NO844224L - Mikrobiell enzymatisk kontaktlinserenser og dens anvendelse - Google Patents

Description

Foreliggende oppfinnelse angår generelt linserensemiddelsammen-setninger og deres anvendelse. Mere spesielt angår oppfinnelsen nye enzymrensemidler og metoder for effektiv fjerning av film-oppbygning og avfall fra kontaktlinser som kan være tilstede som proteinholdig-karbohydrat-lipidholdige avsetninger.

Rensemiddelsammensetninger for kontaktlinser faller generelt

innen en av tre kategorier: overflateaktiv rensemidler; oksyda-tiv rensemidler og enzymatisk rensemidler. Overflateaktive rensemidler er hyppig benyttet, f. eks. ved anvendelse av en dråpe av en oppløsning på en linse, gnidning av linsen mellom fingrene fulgt av skylling. Selv om slike rensemidler vanligvis er sikre og ikke skadelige for linsene når de brukes riktig, er de fleste overflateaktive rensemidler ikke helt effektive når det gjelder fjerning av proteinavsetninger.

Den andre type rensemiddelsystem involverer oksydative produkt-

er inneholdende f. eks. persulfater og perborater. De kan benyttes enten ved koldneddypping eller med koking i ca. 30 minutter. Denne ytpe rensemiddelsystem er hovedsakelig effektiv for fjerning av ikke-proteinavsetninger fra kontaktlinser. De er generelt ikke-toksiske, imidlertid kan oksydasjonsmidler ha en ugunstig virkning på linser. En mulig forklaring er at de kan oksydere den prinsippielle polymerkjede ved innføring av pH-føl-'somme molekylgrupper.

Den tredje metode for rensing er med enzymer. Enzymrensemidler ansees generelt som effektive, sikre og istand til å fjerne hovedkomponenten av kompaktlinsefilm og avfall, nemlig protein. Enkelte har også evnen til å fjerne karbohydrat- og lipidavsetninger fra kontaktlinser.

Hittil var tiførselen av proteolytiske, karbolytiske og lipolytiske enzymer, f.eks. proteaser, amylaser og lipaser, for bruk i kontaktlinse rensemiddeloppløsninger, begrenset til plante- og animalske kilder. Rensemiddeloppløsninger fremstilt fra plante- og animalsk avledede enzymer har flere mangler. I de fleste tilfeller gir de enten rensemiddelbadet en ubehagelig lukt eller utvikler en lukt etter noen timers bruk. I enkelte tilfelle vil plante- og animalske proteaser og -amylaser mis-farge linser.

Kontaktlinserensemiddeloppløsninger fremstilt med plante- og animalsk avledede proteaser som papain, chymopapain, pankreatin, trypsin, chymotrypsin, pepsin, ficin, karboksypeptidase, amino-peptidase og bromelin er beskrevet f.eks. i US-PS 3 910 296, GB-PS 2 088 581, Japansk søknad 113 233 publisert som Kokai 64 303 samt US-PS 4 096 870. I tillegg til patentreferansene er enzymatiske linserensemidler fremstilt fra proteaser fra svin, nemlig er pankreatin gjort kommersielt tilgjengelig fra Alcon Laboratories. Enzymatiske kontaktlinse rensemidler fremstilt med planteproteaser, f. eks. papain, er også tilgjengelige under varemerket "Soflens" som enzymatiske rensemiddeltabletter. Selv om disse preparater generelt er effektive for rensing av kontaktlinser har de mangler i tillegg til de som tidligere er nevnt. Dette er ved siden av muligheten for ubehagelig lukt og muligheten for misfarging av linser, nemlig kan rensemidler inneholdende proteaser som pankreatin fra svin eller storfe indusere allergisk respons hos noen brukere. I tillegg har oppløsningen inneholdende pankreatin en tendens til å bli uklare.

Planteproteaser, f. eks. papain, krever vanligvis en lang rensemiddel cyklus innen området 4-12 timer for å fjerne film og avfall fra linsene. Slike lange cykler kan være ugunstige for brukeren. I tillegg krever rensemiddeloppløsninger fremstilt med plante- og animalske proteaser anvendelse av varme, f. eks. 80°C, som er nødvendig ikke bare for å desinfisere linsene, men også for å inaktivere enzymet.

Kontaktlinse rensemidler inneholdende enzymer krever også stabilisatorer/aktivatorer. F. eks. krever papain cystein. Pancreatin krever kalsiumsalter. Uten bruken av en aktivator

vil papain og andre tilsvarende planteenymer forbli inaktive. Aktivatorer som cystein er hygroskopiske og har en tendens til

å fange opp fuktighet for derved å gi fremstillingsvanskelig-heter. Slike enzymprodukter kan kun fremstilles og pakkes under strenge standarder for å fjerne enhver fuktighet fra å trenge inn i pakken da den ellers ville reagere av seg selv og redusere lagringstiden for rensemidlet.

Mikrobielle proteaser avledet fra Bacillus og Stremtomyces bakterier og Aspergillus mugg er beskrevet tidligere. US-PS 3 590 121 beskriver en effervescerende tablett til bruk for munnvask. Tabletter og oppløsninger ifølge dette patent benytter en nøytral protease kalt et metallo-enzym meden optimal aktivitet med en pH-verdi på 6 til 8. Fordi metaller er en integral del av enzymet blir aktiviteten inhibert ved nærværet av gelateringsmidler som vanligvis benyttes i kontaktlinse rensemiddel preparater for å binde kalsium og andre uønskede metaller fra å reagere med proteiner og avsetninger på linsene. Som et resultat er enzymer som inhiberes av gelateringsmidler på den måte som er beskrevet i US-PS 3 590 121 generelt utilfredsstill-ende for bruk i forbindelse med kontaktlinser.

US-PS beskriver fremstilling av flytende konsentrater av bakteriell protease og/eller amylase. De flytende konsentrater benyttes for fremstilling av slike produkter som husholdningsvaskemidler.■

I henhold til dette er det et behov for . sikrere og mere pålite-lige enzymrensemiddel preparater som gir et bredt spektrum rense-kapasitet for effektiv fjerning av i det minste protein- og karbohydratfilmer og avfall fra kontaktlinsene. Enzymene bær være stabile i oppløsning, forbli aktive ved forhøyet temperatur og være forenelige med andre komponenter i rensemiddelpreparatet. Fortrinnsvis bør enzymsysternet ikke avhenge av bruken av aktivatorer som kan føre til autonedbrytning med enzymet for derved å begrense lagringstiden. På tilsvarende måte bør renseprosessen være hensiktsmessig for brukeren og eliminere behovet for ut-strakte neddyppingsperioder ved å tillate brukeren fleksibilitet-en med kortere rensetider. Enzymrensemiddelpreparatet bør også være fritt for eller i det vesentlige fritt for lukt og ikke forårsake ubehag for bæreren når linsene gjeninnføres i øynene.

De bør ikke forårsake irritasjon eller allergiske responser som et resultat av restmengder enzym på linseoverflaten.

I henhold til dette, tilveiebringes det et enzymatisk kontaktlinse rensemiddelpreparat inneholdende en effektiv, ikke-toksisk mengde av en protease avledet fra en Bacillus-, Streptomyce- eller Aspergillus mikroorganisme slik at når den er oppløst i en vandig oppløsning vil den effektivt fjerne i det minste protein- og karbohydratfilmer og avfall fra kontaktlinseoverflåtene. Enzymrensemidlene kan inneholde protease alene avledet fra de ovenfor angitte bakterier eller mugg. Enzymene vil fortrinnsvis bestå

av en blanding hovedsakelig av protease og amylase, og eventuelt en mindre mengde lipase.

Oppfinnelsen omfatter også forskjellige tabletter inkludert effervescerende og ikke-effervescerende vannoppløselige tabletter inkludert granulat og pulvere som i tillegg inneholder de vanlige inerte bindemidler, strekkmidler, smøremidler o.s.v., andre ønskelige funksjonelle additiver som buffere, preserveringsmidler, gelateringsmidler, tonisitets justeringsmidler o.l.,

slik at når de er oppløst i vann dannes det en preservert isotonisk oppløsning som lett kan benyttes for linserensing. På tilsvarende måte omfatter oppfinnelsen vannoppløselige mikrobielle protease-amylase tabletter spesielt egnet som varmeenhets enzymtabletter for høytemperatur rensing/desinfisering av linser. Slike tabletter kan tilsettes til vandige isotonisk linsevætings-eller rensemiddeloppløsning for koldvæting eller høytemperatur-

rensing og desinfisering. Disse vætings- og rensemiddeloppløs-ninger som enzymtablettene tilsettes til kan inneholde preserveringsmidler, gelateringsmidler, overflateaktive stoffer, pH-buffere, tonisitetsjusterende midler o.s.v.

De mikrobielle proteaseholdige linserenseoppløsninger er spesielt effektive ved nebrytning og fjerning av denaturert protein- og karbohydratfilmer og avfall fra kontaktlinser uten enzymaktiva-torer og presenterer derfor færre fremstillings- og pakkeproblem-er ved formulering av de forskjellige rensemiddelpreparater som her omfattes.

De enzymatiske kontaktlinse rensemidler ifølge oppfinnelsen er spesielt effektive for fjerning av kontaktlinse film og -avfall i løpet av 1 time eller mindre ved høytemperatur rensemetoder.

I tillegg kan de bakterielle enzymrensemidler arbeide med liten eller ingen restbinding eller, konsentrasjon på linseoverflaten, og derfor blir øyevevfølsomhet, vanligvis påvist som stikk og betennelse, i det vesentlig eliminert.

Foreliggende oppfinnelse angår rensemiddel oppløsninger for bruk med de fleste kontaktlinser inkludert hårde og myke linser, såvel som de nyere hårdgasspermeable kontaktlinser slik som beskrevet i US-PS 4 327 203. Oppfinnelsen angår også de myke linser som generelt kalles langbrukslinser inneholdende 55% eller mere vann. Uttrykket "myke kontaktlinser" slik det heri benyttes henviser generelt til de kontaktlinser som lett bøyes under liten kraftpåvirkning og vender tilbake til opprinnelig form når kraft-en avlastes. Typiske myke kontaktlinser formuleres fra polyhyd-roksyetyl metakrylat som i de foretrukne formuleringer er fornettet med etylenglykol dimetakrylat. For hensiktsmessighetens skyld kalles denne polymer PHEMA. Myke kontaktlinser fremstilles også fra silisiumpolymerer fornettet f. eks. med dimetyl polysil-oksan. Generelt består "hårde kontaktlinser" som kun dekker øyets cornea vanligvis av polymetylmetakrylat fornettet med etylen glykol dimetakrylat.

Enzym rensemidlene avledes fra mikroorganismer og inkluderer forskjellige typer Bacillus- og Streptomyces bakterier og Aspergillus mugg. Mikroorganismer innen dette område som er kjent å danne hovedsakelig protease og amylase er ment å inkludere slike som subtilis, B. licheniformis, Aspergillus orysae, Aspergillus niger, Streptomyces griseus, Streptomyces naraenia. Protease og amylase avledet fra B^subtilis er generelt foretrukket. De heri beskrevne blandinger kan inneholde kun protease men mikrobielle enzymer i ren eller noe nær ren form er ikke alltid lett tilgjengelige. Således inneholder de fleste kommersielt tilgjengelige produkter blandinger av hovedsakelig protease og så amylase inkludert noe lipase og dette er tilfredsstillende. Amylasen er fortrinnsvis a-amylase fordi 3-amylase er mere varmefølsom.

De mikrobielle enzymprodukter som her beskrives er kommersielt tilgjengelige gjenstander og kan lett oppnås fra et antall produ-senter under forskjellige betegnelser, f. eks. beskriver "Enzeco" en næringsmiddelkvalitet av protease, nemlig Protease AP I oppnådd fra B^subtilis og som også inneholder a-amylase aktivitet. Fungal protease fremstilt fra Aspergillus flavus- oryzae er også tilgjengelig under varemerket "Enzeco". Fungal protease er også oppnåelig under varemerket "Rhozyme 41". "Rhozyme P-11", en protease oppnådd fra Aspergillus flavus- oryzae er også tilgjengelig. Produkter under "Rhozyme" familien av produkter inkluderer kvaliteter som angis som et B-6, PF og P-53 fremstilt fra B^Subtilis . Brukbare proteaser er også kommersielt tilgjengelig under varemerkene "Amano", "Prozyme" og "Newlase" samt videre "Maxatase" og "Prolase".

Proteasen bør være aktiv ved et pH-område fra 5 til ca. 8,5. Optimal pH-verdi for et gitt enzymprodukt kan være over eller under dette området. Fordi imidlertid det mest foretrukne sikre område for rensing av kontaktlinser er ca. det nøytrale området er viktigheten av proteolytisk aktivitet i sterkt alkalisk og

surt pH-område ikke kritisk.

Fortrinnsvis bør proteasen ikke inhiberes i nærvær av et gelateringsmiddel slik som når det gjelder metallo-enzymer. Proteaseaktivitet ifølge oppfinnelsen kan uttrykkes i casein enheter og bestemmes ved vidt kjente prosedyrer involvert nedbrytning av casein. Prosedyren for prøving av nøytral proteaseaktivitet beskrives i Journal of General Physiology, 30 (1947) 291 og Methods of Enzymology, 2, Academic Press, New York 33 (1955).

Enzymene forblir fortrinnsvis aktive når de eksponeres til for-høyede temperaturer. Det vil si at de heri beskrevne metoder tilveiebringer rensing av linser ved omgivelsestemperaturbeting-elser ved bruk av "kold" fukteteknikk såvel som betingelser med forhøyet temperatur ved bruk av høytemperatur rense/desinfiser-ingsmetoder.

De enzymatiske rensemidler inneholdende hovedsakelig den protease og amylase som erkarakterisertovenfor, benyttes i mengder tilstrekkelig til å bryte ned og fjerne filmer og avfall fra kontaktlinser. Det vil si at rensemiddelpreparatene bør inneholde tilstrekkelig enzymaktivitet til at når de er oppløst i linserensemiddelbadet så vil de fjerne i det vesentlige all proteinholdig og karbohydratavfall og -film ved enten koldfukting eller ved forhøyet temperatur.

Enzymkonsentrasjonen i oppløsninger vil vanligvis ligge innen området 0,0001 og 5% vekt/volum. Enzymtablett preparater, f. eks. ikke effervescerende vannoppløselige varmeenhetstabletter, effer-verscerende tabletter, granulat eller pulverpakker, inneholder vanligvis fra 0,01 til ca. 500 mg enzym og mere spesielt fra ca. 10 til ca. 100 mg enzym hvori protease aktiviteten ligger innen området ca. 30 til ca. 80 casein enheter/mg enzym, og mere spesielt ca. 40 til ca. 70 casein enheter/mg enzym.

Som angitt tidligere omfatter foreliggende oppfinnelse forskjellige på forhånd målte sammensetninger som hensiktsmessige midler for dispensering av en tilstrekkelig mengde enzym for rensing av linser. De omfatter f.eks. oppløselige tabletter som opp-løses i vandige oppløsninger uten effervescering; effervescerende

tabletter inkludert granulat og pulvere hvert av hvilke inneholder tilstrekkelig preparat for en enkel rensemiddelcyklus. Også inkludert er store effervescerende tabletter som kan ha en spalt for lett knusing hvorved hver halve tablett kan benyttes ved fremstilling av en rensemiddeloppløsning for hver linse an-ordnet i en linseeske.

Ved preparering av pulver og forskjellige tabletter blir enzympulveret formulert med kjente tablettbindemidler eller strekkmidler og kan ha inerte bærere, desintegreringsmidler og salter som effervescerer i vandig oppløsning. Fremgangsmåter og stoffer for fremstilling av slike tabletter og pulvere er alt godt kjent i praksis i tablettfremstillings teknikken og deres identi-fisering og utvalg er rutinearbeid.

I tillegg til mikrobielle enzymer kan tabletter, granulat og pulvere også formuleres med en eller flere bestanddeler for å sikre optimal renseaktivitet uten ugunstige virkninger på linsen eller på brukerens øye. F. eks. kan enzympreparater inneholde et antall additiver slik som tonisitetsjusteringsmidler, buffere, preserveringsmidler, overflateaktive stoffer, gelateringsmidler for å sikre stabilitet og sterilitet i rensemiddeloppløsningen, totalt dispergering av restlipidavsetninger og lignende. Enzymatisk rensemiddeltabletter og pulvere inneholdende slike totale formuleringer er meget hensiktsmessige for brukeren fordi en rensemiddeloppløsning kan fremstilles ved ganske enkelt å oppløse tabletten i destillert vann. F. eks. kan tabletter, granulat og pulvere formuleres med tonisitetsmidler for å komme nær det osmotiske trykk for vanlige lacrimal fluider som er ekvivalent en 0,9% oppløsning av natriumklorid eller 2,5% glyceroloppløsning.

Det kan også være fordelaktig å inkludere et desinfiseringsmiddel/ germicid som et middel for preservering av rensemiddeloppløs-ningen. Et preserveringsmiddel tilsettes i tilstrekkelig mengde til å gi en konsentrasjon i rensemiddelbadet innen området 0,00001 til ca. 0,5 vekt-%, fortrinnsvis fra ca. 0,0001 til ca. 0,1 vekt-%. Egnede preserveringsmidler inkluderer men er ikke begrenset til thimerosal, sorbinsyre, 1,5-pentandial, alkyl trietanolaminer, fenylkvikksølvsalter, f. eks. nitrat, borat, acetat, klorid og blandinger derav. Andre egnede forbindelser og salter kan benyttes når de er oppløselige i vann ved omgivelsestemperatur i en mengde av minst 0,5 vekt-%. Disse salter inkluderer gluconatet, isothionatet (2-hydroksyetansulfonatet), formatet, acetatet, glutamatet, succinamatet, monodiglykollatet, dimetansulfonatet, laktatet, diisobutyratet, glucoheptonatet.

Egnede buffere inkluderer f. eks. natrium- eller kalium sitrat, sitronsyre, borsyre, natriumborat, natriumbikarbonat og forskjellig blandede fosfatbuffere inkludert kombinasjoner av Na2HP04, NaH2P04og Kr^PO^. Generelt kan buffere benyttes i mengder innen området 0,05 til ca. 2,5% og aller helst fra ca. 0,1 til 1,5%, alt på vektbasis. Komplette tabletter og pulvere inneholder fortrinnsvis i tillegg til tonicitetsmidler, buffere og preserveringsmidler som beskrevet ovenfor, forskjellige sequesterings- eller gelateringsmidler for å binde metallioner slik som kalsium som ellers kan reagere med protein og ansamles på linseoverflåtene. Etylen-diamintetraeddiksyre (EDTA), og salter derav (dinatrium) er foretrukne eksempler. De tilsettes vanligvis i mengder tilstrekkelig til å gi en oppløsning inneholdende fra ca. 0,01 til ca. 2,0 vekt-%.

Selv om de mikrobielle enzymrensemiddelpreparater som her beskrives lett kan fremstilles ved mange av de ovenfor angitte additiver slik at når det hele oppløses f. eks. i destillert vann så vil det oppstå en total, preservert isotonisk enzymatisk rensemiddels-oppløsning, kan som en ytterligere foretrukket utførelsesform disse tabletter, pulvere o.s.v. fremstilles frie for slike additiv er inkludert tonicitetsmidler, buffere o.s.v. Det vil si at de forskjellige vannoppløselige tabletter, granulater og pulvere kan formuleres med egnede inerte bestanddeler slik som bærere, smøremidler, bindemidler eller strekkmidler slik som polyetylen-glycol, natriumklorid o.s.v., generelt benyttet i tablettfrem-stillingsteknikken. Denne utførelsesform er spesielt egnet for bruk i forbindelse med andre vandige linsestell produkter slik som fukteoppløsninger, neddyppingsoppløsninger, rensemiddel- og kondisjoneringsoppløsninger såvel som linsepleieoppløsninger for alle formål. Slike produkter inneholder f. eks. tonicitetsmidler, pH-buffere, rense- og fuktemidler, sequesteringsmidler, viskositetsoppbyggede o.s.v. Således kan effervescerende tabletter, formulert f. eks. med en blanding av de mikrobielle enzymer og effervescerende salter som sitronsyre eller vinsyre og natriumbikarbonat, oppløses i en hvilken som helst av de lett tilgjengelige OTC-oppløsninger, f. eks. isotoniske preservert saltoppløs-ning inneholdende et gelateringsmiddel slik som dinatrium EDTA

og et overflateaktivt middel.

Mikrobiell enzymrenseaktivitet kan suppleres med et overflateaktivt rensemiddel som kan benyttes før eller etter enzymatisk rensing for å fjerne gjenværende lipidavsetninger. I de tilfeller der det har vært en sterk oppbygning av denaturert tåre-film og avfall på linsene kan den lipolytiske virkning av enzymet suppleres ved bruk av et linserensemiddel av typen overflateaktivt middel. Når slike benyttes er nøytrale eller ikke-ioniske foretrukket p.g.a. rense- og kondisjoneringsegenskapene som vanligvis er tilstede i mengder opptil 15 vekt-%. Eksempler på egnede overflateaktive midler inkluderer men er ikke begrenset til polyetylenglykolestere av fettsyrer, f. eks. kokosnøtt, poly-sorbat, polyoksyetylen- eller polyoksypropylenetere av høyere alkaner (C-12~<C>18^<*>Eksempler på foretrukne overf lateaktive midler inkluderer polysorbater 20 ("Tween 20") polyoksyetylen (23) luryleter ("Brij 35") polyoksyetylen (40) stearat ("Myrj". 52) polyoksyetylen (25), propylen glykol stearat ("Atlas" 2612).

Et ikke-ionsik overflateaktivt middel spesielt bestående av

et polyoksypropylen polyoksyetylen addukt av etylen diamin med en molekylvekt fra ca. 7.500 til ca. 27.000 der minst 40 vekt-%

av adduktet er polyoksyetylen, er funnet å være spesielt bruk-bart for rensing og kondisjonering både av myke og hårde kontaktlinser i mengder fra ca. 0,01 til ca. 15%. Slike overflateaktive midler er tilgjengelige under betegnelsen "Tetronic".

Det mikrobielle protease-amylase og eventuelt lipase kontaktlinse rensemiddel gir forskjellige fordeler inkludert i det vesentlige luktfrihet, ikke-allergenhet, krever ingen ytterligere aktivator eller stabilisator og er helt vannoppløselig. I tillegg kan de mikrobielle protease-amylase enzymrensemidler hensiktsmessig benyttes i forbindelse med kontaktlinse varmedesinfiserings-enheter slik som de som er kommersielt tilgjengelige under betegnelsen "Aseptron" som f. eks. har en entimes rensecyklus der linsene i oppløsning oppvarmes til ca. 80°C og så tillates av-kjøling. Således kan høytemperaturrensning og desinfisering gjennomføres med enzymrensemidlene ifølge oppfinnelsen i løpet .

av 1 time eller mindre uten de vanlige 2 til 12 timers forfukting og sluttdesinfeksjon. De kortere rensetidscykler er spesielt ønskelige for bruk i forbindelse med "extended wear" linser som kan renses med det mikrobielle protease-amylaseprodukt i løpet av 30 minutter ved en topptemperatur på for eksempel 70°C, for derved å redusere muligheten for fysisk skade slik som misfarging av linsene. Detaljer ved denne entrinns rensemetode er beskrevet i den paralleltløpende søknad 844 223.

De følgende spesifikke eksempler viser sammensetninger av fremgangsmåter ifølge oppfinnelsen. Det skal være klart at disse eksempler er illustrerende og ikke på noen måte begrenser oppfinnelsens ramme.

Eksempel 1♦

For å studere effektiviteten av bakteriell protease med henblikk på å fjerne proteinfilm avsetninger og avfall fra kontaktlinser blir pressede vannoppløselige varmeenhetstabletter først fremstilt med hver tablett inneholdende ca. 18 mg Protease AP I enzym kommersielt tilgjengelig under betegnelsen "Enzeco". Enzymet er avledet fra subtilis og inneholder prinsipiell protease- og a-amylaseaktivitet. Protease aktiviteten er ca. 53 caseinenheter/mg. Enzymet er stabilt med en pH-verdi mellom 5,0 og 10,0.

Enzympulveret granuleres først med en tilstrekkelig mengde av polyetylen glykol 4000 av farmasøytisk kvalitet eller et annet egnet bindemiddel og smøremiddel. De granulerte finfordelte stoffer omdannes så til komprimerte tabletter der hver tablett veier ca. 30 mg.

Eksempel 2.

Det fremstilles en klar kunstig tåreoppløsning bestående av

0,2 g lysozym/100 ml elektrolytt. Elektrolytten er en lageropp-løsning fremstilt fra 2,2 g/l natrium bikarbonat, 7 g/l natrium klorid, 0,0005 g/l kalsium klorid og 1,5 g/l kalium klorid.

Seks polymacon mykkontaktlinser kommersielt tilgjengelig under varemerket "Soflens" undersøkes mikroskopisk før belegning med lysozymoppløsningen. Linsene blir så nedsenket i lysozymoppløs-ningen i 30 til 60 minutter ved romtemperatur. Linsene anbringes så individuelt i brønnene i "Lensgard" bæreesker og så plassert i "Aseptron" varmeenheter for denaturering av lysozym proteinet. De belagte linser anbringes så i andre "Lensgard" transportesker og dekkes med sorbinsyre preservert steril isotoniske saltopp-løsning inneholdende "Tetronic" 1107 overflateaktivt middel. En enkelt tablett fremstilt i eksempel 1 anbringes i hver brønn av transportesken og eskens lokk festes fast. Hver væske underkastes en varmecyklus i en "Aseptron" varmeenhet med en 1 times oppvarmingscyklus med en maksimal temperatur på 80°C fulgt av en avkjølingscyklus. Etter ferdigoppvarmingscyklus fjernes . linsene fra eskene, gnies og skylles med sorbinsyre preservert steril isotonisk oppløsning inneholdende "Tetronic" 1107 overflateaktivt middel. Hver av linsene undersøkes så mikroskopisk. Det denaturerte protein på alle prøvelinsene er helt fjernet. Ingen defekter eller tilsynelatende misfarginger kan observeres

på noen av de seks linser.

Eksempel 3.

For å bedømme foreneligheten av enzymrensetablettene på myke kontaktlinser gjennomføres det først et forsøk med kun enzymrensemiddel. Et andre studium gjennomføres for å bedømme virkning-en av kombinasjonen av enzym, preserverte linserensemiddel og varme på myke kontaktlinser.

Seks polymacon "Softlens" kontaktlinser undersøkes mikroskopisk for mulige defekter og misfarginger og anbringes så i brønnene av tre "Lensgard" linsetransportesker. Hver av linsene dekkes så med en sorbinsyre preservert isotonisk saltoppløsning inneholdende "Tetronic" 1107 overflateaktivt middel. 30 mg polyetylen glykol tilsettes så til brønnen av den første eske; en vann-oppløselig enzymtablett fra eksempel 1 anbringes så i hver av brønnene i den andre eske og intet tilsettes til den tredje transporteske. Lokkene anbringes så på hver av eskene som så underkastes en enkelt entimes oppvarmingscyklus i en automatisk "Aseptron" oppvarmingsenhet. Dette gjentas fem ganger ved bruk av de samme linser mens man fornyer den preserverte saltoppløs-ning, polyetylenglykol og enzymet ved begynnelsen av hver av cyklene. Etter avslutning av hver cyklus undersøkes linsene mikroskopisk. Ingen defekter eller misfarginger observeres på noen av de seks linser og disse forblir uforandret for studiets varighet. ,

Eksempel 4.

Et okkulært irritasjonsstudium gjennomføres ved bruk av fluorescein fargestoff retensjon på kaninøye cornea utstyrt med kontaktlinser behandlet i rensemiddeloppløsning fremstilt med "Enzeco" AP oppvarmingsenhet enzymtabletter ifølge eksmepel 1. Øynene til tre kaniner utstyres med "Soflens" linser, tre av hvilke er renset ved oppvarming i en "Aseptron" oppvarmingsenhet inneholdende enzymtablettene fra eksempel 1 oppløst i en sorbinsyre preservert isotonisk saltoppløsning kommersielt tilgjengelig under betegnelsen "Sensitive Eyes". Kontrolløyet utstyres med en linse oppvarmet med kun en "Sensitive eyes" oppløsning. Alle øynene undersøkes makroskopisk hver dag før innføring og etter fjerning av linsene som bæres gjennomsnitlig seks timer pr. dag i fem dager. Fluorescein flekking gjennomføres i forbindelse med UV lys før initiering av studiet, gjentas etter tre dagers bæring og igjen ved ferdig studium. Enhver okkulær irritasjon påvises ved fargestoff absorbsjon ved bruk av spaltlampe mikro-skopi .

Alle øyne viste minimal konjunktiv rødhet, sannsynligvis p.g.a. linsebæring og manipulering. Ingen positiv fluorescein flekking ble observert. Ingen positive reaksjoner observeres makroskopisk under dette studium.

Eksempel 5.

Sammenlignende studier gjennomføres for å bedømme cytotoksisitet-en for linserenseoppløsninger fremstilt med varmeenhetstablettene ifølge eksempel 1. Studien benytter den "Agar Overlay Assay" teknikk som er publisert i "Journal of Pharmaceutical Sciences", vol. 54 (1965) side 1545-1547 av W.L. Guess et al. Fire "Soflens" kontaktlinser fuktes i oppløsning fremstilt ved oppløsning av enzymtabletter i brønnene til "Lensgard"linseesker med sorbinsyre preservert isotoniske saltoppløsning inneholdende "Tetronic" 1107 overflateaktivt middel. Ytterligere fire linser anbringes i eskene inneholdende kun preservert salt- "Tetronic" oppløsning som tjener som kontroller. Linsene oppvarmes i en cyklus i "Aseptron" varmeenheter og skylles i preservert saltoppløsning-"Tetronic" oppløsning, varmebehandles så i en ytterligere cyklus og skylles igjen før de plasseres på L-929 muse fibro-blastceller for å observere lysering av cellene.

Fraværet av en avfarget sone indikerte mangelen på lyserte celler og fravær av cytotoksisk respons.

Eksempel 6.

Effervescerende enzym tabletter.

Effervervescerende enzymtabletter fremstilles ved først å pre-parere et effervescerende strekkmiddel inneholdende natriumbikarbonat, sitronsyre og natriumklorid i et vektforhold på 3:1:1. Hvert av saltene oppmales fint separat i en morter og blandes

så ved hjelp av morter og pistil. En liten mengde destillert vann, f. eks. <0,5 ml, tilsettes til blandingen som så blandes ytterligere for å initiere molekylær interaksjon av slatene. Blandingen spres jevnt på en glassflate og anbringes i en vakuum-ovn i 2-3 timer ved 60°C. Blandingen oppmales så til fin til-stand i en morter og blandes med "Enzeco" Protease AP 1 enzym-pulver i et forhold strekkmiddel:ensym = 2:1 for derved å oppnå

100 mg enzym pr. tablett. Tabletter fremstilles så ved kompri-mering ved 2500 psig.

Disse tabletter prøves så på oppløsningstid; oppløsningsopptreden og effervescense karakteristika. Oppløsning i 10 ml destillert vann krever 37 sek., et hvitt skum opptrer umiddelbart men av-settes hurtig deretter hvorved det oppstår en klar og fargeløs oppløsning. Oppløsning av tabletten skjedde enhetlig.

Mens oppfinnelsen er beskrevet i forbindelse med spesifikke eksempler er disse kun illustrerende. I henhold til dette kan mange alternativer, modifikasjoner og variasjoner gjennomføres og disse er ment å ligge innenfor oppfinnelsens ramme.

Claims (23)

1. Fremgangsmåte for rensing av en kontaktlinse, karakterisert ved at den omfatter å bringe linsen i kontakt med en effektiv mengde av en aktivatorfri protase-holdig oppløsning idet proteasen er avledet fra en Bacillus-, Streptomyces- eller Aspergillus mikroorganisme.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det benyttes en enzymholdig oppløsning bestående hovedsakelig av protease og amylase.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 1 , karakterisert ved at det benyttes en mikrobiell enzymholdig oppløsning inkludert lipase.

4. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at det benyttes en enzymholdig oppløsning som omfatter en eller flere bestanddeler valgt blant tonisitetsmidler, en buffer, et preserveringsmiddel, et overflateaktivt middel og et gelateringsmiddel.

5. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at det benyttes enzymer avledet fra Bacillus subtilis.

6. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at det benyttes enzymer avledet fra Aspergillus oryzae.

7. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at det benyttes enzymer aveldet fra Streptomyces griseus.

8. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at den enzymholdige oppløsning fremstilles ved opp-lø sning av en tablett, et pulver eller et granulat i en vandig oppløsning for å tilveiebringe en enzymkonsentrasjon av ca. 0,0001 til ca. 5% vekt/volum.

9. Fremgangsmåte ifølge krav 8, karakterisert ved at enzymoppløsningen fremstilles fra en effervescent tablett eller et granulat.

10. Fremgangsmåte ifølge krav 8, karakterisert ved at enzymoppløsningen fremstilles fra en vannoppløse-lig ikke-effervescerende tablett.

11. Fremgangsmåte ifølge krav 8, karakterisert ved at det benyttes en enzymtablett, et pulver eller et granulat som omfatter protease og amylase avledes fra Bacillus subtilis.

12. Fremgangsmåte ifølge krav 11, karakterisert ved at det anvendes en enzymtablett, et pulver eller et granulat inkludert en eller flere ytterligere bestanddeler valgt blant et bindemiddel, en bærer, et strekkmiddel, et smøremiddel, et desintegreringsmiddel, et tonisitetsmiddel, en buffer, et preserveringsmiddel, et overflateaktivt middel, et gelateringsmiddel og et effervescerende salt.

13. Kontaktmiddel rensetablett, karakterisert ved at den omfatter fra ca. 0,1 mg til ca. 500 mg av en protease fri for aktivator, avledet fra en Bacillus-, Streptomyces- eller Aspergillus mikroorganisme, idet proteasen forblir aktiv også i nærvær av et gelateringsmiddel.

14. Tablett ifølge krav 13, karakterisert ved at de mikrobielle enzymer hovedsakelig er protease og amylase.

15. Tablett ifølge krav 14, karakterisert ved at den er en effervescent tablett eller en vannoppløselig ikke-effervescent tablett.

16. Tablett ifølge krav 14, karakterisert ved at den inneholder enzymer avledet fra Bacillus subtilis.

17. Tablett ifølge krav 15, karakterisert ved at den omfatter en eller feire bestanddeler valgt blant et bindemiddel, en bærer, et strekkmiddel, et smøremiddel, et desintegreringsmiddel, et tonisitetsmiddel, en buffer, et preserveringsmiddel, et gelateringsmiddel og et effervescerende salt.

18. Tablett ifølge krav 17, karakterisert ved at den inkluderer et strekkmiddel eller et tablett bindemiddel, hvilken tablett gir en i det vesentlige isotonisk oppløsning o <p> pløst i en vandig oppløsning.

19. Ikke-effervescerende kontaktlinse rensetablettt, karakterisert ved at den omfatter en effektiv konsentrasjon av en aktivatorfri protease og amylase avledet fra en Bacillus bakterie eller Aspergillus mugg og et egnet tablettbindemiddel eller -strekkmiddel.

20. Tablett ifølge krav 19, karakterisert ved at proteasen og amylasen er avledet fra Bacillus subtilis.

21. Tablett ifølge krav 19, karakterisert ved at bindemidlet er et polyetylen glycol.

22. Effervescerende vannoppløselig kontaktlinse rensetablett, pulver eller granulat, karakterisert ved at det omfatter en effektiv konsentrasjon av en aktivatorfri <p> rotease og amylase avledet fra en Bacillus- eller Streptomyce bakterie eller Aspergillus mugg og et effervescerende salt, idet proteasen forblir aktiv også i nærvær av et gelateringsmiddel.

23. Tablett, pulver eller granulat ifølge krav 22, karakterisert ved at proteasen og amylasen er avledet fra Bacillus subtilis.