PL107655B1 - Sposob otrzymywania preparatu enzymatycznego b-galaktozydazy - Google Patents

Sposob otrzymywania preparatu enzymatycznego b-galaktozydazy Download PDF

Info

Publication number
PL107655B1
PL107655B1 PL20331377A PL20331377A PL107655B1 PL 107655 B1 PL107655 B1 PL 107655B1 PL 20331377 A PL20331377 A PL 20331377A PL 20331377 A PL20331377 A PL 20331377A PL 107655 B1 PL107655 B1 PL 107655B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
galactosidase
enzyme
yeast
active
protein
Prior art date
Application number
PL20331377A
Other languages
English (en)
Other versions
PL203313A1 (pl
Inventor
Jadwiga Kowalewska
Stefan Poznanski
Wlodzimierz Badnarski
Marian Mieczkowski
Wladyslaw Chojnowski
Original Assignee
Akad Rolniczo Tech
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Akad Rolniczo Tech filed Critical Akad Rolniczo Tech
Priority to PL20331377A priority Critical patent/PL107655B1/pl
Publication of PL203313A1 publication Critical patent/PL203313A1/pl
Publication of PL107655B1 publication Critical patent/PL107655B1/pl

Links

Landscapes

  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób otrzymywania aktywnego rozpuszczalnego preparatu enzymatycznego B — galaktozydazy z drozdzy, uzdolnionych do syntezy tego enzymu, oddzielonych od podloza hodowlanego w postaci biomasy.B — galaktozydaza znajduje zastosowanie do produkcji napojów mlecznych, koncentratów mlecznych z rozlozona laktoza do glukozy i galaktozy oraz coraz wieksze zastosowanie w technologii mleczarskiej w celu przyspieszenia dojrzewania serów, skracanie fermentacji napojów mlecznych, aktywizacji rozwoju bakterii fer¬ mentacji mlekowej i innych.Do celów przemyslowych B — galaktozydaze otrzymuje sie z drobnoustrojów. B — galaktozydaza pocho¬ dzenia mikrobiologicznego w zaleznosci od rodzaju drobnoustrojów, wykorzystywanych do ich biosyntezy, rózni sie wlasciwosciami, takimi jak: optimum pH, temperatury, aktywnoscia hydrolizy laktozy oraz stabilnoscia.Znany jest sposób otrzymywania B - galaktozydazy z bakterii Escherichia coli. W tym celu wysuszona i sproszkowana mase bakterii wytrzasa sie z buforem fosforanowym o pH=7,3, piaskiem kwarcowym i alkoho¬ lem etylowym w temperaturze 0°C i poddaje wirowaniu, uzyskujac zloty roztwór. Nastepnie z roztworu usuwa sie kwasy nukleinowe, a B - galaktozydaze wytraca alkoholem, który usuwa sie przez wirowanie, a uzyskany osad zawiesza w buforze fosforanowym i poddaje wirowaniu, otrzymujac ezysty roztwór. Do uzyskanego roztwo¬ ru dodaje sie bardzo powoli ciagle mieszajac nasycony roztwór siarczanu amonu w proporcji 1:1. Suspensje poddaje sie ponownie wirowaniu, a osad rozpuszcza w buforze fosforanowym i prowadzi dialize przez 48 godz.Do plynu po dializie dodaje sie mieszanine eteru i etanolu przy stalym mieszaniu w temperaturze zamarzania.Suspensje natychmiast odwirowuje sie, a otrzymany osad stanowi aktywne bialko B - galaktozydazy. W celu zachowania aktywnosci enzymu przechowuje sie go w temperaturze minus 30°C.Stwierdzono, ze B-galaktozydaza, otrzymana z bakterii Escherichia coli, wykazuje tylko 27% aktywnoscia hydrolizy, stwierdzonej w roztworze czystej laktozy.Znana jest równiez B-galaktozydaza, otrzymywana z plesni, ale ze wzgledu na wysoka stabilnosc termiczna i niskie optimum pH dzialania znajduje tylko zastosowanie do hydrolizy laktozy w ukwaszonej serwatce.Znany jest sposób otrzymywania plonu biomasy drozdzy syntetyzujacych B-galaktozydaze, ale metoda2 107655 otrzymywania preparatu B-galaktozydazy z biomasy drozdzy jest nieujawniona przez producentów tego enzymu.W technologii otrzymywania enzymów wewnatrzkomórkowych, do których nalezy równiez B-galaktozyda- za, jedna z glównych trudnosci jest opracowanie skutecznego sposobu zniszczenia struktury komórkowej drobno¬ ustrojów bez obnizenia aktywnosci wydzielonych enzymów i sposobu izolowania aktywnych bialek enzyma¬ tycznych z komórek.W wyniku dotychczas stosowanych metod dezintegracji struktury komórkowej i otrzymywania preparatów enzymatycznych uzyskuje sie preparaty o daleko posunietej denaturacji bialek enzymatycznych oraz niskiej rozpuszczalnosci preparatu enzymatycznego w substracie. Ponadto sposoby te nie pozwalaja na otrzymywanie preparatu enzymatycznego B — galaktozydazy o standartowej aktywnosci.Wedlug wynalazku B-galaktozydaze otrzymuje sie z biomasy drozdzy, która rozprowadza sie woda, uzu¬ pelniona jonami potasu i magnezu, a uzyskana suspensje komórek drozdzy dezintegruje sie za pomoca schlodzo¬ nego acetonu lub alkoholu etylowego. Nastepnie z otrzymanego roztworu wydziela sie aktywne bialko enzyma¬ tyczne jedna ze znanych metod, po czym traktuje sie eterem etylowym i acetonem, a wydzielone aktywne bialko enzymatyczne dosusza sie.Wedlug wynalazku preparat enzymatyczny B-galaktozydazy otrzymuje sie równiez przez dezintegracje mechaniczna biomasy drozdzy, rozprowadzonej woda, wzbogacona jonami potasu i magnezu. Po dezintegracji komórek drozdzy oddziela sie blony komórkowe, a aktywne bialko enzymatyczne utrwala przez zamrazanie, liofilizacje lub suszy metoda rozpylówa, dostosowana do suszenia substancji biologicznie czynnych. - Istotna zaleta sposobu wedlug wynalazku jest uzyskanie preparatu enzymatycznego B — galaktozydazy o standardowej aktywnosci i wysokiej rozpuszczalnosci w substratach. Enzym ten jest przydatny do hydrolizy laktozy nie tylko w mleku, ale i w serwatce, otrzymanej przy produkcji serów i bialczanów. Ponadto w opraco¬ wanej metodzie stopien denaturacji bialek enzymatycznych jest znikomy.' Badania wykazaly, ze B — galaktozydaza, otrzymana z komórek drozdzy, wykazuje zblizona aktywnosc, zarówrio gdy substratem jest roztwór czystej laktozy, jak i w przypadku gdy substratem jest laktoza, wystepujaca w mleku.Przedmiot wynalazku przedstawiony jest blizej w przykladach wykonania.Przyklad I. Do wilgotnej biomasy drozdzy dodaje sie buforu fosforanowego o pH=6,5, zawierajacego 0,15% potasu oraz chlorku magnezu, zawierajacego 0,05% magnezu i dokladnie miesza w celu otrzymania jedno¬ rodnej suspensji drozdzy. Do otrzymanej suspensji drozdzy ciagle mieszajac dodaje sie cienkim strumieniem aceton w temperaturze minus 20°C i zawartosc przetrzymuje w temperaturze minus 18°C do minus 10°C przez kilkanascie minut, okresowo mieszajac. Po tym okresie oddziela sie aktywne wydzielone bialko od pozostalego roztworu przez odwirowanie. Oddzielone aktywne bialko ponownie rozprowadza sie schlodzonym acetonem, natychmiast ponownie oddziela bialko od acetonu. Uzyskane aktywne bialko enzymatyczne przemywa sie eterem etylowym, a nastepnie acetonem, po czym dokladnie filtruje i dosusza w temperaturze, nie przekracza¬ jacej 20°C. Otrzymuje sie enzym B - galaktozydaze w postaci proszku o barwie kosci sloniowej. Przechowuje sie go szczelnie w zamknietym opakowaniu w temperaturze 5°C. Aktywnosc enzymatyczna preparatu ustala sie po uplywie tygodnia. Aktywnosc preparatu, otrzymanego wedlug wynalazku, wynosi 20000 jednostek orto-ni- tro-fenylo-beta-D-galaktopiranozydu (gam preparatu).Przyklad II. Do wilgotnej biomasy dodaje sie wode z dodatkiem jonów potasu o stezeniu 0,15% i magnezu w ilosci 0,05% opH=6,5 i dokladnie miesza w celu uzyskania jednolitego roztworu bez zawiesiny.Calosc schladza sie mozliwie szybko do temperatury 1—3°C i poddaje dezintegracji mechanicznej, uzywajac urzadzen pozwalajacych na maksymalne rozrywanie struktury komórkowej. Uzyskany roztwór po dezintegracji komórek mozliwie jak najszybciej poddaje sie wirowaniu w celu oddzielenia blon komórkowych drozdzy od roztworu, zawierajacego aktywne bialko enzymatyczne.W celu pelnego utrwalenia wyjsciowej aktywnosci obecnej w roztworze B — galaktozydazy roztwór podda-" je sie jednej z nastepujacych operacji: zamrazaniu, liofilizacji lub suszeniu rozpylowemu.Zamrazanie prowadzi sie w temperaturze od minus 20°C do minus 40°C w opakowaniach z tworzyw sztucznych. Roztwór przechowywany w stanie zamrozenia zachowuje dobra rozpuszczalnosc i wyjsciowa aktywnosc enzymatyczna, to jest 180 jednostek orto-nitro-fenylo-beta-D- galaktopiranozydu/gram preparatu.Liofilizacje prowadzi sie z dodatkiem nosników bialka enzymatycznego w postaci skrobi lub laktozy, uzyskujac preparat enzymatyczny, który przechowywany w temperaturze 5°C zachowuje aktywnosc 10000 jednostek orto-nitro-fenylo-beta-D- galaktopiranozydu/gram preparatu.Suszenie rozpylowe prowadzi sie z dodatkiem nosników bialka enzymatycznego przy uzyciu suszarek, pozwalajacych na pelne zachowanie aktywnosci enzymatycznej preparatu. Wysuszony preparat B-galaktozydazy w postaci proszku wykazuje 80% rozpuszczalnosci i przechowywany w temperaturze 5°C zachowuje aktywnosc107655 3 12000 jednostek orto-nitro-fenylobeta-D- galaktopiranozydu/gram preparatu.Zastrzezenia patentowe 1. Sposób otrzymywania preparatu enzymatycznego B-galaktozydazy, znamienny tym, ze biomase drozdzy rozprowadza sie woda, wzbogacona jonami potasu i magnezu, nastepnie uzyskana suspensje komórek drozdzy dezintegruje sie za pomoca schlodzonego acetonu lub alkoholu etylowego, a z otrzymanego roztworu wydziela sie aktywne bialko enzymatyczne jedna ze znanych metod, po czym traktuje sie eterem etylowym i acetonem, a wydzielone aktywne bialko enzymatyczne dosusza sie. 2. Sposób otrzymywania preparatu enzymatycznego B-galaktozydazy, znamienny tym, ze rozpro¬ wadzona biomase drozdzy w wodzie z dodatkiem jonów potasu i magnezu dezintegruje sie mechanicznie, nastepnie oddziela blony komórkowe, a aktywne bialko enzymatyczne utrwala przez zamrazanie, liofilizacje lub suszy metoda rozpylowa, dostosowana do suszenia substancji biologicznie czynnych. PL

Claims (2)

  1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób otrzymywania preparatu enzymatycznego B-galaktozydazy, znamienny tym, ze biomase drozdzy rozprowadza sie woda, wzbogacona jonami potasu i magnezu, nastepnie uzyskana suspensje komórek drozdzy dezintegruje sie za pomoca schlodzonego acetonu lub alkoholu etylowego, a z otrzymanego roztworu wydziela sie aktywne bialko enzymatyczne jedna ze znanych metod, po czym traktuje sie eterem etylowym i acetonem, a wydzielone aktywne bialko enzymatyczne dosusza sie.
  2. 2. Sposób otrzymywania preparatu enzymatycznego B-galaktozydazy, znamienny tym, ze rozpro¬ wadzona biomase drozdzy w wodzie z dodatkiem jonów potasu i magnezu dezintegruje sie mechanicznie, nastepnie oddziela blony komórkowe, a aktywne bialko enzymatyczne utrwala przez zamrazanie, liofilizacje lub suszy metoda rozpylowa, dostosowana do suszenia substancji biologicznie czynnych. PL
PL20331377A 1977-12-23 1977-12-23 Sposob otrzymywania preparatu enzymatycznego b-galaktozydazy PL107655B1 (pl)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL20331377A PL107655B1 (pl) 1977-12-23 1977-12-23 Sposob otrzymywania preparatu enzymatycznego b-galaktozydazy

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL20331377A PL107655B1 (pl) 1977-12-23 1977-12-23 Sposob otrzymywania preparatu enzymatycznego b-galaktozydazy

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL203313A1 PL203313A1 (pl) 1978-11-06
PL107655B1 true PL107655B1 (pl) 1980-02-29

Family

ID=19986466

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL20331377A PL107655B1 (pl) 1977-12-23 1977-12-23 Sposob otrzymywania preparatu enzymatycznego b-galaktozydazy

Country Status (1)

Country Link
PL (1) PL107655B1 (pl)

Also Published As

Publication number Publication date
PL203313A1 (pl) 1978-11-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12559524B2 (en) Stable dry powder composition comprising biologically active microorganisms and/or bioactive materials and methods of making
Obradović et al. Microencapsulation of probiotic starter culture in protein–carbohydrate carriers using spray and freeze-drying processes: Implementation in whey-based beverages
AU2001268057B2 (en) Preservation and storage medium for biological materials
ES2427542T3 (es) Almacenamiento estable de cultivos congelados de bacterias de ácido láctico
To et al. Survival of Brevibacterium linens (ATCC 9174) after spray drying, freeze drying, or freezing
Biehl et al. Proteolysis during fermentation‐like incubation of cocoa seeds
DK141822B (da) Stabiliserede toerkulturer af levedygtige uskadelige maelkesyreproducerende bakterier
Mandelstam et al. Studies in biochemical adaptation. The effect of variation in dietary protein upon the hepatic arginase of the rat
US4158607A (en) Enzymatic preparation for ripening of milk protein products
Dahlqvist et al. Hydrolysis of lactose in milk and whey with minute amounts of lactase
Sharma et al. Standardization of lyophilization medium for Streptococcus thermophilus subjected to viability escalation on freeze drying.
RU2148636C1 (ru) Способ получения дрожжевого низкомолекулярного экстракта и вещество, получаемое этим способом
RU2088211C1 (ru) Способ получения косметического средства для ухода за кожей
PL107655B1 (pl) Sposob otrzymywania preparatu enzymatycznego b-galaktozydazy
JP2003505024A (ja) 微生物、細胞、および組織の貯蔵
RU2142504C1 (ru) Способ получения биологически активной добавки в сухой форме, содержащей бактерии-эубиотики, и начинка для хлебных или кондитерских изделий на ее основе
JP3509148B2 (ja) 凍害保護剤および凍結保存方法
RU2425576C1 (ru) Сухой пробиотически активный биопрепарат и способ получения кисломолочного напитка на его основе
RU2160992C1 (ru) Сухой биопрепарат и способ его получения
Kurniawati et al. Homogeneity and stability of a secondary microbiological reference material candidate for Salmonella in fish matrix
Whitfield The use of proteolytic and other enzymes in the separation of slime mould grex
SU1124028A1 (ru) Защитна среда дл бактериальных препаратов молочнокислых культур,используемых в сыроделии и маслоделии
JPS60188060A (ja) 胃酸耐性の高いビフイズス菌生菌粉末及びその製造方法
JP2935101B2 (ja) 乳酸菌乾燥粉末の製造方法
Tuomi et al. Fiber fractions from processing of barley in production and conservation of a biologic control agent