PL112030B1 - Method of preparation of/3a-alpha-h-7a-beta-methylhexahydroindanodion-1,5-yl-4-alpha/-3'-propionic acid - Google Patents

Method of preparation of/3a-alpha-h-7a-beta-methylhexahydroindanodion-1,5-yl-4-alpha/-3'-propionic acid Download PDF

Info

Publication number
PL112030B1
PL112030B1 PL1977202380A PL20238077A PL112030B1 PL 112030 B1 PL112030 B1 PL 112030B1 PL 1977202380 A PL1977202380 A PL 1977202380A PL 20238077 A PL20238077 A PL 20238077A PL 112030 B1 PL112030 B1 PL 112030B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
dione
pattern
steroid
formula
alpha
Prior art date
Application number
PL1977202380A
Other languages
English (en)
Other versions
PL202380A1 (pl
Inventor
Candice B Biggs
Thomas R Pyke
Merle G Wovcha
Original Assignee
Upjohn Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Upjohn Co filed Critical Upjohn Co
Publication of PL202380A1 publication Critical patent/PL202380A1/pl
Publication of PL112030B1 publication Critical patent/PL112030B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/94—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with rings other than six-membered or with ring systems containing such rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
    • C12P17/04—Oxygen as only ring hetero atoms containing a five-membered hetero ring, e.g. griseofulvin, vitamin C
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/24—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carbonyl group
    • C12P7/26—Ketones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/32—Mycobacterium
    • C12R2001/33—Mycobacterium fortuitum
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/83—Arthrobacter
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/832—Bacillus
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/84—Brevibacterium
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/843—Corynebacterium
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/867—Micromonospora
    • Y10S435/868—Micromonospora chalcea
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/872—Nocardia
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/88—Serratia
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/911—Microorganisms using fungi
    • Y10S435/939—Rhizopus

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania kwasu (3a«-H- 7a^^netyloszesckwodoromdaiiodion- l,5-ylo-4o) -T-propionowego.Sposoby przeksztalcania sterydów za pomoca mikroo¬ rganizmów znane sa np. z prac Mamoli i Vercelloneber. 70, 470 (1937) oraz ber. 70, 2079 (1937) opisujacych redukcje 17-ketosterydów do 17/Uiydroksysterydów droga fermentacji drozdzowej. Wopisie patentowym St.Zjedn- Am. nr 2 602 769 ujawniono sposób wprowadza¬ nia grupy hydroksylowej w pozycje 1la progesteronu dzialaniem grzyba Fhizopus nigricans, a w opisie paten¬ towym St. Zjedn. Am. nr 3684657 opisano selektywna degradacje mikrobiologiczna grup alkilowych w pozycji 17 sterydów, zachodzaca w wyniku fermentacji sterydu zwiazanego w pozycji 17 z bocznym bncuchem alkilo¬ wym o co najmniej 8 atomach wegla, przebiegajacej pod wplywem Mycobacterium sp. NRRL B-3683iprowadza¬ cej do otrzymania androsten-4-dionu-3,17, androsta- dien-l,4-diofiu-3,17 i 20g-hydroksymetylopfegnadien- l,4-onu-3. Z opisu patentowego St. Zjedn. Am. nr 3759791 znanyjest sposób selektywnego mikrobiologi- cznego wytwarzania androstcn-4- mentacji sterydu z grupy chofestanu lub stigmastanu zwiazanego w pozycji 17 z bocznym bncuchem alkilo¬ wym zawierajacym co najmniej 8atomówwegla,przebie¬ gajacej podwplywem Mycobacterium sp. NRRLB-3805.W opisie patentowym PRL nr 106849ujawniono spo¬ sóbwytwarzania pochodnych 3ao—H-4 «- pfopykV7a^-mcrykszcsciowoobfiofndanuowzoiach2i 5, polegajacy na hodowaniu Mycobacterium fortuitum NRRL B-8129 wpozywce wodnej, wwarunkach aerobo- wych, w obecnosci sterydu.Sposobem wedlug wynalazku wytwarza siekwas(3a«- H-7a/J -metyk)szesciowodoroindanodion-l^-ylo-4ar) - J-propionowy o wzorze 1, bedacy zwiazkiem znanym z artykulu „Mechanisms of steroid oxidation by microo- rganisms II. Izolation and characterisation of 3a.a-H-Aa- (3-propionk acid)-7a ^-methylhexahydro-l:r5- indanc- dions" J. Am. Chem. Soc., 85, 2135—2137 (1963), w którym opisano wytwarzanie zwiazku o wzorze 1 jako produktu posredniego w reakcji degradacji androsteu-4- dionu-3,17 pod dziafaniem Nocanfia restrictus. Z arty¬ kulu K. Schuberta, K. H. Bohms'a i C. Harholda „FonnationofIow mofeculardegradationproductsfrom progesterone by microorganisms", Steroids, 4,581—586 (1964) znany jest proces powstawania trójpierscienio- wych produktów posrednich,wreakcjidegradacjiproga- steronu pod dziabniem Mycobacterium Smegmatis.Cecha sposobu wedlug wynalazkujest to, zeMycobac¬ terium fortuitum NRRL B-8129hoduje sie wwarunkach acrobowych, w wodnej pozywce o wartosci pH okolo 7—9. w obecnosci sterydu zwiazanego lub nie zwiaza¬ nego w pozycji 17 z bocznym lancuchem alkilowym o 2—10 atomach wegla, po czym wyodrebnia sie kwas.Tak wiec nieoczekiwanie stwierdzono, ze prowadzac powyzszyproceswsrodowiskuo wartosci pH 7—9otrzy¬ muje sie glównie zwiazek o wzorze 1, podczas gdy pochodne 3aa-ll-4o- (T-hydroksypropylo)-7a0-mctylo-1 3 szcaciowodoroindanu opisane w opisie patentowym PRL nr 106849 powstaja tu jedynie w ilosciach sladowych.Ten zaskakujacy wplyw wartosci pH na wynik hodowli znajduje dalsze potwierdzenie, gdy jak podano w wyzej wyrnienionym opisie patentowym PRL, glównym pro¬ duktem procesu prowadzonego w srodowisku o wartosci pH 3—6 jest zwiazek o wzorze 2.Przykladami odpowiednich sterydów sa sitosterole, cholesterol, stigmasterol, kampesterol itp., zwiazane, lub niezwiazane w pozycji 17 z bocznym lancuchem alkilo¬ wym o 2—10 atomach wegla oraz androsteno-4-dion- 3,17, androstadieno-l,4-dion-3,17, dehydrospiandoste- ron i testosteron. Te stanowiace substraty sterydy mozna stosowac w postaci oczyszczonej lub surowej.W brzeczce fermentacyjnej powstaja równiez mniejsze ilosci hemiketalu (3aa-H- 7a/3-metyloszesciowodoroin- danodion- l,5-ylo-4a)propanolu-3' o wzorze 2 i slady hemiacetalu (3aa-H-5a-hydroksy-7a j3-metyloszescio- wodoroindanon- l-ylo-4a)- propanolu-3' o wzorze 3 oraz 6-lakton kwasu (3aa-H-5a-hydroksy-7a a/J-metyloszes- ciowodoroindanon-l-ylo-4a)- 3'-propionowego o wzo¬ rze 4 i (3aa-H-5a-hydroksy-7a 0-metyloszesciowodoro- indanon- 1-ylo) -4a-propanol-3' o wzorze 5.Mycobacterium fortuitum NRRL B-8129 otrzymuje sie poddajac Mycobacterium fortuitum ATCC 6842 mutacji za pomoca nitrozoguanidyny, w wyniku której powstaje mutant powodujacy selektywna degradacje ste¬ roidów zwiazanych lub nie zwiazanych w pozycji 17 z bocznym lancuchem alkilowym o 2—10 atomach wegla, prowadzaca do otrzymania w brzeczce fermentacyjnej w warunkach procesu wedlug wynalazku glównie zwiazkti o wzorze 1.Morfologia i wrazliwosc na leki M. fortuitum NRRL B-8129 sa takie same jak w przypadku macierzystego M. fortuitum ATCC 6842, gdyz obie kultury sa odpornymi na kwasy, nieruchliwymi i nie tworzacymi zarodników bakteriami nalezacymi do rodziny Mycobacteriaecae rzedu Actinomycetales. Zgodnie z klasyfikacja Runyon'a (E. H. Runyon, 1959 Med. Clin. North America 43; 273) jest to nie wytwarzajaca barwników IVgrupa mycobycte- rium, czyli bakterie rosnace bardzo szybko w* niskiej temperaturze i tworzace niezabarwione kolonie na wzg¬ lednie prostych pozywkach.Dzialanie M. fortuitum ATCC 6842 i M. fortuitum NRRL-8129 na czasteczki sterydów rózni sie wyraznie, poniewaz M. fortuitum ATCC 6842 powoduje nieselek- tywna degradacje sterydów na zwiazki o niskim ciezarze czasteczkowym (np. CO2+ H2O), podczas gdy M. fortui¬ tum NRRL-8129 degraduje sterydy selektywnie, co sta¬ nowi o jego wysokiej uzytecznosci.Mutacje M. fortuitum ATCC 6842 w celu otrzymania M. fortuitum NRRL B-8129 prowadzono za pomoca nitrozoguanidyny sposobem podanym w ponizszych przykladach.Sposób wedlug wynalazku realizuje sie dodajac wybrany steryd do rosnacej hodowli M. fortuitum NRRL B-8129 w okresie inkubacji lub dodajac steryd do pozywki przedjej zaszczepieniem. Stosowac moznajeden lub wiecej fterydów. * 030 4 Korzystnym lecz nie stanowiacym ograniczenia zakre¬ sem stezen sterydu w hodowli jest stezenie wynoszace okolo 0,1—100g/litr. Hodowla rosnie na pozywce zawierajacej zródlo wegla, np. przyswajalny weglowodan oraz zródlo azotu, np. przyswajalny zwiazeK,zawierajacy azot lub substancje bialkowa.Korzystnymi zródlami wegla sa glikoza, cukier nie- oczyszczony, sacharoza, gliceryna, skrobia, skrobia kukurydziana, laktoza, dekstryna, melasa itp. Korzyst¬ nymi zródlami azotu sa wyciag namokowy kukurydzy, drozdze, autolizowane drozdze browarniane z ekstrak¬ tem z mleka, maczka sojowa, maczka z nasion bawelny, maczka kukurydziana, trzustkowy ekstrat kazeiny, maczka rybna, mocznik,-ekstrat gorzelniczy, wyciagi zwierzecych peptonów, odpadki miesa i kosci, sole amo¬ nowe itp. Korzystnie mozna stosowac kombinacje wymienionych zródel wegla i azotu. Do pozywki nie trzeba dodawac sladowych ilosci metali, na przyklad cynku, magnezu, manganu, kobaltu, zelaza itp., ponie¬ waz w sklad pozywki wchodzi woda wodociagowa i skladniki nie oczyszczane. Przed wyjalowieniem pozywki doprowadza sie jej odczyn do wartosci pH powyzej 7.Majacym decydujace znaczenie warunkiem jest w spo¬ sobie wedlug wynalazku utrzymanie podczas fermentacji wartosci pH powyzej 7, co prowadzi do otrzymywania przede wszystkim zwiazku o wzorze 1. Utrzymywanie stalej wartosci pH mozna realizowac znanymi metodami, np. dodaja; do pozywki CaC03 lub bufor fosforanowy, wzglednie regulujac wartosc pH za pomoca zasady np. wodorotlenku sodowego, wodorotlenku amonowego itp.Odczyn srodowiska procesu korzystnie odpowiada war¬ tosci pH 7.S.Czas trwania procesu przeksztalcania wynosi od okolo 72 godzin do 15 dni. Temperatura inkubacji podczas procesu przeksztalcania wynosi okolo 25—37°C, ko¬ rzystnie 31°C. W celu ulatwienia wzrostu mikroorganiz¬ mów, zawartosc naczynia w którym odbywa sie przeksztalcenie przedmuchuje sie wyjalowionym, powie¬ trzem i miesza, zwiekszajac w ten sposób skutecznosc procesu przeksztalcania.Zakonczenie reakcji przeksztalcania stwierdza sie metoda chromatografii cienkowarstwowej na plytkach z zelem krzemionkowym (E. Merck, Darmstadt) stosujac jako eluent uklad rozpuszczalnikowy octan etylu- cykloheksan-lodowaty kwas octowy (60:40:1 objetos¬ ciowo). Po zakonczeniu procesu przeksztalcony steryd wyosobnia sie znanymi metodami, np. odczyn miesza¬ niny reakcyjnej lacznie z brzeczka fermentacyjna i komórkami doprowadza sie do wartosci pH okolo 8 za pomoca wyzej wymienionej mocnej zasady lub roztworu buforowego, takiego jak nasycony roztwór wodoroweg¬ lanu sodowego itp., a nastepnie ekstrahujac mieszanine nie mieszajacym sie z woda rozpuszczalnikiem organi¬ cznym rozpuszczajacym sterydy. Odpowiednimi rozpu¬ szczalnikami sa chlorek metylenu, chloroform, cztero¬ chlorek wegla, chlorek etylenu, trójchloroetylen, eter octanoamylowy, benzen, itp., korzystnie chlorek mety¬ lenu. Zwiazek o wzorze 1 otrzymuje sie z dobra wydaj¬ noscia przez doprowadzenie odczynu mieszaniny re-5 112 030 6 akcyjnej, na która uprzednio podzialano wodorowegla¬ nem sodowym, do wartosci pH okolo 2, za pomoca stezonego roztworu kwasu mineralnego, na przyklad ste¬ zonego roztworu HC1. Mieszanine reakcyjna mozna nastepnie ekstrahowac, otrzymujac ekstrakt zawierajac zwiazek o wzorze 1. Dodajac powoli do ekstraktu cyklo¬ heksan, otrzymuje sie krystaliczny zwiazek o wzorze 1 o temperaturze topnienia 107—U0°C.Zwiazek o wzorze 1 jest uzyteczny jako produkt pos¬ redni w chemicznej syntezie zadanych sterydów, np. mozna go przeksztalcic w zwiazek wyjsciowy w procesie znanym z opisu patentowego St. Zjedn. Am. nr 3 880 884, którego przedmiotem jest pierwiastkowa synteza uzyte- cznch sterydów 19-nor. Przeksztalcania w material wyjsciowy mozna dokonac znanymi sposobami, np. dzialaniem bezwodnika octowego i octanu sodowego (J.S.C.S. 85, 2135—2137).Ponizsze przyklady ilustruja sposób wedlug wyna¬ lazku, nie ograniczajac go jednak w zadnym stopniu.Wszystkie podane w nich procenty sa procentami wago¬ wymi a wszystkie proporcje mieszanin rozpuszczalniko¬ wych wyrazone sa stosunkami objetosciowymi, o ile nie oznaczono ich inaczej.Przy klad 1. Wytwarzanie mutanta M. fortuitum NRRL B-8129 z M. fortuitum ATCC 6842 A. Wywolywanie mutacji dzialaniem nitrozoguani- dyny.Komórki M. fortuitum ATCC 6842 wzrastaja w tem¬ peraturze 28°C na nastepujacej wyjalowionej pozywce: Bulion odzywczy (Difoo) 8 g/litr Ekstrakt drozdzowy 1 g/litr Propionian sodu 0,5 g/litr Woda destylowana, q.s. 1 litr Odczyn pozywki doprowadza sie za pomoca In NaOH do wartosci 7,0 przed wyjalowieniem tej pozywki w tem¬ peraturze 121°C w ciagu 20 minut.Komórki rozmnazaja sie osiagajac gestosc okolo 5x 108 na ml, po czym poddaje sieje aglomeracji przez odwirowanie i przemywa równa objetoscia wyjalowio¬ nego 0,1 m cytrynianu sodu o wartosci pH 5,6. Z przemy¬ tych komórek wytwarza sie ponownie zawiesine w takiej samej objetosci buforu cytrynianowego, pobiera próbke dla wyznaczenia miana (liczenie komórek) i dodaje nitro- zoguanidyne do osiagniecia koncowego stezenia 50 Mg/ml.Zawiesine komórek poddaje sie inkubacji w tem¬ peraturze 37°C, w lazni wodnej w ciagu 30 minut, po czym ponownie pobiera sie próbke do wyznaczenia miana, a pozostalosc odwirowuje i przemywa równa objetoscia wyjalowionego 0,lm fosforanu potasowego o wartosci pH 7,0. W koncowym etapie, z komórek ponownie wytwarza sie zawiesine w zubozonej pozywce nie zawierajacej zródla wegla,.skladajacej sie z nastepuja¬ cych soli: NH4NO3 1,0 g/litr K2HPO4 0,25 g/litr NgS04 • 7H20 0,25 g/litr NaCl 0,005 g/litr FeS04 • 7H20 0,001 g/litr Woda destylowana, q.s. 1 litr Odczyn poz\wki doprowadza sie za pomoca In HCI do wartosci 7.0 przed wyjalowieniem tej pozywki w tem¬ peraturze 12PC w ciagu 20 minut.Nastepnie komórki rozlewa sie na plytkach v\ celu wyselekcjonowania mutantów.B. Wyselekcjonowanie i wyodrebnianie mutanta M. fortuitum NRRL B-8129.Komórki poddane mutacji wyzej podana metoda roz¬ ciencza sie i rozlewa na plytkach z pozywka o nastepuja¬ cym skladzie (zmodyfikowana pozywka Frasera i Jerrela 1963. J. Biol. Chem. 205, 291—.295): Gliceryna 10,0 g/litr Na2HP04 8,4 g/litr KH2PO4 4,5 g/litr NH4CI 2,0 g/litr MgS04 • 7H20 0,3 g/litr FeCl3-6H20 0,05 g/litr Woda destylowana q.s. 1 litr Po dodaniu agaru (15 g/litr) pozywke umieszcza sie w autoklawie w temperaturze 121°C w ciagu 30 minut, a nastepnie wylewa na wyjalowione plytki Petriego.Prowadzenie hodowli na podanej pozywce eliminuje wzrost auksotrofów wymagajacych najbogatszych pozy¬ wek o okreslonym skladzie chemicznym np. zawieraja¬ cych witaminy, czynniki wzrostu itp.Po okresie inkubacji w temperaturze 28°C w ciagu okolo 7 dni, powstale kolonie nanosi siena plytki testowe do selekcjonowania mutantów, a nastepnie na plytki kontrolne z pozywka na podstawie gliceryny. Plytki testowe przygotowuje sie w sposób opisany przez Peter- sona G. E., H. L. Levisa i J. R. Davisa w J. Lipid Research 3, 275—276 (1962). Stosowana na tych plyt¬ kach zubozona pozywka zlozona z soli opisana zostalaw ustepie (A) przykladu I. Do pozywki dodaje sie agar (15g/litr) i odpowiedni zwiazek wegla (1,0 g/litr), np. sitosterol lub androstenodion (AD) i powstala zawiesine umieszcza w autoklawie w temperaturze 121°C na okres 30 minut. Wyjalowiona goraca zawiesine wlewa sie do wyjalowionego mieszalnika, miesza w ciagu kilku minut i nastepnie wylewa na wyjalowione plytki Petriego.Pewien problem moze tu stwarzac tendencja do pienienia sie mieszaniny lecz mozna ograniczyc wytwarzanie piany mieszajac goraca mieszanine i opalajac plomieniem powierzchnie plytek ze stopionym agarem. Ta metoda otrzymuje sie jednorodne dyspersje nierozpuszczalnych w wodzie zwiazków wegla, co ulatwia przygotowanie jednorodnych jakkolwiek matowych plytek agarowych.Kolonie rosnace na plytkach kontrolnych lecz nie na plytkach testowych zawierajacych androstenodion jako jedyne zródlo wegla oczyszcza sie nakladajacje w postaci pasm na stanowiace pozywke plytki agarowe. Po okresie wzrostu w temperaturze 28°C pszczególne klony zbiera sie z plytek agarowych jalowymi wykalaczkami i ponow¬ nie bada po zaszczepieniu na siatkowych plytkach zawie¬ rajacych AD jako zródlo wegla. Oczyszczone klony o fenotypie rózniacym sie nadal od fenotypu kultury macierzystej oznacza sie nastepnie w wytrzasanych kolbach.C. Oznaczanie w wytrzasanych kolbach.Kolby do wytrzasania o pojemnosci 500 ml zawieraja1121 lj II9 112030 10 sitosterolu kombinacja dwóch lub wiecej zwiazków takich jak sitosterol, cholesterol, stigmasterol, andros- ten-4-dion-3,17, androstadien-l,4-dion-3,17, dehydroe- piandrosteron i testosteron otrzymuje sie zwiazek o wzorze 1.Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania kwasu (3aa-H-7a 0-metylo- szesciowodoro-indanodion-l,5-ylo-4a)- 3' -propionowe go o wzorze 1, znamienny tym, ze Mycobacterium fortui- tum NRRL B-8129 hoduje sie w warunkach aerobowych, w wodnej pozywce o wartosci pH okolo 7—9, w obec¬ nosci sterydu zwiazanego lub nie zwiazanego w pozycji 17 z bocznym lancuchem alkilowym o 2—10 atomach wegla, po czym wyodrebnia sie zwiazek o wzorze 1. 2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako steryd stosuje sie sitosterol, cholesterol, stigmasterol, kampesterol, androsten-4-dion-3.17, androstadien-1,4- dion-3,17, dehydroepiandrosteron lub testosteron. 3 Sposób wedlug zastrz. 1. znamienny tym, ze korzyst¬ nie stosuje sie pozywke o wartosci pH 7,5. 4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze Myco¬ bacterium fortuitum NRRL B-8129 hoduje sie w warun¬ kach aerobowych w wodnej pozywce, w obecnosci mieszaniny dwóch lub wiekszej liczby sterydów. 5. Sposób wedlug zastrz. 4, znamienny tym, ze jako sterydy tworzace mieszanine sterydów stosuje sie sitoste¬ rol, cholesterol, stigmasterol, kampesterol, androsten-4- dion-3,17, androstadien-l,4-dion-3,17, dehydroepian¬ drosteron lub testosteron.Wzór 1 0 o HO Wzór 2 Wzór 3 Wzór 4 Wzór 5 PL PL PL PL

Claims (5)

1. Zastrzezenia patentowe 1. Sposób wytwarzania kwasu (3aa-H-7a 0-metylo- szesciowodoro-indanodion-l,5-ylo-4a)- 3' -propionowe go o wzorze 1, znamienny tym, ze Mycobacterium fortui- tum NRRL B-8129 hoduje sie w warunkach aerobowych, w wodnej pozywce o wartosci pH okolo 7—9, w obec¬ nosci sterydu zwiazanego lub nie zwiazanego w pozycji 17 z bocznym lancuchem alkilowym o 2—10 atomach wegla, po czym wyodrebnia sie zwiazek o wzorze 1.
2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako steryd stosuje sie sitosterol, cholesterol, stigmasterol, kampesterol, androsten-4-dion-3.17, androstadien-1,4- dion-3,17, dehydroepiandrosteron lub testosteron.
3. Sposób wedlug zastrz. 1. znamienny tym, ze korzyst¬ nie stosuje sie pozywke o wartosci pH 7,5.
4. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze Myco¬ bacterium fortuitum NRRL B-8129 hoduje sie w warun¬ kach aerobowych w wodnej pozywce, w obecnosci mieszaniny dwóch lub wiekszej liczby sterydów.
5. Sposób wedlug zastrz. 4, znamienny tym, ze jako sterydy tworzace mieszanine sterydów stosuje sie sitoste¬ rol, cholesterol, stigmasterol, kampesterol, androsten-4- dion-3,17, androstadien-l,4-dion-3,17, dehydroepian¬ drosteron lub testosteron. Wzór 1 0 o HO Wzór 2 Wzór 3 Wzór 4 Wzór 5 PL PL PL PL
PL1977202380A 1976-11-26 1977-11-24 Method of preparation of/3a-alpha-h-7a-beta-methylhexahydroindanodion-1,5-yl-4-alpha/-3'-propionic acid PL112030B1 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US05/745,113 US4062729A (en) 1976-11-26 1976-11-26 Microbial transformation of steroids

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL202380A1 PL202380A1 (pl) 1978-09-11
PL112030B1 true PL112030B1 (en) 1980-09-30

Family

ID=24995304

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL1977202380A PL112030B1 (en) 1976-11-26 1977-11-24 Method of preparation of/3a-alpha-h-7a-beta-methylhexahydroindanodion-1,5-yl-4-alpha/-3'-propionic acid

Country Status (10)

Country Link
US (1) US4062729A (pl)
JP (1) JPS5369885A (pl)
DE (1) DE2746323C2 (pl)
FR (1) FR2372137A1 (pl)
GB (1) GB1571143A (pl)
HU (1) HU176627B (pl)
IL (1) IL53156A (pl)
MX (1) MX4849E (pl)
NL (1) NL7712280A (pl)
PL (1) PL112030B1 (pl)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS53130492A (en) * 1977-04-15 1978-11-14 Satoru Arima Production of indane compound by microorganism
US4211841A (en) * 1977-09-08 1980-07-08 The Upjohn Company Process for microbial transformation of steroids
AT386225B (de) * 1979-03-07 1988-07-25 Henkel Kgaa Verfahren zur hestellung von 17-c-steroid-alpha- propionsaeureverbindungen, insbesondere von 3-oxopregna-4-en-20-carbons|ure und/oder 3-oxo-pregna-1,4-dien-20-carbonsaeure
DE3113053A1 (de) * 1981-04-01 1982-10-21 Henkel KGaA, 4000 Düsseldorf Verfahren zur herstellung eines tricyclischen steroid-abbauprodukts
CN104496958A (zh) * 2014-11-28 2015-04-08 江西赣亮医药原料有限公司 一种膜法提取a环降解物的方法
CN113563170A (zh) * 2021-07-30 2021-10-29 湖南龙腾生物科技有限公司 一种a环降解物发酵液中副产物的提取方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3616228A (en) * 1968-09-26 1971-10-26 Kurt Schubert Beta-substituted propionic acids and method of making the same

Also Published As

Publication number Publication date
GB1571143A (en) 1980-07-09
FR2372137B1 (pl) 1984-03-23
HU176627B (en) 1981-03-28
DE2746323A1 (de) 1978-06-01
IL53156A (en) 1982-04-30
NL7712280A (nl) 1978-05-30
JPS5369885A (en) 1978-06-21
JPS6155953B2 (pl) 1986-11-29
PL202380A1 (pl) 1978-09-11
IL53156A0 (en) 1977-12-30
FR2372137A1 (fr) 1978-06-23
MX4849E (es) 1982-11-01
US4062729A (en) 1977-12-13
DE2746323C2 (de) 1984-12-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4035236A (en) Process for preparing 9α-hydroxyandrostenedione
US4029549A (en) Process of producing 9α-hydroxy-3-ketobisnorchol-4-en-22-oic with mycobacterium fortuitum
US4345029A (en) Mycobacterium phlei mutants convert sterols to androsta-1,4-diene-3,17-dione and androsta-4-ene-3,17-dione
PL112030B1 (en) Method of preparation of/3a-alpha-h-7a-beta-methylhexahydroindanodion-1,5-yl-4-alpha/-3'-propionic acid
JPH022395A (ja) ９α―ヒドロキシ―１７―ケトステロイドの微生物学的製法
US4293644A (en) Process for preparing androst-4-ene-3,17-dione
US4039381A (en) Composition of matter and process
JPS6141547B2 (pl)
US4358538A (en) Mycobacterium fortuitum mutant
US4042459A (en) Composition of matter and process
US4293646A (en) Composition of matter and process
US4062880A (en) 9α-Hydroxy-bis-nor-cholanic acid
US4345030A (en) Microorganism mutant conversion of sterols to androsta-4-ene-3,17-dione
US4345033A (en) Mycobacterium fortuitum mutant
US4211841A (en) Process for microbial transformation of steroids
US4097335A (en) Microbial transformation of steroids
US4304860A (en) Process for the microbial transformation of steroids
US4177106A (en) Process for preparing 3aα-H-4α-[3'-propanol]-7aβ-methylhexahydro-1,5-indanedione hemiketal
US4176123A (en) Steroid intermediates
US4329432A (en) Mycobacterium fortuitum strain
JPS608120B2 (ja) 微生物による化合物の製法
US4345034A (en) Mycobacterium fortuitum mutant
US4443541A (en) Process for preparing an indenedione and a mycobacterium culture therefor
JPS6117478B2 (pl)
JPS6327359B2 (pl)