JPH022395A - ９α―ヒドロキシ―１７―ケトステロイドの微生物学的製法 - Google Patents
９α―ヒドロキシ―１７―ケトステロイドの微生物学的製法Info
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- JPH022395A JPH022395A JP63325731A JP32573188A JPH022395A JP H022395 A JPH022395 A JP H022395A JP 63325731 A JP63325731 A JP 63325731A JP 32573188 A JP32573188 A JP 32573188A JP H022395 A JPH022395 A JP H022395A
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/005—Degradation of the lateral chains at position 17
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J1/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen, not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, androstane
- C07J1/0003—Androstane derivatives
- C07J1/0011—Androstane derivatives substituted in position 17 by a keto group
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発胡は、マイコバクテリウム属の新しい微生１勿を用
いた、９α−ヒドロキシ−１７−ケトステロイド類の製
造法に関するものである。
いた、９α−ヒドロキシ−１７−ケトステロイド類の製
造法に関するものである。
ステロイド分子は微生物によって変換されることが良く
知られている（ＩＩｌ、 シャー −−−（Ｃｈａｒ
ｎｅｙ）、Ｈ，Ｌ、 ハーゾク（）Ｉｅｒｚｏｇ）
、ステロイド類の微生物による変換）。繁雑で高洒な化
学過程と置換するために、微生物によるステロイド類の
変換を用いた多くの方法が開発されてきた。有用なステ
ロイド中間体の安価な製造源としては、豊富に人手でき
るステロール類、例えばコレステロール及びシトステロ
ールがある。微生物としては、これらのステロイド類を
炭素源として利用できるものが選ばれてきた。例えばオ
ランダ特許公報ＮＬ６５１３７１８およびＮＬ６７０５
４９０など、いくつかの特許出願においては、ステロイ
ド核を保存した、Ｃ−１７側鎖の微生物による分解が報
告されている。米国特許第３６８４６５７号、第３７５
９７９１号又は第４３４５０２９号で報告されているよ
うに、特異的インヒビター化合物およびその後に、特別
に開発した変異株を用いて、治療に有用なステロイド類
の合成の原料となる、アンドロスト−４−エン−３，１
７−ジオンおよびアンドロスタ−１，４−ジエン−３，
１７−ジオンを高収率で製造することが可能である。
知られている（ＩＩｌ、 シャー −−−（Ｃｈａｒ
ｎｅｙ）、Ｈ，Ｌ、 ハーゾク（）Ｉｅｒｚｏｇ）
、ステロイド類の微生物による変換）。繁雑で高洒な化
学過程と置換するために、微生物によるステロイド類の
変換を用いた多くの方法が開発されてきた。有用なステ
ロイド中間体の安価な製造源としては、豊富に人手でき
るステロール類、例えばコレステロール及びシトステロ
ールがある。微生物としては、これらのステロイド類を
炭素源として利用できるものが選ばれてきた。例えばオ
ランダ特許公報ＮＬ６５１３７１８およびＮＬ６７０５
４９０など、いくつかの特許出願においては、ステロイ
ド核を保存した、Ｃ−１７側鎖の微生物による分解が報
告されている。米国特許第３６８４６５７号、第３７５
９７９１号又は第４３４５０２９号で報告されているよ
うに、特異的インヒビター化合物およびその後に、特別
に開発した変異株を用いて、治療に有用なステロイド類
の合成の原料となる、アンドロスト−４−エン−３，１
７−ジオンおよびアンドロスタ−１，４−ジエン−３，
１７−ジオンを高収率で製造することが可能である。
微生物学的に合成したステロイド類の中で、９−α−ヒ
ドロキシ−１７−ケトステロイド類は、コルチコステロ
イド類の合成のための価値ある原料化合物であることか
ら重要である（ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミ
ストリー（Ｊ、Ｏｒｇ。
ドロキシ−１７−ケトステロイド類は、コルチコステロ
イド類の合成のための価値ある原料化合物であることか
ら重要である（ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミ
ストリー（Ｊ、Ｏｒｇ。
Ｃｈｅｍ、） （１９７９年）４４巻、１５８２頁）。
コルチコステロイド頒に必要な、Ｃ−１１への水酸基、
及び場合によっては、Ｃ−９へのハロゲン原子の導入は
、このタイプの化合物とは異なり、容易で、よく知られ
た方法で行なわれる。
及び場合によっては、Ｃ−９へのハロゲン原子の導入は
、このタイプの化合物とは異なり、容易で、よく知られ
た方法で行なわれる。
上記タイプの好ましい化合物には、始めてジャーナル・
オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイアテｄＪ、Ａｍｅ
ｒ、 Ｃｈｅｍ、 Ｓｏｃ、） ８０巻（１９５８年
）６１４８頁に報告された９α−ヒドロキシアンドロス
ト−４−エン−３，１７−’；オンがアル。それは、抗
アンドロゲン、及び抗エストロゲン活性を有するが、こ
れは主に医療的に価値のあるコルチコステロイド類の合
成中間体として用いられる（例えばヨーロッパ特許出願
Ｅ Ｐ −Ａ −０２６３５６９参照）。
オブ・アメリカン・ケミカル・ソサイアテｄＪ、Ａｍｅ
ｒ、 Ｃｈｅｍ、 Ｓｏｃ、） ８０巻（１９５８年
）６１４８頁に報告された９α−ヒドロキシアンドロス
ト−４−エン−３，１７−’；オンがアル。それは、抗
アンドロゲン、及び抗エストロゲン活性を有するが、こ
れは主に医療的に価値のあるコルチコステロイド類の合
成中間体として用いられる（例えばヨーロッパ特許出願
Ｅ Ｐ −Ａ −０２６３５６９参照）。
次に示す特許公報では、９α−ヒドロキシ−１フーケド
ステロイド類、特に、９α−ヒドロキシアンドロスト−
４−エン−３，１７−ジオンを得るいくつかの方法が公
開されている。
ステロイド類、特に、９α−ヒドロキシアンドロスト−
４−エン−３，１７−ジオンを得るいくつかの方法が公
開されている。
ａｌ例えばノカルデイア（Ｎｏｃａｒｄ ｉａ）属（米
国特許４３９７９４７）又は、コリネスポラ・カシコラ
（Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ ｃａｓｓｉｃｏｌａ） 株
（ヨー０ツバ特許出願ＥＰ−Ａ−００２７８２９）を用
いて、アンドロスト−４−エン−３，１７−ジオンから
出発する、９−α−ヒドロキシ基の微生物学的導入。
国特許４３９７９４７）又は、コリネスポラ・カシコラ
（Ｃｏｒｙｎｅｓｐｏｒａ ｃａｓｓｉｃｏｌａ） 株
（ヨー０ツバ特許出願ＥＰ−Ａ−００２７８２９）を用
いて、アンドロスト−４−エン−３，１７−ジオンから
出発する、９−α−ヒドロキシ基の微生物学的導入。
ｂ、米国特許３７５９７９１ （例６及び７）は、マ
イコバクテリウム（！、ｆｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｒｎ
） 株でのステロイド類の発酵後の培地中に、９α−ヒ
ドロキシアンドロスト−４−エン−３，１７−ジオンが
存在することを報告している。米国特許４０３５２３６
によれば、収率はかなり低いが、マイコバクテリウム・
ホルツイタム（！Ｊ ｙ ｃ ｏ −ｂａｃｔｅｒｉｕ
ｒｎ ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ） ＮＲＲＬ Ｂ −８
１１９は、ステロール類のＣ−１７側鎖及び同時に９α
−ヒドロキシ基の導入を行うことができる。
イコバクテリウム（！、ｆｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｒｎ
） 株でのステロイド類の発酵後の培地中に、９α−ヒ
ドロキシアンドロスト−４−エン−３，１７−ジオンが
存在することを報告している。米国特許４０３５２３６
によれば、収率はかなり低いが、マイコバクテリウム・
ホルツイタム（！Ｊ ｙ ｃ ｏ −ｂａｃｔｅｒｉｕ
ｒｎ ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ） ＮＲＲＬ Ｂ −８
１１９は、ステロール類のＣ−１７側鎖及び同時に９α
−ヒドロキシ基の導入を行うことができる。
インキュベーション中、目的産物がさらに徐々に分解す
ることを主因とする低収率は別にして、この方法の欠点
は、この微生物が便宜的病原（ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔ
ｉｃ ｐａｔｈｏｇｅｎ）であるということである。
ることを主因とする低収率は別にして、この方法の欠点
は、この微生物が便宜的病原（ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｓｔ
ｉｃ ｐａｔｈｏｇｅｎ）であるということである。
Ｃ０東ドイツ特許２３２１６７は、マイコバクテリウム
・ホルツィ９ Ａ（、’ｌｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ） １５１０株（Ｚ ＩＭ’ＥＴ
１０８４９）にょる９α−ヒドロキシアンドロスト−４
−エン−３，１７−ジオンの製造を公開している。特別
な性質により、よく分散させた疎水佐有機ポリマーを発
酵培地に加えることにより、収率が４０〜５０％上昇し
た。
・ホルツィ９ Ａ（、’ｌｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｆｏｒｔｕｉｔｕｍ） １５１０株（Ｚ ＩＭ’ＥＴ
１０８４９）にょる９α−ヒドロキシアンドロスト−４
−エン−３，１７−ジオンの製造を公開している。特別
な性質により、よく分散させた疎水佐有機ポリマーを発
酵培地に加えることにより、収率が４０〜５０％上昇し
た。
ｄ、マイコバクテリウム（！Ｊｙｃｏｂａｃｔｅｒ ｉ
ｕｍ）株を用いることによる、ステロール類とは異なる
９α−ヒドロキシアンドロスト−４−エン−３゜１７−
ジオンの製法も、日本特許出願ＪＰ５５／８５３９７に
報告されているが、収率は低い。
ｕｍ）株を用いることによる、ステロール類とは異なる
９α−ヒドロキシアンドロスト−４−エン−３゜１７−
ジオンの製法も、日本特許出願ＪＰ５５／８５３９７に
報告されているが、収率は低い。
ｅ、１９８８年６月２日に公開された英国特許出願ＧＢ
−２１９７８６９によると、９α−ヒドロキシアンドロ
スト−４−エン−３，Ｌ７−ジオンの生産が、新しいマ
イコバクテリウム・ロセウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ ｒｏｓｅｕｍ）種の株を用いたステロール発酵に
より効果的に行うことができる。１００ｇのステロール
から２８．５ ｇの産物が得られた。
−２１９７８６９によると、９α−ヒドロキシアンドロ
スト−４−エン−３，Ｌ７−ジオンの生産が、新しいマ
イコバクテリウム・ロセウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ ｒｏｓｅｕｍ）種の株を用いたステロール発酵に
より効果的に行うことができる。１００ｇのステロール
から２８．５ ｇの産物が得られた。
本発明は、マイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ）属の新しい微生物を用い、５〜１０個の炭素
原子を含むＣ−１７炭素側鎖を特徴とするステロイド類
を９α−ヒドロキシ−１７−ケトステロイド類へ、特に
種々のステロール類から、９α−ヒドロキシアンドロス
ト−４−エン−３，１７−ジオンへ変換する発酵法を提
供する。この発酵法によれば希望のステロイド類を選択
的かつ高収率で生産できる。
ｉｕｍ）属の新しい微生物を用い、５〜１０個の炭素
原子を含むＣ−１７炭素側鎖を特徴とするステロイド類
を９α−ヒドロキシ−１７−ケトステロイド類へ、特に
種々のステロール類から、９α−ヒドロキシアンドロス
ト−４−エン−３，１７−ジオンへ変換する発酵法を提
供する。この発酵法によれば希望のステロイド類を選択
的かつ高収率で生産できる。
（微生物）
米国特許３７５９７９１で報告されているように、マイ
コバクテリウム・スピーシーズ（Ｍ ｙ ｃ 。
コバクテリウム・スピーシーズ（Ｍ ｙ ｃ 。
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ５ｐｅｃｉｅｓ）ＮＲＲＬ−Ｂ−
３８０５の培養物から新しいマイコバクテリウム株が得
られた。
３８０５の培養物から新しいマイコバクテリウム株が得
られた。
マイコバクテリウム・スピーシーズＮＲＲＬ−Ｂ−３８
０５は、米国特許４３４５０２９第２欄、３４〜４０行
から明らかなように、マイコバクテリウム・バカｊ−（
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｃｃａｅ）の−船釣
特徴を示す。マイコバクテリウム・スピーシーズＮＲＲ
Ｌ−Ｂ−３８０５は、高収率でステロール類をアンドロ
スト−４−エン−３，１７−’；オンに変換する。
０５は、米国特許４３４５０２９第２欄、３４〜４０行
から明らかなように、マイコバクテリウム・バカｊ−（
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｖａｃｃａｅ）の−船釣
特徴を示す。マイコバクテリウム・スピーシーズＮＲＲ
Ｌ−Ｂ−３８０５は、高収率でステロール類をアンドロ
スト−４−エン−３，１７−’；オンに変換する。
ＮＲＲＬ−Ｂ−３８０６を、β−シトステロール及びア
ンドロスタ−１，４−ジエン−３，１７−ジオンの混合
物を含む培地中で子世代増殖させることにより選択操作
にかけた。この操作により最終的にマイコバクテリウム
・スピーシーズと命名した新しい株を調製し、１９８６
年１１月２４日、セントラル・ブリニー・ボア・シメル
力ルチャーズに（Ｃｅｎｔｒａａｌ Ｂｕｒｅａｕ ｖ
ｏｏｒ Ｓｃｈｉｍ＋＋＋ｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓ。
ンドロスタ−１，４−ジエン−３，１７−ジオンの混合
物を含む培地中で子世代増殖させることにより選択操作
にかけた。この操作により最終的にマイコバクテリウム
・スピーシーズと命名した新しい株を調製し、１９８６
年１１月２４日、セントラル・ブリニー・ボア・シメル
力ルチャーズに（Ｃｅｎｔｒａａｌ Ｂｕｒｅａｕ ｖ
ｏｏｒ Ｓｃｈｉｍ＋＋＋ｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓ。
Ｐ、０．ＢＯＸ ２７３． ３７４０ ＡＧ Ｂａａｒ
ｎ、 Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）第ＣＢＳ４８
２．８６号で寄託した。親株マイコバクテリウム・スピ
ーシーズＮＲＲＬ−Ｂ−３８０５から新しい種を区別す
る最も顕著な特性は、ステロイド類を安定に９α−ヒド
ロキシステロイド頚に変換する能力である。
ｎ、 Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）第ＣＢＳ４８
２．８６号で寄託した。親株マイコバクテリウム・スピ
ーシーズＮＲＲＬ−Ｂ−３８０５から新しい種を区別す
る最も顕著な特性は、ステロイド類を安定に９α−ヒド
ロキシステロイド頚に変換する能力である。
新しいマイコバクテリウム・スピーシーズＣＢＳ４８２
、８６は、コロニーの色や形で、上述のマイコバクテリ
ウム・ホルツイタムＮＲＲＬＢ−８１１９と明確に区別
される。それらは、通常のＡＰＩ−２０Ｂテスト検定法
を用いたとき、生化学的性質に関し、わずか約７５％の
類似性しか有していないようだ。さらに第１表を参照せ
よ。さらに、上記マイコバクテリウム・ホルツイタムと
は対照的に、新しいマイコバクテリウム株は、ステロー
ル分子の８０％にも昇る、驚くべき高い変換率を示す。
、８６は、コロニーの色や形で、上述のマイコバクテリ
ウム・ホルツイタムＮＲＲＬＢ−８１１９と明確に区別
される。それらは、通常のＡＰＩ−２０Ｂテスト検定法
を用いたとき、生化学的性質に関し、わずか約７５％の
類似性しか有していないようだ。さらに第１表を参照せ
よ。さらに、上記マイコバクテリウム・ホルツイタムと
は対照的に、新しいマイコバクテリウム株は、ステロー
ル分子の８０％にも昇る、驚くべき高い変換率を示す。
さらに、通常の発酵条件下、それは主産物である９α−
ヒドロキシアンドロスト−４−ニンー３．１７−ジオン
をさらに分解せず、従って、その発酵液中に蓄積してい
き、それを従来法により高収率で容易に単離することが
できる。
ヒドロキシアンドロスト−４−ニンー３．１７−ジオン
をさらに分解せず、従って、その発酵液中に蓄積してい
き、それを従来法により高収率で容易に単離することが
できる。
（基 質）
９α−ヒドロキシ−１７−ケトステロイド類の製造のた
め、この新しいマイコバクテリウム・スピーシーズ（！
、ｌｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ５ｐｅｃｉｅｓ）は種
々の基質、特に、コレステロール、α＋ Ｘはβ−シ
トステローノペスチグマステロール、カンペステロール
、エルゴステロール、コールＬＩＪトコール酸、ｌＬ１
２−デヒドロ−リトコール酸、及びコレスト−４−エン
−３−オンのような、５〜１０個の炭素原子を有するＣ
−１７側鎖をもつステロイド類を利用することができる
。得られた発酵液中、例えば３−ケト−デルタ−４ステ
ロイド頌又は３−ケト−デルタ−１，４ステロイド頚の
ようなそのいくつかはＣ−１７上にヒドロキシイソプロ
ピル基を有する、９α−ヒドロキシ基を欠いた少量の副
産物が見い出されることがある。基質の種類に依存して
、そのようなｇす産物には、例えば、アンドロスト−４
−エン−３，１７−ジオン、アンドロスタ−１，４−ジ
エン−３，１７ジオン、９α−ヒドロキシ−２０−ハイ
ドロキシメチルプレダン−４−エン−３−オンなどがあ
る。
め、この新しいマイコバクテリウム・スピーシーズ（！
、ｌｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ５ｐｅｃｉｅｓ）は種
々の基質、特に、コレステロール、α＋ Ｘはβ−シ
トステローノペスチグマステロール、カンペステロール
、エルゴステロール、コールＬＩＪトコール酸、ｌＬ１
２−デヒドロ−リトコール酸、及びコレスト−４−エン
−３−オンのような、５〜１０個の炭素原子を有するＣ
−１７側鎖をもつステロイド類を利用することができる
。得られた発酵液中、例えば３−ケト−デルタ−４ステ
ロイド頌又は３−ケト−デルタ−１，４ステロイド頚の
ようなそのいくつかはＣ−１７上にヒドロキシイソプロ
ピル基を有する、９α−ヒドロキシ基を欠いた少量の副
産物が見い出されることがある。基質の種類に依存して
、そのようなｇす産物には、例えば、アンドロスト−４
−エン−３，１７−ジオン、アンドロスタ−１，４−ジ
エン−３，１７ジオン、９α−ヒドロキシ−２０−ハイ
ドロキシメチルプレダン−４−エン−３−オンなどがあ
る。
また、上述のＣ−１７−置換ステロイド類の混合１’ｌ
Ｊ、例文ｌｆ、５８％β−シトステロール、５％カンペ
ステロール及び２５％スチグマステロールと１２％のそ
の池の化合物を含む、大豆由来の既知混合物なども基質
に適している。９α−ヒドロキシアンドロスト−４−エ
ン−３，１７−ジオン製造のための好ましい基質は、ス
テロール、特にβ−シトステロールであるが、リトコー
ル酸も適している。その池の種々のＣ−１７−置換ステ
ロイド基質も、新しいマイコバクテリウム株を用いて、
本目当する９α−ヒドロキシ−１７−ケトステロイド類
に変換される。
Ｊ、例文ｌｆ、５８％β−シトステロール、５％カンペ
ステロール及び２５％スチグマステロールと１２％のそ
の池の化合物を含む、大豆由来の既知混合物なども基質
に適している。９α−ヒドロキシアンドロスト−４−エ
ン−３，１７−ジオン製造のための好ましい基質は、ス
テロール、特にβ−シトステロールであるが、リトコー
ル酸も適している。その池の種々のＣ−１７−置換ステ
ロイド基質も、新しいマイコバクテリウム株を用いて、
本目当する９α−ヒドロキシ−１７−ケトステロイド類
に変換される。
表 １
マイコバクテリウム・スピーシーズＣＢＳ４８２．８６
、マイコバクテリウム・スピーシーズＮＲＲＬ−Ｂ−３
８０５及びマイコバクテリウム・ホルツイタムＮ ＲＲ
Ｌ −Ｂ−８１１９の特性 λ１．スど−シーズ ｊ、１．スど−シーズ
Ｖ、ホルツイタムｃａｓ ４８２．８６ Ｎ
ＲＲＬ−８−３８０５ＮＲＲＬ−８−１ｔ９ＡＰ Ｉ−
２０Ｂテスト ゼラチン・ダンバク 分解 亜硝酸塩 β−ガラクトシダーゼ 酸生産 サッカロース しく＋）アラビノース マンニトール フラクトース グルコース マルトース デンプン 十 二 ｉ ″ 二 十 ＋ ＋ ＋ ラムノース ガラクトース マンノース ソルビトール グリセロール 一 インドール ウレアーゼ ＬＳ形成 アセトイン シモンズクエン酸塩 チトクロムオキシダーゼ カタラーゼ 増毎温度依存性 ３７℃ ４０℃ ４５℃ マクコンキー寒天上 での増殖 色素沈着 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 十 ：ネガティブ；十：ポシティブ； Ｗ：弱；Ｓ：暗所で
の色素沈着（スコトクロマゲン性）（方 法） 発酵は当分野でよく知られている方法で行なう。
、マイコバクテリウム・スピーシーズＮＲＲＬ−Ｂ−３
８０５及びマイコバクテリウム・ホルツイタムＮ ＲＲ
Ｌ −Ｂ−８１１９の特性 λ１．スど−シーズ ｊ、１．スど−シーズ
Ｖ、ホルツイタムｃａｓ ４８２．８６ Ｎ
ＲＲＬ−８−３８０５ＮＲＲＬ−８−１ｔ９ＡＰ Ｉ−
２０Ｂテスト ゼラチン・ダンバク 分解 亜硝酸塩 β−ガラクトシダーゼ 酸生産 サッカロース しく＋）アラビノース マンニトール フラクトース グルコース マルトース デンプン 十 二 ｉ ″ 二 十 ＋ ＋ ＋ ラムノース ガラクトース マンノース ソルビトール グリセロール 一 インドール ウレアーゼ ＬＳ形成 アセトイン シモンズクエン酸塩 チトクロムオキシダーゼ カタラーゼ 増毎温度依存性 ３７℃ ４０℃ ４５℃ マクコンキー寒天上 での増殖 色素沈着 ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ 十 ：ネガティブ；十：ポシティブ； Ｗ：弱；Ｓ：暗所で
の色素沈着（スコトクロマゲン性）（方 法） 発酵は当分野でよく知られている方法で行なう。
その媒体は、インキュベーション中、培養物中に選択し
たステロイドを添加するか、または、接種前、栄養培地
中にそれを添加しておくことにより、マイコバクテリウ
ム・スピーシーズＣＢ Ｓ ４８２．８６を培養して作
る。ステロイド基質は単独で添加することもあるし、ま
た、他のステロイドと組合せて用いることもできる。基
質は、懸濁物としてか、又は、例えばジメチルホルムア
ミドのような、適用な有機溶媒中に溶かして混合物に加
えることができる。培養培地中のステロイド濃度は０．
１〜１００ｇ／ｊ、好ましくは、０．５１５０ｇ／でで
あることが望ましい。培養物は、同化可能な炭水化物の
ような炭素源及び同化可能な窒素化合物又はタンパク質
性物質のような窒素源を含む栄養培地中で増殖される。
たステロイドを添加するか、または、接種前、栄養培地
中にそれを添加しておくことにより、マイコバクテリウ
ム・スピーシーズＣＢ Ｓ ４８２．８６を培養して作
る。ステロイド基質は単独で添加することもあるし、ま
た、他のステロイドと組合せて用いることもできる。基
質は、懸濁物としてか、又は、例えばジメチルホルムア
ミドのような、適用な有機溶媒中に溶かして混合物に加
えることができる。培養培地中のステロイド濃度は０．
１〜１００ｇ／ｊ、好ましくは、０．５１５０ｇ／でで
あることが望ましい。培養物は、同化可能な炭水化物の
ような炭素源及び同化可能な窒素化合物又はタンパク質
性物質のような窒素源を含む栄養培地中で増殖される。
好ましい炭素源には、グルコース、赤砂糖、ショ糖、グ
リセリン、デンプン、特にコーンスターチ、ラクトース
、デキストリン及び糖みつが含まれている。好ましい窒
素源には、コーンスターチ液、イースト、固型ミルクを
含む自己分解した醸造イースト、大豆粉、綿実粉、コー
ン扮、固型ミルク、カゼインのパンクレア消化物、魚粉
、酒蒸留固型分、動物ペプトンリカー肉及び骨破片及び
アンモニア塩類が含まれる。これら炭素源及び窒素源を
組合せて使用した方が良い。培地の滅菌前に培地成分と
して水道水及び未精製原料を用いるなら、例えば亜鉛、
マグネシウム、マンガン、コバルト及び鉄のような微量
金、嘱を発酵培地に加える必要はない。
リセリン、デンプン、特にコーンスターチ、ラクトース
、デキストリン及び糖みつが含まれている。好ましい窒
素源には、コーンスターチ液、イースト、固型ミルクを
含む自己分解した醸造イースト、大豆粉、綿実粉、コー
ン扮、固型ミルク、カゼインのパンクレア消化物、魚粉
、酒蒸留固型分、動物ペプトンリカー肉及び骨破片及び
アンモニア塩類が含まれる。これら炭素源及び窒素源を
組合せて使用した方が良い。培地の滅菌前に培地成分と
して水道水及び未精製原料を用いるなら、例えば亜鉛、
マグネシウム、マンガン、コバルト及び鉄のような微量
金、嘱を発酵培地に加える必要はない。
基質の所望の生成物への変換法は通常４８時間から１２
日間で終了する。この方法におけるインキュベーション
温度は、２０℃から３５℃の温度範囲、好ましくは３０
℃が用いられる。培養容器の内容物を好ましくは滅菌空
気で通気し、撹拌することにより微生物を増殖させ、そ
うすることにより、変換プロセスの効率を高揚した。
日間で終了する。この方法におけるインキュベーション
温度は、２０℃から３５℃の温度範囲、好ましくは３０
℃が用いられる。培養容器の内容物を好ましくは滅菌空
気で通気し、撹拌することにより微生物を増殖させ、そ
うすることにより、変換プロセスの効率を高揚した。
変換プロセスの完了がシリカゲルプレートによる薄層ク
ロマトグラフィーにより示されたら（Ｅ。
ロマトグラフィーにより示されたら（Ｅ。
メルク （！Ｊｅｒｋ） 、タルムスタット（Ｄａｒ＋
ｒ＋５ｔａｄｔ） ）、変換した目的産物を当分野でよ
く知られている手法で回収する。例えば、発酵液及び細
胞を含む発酵（変換）反応混合物から、非水溶性有機溶
媒を用いて、ステロイドを抽出することができる。溶媒
には、メチレンクロライド（好ましい）、クロロホルム
、四塩化炭素、エチレンクロライド、トリクロロエチレ
ン、ジエチルエーテノペ酢酸ペンチル、ベンゼン及びイ
ソブチルメチルケトンが適している。
ｒ＋５ｔａｄｔ） ）、変換した目的産物を当分野でよ
く知られている手法で回収する。例えば、発酵液及び細
胞を含む発酵（変換）反応混合物から、非水溶性有機溶
媒を用いて、ステロイドを抽出することができる。溶媒
には、メチレンクロライド（好ましい）、クロロホルム
、四塩化炭素、エチレンクロライド、トリクロロエチレ
ン、ジエチルエーテノペ酢酸ペンチル、ベンゼン及びイ
ソブチルメチルケトンが適している。
それとは別に、発酵液と細胞を、例えば濾過や遠心など
の従来法で分離し、それからそれを別々に適当な溶媒で
抽出することができる。細胞は水溶性又は非水溶性溶媒
で抽出することができる。
の従来法で分離し、それからそれを別々に適当な溶媒で
抽出することができる。細胞は水溶性又は非水溶性溶媒
で抽出することができる。
細胞を含まない発酵液は、次いで当分野でよく知られて
いる方法で抽出することができる。
いる方法で抽出することができる。
抽出物をケイソウ土で濾過し、その濾液を乾燥するまで
蒸留することができる。変換した目的とするステロイド
を含む残査を１０％クロロホルムメタノール溶液に溶か
し、つづいて、結晶が出現するまで、スチーム浴上、窒
素を通気して濃縮していくこともできる。その溶液を室
温にまで冷却し、濾過して純粋な沈殿ステロイドを取り
出す。
蒸留することができる。変換した目的とするステロイド
を含む残査を１０％クロロホルムメタノール溶液に溶か
し、つづいて、結晶が出現するまで、スチーム浴上、窒
素を通気して濃縮していくこともできる。その溶液を室
温にまで冷却し、濾過して純粋な沈殿ステロイドを取り
出す。
変換された目的ステロイドは、残りの上清から溶媒を蒸
発することによってさらに得ることができる（粗産吻）
。
発することによってさらに得ることができる（粗産吻）
。
変換の進行は、薄層プレートで追跡できるが、一方、定
量的データは、高速液体クロマトグラフィーカラムを用
い、メタノールで、培養液の混合物を分離することによ
って得ることができる。
量的データは、高速液体クロマトグラフィーカラムを用
い、メタノールで、培養液の混合物を分離することによ
って得ることができる。
得られた化合物の構造はＮＭＲ分析で確認することもで
きる。
きる。
発酵過程の生きたマイコバクテリウム（Ｍｙｃ。
ｂａｃｔｅｒ ｉｕｍ）細胞を用いる代りに、上述のマ
イコバクテリウム株の細胞から誘導される酵素調製物に
よっても、目的とする変換を行うことができる。
イコバクテリウム株の細胞から誘導される酵素調製物に
よっても、目的とする変換を行うことができる。
その調製物の１つとして回収が容易な固定化された酵素
がある。同様の変換を行い得る新規株マイコバクテリウ
ム・スピーシーズ（！、１ｙｃｏｂａｃｔｅｒ ｉｕｍ
ｓｐｅｃｉｅｓ） ＣＢ Ｓ ４８２．８６の変異株又
は突然変異株も同様に本発明に用いることができる。
がある。同様の変換を行い得る新規株マイコバクテリウ
ム・スピーシーズ（！、１ｙｃｏｂａｃｔｅｒ ｉｕｍ
ｓｐｅｃｉｅｓ） ＣＢ Ｓ ４８２．８６の変異株又
は突然変異株も同様に本発明に用いることができる。
本発明はさらに、次に示す例で証明されるが、これは本
発明を制限するものとして理解すべきではない。
発明を制限するものとして理解すべきではない。
例の中では、次の略号を用いている。
ＡＤ ＝アンドロストー４−エンー３．１１−ジオン
ＡＤＤ ：アンドロストー１．４−ジエンー３゜１７−
ジオン ９−［ＩＨ−Ａｎ： ９α−ヒドロキシアンドロスト−
４−エン−３，１７−ジオン ９−０Ｈ−１１１，ｌＰ： ９α−ヒドロキシ−２０
−ヒドロキシメチルプレダン−４−エン−３ −オン 実施例１ 三角フラスコ（５００ｍ）中に、１００読の培地Ａを調
製する。
ジオン ９−［ＩＨ−Ａｎ： ９α−ヒドロキシアンドロスト−
４−エン−３，１７−ジオン ９−０Ｈ−１１１，ｌＰ： ９α−ヒドロキシ−２０
−ヒドロキシメチルプレダン−４−エン−３ −オン 実施例１ 三角フラスコ（５００ｍ）中に、１００読の培地Ａを調
製する。
培地Ａ
１０ｇ イースト抽出物（デイフコ）３．４ｇ リン
酸２水素カリウム ４．０ｇ トウィーン８０Ｔ′４ １０００彪 蒸留水 ｐ）１７．０に調整 このフラスコを滅菌（１２０℃、２０分）し、３０℃に
冷却後、マイコバクテリウム・スピーシーズＣＢＳ４８
２．８６の懸濁液を接種する。接種した培地を、２８Ｏ
ｒｐｍのロータリーシェーカー上、３０℃で４８〜７２
時間インキュベートする。
酸２水素カリウム ４．０ｇ トウィーン８０Ｔ′４ １０００彪 蒸留水 ｐ）１７．０に調整 このフラスコを滅菌（１２０℃、２０分）し、３０℃に
冷却後、マイコバクテリウム・スピーシーズＣＢＳ４８
２．８６の懸濁液を接種する。接種した培地を、２８Ｏ
ｒｐｍのロータリーシェーカー上、３０℃で４８〜７２
時間インキュベートする。
つづいて、この培養物１０ｍをコレステロール（１００
ｍｇ）を？Ｎっだ１００ｄの新しい培地Ａに接種する。
ｍｇ）を？Ｎっだ１００ｄの新しい培地Ａに接種する。
コレステロールは次のように調製した、懸濁液として、
培地Ａに添加した。
培地Ａに添加した。
２．５ｇ コレステロール
４０ｇ ガラスピーズ（直径０．５ｃｍ）５０ｇ
蒸留水 ０．２５）ウィーン８０Ｔ８ を入れたセラムボトルを滅菌（１２０℃１．２０分）し
、室温で２００時間、ロータリーシェーカ（２８Ｏｒｐ
ｍ ）上で振盪する。接種した混合物を２８Ｏｒｐｍの
ロータリーシェーカー上、３０℃で１４４時間インキュ
ベートする。インキュベーションにつづいて、その培養
物をメタノールと混合し、濾過する。その濾液をＨＰＬ
Ｃで分析する。
蒸留水 ０．２５）ウィーン８０Ｔ８ を入れたセラムボトルを滅菌（１２０℃１．２０分）し
、室温で２００時間、ロータリーシェーカ（２８Ｏｒｐ
ｍ ）上で振盪する。接種した混合物を２８Ｏｒｐｍの
ロータリーシェーカー上、３０℃で１４４時間インキュ
ベートする。インキュベーションにつづいて、その培養
物をメタノールと混合し、濾過する。その濾液をＨＰＬ
Ｃで分析する。
培養培地中には、
２５ｍｇ ９−９−０Ｈ−
ＡＤ６ ＡＤ
）ｍｇ ＡＤＤ 及び
１ｍｇ ９−ＯＨ−ＨＭＰ
が同定された。
実施例２
実施例１の操作におけるコレステロールを種々のステロ
イドに置き換えることにより、主産物として９−０Ｈ−
ＡＤを得ることができる。その収量を第■表に示す。
イドに置き換えることにより、主産物として９−０Ｈ−
ＡＤを得ることができる。その収量を第■表に示す。
第■表
９−０Ｈ−、八〇 ＡＤ ＡＤＤ
ｌｏｏ ３０ １ ＜１１００
５０ １ ＜１１００
２６ １ ＜１１００
４５ １ ＜１１００
３０ １ ＜１１００
１２ １１ ＜１α１−シトステロール β−７トステロール スチグマステロール カンペステロール エルゴステロール リ ト コ − ル 酸 実施例３ 先の例（実施例１及び２）で述べたステロイド基質を例
えば実施例５の混合物のように、種々組合せて、発酵培
地に添加し、実施例１で述べたような操作を行った。主
産物は、９−０Ｈ−ＡＤであった。
５０ １ ＜１１００
２６ １ ＜１１００
４５ １ ＜１１００
３０ １ ＜１１００
１２ １１ ＜１α１−シトステロール β−７トステロール スチグマステロール カンペステロール エルゴステロール リ ト コ − ル 酸 実施例３ 先の例（実施例１及び２）で述べたステロイド基質を例
えば実施例５の混合物のように、種々組合せて、発酵培
地に添加し、実施例１で述べたような操作を行った。主
産物は、９−０Ｈ−ＡＤであった。
実施例４
実施例１のコレステロールｇ濁液の代りに、コレステロ
ール溶液（２，５ｍｉ！ｚタノール中、５０ｍｇ）を用
い、実施例と同様の操作により、主産物として９−０Ｈ
−ＡＤが得られた。
ール溶液（２，５ｍｉ！ｚタノール中、５０ｍｇ）を用
い、実施例と同様の操作により、主産物として９−０Ｈ
−ＡＤが得られた。
５ｍｇ ９−０Ｈ−ＡＤ
ｍｇＡＤ
＜１ｍｇＡＤＤ
く１田ｇ ９−○Ｈ−ＨＭＰ
実施例５
実施例１のコレステロール懸濁液の代りに、β−シトス
テローノベカンベステロール及びスチグマステロール（
およそ１０：５：１の比率で、総ステロール含量９０％
）を含む、粗シトステロール混合物の溶液（２，５ｍア
セトン中５０ｍｇ＞を用い、実施例１と同様の操作によ
り主産物として９−○Ｈ−ＡＤが得られた。収量は： １３ｍｇ ９−０Ｈ−ＡＤ ｍｇＡＤ ＜１ｍｇＡＤＤ ＜ ｌ ｍｇ ９−９−０Ｈ−Ｈ であった。
テローノベカンベステロール及びスチグマステロール（
およそ１０：５：１の比率で、総ステロール含量９０％
）を含む、粗シトステロール混合物の溶液（２，５ｍア
セトン中５０ｍｇ＞を用い、実施例１と同様の操作によ
り主産物として９−○Ｈ−ＡＤが得られた。収量は： １３ｍｇ ９−０Ｈ−ＡＤ ｍｇＡＤ ＜１ｍｇＡＤＤ ＜ ｌ ｍｇ ９−９−０Ｈ−Ｈ であった。
実施例６
実施例１のコレステロール懸濁液の代りに、コール酸を
用い、実施例１と同様の操作により、７α、９α、１２
α−トリヒドロキシアンドロスト−４−エン−３，１７
−ジオンが主産物として得られ、またいくつかの少量の
副産物も生成していることが、薄層クロマトグラフィー
で明らかとなった。主産物の構造は、ＮＭＲ分析で確認
した。
用い、実施例１と同様の操作により、７α、９α、１２
α−トリヒドロキシアンドロスト−４−エン−３，１７
−ジオンが主産物として得られ、またいくつかの少量の
副産物も生成していることが、薄層クロマトグラフィー
で明らかとなった。主産物の構造は、ＮＭＲ分析で確認
した。
実施例７
実施例１のコレステロールの代すｉ、ｌ：ｌ １． １
２−デヒドロ−リトコール酸を用いると、９−α−ヒド
ロキシアンドロスト−４，１１−ジエン−３゜１７−ジ
オンが主産物として得られ、またいくつかの少量の副産
物も生成していることが、薄層クロマトグラフィーで明
らかとなった。主産物の構造は、ＮＭＲ分析で確認した
。
２−デヒドロ−リトコール酸を用いると、９−α−ヒド
ロキシアンドロスト−４，１１−ジエン−３゜１７−ジ
オンが主産物として得られ、またいくつかの少量の副産
物も生成していることが、薄層クロマトグラフィーで明
らかとなった。主産物の構造は、ＮＭＲ分析で確認した
。
実施例８
実施例１で述べたように培地Ａ（２０００ｍＲ三角フラ
スコ中５００ｍ）に、マイコバクテリウム・スピーシー
ズＣＢＳ４８２．８６の培養液１０ｒｎＩ！を接種した
。この接種した混合物を、２０Ｏｒｐｍのロータリーシ
ェーカー上、３０℃で４８時間インキュベートした。こ
の培養物を１０βファーメンタ−用の接種物として用い
る。このファーメンタ−中の培地は、 ５０ｇ イースト抽出物（デイフコ）２０ｇ トウィ
ーン８０” ２５００ｍＪｌ！ 蒸留水 （ｐＨ６，８に調整） を含んでいた。
スコ中５００ｍ）に、マイコバクテリウム・スピーシー
ズＣＢＳ４８２．８６の培養液１０ｒｎＩ！を接種した
。この接種した混合物を、２０Ｏｒｐｍのロータリーシ
ェーカー上、３０℃で４８時間インキュベートした。こ
の培養物を１０βファーメンタ−用の接種物として用い
る。このファーメンタ−中の培地は、 ５０ｇ イースト抽出物（デイフコ）２０ｇ トウィ
ーン８０” ２５００ｍＪｌ！ 蒸留水 （ｐＨ６，８に調整） を含んでいた。
この培地を滅菌しく１２０℃、４５分）、約３０℃に冷
却してから、リン酸２水素カリウム（蒸留水５００ｄ中
中子７）及び硫酸アンモニウム（蒸留水５００ｍ１中１
５ｇ）の滅菌（１２０℃、２０分）溶液を添加した。こ
の混合物に、例５で述べた粗β−シトステロール混合物
の懸濁液２０００ｇを添加した。ステロール懸濁液は次
のように調製した。
却してから、リン酸２水素カリウム（蒸留水５００ｄ中
中子７）及び硫酸アンモニウム（蒸留水５００ｍ１中１
５ｇ）の滅菌（１２０℃、２０分）溶液を添加した。こ
の混合物に、例５で述べた粗β−シトステロール混合物
の懸濁液２０００ｇを添加した。ステロール懸濁液は次
のように調製した。
４個のセラムボトル（２０００ｄ）は各々次のものを含
んでいる ２５ｇ 粗β−シトステロール ２００ｇ ガラスピーズ（直径０．５ｃｍ）５００ｍｊ
！ 蒸留中 ４ｇ ）ウィーン８０” この混合物を４５分間、１２０℃で滅菌し、ついで１５
（ｌｒｐｍのロータリーシェーカー上、室温で４００時
間振盪した。接種した混合物を撹拌反応器（６００ｒｐ
ｍ ）中、３０℃で培養し、その間無菌空気を１００β
／ｈの流量で培地に通気し、かつそのｐＨを、ＮＨ，Ｏ
Ｈ（蒸留水中５％、メンブレンフィルターで除菌）を用
いて、自動的にｐＨ７，０に保持した。７２時間後、ト
ゥイーン８０Ｔ０（５００ｇを蒸留水で２５００ｇとし
たもの）の供給を、１５ｇ／ｈの速度で開始した。この
発酵を２１６時間続け、その後、この発酵培地をメチレ
ンクロライドで抽出した。抽出物をケイソウ土で濾過し
、その濾液を乾燥するまで減圧蒸留した。
んでいる ２５ｇ 粗β−シトステロール ２００ｇ ガラスピーズ（直径０．５ｃｍ）５００ｍｊ
！ 蒸留中 ４ｇ ）ウィーン８０” この混合物を４５分間、１２０℃で滅菌し、ついで１５
（ｌｒｐｍのロータリーシェーカー上、室温で４００時
間振盪した。接種した混合物を撹拌反応器（６００ｒｐ
ｍ ）中、３０℃で培養し、その間無菌空気を１００β
／ｈの流量で培地に通気し、かつそのｐＨを、ＮＨ，Ｏ
Ｈ（蒸留水中５％、メンブレンフィルターで除菌）を用
いて、自動的にｐＨ７，０に保持した。７２時間後、ト
ゥイーン８０Ｔ０（５００ｇを蒸留水で２５００ｇとし
たもの）の供給を、１５ｇ／ｈの速度で開始した。この
発酵を２１６時間続け、その後、この発酵培地をメチレ
ンクロライドで抽出した。抽出物をケイソウ土で濾過し
、その濾液を乾燥するまで減圧蒸留した。
残査を１０％クロロホルムメタノール溶液にとかし、そ
れから結晶が析出するまで、スチームバス上で窒素を通
気してａＦＭした。その溶液を室温にまで冷却し、沈殿
したステロール頚を濾過して取り除いた。上清から、溶
媒をエバボレートすると徂β−ＯＨ−Ａ Ｄ結晶が得ら
れた。粗結晶には３７．９ｇ ９−０Ｈ−ＡＤ ２．９ｇＡＤ ＜０．１ｇ ＡＤＤ ０．２ｇ ９−９−０Ｈ−Ｈ が含まれていた（ＨＰＬＣ検定）。
れから結晶が析出するまで、スチームバス上で窒素を通
気してａＦＭした。その溶液を室温にまで冷却し、沈殿
したステロール頚を濾過して取り除いた。上清から、溶
媒をエバボレートすると徂β−ＯＨ−Ａ Ｄ結晶が得ら
れた。粗結晶には３７．９ｇ ９−０Ｈ−ＡＤ ２．９ｇＡＤ ＜０．１ｇ ＡＤＤ ０．２ｇ ９−９−０Ｈ−Ｈ が含まれていた（ＨＰＬＣ検定）。
Claims (6)
- （１）５〜１０個の炭素原子を含む、Ｃ−１７側鎖を少
なくとも１個有する１個以上のステロイド化合物を、好
気培養条件下、栄養培地中、Ｃ−１７側鎖分解微生物又
はその１個以上の酵素と反応させの作用に付し、かつ培
養液から９α−ヒドロキシ−１７−ケトステロイドを回
収する工程を含む９α−ヒドロキシ−１７−ケトステロ
イド類の製造法であって、上記微生物がマイコバクテリ
ウム種（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ
）ＣＢＳ４８２．８６、又はその突然変異株あるいは変
異株であって、それと同じ変換を行いうるものでること
を特徴とする上記製造法。 - （２）ステロイド化合物が、α＿１−又はβ−シトステ
ロール、スチグマステロール、コレステロール、コレス
ト−４−エン−３−オン、カンペステロール、エルゴス
テロール、コール酸、リトコール酸、１１，１２−デヒ
ドロ−リトコール酸又はこれらの混合物から選ばれるこ
とを特徴とする、請求項（１）記載の方法。 - （３）９α−ヒドロキシアンドロスト−４−エン−３，
１７−ジオンを、好ましくはβ−シトステロールから製
造することを特徴とする、請求項（１）もしくは（２）
記載の方法。 - （４）７α，９α，１２α−トリヒドロキシアンドロス
ト−４−エン−３，１７−ジオンをコール酸から製造す
ることを特徴とする、請求項（２）記載の方法。 - （５）９α−ヒドロキシアンドロスト−４−エン−３，
１７−ジオンを１１，１２−デヒドロリトコール酸から
製造することを特徴とする、請求項（２）記載の方法。 - （６）マイコバクテリウム・スピーシーズＣＢＳ４８２
．８６。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP87202619 | 1987-12-23 | ||
| EP87202619.0 | 1987-12-23 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH022395A true JPH022395A (ja) | 1990-01-08 |
| JP2719377B2 JP2719377B2 (ja) | 1998-02-25 |
Family
ID=8197730
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63325731A Expired - Lifetime JP2719377B2 (ja) | 1987-12-23 | 1988-12-23 | ９α―ヒドロキシ―１７―ケトステロイドの微生物学的製法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5166055A (ja) |
| EP (1) | EP0322081B1 (ja) |
| JP (1) | JP2719377B2 (ja) |
| DE (1) | DE3876769T2 (ja) |
| ES (1) | ES2052693T3 (ja) |
| GR (1) | GR3006578T3 (ja) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0322081B1 (en) * | 1987-12-23 | 1992-12-16 | Roussel-Uclaf | Microbiological preparation of 9-alpha-hydroxy-17-keto steroids |
| US5298398A (en) * | 1987-12-23 | 1994-03-29 | Gist-Brocades Nv | Preparation of 9-α-hydroxy-17-keto steroids using Mycobacterium species CBS 482.86 |
| US5472854A (en) * | 1990-08-18 | 1995-12-05 | Schering Aktiengesellschaft | Process for the production of 17-oxosteroids via the fermentative oxidation of 17β-hydroxysteroids by Mycobacterium |
| EP0496854B1 (de) * | 1990-08-18 | 2000-03-15 | Schering Aktiengesellschaft | Verfahren zur Herstellung von 20-METHYL-5,7-PREGNADIEN-3$g(b),21-DIOL-DERIVATIVEN |
| ATE152773T1 (de) * | 1990-08-18 | 1997-05-15 | Schering Ag | Verfahren zur herstellung von 17-oxosteroiden |
| ATE473759T1 (de) | 1998-05-22 | 2010-07-15 | Univ Leland Stanford Junior | Bifunktionelle moleküle sowie darauf basierende therapien. |
| GB0003231D0 (en) * | 2000-02-11 | 2000-04-05 | Medi Cult As | Cell culture media |
| KR100418657B1 (ko) * | 2001-10-16 | 2004-02-11 | 주식회사 엘지생명과학 | 마이코박테리움 에스피를 사용하는9-알파-하이드록시-안드로스트-4-엔-3,17-디온의 제조방법 |
| EP2392258B1 (en) | 2005-04-28 | 2014-10-08 | Proteus Digital Health, Inc. | Pharma-informatics system |
| US9062126B2 (en) | 2005-09-16 | 2015-06-23 | Raptor Pharmaceuticals Inc. | Compositions comprising receptor-associated protein (RAP) variants specific for CR-containing proteins and uses thereof |
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| CN103613627B (zh) * | 2013-11-20 | 2017-12-01 | 上海市农药研究所 | 生物转化生产雄烯二酮过程中食用级油的循环再利用方法 |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE232167C (ja) * | ||||
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