes simplex type 1 vaksine.
Herpesvirus er allestedsnærværende i naturen, og naturlige verter innbefatter frosk, kylling, mus, marsvin, katt,, hund, svin, kveg, hest, ape og menneske. Mennesket er den naturlige vert for Herpes simplex type 1, varicella zoster, cytomegalovirus og Epstein-Barr. Klinisk sykdom fremkaldt av herpesvirus utgjør et betydelig helseproblem overfor hvilket intet effektivt forebyggende middel er tilgjengelig.. Herpes simplex type 1 (HSV1) overføres ved den orale-respiratoriske vei og er hyppig forbundet ned orale lesjoner.
Medlemmer av herpesvirusgruppen er relativt store omhyllende ether-følsomme DNA vira. Herpes simplex type 1 vira har karakteristisk vist seg å inneholde to dominerende mole-kylvektgrupper av omhyllende glycoproteiner.
Herpesvira utgjør entydige og- individuelle problemer for vaksineutvikling, særlig for bruk i mennesket. Generelt fremstilles virale vaksiner-, enten levende svekkede vaksiner eller drepte, inaktiverte vaksiner, av virus inneholdt i dyre-vertvæsker celledyrkningsvæsker eller virale konsentrater av-ledet derfra. Imidlertid er herpesvira generelt tilbøyelig til å være mer celle-assosiert enn mange andre vira, dvs. at de ikke spredes i væskene, og spesielt énkelte medlemmer av gruppen formerer seg ikke lett til det høye nivå av virus som kreves for fremstilling av vaksiner i stor skala. I tillegg er visse herpesvira mistenkt for å være onkogen for mennesket. Fremstilling av vaksiner av slike vira representerer et spesielt problem ved at vaksinen må være fri for enhver viral genetisk informasjon som er istand til å fremkalle kreft. Selv inaktiverte helvirusvaksiner betraktes som potensielt farlige i slike tilfeller, fordi de inneholder viral nucleinsyre. Ny-lig har anstrengelser mot forbedrede virale vaksiner ført til utvikling av subenhet eller "split" vaksiner 'for å redusere eller fjerne uønsket vert eller viralkomponenter i vaksinen. Et eksempel er fremstilling av influensaviralsubenhetvaksine fra infisert kyllingegg allantoinvæske for å redusere toksi-siteten og pyrogenisiteten som beskrevet i USA patentskrift nr. 3.962.421. Imidlertid har slike subenhetvaksiner ikke fremhevet eller demonstrert fjerning og/eller deaktivering av viral genetisk informasjon som. behøves for vira som mis-tenkes for å spille en ethiologisk rolle ved kreft.
Et mål med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe et subenhetantigen for et herpes simplex type 1 virus. Et annet mål er å tilveiebringe et immunogent, men ikke-patogent herpes simplex type 1 subenhet antigen. Et ytterligere mål er å tilveiebringe et herpes subenhet antigen som kan anvendes som en vaksine som beskytter en pasient mot virkningene av denne virus både ved begynnelsesutfordring og etterføl-gende utfordring. Et ytterligere mål er å tilveiebringe en metode for effektivt å oppløseliggjøre og ekstrahere ikke-patogene immunogene antigener fra virus-infiserte celler. Et ytterligere mål er å tilveiebringe en fremgangsmåte for konsentrering av disse antigener og for å fjerne uønsket protein og nucleinsyre. Et ytterligere mål ér å tilveiebringe preparater inneholdende et herpes simplex type 1 subenhet virus som er stabilt og lagringsbart. Et ytterligere mål er å tilveiebringe . fysiologisk akseptable preparater for administrer-ing av en herpes simplex type 1 subenhet vaksine.'Disse og .., andre mål ved oppfinnelsen fremgår av den etterfølgende be-skrivelse.
Primære kyllingfosterceller infisert med HSVl fremstilles og underkastes følgende sekvens av operasjoner for å ekstrahere og konsentrere de ikke-patogene, immunogene antigener, separere disse fra uønsket materiale og behandle dem for å gjøre dem tilfredsstillende for bruk som en vaksine: (1) de infiserte celler ekstraheres med urea mens cellene fremdeles er festet til vekstoverflaten,
(2) ureaekstrakten renses, konsentreres og inaktiveres,
(3) den inaktiverte ekstrakt behandles for å separere immunogene fraksjoner. ' . :;
Ifølge oppfinnelsen er utgangsmaterialet herpes simplex virustype 1 (HSVl) infiserte celler formert i cellekultur. Cellen kan være hvilken som helst celle som er istand til å infiseres med HSVl og produsere de ønskede virale antigener, og som betraktes som akseptable for fremstilling av en vaksine. For HSVl vaksiner for mennesket er f.eks. et egnet celle-' dyrkningssystem primære kyllingfosterceller formert som mono-lag i riilleflasker ved prosedyrer vanlig anvendt av fagmannen.. Cellene infiseres med HSVl virus ved en lav infeksjonsmulti-plisitet (MOI, dvs. antall viruspartikler pr. celle), slik som en MOI på fra 0,001 til 1.0, fortrinnsvis ca. 0.01, ved teknikker som vanligvis anvendes av fagmannen, og kulturene inkuberes inntil viral cytopathogen effekt observeres i en stor andel av cellene, typisk ca. 75 % av cellene. Ved slutten av inkubasjonsperioden fjernes celledyrkningsmediet,'og cellemonolaget vaskes eventuelt med en saltoppløsning, f.eks. fosfatbufret saltvann (TBS) .
HSVl subenhetantigener ekstraheres derefter direkte fra cellene bundet til vekstoverflaten ved behandling av cellene med en vandig ureaoppløsning, f.eks. en oppløsning i PBS eller vann inneholdende urea i konsentrasjon på minst 2M, ved forhøyet temperatur i opptil flere timer. Ureakonsentrasjo-nen kan være fra 2M til 8M, fortrinnsvis ca. 4M. Ekstraksjo-nen finner fortrinnsvis sted under omrøring. De forhøyede temperaturer kan være fra 30 til 45°C. Ekstrasjonstiden kan være fra en 1/2 time til 5 timer. Enten en enkel kontinuerlig eller flere suksessive ekstraksjoner kan utføres. Direkte kjemisk ekstraksjon av de intakte monolagcellekulturer. gir en signifikant praktisk fordel for' vaksinefremstiIling i stor skala, da det ikke krever mekanisk fjerning av cellene fra cellevekstoverflaten.. Den er også blitt funnet å gi et høye-re proteinutbytte ved nedsettelse av tap innbefattet i mekanisk høsting av celler. Under omhyggelig regulerte betingelser forbedrer denne prosedyre antigenrenhetV:ed selektiv ekstraksjon av antigener.
Ureaekstraktne klargjøres derefter, f.eks. ved sentri-. fugering eller filtrering, og den overflytende væske konsentreres derefter for å redusere væskevolumet. Fortrinnsvis reduseres til fra 1/10 til 1/100 eller mer av det opprinneli ge volum. Konsentratet er valgfritt, men fortrinnsvis homo-genisert og inaktivert, f.eks. ved lydbehandling eller behandling med en detergent. Forbedrede utbytter erholdes ved oppvarmning av det inaktiverte konsentrat til fra 50 til 7 5°C, f.eks. ved behandling i et vannbad.
Konsentratet behandles derefter for å fjerne DNA, f.eks. ved behandling med et enzym som nedbryter DNA, slik som DNase for å hydrolysere DNA, og fraksjoneres kromatografisk for å separere immunogene fraksjoner.. De immunogene fraksjoner oppsamles og kan eventuelt, men fortrinnsvis homogen-iseres og sterilfiltreres. Det endelige produkt kan ytterligere behandles ved tilsetning av formalin til en konsentrasjon på 90 - 100 /^g/ml og ved tilsetning av thimerosal (1:20000 vol/vol) for ytterligere å sikre mot nærvær av.in-feksiøse vira.
Herpes simplex type 1 immunogene antigener ifølge oppfinnelsen er immunogene i pattedyrartér, f.eks. mus, marsvin og bavianer, og er nyttige som en vaksine i en immunologisk effektiv mengde for å beskytte mot herpes simplex type 1.
De immunogene antigener ifølge oppfinnelsen kan administreres på en hvilken som helst hensiktsmessig måte, f..eks. subcutant, ,,intraperi tonalt, eller intramuskulært, i nærvær av et fysio-logisk akseptabelt fortynningsmiddel, i et doseområde på fra 0. 1 til .100^g/dose, fortrinnsvis fra 5 til 50 ywg/dose, for å oppnå den ønskede immunogene effekt. Antigenene kan administreres i en enkel dose eller i flere doser ved intervaller på flere uker eller mer.
De immunogene antigener ifølge oppfinnelsen kan administreres om ønsket i kombinasjon med vaksinestabilisatorer og vaksinehjelpestoffer. Typiske stabilisatorer er f.eks. suc-rose, et alkalimetallhydrogenfosfatsalt, glutamat, serum al-bumin, gelatin eller kasein. Stabilisatoren kan være én eller flere av de foregående. Hjelpestoffet kan f.eks. være. alun eller en sammensetning inneholdende en'vegetabilsk olje, 1. somannid monooleat og aluminium monostearat.. De immunogene antigener ifølge oppfinnelsen kan lagres under kjøling eller i frosset, eller lyofili.sert tilstand.
Det immunogene antigen ifølge oppfinnelsen inneholder
5 eller 6 bånd med minimum molekylvekt større enn 68000 dalton som bestemt på SDS gel-elektroforese. Det intakte antigene produkt har en molekylvekt større enn 1 x 10 dalton som bestemt på Sephadex ®6B-C1 gelelektroforese. Det antigene prai.uKt er hovedsakelig fritt for glycoprotein (intet glycoprotein påvist ved 230/xg protein/gel og for DNA (intet påvist ved minimum sensitivitet på 5Q ^g/ml). Det antigene produkt inneholder fra 0,1 til 0,7 yUg carbohydrat pr. 1fxq protein, og inneholder et lipid bånd med en molekylvekt mellom 60000 og 70000 dalton som bestemt ved SDS gelelektroforese.
Dé etterfølgende eksempler illustrerer oppfinnelsen. Alle temperaturer er uttrykt i °C.
EKSEMPEL 1
Et celleark av kyllingfosterceller dyrket i rulleflas-ker ble infisert den fjerde dag efter plantning med herpes simplex type 1 virus. Seks dager efter infeksjon ble cellene vasket med 30 ml PBS pr. liter flaske. Viruset ble ekstrahert fra cellene ved behandling av cellene med 4M urea i PBS i 75 .minutter ved 37°C mens flaskene roterte. Ureaen kan også fo-religge i vann. Ca.' 25 ml av ureaoppløsningen anvendes pr. liter flaske. Ureaoppløsningen steriliseres før bruk ved steril filtrering gjennom et 0,22/U Millipore w 293 mm filter. En annen ekstraksjon under lignende betingelser utføres, og de to ureaekstrakter kombineres og klargjøres ved sentrifugering ved 14000 x g i 10 minutter med en kontinuerlig DeLaval strømningssentrifuge.
Den overliggende væske konsentreres 85 ganger ved romtemperatur på "Amicon" Model TCID magasinfilterenheter, be-stående av''<:>fem 150 mm XM-100 filterputer. Dette konsentrat konsentreres ytterligere til en 450 gangers sluttkonsentra-
'i
sjon ved romtemperatur på en "Amicon" Model 2000 omrørt fil-terenhet under anvendelse av et SM-100 "Amicon" 150 mm's filter ved romtemperatur. Efter konsentrering skylles filteret med 20 ml eluat, som derefter tilsettes til konsentratet.
Derefter lydbehandles konsentratet,3 minutter ved 60 % av maksimal krav ved en høyfrekvens prøvesonikator ("Biosonic II") i et isbad. Det lydbehandlede materiale oppvarmes i et 60°<1>s vannbad 3 timer, avkjøles derefter til romtemperatur.
Konsentratet behandles derefter med DNase ved en konsentrasjon på 10 g/ml + 0.01 M MgCl.2i 3 timer ved romtemperatur og over natten ved 4°C. Det DNase-behandlede konsentrat fylles derefter på en 10 cm x 1000 cm Pharmacia wko-lonne pakket med B10-gel A-5M eller Sephadex ® 6b-Cl og gelkromatograferes ved romtemperatur. Fraksjonering overvåkes ved ultrafiolett adsorpsjon. Fraksjonene ved tomt volum (void volume) oppsamles og lydbehandles med en sondesonicator i et isbad. Det lydbehandlede materiale filtreres derefter : gjennom et 0,45^ Gelman filter av egnet størrelse, under, dannelse av et sterilt produkt som lagres ved 4°C. Slutt-produktet testes sterilt i thioglycolatmedium, 1 ml produkt pr. 15 ml medium, og inkuberes ved 32°C i 5 dager.
Produktet undersøkes derefter med hensyn til nærvær av nucleinsyre ved en fluorpmetrisk metode under anvendelse av ethidiumbromid, Analytical Biochemistry 46, 135-145 (1972). Produktets proteinkonsentrasjon bestemmes ved Lowry-metoden, Anal. Biochemistry 48, 422-427 (1972). Carbohydrater bestemmes kvantitativt ved fenolsvovelsyremetoden, Anal. Biochemistry 28, 350 (1956). Lipidinnholdet identifiseres efter SDS polyacrylamidgelelektroforese ved.beising med Sudan Black, Bull. Soc. Chim. Biol. 51:1367 (1969). SDS gel-elektroforese anvendes også for bestemmelse av antallet av minimum molekylvekt.peptider tilstede i det endelige produkt med Coomassie Blue, Journal of Biological Chemistry 244, 4406 (1969). Det testes også for. glycoproteininnholdet under anvendelse av periodisk syre-Schiff's beis, Methods in Enzymology. XXXII, sider 92 - 102, Academic Press. Produktet undersøkes ennvidere både ved rakett (rocket) immunoelektroforese og immunoelektroforese for nærværet av kyllingcelle-protein, Manual for Quantitative Immunoelektrophoresis,. ed. Axelson et al., Scand. Journal of Immunology 2 suppl. 1, 37-46 (197 3) for rakett immunoelektroforese, og immunoelektroforese (IEP), HylandDiagnostics, Div. Travenol Latoratories, Inc. Deerfield, Illinois 60015 for immunoelektroforese, og kvantitativt for ethvert utfellende antigen under anvendelse av antistoff fremstilt i kaniner. En elektronmikroskop-opp-tegnelse gjøres på det endelige produkt..
Produktet behandles eventuelt med formalin i 72 timer ved 37°C og med thimerosal (1:20000). Ved slutten av forma-linbehandlingen nøytraliseres overskudd formaldehyd med NaHSO^. En steril suspensjon inneholdende 30 ml PBS, 2 ml 10 %'s
NaPO^og 2,5 ml 10 %'s alun sentrifugeres ved 3000 x G. Den overliggende væske dekanteres, og 30 roi av produktet tilsettes til bunnfallet under omrøring ved romtemperatur 2 timer. Det absorberte produkt sentrifugeres i en klinisk sentrifuge. Den overliggende væske fjernes, og bunnfallet resuspenderes til det opprinnelige volum med fosfatbufret saltvann. Mengden av adsorbert protein bestemm.es av proteinmengden tilbake uadsor-bert i den overflytende væske. Det alunadsorberte produkt lagres ved 4°C.
EKSEMPEL 2
To grupper av ICR/Ha mus, 20 mus pr. gruppe, ble injisert intraperitonalt (i.p.) med to 0,5 ml injeksjoner på dager '0 og 30 med enten 0,5 ml av det alunadsorberte produkt ifølge eksempel 1 eller placebo. Hver 0,5 ml dose av det alunadsorberte produkt ifølge eksempel 1 'inneholder 20^g av HSV-1 subenhet antigen. En tredje gruppe på 5 mus mottok ingen behandling. Den 44. dag ble musene i alle grupper utfordret ved infeksjon med 0,5 ml av en 10 3 fortynning med HSV-1 (Schooler stamme) intraperitonalt, og ble overvåket med hensyn ti 1.overlevelse de neste 21. dager. Blant de mus som mottok subenhet antigen ifølge eksempel 1, var 19 (95 %)
ilive den 6.5. dag, mens bare 3 (15 %) av gruppen som mottok placebo var ilive. Ingen av gruppen som ikke mpttok noen behandling var ilive.:i
EKSEMPEL 3 '
En gruppe på 20 mus, varierende i alder fra 3 til 12 uker, og varierende i vekt på fra 20 til :35 g, ble injisert intraperitonalt (i.p.) med to 0,5 ml doser av det alun-adsor- berte produkt ifølge eksempel 1 (20/.<g/dyr) ved 1 måneds in-tervall. En annen.gruppe på 20 mus mottok en placebo, og en tredje gruppe på 37 mus mottok ingen behandling. To uker efter siste injeksjon ble musene utfordret med herpes simplex type 1, Schooler stamme, (ca. 2 x 10 5 plateformede enheter) ved påføring på den bare snute.- To mus av placebogruppen dø-de før utfordring. Atten dager efter infeksjon var 17 mus
(85 %) ilive i første gruppe, og totalt 35 mus (64 %) var ilive av de 55 mus som ble utfordret fra placebogruppen og grup-pene uten behandling.
Claims (11)
1. En herpes simplex type 1 subenhetvaksine, fremstilt ved ekstrahering av celler infisert med herpes simplex type 1 virus med urea, mens cellene er festet til vekstoverflaten, klargjøring av ekstrakten, konsentréring av ekstrakten, og behandling av ekstrak'ten for å fjerne hovedsakelig all DNA.
2. Vaksine ifølge krav 1, karakterisert ved at urea har en konsentrasjon på fra 2M til 8M.
3. Vaksine ifølge krav 1, karakterisert ved at ureaekstrakten klargjøres ved sentrifugering eller filtrering.
4. Vaksine ifølge krav 1, karakterisert ved at den klarede ekstrakt konsentreres ved filtrering.
5. Vaksine ifølge krav 1, karakterisert ved at DNA fjernes ved behandling med et enzym som nedbryter DNA.
6. Vaksine ifølge krav 5, karakterisert ved at enzymet er DNase.
7. Vaksine ifølge krav 1, karakterisert ved at ekstrakten efter fjerning av DNA gelkromatograferes.
8. Vaksine ifølge krav 7, karakterisert ved at fraksjonene ved tomt volum (void volume) oppsamles og ste-rilf iltreres ~.
9. Vaksine ifølge krav 8,- karakterisert ved at fraksjonene lydbehandles før filtrering.
10. Herpes simplex type 1 vaksine, karakterisert ved at den omfatteren immunologisk effektiv mengde a\sr et immunogent antigen med en molekylvekt større enn 1 x IO6 dalton og omfattende 5 eller 6 bånd med minimum molekylvekt større enn 6 8000 dalton, hvor antigenet er hovedsakelig fritt for glycoprotein og DNA, og inneholdende fra ;,0,l til 0,7JU q carbphydrat pr. 1/ xg protein, og inneholdende et lipidbånd med en molekylvekt mellom 60000 og 70000 dalton, bg et fysio-logisk akseptabelt fortynningsmiddel.
11. Fremgangsmåte for fremstilling av en herpes simplex type 1 subenhetvaksine, karakterisert ved at celler infisert med herpes simplex type 1 virus ekstraheres med urea mens cellene er festet til vekstoverflaten, ekstrakten klargjøres, ekstrakten konsentreres, og behandles for fjerne hovedsakelig alt DNA.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/186,365 US4317811A (en) | 1980-09-11 | 1980-09-11 | Herpes simplex type 1 subunit vaccine |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO813087L true NO813087L (no) | 1982-03-12 |
Family
ID=22684654
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO813087A NO813087L (no) | 1980-09-11 | 1981-09-10 | Fremgangsmaate ved fremstilling av herpes simplex type i-vaksine |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4317811A (no) |
| EP (1) | EP0048201B1 (no) |
| JP (1) | JPS5780326A (no) |
| AT (1) | ATE12583T1 (no) |
| CA (1) | CA1174599A (no) |
| DE (1) | DE3169848D1 (no) |
| DK (1) | DK401981A (no) |
| FI (1) | FI73596C (no) |
| IE (1) | IE51553B1 (no) |
| NO (1) | NO813087L (no) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4388035A (en) * | 1979-08-01 | 1983-06-14 | Bud Antle, Inc. | Dibble tube soil plug planter |
| US4540669A (en) * | 1980-09-11 | 1985-09-10 | Merck & Co., Inc. | Herpes simplex type I subunit vaccine |
| US4554159A (en) * | 1981-11-12 | 1985-11-19 | Institute Merieux | Vaccine and method of immunizing against herpes simplex virus (types 1 and 2) |
| DE3378611D1 (en) * | 1982-03-24 | 1989-01-12 | Univ Birmingham | Vaccine against dna viruses |
| CA1201987A (en) * | 1982-03-24 | 1986-03-18 | Gordon R.B. Skinner | Vaccine against dna viruses |
| NZ209308A (en) * | 1983-08-30 | 1991-08-27 | Genentech Inc | Vaccine against hsv involving a truncated membrane-free derivative of a membrane-bound protein |
| US7264817B1 (en) | 1983-08-30 | 2007-09-04 | Genentech, Inc. | Immunogenic composition based on a truncated derivative of a membrane bound protein and process for making it |
| JPS6051120A (ja) * | 1983-08-31 | 1985-03-22 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 単純ヘルペスサブユニットワクチン |
| US5171568A (en) * | 1984-04-06 | 1992-12-15 | Chiron Corporation | Recombinant herpes simplex gb-gd vaccine |
| US5244792A (en) * | 1984-04-06 | 1993-09-14 | Chiron Corporation | Expression of recombinant glyoprotein B from herpes simplex virus |
| US4618578A (en) * | 1984-07-17 | 1986-10-21 | Chiron Corporation | Expression of glycoprotein D of herpes simplex virus |
| US5612041A (en) * | 1984-07-17 | 1997-03-18 | Chiron Corporation | Recombinant herpes simplex gD vaccine |
| JPS6153226A (ja) * | 1984-08-24 | 1986-03-17 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 単純ヘルペスサブユニツトワクチンの精製方法 |
| US4761470A (en) * | 1985-12-16 | 1988-08-02 | Merck & Co., Inc. | Immunogenic synthetic peptide capable of eliciting herpes simplex virus neutralizing antibody |
| US5955088A (en) * | 1992-02-03 | 1999-09-21 | Cedars-Sinai Medical Center | Pharmaceutical compsition of herpes simplex virus type-1 (HSV-1), glycoproteins |
| TW570803B (en) * | 1997-04-09 | 2004-01-11 | Duphar Int Res | Influenza vaccine |
| EP1027426A4 (en) * | 1997-10-31 | 2006-04-19 | Merck & Co Inc | METHOD FOR IMPROVED MIXING OF A VARICELLA INFECTED CELL CULTURE IN ROLL BOTTLES |
| US20030045467A1 (en) * | 2001-01-05 | 2003-03-06 | Tihamer Orban | Autoantigen composition |
| RU2225223C1 (ru) * | 2002-06-14 | 2004-03-10 | Закрытое акционерное общество Фирма "ВИТАФАРМА" | Лиофилизированная антигерпетическая вакцина |
| WO2007127787A2 (en) * | 2006-04-25 | 2007-11-08 | Joslin Diabetes Center, Inc. | Insulin autoantigen-specific regulatory cd4+ t cells |
| RU2552341C1 (ru) * | 2014-02-26 | 2015-06-10 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов" Федерального медико-биологического агентства (ФГУП СПбНИИВС ФМБА России) | Фармацевтическая композиция для получения антигерпетической поливакцины и лекарственной формы на ее основе |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1316588A (en) | 1970-08-15 | 1973-05-09 | Beecham Group Ltd | Recovery of virus particles |
| DE2215728C3 (de) | 1972-03-30 | 1979-02-15 | Stickl, Helmut, Prof. Dr.Med., 8033 Krailling | Arzneimittel zur Behandlung von Herpes simplex |
| FI66020C (fi) * | 1977-09-19 | 1984-08-10 | Merck & Co Inc | Foerfarande foer framstaellning av antigeniska immunogeniska subunits av hsv-1 och hsv-2 |
| DE2848965A1 (de) | 1978-11-11 | 1980-05-22 | Behringwerke Ag | Verfahren zur herstellung von membranproteinen aus neisseria meningitidis und diese enthaltende vaccine |
-
1980
- 1980-09-11 US US06/186,365 patent/US4317811A/en not_active Expired - Lifetime
-
1981
- 1981-09-02 FI FI812704A patent/FI73596C/fi not_active IP Right Cessation
- 1981-09-09 CA CA000385518A patent/CA1174599A/en not_active Expired
- 1981-09-09 IE IE2096/81A patent/IE51553B1/en unknown
- 1981-09-10 EP EP19810401407 patent/EP0048201B1/en not_active Expired
- 1981-09-10 NO NO813087A patent/NO813087L/no unknown
- 1981-09-10 DK DK401981A patent/DK401981A/da not_active Application Discontinuation
- 1981-09-10 AT AT81401407T patent/ATE12583T1/de not_active IP Right Cessation
- 1981-09-10 DE DE8181401407T patent/DE3169848D1/de not_active Expired
- 1981-09-11 JP JP14372681A patent/JPS5780326A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0048201A2 (en) | 1982-03-24 |
| DE3169848D1 (en) | 1985-05-15 |
| ATE12583T1 (de) | 1985-04-15 |
| US4317811A (en) | 1982-03-02 |
| CA1174599A (en) | 1984-09-18 |
| EP0048201A3 (en) | 1982-09-15 |
| EP0048201B1 (en) | 1985-04-10 |
| FI73596C (fi) | 1987-11-09 |
| IE812096L (en) | 1982-03-11 |
| IE51553B1 (en) | 1987-01-07 |
| FI812704L (fi) | 1982-03-12 |
| JPS5780326A (en) | 1982-05-19 |
| DK401981A (da) | 1982-03-12 |
| FI73596B (fi) | 1987-07-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO813087L (no) | Fremgangsmaate ved fremstilling av herpes simplex type i-vaksine | |
| US6048537A (en) | Method for preparing an influenza virus, antigens obtained and applications thereof | |
| US4452734A (en) | Herpes subunit vaccine | |
| US4374127A (en) | Herpes sub unit vaccine | |
| CN113308441B (zh) | 一株猫疱疹病毒i型病毒株及其应用 | |
| FI85222B (fi) | Hund parvovirusstam och foerfarande foer framstaellning av ett hund parvovirusvaccin. | |
| NO153692B (no) | Fremgangsmaate ved fremstilling av en antigen, immunogen subenhet av herpes simplex type 1 (hsv1) eller type 2 subenhet (hsv2) | |
| Cappel et al. | Clinical efficacy of a herpes simplex subunit vaccine | |
| CN104056265B (zh) | 猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征二联疫苗及其制备方法 | |
| RU2378014C2 (ru) | Ассоциированная вакцина против парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита и коронавирусной инфекции крупного рогатого скота эмульсионная инактивированная | |
| CN101730544A (zh) | Pitman moore狂犬病病毒株对原代鸡胚成纤维细胞培养物的适应方法 | |
| HU200696B (en) | Process for producing combined vaccine | |
| US4540669A (en) | Herpes simplex type I subunit vaccine | |
| van den Hurk | Protection of turkeys against haemorrhagic enteritis by monoclonal antibody and hexon immunization | |
| CN106563125A (zh) | 鸭甲肝病毒ⅲ型复合物活疫苗及其制备方法 | |
| US4215107A (en) | Parainfluenza virus vaccine and its preparation | |
| US3098011A (en) | Process of producing a vaccine against distemper | |
| CN116375850A (zh) | 一种鸭坦布苏病毒病、鸭病毒性肝炎病毒二联三价卵黄抗体的制备方法和应用 | |
| WO2005062709A2 (en) | Integrated viral complexes, methods of production thereof, vaccines containing same and methods of use thereof | |
| RU2294760C2 (ru) | Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а | |
| RU2144562C1 (ru) | Штамм "вниизж/№ 110" вируса герпеса индеек для изготовления вакцины против болезни марека | |
| Kavaklova et al. | Preparation and efficacy of antiherpes type 1 and 2 subunit vaccines | |
| US3432391A (en) | Attenuated infectious canine hepatitis live virus vaccine and method of producing same | |
| Kazár et al. | Failure of Q fever phase I corpuscular vaccine to influence the persistence and reactivation of Coxiella burnetii infection in mouse and guinea pig tissues. | |
| RU2279474C1 (ru) | Штамм тк-а/к вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота для изготовления вакцинных и диагностических препаратов |